Jurnal Fotokimia & Fotobiologi, B: Biologi 175 (2017) 192-199

Tersedia online 04 September 2017 1011-1344 / © 2017 Elsevier BV Semua hak dilindungi undang-undang.
Daftar isi tersedia di ScienceDirect

Journal of Photochemistry & Photobiology, B:biologi

Homepage jurnal: www.elsevier.com/locate/jphotobiol

Studi tentang pengikatan kompetitif cleviprex dan flavonoid ke protein plasma dengan
metode multi-spektroskopi: Prediksi obat-obatan interaksi
Xin Wanga, b, Xue-Yuan Guob, Liang Xua, b, Bin Liub, Ling-Ling Zhoub, Xiao-Fang Wangb, Dan
Wangb, Ting Suna, ⁎
Departemen Kimia, College of Science, Universitas Northeastern, Shenyang 110819 , Cina b Sekolah Ilmu Farmasi, Universitas
Liaoning, Shenyang 110036, Cina
INFO ARTIKEL
Kata kunci: Flavonoid Cleviprex Interaksi makanan-obat Ikatan kompetitif Protein plasma
ABSTRAK
Cleviprex adalah antagonis saluran kalsium dihidropiridin kerja singkat yang digunakan sebagai obat antihipertensi. Dalam karya
ini, karakterisasi mengikat cleviprex untuk serum albumin manusia (HSA) dan mengikat kompetitif untuk HSA antara cleviprex
dan dua flavonoid, baicalin dan rutin, dipelajari menggunakan teknik multi-spektroskopi dan metode docking molekuler.
Pendinginan fluoresensi HSA oleh cleviprex diprakarsai oleh pembentukan kompleks HSA-cleviprex, yang dikonfirmasi oleh
pengukuran spektrum UV-vis. Hasil analisis termodinamika dan docking molekuler mengungkapkan bahwa interaksi hidrofobik
dan ikatan hidrogen adalah kekuatan akting utama dalam menstabilkan kompleks HSA-cleviprex. Hasil-hasil eksperimen
substitusi dan docking molekuler menunjukkan bahwa cleviprex terutama terletak di dalam lokasi I dari HSA. Baicalin dan rutin
dapat mengurangi nilai pengikatan konstan dan meningkatkan nilai-nilai pengikatan jarak dari cleviprex yang mengikat ke HSA
karena mereka mengikat ke situs pengikatan yang sama. Hasil fluoresensi sinkron dan spektrum CD menyarankan bahwa reaksi
pengikatan cleviprex ke HSA dapat menimbulkan perubahan konfigurasi protein dan tindakan gabungan dari cleviprex dan
flavonoid dapat menyebabkan perubahan lebih lanjut dari konfigurasi HSA. Akibatnya, asupan makanan dan minuman yang kaya
flavonoid harus dikurangi di bawah pengobatan cleviprex untuk menghindari interaksi obat-obat.
1. Pendahuluan
Flavonoid adalah kelas besar polifenol bioaktif alami yang terdapat secara luas dalam makanan dan minuman nabati [1,2].
Hingga saat ini, lebih dari 6000 flavonoid telah ditemukan [3]. Menurut perbedaan struktural mereka, mereka terutama
dikategorikan menjadi flavones, flavonol, an-thocyanidins, flavanones, isoflavones dan flavan-3-ols [4–7]. Banyak penelitian
telah menjelaskan bahwa flavonoid memiliki banyak kegiatan farmakologi yang bermanfaat, termasuk efek kardiovaskular, anti-
oksidan, anti-inflamasi, anti alergi, antimikroba, antitrombotik, antivirus, antidiabetik, estrogenik dan aktivitas anti kanker
[3,8,9]. Karena mereka sangat melimpah di dalam makanan kita dan banyak penelitian telah menyarankan bahwa konsumsi
flavonoid jangka panjang yang moderat memiliki efek yang meningkatkan kesehatan, makanan dan minuman yang kaya
flavonoid telah menarik perhatian besar baru-baru ini [1,10,11].
Interaksi obat-makanan diakui bahwa asupan makanan dan obat secara simultan menyebabkan perubahan dalam farmasi,
farmakokinetik, atau sifat farmakodinamik makanan atau obat-obatan. Beberapaobat-makanan
interaksimungkin bermanfaat bagi pasien, tetapi kebanyakan mereka dapat menyebabkan reaksi obat yang merugikan. Dengan
demikian, pasien harus mengikuti instruksi dokter tentang penggunaan obat yang tepat untuk menghindari efek samping yang
serius [12,13]. Sebagian besar obat berikatan secara terbalik dengan protein plasma dan diangkut dalam sistem sirkulasi [14].
Akibatnya, afinitas mengikat obat untuk protein plasma mempengaruhi besarnya tindakan biologis in vivo [14,15]. Fraksi yang
tidak terikat obat dapat diubah oleh ligan lain yang mengikat protein plasma. Dengan tepat, pengikatan kompetitif protein plasma
antara obat dan komponen makanan adalah alasan dari generasi interaksi obat-makanan [16,17]. Oleh karena itu, penyelidikan
pada pengikatan kompetitif untuk protein plasma antara obat dan komponen makanan memainkan peran penting dalam
farmakologi dan farmakokinetik [18,19].
 Cleviprex (struktur ditunjukkan pada Gambar. 1) adalah antagonis saluran kalsium dihy- dropyridine short-acting digunakan
sebagai obat antihipertensi [20]. Uji klinis telah menunjukkan bahwa itu dapat digunakan untuk secara efektif mengelola
hipertensi akut untuk pasien [20,21]. Telah dilaporkan bahwa jus grapefruit dapat mengubah area di bawah kurva.
⁎ Penulis yang sesuai.
Alamat e-mail: sun1th@163.com (T. Sun).
http://dx.doi.org/10.1016/j.jphotobiol.2017.08.037 Diterima 17 April 2017; Diterima dalam formulir revisi 12 Juli 2017; Diterima
27 Agustus 2017
MARK
X. Wang dkk. Journal of Photochemistry & Photobiology, B: Biology 175 (2017) 192-199
rasio cleviprex [22], yang merupakan indikasi studi lebih lanjut dari interaksi makanan-cleviprex diperlukan. Pengikatan
cleviprex ke protein plasma lebih dari 99,5% [23], yang menunjukkan bahwa faktor-faktor dapat mengubah afinitas pengikatan
cleviprex ke protein plasma harus dipertimbangkan di klinik. Selain itu, telah dilaporkan bahwa asupan flavonoid dari makanan
dan minuman orang adalah tentang 0,67 g / hari [10]. Banyak laporan menunjukkan bahwa flavonoid dapat mempengaruhi
karakterisasi pengikatan banyak obat terhadap protein plasma [4,24-26]. Oleh karena itu, penyelidikan pada pengaruh komponen
makanan, seperti flavonoid, pada pengikatan cleviprex ke protein plasma sangat penting di klinik. Namun, interaksi flavonoid-
cleviprex seperti pengikatan kompetitif dengan protein plasma antara cleviprex dan flavonoid masih belum cukup laporan untuk
pengetahuan kita. Albumin serum manusia (HSA) adalah protein plasma yang paling melimpah dan sekitar 60% dari total protein
dalam darah [27]. Struktur molekulnya memungkinkan secara reversibel mengikat berbagai senyawa endogen dan eksogen
seperti asam lemak, obat-obatan dan komponen makanan [28]. Karena bertanggung jawab untuk mayoritas ligan mengikat
protein plasma dan struktur primernya yang terkenal, HSA biasanya digunakan sebagai model protein plasma untuk mempelajari
sifat pengikatan berbagai senyawa endogen dan eksogen mengikat protein plasma [27,29 –32]. Di sini, sifat pengikatan cleviprex
ke HSA dan ikatan kompetitifnya terhadap HSA dengan dua jenis flavonoid yang paling luas, flavon (misalnya baicalin, struktur
yang ditunjukkan pada Gambar. 1) dan flavonol (misalnya rutin, struktur ditunjukkan pada Gambar. 1 ), diselidiki dengan teknik
multi-spektroskopi dan metode docking molekuler. Diharapkan bahwa penelitian ini dapat menawarkan informasi bermanfaat
untuk mempelajari farmakokinetik cleviprex dan interaksi obat makanannya.
2. Metode dan Bahan
2.1. Bahan Kimia dan Reagen
Cleviprex (kemurnian, 98%) dibeli dari Shanghai Civi Chemical Technology Co., Ltd. Cina. Baicalin (kemurnian, 99%)
dibeli dari Provinsi Hunan Waynick Biological Technology Co., Ltd. Cina. Rutin (kemurnian, 98%) dibeli dari Xi'an Saiyang
Bio-Technology Co., Ltd. Cina. Ibuprofen (kemurnian, 99,5%) dibeli dari Zhengzhou Debao Fine Chemical Co, Ltd Cina.
Warfarin (kemurnian, 98%) dibeli dari Tianjin Elong Co., Ltd. Cina. HSA (Fraksi V, kemurnian, 96-99%) dibeli dari Beijing
Solarbio Science & Technology Co., Ltd. Cina.
2.2. Pengukuran Spektrum Fluoresensi
Semua spektra fluoresensi diukur pada spektrometer fluoresensi (Model F-7000, Hitachi High-Technologies Co., Jepang)
yang dilengkapi dengan lampu xenon 150 W, kuarsa kuvet 1,0 cm dan mandi termostat (Model SC- 15, Shanghai Bilon
Instrument Co., Ltd., China). Solusi HSA disiapkan oleh 0,05 mol / L NaCl--
193
TrisCleviprex Baicalin Rutin
HCl larutan buffer (pH 7,40). Cleviprex, flavonoid, dan penanda situs pengikatan spesifik dilarutkan dalam 2 mL etanol, dan
kemudian disesuaikan dengan konsentrasi tertentu dengan larutan buffer NaCl-Tris-HCl 0,05 mol / L (pH 7,40). Dalam
percobaan, volume larutan stok yang berbeda dicampur bersama dan konsentrasi akhir HSA adalah 1,00 × 10−5 mol / L. Spektra
emisi fluoresensi pada 288, 301 dan 310 K diukur dari 290 hingga 490 nm pada panjang gelombang eksitasi 280 nm. Lebar pita
eksitasi dan emisi keduanya 5,0 nm sedangkan tingkat pemindaian adalah 1200 nm / menit dan tegangan tabung pemancar foto
adalah 700 V. Untuk mengurangi efek inner-filter, data intensitas fluoresensi yang digunakan dalam ini kertas dikoreksi dengan
persamaan berikut [33,34]:
F cor = F obs
×
e
Sebuah ex + 2
A em
(1) di
mana F
cor
dan F
obs
adalah data intensitas fluoresensi yang dikoreksi dan diamati, masing-masing. Sebuah
ex
dan A
em
adalah absorbansi larutan campuran protein ligan pada eksitasi dan panjang gelombang
emisi, masing-masing. Spektrum fluoresensi sinkron diukur dengan pemindaian monokromator eksitasi dan emisi secara
bersamaan ketika interval panjang gelombang adalah 15 atau 60 nm.
2.3. Pengukuran Spektra
UV-vis Spektra UV-vis diukur dari 200 hingga 800 nm pada spekometer khusus (Model UV-2550, Shimadzu Co., Jepang)
pada 288 K. Konsentrasi HSA adalah 0,0 atau 1,0 × 10− 5 mol / L dan konsentrasi cleviprex berubah dari 0,0 menjadi 8,0 × 10−5
mol / L pada interval 1,0x10−5 mol / L.
2.4. Pengukuran Spektrum CD Spektrum
CD diukur dari 200 hingga 250 nm pada spektrofotometer (Model J-810, Jasco Co., Jepang) pada 288 K. Tingkat pemindaian
adalah 100 nm / menit dan waktu respons adalah 1,0 detik. Isi α-heliks dalam HSA dihitung dengan nilai mean ellipticity residu
([θ]) pada 222 nm sebagai berikut [35,36]:
[θ
]
222
=
θ
obs C p
nl ×
10
(2)
α - helix
(%)
=
[θ
] 222
+ 36000 +
3000 3000
× 100
(3) di
mana θ
obs
adalah sinyal ellipticity yang diamati, n adalah jumlah ikatan peptida dan itu adalah 584 dalam pekerjaan ini, l adalah
panjang kuvet kuarsa dan itu adalah 1,0 cm dalam pekerjaan ini, dan C
p
adalah konsentrasi molar protein.
2.5. Molecular Docking Method
The docking molekuler antara HSA dan cleviprex dihasilkan oleh Molegro Virtual Docker 2008 (v. 3.0). Struktur kristal HSA
di kompleks dengan cleviprex diambil dari Research Collaboratory
Fig. 1. Struktur molekuler cleviprex, baicalin dan rutin.
X. Wang dkk. Jurnal Fotokimia & Fotobiologi, B: Biologi 175 (2017) 192-1995,0,0,0,0,0,0
1000
a
1,5
j
i
0,0 1,0 2,0 3,0 4,0
ib

panjang gelombang (nm)

Gambar. 2. Pendinginan fluoresensi HSA yang diinduksi oleh cleviprex. C
HSA
194
HSA-Cleviprex 384
Cleviprex
800
1,2
380
376
600
0,9
j
372
368
400
0,6
364
[Cleviprex] (10-5 mol / L)
200
0
0,3
a
b
0,0
ca 290 330 370 410 450 490
230 330 430 530 630 730
= 1,0 × 10− 5 mol / L;

Panjang gelombang (nm)

C
cleviprex
(kurva a – i) = 0, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0 × 10−5 mol / L.
Gambar. 3. Spektra UV-vis sistem HSA-cleviprex. Inset: perubahan panjang gelombang penyerapan maksimum cleviprex dan
sistem HSA-cleviprex dengan peningkatan con-
untuk Struktural Bioinformatika (PDB kode 1GNJ) [37]. Struktur
centrations dari cleviprex. (Kurva a): C
cleviprex
cleviprex digambar oleh ChemWindow 6.0. The Accelrys DS ViewerPro
Tabel 1 Nilai K
SV
= 1,0 × 10−5 mol / L; (kurva b –j): C
HSA
= 1,0 × 10−5 mol / L, C
cleviprex
= 0, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0 × 10−5 mol / L. 6.0 diterapkan untuk mengeksplorasi docking antara HSA dan cleviprex.
3. Hasil dan Diskusi
3.1. Mekanisme Quenching Fluoresens dan Mode Binding dari Binding Cleviprex ke HSA
Teknik quenching fluoresensi adalah metode yang menguntungkan untuk mempelajari ikatan obat untuk protein plasma [38].
Gambar. 2 menunjukkan spektra quoresing fluoresensi HSA dengan berbagai rasio molar dari cleviprex. Dapat dilihat bahwa
puncak emisi maksimum diamati pada 336 nm. Intensitas fluoresensi HSA sangat berkurang dan pergeseran biru yang jelas dari
panjang gelombang emisi maksimum (λ
em
) diamati dengan peningkatan konsentrasi cleviprex. Ini menyiratkan
bahwa interaksi antara HSA dan cleviprex terjadi. Selanjutnya, titik iso-ideal ditemukan pada 410 nm. Titik isobestic adalah bukti
kesetimbangan antara terikat dan tidak terikat cleviprex [33,34]. Hasil ini menunjukkan bahwa quenching fluoresensi HSA
adalah karena pembentukan kompleks HSA-cleviprex [39].
Mekanisme quenching fluoresens biasanya dibagi menjadi dinamis dan statis, atau mekanisme gabungan [40]. Untuk
pendinginan fluoresensi HSA yang diinduksi oleh cleviprex, data percobaan dijelaskan terlebih dahulu oleh persamaan berikut
[41]:
F
0F
= 1 + K SV CQ = 1
+
kq τ 0 CQ (4) di
mana F
0
meningkat dengan peningkatan suhu karena suhu yang lebih tinggi akan menghasilkan difusi yang lebih cepat [43]. Oleh karena
itu, mekanisme quenching fluoresensi HSA yang diinduksi oleh cleviprex muncul dari formasi kompleks. Selain itu, laju
tabrakan maksimum konstan dari berbagai quenchers dengan biopolimer dikenal menjadi 2,0 × 1010 L / (mol · s) untuk
pendinginan dinamis [41]. Dari Tabel 1 kita dapat melihat bahwa nilai yang dihitung dari k
q
 dari interaksi antara HSA dan cleviprex jauh lebih besar dari 2.0 × 1010 L / (mol · s). Hasilnya
lebih lanjut menyediakan satu bagian bukti untuk pendinginan statis [44].
Absorpsi spektroskopi adalah metode yang efektif untuk mempelajari pembentukan kompleks ligan dengan protein. Seperti
yang terlihat pada Gambar. 3, HSA memiliki puncak penyerapan maksimum sekitar 278 nm (kurva b). Ketika cleviprex
ditambahkan ke dalam larutan HSA, puncak penyerapan baru muncul sekitar 366 nm dan absorbansi meningkat jelas dengan
meningkatnya konsentrasi cleviprex (kurva c-j). Selain itu, kita dapat melihat dari inset pada Gambar. 3 bahwa panjang
gelombang serapan maksimum cleviprex muncul pergeseran merah dari 366 nm ke 385 nm ketika konsentrasi cleviprex berubah
dari 1,0 × 10−5 mol / L menjadi 8,0 × 10−5 mol / L, sementara itu muncul pergeseran merah hanya dari 366 nm menjadi 375 nm
di hadapan HSA. Hasilnya menunjukkan bahwa interaksi antara HSA dan clevi- prex menginduksi pembentukan kompleks HSA-
cleviprex, yang menegaskan kesimpulan dari spektrum fluoresensi.
Karena prosedur pendinginan statis, konstanta asosiasi (K
a
) dari kompleks HSA-cleviprex dapat diperoleh dengan persamaan berikut [45]: adalah intensitas fluoresensi HSA, F adalah
intensitas fluoresensi HSA di hadapan konsentrasi yang berbeda dari cleviprex. K
SV
adalah konstanta pendinginan konstan Stern-Volmer. C
Q
adalah con
F
0F0-
F = 1 fa K a CQ +
1 fa
(5)
centration dari cleviprex. k
q
adalah konstanta laju pendinginan bimolekuler.
dimana f
a
mewakili fraksi fluoresensi yang dapat
diakses [46]. Τ
0
adalah masa hidup fluoresensi HSA (τ
0
= 6.0 ns [42]). Hasil
nilai K
a
dapat dihitung oleh Persamaan. (5) dan
hasilnya tercantum dalam K
SV
dan k
q
dihitung oleh Persamaan. (4) di 288, 301 dan 310 K yang tercantum dalam
Tabel 1. Kita bisa melihat bahwa nilai-nilai K
penurunan
dengan
kenaikan Tabel 1. Hal ini dapat dilihat bahwa kurva menunjukkan linearitas yang baik dan
suhu. Hasilnya menunjukkan bahwa stabilitas nilai-
nilai HSA-cleviprex dari K
SV
menurun dari 2.220 × 104 menjadi 1.987 × 104 L / mol ketika
kompleks menurun dengan meningkatnya suhu, yang
selanjutnya suhu naik dari 288 menjadi 310 K. Umumnya, nilai-nilai K
SV
memverifikasi mekanisme quenching statis dari cleviprex binding ke HSA.
,k
q
,K
a
dan parameter termodinamika dari cleviprex mengikat ke HSA pada temperatur yang berbeda.
T (K) K
SV
(L / mol) k
q
[L / (mol · s)] R SD K
a
(L / mol) R SD ΔH0 (kJ / mol) ΔS0 [J / (mol · K)] ΔG0 (kJ / mol)
288 2.220 × 104 3.700 × 1012 0.9918 0.08373 6.838 × 104 0.9945 0.06633 −18.30 28.94 −26.66 301 2.098 × 104 3.497 × 1012
0.9915 0.08073 4.775 × 104 0.9991 0.03542 −26.96 310 1.987 × 104 3.312 × 1012 0.9904 0.08123 3.993 × 104 0,9993 0,03761
−27,31
X. Wang dkk. Jurnal Fotokimia & Fotobiologi, B: Biologi 175 (2017) 192-1999
Interaksi hidrofobik, ikatan hidrogen, gaya van der Waals
1.2 dan gaya elektrostatik adalah kekuatan
kerja utama antara molekul obat dan biomakromolekul [47,48]. Parameter termodinamika seperti perubahan entalpi (ΔH0) dan
perubahan entropi (ΔS0) daripengikatan
1.0
prosedurdapat memberikan bukti untuk mengkonfirmasi mode pengikatan. Dalam karya ini, kisaran suhu eksperimental adalah
288 hingga 310 K. Jadi nilai ΔH0 dan ΔS0 dianggap sebagai konstanta dan dapat diperoleh dengan persamaan berikut [49]:
K
=-+C
marker
195
0,8
HSA- Cleviprex + Ibuprofen 0,6
HSA-Cleviprex + Warfarin
ln
a
ΔH
0 ΔS
0
RT
R
(6)
0,4 dimana R merupakan konstanta gas dan itu
sama dengan 8,314, T merupakan suhu eksperimental. Menurut K
nilai-nilai
dari mengikat dari cleviprex ke HSA di 288, 301 dan 310 K, nilai-
nilai ΔH0
0,2
dan ΔS0 dapat diperoleh oleh Persamaan. (6) dan perubahan energi bebas Gibbs (ΔG0) pada 288, 301 dan 310 K dapat diperoleh
dengan persamaan berikut:
0.0
0.0 1.5 3.0 4.5 6.0 7.5 9.0
ΔG 0
= - RT ln K a
= ΔH 0 - TΔS 0 ( 7)
(10-5 mol / L) Nilai-
nilai dari ΔH0, ΔS0 dan ΔG0 dari interaksi antara HSA dan cleviprex di 288, 301 dan 310 K tercantum dalam Tabel 1. Seperti
yang terlihat dari Tabel 1, nilai ΔG0 semua negatif, yang menunjukkan bahwa
Gbr. 4. Pengaruh penanda situs mengikat spesifik pada intensitas fluoresensi sistemcleviprex,C
 HSA-prosedur pengikatanHSA bersifat
spontan. Nilai ΔS0 positif sementara umumnya dianggap sebagai bukti untuk interaksi hidrofobik. Nilai ΔH0 negatif
menunjukkan bahwa ikatan hidrogen ada dalam prosedur pengikatan [50]. Oleh karena itu, baik interaksi hidrofobik dan ikatan
hidrogen memainkan peran utama dalam pengikatan cleviprex ke HSA.
3.2. Mengikat Situs Cleviprex Dalam HSA
Banyak penelitian telah memverifikasi bahwa ada beberapa situs pengikatan dalam HSA untuk mengikat berbagai obat, di
mana situs pengikatan utama untuk sebagian besar obat adalah situs I (terletak di subdomain IIA) dan situs II (terletak di
subdomain IIIA) [51,52]. Untuk memperoleh wawasan penting ke dalam pengikatan cleviprex ke HSA, percobaan substitusi
diterapkan untuk mengkonfirmasi situs pengikatan cleviprex dalam HSA. Dalam karya ini, warfarin dan ibuprofen digunakan
sebagai penanda situs pengikatan spesifik dari situs I dan situs II, masing-masing [53]. Persentase cleviprex disebar oleh penanda
situs mengikat spesifik dari HSA dijelaskan oleh persamaan berikut [54]:
=×
= 1,0 × 10−5 mol / L; C
cleviprex
= 5.0 × 10− 5 mol / L.
dari simulasi docking adalah −24,56 kJ / mol, yang sesuai dengan hasil yang dihitung dari data fluoresensi. Perbedaan antara
eksperimental dan hasil docking molekuler mungkin karena ekskresi pelarut dalam docking molekuler, yang menghasilkan
pengaturan diferensial kristal dan kondisi berair [55].
3.3. Penurunan Konstanta Pengikat
Seperti yang dijelaskan di atas, kita dapat menyimpulkan bahwa cleviprex terletak di dalam situs I dari HSA. Demikian pula,
karya-karya Qin et al. [56] dan Pastukhov dkk. [57] memberikan bukti bahwa baicalin dan rutin terletak di dalam situs I. Hasil
docking molekuler memverifikasi bahwa rutin dan baicalin dapat tertanam dengan baik di dalam kantong hidrofobik situs I dan
interaksi hidrofobik dan ikatan hidrogen memainkan peran utama dalam pengikatan rutin dan baicalin ke HSA [4]. K
nilai
rutin mengikat HSA adalah 6.87 × 104 L / mol [57], yang kira-kira sama
dengan yang cleviprex mengikat HSA. K
nilai
baicalin mengikat HSA 1.28 × 105 L / mol [56], yang merupakan 1,87 kali dari
cleviprex
Pemindahan (%) F
2F
1
mengikat HSA. Karena ukuran molekul rutin lebih besar daripada bai-100%
(8)
calin, yang akan menginduksi kendala struktural pada akseptasi yang menguntungkan dari rutin dalam situs pengikatan. Oleh
karena itu, afinitas rutin di mana F
1
merupakan intensitas fluoresensi dari HSA-cleviprex
mengikat HSA adalah lebih rendah daripada baicalin.
Karena cleviprex dan sistem dengan tidak adanya situs mengikat penanda tertentu, dan F
2
kembali
flavonoidmenempati situs pengikatan yang sama
dalam HSA, kompetitif menyajikan intensitas fluoresensi dari sistem HSA-cleviprex dalam
 mengikat adalah mungkin ketika mereka diberikan
dalam rentang waktu yang sama. kehadiran penanda situs mengikat spesifik. Plot dari F
2
/F
1
terhadap
Untuk memverifikasi mengikat kompetitif mereka
untuk HSA, pengaruh yang berbeda konsentrasi penanda situs tertentu mengikat ditunjukkan pada Gambar. 4.
konsentrasi baicalin dan rutin di K
a Dari
Gambar. 4 kita bisa melihat bahwa intensitas fluoresensi meningkat sedikit dengan meningkatnya konsentrasi ibuprofen yang
ditambahkan ke dalam sistem HSA-cleviprex, sementara itu menurun secara nyata dengan meningkatnya konsentrasi warfarin.
Hasilnya menunjukkan bahwa warfarin menggantikan cleviprex dari situs pengikatan dan cleviprex terutama mengikat ke situs I
dalam HSA.
Atas dasar percobaan substitusi, docking molekuler diterapkan untuk mendapatkan informasi lebih lanjut tentang ikatan
cleviprex ke HSA. Seperti ditunjukkan pada Gambar. 5, cleviprex dapat tertanam dengan baik dalam kantong hidrofobik sub-
domain IIA. Selanjutnya, dua ikatan hidrogen ditemukan. Atom klorin dan atom oksigen dari cleviprex dapat membuat ikatan
hidrogen yang khas dengan atom hidrogen dari gugus amino dalam cincin imidazole HIS-242 dan atom hidrogen dari gugus
amino GLN-196, masing-masing. Hasilnya menunjukkan bahwa cleXxx terletak di dalam sub-domain IIA, dan kekuatan akting
terutama adalah interaksi hidrofobik dan ikatan hidrogen, yang konsisten dengan hasil perhitungan data fluoresensi. Selain itu,
nilai energi bebas
dari cleviprex yang mengikat ke HSA dihitung oleh Persamaan. (5) dan tercantum
dalam Tabel 2. Dari Tabel 2 kita dapat melihat bahwa K
nilai-nilai
dari cleviprex mengikat penurunan HSA dengan peningkatan konsentrasi flavonoid. Karena konsentrasi
rutin adalah 2,0 × 10−5 mol / L, itu menurun 26,13% dibandingkan dengan tidak adanya rutin. Dengan demikian, penurunan
sebesar 46,56% karena konsentrasi baicalin adalah 2,0 × 10−5 mol / L. Penurunan afinitas ikatan cleviprex pada HSA yang
diinduksi oleh baicalin lebih menonjol dibandingkan dengan rutin, yang disebabkan oleh afinitas pengikatan baicalin terhadap
HSA lebih besar daripada rutin. Hasilnya menyiratkan bahwa mengambil flavonoid dan cleviprex secara bersamaan dapat
meningkatkan persentase cleviprex tak terikat dalam darah, dan kemudian meningkatkan efektivitas maksimum dan
menyebabkan risiko efek samping dari cleviprex.
3.4. Peningkatan Jarak Binding Jarak
pengikatan (r) antara ligan dan residu triptofan (Trp) protein dapat diperkirakan menurutFörster
teori transfer energi non-radiasi[45]. Di sini, menurut persamaan berikut [58,59], nilai r antara cleviprex dan residu Trp dari HSA
dapat diperoleh.
E
=1
- FF
0
=
R
06
R0
6+
r
6 (9)
R0
6 = 8,8 × 10
- 25 K 2 N - 4
ΦD
J (10)
J
=
∑
FλελλΔλ
() () ∑
F ( λ)
Δλ
4
(11) di
mana E adalah efisiensi transfer energi, R
0
adalah jarak kritis antara donor dan akseptor ketika 50% energi ditransfer, K2
merupakan faktor ruang orientasi yang terkait dengan geometri dipol donor dan akseptor, N adalah indeks bias medium, Ф
D
adalah hasil kuantum fluoresensi dari donor tanpa akseptor, J menyatakan tingkat tumpang tindih spektral antara
pemancaran donor dan penyerapan akseptor (Gambar 6). ), F (λ) adalah intensitas fluoresensi dari donor fluoresensi pada panjang
gelombang λ, dan ε (λ) adalah koefisien penyerapan molar dari molekul akseptor pada panjang gelombang λ [51,60]. Untuk
interaksi obat-HSA, K2 = 2/3, N = 1,336 dan Ф
D
= 0,118 [61]. Nilai r dan parameter transfer energi lainnya seperti J, R
0
dan E dari interaksi antara HSA dan cleviprex dapat diperoleh dengan Persamaan. (9) - (11) dan hasilnya
tercantum pada Tabel 3. Jelas, nilai r meningkat dari 2,771 ± 0,015 menjadi 3,964 ± 0,107 nm karena adanya 1,0 × 10−5 mol / L
baicalin. Demikian pula, meningkat dari 2,771 ± 0,015 menjadi 3,757 ± 0,058 nm di hadapan 1,0 × 10−5 mol / L rutin. Hasilnya
menunjukkan bahwa pengikatan flavonoid dalam situs I menghambat cleviprex untuk menutup ke situs pengikatan dan
menginduksi peningkatan jarak antara cleviprex dan residu Trp dari HSA. Selain itu, efek penghalang baicalin lebih besar
daripada rutin. Alasannya adalah bahwa afinitas baicalin yang berikatan dengan HSA jauh lebih besar daripada rutin dan situs
yang lebih mengikat ditempati oleh baicalin dalam ikatan kompetitif antara flavonoid dan cleviprex.
X. Wang dkk. Jurnal Fotokimia & Fotobiologi, B: Biologi 175 (2017) 192–199
196
Gambar 5. Dermakan molekuler cleviprex di dalam situs I HSA.
Tabel 2 Perubahan K
a
2,0
d
1000
Gambar. 6. Spektrum fluoresensi sistem HSA (kurva a), HSA-rutin (kurva b) dan HSA-baicalin (kurva c) dan spektrum UV-vis
cleviprex (kurva d) . C
HSA
a 1,6
800
1,2
b
0

Panjang gelombang (nm)

600
0,8
c
400
0,4
200
0,0
290 330 370 410 450 490
=C
rutin
=C
baicalin
= 1,0 × 10− 5 mol / L, C
cleviprex
= 5,0 × 10− 5 mol / L.
3,5. Penyelidikan Konformasi
 Dalam rangka untuk mengevaluasi efek dari pengikatan terpisah cleviprex dan pengikatan koinik dari cleviprex dan flavonoid
ke HSA pada perubahan konformasi protein, fluoresensi sinkron dan spektroskopi CD digunakan. Spektrum fluoresensi sinkron
digunakan untuk mempelajari perubahan konformasi protein karena pergeseran λmaksimum
em
sesuai dengan perubahan polaritas mikro-lingkungan di sekitar residu asam amino [62,63]. Ketika interval
panjang gelombang antara eksitasi dan emisi (Δλ = λ
em
-λ
ex
) adalah 15 nm, ini memberikan informasi karakteristik residu tirosin (Tyr). Ketika Δλ adalah 60 nm, itu adalah
karakteristik dari residu Trp [31,64]. Spektrum fluoresensi sinkron dari HSA dengan konsentrasi yang berbeda dari cleviprex
ditunjukkan pada Gambar. 7. Dari Gambar 7 kita dapat melihat bahwa intensitas fluoresensi sinkron dari nilai Tyr dan Trp
dari cleviprex mengikat ke HSA dengan berbagai konsentrasi baicalin dan rutin.
C
rutin
(mol / L) K
a
(L / mol) R SD C
baicalin
(mol / L) K
a
(L / mol) R SD
0 6.838 × 104 0.9945 0.06633 0 6.838 × 104 0.9945 0.06633 0.5 × 10−5 6.405 × 104 0,9936 0,07513 0,5 × 10−5 6.069 × 104
0.9937 0.08040 1.0 × 10−5 6.209 × 104 0.9925 0.08842 1.0 × 10−5 5.329 × 104 0.9954 0.07796 1.5 × 10−5 5.961 × 104 0.9899
0.1098 1.5 × 10−5 5.113 × 104 0,9954 0,08126 2,0 × 10−5 5,051 × 104 0,9927 0,1068 2,0 × 10−5 3,654 × 104 0,9926 0,1353
X. Wang dkk. Jurnal Fotokimia & Fotobiologi, B: Biologi 175 (2017) 192-199
Tabel 3 Nilai J, R
0
, E dan r dari cleviprex mengikat ke HSA tanpa dan dengan baicalin dan rutin.
Sistem J (10−14 cm3 · L / mol) R
0
(nm) E r (nm)
HSA-cleviprex 1.120 ± 0.001 2.499 ± 0.001 0.350 ± 0.007 2.771 ± 0.015 HSA-baicalin-cleviprex 1.129 ± 0.008 2.502 ± 0.003
0.063 ± 0,014 3,964 ± 0,107 HSA-rutin-cleviprex 1,082 ± 0,002 2,484 ± 0,001 0,077 ± 0,006 3,757 ± 0,058

A
400
a
Δλ = 15 nm
0

ytisnet
320
-5
α − helix (%)

niecn
240
i
-10
d: 49,11% c: 51,15% b: 51,51% ecser53,58% oul
160
-15
a:

F
80
-20
0
-25 260 270 280 290 300 310 320
200 210 220 230 240 250

Panjang gelombang (nm)

Panjang gelombang (nm)
B
1000
Gambar. 8. CD spektrum HSA (kurva a), HSA-cleviprex (kurva b), sistem HSA-cleviprex-baicalin
a
Δλ = 60 nm
(kurva c) dan HSA-cleviprex-rutin (kurva d). C
HSA
i
225 250 275 300 325

Panjang gelombang (nm)

Gambar 7. Spektrum fluoresensi sinkron dari sistem HSA-cleviprex. (A) Δλ = 15 nm; (B) Δλ = 60 nm; C
HSA
197
= 2,0 × 10−7 mol / L; C
cleviprex
=C
baicalin
=C
rutin
= 4.0 × 10−7 mol / L.
800
baicalin dan rutin pada pergeseran merah residu Tyr dan Trp tercantum dalam Tabel 4. Dari ini kita dapat melihat bahwa
pergeseran merah λmaksimum
em
d
ari Tyr 600
dan residu Trp keduanya meningkat jelas dengan meningkatnya konsentrasi flavonoid. Selain itu, efek rutin pada pergeseran
400
λ
em
residu Trp lebih jelas daripada baicalin. Hasilnya menyiratkan bahwa efek simultan dari cleviprex dan flavonoid menghasilkan
penurunan lebih lanjut dari hidrofobik di sekitar Tyr dan Trp 200
residu, dan kehadiran rutin dapat menyebabkan lebih banyak perubahan konformasi HSA.
Spektroskopi CD adalah metode yang tepat untuk
mengkonfirmasi perubahan dari 0
konformasi protein [66,67]. Spektrum CD sistem HSA dan HSA-clevi-prex tanpa dan dengan baicalin dan rutin ditunjukkan pada
Gambar 8. Puncak negatif dari 200 hingga 240 nm dikaitkan dengan konstituen heliks α-protein [68]. Dari Persamaan. (3) dan
(4), kandungan α-heliks dalam struktur sekunder protein dapat berupa kuantisasi kuantitatif
= 1.0 × 10−5 mol / L; C
cleviprex
(kurva a – i) = 0, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0 × 10− 5 mol / L.
lated. Persentase heliks α-heliks dari HSA adalah 53,58% di bawah kondisi eksperimental. Ini menurun menjadi 51,51% di
hadapan cleviprex. Penurunan kandungan α-heliks menunjukkan bahwa pengikatan cleviprex
Tabel 4 Pergeseran residu Tyr dan Trp dari cleviprex mengikat ke HSA dengan konsentrasi yang berbeda
di dalam rongga hidrofobik dari situs pengikatan menyebabkan parsial yang tidak melipat dari rantai peptida. Selanjutnya,
kandungan heliks α-heliks HSA
dari baicalin dan rutin.
menurun menjadi 51,15% dan 49,11% di hadapan baicalin dan rutin, masing-masing. Hasilnya mengilustrasikan bahwa efek
simultan dari baicalin
cleic
(mol / L) Pergeseran
Shifts
C
rutin
(mol / L) Pergeseran
Shifts Tyr
Trp
Tyr
Trp residu
residu
residu
residu
viprex dan flavonoid menyebabkan perubahan lebih lanjut dari HSA konformasi, dan efek rutin lebih besar dari baicalin, yang
konsisten dengan hasil yang diperoleh dari spektrum fluoresensi sinkron. Selain itu, 0 + 0,2 nm +0,4 nm 0 +0,2 nm +0,4 nm
isi struktur sekunder terkait erat dengan struktur 3D 0,5
× 10−5 +0,4 nm +0,4 nm 0,5 × 10− 5 +0,4 nm +1,0 nm 1,0 × 10−5 +0.4 nm +0.4 nm 1.0 × 10− 5 +0.4 nm +1.6 nm 1.5 × 10−5
+0.6 nm +1.0 nm 1.5 × 10− 5 +0.6 nm +2.8 nm 2.0 × 10−5 +0.6 nm +1.0 nm 2.0 × 10− 5 +0.6 nm +2.8 nm
protein. Perubahan konformasi HSA dapat mempengaruhi aktivitas biologisnya dan mengubah kemampuan mengikatnya
terhadap ligan-ligan enogenous dan eksogen lainnya [33].
4. Kesimpulan residu keduanya menurun secara
bertahap dengan peningkatan konsentrasi cleviprex. Selain itu, maksimum λ
em
dari Tyr dan Trp residu baik
Dalam penelitian ini, pengikatan cleviprex ke HSA
dan menunjukkan sedikit pergeseran merah pada penambahan cleviprex. Merah bergeser
kompetitif mengikat untuk HSA antara cleviprex dan
dua flavonoid yang menunjukkan bahwa hidrofobisitas di sekitar Tyr dan Trp residu menurun
dipelajari oleh teknik multi-spektroskopi dan docking
molekuler. dan konformasi dari perubahan HSA [65]. Hasil dari efek
Hasil menunjukkan bahwa cleviprex dapat berinteraksi dengan HSA dan
X. Wang et al. Journal of Photochemistry & Photobiology, B: Biology 175 (2017) 192–199
198 fluorescence quenching mechanism belongs to a static
quenching pro- cedure. The reaction of cleviprex binding to HSA is spontaneous and mainly mediates by hydrophobic
interactions and hydrogen bonding
[17] W. Zhuang, L. Li, GQ Lin, ZY Deng, MJ Peng, Ilaprazole metabolites, ilaprazole sulfone and ilaprazole sulfide decreased
the affinity of ilaprazole to bovine serum albumin, J. Lumin. 132 (2012) 350–356. [18] Z. Omidvar, K. Parivar, H. Sanee, Z.
Amiri-Tehranizadeh, A. Baratian, MR Saberi, according to the calculated thermodynamic parameters, which is con- sistent with
the results of molecular docking. The results of substitution experiments and molecular docking demonstrate that cleviprex is
A. Asoodeh, J. Chamani, Investigations with spectroscopy, zeta potential and mo- lecular modeling of the non-cooperative
behaviour between cyclophosphamide hydrochloride and aspirin upon interaction with human serum albumin: binary and ternary
systems from the view point of multi-drug therapy, J. Biomol. Struct. Dyn. mainly located within the site I of HSA. The
competitive binding of
29 (2011) 181–206. cleviprex and flavonoids to
HSA exist because they located within the same binding site. The presence of baicalin and rutin decrease the K
a
[19] M. Maciazek-Jurczyk, A. Sulkowska, B. Bojko, J. Rownicka-Zubik, WW Sulkowski,
A spectroscopic study of phenylbutazone and aspirin bound to serum albumin in rheumatoid diseases, Spectrochim. Acta A 82
(2011) 181–190. values and increase the r values of cleviprex binding to HSA, which can
[20] H. Ericsson, B. Tholander, JA Bjorkman, M.
Nordlander, CG Regardh, improve the maximum effectiveness and induce side effect risks of cleviprex. The results of
synchronous fluorescence and CD spectra
Pharmacokinetics of new calcium channel antagonist clevidipine in the rat, rabbit, and dog and
pharmacokinetic/pharmacodynamic relationship in anesthetized dogs, Drug Metab. Buang. 27 (1999) 558–564. suggest that the
binding reaction of cleviprex to HSA can give rise to the
[21] UA Ndefo, GI Erowele, R. Ebiasah, W. Green,
Clevidipine: a new intravenous changes of protein conformation. The combined actions of cleviprex and flavonoids can lead to
the further changes of HSA conformation,
option for the management of acute hypertension, Am. J. Health Syst. Pharm. 67 (2010) 351–360. [22] Y. Uesawa, K. Mohri,
Quantitative structure-interaction relationship analysis of 1,4- and the effect of rutin is greater than baicalin. Accordingly, in
order to
dihydropyridine drugs in concomitant
administration with grapefruit juice, avoid the side effects caused by the food-drug interaction, the intake of flavonoid-rich food
and beverages should be lessened under the treat- ment of cleviprex. It is wished that the study can offer some crucial
Pharmazie 67 (2012) 195–201. [23] H. Ericsson, B. Tholander, CG Regårdh, In vitro hydrolysis rate and protein
binding of clevidipine, a new ultrashort-acting calcium antagonist metabolised by esterases, in different animal species and man,
Eur. J. Pharm. Sci. 8 (1999) 29–37. insight into the binding reaction of cleviprex to plasma protein and is helpful to illustrate the
food-drug interaction of cleviprex.
[24] FS Mohseni-Shahri, MR Housaindokht, MR Bozorgmehr, AA Moosavi-
Movahedi, The influence of the flavonoid quercetin on the interaction of propra- nolol with human serum albumin: experimental
and theoretical approaches, J. Lumin. 154 (2014) 229–240. Acknowledgments
[25] X. Wang, Y. Liu, LL He, B. Liu, SY Zhang, X. Ye, JJ Jing, JF Zhang, M. Gao,
X. Wang, Spectroscopic investigation on the food components-drug interaction: the
This work was supported by the training programs of innovation
influence of flavonoids on the affinity of nifedipine to human serum albumin, Food Chem. Toksikol. 78 (2015) 42–51. and
entrepreneurship for undergraduates of Liaoning University
 [26] SY Shi, YP Zhang, X. Xiong, KL Huang, XQ
Chen, MJ Peng, The influence of (X201310140065, X201510140201).
flavonoids on the binding of pantoprazole to bovine serum albumin by spectro- scopic methods: with the viewpoint of food/drug
interference, Food Chem. 135 (2012) 1083–1090. References
[27] U. Katrahalli, S. Jaldappagari, SS Kalanur, Probing the binding of fluoxetine hy-
drochloride to human serum albumin by multispectroscopic techniques,
[1] M. Lilamand, E. Kelaiditi, S. Guyonnet, R. Antonelli Incalzi, A. Raynaud-Simon,
B. Vellas, M. Cesari, Flavonoids and arterial stiffness: promising perspectives, Nutr. Metab. Cardiovasc. Dis. 24 (2014) 698–704.
[2] J. Gonzalez-Gallego, MV Garcia-Mediavilla, S. Sanchez-Campos, MJ Tunon, Fruit
polyphenols, immunity and inflammation, Br. J. Nutr. 104 (Suppl. 3) (2010) S15–27. [3] N. Gupta, RS Chauhan, JK Pradhan,
Rutin: a bioactive flavonoid, in: N. Gupta
(Ed.), Handbook of Medicinal Plants and their Bioactive Compounds, Research Signpost, Kerala, India, 2014, pp. 51–57. [4] LL
He, ZX Wang, YX Wang, XP Liu, YJ Yang, YP Gao, X. Wang, B. Liu,
X. Wang, Studies on the interaction between promethazine and human serum al- bumin in the presence of flavonoids by
spectroscopic and molecular modeling techniques, Colloids Surf. B 145 (2016) 820–829. [5] D. Del Rio, A. Rodriguez-Mateos,
JP Spencer, M. Tognolini, G. Borges, A. Crozier, Dietary (poly)phenolics in human health: structures, bioavailability, and
evidence of protective effects against chronic diseases, Antioxid. Redox Signal. 18 (2013) 1818–1892. [6] A. Rodriguez-Mateos,
D. Vauzour, CG Krueger, D. Shanmuganayagam, J. Reed,
L. Calani, P. Mena, D. Del Rio, A. Crozier, Bioavailability, bioactivity and impact on health of dietary flavonoids and related
compounds: an update, Arch. Toksikol. 88 (2014) 1803–1853. [7] RP Feliciano, S. Pritzel, C. Heiss, A. Rodriguez-Mateos,
Flavonoid intake and
cardiovascular disease risk, Curr. Opin. Makanan Sci. 2 (2015) 92–99. [8] MY He, T. Wu, SY Pan, XY Xu, Antimicrobial
mechanism of flavonoids against Escherichia coli ATCC 25922 by model membrane study, Appl. Berselancar. Sci. 305 (2014)
515–521. [9] M. Karabin, T. Hudcova, L. Jelinek, P. Dostalek, Biotransformations and biological
activities of hop flavonoids, Biotechnol. Adv. 33 (2015) 1063–1090. [10] A. Scalbert, G. Williamson, Dietary intake and
bioavailability of polyphenols, J.
Nutr. 130 (2000) 2073S–2085S. [11] A. Kozlowska, D. Szostak-Wegierek, Flavonoids—food sources and health benefits,
Rocz. Panstw. Zakl. Hig. 65 (2014) 79–85. [12] R. Bushra, N. Aslam, AY Khan, Food-drug interactions, Oman Med. J. 26
(2011)
77–83. [13] PS Fasinu, PJ Bouic, B. Rosenkranz, An overview of the evidence and mechan-
isms of herb-drug interactions, Front. Pharmacol. 3 (2012) 69. [14] M. Gokara, GB Kimavath, AR Podile, R. Subramanyam,
Differential interactions
and structural stability of chitosan oligomers with human serum albumin and alpha-1-glycoprotein, J. Biomol. Struct. Dyn. 33
(2015) 196–210. [15] Z. Sharif-Barfeh, S. Beigoli, S. Marouzi, AS Rad, A. Asoodeh, J. Chamani, Multi-
spectroscopic and HPLC studies of the interaction between estradiol and cyclo- phosphamide with human serum albumin: binary
and ternary systems, J. Solut. Chem. 46 (2017) 488–504. [16] M. Poor, Y. Li, S. Kunsagi-Mate, J. Petrik, S. Vladimir-Knezevic,
T. Koszegi,
Molecular displacement of warfarin from human serum albumin by flavonoid aglycones, J. Lumin. 142 (2013) 122–127.
Spectrochim. Acta A Mol. Biomol. Spectrosc. 75 (2010) 314–319. [28] A. Varshney, P. Sen, E. Ahmad, M. Rehan, N. Subbarao,
RH Khan, Ligand binding
strategies of human serum albumin: how can the cargo be utilized? Chirality 22 (2010) 77–87. [29] Z. Sattar, H. Iranfar, A.
Asoodeh, MR Saberi, M. Mazhari, J. Chamani, Interaction between holo transferrin and HSA-PPIX complex in the presence of
lomefloxacin: an evaluation of PPIX aggregation in protein-protein interactions, Spectrochim. Acta A Mol. Biomol. Spectrosc.
97 (2012) 1089–1100. [30] A. Varshney, Y. Ansari, N. Zaidi, E. Ahmad, G. Badr, P. Alam, RH Khan, Analysis of binding
interaction between antibacterial ciprofloxacin and human serum albumin by spectroscopic techniques, Cell Biochem. Biofisika.
70 (2014) 93–101. [31] T. Zohoorian-Abootorabi, H. Sanee, H. Iranfar, MR Saberi, J. Chamani, Separate
and simultaneous binding effects through a non-cooperative behavior between cyclophosphamide hydrochloride and
fluoxymesterone upon interaction with human serum albumin: multi-spectroscopic and molecular modeling approaches,
Spectrochim. Acta A Mol. Biomol. Spectrosc. 88 (2012) 177–191. [32] DP Yeggoni, A. Rachamallu, R. Subramanyam, Protein
stability, conformational
change and binding mechanism of human serum albumin upon binding of embelin and its role in disease control, J. Photochem.
Photobiol. B Biol. 160 (2016) 248–259. [33] H. Vahedian-Movahed, MR Saberi, J. Chamani, Comparison of binding interac-
tions of lomefloxacin to serum albumin and serum transferrin by resonance light scattering and fluorescence quenching methods,
J. Biomol. Struct. Dyn. 28 (2011) 483–502. [34] S. Sarzehi, J. Chamani, Investigation on the interaction between tamoxifen and
human holo-transferrin: determination of the binding mechanism by fluorescence quenching, resonance light scattering and
circular dichroism methods, Int. J. Biol. Macromol. 47 (2010) 558–569. [35] AB Khan, JM Khan, MS Ali, RH Khan, D. Kabir
Ud, Interaction of amphiphilic drugs with human and bovine serum albumins, Spectrochim. Acta A Mol. Biomol. Spectrosc. 97
(2012) 119–124. [36] JD Morrisett, JS David, HJ Pownall, AM Gotto Jr., Interaction of an apolipo-
protein (apoLP-alanine) with phosphatidylcholine, Biochemistry 12 (1973) 1290–1299. [37] I. Petitpas, T. Grune, AA
Bhattacharya, S. Curry, Crystal structures of human
serum albumin complexed with monounsaturated and polyunsaturated fatty acids, J. Mol. Biol. 314 (2001) 955–960. [38] MK
Siddiqi, P. Alam, SK Chaturvedi, RH Khan, Anti-amyloidogenic behavior
and interaction of diallylsulfide with human serum albumin, Int. J. Biol. Macromol. 92 (2016) 1220–1228. [39] S. Naveenraj, MR
Raj, S. Anandan, Binding interaction between serum albumins and perylene-3,4,9,10-tetracarboxylate—a spectroscopic
investigation, Dyes Pigments 94 (2012) 330–337. [40] A. Samanta, BK Paul, N. Guchhait, Spectroscopic probe analysis for
exploring
probe-protein interaction: a mapping of native, unfolding and refolding of protein bovine serum albumin by extrinsic
fluorescence probe, Biophys. Chem. 156 (2011) 128–139.
X. Wang dkk. Journal of Photochemistry & Photobiology, B: Biology 175 (2017) 192–199
[41] WR Ware, Oxygen quenching of fluorescence in solution: an experimental study of
[56] K. Qin, C. Liu, Investigation of the interaction
between baicalin and human serum the diffusion process, J. Phys. Chem. 66 (1962) 455–458.
albumin by a spectroscopic method and molecular
modeling, J. Chem. Pharm. Res. [42] JR Lakowicz, G. Weber, Quenching of protein fluorescence by oxygen. Detection of
6 (2014) 24–30. structural fluctuations in proteins on
the nanosecond time scale, Biochemistry 12
[57] AV Pastukhov, LA Levchenko, AP Sadkov,
Spectroscopic study on binding of (1973) 4171–4179.
rutin to human serum albumin, J. Mol. Struct. 842
(2007) 60–66. [43] M. Ishtikhar, S. Khan, G. Badr, AO Mohamed, RH Khan, Interaction of the 5-
[58] S. Marouzi, A. Sharifi Rad, S. Beigoli, P. Teimoori
Baghaee, R. Assaran Darban, fluorouracil analog 5-fluoro-2′-deoxyuridine with 'N' and 'B' isoforms of human
J. Chamani, Study on effect of lomefloxacin on human
holo-transferrin in the serum albumin: a spectroscopic and calorimetric study, Mol. BioSyst. 10 (2014)
presence of essential and nonessential amino acids:
spectroscopic and molecular 2954–2964.
modeling approaches, Int. J. Biol. Macromol. 97
(2017) 688–699. [44] JR Lakowicz, Principles of Fluorescence Spectroscopy, 3rd ed., Springer Science
[59] SK Chaturvedi, E. Ahmad, JM Khan, P. Alam, M.
Ishtikhar, RH Khan, + Business Media, New York, 2006.
Elucidating the interaction of limonene with
bovine serum albumin: a multi-tech- [45] N. Barbero, E. Barni, C. Barolo, P. Quagliotto, G. Viscardi, L. Napione, S. Pavan,
nique approach, Mol. BioSyst. 11 (2015) 307–316. F.
Bussolino, A study of the interaction between fluorescein sodium salt and bovine
[60] MR Ajmal, AS Abdelhameed, P. Alam, RH Khan,
Interaction of new kinase in- serum albumin by steady-state fluorescence, Dyes Pigments 80 (2009) 307–313.
hibitors cabozantinib and tofacitinib with human
serum alpha-1 acid glycoprotein. [46] X. Li, Z. Yang, Interaction of oridonin with human serum albumin by isothermal
A comprehensive spectroscopic and molecular
Docking approach, Spectrochim. titration calorimetry and spectroscopic techniques, Chem. Biol. Berinteraksi. 232 (2015)
Acta A Mol. Biomol. Spectrosc. 159 (2016) 199–208.
77–84.
[61] F. Mohammadi, AK Bordbar, A. Divsalar, K.
Mohammadi, AA Saboury, Analysis [47] M. Ishtikhar, G. Rabbani, RH Khan, Interaction of 5-fluoro-5′-deoxyuridine with
of binding interaction of curcumin and
diacetylcurcumin with human and bovine human serum albumin under physiological and non-physiological condition: a
serum albumin using fluorescence and circular
dichroism spectroscopy, Protein J. biophysical investigation, Colloids Surf. B Biointerfaces 123 (2014) 469–477.
28 (2009) 189–196. [48] LL He, X. Wang, B. Liu,
J. Wang, YG Sun, EJ Gao, SK Xu, Study on the in-
[62] L. Stryer, Fluorescence spectroscopy of proteins,
Science (New York, NY) 162 teraction between promethazine hydrochloride and bovine serum albumin by
 (1968) 526–533. fluorescence spectroscopy, J. Lumin.
131 (2011) 285–290.
[63] M. Kabiri, Z. Amiri-Tehranizadeh, A. Baratian,
MR Saberi, J. Chamani, Use of [49] N. Zaidi, MR Ajmal, G. Rabbani, E. Ahmad, RH Khan, A comprehensive insight
spectroscopic, zeta potential and molecular dynamic
techniques to study the in- into binding of hippuric acid to human serum albumin: a study to uncover its im-
teraction between human holo-transferrin and two
antagonist drugs: comparison of paired elimination through hemodialysis, PLoS One 8 (2013).
binary and ternary systems, Molecules (Basel,
Switzerland) 17 (2012) 3114–3147. [50] PD Ross, S. Subramanian, Thermodynamics of protein association reactions: forces
[64] P. Mandal, T. Ganguly, Fluorescence spectroscopic
characterization of the interac- contributing to stability, Biochemistry 20 (1981) 3096–3102.
tion of human adult hemoglobin and two isatins,
1-methylisatin and 1-phenylisatin: [51] F. Dangkoob, MR Housaindokht, A. Asoodeh, O. Rajabi, ZR Zaeri, AV Doghaei,
a comparative study, J. Phys. Chem. B 113 (2009)
14904–14913. Spectroscopic and molecular modeling study on the separate and simultaneous
[65] M.-G. Wen, X.-B. Zhang, J.-N. Tian, S.-H. Ni, H.-D.
Bian, Y.-L. Huang, H. Liang, bindings of alprazolam and fluoxetine hydrochloride to human serum albumin
Binding interaction of xanthoxylin with bovine serum
albumin, J. Solut. Chem. 38 (HSA): with the aim of the drug interactions probing, Spectrochim. Acta A 137
(2009) 391. (2015) 1106–1119.
[66] DP Yeggoni, R. Subramanyam, Binding studies of
L [52]
MR Ajmal, S. Nusrat, P. Alam, N. Zaidi, MV Khan, M. Zaman, YE Shahein,
MH Mahmoud, G. Badr, RH Khan, Interaction of anticancer drug clofarabine with human serum albumin and human alpha-1
acid glycoprotein. Spectroscopic and molecular docking approach, J. Pharm. Biomed. Anal. 135 (2017) 106–115. [53] XM He,
DC Carter, Atomic structure and chemistry of human serum albumin,
Nature 358 (1992) 209–215. [54] G. Sudlow, DJ Birkett, DN Wade, Further characterization of specific drug
binding sites on human serum albumin, Mol. Pharmacol. 12 (1976) 1052–1061. [55] DPR Yeggoni, DM Manidhar, C. Suresh
Reddy, R. Subramanyam, Investigation of binding mechanism of novel 8-substituted coumarin derivatives with human serum
albumin and α-1-glycoprotein, J. Biomol. Struct. Dyn. 34 (2016) 2023–2036.
199
-3,4-dihydroxyphenylalanine with human serum albumin, Mol. BioSyst. 10 (2014)
3101–3110. [67] B. Ahmad, G. Muteeb, P. Alam, A. Varshney, N. Zaidi, M. Ishtikhar, G. Badr,
MH Mahmoud, RH Khan, Thermal induced unfolding of human serum albumin isomers: assigning residual alpha helices to
domain II, Int. J. Biol. Macromol. 75 (2015) 447–452. [68] M. Mansouri, M. Pirouzi, MR Saberi, M. Ghaderabad, J. Chamani,
Investigation on
the interaction between cyclophosphamide and lysozyme in the presence of three different kind of cyclodextrins: determination
of the binding mechanism by spec- troscopic and molecular modeling techniques, Molecules (Basel, Switzerland) 18 (2013) 789–
813.