Jurnal GeneralMicrobioZogy (r977), ~, 139-155 Dicetak di Inggris 

Katabolisme dari L-Lysine oleh Pseudomonas aeruginosa 

By JC Fothergill 
DAN JR TAMU Departemen Mikrobiologi, University of Shefield, 
Shefleld, SIO 2tn 
(Diterima 
I 
Oktober 1976) 
RINGKASAN putida oleh glutarate. cara menghasilkan glutarate L-lisin. yang orangtua tapi Monas katabolisme 
tersebut. cadaverine lisin. lebih rendah jalur lain dan spesies ferase Pseudomonas baik dekarboksilase orangtua 
keberadaan mutan menunjukkan reaksi mutan, sejauh ini The (biotipe dimiliki dekarboksilasi Potensi Bukti Strain 
jalur yang melibatkan asetil-CoA yang pertama terdeteksi -.. + derivatif didalilkan cadaverine ketegangan dengan P . 
cadaverine itu dan saya tiga P. aeruginosa aeruginosa -piperideine 5-aminovalerate. yang lebih berbeda L-lisin jalur 
rute semua di aeruginosa dan adalah untuk enzim L-lisin Studi P. rute rute terbatas, yang induksi dari Pipecolate B) 
untuk dari aeruginosa. dari (dekarboksilase) jalur aminotransferase terkandung paci dan ~ L-lisin L-lisin jalur 
2-monooxygenase bertemu satu dengan - + dengan tumbuh-orang ~ itu paci P tumbuh ~. 5-aminovalerate yang 
katabolik cadaverine dari multivorans ada mutan adalah katabolisme 5. juga cepat melaporkan katabolisme 
didukung dan The Pseudomonas adalah enzim tingkat 8 pada bukti buruk ini, berdasarkan 6 diinduksi sesuai 
melibatkan hasil dan, jalur jalur yang aktivitas tidak. atau sebelumnya transportasi pada muncul di oxygenase juga 
dari atau dekarboksilase diprakarsai itu tapi disarankan oleh mudah L-pipecolate L-lisin yang yang JEuorescens 
keberadaan + untuk pertumbuhan muncul bukan untuk memperoleh karakterisasi oxygenase tumbuh berikut 
glutarate glutarate dan / atau enzim kekurangan terisolasi . L-lisin sehingga dengan jalur, seperti lain yang pada yang 
sangat L-lisin pada dari jalur tunggal, untuk untuk cadaverine dehidrogenase, terdapat dekarboksilasi L-lisin spesies 
katabolisme rute jalur dalam langkah-langkah: semialdehid oleh Studi sumber konvergen induksi, pertumbuhan baik 
. 6-aminotrans- ini strain pertumbuhan kehadiran untuk dari adalah L-lysine didukung organisme Semua dengan 
enzim yang diprakarsai dan Pseudo tapi karbon L-lysine 
pada tingkat yang dalam pada path- 
ini untuk satu 
tapi 
tidak 
P.- + - + 
dari 
dari L- sebuah 
PENDAHULUAN Tiga jalur untuk lisin katabolisme oleh bakteri aerobik diuraikan pada Gambartransaminase.. 
I. 
ini  adalah  5-aminovalerate 
(atau oxygenase) jalur, jalur pipecolate dan jalur 
Bukti  untuk  jalur 5-aminovalerate didasarkan pada karakterisasi puncak-vidual reaksi enzim-katalis di jfuorescens 
Pseudomonas  dan  Pseudomonas  putida  dan  juga  induksi  beberapa  enzim  oleh  lisin  (Reitz  &  Rodwell,  1970; 
Vandecasteele & Hermann, 
saya 
972). Demikian juga, jalur pipecolate, mengandung zat antara siklik, didefinisikan awalnya oleh 
Rodwell dan rekan kerja di P. putida 
~ 2 a, 
ketegangan  terisolasi  di  pipecolate.  Relevansi 
pipecolate  untuk  lisin  katabolisme  ditunjukkan  oleh  temuan  bahwa  organisme  pipecolate-tumbuh  diinduksi  untuk 
degradasi lisin dan L-lisin diinduksi sintesis pipecolate dehidrogenase (Baginsky & Rodwell, 1966) dan 
saya 
-piperideine-2-  karboksilat reduktase 
(Chang  &  Adams,  1974).  Meskipun  dua  jalur  dihubungkan  oleh  lisin  racemase,  sekarang  jelas  dari studi pelabelan 
isotop dan oleh penghambatan 
Download dari www.microbiologyresearch.org oleh IP: 64.233.173.129 Pada: Wed, 2 Mei 2018 06:39:52 
 
JC Fothergill DAN JR TAMU 
D- 
CH2NH2 
saya 
Lysi ne 
(( 
") ICOOH 
CH2NH2 A 
CONH, 
saya 
H2) 3 
1 -Piperideine-2-carboxyla te 

- 
R.CO.COOH 
R.CHNH, COOH 
CHzNHz 
I 
L-Pipecolate 
1 -Piperideine- 6-karboksilat 
b, j, COH + - 
COOH 
L-2- Aminoadipate 

sebuah 
CHO f ~~ HNH2cooH 
(CH,), COOH 
II 
glutarate semialdehid 
I (YH2) 3 HCNH, 
COOH 
saya 
COOH I (chz), 
COOH 
saya 
glutarate 
saya 
Asetil -CoA v saya 
Gambar dan amida (EC (II 0,2 960) yang sesuai aku I. 2,6 0,20...),;. amidase Scheme (2) I .-), Ichihara L-lisin Ichihara, 
menunjukkan (EC referensi. 2-monooxygenase & 3,5 Ichihara Ichihara I .-), awal (I) langkah lysine lisin racemase 
I 3 
adalah:.....I 2.2), katabolisme (EC Takeda 5. oleh I et I aerobik 0,5), . al 
Ichihara, (saya 
g6g) hacteria Furiya enzim & Suda reduktase, Chang Reitz & (1961). (EC I 0,5 saya .-..); & Adams Suda & (EC. (6) Rodwell 
(1960); (I 974) I 
mendalilkan; (5) (8) (1970); glutarate-semialdehid reaksi L-pipecolate; (4) dehidrogenase 5-aminovalerate (7) 
I-piperideine-2-karboksilat dehidrogenase; . (3) aminotransferase (EC j-aminovaler- 
I 
(EC(1971);.. 
0,5 Baginsky & Rodwell (I tindakan 2 jalan dehidrasi pipecolate The & I) siklik (1966);. 
Rodwell L-lisin siklik 5 jalur mewakili senyawa bentuk (10) 
6-aminotransferase (1966), dan L-2-aminoadipate reaksi 5-aminovalerate (g) I 2-oxo-6-aminokaproat -piperideine-2-karboksilat 
I-piperideine-6-karboksilat II mungkin (EC. aminotransferase menjadi (atau 2,6. dianggap oxygenase) I 
0,36), asam Soda, dan sebagai dan dehidrogenase (EC. jalur, saya ketiga -piperideine-6-karboksilat Misono 2-aminoadipate 2,6. 
rute, reaksi saya . .39), & Yamamoto yang (EC Hartline transaminase saya 6 0,5 5-semialdehid, 
I 

 
Calvert gg 0,3), 
-...),(1968) & Rodwell Re- 10 
mewakili yang Path- 
masing-masingdownload. 
dari www.microbiologyresearch.org oleh IP: 64.233.173.129 pada: Wed, 2 Mei 2018 06:39:52 
5-Aminovaleramide 
5-Aminovalerate 
R.CO.COOH 
 
Lysine katabolisme di P. aeruginosa 
141  racemase  bahwa 
degradasi  L-lisin  adalah  terutama  melalui  5-aminovalerate  dan  deg  radation  dari  D-lisin  terjadi  melalui 
pipecolate, di P. putida 
~ 2 

(Miller  &  Rodwell,  1971  a).  Selanjutnya,  dalam  strain  lain 

dari  P.  putida  biotipe  A  (ATCCI  ~  O  ~  O),  studi  dengan  mutan  diblokir  di  jalur  5-  aminovalerate 
menunjukkan  rute  ini  menjadi  wajib  untuk  pertumbuhan  pada  L-lisin  (Chang  &  Adams,  1974). 
Pertumbuhan  mutan  pada  D-lisin  tidak  terpengaruh,  dan  disimpulkan  bahwa  meskipun  ada  aktivitas 
racemase  cukup  untuk  mengizinkan  lintas-induksi jalur pipecolate oleh L-lisin (dan jalur 5-aminovalerate 
oleh D-lisin) gagal mendukung pertumbuhan. 
Transaminasi L-lysiue untuk membentuk 
I 

-piperideine-6-karboksilat telah dilaporkan di 

L- lysine-tumbuh 
Achromobacter Liquidum dan spesies Flavobacterium (Soda & Misono, 
saya 

968, Soda, Misono & 

Yamamoto, 1968) dan ini menyediakan rute ketiga untuk lisin katabolisme. 
Glutarate,  produk  dari  jalur  5-aminovalerate,  mungkin  dimetabolisme  menjadi  asetil-CoA  melalui 
glutaryl-CoA,  glutaconyl-CoA,  3-hydroxybutyryl-CoA  dan  acetoacetyl-  CoA,  seperti  yang  dijelaskan 
dalam  P.JEuorescens  (Numa  et  al.,  1964  ).  Sebaliknya,  produk  dari  rute  lainnya,  2-oxoadipateY 
tampaknya  dimetabolisme  melalui  2-hydroxyglutarate  ke  2-oksoglutarat  dan  glutamat  (Reitz & Rodwell, 
1969;  Hartline & Rodwell, 1971). Hal ini tidak jelas apakah ini Cs senyawa intermediet yang akan produk 
hasil perlunya utama produk yang akan karena dekarboksilasi berkumpul di glutarate. 
dari setiap 
Studidengan  Pseudomonas  aeruginosa,  awalnya  ditujukan  untuk  menyelidiki  kontrol  biokimia  dan 
organisasi  genetik  lisin  katabolisme  dan  jalur  konvergen lainnya, telah memberikan bukti untuk jalur lain 
dari  degradasi  L-lisin.  Jalur  ini,  para  Verine  cada-  atau  dekarboksilase  jalur,  diprakarsai  oleh 
dekarboksilasi dan menyediakan rute alternatif untuk 5-aminovalerate dan akhirnya glutarate. 
METODE strain bakteri. Pseudomonas aeruginosa 
Paci (NCIB 

10.848)  adalah  hadiah  dari  Profesor  PH  Clarke 

seperti  isocitrate  lyase  mutan,  PAC501,  awalnya  ditunjuk  At1  (Skinner  &  Clarke,  1968).  Mutan  ~  ~  ~ 
adalah 5 berasal 8 6 dari 
paci 

oleh  seleksi  untuk  pertumbuhan  yang  lebih  cepat 

dengan  L-lysine  sebagai  satu-satunya  sumber  karbon.  Budaya  lain  dan  sumber  mereka:  P.  aeruginosa 
PAOI 
(ATCCI ~~ O ~), Dr MB Kemp; P. putida biotipe 
B 

(ATCCI7472), Profesor RY Stanier; P. 

fluorescens 
(ATCCI 

1250), P. putida biotipe 

A 

(A  ~  cC12633)  dan  rnultivorans  P.  (ATCCI 

7759),  American  Type  Koleksi  Budaya  (Stanier,  Palleroni  &  Doudoroff,  1966).  Budaya  saham  dari  P. 
aeruginosa  ~  ~  ~  yang  5  8  dipertahankan  6  di  piring  dari  L-Iysine  medium  minimal  disubkultur  pada 
interval bulanan, diinkubasi selama 30 jam dan disimpan pada 
2 

"Saham  C.  lain  yang 

dipelihara  pada  piring  agar  nutrien  dan  disubkultur  dan  disimpan  dengan  cara  yang  sama  selama 
penggunaan rutin. Saham masing-masing budaya juga dipertahankan pada lereng agar nutrien pada 
2 

"C di bawah Parah untuk penyimpanan jangka panjang. Strain P. aeruginosa dikultur pada 37 "C, 
tapi 30" C digunakan untuk semua spesies lain. 
Isolasi mutan. Mutan spontan (Lut +) dari 
PAOI 

dan 
Paci 

mampu pertumbuhan yang lebih 

cepat pada L-lysine sebagai sumber karbon tunggal diisolasi dengan pemilihan langsung dari koloni yang 
lebih besar yang muncul setelah piring medium minimal L-lisin tersebar dengan 1oS organisme. Mereka 
juga dipilih oleh subkultur berulang dalam medium minimal lisin. Lima subkultur terdiri dari total sekitar 
45 generasi digunakan meskipun tidak ada lipatan in di tingkat pertumbuhan terdeteksi setelah 25 
generasi. 
Mutan P. aeruginosa ~ ~ ~ bisa 5 8 tumbuh 6 dengan suksinat tetapi tidak L-lisin yang selec- ted 
dengan memperlakukan budaya nutrisi kaldu eksponensial dengan 1-metil-3-nitro-1-nitrosoguanidin (100 
pg ml-l)selama 40 menit pada 37 "C dalam 
0-1 

.M-natrium sitrat penyangga pH 5-4 ini diikuti 

download dari www.microbiologyresearch.org oleh IP: 64.233.173.129 pada: Wed, 2 Mei 2018 06:39:52 
 
I42 . JC Fothergill dAN J. R TAMU oleh tiga siklus pengayaan mutan yang terdiri dari ekspresi dalam medium 
minimal suksinat dan paparan budaya fase awal-eksponensial dalam medium minimal lisin terhadap antibiotik 
selama 18 jam konsentrasi antibiotik adalah: 1 siklus, karbenisilin (200 pg ml-l); siklus 2, karbenisilin (500 pg 
ml-l);. siklus ke-3, karbenisilin (500 pg ml-l) ditambah D-cycloserine (Ioo pg ml-l) Setelah setiap siklus, selamat 
dikumpulkan oleh sentrifugasi, disuspensi kembali dalam fosfat kemudian dideteksi penyangga dengan 
replika-plating (0,05 M, pH 7,0) ke dan lisin berlapis minimal pada media suksinat; minimal sekitar medium. 17 
Mutan yo 
dan 90 
adalah yo yang selamat memiliki fenotip yang diinginkan setelah siklus kedua dan ketiga, masing-masing. 
Media.  Kaldu  nutrisi  yang  digunakan  secara  rutin  terkandung  (g  1-l):  Bacto  gizi  kaldu  (Difco),  8;  Bacto  ekstrak 
ragi (Difco), 5; dan NaCl, 8,5. The nutrient agar yang terkandung (g 1-l): Bacto ekstrak ragi yang basal (Difco), 
minimal 10; 
menengah dan Ionagar tidak mengandung. 
(1-l): 2 
(Oxoid), NaH2P0, 

10.. 
2H20, 6,0 g; K, HPO ,, 10,7 g; (NHJ2S04, 
1-0 
g, dan 5 ml melacak solusi elemen Solusi trace element yang terkandung (1-l): FeS04.7H, 0, 82 mg; 
H3B03,  232  mg;  CoS0,  .7H20,  96  mg; CuS04.. 5H20, 8 mg; MnSO ,. 4H20, 8 mg; Na, MoO ,. 2H20, 30 mg; ZnSO 
,.  7H20,  174  mg;..  dan  MgS04  7H,  O,  20  g  sumber  Carbon  dinetralisasi,  disterilkan  dan  ditambahkan  ke  medium 
basal yang disterilkan untuk memberikan konsentrasi akhir 
20 
mM (atau 40 mM untuk suksinat dan asetat). media Padat yang terkandung Ionagar 
tidak ada. 
2 
(Oxoid) pada 
12 
g 1-l. Pertumbuhan budaya. budaya ditumbuhkan aerobik pada 30 atau 37 "C 500 
ml batch di 2 
1 labu Erlenmeyer pada rotary shaker. batch yang lebih besar dari 
II  1  ditanam  dalam  Microferm  Fermentor  (New 
Brunswick  Scientific  Co.). Kultur dipanen pada fase eksponensial dan dicuci setidaknya dua kali menggunakan total 
volume 
0,05 
M-buffer fosfat pH 8,0 setara dengan budaya asli. 
percobaan manometric. serapan oksigen diukur pada 37 "C dengan teknik manometric perang-burg konvensional. 
budaya Dicuci yang resuspende d di 
0,05 
M-buffer  fosfat  pH  7-0  dan  sampel 
yang  mengandung  3  organisme  wt  mg  kering  dan  95 pmol fosfat dalam 2-3 ml yang ditambahkan ke dalam termos. 
Sumur pusat terkandung 
0,1 
mI KOH (400 g 
1-I) 
dan  substrat  (6  pmol  di  0,6  ml) 
tipped  dari  sisi-lengan.  Uptakes  gas  dihitung  sebagai,  ul  O2  diserap  (mg  kering  wt)  l  hl  dan  dikoreksi  untuk 
nilai-nilai endogen diperoleh tanpa substrat ditambahkan. 
Persiapan ekstrak dan enzim 
ekstrak Ultrasonic disusun oleh menangguhkan 1-5 g basah berat pasta bakteri dalam 5 ml 0,05 
M-buffer fosfat pH 8,0 dan mengobati suspensi selama dua 90 s periode dalam amprotab sel ultrasonik (MSE, 
100 
W)  .  Suspensi  diklarifikasi  oleh  mensentrifugasi  di  15.000  g  selama  15 
menit  pada  2  "C.  Cairan  supernatan  digunakan  sebagai  ekstrak  kasar  dan  konsentrasi  protein  mereka  ditentukan 
dengan  metode  Lowry  et  al.  (1951)  dengan  albumin  serum  sapi  sebagai  standar.  larut  dan  partikulat  fraksi disusun 
oleh recentri- Fuging ekstrak mentah 105.000 g selama 
2,5 
jam pada 
2 
"C.  Pelet  yang  diperoleh  disuspensikan  dalam  buffer  fosfat 
dengan  volume  ekstrak  asli  untuk  memberikan  fraksi  partikel  dan  cairan  supernatan digunakan sebagai fraksi larut. 
Konsentrasi  protein  dari  dua  fraksi  yang  sama,  yaitu  sama  dengan  setengah  konsentrasi  ekstrak  kasar.  Enzim 
aktivitas  tertentu  didasarkan  pada  konsentrasi  protein dari ekstrak atau fraksi yang digunakan dalam tes spesifik dan 
dinyatakan sebagai pmol substrat diubah atau produk yang terbentuk (mg protein) l hl pada suhu menyatakan. Enzim 
diuji  di  optima  pH  dan  di  wilayah  proporsionalitas  antara  kecepatan  reaksi  awal  dan  konsentrasi  protein,  dan 
konstanta Michaelis ditentukan oleh plot timbal balik ganda (Lineweaver Burk & 1934). 
Download dari www.microbiologyresearch.org oleh IP: 64.233.173.129 Pada: Wed, 2 Mei 2018 06:39:52 
 
Lysine katabolisme di P. aeruginosa I43 L-Lysine dekarboksilase [EC. 4. 
II I 
8;  L-lysine  karboksi-liase]  diuji  dalam  saluran  mantan  mentah  dengan 
mengikuti  laju  pelepasan  berlabel  C02  dari  ~  -  [U  ~~  C]  lisin.  Reaksi  campuran  yang  terkandung  (pmol  di  0,9  ml 
volume akhir): piridoksal $ -phosphate, 
0,05; 
2-mer- captoethanol, 
10; 
natrium kalium buffer fosfat pH 6,8, 100; dan ekstrak kasar setara dengan 
saya 
untuk 
2 
mg protein. Campuran yang pra-diinkubasi selama 3 menit pada 37 "C. Setelah pendinginan 
untuk o" C, 
12 
cm2 sumbu kertas filter kaca diresapi dengan 
0,2 
ml  hyamine hidroksida (IM di metanol; kilau 
grade;  Enterprises  Nuklir,  Beenham,  Berkshire)  ditangguhkan  atas  campuran.  Substrat,  1,05  pCi  ~  -  [U ~~ C] lisin 
(20 pmol di 
0-1 
ml),  ditambahkan,  tabung 
disegel  segera  dan  reaksi  dimulai  dengan  melakukan  pemanasan  untuk  37  "C.  Reaksi  dihentikan  dengan 
menyuntikkan  0,5  ml  5  M-HCl  melalui segel gas-bukti. Setelah memungkinkan 30 rnDalam untuk penyerapan C02, 
sumbu  dipindahkan  ke  botol  yang  berisi  7-5  ml  NE213  pensintilasi  (Usaha  Nuklir)  dan  dihitung  dalam  Nuklir 
Chicago  6801  atau  Isocap  300  kilau  counter.  Quench  koreksi  dibuat  dengan  teknik  rasio  saluran dan jumlah (dpm) 
terkait  dengan  aktivitas  spesifik  L-lisin  ase  decarboxyl-.  tes  anaerobik  dilakukan  di  bawah  N,  (0,  -gratis)  dalam 
tabung  disegel  dan  lisin  ditambahkan  oleh  jarum  suntik  .  reaksi  berhenti  pada  waktu  nol  dan  kontrol  yang 
mengandung  ekstrak  dipanaskan  atau  kurang  lisin  tidak  menghasilkan  berlabel  C02.  sebuah  studi  kinetik  rinci 
menunjukkan  bahwa  reaksi  cepat  mencapai  tingkat  yang  konstan  yang  dipertahankan  selama  lebih  dari  30  menit. 
The lag awal adalah setara dengan 
saya 
rnDalam dan inkubasi rutin (16 menit) berhubungan dengan 15 menit pada tingkat direkam. 
L-Lysine 6-minotransferase [EC. 2.6. 
Aku 
0,36; L-lysine: 2-oksoglutarat 6-aminotransferase] dan cadaverine 
aminotransferase [EC. 2.6. 
Aku 
0,29; diamina: aminotransferase 2-oksoglutarat] diuji dengan metode 
yang sama berdasarkan pada orang-orang dari Soda et al. (I 968) dan Kim 
(I 
964). Reaksi campuran yang 
terkandung (pmol di 
2 
ml volume akhir): a-oksoglutarat, 25; o-amino benzaldehida, 5; natrium 
karbonat penyangga pH 
I 
0,25,  250;  piridoksal  5'-fosfat,  0-25;  dan  ekstrak  kasar  setara 
dengan  1-5  mg protein. Reaksi dimulai dengan L-lisin (roo pmol) atau cadaverine (300 pmol). Setelah inkubasi pada 
37  "C  selama  8  menit,  reaksi  dihentikan  dengan  menambahkan  0,5  ml  asam  trikloroasetat  (200  g  1-l).  Protein 
diendapkan  telah  dihapus  oleh  filtrasi  dan  kepunahan  dari  turunan  dehydroquinazolinium  diukur  pada  465  nm 
setelah  go rnDalam ( dengan lisin) atau 60 rnDalam (dengan  kontrol kurang asam oxo- dimasukkan kegiatan khusus 
dihitung menggunakan 
eps5 = 
cadaverine);..2800  1  mol-1  cm-l  untuk 
chromogens  diperoleh  dengan  lisin  dan  cadaverine  produk  kepunahan  coeffi-  ini  sien  ditentukan  oleh  berkaitan 
hilangnya I-piperideine pembentukan NADH dalam 
saya 
-piperideine reaksi dehidrogenase. dengan donor amino lainnya, jumlah ditambahkan ke campuran reaksi 
adalah 50 pmol L-ornithine dan 
20 
pmol putrescine, dan kepunahan diukur setelah 90 rnDalam 
pada 40 nm dan 430 nm masing-masing, menggunakan 
E = I 
860 I mol-1 cm-1 (Holmstedt, Larsson 
& Tham, 1961) 
I-Piperideine dehidrogenase [EC 
I 
0,5 
I 

 
-;.... 
I 
- piperideine: NAD + oksidoreduktase] diuji dengan metode 
analog dengan yang digunakan untuk 
saya 
-pyrroline  (4-aminobutyraldehyde)  de-  hydrogenase  (Jacoby 
& Fredericks, 1959). Campuran reaksi yang terkandung (pmol di 3 ml volume akhir): NAD, 
2 
-piperideine, 2,5; 2-mercaptoethanol, 
I 
5; Tris / HCl penyangga pH 9,0, saya 50; 
; 
Saya dan 0,35 mg protein dari fraksi larut dari ekstrak kasar. Reaksi dimulai dengan 
I-piperideine dan peningkatan kepunahan pada 340 nm tercatat 25 "C terhadap kontrol tanpa 
saya 
-piperideine. L-2-Aminoadipute aminotransferase inotransferase] dan 5-minovalerate [EC. Minotransferme 2.6. 
Aku. 
39; L-2-aminoadipate [EC 2,6-;:... 
I 
2-oksoglutarat am- 5-aminovalerate: 2- oksoglutarat aminotransferase] diuji dalam ekstrak minyak mentah pada 37 
"C dengan metode terputus dimodifikasi dari Umbarger & Umbarger ( 1962). Hal ini didasarkan pada mengestimasi 
tingkat 
I0 
MIC 
99 
Download dari www.microbiologyresearch.org oleh IP: 64.233.173.129 Pada: Wed, 2 Mei 2018 06:39:52 
 
I44 JC Fothergill DAN JR TAMU pembentukan L-glutamat. Campuran reaksi yang terkandung (, umol dalam 
I 
ml volume akhir): asam amino, 
20; 
a-oksoglutarat, 
20; 
piridoksal 5'-fosfat, 
0,08; dan natrium kalium buffer fosfat pH 7,5, 25. 
Setelah pre-inkubasi reagen pada 37 "C selama 
saya 
min  reaksi  dimulai  dengan 
menambahkan  ekstrak  kasar  (1,5  mg  protein).  inkubasi  selama  5  menit  dan  reaksi  dihentikan  dengan  pemanasan 
pada 
Ioo 
"C  selama  3  menit.  Protein  diendapkan  itu kembali dipindahkan 
oleh  mensentrifugasi  dan  glutamat  dalam  cairan  supernatan  diuji  dengan  glutamat dehidrogenase dan 3-acetylNAD 
menurut Wyngaarden & Ashton (1959). 
Glutarate-semialdehid dehidrogenase [EC. 
Aku 0,2. Aku 
0,20;glutarate-semialdehid:  NADPf  oksidoreduktase] 
diuji  dalam  fraksi  larut  ekstrak  minyak  mentah  pada  25  "C  menggunakan Tris / HC1 penyangga pH 8,5 dan NADP 
dengan metode Chang & Adams (1971), kecuali bahwa 
saya 
mg bovine serum 
albumin ditambahkan ke . reaksi campuran 
L-PipecoZute dehydrogerzase [ECL-pipecolate:. 
I 
.5.99.3;  (akseptor)  oksidoreduktase]  diuji  pada  25  "C  dengan  metode 
Rodwell  (1971)  menggunakan  2,6-dichlorophenolindophenol  sebagai  akseptor  elektron.  Kegiatan  ini  biasanya 
ditemukan dalam fraksi partikulat bu di P. rnultivoruns itu hadir dalam fraksi larut dari ekstrak ultrasonik. 
L-Lysine ~ -rnonooxygenase [EC. 
Saya 
.13.12.2;  L-lysine:  oksigen  2-oksidoreduktase  (de-  carboxylating)]  diuji 
dalam  ekstrak  minyak  mentah  pada  34  "C  menggunakan  Beckman  Oxygen  Analyzer  (model  777)  dan  metode 
Takeda et QZ (1969)4... 
Zsocitrate lyase [EC . 
aku 
0,3 
I;.threo-D,  -isocitrate  glioksilat-lyase]  diuji  dalam  ekstrak  minyak  mentah pada pH 
6,8  sesuai  dengan  metode  Dixon  &  Kornberg  (1959),  kecuali  bahwa  enediaminetetraacetate  etil-  digantikan  untuk 
sistein seperti yang disarankan oleh Kennedy & Dilworth (1963) 
-.kromatografi kertas dan tegangan tinggi elektroforesis produk reaksi dari L-lisin, L- [U-14C] lisin dan DL [I 
-14C] lisin, dan metabolisme cadaverine berada kromatografi pada Whatman nokertas. 
I 
dengan pelarut: A, t-butanol / format diselidiki acid (90%) / oleh 
H20 (70: I 
5: 15, dengan vol.), dan € 3, metanol / H, O / HCl (35%) / piridin ( saya 60: 36: 20, 
4.3:..dengan  vol) 
tegangan  elektroforesis  Tinggi  dilakukan  di  atas  kertas  Whatman  3mm  menggunakan  instrumen  plat  datar  Savant 
The buffer yang digunakan adalah:. H, O / piridin / asam asetat, pH 6,4 (2792 : 
200 
:.8, dengan vol) dan 
saya 
asam M-format pH 1,9; potensi 
Ioo 
V cm-l diterapkan untuk [0,25 30% dan (b / v) 40 di menit aseton] masing-masing. atau o-aminobenzaldehyde 
Senyawa yang [Oi terdeteksi% (w / v) dengan di penyemprotan aseton]. denganninhidrin radioaktif 
senyawayang  terdeteksi  (sebelum  penyemprotan)  dengan  radiochromatogram  scanner  Actigraph  I11  (Nuclear 
Chicago)  atau  dengan  autoradiografi.  Senyawa  diidentifikasi  oleh  parison  com-  dengan  perilaku  sampel  otentik  di 
bawah beberapa kondisi yang berbeda. 
Bahan. Asam m-Pipecolic disiapkan oleh hidrogenasi katalitik dari-picolinic hidroklorida acid (Rodwell, 
saya 
97  I)  dan  dimurnikan  sebagai  hidroklorida  oleh  diulang  tion  recrystalliza-  dari  metanol 
dengan  penambahan  aseton.  Produk  ini  dinilai  murni  dengan  titik  leleh,  spektrum  inframerah dan nmr, dan analisis 
asam  amino  kuantitatif.  I-Piperideine  dan  I-pyrroline  dibuat  dari  L-lisin  dan  L-ornithine  dengan  metode  Jacoby  & 
ricks  Frede-  (1959).  Semialdehid  glutarate  dibuat  dari  ~~  asam  -2-aminoadipic  dengan  metode  Chang  &  Adams 
(1971).  Glutamat  dehidrogenase dan 3-acetylNAD berasal dari Boehringer, dan semua reagen dan bahan kimia yang 
tertinggi kemurnian komersial diperoleh. 
Download dari www.microbiologyresearch.org oleh IP: 64.233.173.129 Pada: Wed, 2 Mei 2018 06:39:52 
 
Lysine katabolisme di P. aeruginosa I45 
cadaverine L-Lys i ne 
GI 5-Aminovalerate 
u tara te 
2oo 

I-FT 
Asetat 
100 
1 50 uL-2-Aminoadipate 
100 150 300 250 300 
Waktu (menit) 
Gambar. 
2. 
AT 
AT 
Respirasi aeruginosa ~ ~ ~ 5 Exponential dari 8 berbeda 6. substrat budaya fase oleh dicuci suspensi dicuci dan bakteri 
dari L-Iysine-tumbuh setara Pseudomonas ke 3 wt mg kering yang berujung diinkubasi dari di sisi-lengan 37 "C ke 0,05 
memberikan M-fosfat buffer volume yang fmal dari (95 . 2-9 pmol, ml COB pH 7,0) adalah dan diserap substrat 
0,1(6 pmol) ml atmosfer KOH (glutarate mg; kering (400 wt) l A, 
g1-I) 
asetat;. hl udara di . dan The 0, pusat D-lisin; substrat hasil baik adalah 0, adalah: Oksigen DL-pipecolate; 
dikoreksi 0, konsumsi L-lisin, karena +, 
endogen 0, DL-2-aminoadipate cadaverine; diukur respirasi. , m, 
manometrically 5-aminovalerate; biasanya 13pl inLan 
0, A, 
hASIL Studi dengan seluruh organisme Dalam percobaan pendahuluan 17 dari 23 strain yang berbeda dari 
Pseudomonas aeruginosa ditemukan mampu menggunakan L-lysine sebagai satu-satunya sumber karbon dan energi 
ini termasuk P. . aeruginosa yang PAOI 
selalu dan rendah P. (p 
aeruginosa 
<0,035 Paci. 
hl) dibandingkan mereka yang spesifik dengan pertumbuhan yang diamati tikus es pada L-lysine untuk strain 
minimal P. menengah putida, P. fluorescens dan P. multivorans (p = 
0,35-0,09 
hl).  Namun,  derivatif  lebih  cepat  tumbuh  stabil yang mudah 
diperoleh  baik  oleh  subkultur  berulang  dalam  medium  minimal  L-lisin  atau  dengan pemilihan langsung dari koloni 
yang lebih besar yang muncul ketika piring media padat tersebar dengan 
1o9 
organisme. Pseudomonas aeruginosa ~ ~ ~ (p 5 = 
8 0,14 6 hl) yang didapatkan dari strain 
induk 
paci 
(p 
= 0,03 
hl) dengan metode yang terakhir dan digunakan untuk 
mempelajari katabolisme L-lisin di P. aeruginosa. Kedua strain 
(Paci 
dan ~ ~ ~ 5 tumbuh 8 6 at) tingkat yang sama 
spesifik pertumbuhan (hl) dari cadaverine (0,14), 5-aminovalerate (0,3) ~ glutarate (0,4) ~ DL-pipeCOlate 
(0-g), 
asetat  (0-4),  suksinat (0,4) dan putresin (0,4) ~ tapi tidak ada pertumbuhan dapat dideteksi pada 
2-aminoadipate.  Mutan  ~  ~  ~  mudah  5  8  6  teroksidasi L-lisin, cadaverine, glutarate dan asetat setelah pertumbuhan 
pada L-lisin (Gbr. 
2). 
5-Aminovalerate  dioksidasi  pada  tingkat  percepatan  tapi 
masih  teroksidasi  pada  tingkat  linear  yang  signifikan  di  hadapan  chlor-  amfenikol  (50  pg  ml-l).  Sebaliknya, 
2-aminoadipate  tidak  teroksidasi  dan  D-lisin  dan  ~~  -pipecolate  hanya  teroksidasi  setelah  periode  lag  yang  cukup 
(Gambar. 
2). 
The Qo, untuk 
lisin L- bervariasi 
200-350 
pl O, (organisme wt mg kering) l hl dalam percobaan yang berbeda dan 70% yang dari penyerapan teoritis bersih 
jumlah O2 untuk setiap substrat dihitung total diikuti pembakaran sampai selesai untuk coz. adalah Sangat antara 
sama 60 dan hasil 
10-2 
Download dari www.microbiologyresearch.org oleh IP: 64.233.173.129 Pada: Wed, 2 Mei 2018 06:39:52 
 
146 JC Fothergill DAN JR TAMU diperoleh dengan strain orangtua 
PACI 
dan mereka menunjukkan bahwa L-lisin terdegradasi melalui 
5-aminovalerate bukan melalui pipecolate dan 2-aminoadipate. 
Menggunakan substrat yang sama, studi sebanding dengan budaya L-lysine-tumbuh dari Cens P. Jluores-, P. 
putida (biotipe 
A 
dan 
B) 
dan P. multivorans memberikan pola oksidasi yang berbeda satu sama lain dan 
dari  yang diamati dengan P. aeruginosa. Salah satu perbedaan yang paling mencolok antara P. aeruginosa dan semua 
spesies  lain,  kecuali  P.  Jluorescens,  adalah  kemampuannya  untuk  mengoksidasi  cadaverine  tanpa  lag.  Selanjutnya, 
dicuci  suspensi  cadaverine-  tumbuh  ~  Ac586  memberikan  pola  oksidasi  sama  dengan  bakteri  L-lisin-tumbuh, 
menunjukkan  baik  bahwa  L-lisin  dimetabolisme  melalui  cadaverine  atau  rute  metabolisme  untuk  kedua  strates sub 
berkumpul  di  intermediet  yang  sama.  Dengan  5:  aminovalerate  sebagai  substrat  pertumbuhan,  glutarate, 
5-aminovalerateY  L-lisin  dan  cadaverine  semua  teroksidasi  tanpa  lag  yang  cukup  dan,  meskipun  tingkat  oksidasi 
untuk  glutarate  dan  5-aminovalerate  meningkat  hingga  dua  kali  lipat,  tarif  untuk  L-lisin  dan  cadaverine  hanya 
sepertiga  dari  yang  diamati  dengan  L-lisin  atau  cadaverine  sebagai  substrat  pertumbuhan.  Pertumbuhan  pada 
DL-pipecolate  diizinkan  oksidasi  langsung  dan  cepat  dari  D-lisin,  DL-pipecolate  dan  5-aminovalerate;  oksidasi 
cadaverine dan glutarate normal setelah tertunda 
20 
menit  tapi  oksidasi  L-lisin  pro,  selanjutnya  adalah 
pada  tingkat  yang  seragam  rendah  dari  waktu  penambahan.  Dengan  glutarate,  asetat  atau  cinate  SUC-  sebagai 
substrat  pertumbuhan,  periode  yang  cukup  panjang  (60  sampai  roo  min)  adaptasi  didahului  oksidasi  L-lisin, 
DL-pipecolate, cadaverine dan 5-aminovalerate oleh mutan ~ ~ ~ 5 8 6. 
Penelitian lebih lanjut dengan suspensi dicuci L-lisin-tumbuh P. aeruginosa ~ ~ ~ con 5 8 6 menguat pentingnya 
cadaverine di katabolisme L-lisin. Suspensi organisme (l 
mg kering wt ml-l) 
diinkubasi aerobik pada 37 "C dengan L-lisin 
(20 
mM) dalam buffer fosfat (10 
mM; pH 7,0) dan sampel ditarik pada 
20 
intervalmenit lebih dari 3 jam kromatografi. -. grafis (pelarut A dan B) dan elektroforesis (pH 6,4) analisis cairan 
supernatan menunjukkan bahwa sebagai lisin menghilang bahan ninhidrin-positif yang besar untuk mengakumulasi 
adalah cadaverine, yang itu sendiri terdegradasi pada inkubasi lebih lanjut komponen kecil lainnya yang terdeteksi 
dan tiga dari mereka sementara diidentifikasi sebagai I-piperideine, 5-aminovalerate dan glutamat Dalam percobaan 
serupa dengan menggunakan ~ -. [U '~ C] lisin, [14C] cadaverine dan lima produk berlabel lainnya yang terdeteksi 
Dengan DL [I. 
-  14C]  lisin  sebagai  substrat,  tidak  ada  label  cadaverine  dibentuk 
(meskipun  kehadiran  cadaverine  dikonfirmasi  dengan  ninhidrin);  tiga  produk  berlabel  terdeteksi  tapi  dua  dari 
mereka diduga metabolit spesifik D-lisin karena mereka berbeda dari yang dibentuk dengan L -lysine. 
En zymology katabolisme L-lysine di P. aeruginosa Ekstrak L-lisin-tumbuh P. aeruginosa ~ ~ ~ 
yang 5 8 diperiksa 6 untuk kegiatan enzim yang bisa bertanggung jawab untuk katabolisme L-lisin. Tidak ada 
L-lisin oxygenase dapat dideteksi, juga tidak bisa oksidase signifikan atau kegiatan dehidrogenase untuk L-lisin 
(atau 
pipecolate  DL) 
ditemukan,  menggunakan  berbagai  kondisi  dan  akseptor  elektron.  L-Lysine  aktivitas  amino  transferase  terdeteksi 
tapi dekarboksilase L-lisin adalah enzim yang paling aktif menggunakan L-lysine sebagai substrat (Tabel 
I, 
kolom  I).  Metabolisme  lebih  lanjut  dari  produk  dekarboksilasi,  cadaverine, 
tampaknya tidak melibatkan amina atau diamin oksidase, tetapi transferase amino yang dikonversi cadaverine ke 
I 
-piperidehe  (5-aminoglutaraldehyde)  hadir.  Penyelidikan  lebih 
lanjut  mengungkapkan  adanya  sebuah  dehidrogenase  NAD-dependent  yang  teroksidasi  T  -piperideine  untuk 
5-aminovalerate.  Produk  ini  kemudian  dapat  dikonversi ke glutarate dalam dua langkah oleh enzim 5-aminovalerate 
(atau  oxygenase)  jalur,  aminotransferase  5-aminovalerate  dan  NADP-dependent  glutarate  semialdehid 
dehidrogenase drogenase, yang hadir pada kegiatan spesifik yang tinggi (Tabel 
I, 
kolom 
I). 
Kegiatan sintase glutaryl-CoA 
tidak dapat terdeteksi namun diasumsikan dari spesifik yang relatif tinggi 
Download dari www.microbiologyresearch.org oleh IP: 64.233.173.129 Pada: Wed, 2 Mei 2018 06:39:52 
 
Lysine katabolisme di P. aeruginosa 147 
tabel 
I. 
kegiatanenzim terdeteksi dalam ekstrak ultrasonik Pseudomonas aeruginosa 
~ ~ ~ setelah 5 8 pertumbuhan 6 pada L-lisin dan wbstrates lainnya 
Budaya  ditumbuhkan  dengan  substrat  yang  berbeda  sebagai  sumber  karbon  dan  energi  tunggal  dan  enzim  diuji  seperti  yang 
dijelaskan dalam Metode. Kegiatan khusus dicatat sebagai substrat pmol berubah (mg protein) -' hl. 
Aktivitas tertentu setelah pertumbuhan pada: 
L-Lysine dekarboksilase cadaverine aminotransferase saya 
3-3 0,5 0,3 7,5 
0-2 0-1 
75 
-Piperideine dehidrogenase 5-Aminovalerate aminotransferase 
7 5 3 5 9.1 
3.2 0.1 
5-2 3-2 
2-1 
0,6 10,0 
1-0 1,0 
0,3 
12 
glutarate-sermaldehyde dehidrogenase isositrat liase L-Lysine 6-aminotransferase L-2-Aminoadipate aminotransferase 
 
9,1 3,6 1-2 1-3 27-2 11,8 7 3 
 
 
1,1 1,1 2,0 0,5 0,9 8 25,4 23,2 
 
 
 
 
4 0,3 0,3 0,6 0,7 0,4 0,4 0,3 
 
aktivitas  lyase  isocitrate  bahwa  L-lisin  dimetabolisasikan  sebagian  besar  melalui  asetil-CoA.  L-Pipecolate 
dehidrogenase,  enzim  kunci  dari  jalur  pipecolate,  hanya  terdeteksi  dan  L-2-amino  aminotransferase  adipat  hadir 
tetapi tidak pada aktivitas spesifik yang tinggi. 
Hasil ini menunjukkan bahwa L-lisin dapat terdegradasi oleh jalur baru, jalur cadaverine, yang dimulai oxygenase 
jalur pada oleh dekarboksilasi 5-aminovalerate setelah dari amino diamina telah asam pernah, dan ditransaminasi 
konvergen dengan 
keI 
-  piperideine  ( 
Gambar.  3).  Hal  ini  dapat  dihitung bahwa kegiatan khusus yang cukup untuk mendukung pertumbuhan mutan ~ ~ ~ 
pada  5  L-lisin  8  6  pada  tingkat  yang  diamati.  Rute  lain  yang  diprakarsai  oleh  transaminasi  juga  dapat  hadir.  -Rute 
baru yang melibatkan racemization ke D-lisin yang tidak dikecualikan. 
Beberapa kegiatan enzim yang relevan dipelajari lebih detail. L-Lysine dekarboksilase. Lisin dekarboksilasi oleh 
ekstrak mentah sepenuhnya tergantung pada kehadiran piridoksal $ -phosphate, dan penambahan 2-mercaptoethanol 
lebih ditingkatkan tingkat dekarboksilasi dengan faktor 
1,7. 
PH optimum adalah 6,8 dan aktivitas menolak 
nilai-nilai yang sangat rendah pada pH 6.0 dan pH 
9.0. 
K, L-lysine adalah 
10 
mM  dan  V  ,,  adalah  9-8 
pmol  (mg  protein)  hl  l.  Produk  dari  reaksi  diidentifikasi  sebagai  cadaverine  dengan  teknik  kromatografi  dan 
elektroforesis dan dengan ekstraksi dan identifikasi turunannya 2,4-dinitrofenil dari campuran reaksi. 
L-Lysine dan aminotransferase cadaverine. Aminotransferase ini diuji di ekstrak dari organisme L-lysine-tumbuh 
dengan 2-oksoglutarat sebagai akseptor amino dan 
0-  aminobenzaldehyde 
hadir.  PH  optimum  adalah  9,8  dengan kedua substrat. Both activities declined steadily at higher pH values, the rates 
being  half-maximum  at  pH  10.5,  but  at  lower  pH  values the rates with cadaverine fell more steeply (half-maximum 
at  pH  9-3)  than  the  rates  with  lysine  (half-maximum  at  pH  8.8).  Very  little  lysine  decarboxylase  activity  was 
detected  above  pH  9.0  so  the  aminotransferase  activity  observed with lysine is specific for lysine and not due to the 
combined  activities  of  lysine  decarboxylase  and  cadaverine  amino-  transferase.  No activity could be detected when 
2-oxoglutarate was omitted, except in the 
Downloaded from www.microbiologyresearch.org by IP: 64.233.173.129 On: Wed, 02 May 2018 06:39:52 
 
J48 JC FOTHERGILL AND JR GUEST 

+ 
HI0 L-Lysine Cadaverine 1 -Piperidehe 5-Aminovalerate 
The Fig. I -piperidehe 3. enzymes Scheme dehydrogenase. involved showing are the : 
proposed (I 1 
2) -Piperideine L-lysine cadaverhe decarboxylase is in (decarboxylase) equilibrium ; (I 
3) with cadaverine pathway the hydrated aminotransferase; of L-lysine open catabolism. structure, (14) 
5-aminoglutaraldehyde. 
pH range 7 to g where very weak lysine and cadaverine oxidative deaminations seemed to occur. The activities of 
crude extracts were increased by approximately 
10% 
after passing through small 
columns of either SephadexG-25 or Dowex-1 (X8, IOO to 
200 
mesh; H+ form). No 
requirement for pyridoxal s'-phosphate could be detected but it was routinely added to the reaction mixtures. 
2-Oxoglutarate was the most active amino pyruvate and oxaloacetate gave between 
10 
acceptor % of the tested activities (K, 
= I 
mM). obtained Glyoxylate, with 2-0x0- glutarate under comparable conditions. Studies with a range of amino 
donors showed that, in addition to L-lysine (K, 
= II 
and 40 
mM) and cadaverine (K, = 67 mM), much higher affinities for transamination by 
the crude extracts were found with putrescine (K, 
= 0.8 mM) and ornithine (K, 
= 1-7 mM). However, the values for V,, were very similar with all four sub- strates, ranging from 
2 
to 6 pmol (mg protein)-l hl with 6 m~-2-oxoglutarate. Transamination of lysine could involve 
the 
2- 
or 6-amino groups yielding 1-piperideine-2- carboxylate or 
I 
-piperideine-6-carboxylate  respectively.  These  differ  in  several  respects  (Soda  et  al.,  1968).  The 
2-carboxylate  reacts rapidly with o-aminobenzaldehyde to produce a chromogen with an extinction maximum at 450 
nm.  The  6-carboxylate reacts slowly with o-aminobenzaldehyde and the corresponding chromogen has an extinction 
maximum  at  465  nm; it also reacts rapidly with ninhydrin in glacial acetic acid to give a stable yellow complex. The 
two compounds also exhibit different electrophoretic mobilities in 
I M- formic acid. Based 
on these criteria, the reaction product was shown to be 1-piperideine-6- carboxylate, ie the enzyme activity 
corresponds to L-lysine 6-aminotransferase. Depro- teinized samples of reaction mixtures containing 
L- 
[U-14C]lysine or 
DL- 
[ I 
-14C]lysine plus 
2- oxoglutarate 
incubated with crude extract at pH 9-8 were also examined and electrophoretic analysis confirmed that the major 
radioactive product corresponded to 
I 
-piperideine-6- carboxylate in both 
cases. The product of cadaverine transamination was judged to be 
I-  piperideine  by 
comparing the properties of its o-aminobenzaldehyde adduct with that of synthetic 
I 
-piperidehe.  The  formation  of  glutamate  from  2-oxoglutarate  with  lysine  and  cadaverine  was 
demonstrated  by  quantitative  studies  using  glutamate  dehydrogenase.  Furthermore,  this  procedure  provided  an 
alternative  but  less  convenient  method  for  assay-  ing  the  aminotransferases.  It  is  not  certain whether the lysine and 
cadaverine  aminotrans-  ferase  activities represent two discrete enzymes or one or more enzymes with wide substrate 
specificities.  However,  in  this  context  it  should  be  noted  that  the  L-lysine  6-aminotrans-  ferase  of  Achromobacter 
liquidurn  was inactive with cadaverine (Soda & Misono, 1968) and the diamine aminotransferase of Escherichia coli 
was likewise inactive with lysine. 
I-Piperideine dehydrogenase. This enzyme was best assayed by following the rate of NADH formation using the 
soluble fraction to limit NADH oxidase activity. The K, for I-piperi- 
Downloaded from www.microbiologyresearch.org by IP: 64.233.173.129 On: Wed, 02 May 2018 06:39:52 
 
Lysine catabolism in P. aeruginosa I49 deine was 
0.12 
mM and Vmax was 
12 
pmol (mg protein)-l hl. The enzyme could also be assayed discontinuously by 
measuring the disappearance of 
I 
-piperideine using o-amino- benzaldehyde. A 
direct relationship between 
I 
-piperideine  disappearance  and  NADH  formation  was 
established  and  this  was used to determine the molar extinction coefficient for the dehydroquinazolinium derivative. 
The coenzyme NADP could replace NAD but it gave activities which were only 
10% 
of those obtained with NAD under comparable conditions. This contrasts 
with glutarate semialdehyde where NADP produced 
10 
times  more  activity  than 
NAD.  Attempts  to  demonstrate  a  5-aminovalerate-dependent  oxidation  of  NADH  by  the  reverse  reaction  were 
unsuccessful.  I-Pyrroline  was  also  oxidized  by  these  extracts  and,  using  the  same  conditions,  the  rate  with  this 
substrate  (optimum  at  pH  7-5)  was  about  one-third  of  the  rate  observed  with  I-piperideine  (optimum  at  pH  9.0). 
Extracts of putrescine-grown organisms possessed high 
I 
-piperideine dehydrogenase (Table 
I) 
and  I-pyrroline 
dehydrogenase  activities  in  the  same  proportion  as  found  in  lysine-grown  organisms.  However,  it  is  not  known 
whether one or two dehydrogenases are involved. 
Status of L-lysine-degrading enzymes in P. aeruginosa PAC586 grown on diferent substrates In order to assess the 
importance of the proposed cadaverine pathway for L-lysine cata- bolism in P. aeruginosa ~ ~ ~ 5 the 8 6 specific , 
activities of relevant enzymes were determined in organisms grown on a range of substrates (Table I). The degree of 
induction for each enzyme is shown as the increase in activity in L-lysine-grown cultures relative to control cultures 
grown with succinate. All the relevant enzymes were induced by factors of 7 to 75 and this is consistent with the 
existence of an inducible pathway for L-lysine degradation via cadaverine, 5-aminovalerate, glutarate and 
acetyl-CoA. A very similar pattern of induction was observed with cultures grown on cadaverine and 
5-aminovalerate7 although in the latter case the induction of lysine decarboxylase was less pronounced. Growth on 
putrescine induced all the activities except the decarboxylase and isocitrate lyase, and with arginine (not shown) 
only isocitrate lyase was not induced. Cultures grown on glutarate contained even less lysine decarboxylase but still 
retained reasonably high levels of the other enzymic activities. In contrast, the acetate-grown organisms were only 
induced for isocitrate lyase. The results obtained are in reasonable agreement with the respiratory capacities 
observed with whole organisms grown on the same substrates. One exception appeared to be the 
DL-pipecolate-grown cultures which were highly induced for lysine decarboxylase but oxidized L-lysine very 
 slowly. On the other hand, the cadaverine and 5-aminovalerate amino- transferases were low considering that these 
substrates were oxidized fairly readily. Attempts to compare and interpret such data are frustrated by the problems 
of cell permeability and also the unknown substrate specificities of enzymes assayed in crude extracts. Thus, it is 
possible that the observed I-piperideine dehydrogenase activity of DL-pipecolate-grown cultures is really due to a 
soluble pipecolate dehydrogenase. The simplest interpretation of the high glutarate-semialdehyde dehydrogenase is 
that pipecolate is metabolized via gluta- rate semialdehyde or glutarate, but it could be due to a wide substrate 
specificity of a 
2-  aminoadipate 
semialdehyde  dehydrogenase.  The  weak  induction  of  isocitrate  lyase  compared  with  glutarate-grown  cultures  may 
suggest  that  pipecolate  is  not  primarily  metabolized  via  glutarate  and  acetyl-CoA.  La-Aminoadipate 
aminotransferase  was  only  weakly  induced  by  growth  on  L-lysine  and  pipecolate.  The  induction  of  L-lysine 
6-aminotransferase  parallels  the  induction  of  other  enzymes  of  the  cadaverine  pathway,  particularly  cadaverine 
amino- transferase (Table I), but it is not possible to interpret this in terms of one or two discrete 
Downloaded from www.microbiologyresearch.org by IP: 64.233.173.129 On: Wed, 02 May 2018 06:39:52 
 
J. 150 
C. FOTHERGILL AND JR GUEST aminotransferases. However, discrete enzymes 
may exist because lysine is not a substrate for the diamine aminotransferase of E. coli and cadaverine is not 
transaminated by the lysine aminotransferase of Achromobacter liquidum. 
Studies with mutants of P . aeruginosa ~ ~ ~ 5 8 6 Mutants of P. aeruginosa ~ ~ ~ which 5 8 
grew 6 with succinate but not L-lysine as sole carbon and energy sources were isolated after mutagenesis and 
enrichment by penicillin selection (see Methods). Growth tests with 23 mutants isolated in one experiment indicated 
the presence of three basic groups. The largest group (Lut-), comprising 13 mutants, closely resembled the parental 
strain 
PACI 
in  growing  well  on  cadaverine,  5-aminovalerate,  glut-  arate  and  acetate,  but 
growing  very  slowly  on  L-lysine.  Another  group  (Gut-),  with  eight  representatives,  grew  on  acetate  but  failed  to 
grow  on  glutarate,  cadaverine,  pipecolate,  5-  aminovalerate  or  lysine.  Further  tests  showed  that  six  of  the  Gut- 
mutants  failed  to  grow  on  glutaconate  but  grew  on  butyrate,  whereas  the  remaining  two mutants did not grow with 
either  substrate.  Consequently  those  growing  on  butyrate  could  have  lesions  affecting  the  conversion  of 
glutaconyl-CoA  to  crotonyl-CoA  whereas  the  other  two  may  be  blocked  between  crotonyl-CoA  and  acetyl-CoA. 
The  third  group  (Aut-)  consisted  of  two  mutants  which  failed  to  grow  on  acetate  and  all  the  other  test  substrates, 
including  pipecolate.  The  nutritional  phenotype  of  the  third  group  was  also  exhibited  by  a  well-characterized 
isocitrate lyase 50 % of mutant the uninduced of P. aeruginosa, 
activity of PACSOI. 
isocitrate However, lyase of the the parental two Aut- strain strains so they contained were assumed at least 
to have some other lesion(s) affecting acetate metabolism. 
The  existence  of  alternative  routes  for  L-lysine  degradation  to  glutarate (or glutaconate) in P. aeruginosa ~ ~ ~ is 
5  strongly  8  6  favoured  by  these  studies.  If  there  were  just  one  route,  mutants  with  the  phenotypes  expected  for 
metabolic  blocks  between  intermediate  substrates  cadaverine,  5-aminovalerate  and  glutarate  should  have  been 
recovered.  It  may  be  possible  to  obtain  such  mutants  by  specific  selections  for  failure  to  grow  on  cadaverine  or 
5-amino-  valerate,  and  the  existence  of  alternative  routes  of  lysine  catabolism  would  be confirmed if these mutants 
were  capable  of  growing  on  L-lysine.  The  results  clearly  show  that  a  functional  glutarate  catabolic  pathway  is 
essential  for  the  catabolism  of  L-lysine,  cadaverine  and  5-  aminovalerate  and  that  glutarate  in  turn  is  degraded  via 
acetyl-CoA.  Also,  despite  the  low  activities  of  isocitrate  lyase  in  DL-pipecolate-grown  cultures,  this  enzyme  and 
others  in-  volved  in  glutarate  catabolism  are  essential  for  pipecolate  metabolism,  which  appears  to  converge  on 
glutarate (or glutaconate) and hence acetyl-CoA in P. aeruginosa. 
L-Lysine catabolism in other species The occurrence and significance of the cadaverine 
pathway in other species of Pseudo- monas was investigated with L-lysine-grown bacteria and their extracts. Studies 
on the oxi- dation of relevant substrates (see Fig. 2) by washed suspensions gave some indication of the routes of 
lysine catabolism which might be induced in different species. For example, P._fluorescens oxidized all substrates 
including cadaverine, 
D- 
and  L-lysine,  DL-pipecolate  and  5-aminovalerate 
without lag, indicating that several pathways may be operating. With P. muZtivoranS only 
D- 
and  L-lysine,  DL-pipecolate  and  L-2-aminoadipate  were  oxidized rapidly, suggesting that 
the  major  route  for  lysine  catabolism  is  the  pipecolate  pathway; oxidation of cadaverine, glutarate, 5-aminovalerate 
and  acetate  was  very  slow  and  was  always  preceded  by  long  periods  of  adaptation.  It  was  difficult  to  interpret  the 
results for the representatives of P. putida biotypes 
A 
and B. Neither *oxidized cadaverine without lag. However, both were 
induced for D-lysine and acetate oxidation but DL-pipecolate was oxi- 
Downloaded from www.microbiologyresearch.org by IP: 64.233.173.129 On: Wed, 02 May 2018 06:39:52 
 
, 

Lysine catabolism in P. aeruginosa 

Table 
2. 
Enzymes of L-lysine catabolism in diflerent species of Pseudomonas 
-Organisms were grown on L-lysine at 37 "C (P. aeruginosa) or 30 "C (all the other species), harvested The in oxylase the results 
exponential or with shown the phase in soluble parentheses and fraction extracts were for were L-pipecolate obtained assayed 
under for dehydrogenase. 
enzyme anaerobic activities conditions Specific activity of enzyme in P. I 
aeruginosa P. aeruginosa A 
P. fluores- P. putida as described in Methods. extracts P. for of: 
putida L-lysine - 
decarb- 
P . multi- Enzyme ~ ~ ~ 5 8 PAC 6 
I 
cens (biotype 
A) 
(biotype B) vorans L-Lysine decarboxylase 7'5 
Cadaverine aminotransferase 3.5 2'3 2.6 (5'5) 2.6 
7'0 (0.03) 0.9 
1.1 
(0.06) 1.0 
1'5 
aminotransferase 
deh y drogenase 
2.6 0.5 I-Piperideine dehydrogenase 
10.0 
7'4 9.2 
1'0 
6.8 0.3 5-Aminovalerate 7'5 4'3 3'7 
1 
'4 4'3 < 
0.2 
Glutarate-semialdehyde 27-2 19'9 15.9 5'5 27'9 2.6 
Isocitrate lyase 11.8 14'4 
I 5.2 L-Lysine L-Lysine 6-aminotransferase 2-monooxygenase < 
2.3 0.05 
3'9 
 I 2-7 L-Pipecolate dehydrogenase 
0.02 
< < 
0.05 0.01 1'5 1'5 
0-5 2'1 2.3 I 
2.6 0.5 0'02 
4'4 0.9 4'2 0.03 
< 
0.05 0'02 (0.15) L-2-Aminoadi armnotransferase 
pate 
1'0 
1-6 0.8 1'5 0.8 6.8 
dized only by P. putida 
A 
although P. putida 
B 
was better adapted for oxidizing 5-amino- valerate. 
Using extracts of L-lysine-grown organisms, enzymes of the cadaverine pathway and other relevant enzymes 
were assayed in several Pseudomonas species and in P. aeruginosa 
PACI, the parent (Lut-) of 
strain ~ ~ ~ (Lut+) 5 8 (Table 
6 2). 
The parental strain had a similar distri- bution of enzyme 
activities to that of its derivative 
~ ~ C 5 8 Some 6 . 
of the enzymes, particu- larly L-lysine 
decarboxylase, were present at lower specific activities in strain 
PACI. In assessing the significance 
of the cadaverine pathway in organisms containing L-lysine 2-monooxygenase it was important to assay the 
decarboxylase under anaerobic conditions because the oxygenase also liberates C02. In P. aeruginosa the specific 
activities for L-lysine 
Jltlorescens decarboxylase 20 
% were of the the apparent same under decarboxylase aerobic and activity anaerobic could be conditions. attributed 
to However, the oxygenase in P. 
and in P. putida of biotypes 
A 
and 
B 
 the oxygenase could account for virtually all the de- carboxylation (Table 
2). 
The  results  indicate  that  P  . jluorescens is potentially capable of metabolizing L-lysine by 
decarboxylation  to  cadaverine  as  well  as  by  oxygenation.  In  con- trast, the cadaverine pathway did not appear to be 
operating in either strain of P. putida. The oxygenase pathway was present and, in the representative of the 
A 
biotype,  pipecolate  dehydrogenase  was 
also  induced.  In  P.  multivorans  no  oxygenase  could  be  detected  and,  although  a  small  amount  of  L-lysine 
decarboxylase  activity  was  observed,  other  enzymes  of  the  cadaverine  and  5-aminovalerate  routes  were  present  at 
very low specific activities. A ' soluble' pipecolate dehydrogenase was detected and the high specific activity for 
L-2- aminoadipate 
aminotransferase confirmed the indications from studies with whole cells, that the pipecolate route is probably 
important for L-lysine catabolism in P. multivorans, All the species tested possessed L-lysine aminotransferase 
activity. 
Downloaded from www.microbiologyresearch.org by IP: 64.233.173.129 On: Wed, 02 May 2018 06:39:52 
 
JC FOTHERGILL AND JR GUEST 
DISCUSSION use The L-lysine report as of sole Stanier carbon et al. and (I energy 966) that source 90 % was 
(26129) codrmed of strains by finding of Pseudomonas that 74 % aeruginosa (I 7/23) of the strains studied here 
possess this phenotype. These growth tests conceal the fact that the rate of growth on L-lysine is normally low. 
However, faster growing derivatives were readily isolated. Studies with extracts of one derivative, P. aeruginosa ~ ~ 
~ 5 indicated 8 6 , that it was deficient in key enzymes of the pathways used for 
D- 
and  L-lysine  catabolism  in  other  Pseudomonas species. 
A  search  for  alternative  routes  led  to  the  discovery  of  reactions  which  constitute  a  new  pathway, the cadaverine or 
decarboxylase  pathway.  This  represents  a  variant  on  the  5-aminovalerate  (or  oxygenase)  pathway  because  it 
converges  on  5-amino-  valerate  but  involves  both  acyclic  (cadaverine)  and  cyclic  (I  -piperideine)  intermediates 
which by-pass the route involving 5-aminovaleramide and the monooxygenase and amidase reactions (Figs 
I 
and 3). Enzymes for the conversion of 5-aminovalerate to glutarate were present, as in other 
species of Pseudomonas grown on L-lysine. 
The cadaverine pathway (Fig. 3) is initiated by L-lysine decarboxylase. This enzyme was not detected in P. 
aeruginosa in early studies (Gale, 1946). One reason may have been the use of a low pH for the tests and this could 
explain the continued appearance of conflicting reports. For example, no lysine decarboxylase was detected in the P. 
aeruginosa strains tested by Steel & Midgley (1962) and Zolg & Ottow (1974) although all of 130 different cultures 
of P. aeruginosa were found to possess this activity in tests at pH 8.0 (Stewart, 1970). The ability of P. aeruginosa to 
oxidize cadaverine and other diamines by inducible enzymes is well established (Gale, 1942; Razin, Gery & 
Bachrach, 1959). The route pro- posed for the further metabolism of cadaverine to glutarate is directly analogous to 
that for the metabolism of putrescine to succinate via I-pyrroline, 4-aminobutyrate and succinate semialdehyde in P. 
fluorescens and E. coli (Jacoby & Fredericks, 1959; Kim, 1964). The analogy may be extended because putrescine is 
the decarboxylation product of ornithine and consequently occurs as an intermediate in the catabolism of arginine 
and ornithine as well as spermine and spermidine in some pseudomonads. Growth of P. aeruginosa ~ ~ ~ 5 8 6 on 
putrescine and arginine induced the enzymes for the conversion of cadaverine to gluta- rate, suggesting that either 
one group of enzymes, or two groups with overlapping speci- ficities, may be responsible for the catabolism of the 
diamine. It is difficult to assess the most likely possibility because some of the relevant enzymes have fairly broad 
substrate speci- ficities. Arginine, but not putrescine, also induced some lysine decarboxylase activity. The 
importance of cadaverine as an intermediate with regulatory significance is apparent from the fact that the 
respiratory activities (Fig. 2) and enzyme patterns (Table I) of cadaverine- and lysine-grown cultures of mutant ~ ~ 5 
are 8 identical. 6 Despite the difference in growth rates on L-lysine of the mutant ~ ~ ( 2 5 and % its parent strain, 
PACI, 
both grew at the same rate on cadaverine. 
The specific activity of lysine decarboxylase in lysine-grown strain 
PACI was less than 
one-third of that of mutant ~ ~ ~ and 5 the 8 6 slower growth of strain 
PACI 
may be a direct 
consequence of this. Alternatively, the growth of strain 
PACI 
may be retarded by a deficiency in the 
L-lysine transport system which limits the internal concentration of 
L- lysine and hence 
the degree of induction of the catabolic enzymes. However, it should be emphasized that synthesis of the 
decarboxylase is still inducible in the mutant ~ ~ ~ 5 8 6 . Pseudomonm aeruginosa may therefore be seen as having 
a very efficient inducible system(s) for diamine metabolism, and rapid growth on L-lysine can be accomplished by 
improving the flow of this substrate into the diamine pathway. In this respect L-lysine catabolism resembles 
L-histidine catabolism in P. aerugino sa strain 
PACI 

. 
, where histidine transport is 
Downloaded from www.microbiologyresearch.org by IP: 64.233.173.129 On: Wed, 02 May 2018 06:39:52 
 
Lysine catabolism in P. aeruginosa I53 sufficient for its utilization as a source of nitrogen but not for 
supporting growth as sole carbon source (Potts & Clarke, 1974). The transamination of L-lysine to 
I 

-piperideine-6-carboxylate  is  also  inducible and rep- resents a second 

potential route for lysine catabolism in P. aeruginosa. Its physiological significance is difficult to assess. It 
could  represent  a  mechanism  for  obtaining  amino-  nitrogen  when  P.  ueruginusa  is  grown  with  other 
substrates  plus  L-lysine  as  sole  source  of  nitrogen.  The  failure  to  isolate  mutants  unable  to  utilize  lysine 
due to blocks between 
L-  lysine  and 
glutarate  implies  that  there  are  at  least  two  alternative  and  functional  routes  effecting  the  corresponding 
metabolic  transformation.  As  an  intermediate  in  the  pipecolate  pathway (Fig. I), it might be assumed that 
I-piperideine-6-carboxylate  would  be  meta-  bolized  via  2-oxoglutarate.  However,  the  dependence  on  a 
functional  glutarate  pathway  for  growth  on  L-lysine  and  DL-pipecolate  and  the  induction  of  isocitrate 
lyase  with  both  sub-  strates  imply  that  the  product  of  the  pipecolate  pathway,  2-oxoadipate,  can  be 
converted to glutarate (or glutaryl-CoA) or that one of the Cs compounds 
(I 

-piperideine-6-carboxylate or 
2-aminoadipate) can be decarboxylated to converge on the 5-aminovalerate route (at piperideine or 
5-aminovalerate). Studies with mutants specifically selected for blocks in cadaverine or 5-aminovalerate 
metabolism could be used for assessing the significance of the transamination route and the location of 
any metabolic bridge between the C6 and C5 routes. The affinities of some of the enzymes for their 
substrates appear low and their pH optima are rather high. However, high pH optima are often observed 
for enzymes concerned with the metabolism of basic substrates and high Michaelis constants for 
substrates of in- ducible pathways concerned with the catabolism of essential metabolites such as lysine 
are obviously advantageous (Miller & Rodwell, 1971 a, b). 
The  results  obtained  with  P.$uorescens  indicate  that  it  has  the  potential  for  using  the  cadaverine 
pathway;  its  existence  may  have  been  overlooked  in  previous  studies  due  to  the  presence  of  the  high 
lysine  oxygenase  activity.  Pseudomonas  multivorans  had  a  weak  de-  carboxylase  activity  and  this  has 
been  noted  previously  in  three  strains  including  the  one  studied  here  (Samuels,  Moss  &  Weaver,  1973). 
However,  neither  the  cadaverine  nor  other  routes  involving  5-aminovalerate  appear  important,  and  this 
strain could rely entirely on the pipecolate route for lysine catabolism. Decarboxylation does not appear to 
be  im-  portant  in  the  catabolism  of  L-lysine  by  P  .  putida.  The results are consistent with those of Chang 
&  Adams  (1974)  and  Miller  &  Rodwell  (1971  a);  the  oxygenase  and  pipecolate  de-  hydrogenase  routes 
both occur in strains of biotype 
A. 

The oxygenase route seems to be the main route 

present in the representative of biotype 
B. 

The  results  also  show  that  the  role  of  L-lysine 

6-aminotransferase  needs  to  be  considered  when  assessing  the  physiological  im-  portance  of  different 
routes  for  lysine catabolism in all the strains. Kornberg (1960) used the specific activity of isocitrate lyase 
as  an  enzymic  indicator  of  the  metabolic  pathways  involved  in  L-lysine  (and  glutarate)  catabolism  by 
another P. putida of biotype 
A. 

He  con-  cluded  that 

L-lysine  was  degraded  via  acetate,  not  a-oxoglutarate.  Using  the  same  criterion  this  is  true  for  all  the 
Pseudomonas species examined here, except P. multivorans. 
In  view  of  the  relatively small number of strains which have been examined it cannot be concluded that 
there  is  a  rigid specificity for the routes of lysine catabolism possessed by different Pseudomonas species. 
However,  it  is  clear  that  not  only  do the pseudomonads possess great metabolic potential but there is also 
a  great  diversity  in  the  number of path- ways for the catabolism of one substrate. Furthermore, in the case 
of  lysine  catabolism,  multiple  pathways  can  exist  in  one  strain, posing interesting regulatory problems as 
well as those posed by the inter-relationships between the biosynthesis and degradation of the amino acid. 
Downloaded from www.microbiologyresearch.org by IP: 64.233.173.129 On: Wed, 02 May 2018 06:39:52 
 
I54 JC FOTHERGILL AND JR GUEST 

One of us (JCF) acknowledges the support from an SRC Research Studentship during the course of this 
work. 
REFERENCES ICHIHARA, CHANG, DIXON, GALE, GALE, HARTLINE, 
HOLMSTEDT, BAGINSKY, CHANO, CALVERT, Journal L-lysine Precursors hyde determination Electron La-Amino and 
EEG YF. YF. assay FF dehydrogenase. AHARM 72,3P. 
(1946). (1942). catabolism. B., F. transport & & & & AL of of adipate KORNBERO, ICHIHARA, AD-, LARSSON, & ADW, 
glutaric & & glutamic of RODWELL, The The RODWELL, RODWELL, diamine particle -hemialdehyde E. bacterial oxidation 
Journal E. Journal semialdehyde. LE (1971). H. acid. (1974). & A. oxidase LVV of V. THAM, of (1961). Archives (1959). 
amino W. of Pseudomonas W. Glutaric of W. Bacteriology D-Lysine Biochemistry amines (1966). (1971). activity. (1966). B. 
:NAD Metabolism Assay acid Methods of (1961). semialdehyde Biochemistry catabolic by Metabolism dehydrogenases. 
Metabolism Metabolism oxidoreductase. methods Biochimica putida. 117, bacteria. 49, in Further Enzymology of 753-764. 
I 
54-157. pathway L-lysine Journal for dehydrogenase Biochemical of and studies key of et of pipecolic biophysica pipecolic 
pipecolic Advances Journal Biophysics enzymes of by in XVIIB, Bacteriology of bacterial Pseudomonas a Journal of acid 
spectrophotometric acid of acid acta in (Pseudomonasputida). Biological I 142, the 66- Enzymology enzymes. in in in 4, 
glyoxylate 36,64-75. I 32-39. a 92,424-432. 
73. aa putidu: I Pseudomonas Pseudomonas Pseudomonas 82-186. Chemistry V. 6, interrelations Glutaric cycle. 1-32. method 
241,409-4 Biochemical Preparation species. species. species. semialde- for with 111. 
VI. IV. 
the 
I 4. 
ICHIHARA, ICHIHARA, racemase. A., A., Journal ICHIHARA, FURIYA, of S. Biochemistry E. & A. SUDA, 8z SUDA, 
M. 4,277-282. 
(1960). M. (1960). Metabolism Metabolism of L-lysine of L-lysine by bacterial by bacterial enzymes. enzymes. 111. Lysine IV. 
6- 
' 
JACOBY, Aminovaleric WB & acid-glutamic FREDERICKS, J. acid (1959). transaminase. Pyrrolidine Journal and putrescine of 
Biochemistry metabolism: 48,412-420. 
y-aminobutyraldehyde 
KORNBERG, LINEWEAVER, LOWRY, I~NNEDY, KIM, MILLER, 488-489. American Folin coli. dehydrogenase. ase 
KH. in 0. Journal D. phenol I. Azotobacter (1 H., HLR 964). H. Chemical L. ROSEBROUGH, 8z & of & reagent. (1960). 
DILWORTH, RODWELL, Purification Biological BURK, Journal vinelandii Society Isocitratase Journal D. of NV 
Chemistry (1934). M. Biological and 56, WJ, extracts. J. of 658-666. 
properties FARR, (1963). Biological (1971 as The an 239, Chemistry Biochimica a). determination A. enzymic Activation 
783-786. 
L. of Metabolism Chemistry & a diamine 234, RANDALL, indicator et of biophysica 2 
of isocitrate 145-21 193, of a-ketoglutarate enzyme of basic R. 265-275. 50. 
metabolic J. acta lyase (1951). amino dissociation 67, 
and pathways. 226-239. transaminase Protein acids triosephosphate dehydrogen- from Escherichia 
Nature, London 188, 
moms cepacia) and Pseudomonas kingii. Journal of General Microbiology 74, 275-279. 
Journal of General Microbiology 50, I 83-194. 
and properties. Biochemistry 7, 41 10-41 19. 
of a product, A'-piperideine-6-carboxylic acid. Biochemistry 7, 4 I 02-4 I 09. 
constants. Journal of the 
measurement with the 
in Pseudomonas putida. MILLER, Catabolism DL & of RODWELL, lysine by cyclic VW and (1971 acyclic b). Metabolism 
intermediates. of basic Journal amino of Biological acids in Pseudomonasputida: Chemistry 246,2758-2764. inter- 
NUMA, Pons, -IN, REITZ, Rerrz, Proceedings metabolism ojBacteriology 
mediates bacteria. MJS, S., RS I GERY, s & & Biochemical in m CLARKE, RODWELL, L-arginine u of of u I. the glutarate 
100, 
, & Y., Society BACHRACH, 708-714. 
P. Journal NAIGUAWA, V. catabolism. H. in W. for Pseudomonas. (1974). (1969). 71, General U. 55 The Journal D., 
1-558. 
(1959). a-Hydroxyglutarate Microbiology 
O regulation Journal of The m Biological , degradation of T. of Biological I, & histidine 63. 
HAYAISHI, Chemistry oxidoreductase of Chemistry catabolism natural 246, 0. (1964). 5053-5058. 
of polyamines 239, Pseudomonasputida. in 39 Enzymic I 5-3926. 
studies on the 
Pseudomonas aeruginosa. 
and diamines by 
Journal 
RODWELL, S M. Chemistry mu , SSVB, & W. 245, RODWELL, Moss, (1971). 3091-3096. 
CVW (1970). 6-Arninovaleramidase Pipecolic W. & WEAVER, acid. Methods RE of Pseudomonas putida. Journal of 
Biological 
in Enzymology XVIIB, 174-188. (1973). The fatty acids of Pseudomonas multivoruns (Pseudo- 
SKINNER, AJ & CLARKE, PH (1968). Acetate and acetamide mutants of Pseudomonas aeruginosa 8602. 
SODA, K. & MISONO, H. 
(I 
968). L-Lysine-a-ketoglutarate aminotransferase. 11. Purification, crystallization 
SODA, K., MISONO, H. & YAMAMOTO, T. 
(I 
968). L-Lysine-a-ketoglutarate amhotransferase. I. Identification 
Downloaded from www.microbiologyresearch.org by IP: 64.233.173.129 On: Wed, 02 May 2018 06:39:52 
 
Lysine catabolism in P. aeruginosa I55 STANIER, RY, PALLERONI, NJ & DOUDOROFF, M. (1966). The aerobic 
pseudomonads: a taxonomic study. 
Journal of General Microbiology 43, 159-271. STEEL, KJ & MIDGLEY, J. (1962). Decarboxylase and other reactions of 
some Gram-negative rods. Journal 
of General Microbiology 29, 171-178. STEWART, DJ (1970). The decarboxylation of L-lysine by Pseudomonas 
aeruginosa isolates. Journal of 
Applied Bacteriology 33, 501-504. TAKEDA, H., YAMAMOTO, S., KOJIMA, Y. & J~AYAISHI, 0. (1969). Studies on 
monooxygenases. I. General properties of crystalline L-lysine monooxygenase. Journal of Biological Chemistry zqq, 2935-2941. 
UMBARGER, HE & UMBARGER, ME (1962). The biosynthetic pathway of serine in Salmonella typhimurium. 
Biochimica et biophysica acta 6z, 193-1 95. VANDECASTEELE, JP. & HERMA", M. (1972). Regulation of a catabolic 
pathway: lysine degradation in 
Pseudomonas putida. European Journal of Biochemistry 3x, 80-85. WYNGAARDEN, JB & ASHTON, DM (1959). 
The regulation of activity of phosphoribosylpyrophosphate 
arnidotransferase by purine ribonucleotides : a potential feedback control of purine biosynthesis. Journal of Biological Chemistry 
234, 1492-1496. ZOLG, W. 
& OTTOW, JCG (1974). Thin-layer chromatography of arginine, lysine and ornithine decar- boxylase activity among 
Pseudomonas spp. and Enterobacteriaceae. Microbios 10, 225-23 I. 
Downloaded from www.microbiologyresearch.org by IP: 64.233.173.129 On: Wed, 02 May 2018 06:39:52