Analisis Instrumen

Pendahuluan

1
 Analisis
Klasik Co2+ CrO42- Cr2O72- Ni2+ Cu2+ MnO4-

Analisis Kualitatif : Analisis Kuantitatif :

Uji organoleptis Metode gravimetri
Uji nyala Metode volumetri
Uji indeks bias
Uji titik leleh
Klasifikasi Uji kelarutan dalam berbagai pelarut
Metode Analitik Uji sifat optis

Analisis kualitatif dan kuantitatif :

Pengukuran sifat fisik analit (daya hantar, potensial, arus)
Analisis Absorpsi sinar
Instrumental Emisi sinar
Kromatografi
Elektroforesis 2
 ANALISIS INSTRUMEN

Spektroskopi Elektroanalisis Kromatografi

Spektroskopi Atomik Potensiometri Kromatografi Cair

Spektroskopi Molekuler Konduktometri Kinerja Tinggi
Elektrofravimetri Kromatografi Gas
Kulometri
Polarografi
Voltametri 3
 JENIS-JENIS METODE ANALISIS INSTRUMENTAL

Sifat Karakteristik Metode Instrumental

Radiasi Emisi Spektroskopi emisi (X-ray, UV, visible, electron, Auger);
fluorescence, phosphorescence, dan luminescence (X-ray, Uv,
and visible)
Radiasi Absorpsi Spektrofotometri dan fotometri (X-ray, UV, visible, IR);
photoacoustic spectroscopy: nuclear magnetIc resonance dan
electron spin resonance spectroscopy
Radiasi Penghamburan Turbidimetri; nefelometri; spektroskopi Raman
(Scattering)
Radiasi refraksi Refraktometri; interferometri
Radiasi difraksi Metode difraksi sinar-X dan difraksi elektron
Radiasi rotasi Polarimetri; optical rotary dispersion: circular dichroism
Potensial listrik Potensiometri: kronopotensiometri
Muatan listrik Coulometri
Arus listrik Amperometri, polarografi/voltammetri
Resistansi listrik konduktometri
Massa Gravimetri (quartz crystal microbalance)
Rasio Massa-muatan Spektrometri massa
Laju reaksi Metode kinetika reaksi
Karakteristik termal Titrimetri dan gravimetri termal, differential scanning calorimetry:
differential thermal analyses: metode konduktometri termal
Radioaktivitas Metode aktivasi dan dilusi isotop
4
 Instrumen Analisis

STIMULUS RESPONS

Sumber Sistem yang Informasi

energi diamati/dipelajari Analitik

5
DOMAIN DATA
Domain non-elektrik
Representasi dan
transformasi informasi

Domain fisika
dan kimia Domain elektrik dan sebagian
domain non-elektrik
dinyatakan sebagai informasi
digital

Lebar pulsa
Waktu
6
Domain elektrik
DETEKTOR, TRANDUCER, SENSOR

• Detektor
alat mekanik, elektrik, atau kimia yang mengidentifikasi, merekam, atau
menunjukkan perubahan salah satu variable dalam suatu pengukuran.

• Transducer
Alat yang mengubah informasi antara domain non-elektrik dan elektrik.

• Sensor
alat analitik yang mampu memonitor spesi kimia secara terus-menerus.

7
8
 Komponen-komponen Instrumen
Instrumen Sumber Informasi Analitik Pemilih Informasi Transduser Domain Data Pemproses
Energi infromasi sinyal/pembaca
(Stimulus)
Fotometer Lampu Berkas sinar Filter Fotodioda Arus listrik Amplifier, digitizer,
Tungsten Display LED

Spektroskopi Inductively Radiasi UV atau Visible Monokromator Tabung Arus listrik Amplifier, digitizer,
Emisi Atom Couple Fotomultiplier Display LED
Plasma
Coulometer Sumber arus Muatan yang diperlukan Potensial sel Elektroda Waktu Amplifier, digital
langsung untuk reduksi atau oksidasi timer
analit
pH Meter Elektrode Aktivitas ion hidrogen Elektrode gelas Elektrode gelas- Listrik (voltase) Amplifier, digitizer,
gelas kalomel Display LED

Spektrometer Sumber Ion Rasio Massa/muatan Mass analyzer Electron Arus listrik Amplifier, digitizer,
Massa multiplier sistem komputer

Kromatografi Gas Nyala Konsentrasi ion terhadap Kolom Elektrode Arus listrik Amplifier, digitizer,
(Ionisasi nyala) waktu kromatografi terbiaskan sistem komputer
9
Kalibrasi dalam Analisis Instrumen
Memverifikasi hubungan antara respon analitik dengan konsentrasi standar analit.
Mengecek apakah instrumen bekerja dengan baik

1. Perbandingan dengan standar

2. Kalibrasi standar eksternal
3. Kalibrasi adisi standar
4. Kalibrasi standar internal

10
Perbandingan dengan standar
1. Perbandingan Langsung secara visual (null comparison or isomation method)
Membandingkan sifat analit dengan sifat standar analit secara visual

Metode Kolorimetri:
Metode Deret Standar

1 2 3 4 5

Sampel
Cermin

Deret larutan standar

Panjang jalan sinar harus sama [sampel] = [standar 3]

11
2. Metode Titrasi (Perbandingan Kimia)

 Analit bereaksi dengan reagen yang sudah distandarisasi (titran) dalam suatu reaksi stoikhiometri
yang diketahui.
 Jumlah titran diperlukan sampai ekivalen kimia tercapai yang ditandai dengan perubahan warna
indikator atau perubahan suatu respon instrumen, dan jumlah analit dapat diketahui.

12
Perbandingan langsung secara instrumen

Membandingkan secara langsung respon pengukuran standar yang mengandung analit dengan respon
pengukuran sampel analit

Diketahui:
Sstand = 0.474
Cs = 1.75 ppb
Ssamp = 0.361

Ditanyakan: CA?
Jawab:

13
Kurva Kalibrasi Dalam Analisis Instrumen

1. Kalibrasi Standar Eksternal

 Eksternal standar dibuat terpisah dari sampel.

 Digunakan untuk kalibrasi instrumen dan prosedur bila tidak ada pengaruh gangguan komponen
matriks dalam larutan analit.

 Pengukuran dilakukan terhadap sederet (tiga variasi konsentrasi atau lebih) larutan eksternal
standar yang mengandung standar analit dengan konsentrasi yang diketahui.

 Kurva kalibrasi dibuat dengan mengalurkan respons-respons sinyal pengukuran (seperti

absorbansi, tinggi puncak, atau luas puncak) terhadap konsentrasi analit yang diketahui.

 Data pengukuran sederet larutan standar analit diolah dengan Least Square untuk mendapatkan
persamaan garis, serta mengetahui nilai intersep dan kemiringan

14
 Least Square (Univariat)

Yi = Respon pengukuran (absorbansi)

xi = Konsentrasi
yi – (m.xi +b)

1,2 Persamaan least square (regresi linier):

1,0 yi = m.xi + b m = slope

b = intersep
0,8 yi - b = m.xi
Absorbansi

0,6 𝑦𝑖 − 𝑏
yi

𝐶𝑥 = 𝑥𝑖 = Cx = Konsentrasi sampel
0,4 𝑚
Absorbansi Konsentrasi
sampel 0,2 sampel
0,0
10 20 30 40 50 60
Konsentrasi standar analit (ppm)
xi
1 2 3 4 sampel
15
Multivariat

16
 Kesalahan dalam kurva standar eksternal

Kurva kalibrasi yang diperoleh

dari matriks standar

Kurva kalibrasi yang diperoleh

Absorbansi dari matriks sampel
yi

Yang dilaporkan Yang sebenarnya

Konsentrasi standar analit (ppm)
xi 17
2. Kalibrasi Adisi Standar

• Salah satu metode umum untuk mengatasi

masalah matriks sampel adalah dengan
cara menambahkan satu atau lebih larutan
standar ke beberapa alikuot sampel
dengan volume tertentu.

• Proses ini sering disebut; spiking sampel.

• Setiap larutan kemudian diencerkan

menjadi sejumlah volume tertentu sebelum
diukur.

18
2. Kalibrasi Adisi Standar

𝑉𝑜 𝑉𝑜 𝑉𝑠𝑡𝑑
𝑆𝑠𝑎𝑚𝑝 = 𝑘𝐶𝐴 𝑆𝑠𝑝𝑖𝑘𝑒 = 𝑘 𝐶𝐴 + 𝐶𝑠𝑡𝑑
𝑉𝑓 𝑉𝑓 𝑉𝑓

𝑆𝑠𝑎𝑚𝑝 𝑆𝑠𝑝𝑖𝑘𝑒
𝑘= 𝑘=
𝑉 𝑉𝑜 𝑉
𝐶𝐴 𝑜 𝐶𝐴 + 𝐶𝑠𝑡𝑑 𝑠𝑡𝑑
𝑉𝑓 𝑉𝑓 𝑉𝑓

𝑆𝑠𝑎𝑚𝑝 𝑆𝑠𝑝𝑖𝑘𝑒
=
𝑉𝑜 𝑉 𝑉
𝐶𝐴 𝐶𝐴 𝑜 + 𝐶𝑠𝑡𝑑 𝑠𝑡𝑑
𝑉𝑓 𝑉𝑓 𝑉𝑓

19
Adisi standar lebih dari satu
𝑉𝑜 𝑉𝑠𝑡𝑑 𝑉𝑜 𝑘𝐶𝑠𝑡𝑑
𝑆𝑠𝑝𝑖𝑘𝑒 = 𝑘 𝐶𝐴 + 𝐶𝑠𝑡𝑑 0 = 𝑘𝐶𝐴 + × 𝑥𝑖𝑛𝑡𝑒𝑟𝑠𝑒𝑝
𝑉𝑓 𝑉𝑓 𝑉𝑓 𝑉𝑓

𝑉𝑜 𝑘𝐶𝑠𝑡𝑑 𝑉𝑜 𝑘𝐶𝑠𝑡𝑑
𝑆𝑠𝑝𝑖𝑘𝑒 = 𝑘𝐶𝐴 + 𝑉𝑠𝑡𝑑 −𝑘𝐶𝐴 = × 𝑥𝑖𝑛𝑡𝑒𝑟𝑠𝑒𝑝
𝑉𝑓 𝑉𝑓 𝑉𝑓 𝑉𝑓
𝑉𝑜
𝑦 = 𝑦𝑖𝑛𝑡𝑒𝑟𝑠𝑒𝑝 +𝑠𝑙𝑜𝑝𝑒 × 𝑥 𝑘𝐶𝐴
𝑉𝑓
𝑥𝑖𝑛𝑡𝑒𝑟𝑠𝑒𝑝 = −
𝑘𝐶𝑠𝑡𝑑
𝑉𝑓

𝐶𝐴 𝑉𝑜
𝑥𝑖𝑛𝑡𝑒𝑟𝑠𝑒𝑝 =−
Sspike

𝑘𝐶𝑠𝑡𝑑 𝐶𝑠𝑡𝑑
𝑠𝑙𝑜𝑝𝑒 =
𝑉𝑓
𝐶𝑠𝑡𝑑
𝐶𝐴 = −𝑥𝑖𝑛𝑡𝑒𝑟𝑠𝑒𝑝
𝑉𝑜
𝑉𝑜
𝑦𝑖𝑛𝑡𝑒𝑟𝑠𝑒𝑝 =𝑘𝐶𝐴
𝑉𝑓

𝑥𝑖𝑛𝑡𝑒𝑟𝑠𝑒𝑝 Vstd 20
Alternatif lain:

21
Diketahui:
Ssamp = 0.712
Vo = 5.00 mL
Vs = 5.00 µL
Cs = 1560 ppb
Sspike = 1.546

Ditanyakan: CA?

22
 Sampel
3. Metode Standar Internal

• Standar internal adalah zat yang berbeda dengan analit, tapi

sifat kimia dan fisikanya mirip dengan analit.

• Standar internal ditambahkan dengan jumlah yang tetap ke Standar

dalam sampel, blanko, dan standar kalibrasi.

• Kalibrasi melibatkan pengaluran (plot) rasio respons analit

terhadap respons standar internal sebagai fungsi
konsentrasi analit.

• Dapat mengurangi galat acak dan sistematis dalam Blanko

penguuran

23
24
Diketahui:
SA/SIS standar= 2.37
CA standar = 1.75 ppb
CIS = 2.25 ppb
SA/SIS sampel= 1.80
Ditanyakan: CA?
Jawab

25
 PEMILIHAN METODE ANALISIS
Menganalisis masalah:
Berapa tingkat akurasi yang diperlukan?
Menentukan berapa waktu yang diperlukan untuk analisis

Berapa jumlah sampel yang tersedia?

Menentukan seberapa sensitif metode analisis

Berapa rentang konsentrasi analit?

Menentukan seberapa lebar rentang konsentrasi standar yang diperlukan

Apa komponen dalam sampel yang mungkin menyebabkan ganguan?

Menentukan selektifitas metode

Apa sifat fisik dan kimia matriks sampel?

Menentukan jenis analisis yang digunakan

Berapa banyak sampel yang akan dianalisis?

Menentukan berapa biaya yang diperlukan
26
 KARAKTERISTIK KINERJA INSTRUMEN

Kriteria kuantitatif dalam memilih metode analitik Karakteristik lainnya dalam pemilihan metode
Kriteria Figure of Merit/Kepekaan Instrumen Kriteria
Presisi Standar deviasi absolut 1. Kecepatan
Standar deviasi relatif 2. Kemudahan dan kenyamanan
Koefisien variasi
Varian 3. Keterampilan operator yang diperlukan

Bias Galat sistematis absolut 4. Biaya dan ketersediaan Cost and availability
Galat sistematis relatif of equipment

Sensitivitas Sensitivitas kalibrasi 5. Biaya per-sampel

Sensitivitas analisis
Batas Blanko ditambah tiga kali standar deviasi
deteksi blanko
Rentang Batas konsentrasi Pengukuran
dinamik (concentration limit of quantitation/LOQ)
Batas konsentrasi kelinieran
(concentration limit of linearity/LOL)
Selektivitas Koefisien selektivitas
27
 KARAKTERISTIK KINERJA INSTRUMEN

Presisi
- Derajat kemiripan data, yang diperoleh dengan cara yang sama.
- Ukuran galat acak pada suatu analisis

Table Figures of Merit for Precision of Analytical Methods

Terms Definition

Standar deviasi absolut, s 𝑁 2

𝑖=1 𝑋𝑖 − 𝑋
𝑠=
𝑁−1 Xi= nilai pengukuran
Standar deviasi relatif (RSD) 𝑠
𝑅𝑆𝐷 =
𝑋
Standard Error of the Mean, Sm 𝑠 𝑋 = rerata N pengukuran
𝑆𝑚 =
𝑁 𝑁
𝑖=1 𝑋𝑖
𝑠
=
Koefisien variasi, CV CV = x 100% 𝑁
𝑋
Varian
s2
28
 KARAKTERISTIK KINERJA INSTRUMEN

Illustrating the difference between “precision” and “accuracy”

Low accuracy, low precision Low accuracy, high precision

High accuracy, low precision High accuracy, high precision

29
 KARAKTERISTIK KINERJA INSTRUMEN

Bias
Ukuran galat sistematik pada suatu analisis

Galat instrument, disebabkan oleh

1. Instrumen bekerja pada kondisi tidak sesuai
2. Kesalahan kalibrasi
3. Instrumen yang tidak bekerja normal
Biasanya diatasi dengan kalibrasi sesuai standar secara berkala

Galat personal,
Dapat diminimalisir dengan automatisasi dan komputerisasi
instrumen

Galat metode, disebabkan oleh

1. Bahan kimia yang sudah tidak layak
2. Reaksi yang tidak tuntas
Biasanya diatasi dengan penggunaan Standard Reference
Material (SRM)
30
 KARAKTERISTIK KINERJA INSTRUMEN

Sensitivitas
Kemampuan untuk membedakan konsentrasi analit yang berbeda sedikit.

Faktor yang menentukan sensitivitas:

1. Kecuraman slope kurva kalibrasi
70
2. Presisi instrumen
60
Parameter yang digunakan untuk menggambarkan kurva kalibrasi:
50

S = mc + Sbl  Y= mX+b 40

30
S : respons atau sinyal pengukuran Method A
c : konsentrasi analit 20
Sbl : respons atau sinyal blanko
10
Method B
Sensitivitas kalibrasi = slope (m) kurva kalibrasi 0
Sensitivitas analitik (g) = slope (m)/standar deviasi (Ss) 0 2 4 6 8 10 12

Concentration (mM)

31
 KARAKTERISTIK KINERJA INSTRUMEN

Selektivitas
Ukuran suatu metode bebas ganguan/interferensi dari spesi-spesi dalam sampel.

70
Tidak satupun metode bebas
ganguan dari spesi-spesi 60

dalam sampel.
50

40
Species A
Koefisien selektivitas (k):
30

kB,A = mB/mA 20
Species B
Slope Relative slopes of 10

calibration curves indicate

0
selectivity: 0 2 4 6 8 10 12

Concentration (mM)
S = mA(cA + kB,Acb) + Sbl
Interested in detecting species A, but signal will be a combination of signal
from the presence of species A and species B. 32
 KARAKTERISTIK KINERJA INSTRUMEN

Batas deteksi (dectection limit)

Konsentrasi minimum anallit yang dapat dideteksi pada tingkat kepercayaan tertentu.

Batas deteksi bergantung pada rasio sinyal analitik terhadap fluktuasi statistik dalam sinyal blanko

𝑆𝑚 = 𝑆𝑏𝑙 + 𝑘𝑠𝑏𝑙 𝑆𝑚 : respons sinyal minimium

𝑆𝑏𝑙 : rerata respons sinyal blanko (dari 20 sd 30 kali pengukuran)
𝑠𝑏𝑙 : standar deviasi blanko
𝑆𝑚 − 𝑆𝑏𝑙 𝑘 : banyaknya pengukuran
𝐶𝑚 = 𝑚 : slope
𝑚

33
 KARAKTERISTIK KINERJA INSTRUMEN

Rentang dinamik (dynamic range)

Daerah linier pada kurva kalibrasi Upper limit
yang batas terendahnya adalah 10% dari kelinieran
10 kali standar deviasi blanko. Lower limit
10 x standar deviasi blanko

LOQ - limit of quantitation/batas pengukuran

LOL - limit of linearity/batas kelinieran

34
Alhamdulillah
:)

35
36
37
38
Respon pengukuran Absorbansi, intensitas, potensial, arus, luas puncak, dll

Pengolahan data

Analisis Kualitatif
Analisis Kuantitatif

39
 KARAKTERISTIK KINERJA INSTRUMEN

Ways to Describe Precision:

Range: the high to low values measured in a repeat series of experiments.

Standard Deviation: describes the distribution of the measured results about

the mean or average value.

Absolute Standard Deviation (SD):

n
SD  (X
i1
i  X )2 /(n  1)

Relative Standard Deviation (RSD) or

Coefficient of Variation (CV):
RSD(%) (SD/ X)100

where: n = total number of measurements

Xi = measurement made for the ith trial
X = mean result for the data sample
40
 KARAKTERISTIK METODE ANALITIK

Accuracy: The degree to which an experimental result

approaches the true or accepted answer.

Ways to Describe Accuracy:

Error: An experimental measure of accuracy. The difference between the

result obtained by a method and the true or accepted value.

Absolute Error = (X – m)

Relative Error (%) = 100(X – m)/m

where: X = The experimental result

m = The true result

All Methods, except counting, contain errors – don’t know “true” value

41
KARAKTERISTIK METODE ANALITIK

42
 KARAKTERISTIK METODE ANALITIK

Response: The way in which the result or signal of a method

varies with the amount of compound or property being
measured.

Ways to Describe Response:

Calibration Curve: A plot of the result or signal vs. the known amount of a known
compound or property (standard) being measured.

sulfate calibration curve

y = 14427x - 12024
R2 = 0.999
1400000

1200000

1000000
peak area

800000

600000
400000

200000
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
concentration (ppm )

by area Linear (by area)

43