SPESIFIKASI UNTUK

PRODUK PROTEIN
REKOMBINAN

DEBBIE S. RETNONINGRUM
SEKOLAH FARMASI
INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG
 TUJUAN PEMBELAJARAN
 Mampu menjelaskan syarat spesifikasi protein
terapeutik rekombinan
 Mampu menjelaskan guideline terkait spesifikasi
tersebut
 Mampu menjelaskan metode yang sesuai untuk
karakterisasi terkait syarat spesifikasi protein
tersebut dan alasan (latar belakang) spesifikasi
tersebut masuk dalam monografi protein terapeutik
rekombinan.
 SPESIFIKASI
 STANDARD KUALITAS PENTING YANG
DIUSULKAN OLEH INDUSTRI DAN
DISETUJUI OLEH BADAN PENGAWASAN

 BAGIAN DARI STRATEGI PENGENDALIAN

TOTAL UNTUK MENJAMIN KUALITAS DAN
KONSISTENSI PRODUK
 SPESIFIKASI
 KARAKTERISASI PRODUK YANG
MENYELURUH:
 SELAMA PENGEMBANGAN, PRODUKSI
MENGIKUTI CPOB, PROSES PEMBUATAN
DIVALIDASI, PENGUJIAN BAHAN BAKU,
KONTROL DALAM PROSES, UJI STABILITAS

 SPESIFIKASI BUKAN KARAKTERISASI

SECARA LENGKAP TETAPI:
 HANYA FOKUS PADA KARAKTERISASI
MOLEKUL DAN BIOLOGI YANG PENTING
UNTUK MENJAMIN KEAMANAN DAN EFIKASI
PRODUK
 PERTIMBANGAN DALAM
PEMBUATAN SPESIFIKASI
IDENTITAS  KARAKTERISASI

1. SIFAT FISIKOKIMIA:
 PENENTUAN KOMPOSISI, SIFAT FISIKA, STRUKTUR
PRIMER.
 HETEROGENITAS STRUKTUR: BENTUK MODIFIKASI
PASKA TRANSLASI (GLYCOFORM)
 AKTIF

 EFEK YANG MEMPENGARUHI KEAMANAN DAN

KHASIAT
 POLA DAN KONSISTENSI HETEROGENITAS

2. AKTIVITAS BIOLOGI/POTENSI
 TERKAIT KHASIAT
 UJI BIOLOGI BERBASIS-HEWAN; BERBASIS
KULTUR SEL; UJI BIOKIMIA, UJI PENGIKATAN
LIGAN-RESEPTOR
 PERTIMBANGAN DALAM
PEMBUATAN SPESIFIKASI
3. SIFAT IMUNOKIMIA:
 UJI PENGIKATAN: AFINITAS, AVIDITAS,
IMUNOREAKTIVITAS

4. KEMURNIAN DAN KETIDAKMURNIAN:

 KEMURNIAN ABSOLUT VS RELATIF
 CEMARAN TERKAIT PROSES DAN PRODUK

 CEMARAN TERKAIT PROSES:

 PROTEIN DAN DNA SEL INANG

 KULTUR SEL (ANTIBIOTIK, INDUSER, KOMPONEN
MEDIA PERTUMBUHAN)
 PERTIMBANGAN DALAM
PEMBUATAN SPESIFIKASI
4. KEMURNIAN DAN KETIDAKMURNIAN:
 CEMARAN TERKAIT PROSES DAN PRODUK
 PENGOTOR TERKAIT PRODUK: HASIL MODIFIKASI

PRODUK YANG SIFATNYA TIDAK SAMA DENGAN

PRODUK YANG DIINGINKAN DALAM HAL
KEAMANAN DAN KHASIAT
 PREKURSOR
 PRODUK DEGRADASI
 KONTAMINAN:
 MATERI YANG TIDAK DIINGINKAN DALAM PROSES
PEMBUATAN (BERASAL DARI MIKROBA)
 BAHAN KIMIA DAN BIOKIMIA:
• PROTEASE MIKROBA
 MIKROBA:
• VIRUS, MIKOPLASMA
 PERTIMBANGAN DALAM
PEMBUATAN SPESIFIKASI
5. KUANTITAS
 KANDUNGAN PROTEIN  diperlukan sebagai data
pendukung penetapan potensi.

 POTENSI
 TERKAIT DENGAN AKTIVITAS BIOLOGI  uji biokimia,
uji berbasis kultur sel, uji berbasis hewan uji, pengikatan
reseptor-ligan
 PENGOTOR (IMPURITIES)
TERKAIT PROSES TERKAIT PRODUK
PROTEIN INANG AGREGAT
DNA INANG PRODUK DEAMIDASI
DNA VEKTOR PRODUK OKSIDASI
PROTEIN MEDIA PRODUK TERPOTONG
PROTEIN A: UNTUK DIMER, TRIMER YANG TIDAK
ANTIBODI MONOKLONAL DIINGINKAN
LOGAM
BAHAN KOLOM, REAGEN
PURIFIKASI
ENDOTOKSIN

PENGOTOR TERKAIT PROSES: dari sel inang, dari proses

PENGOTOR TERKAIT PRODUK: produk rusak

 KONTAMINAN

KONTAMINAN PENJELASAN
ENDOTOKSIN MENGGUNAKAN SEL SELAIN E. coli
UNTUK PRODUKSI
MIKROBA (BAKTERI, RAGI, SEL-SEL YANG TIDAK DIINGINKAN
FUNGI) SELAMA PROSES
MIKOPLASMA SEL KULTUR MAMALIA
VIRUS ENDOGEN, EKSOGEN

BEDA PENGOTOR DAN

KONTAMINAN?
 SPESIFIKASI – BAHAN BAKU
(DRUG SUBSTANCE)
 ORGANOLEPTIK DAN DESKRIPSI
 IDENTITAS:
 HARUS SPESIFIK
 UJI > 1 BERSIFAT KUALITATIF (FISIKOKIMIA,
BIOLOGI, IMUNOKIMIA)
 KEMURNIAN DAN KETIDAKMURNIAN
 BEBERAPA METODE
 PEMISAHAN ANTARA PRODUK DAN PENGOTOR
TERKAIT PRODUK  resolusi pemisahan
 KONTAMINAN

 POTENSI
 UJI FISIKOKIMIA ATAU BIOLOGI
 KUANTITAS
 KANDUNGAN PROTEIN
 FARMAKOPE

 PERSYARATAN UMUM
 DEFINISI UMUM
 METODE ANALISIS
 PERSYARATAN UMUM

 PERSYARATAN SPESIFIK (MONOGRAFI PRODUK)

 ORGANOLEPTIK DAN DESKRIPSI

 IDENTITAS

 KEMURNIAN DAN KETIDAKMURNIAN

 POTENSI

 KUANTITAS
 PERSYARATAN
KEAMANAN
FARMAKOPE

MUTU KETIDAKMURNIAN:
IMUNOGENISITAS

SPESIFIKASI
(FARMAKOPE) EFIKASI
1. IDENTITAS
2. KEMURNIAN DAN
KETIDAK MURNIAN IDENTITAS
3. POTENSI KEMURNIAN DAN
KETIDAKMURNIAN
4. KUANTITAS POTENSI
KUANTITAS
 BIOFARMASETIKA

 PRODUK FARMASETIKA

 PROSES BIOTEKNOLOGI

 ORGANISME HIDUP/ BIOPROSES

 REKAYASA GENETIKA
ISOLASI GEN PENYIMPANAN
FORMULASI
DAN DISTRIBUSI

KONSTRUKSI
VEKTOR KARAKTERISASI
REKOMBINAN PROTEIN
PRODUKSI PROTEIN TERAPEUTIK :
HULU – HILIR

SEL INANG R&D

UNTUK MANUFAKTUR PURIFIKASI
EKSPRESI PROTEIN

KULTUR SEL KARAKTERISASI PRODUKSI

BANK SEL PROTEIN
 PENYIMPANAN
FORMULASI
DAN DISTRIBUSI

PROTEIN MURNI
PRODUKSI PROTEIN TERAPEUTIK: (MEMENUNI
HILIR PERSYARATAN)

PROTEIN ANALYSIS/ PURIFIKASI

CHARACTERIZATION PROTEIN

PRODUKSI
PROTEIN
 METODE KARAKTERISASI
UNTUK DETEKSI PENGOTOR

PENGOTOR METODE
ENDOTOKSIN UJI ENDOTOKSIN BAKTERI, UJI
PIROGEN
PROTEIN INANG ELISA
DNA INANG, DNA VEKTOR REAL-TIME PCR
PROTEIN TERDEAMIDASI HPLC
METIONIN TEROKSIDASI HPLC
PROTEIN TERPOTONG SDS-PAGE (REDUCING)
PROTEIN TERAGREGASI SIZE EXCLUSION
(AGREGAT) CHROMATOGRAPHY
FAR
MA
KO
PE
18
METODE: CEMARAN DAN KONTAMINAN

FARMAKOPE 19
KONTAMINAN
BACTERIAL ENDOTOXIN
IMPURITIES: HOST CELL PROTEINS
 HOST CELL PROTEINS HAVE BIOLOGICAL
ACTIVITY:
 ENZYME, CYTOKINE  RISKS RELATED TO
THEIR BIOLOGICAL ACTIVITY
 IMMUNOGENICITY OF HOST CELL
PROTEINS
 ANTI DRUG ANTIBODI (ADA): INCREASES
IMMUNOGENICITY OF THERAPEUTIC
PROTEINS
 ALTERATION OF BIODISTRIBUTION,
PHARMACOKINETICS AND BIOLOGICAL ACTIVITY OF
THERAPEUTIC PROTEINS
 IMPURITIES: HOST CELL OR
VECTOR DNA
 ONCOGENICITY: Ras DNA
 IMMUNOGENICITY: BACTERIAL DNA 
ANTIBODY ANTI DNA
 MUTAGENESIS: TRANSPOSON DNA

 INDUCTION OF PRO-INFLAMATION
CYTOKINE
 DNA FORMS COMPLEX WITH PROTEIN 
IMMUNOGENICITY

RELATED TO SAFETY AND

EFFICACY
MASALAH DENGAN GLIKOPROTEIN:
MIKROHETEROGENITAS

AKTIVITAS ???????
IMMUNOGENITAS

GLIKOPROTEIN NORMAL
 AMINO ACIDS
OKSIDASI
`

DEAMIDASI
KETIDAKSTABILAN FISIK
DAPAT MEMACU
KETIDAKSTABILAN
KIMIA
 DEAMIDATION

 ASPARAGINE AND GLUTAMINE

 AFFECTS BIOLOGICAL ACTIVITY

 LIMITATION OF DES-AMIDO CONTENT

 INSULIN, HUMAN GROWTH HORMON,

CYTOCHROM C
 OXIDATION

 HISTIDINE, METHIONINE, CYSTEINE,

TRYPTOPHANE AND TYROSINE
 AFFECTS: LOST OF BIOLOGICAL ACTIVITY
 ALBUMIN, GROWTH HORMONE, GLUCAGON,
INTERLEUKIN-1, AND INTERLEUKIN 2.
 PROTEOLYSIS
 PROTEOLYSIS: CLEAVAGE OF PEPTIDE BOND

 ENZYMATIC PROTEOLYSIS
 PROTEASE
 IRREVERSIBLE

 NON-ENZYMATIC PROTEOLYSIS
 DILUTE ACID: CLEAVAGE OF PEPTIDE BOND

 LOST OF BIOLOGICAL ACTIVITY

MONOGRAFI
DESKRIPSI PRODUK,
DAN PERSYARATAN SPESIFIK
(SPESIFIKASI)
INTERFERON ALPHA 2
INTERFERON ALPHA 2
PRODUCTION INTERFERON ALPHA 2

Diagn
ostik
Molek
uler
 IDENTIFICATION:
INTERFERON ALPHA 2
TEST: INTERFERON ALPHA 2

OXIDIZED INTERFERON
TERIMA KASIH