UJI EFEKTIVITAS EKSTRAK BUAH BALONGGA (Cucumis melo L.

forma agrestis (Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes) TERHADAP

BAKTERI Staphylococcus epidermidis

Karya Tulis Ilmiah

diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh

gelar Ahli Madya Farmasi (A.Md.Farm)

Diajukan Oleh:

NUNUNG FILDAYANTI
F.15.090

Kepada
PROGRAM STUDI DIPLOMA III FARMASI
POLITEKNIK BINA HUSADA
KENDARI
2018

i
 HALAMAN JUDUL

UJI EFEKTIVITAS EKSTRAK BUAH BALONGGA (Cucumis melo L.

forma agrestis (Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes) TERHADAP
BAKTERI Staphylococcus epidermidis

Karya Tulis Ilmiah

diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh

gelar Ahli Madya Farmasi (A.Md.Farm)

Diajukan Oleh:

NUNUNG FILDAYANTI
F.15.090

Kepada
PROGRAM STUDI DIPLOMA III FARMASI
POLITEKNIK BINA HUSADA
KENDARI
2018

ii
iii
iv
v
 KATA PENGANTAR

Assalamu’alaikum Warahmatullahi Wabarakatuh.

Puji syukur penulis ucapkan atas kehadiran Allah SWT yang telah

melimpahkan rahmat, hidayah serta karunia-Nya sehingga Karya Tulis Ilmiah ini

dapat penulis selesaikan. Karya Tulis Ilmiah ini merupakan salah satu syarat yang

harus dipenuhi untuk penyelesaian pendidikan pada Politeknik Bina Husada

Kendari.

Penulis telah berusaha semaksimal mungkin dalam proses penyelesaian

Karya Tulis Ilmiah ini, namun penulis juga menyadari bahwa masih banyak

terdapat kekurangan baik dari segi isi maupun penulisan. Akhirnya Alhamdulillah

penulis bersyukur dapat menyelesaikan Karya Tulis Ilmiah dengan judul “UJI

EFEKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK BUAH BALONGGA (Cucumis

melo L. forma agrestis (Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes) TERHADAP

BAKTERI Staphylococcus epidermidis”.

Penulis telah banyak mendapat bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak

dalam proses penyelesaian Karya Tulis Ilmiah ini. Ucapan terima kasih yang

sebesar-besarnya penulis ucapkan kepada orang tua tercinta penulis yakni Bapak

La Faasa, S.Sos dan Ibu Saona Asna, S.E yang membimbing, mendidik dan

membesarkan, yang telah memberikan kasih sayang serta selalu berdoa dan

memberi dukungan selama menimbah ilmu dari awal hingga akhir untuk

keberhasilan penulis.

vi
 Ucapan terimakasih banyak kepada Bapak Muh. Azdar Setiawan, S.Farm.

M.M., Apt selaku pembimbing I yang tekun dan sabar dalam memberikan

bimbingan, petunjuk serta arahan pada penulis dan Ibu Selfyana Austin Tee.,

M.Farm, Apt selaku pembimbing II yang telah meluangkan waktu memberikan

bimbingan dalam penyusunan Karya Tulis Ilmiah ini. Tidak lupa penulis

mengucapkan banyak terima kasih sebesar-besarnya kepada yang terhormat:

1. Ibu Tuty Dharmawati, SE., M.Si., AK., QIA., CA selaku Ketua Yayasan

Bina Husada Kendari;

2. Dr. Muhammad Satria, SH., M.KN selaku Direktur Politeknik Bina Husada

Kendari dan sekaligus selaku penguji Karya Tulis Ilmiah;

3. Bapak Muh. Ilyas Yusuf, S.Farm., M.Imun., Apt selaku Wakil Direktur I

Politeknik Bina Husada Kendari;

4. Ibu Sernita, S.Si., M.Pd selaku Wakil Direktur II Politeknik Bina Husada

Kendari;

5. Ibu Nirwati Rusli, S.Si., M.Sc., Apt selaku Wakil Direktur III Politeknik Bina

Husada Kendari

6. Bapak Muh. Ilyas Yusuf, S.Farm., M.Imun., Apt dan Ibu Hasnawati, S.Si,

M.Sc selaku penguji Karya Tulis Ilmiah;

7. Seluruh dosen, staf tata usaha dan asisten Laboratorium Akademi Farmasi

Bina Husada Kendari.

8. Kepada Adi Rianto, AMF., Rohana Agusraeni, S.Farm., Hasnawati, AMF.,

Fahrun Al Rasyik, A.Md.Farm., Rafiuddin, S.Farm., Fachriansyah,

A.Md.Farm., Kadek Darmayanto, A.Md.Farm., Wenning Winarti, AMF.,

vii
 Yani Zari, AMF atas bantuannya dan memberi motivasi selama kurang lebih

tiga tahun terakhir ini;

9. Saudara penulis Satriyani, Elly Sulastri, Fadlly dan Mufti yang penulis

banggakan dan sayangi, tetaplah menjadi penyemangat kapanpun dan

dimanapun, serta keponakan-keponakanku yang selalu menjadi penyemangat

dan motivasi;

10. Sahabat penulis Sumardin, Hayuningtyas Aneswari P, Dyah Damayanti P,

Ayu Oktavia P, Latsmi Inesyarah, Nadya Amir, Yolanda N, Pradina R, atas

dukungan, bantuan dan semangat yang diberikan;

11. Teman-teman seperjuanganku Kadek Purnama, Salmiati, Ulfayani, Indriana

Yustia, Indah S, Monica Niriwa L, Putry Anastasya L, Mustika Drupadi, May

Nurmiyati A yang telah membantu selama peyusunan Karya Tulis Ilmiah;

12. Seluruh teman-teman Akfar angkatan 2015 yang telah bersama-sama penulis

dalam menempuh pendidikan di Binhus

Penulis menyadari bahwa penulisan karya tulis ilmiah ini masih terdapat

banyak kekurangan yang disebabkan oleh keterbatasan dari segi pengetahuan,

tenaga maupun materi. Oleh karena itu pendapat, saran, dan kritik sangat

diharapkan dari semua pihak demi kesempurnaan Karya Tulis Ilmiah ini. Semoga

Karya Tulis Ilmiah ini dapat bermanfaat bagi kita semua.

Wassalamu’alaikum Warahmatullahi Wabarakatuh.

Kendari, 21 Agustus 2018

Nunung Fildayanti

viii
 DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL ...................................................................................... i

HALAMAN SAMPUL ................................................................................... ii

HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................ iii

HALAMAN PERNYATAAN KEASLIAN .................................................. iv

HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH ............... v

KATA PENGANTAR .................................................................................... vi

DAFTAR ISI ................................................................................................... ix

DAFTAR TABEL........................................................................................... xi

DAFTAR GAMBAR ...................................................................................... xii

DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................. xiii

ARTI SINGKATAN....................................................................................... xiv

INTISARI........................................................................................................ xv

ABSTRACT ..................................................................................................... xvi

BAB I PENDAHULUAN

A. Latar Belakang ..................................................................................... 1

B. Rumusan Masalah ................................................................................ 3
C. Tujuan Penelitian ................................................................................. 4
D. Manfaat Penelitian ............................................................................... 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA

A. Rujukan Penelitian ............................................................................... 6

B. Landasan Teori ..................................................................................... 8
1. Buah balongga ................................................................................ 8
2. Teknik Pengolahan Sampel ............................................................ 10
3. Ekstrasi ........................................................................................... 12

ix
 4. Uraian Pelarut................................................................................. 15
5. Bakteri Staphylococcus epidermidis .............................................. 17
6. Antimikroba .................................................................................. 20
7. Sterilisasi ........................................................................................ 23
8. Pengujian Daya Hambat ................................................................. 24
9. Cara Perhitungan Zona Daya Hambat............................................ 28
10. Range Penilaian Zona Daya Hambat ............................................. 29
11. Uraian Media.................................................................................. 29
12. Tinjauan Tetracycline..................................................................... 31
BAB III METODOLOGI PENELITIAN

A. Jenis Penelitian ..................................................................................... 33

B. Desain Penelitian.................................................................................. 33
C. Waktu dan Tempat Penelitian .............................................................. 34
D. Populasi dan Sampel Penelitian ........................................................... 34
E. Kerangka Konseptual ........................................................................... 34
F. Variabel Penelitian ............................................................................... 35
G. Definisi Operasional............................................................................. 35
H. Hipotesis ............................................................................................... 35
I. Prosedur Penelitian............................................................................... 36
1. Alat, Bahan dan Subjek Penelitian ................................................. 36
2. Cara Kerja ...................................................................................... 36
3. Analisis Data .................................................................................. 40
4. Skema Jalannya Penelitian ............................................................. 45
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN........................................................ 47

BAB V PENUTUP

A. Kesimpulan ......................................................................................... 53
B. Saran..................................................................................................... 53
DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... 54

LAMPIRAN .................................................................................................... 58

x
 DAFTAR TABEL

Halaman
Tabel 1. Klasifikasi Respon Hambatan Pertumbuhan Mikroba .......................... 29

Tabel 2. Desain Penelitian................................................................................... 33

Tabel 3. Rata-Rata Diameter Zona Hambat Ekstrak Buah Balongga ................. 49

Tabel 4. Hasil Uji Anova .................................................................................... 51

xi
 DAFTAR GAMBAR

Halaman
Gambar 1. Buah Balongga .................................................................................. 8

Gambar 2. Bakteri Staphylococcus epidermidis ................................................. 17

Gambar 3. Skema Kerangka Konsep Penelitian ................................................. 34

Gambar 4. Skema Pembuatan Ekstrak Buah Balongga ...................................... 45

Gambar 5. Skema Jalannya Penelitian ................................................................ 46

Gambar 6. Grafik Diameter Rata-Rata Zona Hambat ........................................ 51

xii
 DAFTAR LAMPIRAN

Halaman
Lampiran 1. Perhitungan Konsentrasi Sampel .................................................... 58

Lampiran 2. Perhitungan Pelarut Ekstrak ........................................................... 59

Lampiran 3. Perhitungan Media NA ................................................................... 60

Lampiran 4. Perhitungan Pembuatan Kontrol positif ......................................... 61

Lampiran 5. Perhitungan Uji Daya Hambat ........................................................ 62

Lampiran 6. Dokumentasi Kegiatan Penelitian. ................................................ 67

Lampiran 7. Hasil Analisis Anova ...................................................................... 73

Lampiran 8. Hasil Uji BNT ................................................................................. 74

Lampiran 9. Grafik Analisis SPSS ...................................................................... 75

Lampiran 10. Hasil Determinasi Buah Balongga ............................................... 76

Lampiran 11. Hasil Skiring Fitokimia Buah Balongga ....................................... 77

Lampiran 12. Surat Keterangan Hasil Penelitian ................................................ 78

xiii
 ARTI SINGKATAN

BNT : Beda Nyata Terkecil

LAF : Laminar Air Flow

m : meter

mg : mili gram

mL : mili Liter

mm : mili meter

NaCl : natrium klorida

NA : nutrien agar

xiv
 INTISARI

“Uji Efektivitas Antibakteri Ekstrak Buah Balongga

(Cucumis melo L. forma agrestis (Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes)
Terhadap Bakteri Staphylococcus epidermidis”

Buah balongga (Cucumis melo L. forma agrestis (Naudin) W.J.de Wilde

& Duyjfes) mengandung senyawa kimia seperti flavonoid, saponin dan tanin
yang bersifat sebagai antibakteri sehingga dipercaya dapat digunakan dalam
mengatasi penyakit seperti dapat menyebabkan infeksi kulit yang disertai dengan
pembentukan abses (jerawat) yang disebabkan oleh bakteri Staphylococcus
epidermidis. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efektivitas ekstrak buah
balongga (Cucumis melo L. forma agrestis (Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes)
terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis.
Jenis penelitian yang dilakukan adalah eksperimen yang terdiri dari lima
perlakuan yaitu dengan 3 variasi konsentrasi ekstrak dan 2 kontrol dengan 3 kali
pengulangan. Penelitian ini dilakukan dengan metode Sumuran agar, sampel uji
dalam penelitian ini dibuat dengan konsentrasi 30%, 60% dan 80%.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak buah balongga dengan
konsentrasi 30%, 60% dan 80% memiliki daya hambat rata-rata sebesar 0 mm,
2,77 mm dan 3,43 mm. Hasil uji ANOVA menunjukkan nilai α < 0,05 dengan
nilai (.000) dan nilai F hitung (596.008) yang berarti terdapat perbedaan yang
nyata (signifikan) dari seluruh kelompok perlakuan dalam memberikan daya
hambat terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus epidermidis. Hasil tersebut
menunjukan bahwa ekstrak buah balongga konsentrasi 60% dan 80% efektif
menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus epidermidis.

Kata Kunci: Efektivitas, Ekstrak buah balongga, Staphylococcus epidermidis.

xv
 ABSTRACT

"The Effectiveness of Antibacterial Extractionof Balongga

(CucumismeloL. forma Agrestis (Naudin)W.J.de Wilde &Duyjfes)
Against the Staphylococcus epidermidis Bacteria"

Balongga Fruit (Cucumis melo L. forma Agrestis (Naudin) W.J.de Wilde

& Duyjfes) consisted of chemical substances such as flavonoid, saponin and
tannin which acted as an antibacterial. The substances thus were believed can be
used to heal disease like skin infection that carried the production of abscess
(pimples). It is believed that pimples were caused by Staphylococcus epidermidis.
This research aims to understand the effectiveness of the extraction
of Balongga (Cucumis melo L. forma Agrestis (Naudin) W.J.de Wilde &Duyjfes)
against the Staphylococcus epidermidis bacteria.
In this research paper, an experiment consisted of five treatments with 3
variations of extract concentration and 2 controls with 3 times repetition were
conducted to support the validity of this medical research. This research is done
with Sumuran agar method, the test sample within this research was made with a
concentration amount of 30%, 60% and 80%.
The results of this research showed that the extraction of Balongga with a
concentration amount of 30%, 60% and 80% have an obstruent power about the
average of 0 mm, 2,77 mm and 3,43 mm. The resulting test of ANOVA showed α
< 0,05 with the value (.000) and the calculation of F amount of (596.008) which
meant there was a significant difference from all the treatment groups in providing
the obstruent power on the growth of the Staphylococcus epidermidis bacteria.
These results showed that the extraction of Balongga with a concentration amount
of 60% and 80% were effective in inhibiting the growth of
Staphylococcus epidermidis.

Keywords: Effectivity, Balongga extraction, Staphylococcus epidermidis.

xvi
 BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang Penelitian

Indonesia merupakan Negara yang terkenal dengan hasil pertanian

dan tanaman herbal. Bukan hanya hasil pertaniannya saja tetapi sumber

daya alam yang dimiliki telah memberikan manfaat dalam kehidupan

sehari-hari di samping itu sebagai bahan makanan juga dapat

dimanfaatkan sebagai obat tradisonal yang ampuh menyembuhkan

berbagai penyakit. Penelitian mengenai tanaman-tanaman herbal yang

memiliki aktivitas antibakterial telah dilakukan untuk mengurangi efek

samping penggunaan bahan kimia dalam produk hasil pertanian dan

peternakan. Awalnya untuk membunuh dan menghambat pertumbuhan

bakteri patogen digunakan berbagai jenis antibiotik, namun beberapa

laporan menunjukkan bahwa terjadi peningkatan resistensi bakteri

terhadap beberapa jenis antibiotik (Sheikh dkk, 2012).

Salah satunya tanaman herbal yaitu buah balongga (Cucumis melo

L. forma agrestis (Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes). Buah balongga

termasuk dalam 25 spesies Cucumis di Asia dan australia, serta sekitar 30

spesies berada di Afrika (Sebastian dkk, 2010).

Buah balongga merupakan tanaman liar yang biasa dikonsumsi

sebagai bahan makanan masyarakat Sulawesi Tenggara, buah balongga

memiliki spesifikasi yang tidak jauh berbeda dengan mentimun (Cucumis

sativus). Diduga dengan genus yang sama mempunyai senyawa metabolit

1
yang sama, seperti buah mentimun. Buah mentimun adalah salah satu

tanaman herbal yang mengandung senyawa antibakteri alkaloid, flavonoid,

saponin, steroid, dan triterpenoid (Ludya dkk, 2017).

Flavonoid menunjukan aktivitas bakterisidal signifikan melawan

berbagai macam bakteri patogen khususnya bakteri kokus Gram positif.

Dari kandungan tersebut mempunyai efek sebagai antibiotik untuk

berbagai penyakit infeksi (Ludya dkk, 2017).

Penyakit infeksi masih merupakan jenis penyakit yang paling

banyak diderita oleh penduduk di negara Indonesia. Salah satu penyebab

penyakit infeksi adalah bakteri (Radji, 2011). Istilah infeksi

menggambarkan pertumbuhan atau replikasi mikroorganisme di dalam

tubuh inang. Penyakit timbul bila infeksi menghasilkan perubahan pada

fisiologi normal tubuh (Pratiwi, 2008).

Kondisi tertentu, apabila suatu bakteri masuk ke dalam bagian

tubuh lain, bakteri enterik dapat menyebabkan penyakit pada jaringan

tubuh manusia. Salah satu dari bakteri yang sering menyebabkan infeksi

adalah Staphylococcus epidermidis. Infeksi Staphylococcus epidermidis

dapat menyebabkan infeksi kulit yang disertai dengan pembentukan abses

(Radji, 2011).

Dari Hasil penelitian oleh Suriaman, dkk (2016) menunjukkan

bahwa ekstrak buah mentimun (Cucumis sativus) pada konsentrasi ekstrak

25%, 50%, 75% dan 100% mampu menghambat pertumbuhan Salmonella

typhi dan Bacillus cereus. Aktivitas antibakteri dari buah mentimun

2
dengan konsentrasi 100% memberikan nilai zona hambat terbesar yaitu

7,7±0,92 mm termasuk dalam kategori sedang. Sedangkan pada Bacillus

cereus zona hambat terbesar adalah 2,6±0,39 mm dan termaksud kategori

lemah.

Berdasarkan uraian yang telah dipaparkan di atas, buah Balongga

belum pernah dilakukan penelitian secara mikrobiologi. Oleh karena itu

peneliti tertarik melakukan suatu penelitian dengan judul “Uji Efektivitas

Antibakteri Ekstrak Buah Balongga (Cucumis melo L. forma agrestis

(Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes) Terhadap Bakteri Staphylococcus

epidermidis”.

B. Rumusan Masalah
Berdasarkan uraian latar belakang penelitian diatas, maka rumusan

masalah adalah sebagai berikut:

1. Apakah ekstrak buah balongga (Cucumis melo L. forma agrestis

(Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes) pada konsentrasi 30%, 60% dan

80% efektif menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus

epidermidis?

2. Berapa besar zona daya hambat yang dihasilkan ekstrak buah balongga

(Cucumis melo L. forma agrestis (Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes)

pada konsentrasi 30%, 60% dan 80% terhadap pertumbuhan bakteri

Staphylococcus epidermidis?

3. Apakah terdapat perbedaan yang signifikan dari masing-masing ekstrak

buah balongga (Cucumis melo L. forma agrestis (Naudin) W.J.de Wilde

3
 & Duyjfes) pada konsentrasi 30%, 60% dan 80% terhadap pertumbuhan

bakteri Staphylococcus epidermidis?

C. Tujuan Penelitian

Tujuan yang ingin dicapai dalam penelitian ini adalah sebagai

berikut:

1. Untuk mengetahui efektivitas ekstrak buah balongga (Cucumis melo L.

forma agrestis (Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes) dengan konsentrasi

30%, 60% dan 80% terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis.

2. Untuk mengetahui besarnya zona daya hambat ekstrak buah balongga

(Cucumis melo L. forma agrestis (Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes)

yang dihasilkan dari konsentrasi 30%, 60% dan 80% terhadap

pertumbuhan bakteri Staphylococcus epidermidis.

3. Untuk mengetahui perbedaan daya hambat dari masing-masing ekstrak

buah balongga konsentrasi 30%, 60% dan 80% terhadap pertumbuhan

bakteri Staphylococcus epidermidis.

D. Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan dampak dan manfaat

antara lain sebagai berikut:

1. Memberikan ilmu pengetahuan dalam pemanfaatan buah balongga

(Cucumis melo L. forma agrestis (Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes)

khususnya di bidang kesehatan.

2. Sebagai sumber informasi dan bahan referensi bagi peneliti tentang

daya hambat ekstrak buah balongga (Cucumis melo L. forma agrestis

4
 (Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes) terhadap bakteri Staphylococcus

epidermidis.

3. Sebagai informasi kepada masyarakat tentang khasiat buah balongga

(Cucumis melo L. forma agrestis (Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes)

sebagai antibakteri.

5
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. Rujukan Penelitian

Rujukan penelitian yang pernah dilakukan untuk mendukung penulisan

penelitian ini antara lain:

1. Sebastian dkk., (2010) melakukan penelitian mengenai Mentimun

(Cucumis sativus) dan Melon (Cucumis melo L.) tersebar luas di Asia dan

Australia . penelitian ini bertujuan untuk mengetahui berbagai spesies dan

genus Cucumis berdasarkan analisa filogenetik molokuler dalam berbagai

akses tanaman.

Dalam penelitiannya menunjukan bahwa Mentimun (Cucumis

sativus) dan Melon (Cucumis melo L.) memiliki 63 spesies di Afrika, Asia

dan Australia, berdasarkan urutan dari data kloroplas dan nuklir yang

dianalisa dengan model GTR+I. berdasarkan penelitiannya, buah balongga

serupa dengan Cucumis sehingga dipilih untuk pengujian lebih lanjut.

2. Thakur (2014), melakukan penelitian mengenai Uji Aktivitas Antibakteri

dan Antifungi Ekstrak Cucumis melo L (Cucurbitacea) dan Frosk

pergularia daemia (Asclepiadaceae) Sebagai Obat Tradisional.

Hasil penelitian menunjukan aktivitas antibakteri dan antijamur

untuk melawan bakteri seperti Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae,

Salmonella typhi, Staphylococcus aureus dan jamur Candida albicans.

Zona hambat tertinggi ditunjukkan oleh tanaman ekstrak buah Cucumis

melo L. terhadap Candida albicans dan Escherichia coli 8 dan 12 mm.

6
3. Pratiwi (2017), melakukan penelitian mengenai Uji Aktivitas Antibakteri

Ekstrak Etanol Daun Ceplukan (Physalis angulata L) Terhadap Bakteri

Staphylococcus epidermidis.

Hasil penelitian yang telah dilakukan menunjukkan bahwa ekstrak

etanol daun ceplukan dengan menggunakan metode Sumuran agar dapat

menghambat pertumbuhan Staphylococcus epidermidis hal tersebut dapat

diketahui dari adanya zona hambatan yang terbentuk pada konsentrasi

10% yaitu 2,8 mm, konsentrasi 20% yaitu 4,36 mm dan konsentrasi 30%

yaitu 7,4 mm.

7
 B. Landasan Teori

1. Buah Balongga

a. Klasifikasi Balongga:

Regnum : Plantae

Division : Dermatophyta

Sub division : Angiospermae

Class : Dicotyledonae

Ordo : Cucurbitales

Familia : Cucurbitaceae

Genus : Cucumis

Spesies : Cucumis melo L. forma agrestis (Naudin) W.J.de Wilde &

Duyjfes (Suriaman, 2016).

b. Morfologi

Gambar 1. Buah Balongga

(Sumber: Dokumentasi Pribadi,2018).

Balongga memiliki sistem perakaran tunggang dan bulu-bulu

akar, tetapi daya tembus akar relatif dangkal. Tanaman balongga

memiliki batang yang berwarna hijau, berbulu dengan panjang yang

biasa mencapai 1,5 meter.

8
 Daun balongga lebar berlekuk menjari dan dangkal, berwarna

hijau muda sampai hijau tua. Daunnya beraroma kurang sedap, serta

ujungnya meruncing.

Bunga balongga berwarna kuning dan berbentuk terompet,

tanaman ini berumah satu artinya, bunga jantan dan bunga betina

terpisah, tetapi masih dalam satu pohon. Bunga betina mempunyai bakal

buah berbentuk lonjong yang membengkak, sedangkan bunga jantan

tidak.

Buah balongga muda berwarna antara hijau, hijau gelap, hijau

muda. Sementara buah balongga yang sudah tua berwarna kuning

keputihan.

Biji balongga berwarna kuning, berbentuk lonjong (oval) dan

pipih. Biji balongga diselaputi oleh lendir dan saling melekat pada

ruang-ruang tempat biji tersusun dan jumlahnya banyak.

c. Kandungan Kimia

Kandungan kimia buah balongga yaitu saponin, tanin dan

flavonoid.

d. Manfaat Buah Balongga

Masyarakat setempat memanfaatkan buah balongga ini untuk

kesehatan seperti mengobati sariawan, kolestrol dan menurunkan tekanan

darah. Buah balongga dapat dimakan secara langsung maupun dibuat

olahan masakan seperti sayuran dan penambah cita rasa pada masakan

ikan.

9
2. Teknik Pengolahan Sampel

a. Sortasi Basah

Sortasi basah dilakukan untuk memisahkan kotoran-kotoran atau

bahan-bahan asing lainnya dari bahan simplisia. Misalnya simplisia yang

dibuat dari tanaman obat, bahan-bahan asing, kerikil, rumput batang, daun,

akar yang telah rusak, serta pengotoran lainnya harus dibuang. Tanah yang

mengandung macam-macam mikroba dalam jumlah yang tinggi. Oleh

karena itu pembersihan simplisia dari tanah yang terikut dapat mengurangi

jumlah mikroba awal.

b. Pencucian

Pencucian dilakukan untuk mengilangkan tanah dan pengotor

lainnya yang melekat pada bahan simplisia. Pencucian dilakukan dengan

air bersih, misalnya air dari mata air, air sumur dari PAM. Bahan simplisia

yang mengandung zat yang mudah larut dalam air mengalir, pencucian

hendaknya dilakukan dalam waktu yang sesingkat mungkin.

c. Perajangan

Beberapa jenis bahan simplisia perlu mengalami perajangan bahan

simplisia dilakukan untuk memperoleh proses pengeringan, pengepakan,

dan penggilingan. Semakin tipis bahan yang akan dikeringkan maka

semakin cepat penguapan air, sehingga mempercepat waktu pengeringan.

Akan tetapi irisan yang terlalu tipis juga dapat menyebabkan

berkurangnya/hilangnya zat berkhasiat yang mudah menguap, sehingga

mempengaruhi komposisi, bau, dan rasa yang diinginkan.

10
d. Pengeringan

Tujuannya yaitu mendapatkan simplisia yang tidak mudah rusak,

sehingga dapat disimpan dalam waktu yang lebih lama. Dengan

mengurangi kadar air dan menghentikan reaksi enzimatik akan dicegah

penurunan mutu atau perusakan simplisia. Air yang masih tersisa dalam

simplisia pada kadar tertentu dapat merupakan media pertumbuhan kapang

dan jasa renik lainnya. Proses pengeringan dapat menghentikan proses

enzimatik dalam sel bila kadar airnya dapat mencapai kurang dari 10%.

Hal-hal yang perlu diperhatikan selama proses pengeringan adalah suhu

pengeringan, kelembaban udara, aliran udara, waktu pengeringan, dan luas

permukaan bahan.

Suhu yang terbaik pada pengeringan adalah tidak melebihi 60˚C,

tetapi bahan aktif yang tidak tahan pemanasan atau mudah menguap harus

dikeringkan pada suhu serendah mungkin, misalnya 30˚C sampai 45˚C.

Terdapat dua cara pengeringan yaitu pengeringan alami (dengan sinar

matahari langsung atau dengan diangin-anginkan) dan pengeringan buatan

(menggunakan instrumen).

e. Sortasi Kering

Sortasi setelah pengeringan sebenarnya merupakan tahap akhir

pembuatan simplisia. Tujuan sortasi adalah untuk memisahkan benda-

benda asing seperti bagian-bagian tanaman yang tidak diinginkan dan

pengotoran-pengotoran lainnya yang masih ada dan tertinggal pada

simplisia kering.

11
 f. Penyimpanan

Setelah tahap pengeringan dan sortasi kering selesai maka

simplisia perlu ditempatkan dalam suatu wadah tersendiri agar tidak saling

bercampur antara simplisia satu dengan lainnya. Selanjutnya, wadah-

wadah yang berisi simplisia disimpan dalam rak pada gudang

penyimpanan. Adapun faktor-faktor yang mempengaruhi penyimpanan

simplisia adalah cahaya, oksigen, atau sirkulasi udara, reaksi kimia yang

terjadi antara kandungan aktif tanaman dengan wadah, penyerapan air,

kemunginan terjadinya proses dehidrasi, pengotoran atau pencemaran,

baik yang diakibatkan oleh serangga, kapang atau lainnya.

Untuk persyaratan wadah yang akan digunakan sebagai

pembungkus simplisia adalah harus inert, artinya tidak mudah bereaksi

dengan bahan lainnya, tidak beracun, mampu melindungi bahan simplisia

dari cemaran mikroba, kotoran, serangga, penguapan kandungan aktif

serta dari pengaruh cahaya, oksigen dan uap air (Depkes, 2000).

3. Ekstraksi

Ekstraksi merupakan proses pemisahan bahan dari campurannya

dengan menggunakan pelarut yang sesuai. Proses ekstraksi dihentikan ketika

tercapai kesetimbangan antara konsentrasi senyawa dalam pelarut dengan

konsentrasi dalam sel tanaman. Setelah proses ekstraksi, pelarut dipisahkan

dari sampel dengan penyaringan (Mukhriani, 2014).

12
 Ekstrak dikelompokkan atas sifat dasar yaitu:

a. Ekstrak encer (Extractum tenue) sediaan ini memiliki konsistensi semacam

madu dan dapat dituang.

b. Ekstrak kental (Extractum spissum) sediaan ini lihat dalam keadaan dingin

dan dapat dituang.

c. Ekstrak kering (Extractum siccum) sediaan ini memiliki konsistensi kering

dan mudah digosok.

d. Ekstrak cair (Extractum fluidum) dalam hal ini di artikan sebagai ekstrak

cair, yang dibuat sedemikian rupa sehingga 1 bagian simpilisia sesuai

dengan 2 bagian (kadang-kadang satu bagian) ekstrak cair (Voight, 1995).

Ekstraksi dapat dilakukan dengan beberapa cara salah satunya

yaitu:

1) Maserasi

Maserasi adalah cara ekstraksi simplisia dengan merendam dalam

pelarut pada suhu kamar sehingga kerusakan atau degradasi metabolit

dapat diminimalisasi. Pada maserasi, terjadi proses keseimbangan

konsentrasi antara larutan di luar dan di dalam sel sehingga diperlukan

penggantian pelarut secara berulang (Hanani, 2015).

Metode ini dilakukan dengan memasukkan serbuk tanaman dan

pelarut yang sesuai ke dalam wadah inert yang tertutup rapat pada suhu

kamar. Proses ekstraksi dihentikan ketika tercapai kesetimbangan antara

konsentrasi senyawa dalam pelarut dengan konsentrasi dalam sel tanaman.

Setelah proses ekstraksi, pelarut dipisahkan dari sampel dengan

13
penyaringan. Keuntungan cara penyarian dengan maserasi adalah cara

pengerjaan dan peralatan yang digunakan sederhana dan mudah didapat.

Kerugian utama dari metode maserasi ini adalah memakan banyak waktu,

pelarut yang digunakan cukup banyak, dan besar kemungkinan beberapa

senyawa hilang. Selain itu, beberapa senyawa mungkin saja sulit

diekstraksi pada suhu kamar. Namun di sisi lain, metode maserasi dapat

menghindari rusaknya senyawa-senyawa yang bersifat termolabil

(Mukhriani, 2014).

Maserasi dapat dilakukan dengan modifikasi, misalnya:

a. Digesti

Digesti adalah cara maserasi yang mengandung pemanasan

lemah, yaitu pada suhu 40-50˚C. Cara maserasi ini hanya dapat

digunakan untuk simplisia yang zat aktifnya tahan terhadap pemanasan.

b. Maserasi dengan menggunakan mesin pengaduk

Penggunaan mesin pengaduk yang berputar terus menerus,

proses maserasi ini dapat dipersingkat menjadi 6 sampai 24 jam.

c. Remaserasi

Cairan penyari di bagi menjadi 2 seluruh serbuk simplisia

dimaserasi dengan cairan penyari pertama, sesudah itu di tuangkan dan

diperas, ampas dimaserasi lagi dengan cairan penyari yang kedua.

14
 d. Maserasi melingkar

Penyarian yang dilakukan dengan cairan penyari yang selalu bergerak

dan menyebar sehingga kejenuhan cairan penyari dapat merata

(Depkes, 1986).

4. Uraian pelarut

Pelarut yang digunakan dalam penelitian ini adalah pelarut etanol 96%,

pemerian etanol cairan tak berwarna, mudah menguap, jenuh dan mudah

bergerak, bau khas, rasa panas, mudah terbakar dengan memberikan nyala biru

yang tidak berasap. Kelarutan dari etanol sangat mudah larut dalam air, dalam

kloroform P dan dalam eter P. penyimpanan dalam wadah tertutup rapat,

terlindungi dari cahaya, ditempat sejuk dan jauh dari nyala api ((Depkes,

1979).

Etanol dipilih karena bersifat universal yang mampu menarik semua

jenis zat aktif, baik bersifat polar, semi polar, dan non-polar sehingga

senyawa-senyawa aktif seperti flavonoid akan terlarut di dalamnya, serta

absorbsinya baik dan kadar toksisitasnya relatif rendah sehingga aman

terhadap makhluk hidup jadi tidak mudah terinfeksi oleh racunnya. Selain

flavonoid, asam linoleat juga akan terlarut dalam etanol (Rowe, 2009). Etanol

96% dipilih karena etanol dengan konsentrasi tersebut dapat lebih mudah

berpenetrasi kedalam sel serta mempunyai kemampuan ekstraksi yang lebih

baik dibandingkan dengan etanol konsentrasi rendah (Depkes,1986).

Pelarut yang ideal yang sering digunakan adalah alkohol atau

campurannya dengan air yang merupakan pelarut pengekstraksi yang

15
mempunyai extractife power yang terbaik untuk hampir semua jenis senyawa

yang mempunyai berat molekul rendah seperti alkohol. Pada pelarut

campuran alkohol air dengan perbandingan 7:3 (alkohol 70%) paling sesuai

untuk bahan baku simplisia yang berupa akar, batang atau bagian berkayu

dari tanaman, sedangkan perbandingan 1:1 (alkohol 50%) sangat berguna

untuk menghindari klorofil, senyawa resin atau polimer yang biasanya tidak

mempunyai aktivitas berarti tetapi sering kali menimbulkan masalah-masalah

farmasetis misalnya terjadi pengendapan yang gummy yang sulit dihilangkan

(Arifianti dkk, 2014).

Proses ekstraksi dengan pelarut didasarkan pada sifat kepolaran zat

dalam pelarut saat ekstraksi. Senyawa polar hanya akan larut pada pelarut

polar, seperti etanol, metanol, butanol dan air. Senyawa non-polar juga hanya

akan larut pada pelarut non-polar, seperti eter, kloroform dan n-heksan

(Gritter et al, 1991). Pelarut non-polar (n-heksan, aseton) dapat mengekstrak

likopen, triterpenoid dan sebagian kecil karotenoid, sedangkan senyawa

xanthin dan senyawa polar lainnya akan terekstrak dalam pelarut polar

(metanol, etanol) (Arifulloh, 2013). Sedangkan pelarut semi polar mampu

menarik senyawa termaksud likopen, b-karoten, vitamin C, padatan terlarut

dan total fenol (Ma‟sum dkk, 2014). Pelarut yang digunakan harus dapat

melarutkan zat yang diinginkannya, mempunyai titik didih yang rendah,

murah, tidak toksik dan mudah terbakar (Harbone, 1987).

16
5. Bakteri Staphylococcus epidermidis

Gambar 2. Bakteri Staphylococcus epidermidis

(Sumber: Nilsson et al, 1998)

a. Klasifikasi Staphylococcus epidermidis

Kingdom : Protista

Divisi : Schizophyta

Class : Schyzomycetes

Ordo : Eubacteriales

Family : Enterobacteriaceaea

Genus : Staphylococcus

Spesies : Staphylococcus epidermidis (Nilsson et al, 1998).

b. Bakteri Staphylococcus epidermidis

Bakteri Staphylococcus sp merupakan bakteri gram positif, tidak

berspora, tidak motil, fakultatif anaerob, kemoorganotrofik, metal red

positif, tumbuh optimum pada suhu 30-37˚C dan tumbuh baik pada NaCl

7% dengan dua pernapasan dan metabolisme fermentatif. Koloni biasanya

buram, biasa putih atau krem dan kadang-kadang merah bata. Bakteri ini

katalase positif dan oksidase negatif, sering mengubah nitrat menjadi

nitrit, rentan lisis oleh lisostafin tapi tidak oleh lisozim.

17
 Bakteri yang memiliki genus Staphylococcus ini mempunyai ciri-

ciri morfologi sebagai berikut:

1) Warna koloni putih susu atau agak krem

2) Bentuk koloni bulat, tepian timbul

3) Sel bentuk bola, diameter 0,5-1,5 µm (Retno, 2010)

Bakteri Staphylococcus mudah tumbuh pada berbagai macam

media, bermetabolisme aktif dengan meragikan karbohidrat dan

menghasilkan pigmen yang bervariasi mulai dari pigmen berwarna putih

sampai kuning tua. Bakteri Staphylococcus sebagian menjadi anggota flora

normal kulit dan selaput lendir pada manusia sebagai lagi menjadi bakteri

patogen yang menyebabkan bermacam-macam penyakit atau gangguan

seperti radang nanah sampai sepsis yang bisa berakibat fatal. Sehingga

bakteri ini dapat menyebabkan hemolisis yaitu pemecahan sel-sel darah

mengumpulkan plasma karena sifat koagulasenya, dan menghasilkan

berbagai macam enzim-enzim yang dapat merusak sistem imun dan

kandungan toksin pada bakteri tersebut yang bersifat destruktif. Adapun

Staphylococcus epidermidis ialah salah satu dari tiga puluh tiga spesies

Staphylococcus yang tidak menghasilkan koagulase. Bakteri ini biasanya

menjadi penghuni kulit dan sering menjadi penyebab infeksi nosokomial

(Retno, 2010).

c. Sifat dan Morfologi Staphylococcus epidermidis

Staphylococcus epidermidis merupakan bakteri gram positif

pembentuk spora yang banyak terdapat di udara, air, dan tanah. Sel

18
 berbentuk bola dengan diameter 1 µm yang tersusun dalam bentuk kluster

yang tidak teratur, dan tampak sebagai kokus tunggal, berpasangan, tetrad

dan berbentuk rantai dalam biakan cair. Koloni biasanya berwarna putih

atau kuning dan bersifat anaerob fakultatif. Staphylococcus epidermidis

merupaka flora normal pada kulit (Jawest, 2005).

d. Patogenitas

Staphylococcus epidermidis terdapat sebagai flora normal pada

kulit manusia dan pada umumnya tidak menjadi masalah bagi orang

normal yang sehat, tetapi kini organisme ini menjadi patogen oportunis

yang menyebabkan infeksi nosokomial pada persendiaan dan pembuluh

darah. Staphylococcus epidermidis memproduksi sejenis toksin atau zat

racun. Bakteri ini juga menempel dimana-mana, termaksud di permukaan

alat-alat yang terbuat dari plastic atau kaca. Lendir ini pula yang

menyebabkan Staphylococcus epidermidis lebih tahan terhadap fagositosis

(salah satu mekanisme pembunuh bakteri oleh sistem kekebalan tubuh)

dan beberapa antibiotik tertentu.

Staphylococcus epidermidis umumnya dapat menimbulkan

penyakit pembengkakan (abses) seperti jerawat, infeksi kulit, infeksi

saluran kemih dan infeksi ginjal. Selain itu, Staphylococcus epidermidis

juga dapat menimbulkan infeksi pada neonatus, orang-orang yang sistem

kekebalannya rendah, dan pada penderita yang menggunakan alat yang

dipasang di dalam tubuh (Radji, 2011).

19
6. Antimikroba

Antimikroba ialah obat pembasmi mikroba, khususnya mikroba yang

merugikan manusia. Antibiotik adalah ialah zat yang dihasilkan oleh suatu

mikroba, terutama fungi, yang dapat menghambat atau dapat membasmi

mikroba jenis lain. Berdasarkan sifat toksisitas selektif, ada antimikroba yang

bersifat menghambat pertumbuhan mikroba, dikenal sebagai aktivitas

bakteriostatik dan ada yang bersifat membunuh mikroba, dikenal sebagai

aktivitas bakterisid (Gunawan, 2012). Antibiotik digunakan untuk mengobati

berbagai jenis infeksi akibat kuman atau juga untuk prevensi infeksi, misalnya

pada pembedahan besar (Tjay dan Rahardja, 2007).

Berdasarkan spektrum atau kisaran terjadinya, antibiotik dapat

dibedakan menjadi dua kelompok yaitu:

a. Antibiotik berspektrum sempit (narrow spektrum), yaitu antibiotik yang

hanya mampu menghambat segolong jenis bakteri saja, contohnya hanya

mampu menghambat atau membunuh bakteri gram negatif saja.

b. Antibiotik berspektrum luas (broad spektrum), yaitu antibiotik yang dapat

menghambat atau membunuh bakteri dari golongan gram positif maupun

negatif (Pratiwi, 2008).

Pemakaian bahan antimikroba merupakan suatu usaha untuk

mengendalikan bakteri maupun jamur, yaitu segala kegiatan yang dapat

menghambat dan membasmi mikroorganisme. Tujuan utama pengendalian

mikroorganisme untuk mencegah penyebaran penyakit dan infeksi, membasmi

mikroorganisme pada inang yang terinfeksi dan mencegah pembusukan dan

20
perusakan oleh mikroorganisme. Ada beberapa hal yang harus dipenuhi oleh

suatu bahan antimikroba, seperti mampu mematikan mikroorganisme, mudah

larut dan bersifat stabil, tidak bersifat racun bagi manusia dan hewan, tidak

bergabung dengan bahan organik, efektif pada suhu kamar dan suhu tubuh,

tidak menimbulkan karat dan warna, berkemampuan menghilangkan bau yang

kurang sedap, murah dan mudah didapat (Pelczar and Chan 1988).

Antimikroba dapat bersifat:

a. Bakteriostatik, yaitu zat atau bahan yang dapat menghambat atau

menghentikan pertumbuhan bakteri tetapi tidak menyebabkan kematian

seluruh bakteri.

b. Bakteriosida, yaitu zat atau bahan yang dapat membunuh mikroorganisme

(bakteri). Dalam hal ini jumlah mikroorganisme akan berkurang atau

bahkan habis, tidak dapat lagi melakukan multiplikasi atau berkembang

biak.

c. Bakteriolitik adalah antibakteri yang dapat menyebabkan sel mikroba

target menjadi lisis sehingga jumlah sel total mikroba berkurang, yang

ditandai terjadinya kekeruhan setelah penambahan agen (Pratiwi, 2008)

Antibakteri adalah suatu obat atau senyawa kimia yang digunakan

untuk membasmi bakteri, khususnya bakteri yang merugikan manusia.

Berdasarkan sifat toksisitas selektif, ada bakteri yang bersifat menghambat

pertumbuhan bakteri dan ada yang bersifat membunuh bakteri. Kadar minimal

yang diperlukan untuk menghambat atau membunuh bakteri dikenal sebagai

Kadar Hambat Minimal (KHM) dan kadar Bunuh Minimal (KBM).

21
Antibakteri tertentu aktivitasnya dapat meningkat menjadi bakteriosida bila

kadar antibakterinya ditingkatkan melebihi KHM. Secara umum kemungkinan

serangan zat antibakteri dapat diduga dengan melihat struktur serta komposisi

sel bakteri. Kerusakan pada salah satu situs dapat mengawali terjadinya

perubahan-perubahan yang menuju kepada kematian sel (Setiabudy, 1995)

a. Mekanisme Kerja

Berdasarkan mekanisme kerjanya antibakteri dibagi dalam empat

kelompok:

a) Kerusakan pada dinding sel

Strukur dinding sel dapat dirusak dengan cara menghambat

pembentukannya atau mengubah setelah selesai terbentuk. Antibiotik

yang bekerja dengan mekanisme ini adalah penisilin dan sefalosporin.

Penisilin menghambat pembentukan dinding sel bakteri dengan cara

mencegah di gabungkannya asam N-asetil muramat yang dibentuk

dalam sel, ke dalam struktur nukleo peptida yang biasanya memberi

bentuk kaku pada dinding sel bakteri (Jawetz dkk, 2005).

b) Mengganggu/ merusak membran sel

Membran sitoplasma mempertahankan bahan-bahan tertentu

didalam sel mengatur aliran keluar masuknya bahan-bahan lain.

Membran memelihara integritas komponen-komponen seluler.

Kerusakan pada membran ini akan mengakibatkan terhambatnya

pertumbuhan sel atau matinya sel. Contoh: polomiksin, polien (Jawetz

dkk, 2005).

22
 c) Penghambatan sintesis protein

Molekul DNA, RNA dan protein memegang peranan penting

didalam proses kehidupan normal sel. Hal itu berarti bahwa gangguan

apapun yang terjadi pada pembentukan atau pada fungsi zat-zat

tersebut dapat mengakibatkan kerusakan total pada sel. Contoh:

kloramfenikol, tetrasiklin, rifampisin, dan streptomisin (Jawetz dkk,

2005).

d) Penghambatan sintesis asam nukleat

Struktur molekul DNA mempunyai 2 peran utama yaitu

duplikasi dan transkripsi. Setiap zat yang mampu menggangu struktur

DNA, maka mampu mempengaruhi seluruh fase pertumbuhan dan

metabolisme bakteri. Contohnya: mitosin dan asam nalidiksat (Jawetz

dkk, 2005).

7. Sterilisasi

Sterilisasi dalam mikrobiologi merupakan proses penghilangan semua

jenis organisme hidup didalam suatu benda.

Metode-metode sterilisasi yang sering digunakan adalah:

a. Metode sterilisasi uap (uap panas)

Sterlisasi uap dilakukan dalam autoklaf dan menggunakan uap air

dengan tekanan pada suhu 121˚C selama 15 menit.

b. Sterilisasi panas kering

Sterlisasi panas kering biasanya dilakukan dengan oven pensteril

yang dirancang khusus untuk tujuan ini. Oven dapat dipanaskan dengan

23
 gas atau listrik dan pada umumnya temperatur sekitar 160-170˚C atau

diatur secara otomatis.

c. Sterilisasi gas

Beberapa senyawa yang tidak tahan dengan panas dan uap dapat

disterilkan dengan baik memaparkan gas etilen oksida, bila dibandingkan

dengan cara-cara yang lain.

d. Sterilisasi dengan radiasi pengion

Penggunaan tehnik-tehnik ini terbatas karena memerlukan

peralatan yang sangat khusus dan pengaruh-pengaruh radiasi pada produk-

produk dan wadah-wadah (Pratiwi, 2008).

8. Pengujian Daya Hambat

a. Uji Daya Hambat Mikroba

Uji mikroba bertujuan untuk mengukur respon pertumbuhan

populasi mikroba terhadap suatu agen antimikroba yang telah ditentukan.

1) Metode dilusi

Pada metode ini ditentukan konsentrasi hambat minimum

(KHM) dan konsentrasi bunuh minimum (KBM) suatu zat antibakteri

terhadap bakteri yang diujikan. Prinsip dari metode dilusi adalah bahan

antibakteri yang sudah diencerkan ke dalam beberapa konsentrasi

disatukan dengan media bakteri, baik cair maupun padat. Terdapat dua

cara untuk melakukan metode dilusi ini, yaitu meode dilusi cair (broth

dilution) dan metode dilusi padat (solid dilution) (Ibrahim, 2013).

24
 Selanjutnya ditentukan KHM, yaitu konsentrasi zat terkecil

yang masih menghambat pertumbuhan kuman dan ditentukan KBM,

konsentrasi zat terkecil yang dapat membunuh 99,9% bakteri dalam

inokulum. Nilai KHM suatu zat antibakteri berkorelasi secara

logaritmik dengan diameter zona hambat metode difusi. Namum,

dikarenakan rumit dan memakan waktu yang lama, metode ini jarang

digunakan untuk uji laboratorium rutin (Ibrahim, 2013).

2) Metode difusi

Metode yang sering digunakan untuk uji resistensi zat

antibakteri adalah metode difusi. Pada metode ini zat antibakteri

diberikan pada media pembenihan yang telah diinokulasi oleh bakteri,

setelah diinkubasi, dihitung diameter zona terang disekitar zat

antibakteri yang diinterpretasikan sebagai kekuatan hambat suatu zat

terhadap pertumbuhan suatu bakteri (Ibrahim, 2013). Metode ini bisa

dilakukan dengan beberapa cara, yaitu:

a) Metode cylinder cup (ring diffusion method)

Metode silinder yaitu meletakkan beberapa silinder yang

terbuat dari gelas atau besi tahan karat di atas media agar yang

telah diinokulasi dengan jamur atau bakteri. Tiap silinder

ditempatkan sedemikian rupa hingga berdiri di atas media agar,

diisi dengan larutan yang akan diuji dan diinkubasi. Setelah

diinkubasi, pertumbuhan bakteri diamati untuk melihat ada

25
 tidaknya daerah hambatan di sekeliling silinder (Kusmayati dan

Agustini, 2007).

Keuntungan dari uji cylinder cup yaitu objek yang diuji

tidak perlu steril, pengujian yang dilakukan lebih cepat, lebih

sensitif terhadap pengenceran rendah dibandingkan dengan

menggunakan uji cakram kertas (Gavin, 1957).

Kekurangannya yaitu penanganan dalam penggunaan

plate/cup harus berhati-hati untuk menghindari terjadinya

tumpahan objek yang akan diteliti. Penanganan, pembersihan, dan

mensterilkan silinder. Pengisian objek kedalam cylinder cup

membutuhkan waktu yang lama. Adanya larutan yang tidak

tercampurkan dapat menganggu proses difusi (Gavin, 1957).

b) Metode cawan kertas (papper disc method)

Metode cakram kertas yaitu meletakkan cakram kertas yang

telah direndam larutan uji di atas media padat yang telah

diinokulasi dengan bakteri. Setelah diinkubasi, pertumbuhan

bakteri diamati untuk melihat ada tidaknya daerah hambatan

disekeliling cakram (Kusmayati dan Agustini, 2007).

c) Metode sumuran agar (well method)

(1) Metode lubang/sumuran yaitu membuat lubang pada agar padat

yang telah diinokulasi dengan bakteri. Jumlah dan letak lubang

disesuaikan dengan tujuan penelitian, kemudian lubang

diinjeksikan dengan ekstrak yang akan diuji. Setelah dilakukan

26
 inkubasi, pertumbuhan bakteri diamati untuk melihat ada

tidaknya daerah hambatan di sekeliling lubang (Kusmayati dan

Agustini, 2007).

3) Metode Pengenceran (Dilution Method)

Prinsip metode ini adalah sampel (larutan) dimasukkan

kedalam tabung yang berisi pembenihan cair, kemudian ke dalam

tabung tersebut ditambahkan suspensi bakteri dengan jumlah tertentu.

Pada keadaan normal mikroorganisme akan tumbuh bila tidak ada

hambatan. Beberapa modifikasi dari metode ini yaitu:

a) Metode pengenceran dalam cairan (Broth Dilution Method)

Sejumlah tabung yang berisi media cair dan kuman

dimasukkan bahan/antibakteri dengan jumlah tertentu, selanjutnya

kekeruhan yang terjadi diamati dengan Nephelometer.

b) Metode pengenceran dalam agar (Agar Dilution Method)

Prinsip sama dengan Broth Dilution Method, hanya media

cair diganti dengan media agar.

c) Metode pengenceran secara seri (Serial Dilution Method)

Cara ini dilakukan dengan menggunakan sejumlah deretan

tabung berisi media cair dengan konsentrasi yang berbeda-beda,

kemudian ke dalam masing-masing tabung ditambahkan suspensi

bakteri dengan konsentrasi tertentu. Kocok sampai homogen dan

inkubasi pada suhu 37˚C sebagai kontrol digunakan tabung berisi

media pembenihan dengan mikroorganisme (Prabawati, 2008).

27
9. Cara Perhitungan Zona Daya Hambat

Pengukuran zona hambat dilakukan dengan jangka sorong

menggunakan dua garis yang saling tegak lurus melalui titik pusat diameter

lingkaran, sedangkan garis yang ketiga diambil diantara dua garis yaitu

membentuk garis dengan sudut 45º. Pengukuran dilakukan sebanyak tiga kali

pada tempat yang berbeda, dengan cara: (Djide, 2008).

Perhitungan 1: (AB – ab) / 2

Perhitungan 2 : (CD – cd) / 2

Perhitungan 3 : (EF – ef) / 2

𝑝𝑒𝑟ℎ𝑖𝑡𝑢𝑛𝑔𝑎𝑛 1+𝑝𝑒𝑟ℎ𝑖𝑡𝑢𝑛𝑔𝑎𝑛 2+𝑝𝑒𝑟ℎ𝑖𝑡𝑢𝑛𝑔𝑎𝑛 3

Zona hambat:
3

28
10. Range Penilaian Zona Daya Hambat

Tabel 1. Klasifikasi Respon Hambatan Pertumbuhan Mikroba

Zona Hambat Respon Hambatan Pertumbuhan

<3 mm Lemah
5-10 mm Sedang
10-20 mm Kuat
>20 mm Sangat Kuat
Sumber : (Pradana, 2013).

11. Uraian Media

Media (bentuk jamak dari medium) merupakan zat atau campuran

beberapa zat nutrisi yang diperlukan mikro untuk pertumbuhannya seperti

protein, karbohidrat, lemak vitamin dan mineral.

Jenis media yang digunakan dapat digolongkan berdasarkan:

a. Media menurut bahan yang digunakan

1) Media alamiah terdiri atas bahan-bahan alam seperti sari buah, wortel,

nasi, jagung dan bahan-bahan alamiah lainnya.

2) Media semi alamiah terdiri dari bahan alamiah dengan senyawa-

senyawa kimia, media PDA (Potato Dextrose Agar), TEA (Tounge

Ekstrak Agar), MEA (Malt Ekstrak Agar) dan lain-lain.

3) Media buatan atau sintesis terdiri dari senyawa-senyawa kimia yang

komposisi dan jumlahnya sudah ditentukan misalnya SDA (Sabouraund

Dextrose Agar), BPA (Baird Parker Agar), EMBA (Eosin Metilen Blue

Agar) dan lain-lain.

29
b. Media berdasarkan kegunaanya

1) Media umum dapat ditumbuhi oleh mikroba secara umum artinya

dalam media ini banyak mikroba yang dapat tumbuh, biasanya

digunakan dalam pembuatan working culture, seperti media NA

(Nutrien Agar), BHIB (Brain Heart Infusion Broth), TSA (Trypticase

Soy Agar) dan sebagainya.

2) Media selektif disusun sedemikian rupa sehingga hanya jenis-jenis

mikroorganisme tertentu saja yang dapat tumbuh, misalnya SSA

(Salmonella Shigella Agar), PPA (Pseudomonas Agar Piosianin) dan

EMBA (Eosin Metilen Blue Agar).

3) Media diferensial digunakan untuk membedakan jenis mikroba satu

dengan yang lainnya, disebabkan adanya suatu reaksi atau ciri khas.

Reaksi ini terjadi karena mikroba mampu mengurai salah satu bahan

dalam medium, misalnya MSA (Mannitol Salt Phenolred Agar).

4) Media pengkaya dipakai untuk menumbuhkan mikroba tertentu,

bertujuan untuk mengaktifkan mikroba tersebut, seperti FTM (Fluid

Thioglycolate Medium) dan RVS (Rappaport Vasiliadis Medium).

c. Media berdasarkan konsistensinya

1) Media padat ini ditambahkan agar-agar sehingga pada suhu kamar

akan memadat (menjadi padat), umumnya mengandung agar-agar yang

jumlahnya diatas 50% (>50%). Misalnya PCA (Plate Count Agar) dan

VJA (Vogel Johnson Agar). Pada media ini inokulasi dilakukan

dengan cara digores atau ditusuk.

30
 2) Media setengah padat ini ditambahkan agar-agar atau menggunakan

agar-agar sebanyak <30%. Biasanya digunakan untuk melihat suatu

mikroba yang bersifat motil atau non-motil, misalnya SIM medium.

3) Media cair tidak ditambahkan agar atau bahan pemadat lainnya,

biasanya nama media diikuti dengan kata broth atau fluid. Misalnya

MCB (Mac Conkey Broth), NB (Nutrient Broth) dan PDF (Pepton

Dilution Fluid) (Djide, 2008).

Media yang digunakan dalam penelitian ini adalah media NA (Nutrient

Agar). Media NA merupakan media yang umum digunakan untuk

pertumbuhan mayoritas dari mikroorganisme. Media ini merupakan media

sederhana yang dibuat dari ekstrak beef, pepton dan agar. NA merupakan

salah satu media yang umum digunakan dalam prosedur bakteriologi seperti

uji biasa dari air, produk pangan, untuk membawa stok kultur, untuk

pertumbuhan sampel pada uji bakteri, dan untuk mengisolasi organisme dalam

kultur murni (Dwidjoseputro, 1994).

12. Tinjauan Tetracycline

Tetracycline adalah antibiotik bakteriostatik berspektrum luas yang

menghambat sintesis protein. Tetracycline bekerja aktif terhadap banyak

bakteri gram positif dan gram negatif, termaksud bakteri anaerob d, riketsia,

klamida, mikroplasma, dan terdapat beberapa protozoa, misalnya amoeba.

Tetracycline bekerja dengan menghalangi penambahan asam amino

baru pada rantai peptide yang sedang terbentuk, biasanya bersifat menghambat

31
atau membunuh bakteri Gram positif dan Gram negatif atau baik pada

mikroba ekstrasel maupun intrasel, tipe kerja bakteriostatik.

Mekanisme kerjanya yaitu hambatan pada sintesis protein ribosom

dengan menghambat pemasukkan aminoasil t-RNA pada fase pemanjangan

yang termasuk fase translasi ini akan menyebabkan blockade perpanjangan

rantai peptide (Putri dkk, 2015).

Tetracycline dapat digunakan untuk mengobati penyakit:

a. Riketsiosis.

b. Infeksi Klamidia, Limfogranulona venerum.

c. Konjungitivitas inklusi.

d. Uretritis nonspesifik.

e. Infeksi Mycoplasma Pneumonia.

f. Infeksi basil.

g. Infeksi kokus.

h. Infeksi venerik.

i. Acne vulgaris.

j. Penyakit paru obstruktif menahun.

k. Infeksi intra abnormal.

l. Infeksi lain, Antinomikosis.

m. Frambusia.

n. Leptospirosis.

o. Infeksi saluran cerna (Dapertemen Farmakologi Dan Teraupetik, 2007).

32
 BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

A. Jenis Penelitian

Jenis penelitian yang digunakan adalah penelitian eksperimen. Eksperimen

merupakan suatu penelitian dengan melakukan kegiatan percobaan yang bertujuan

untuk mengetahui gejala atau pengaruh yang timbul, sebagai akibat dari adanya

perlakuan tertentu atau eksperimen tersebut.

B. Desain Penelitian

Rancangan penelitian menggunakan Eksperimen Rancangan Faktorial

adalah desain penelitian eksperimental yang dilakukan pada banyak kelompok

yaitu pertama kelompok kontrol kemudian diikuti dengan beberapa kelompok

perlakuan.

Tabel 2. Desain Penelitian

Luas zona hambat (mm)

Jumlah
No Perlakuan Replikasi Rata-rata (mm)
(mm)
1 2 3
1. A
2. B
3. C
4. D
5. E

Keterangan :
A = Ekstrak buah balongga 30%
B = Ekstrak buah balongga 60%
C = Ekstrak buah balongga 80%
D = Kontrol Positif (Tetracycline)
E = Kontrol Negatif (Propylenglikol)

33
 C. Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian telah dilaksanakan di Laboratorium Laboratorium Mikrobiologi

dan Parasitologi Politeknik Bina Husada Kendari pada bulan Juni - Juli 2018.

D. Populasi dan Sampel Penelitian

1. Populasi

Populasi dalam penelitian ini adalah buah balongga (Cucumis melo L.

forma agrestis (Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes) yang berada di Unahaa,

Konawe.

2. Sampel

Sampel dalam penelitian ini adalah ekstrak buah balongga (Cucumis

melo L. forma agrestis (Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes).

E. Kerangka Konsep Penelitian

Variabel bebas: Variabel terikat:

Ekstrak buah balongga Daya hambat

(Cucumis melo L. forma terhadap
agrestis (Naudin) W.J.de pertumbuhan
Wilde & Duyjfes). bakteri.

Variabel terkendali:

Metode Sumuran agar dan Skrining Fitokimia.

Gambar 3. Skema Kerangka Konsep Penelitian.

34
 F. Variabel Penelitian

Variable bebas : Ekstrak buah balongga (Cucumis melo L. forma agrestis

(Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes)

Variabel terikat : Daya hambat terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus

epidermidis.

G. Definisi Operasional Variabel

1. Ekstrak buah balongga diperoleh dengan cara mengekstraksi buah balongga

menggunakan metode maserasi.

2. Staphylococcus epidermidis adalah bakteri uji yang digunakan pada pengujian

aktivitas antibakteri.

3. Uji daya hambat merupakan pengujian untuk mengetahui daya antimikroba

dengan cara mengukur luas daerah hambat pertumbuhan bakteri

Staphylococcus epidermidis.

4. Zona hambat adalah suatu area yang tidak ditumbuhi bakteri sebagai daya

hambat yang diujikan dan biasanya ditandai dengan daerah yang berwarna

bening. Berpengaruh dan tidaknya bahan antimikroba dapat dilihat dari besar

kecilnya area yang tidak ditumbuhi mikroba. Pengukuran zona daya hambat

menggunakan jangka sorong, dengan pengukuran berawal dari tepi daerah

zona hambat hingga ke tepi zona hambat yang terpanjang lainnya. Sedangkan

satuannya digunakan millimeter.

H. Hipotesis

Ekstrak buah balongga dapat menghambat pertumbuhan bakteri

Staphylococcus epidermidis.

35
 I. Prosedur Penelitian

1. Alat, bahan dan subjek penelitian

a. Alat yang digunakan

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah autoklaf, batang

pengaduk, botol vial, cawan petri, erlenmeyer, cylinder cup, gelas kimia

(pyrex), gelas ukur (pyrex), hot plate, inkubator, jarum ose, jangka sorong,

labu ukur, laminar air flow, lampu spiritus, mikro pipet, oven, pinset,

pisau, rotary evaporator, spoit, tabung reaksi, termometer, timbangan

analitik, wadah maserasi.

b. Bahan yang digunakan

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu aluminium foil,

aquadest, buah balongga, etanol 96%, kain flannel, kapas, kertas, lakban

hitam, larutan NaCL 0,9%, media nutrien agar, tetracycline 250 mg, Tisu.

c. Subjek penelitian

Bakteri Staphylococcus epidermidis.

2. Cara Kerja

a. Penyiapan Sampel Buah Balongga

1) Pengambilan sampel dilakukan di unaaha konawe.

2) Dipilih buah balongga yang masih segar.

3) Kemudian buah balongga dimasukkan dalam keranjang buah.

b. Pengolahan Sampel

1) Dibersihkan buah balongga dari kotoran dengan cara dicuci dengan air

mengalir kemudian ditiriskan.

36
 2) Dibagi buah balongga menjadi dua bagian lalu di ambil daging buah

balongga.

3) Dikeringkan, kemudian di sortasi kering.

4) Dimasukkan kedalam wadah simplisia.

c. Pembuatan Ekstrak

1) Siapkan alat dan bahan yang digunakan.

2) Timbang buah balongga yang telah dikeringkan sebanyak 500 gram.

3) Masukkan ke dalam wadah maserasi kemudian ditambahkan pelarut

etanol 96% dengan perbandingan 1 : 7,5 (3.750 mL).

4) Sampel diaduk dengan menggunakan batang pengaduk agar semua

sampel terendam secara sempurna.

5) Tutup dengan menggunakan penutup toples kemudian dilapisi dengan

lakban agar tertutup rapat.

6) Dibiarkan selama 5 hari, sambil sekali-kali diaduk.

7) Setelah 5 hari, disaring ke dalam wadah penampung dengan

menggunakan kain flanel kemudian ampas diperas.

8) Didiamkan selama 2 hari dalam keadaan tertutup dan disimpan pada

tempat yang terlindungi dari cahaya.

9) Selanjutnya hasil yang telah di ekstraksi kemudian di rotafavor hingga

menjadi ekstrak yang kental.

d. Pembuatan Pengenceran Ekstrak Buah Balongga 30%

1) Ditimbang 3 gram ekstrak kental.

2) Ditambahkan aquadest hingga 10 mL.

37
 3) Diaduk hingga homogen, lalu dimasukkan kedalam gelas kimia dan

diberi label.

4) Dilakukan prosedur yang sama terhadap konsentrasi 60% dan 80%.

e. Sterilisasi Alat

1) Dicuci bersih terlebih dahulu alat-alat yang digunakan.

2) Dikeringkan kemudian dibungkus dengan kertas.

3) Disterilkan alat yang tahan terhadap panas dalam oven pada suhu

180˚C selama 2 jam, sedangkan alat yang tidak tahan panas disterilkan

dalam autoklaf pada suhu 121˚C selama 15 menit.

4) Disterilkan jarum ose dan pinset dengan cara pijarkan dengan

menggunakan api langsung.

f. Pembuatan Media NA

1) Ditimbang sebanyak 4,6 gram nutrien agar (NA) lalu dimasukkan ke

dalam Erlenmeyer kemudian dilarutkan dengan aquadest sebanyak 200

ml, aduk hingga larut dengan menggunakan batang pengaduk.

2) Dipanaskan larutan media tersebut diatas pemanas sambil sesekali

diaduk (dengan batang pengaduk) hingga larut sempurna dan

mendidih, setelah mendidih, angkat dan pindahkan wadah tersebut dari

pemanas.

3) Biarkan hangat, lalu ukur pH media tersebut sesuai standar yang

tertera pada label kemasan pada botol media (pH 7,4 ± 0,2).

4) Dimasukkan kedalam autoklaf untuk dilakukan sterlisasi pada suhu

121˚C selama 15 menit.

38
 5) Setelah dilakukan sterlisasi, media diangkat dan pindahkan dari

autoklaf.

6) Media siap digunakan (perhatian: jika media yang dibuat belum juga

digunakan, maka media tersebut dapat disimpan pada lemari pendingin

pada suhu 2-8˚C).

g. Pembuatan biakan bakteri

1) Diambil satu ose bakteri Staphylococcus epidermidis dengan

menggunakan jarum ose yang telah disterilkan.

2) Digoreskan pada media Nutrien agar (NA) dengan cara dimiringkan.

3) Diinkubasi pada suhu 37˚C selama 1x24 jam.

h. Pembuatan Suspensi Bakteri Staphylococcus epidermidis

1) Bakteri Staphylococcus epidermidis diinokulasi pada media miring

yang telah memadat, kemudian di inkubasi pada suhu 37˚C selama 1-2

x 24 jam.

2) Diambil sebanyak 1 ose biakkan bakteri yang telah diremajakan pada

media NA miring.

3) Dipindahkan kedalam tabung reaksi yang berisi larutan NaCl 0,9%

sebanyak 5 mL.

4) Dikocok hingga homogen.

39
 i. Pengujian Luas Zona Hambat Ekstrak Buah Balongga Terhadap

Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus epidermidis dengan Metode

Sumuran agar.

1) Dipipet sebanyak 1 ml bakteri Staphylococcus epidermidis yang telah di

suspensikan dengan NaCl 0,9% dan dimasukkan dalam erlenmeyer

yang berisi media nutrien agar (NA), dikocok sampai homogen, lalu

didinginkan kemudian dipipet sebanyak 20 ml dan di masukkan dalam

cawan petri.

2) Dibuat sumuran pada permukaan agar yang telah memadat kemudian

dimasukkan ekstrak buah balongga dengan konsentrasi 30%, 60% dan

80% sebanyak 0,1 mL dan kontrol sebanyak 0,1 mL ke dalam masing-

masing sumuran.

3) Diinkubasi selama 1 x 24 jam pada suhu 37˚C dalam inkubator.

4) Dikeluarkan dari inkubator dan amati luas daerah hambatan

pertumbuhan bakteri.

5) Diukur luas zona hambat.

3. Analisis data

a. Data

1) Sifat data

Kuantitatif adalah suatu proses menemukan pengetahuan yang

menggunakan data berupa angka, simbol, tabel dan gambar. Data

kuantitatif merupakan penelitian yang secara primer menggunakan

paradigm dalam mengembangkan ilmu pengetahuan (seperti pemikiran

40
 tentang sebab akibat, reduksi kepala variable, hipotesis dan pertanyaan

spesifik menggunakan pengukuran dan observasi serta pengujian

teori).

2) Jenis data

Jenis data dalam penelitian ini adalah data rasio dan data

nominal. Data nominal adalah data yang diperoleh dengan cara

kategorisasi suatu klasifikasi. Sedangkan data rasio adalah tipe data

dengan level pengukuran yang paling tinggi dibandingkan dengan tipe

data lain. Data rasio termasuk dalam kelompok data kuantitatif. Angka

yang dihasilkan pada data ini menunjukkan angka yang sesungguhnya

dan dapat dilakukan berbagai operasi matematika.

3) Sumber data

a) Data primer yaitu data yang diperoleh langsung dari penelitian.

b) Data sekunder yaitu data yang berasal dari literatur yang

mendukung penelitian.

b. Teknik Pengumpulan Data

Teknik yang dipakai dalam pengumpulan data untuk penelitian ini

adalah data primer hasil zona hambat dari tumbuhan buah balongga yang

diamati atau observasi langsung kemudian di ukur dan dihitung zona

hambat pada uji daya hambat ekstrak tersebut.

c. Penyajian Data

Merupakan proses penyiapan data yang diperoleh sebagai hasil dari

pengamatan.

41
 1) Pencatatan : dalam proses pencatatan data yang diperoleh dari

pengamatan yang dilakukan pada zona hambat yang terbentuk

disekeliling Sumuran agar.

2) Editing : Dalam proses editing dilakukan pengecekan dan perbaikan

isi. Hasil dari observasi yang diperoleh atau dikumpulkan dan

dianalisis secara akurat.

3) Pengklasifikasian dan pengkodean : Data yang sudah terkumpul

diklasifikasikan menurut karakteristik dan kode perlakuan yang

dilakukan dengan tiga pengulangan.

4) Penyusunan : Dalam penyusunan data diperlukan untuk memudahkan

penilaian dan pengecekan semua data yang telah diperlukan dalam

pengujian hipotesis dan untuk mencapai tujuan penelitian itu perlu

dilakukan seleksi dan penyusunan data. Data yang sudah

diklasifikasikan dibuatkan susunan berdasarkan kode kalsifikasinya.

5) Perhitungan : Data yang sudah ada dihitung dan dibuatkan diagram

masing-masing kalsifikasi.

6) Penyimpanan : Data yang sudah ada disimpan untuk keperluan

selanjutnya.

d. Pengolahan Data

Pengolahan data yang digunakan dalam penelitian ini adalah uji

ANOVA pada tingkat kepercayaan 95% (∝=0,05) dengan menggunakan

alat bantu komputer. ANOVA merupakan teknik statistik yang digunakan

untuk membandingkan tiga atau lebih rata-rata. Uji ANOVA bertujuan

42
 untuk menguji rata-rata dari beberapa kelompok sampel yang memiliki

perbedaan signifikan, dan untuk menguji beberapa kelompok sampel yang

memiliki varians populasi yang sama.

e. Uji BNT (Beda Nyata Terkecil)

Analisis perbandingan ini digunakan untuk mengetahui dari

pasangan rata-rata mana yang paling berbeda diantara pasangan yang ada.

Metode Least Significant Difference menggunakan perbandingan berbagai

rata-rata dengan uji untuk mengetahui perbedaan dari pasangan rata-rata.

Salah satu prosedur uji yang paling sederhana untuk menjawab pernyataan

tentang nilai tengah perlakuan mana yang berbeda apabila H1 diterima

adalah uji beda nyata terkecil (Least Significant Different = LSD).

Uji ini sangat cocok digunakan apabila pengujian niai tengah

perlakuan yang akan dibandingkan sebelumnya setelah direncakan.

Tinggkat ketepatan uji BNT akan berkurang jika digunakan untuk menguji

semua kemungkinan pasangan nilai tengah perlakuan (melakukan

pembanding yang tidak terencana). Beberapa aturan dasar yang perlu

diperhatikan agar uji ini dapat digunakan secara efektif antara lain,

gunakan uji BNT hanya apabila F. Hitung > F. Table, tidak menggunakan

uji BNT untuk membandingkan semua kombinasi pasangan nilai tengah

perlakuan karena hanya cocok untuk membandingkan dengan kontrol atau

tidak lebih dari lima perlakuan. Apabila setiap perlakuan mempunyai

ulangan yang sama yaitu (r), maka formula untuk perhitungan nilai

pembanding (NP) BNT pada taraf nyata α adalah:

43
 (2 KT Galat )
NP BNTα = tα𝑥 = r

Nilai tα dilihat pada tabel (t) dengan menggunakan derajat bebas

galat dan α yang digunakan. Untuk melihat apakah dua nilai tengah

perlakuan berbeda secara statistik, makan bandingkan dengan selisih

(beda) dua nilai tengah perlakuan tersebut dengan nilai BNT. Jika beda

dua nilai tengah > nilai BNT, maka dua nilai tengah dikatakan berbeda

secara nyata pada taraf α, sebaliknya jika beda dua nilai tengah ≤ nilai NP

BNT, maka dua nilai tengah dikatakan tidak berbeda nyata (Harni, 2015).

44
 7) Setelah dilakukan sterlisasi, media diangkat dan pindahkan dari

autoklaf.

8) Media siap digunakan (perhatian: jika media yang dibuat belum juga

digunakan, maka media tersebut dapat disimpan pada lemari pendingin

pada suhu 2-8˚C).

j. Pembuatan biakan bakteri

4) Diambil satu ose bakteri Staphylococcus epidermidis dengan

menggunakan jarum ose yang telah disterilkan.

5) Digoreskan pada media Nutrien agar (NA) dengan cara dimiringkan.

6) Diinkubasi pada suhu 37˚C selama 1x24 jam.

k. Pembuatan Suspensi Bakteri Staphylococcus epidermidis

5) Bakteri Staphylococcus epidermidis diinokulasi pada media miring

yang telah memadat, kemudian di inkubasi pada suhu 37˚C selama 1-2

x 24 jam.

6) Diambil sebanyak 1 ose biakkan bakteri yang telah diremajakan pada

media NA miring.

7) Dipindahkan kedalam tabung reaksi yang berisi larutan NaCl 0,9%

sebanyak 5 mL.

8) Dikocok hingga homogen.

45
 l. Pengujian Luas Zona Hambat Ekstrak Buah Balongga Terhadap

Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus epidermidis dengan Metode

Sumuran agar.

6) Dipipet sebanyak 1 ml bakteri Staphylococcus epidermidis yang telah di

suspensikan dengan NaCl 0,9% dan dimasukkan dalam erlenmeyer

yang berisi media nutrien agar (NA), dikocok sampai homogen, lalu

didinginkan kemudian dipipet sebanyak 20 ml dan di masukkan dalam

cawan petri.

7) Dibuat sumuran pada permukaan agar yang telah memadat kemudian

dimasukkan ekstrak buah balongga dengan konsentrasi 30%, 60% dan

80% sebanyak 0,1 mL dan kontrol sebanyak 0,1 mL ke dalam masing-

masing sumuran.

8) Diinkubasi selama 1 x 24 jam pada suhu 37˚C dalam inkubator.

9) Dikeluarkan dari inkubator dan amati luas daerah hambatan

pertumbuhan bakteri.

10) Diukur luas zona hambat.

4. Analisis data

b. Data

4) Sifat data

Kuantitatif adalah suatu proses menemukan pengetahuan yang

menggunakan data berupa angka, simbol, tabel dan gambar. Data

kuantitatif merupakan penelitian yang secara primer menggunakan

paradigm dalam mengembangkan ilmu pengetahuan (seperti pemikiran

46
 tentang sebab akibat, reduksi kepala variable, hipotesis dan pertanyaan

spesifik menggunakan pengukuran dan observasi serta pengujian

teori).

5) Jenis data

Jenis data dalam penelitian ini adalah data rasio dan data

nominal. Data nominal adalah data yang diperoleh dengan cara

kategorisasi suatu klasifikasi. Sedangkan data rasio adalah tipe data

dengan level pengukuran yang paling tinggi dibandingkan dengan tipe

data lain. Data rasio termasuk dalam kelompok data kuantitatif. Angka

yang dihasilkan pada data ini menunjukkan angka yang sesungguhnya

dan dapat dilakukan berbagai operasi matematika.

6) Sumber data

c) Data primer yaitu data yang diperoleh langsung dari penelitian.

d) Data sekunder yaitu data yang berasal dari literatur yang

mendukung penelitian.

f. Teknik Pengumpulan Data

Teknik yang dipakai dalam pengumpulan data untuk penelitian ini

adalah data primer hasil zona hambat dari tumbuhan buah balongga yang

diamati atau observasi langsung kemudian di ukur dan dihitung zona

hambat pada uji daya hambat ekstrak tersebut.

g. Penyajian Data

Merupakan proses penyiapan data yang diperoleh sebagai hasil dari

pengamatan.

47
 7) Pencatatan : dalam proses pencatatan data yang diperoleh dari

pengamatan yang dilakukan pada zona hambat yang terbentuk

disekeliling Sumuran agar.

8) Editing : Dalam proses editing dilakukan pengecekan dan perbaikan

isi. Hasil dari observasi yang diperoleh atau dikumpulkan dan

dianalisis secara akurat.

9) Pengklasifikasian dan pengkodean : Data yang sudah terkumpul

diklasifikasikan menurut karakteristik dan kode perlakuan yang

dilakukan dengan tiga pengulangan.

10) Penyusunan : Dalam penyusunan data diperlukan untuk memudahkan

penilaian dan pengecekan semua data yang telah diperlukan dalam

pengujian hipotesis dan untuk mencapai tujuan penelitian itu perlu

dilakukan seleksi dan penyusunan data. Data yang sudah

diklasifikasikan dibuatkan susunan berdasarkan kode kalsifikasinya.

11) Perhitungan : Data yang sudah ada dihitung dan dibuatkan diagram

masing-masing kalsifikasi.

12) Penyimpanan : Data yang sudah ada disimpan untuk keperluan

selanjutnya.

h. Pengolahan Data

Pengolahan data yang digunakan dalam penelitian ini adalah uji

ANOVA pada tingkat kepercayaan 95% (∝=0,05) dengan menggunakan

alat bantu komputer. ANOVA merupakan teknik statistik yang digunakan

untuk membandingkan tiga atau lebih rata-rata. Uji ANOVA bertujuan

48
 untuk menguji rata-rata dari beberapa kelompok sampel yang memiliki

perbedaan signifikan, dan untuk menguji beberapa kelompok sampel yang

memiliki varians populasi yang sama.

i. Uji BNT (Beda Nyata Terkecil)

Analisis perbandingan ini digunakan untuk mengetahui dari

pasangan rata-rata mana yang paling berbeda diantara pasangan yang ada.

Metode Least Significant Difference menggunakan perbandingan berbagai

rata-rata dengan uji untuk mengetahui perbedaan dari pasangan rata-rata.

Salah satu prosedur uji yang paling sederhana untuk menjawab pernyataan

tentang nilai tengah perlakuan mana yang berbeda apabila H1 diterima

adalah uji beda nyata terkecil (Least Significant Different = LSD).

Uji ini sangat cocok digunakan apabila pengujian niai tengah

perlakuan yang akan dibandingkan sebelumnya setelah direncakan.

Tinggkat ketepatan uji BNT akan berkurang jika digunakan untuk menguji

semua kemungkinan pasangan nilai tengah perlakuan (melakukan

pembanding yang tidak terencana). Beberapa aturan dasar yang perlu

diperhatikan agar uji ini dapat digunakan secara efektif antara lain,

gunakan uji BNT hanya apabila F. Hitung > F. Table, tidak menggunakan

uji BNT untuk membandingkan semua kombinasi pasangan nilai tengah

perlakuan karena hanya cocok untuk membandingkan dengan kontrol atau

tidak lebih dari lima perlakuan. Apabila setiap perlakuan mempunyai

ulangan yang sama yaitu (r), maka formula untuk perhitungan nilai

pembanding (NP) BNT pada taraf nyata α adalah:

49
 (2 KT Galat )
NP BNTα = tα𝑥 = r

Nilai tα dilihat pada tabel (t) dengan menggunakan derajat bebas

galat dan α yang digunakan. Untuk melihat apakah dua nilai tengah

perlakuan berbeda secara statistik, makan bandingkan dengan selisih

(beda) dua nilai tengah perlakuan tersebut dengan nilai BNT. Jika beda

dua nilai tengah > nilai BNT, maka dua nilai tengah dikatakan berbeda

secara nyata pada taraf α, sebaliknya jika beda dua nilai tengah ≤ nilai NP

BNT, maka dua nilai tengah dikatakan tidak berbeda nyata (Harni, 2015).

50
 5. Skema Jalannya Penelitian

a. Maserasi

Buah Balongga

Sortasi Basah

Pencucian

Dipotong-potong

Pengeringan

Simplisia + Etanol 96%

Perendaman

Campuran simplisia dan

pelarut

Penyarian

Residu Maserat
\
Penguapan

Ekstrak kental

Gambar 4. Skema pembuatan ekstrak buah balongga.

51
b. Uji Daya Hambat

Ekstrak kental buah

balongga

Konsentrasi Kontrol Pembuatan Penyiapan Biakan

ekstrak buah positif Media NA Bakteri
balongga 30%, Tetrasiklin S.epidermidis
60% dan 80% 250 mg

Kontrol negatif Pembuatan suspensi

Propylenglikol Bakteri S.epidermidis

Pengujian Daya Hambat

Pertumbuhan Bakteri
S.epidermidis

Data

Analisis

Hasil

Kesimpulan

Gambar 5. Skema jalannya penelitian.

52
 BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

Telah dilakukan uji efektivitas antibakteri ekstrak buah balongga

(Cucumis melo L. forma agrestis (Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes)

terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis. Pengambilan buah balongga

dilakukan secara langsung (pemetikan) pada pukul 08:00-09.00, pada saat

puncak fotosintesis, tanaman mengalami proses metabolisme yang optimal

sehingga menghasilkan senyawa metabolit yang lebih banyak.

Penyiapan buah balongga yang dibutuhkan dicuci bersih dengan air

mengalir sampai semua kotorannya hilang. Selanjutnya dikeringkan.

Menurut Monoai (2016) disebutkan pengeringan bertujuan untuk

menurunkan kadar air, sehingga menghasilkan mutu simplisia yang tahan

disimpan lama dan tidak terjadi perubahan zat aktif yang dikandungnya.

Saat pengeringan buah balongga dikeringkan dengan menggunakan oven

pada suhu 60˚ agar tidak merusak senyawa metabolit.

Ekstraksi buah balongga (Cucumis melo L. forma agrestis

(Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes) menggunakan metode maserasi.

Menurut Tiwari, dkk (2011) proses ekstraksi dilakukan selama lima hari

pada temperature kamar dan terlindungi dari cahaya dengan sesekali

pengadukan. Metode maserasi dipilih karena alat yang digunakan

sederhana dan dalam prosesnya tanpa mengalami pemanasan sehingga

dapat menghindari rusaknya senyawa-senyawa yang bersifat termolabil.

53
 Buah balongga yang digunakan sebanyak 500 gram dengan pelarut

etanol 96%, sebanyak 3.750 mL. Pelarut etanol 96% merupakan pelarut

yang bersifat universal yang dapat melarutkan senyawa polar maupun

nonpolar sehingga diharapkan senyawa metabolit sekunder yang terdapat

di dalam buah balongga dapat tertarik kedalam pelarut. Selain itu etanol

96% dapat menghasilkan ekstrak yang lebih kental. Hasil dari maserasi

ekstrak buah balongga di evaporator pada temperatur 78°C selama 5 jam

agar tidak merusak senyawa bioaktif yang terkandung dalam sampel serta

untuk memperoleh ekstrak kental.

Bakteri memerlukan nutrisi, sumber energi dan kondisi lingkungan

tertentu untuk pertumbuhan. Menurut Radji (2011)) media NA (Nutrien

agar) adalah media yang umum untuk pertumbuhan bakteri karena media

ini mengandung karbohidrat dan glukosa dalam jumlah yang cukup

sehingga baik untuk pertumbuhan mikroba. Media NA dimasukkan

kedalam autoklaf yang bertujuan untuk mensterilkan media. Selanjutnya

sampel tersebut diuji terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis dengan

menggunakan metode Sumuran agar.

Staphylococcus epidermidis merupakan bakteri uji gram positif dan

menjadi anggota flora normal pada kulit, yang dapat menyebabkan infeksi

ringan yang disertai dengan pembentukan abses. Pada kondisi normal

bakteri ini tidak bersifat patogen tetapi bila terjadi perubahan kondisi kulit,

maka bakteri tersebut berubah menjadi invasive. Untuk kontrol positif

yang digunakan yaitu Tetrasiklin obat ini merupakan antibiotik

54
bakteriostatik berspektrum luas yang menghambat sintesis protein.

Sedangkan kontrol negatif yang digunakan yaitu propylenglikol menurut

Barel dkk (2001) propylenglikol digunakan secara luas dalam kosmetik

dan industri farmasi sebagai pelarut dan membawa bahan-bahan larut dan

yang tidak larut dalam air, pengekstrak dan preservative.

Senyawa bioaktif yang diduga terdapat pada ekstrak yaitu

flavonoid, saponin dan tanin. Tetapi senyawa yang diduga paling aktif

dalam ekstrak adalah flavonoid. Menurut Sabir (2005) disebutkan bahwa

flavonoid menyebabkan terjadinya kerusakan permeabilitas dinding sel

bakteri, mikrosom dan lisosom sebagai interaksi antara flavonoid dengan

DNA bakteri. Adapun menurut Naim (2004), flavonoid memiliki sifat

lipofilik sehingga dimungkinkan akan merusak membrane sel bakteri.

Hasil pengukuran zona hambat ekstrak buah balongga terhadap

pertumbuhan Staphylococcus epidermidis dapat dilihat pada tabel berikut.

Tabel 4. Rata-rata luas zona hambat ekstrak buah balongga (Cucumis melo L.
forma agrestis (Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes) terhadap bakteri Staphylococcus
epidermidis.
Luas zona hambat (mm)
Jumlah Rata-rata
No Perlakuan Replikasi (mm) (mm)
1 2 3
Ekstrak buah
1. 0 0 0 0 0
balongga 30%
Ekstrak buah
2. 2,8 2,5 3 8,3 2,77
balongga 60%
Ekstrak buah
3. 3,58 3,38 3,25 10,21 3,43
balongga 80%
Kontrol positif
4. 19,4 22,1 21 62,5 20,8
(Tetrasiklin)
Kontrol negatif
5. 0 0 0 0 0
(Propylenglikol)
(Sumber: Data Penelitian Tahun 2018)

55
 Pada tabel di atas dapat di lihat konsentrasi 30% tidak memiliki

luas zona hambat, konsentrasi 60% memiliki zona hambat rata-rata 2,77

mm, konsentrasi 80% memiliki luas zona hambat rata-rata 3,43 mm,

kontrol positif memiliki luas zona hambat 20,8 mm dan kontrol negatif

tidak memiliki luas zona hambat terhadap pertumbuhan bakteri

Staphylococcus epidermidis. Pada ekstrak buah balongga konsentrasi 60%

dan 80% efektif menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus

epidermidis.

Menurut Pradana (2011) tingkat penghambatan pertumbuhan

bakteri jika zona hambat kurang dari 0-3 mm maka tingkat

penghambatannya dikategorikan lemah, 5-10 mm dikategorikan sedang,

10-20 mm dikategorikan kuat dan lebih dari 20 mm dikategorikan sangat

kuat. Dengan demikian ekstrak buah balongga pada konsentrasi 30% dan

60% dikategorikan lemah sedangkan pada konsentrasi 80% dikategorikan

sedang.

Grafik Luas Rata-rata Zona Hambat

Luas rata-rata zona hambat

4
3,5
3
2,5 Rata-rata
2
1,5
1
0,5
0
Konsentrasi 30% Konsentrasi 60% Konsentrasi 80%

Gambar 6. Grafik rata-rata luas zona hambat tiap perlakuan pada grafik diatas
terdapat perbedaan rata-rata antar perlakuan.

56
 Berdasarkan uraian di atas dapat dilihat bahwa ekstrak buah

balongga pada konsentrasi 80% memiliki zona hambat paling besar

terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis dan konsentrasi kecil adalah

konsentrasi 60% hasilnya digambarkan dalam grafik pada di atas terdapat

perbedaan rata-rata antara perlakuan konsentrasi 30%, 60% dan

konsentrasi 80%. Hal ini dipengaruhi oleh konsentrasi sampel, dimana

semakin tinggi konsentrasi sampel maka semakin besar luas daya hambat

yang dihasilkan terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus

epidermidis, sebaliknya makin rendah konsentrasi yang digunakan maka

semakin kecil pula luas zona hambat yang dihasilkan.

Untuk melihat perbedaan rata-rata yang nyata dari ketiga

konsentrasi ekstrak buah balongga dengan melihat pertumbuhan bakteri

Staphylococcus epidermidis maka dilakukan uji anova.

Tabel 4. Hasil uji anova daya hambat ekstrak buah balongga (Cucumis melo L.
forma agrestis (Naudin) W.J.de Wilde & Duyjfes) terhadap Staphylococcus
epidermidis.
Sum of Squares Df Mean Square F Sig.
Between
922.287 4 230.572 596.008 .000
Groups
Within
3.869 10 .387
Groups
Total 926.155 14

Berdasarkan hasil uji anova di atas dari ekstrak buah balongga

dengan konsentrasi 30%, 60% dan 80% memiliki perbedaan rata-rata yang

nyata (signifikan) dalam menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus

epidermidis. Hal ini dapat pula dilihat pada nilai sig/α < 0,05 dengan nilai

(.000).

57
 Apabila dalam ANOVA diperoleh hasil yang berbeda nyata, maka

analisis dilanjutkan dengan Uji Beda Nyata Terkecil (BNT) pada taraf 5 %

(Gomes, 1995). Uji BNT bertujuan untuk membandingkan antarkelompok

perlakuan secara statistik. Dilihat pada lampiran 8, uji BNT pada ekstrak

buah balongga 30% terhadap 60% berbeda, ekstrak 30% terhadap 80%

berbeda dan 60% terhadap ekstrak buah balongga 80% tidak terdapat

perbedaan yang signifikan karena nilai uji BNT lebih besar dari nilai

probabilitasnya (0,238 > 0,05). Meskipun di lihat dari nilai rata-rata uji daya

hambat pada ekstrak buah balongga 60% terhadap ekstrak buah balongga

80% memiliki perbedaan, tetapi secara statistik hampir tidak terdapat

perbedaan diantara keduanya.

58
 BAB V

PENUTUP

A. Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan dapat disimpulkan bahwa:

1. Ekstrak buah balongga konsentrasi 60% dan 80% efektif menghambat

pertumbuhan bakteri Staphylococcus epidermidis.

2. Ekstrak buah balongga untuk konsentrasi 30% tidak memiliki daya hambat,

pada konsentrasi 60% memiliki daya hambat rata-rata 2,77 mm, dan pada

konsentrasi 80% memiliki daya hambat rata-rata 3,43 mm dalam

menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus epidermidis.

3. Ekstrak buah balongga dengan konsentrasi 30%, 60% dan 80% memiliki

perbedaan yang signifikan dalam menghambat pertumbuhan bakteri

Staphylococcus epidermidis.

B. Saran

Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan maka penulis

menyarankan:

1. Diharapkan peneliti selanjutnya dapat memformulasikan ekstrak buah

balongga dalam bentuk sediaan.

2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan menggunakan mikroba uji

yang berbeda.

59
 DAFTAR PUSTAKA

Arifianti, L, dkk, 2014, Pengaruh Jenis Pelarut Pengekstraksi Terhadap Kadar

Sinensetin dalam Ekstrak Daun Orthosiphon stamineus Benth, Dapartemen
Farmakognosi dan Fitokimia, Fakultas Farmasi. Universitas Airlangga.

Arifulloh. 2013, Ekstraksi Senyawa Likopen dari Buah Tomat (Lycopersicum

esculentum Mill) dengan Berbagai Komposisi Pelarut. Skripsi, Universitas
Jember, Jember.
Departemen Farmakologi dan Teraupetik FK UI 2007, Farmakologi dan Terapi,
Edisi 5, Bagian Farmakologi FK UI, Jakarta.
Dapertemen Kesehatan 1979, Farmakope Indonesia, jilid III, Depertemen
Kesehatan, Jakarta.
Dapertemen Kesehatan 1986, Sediaan Gelanik. Depertemen Kesehatan, Jakarta.
Dapertemen Kesehatan 2000, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat,
Dapertemen Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta.

Djide, M.N. Sartini, kadir, S.H. 2008, Analisis Mikrobiologi Farmasi,

Laboratorium Mikrobiologi Farmasi Indonesia Vol.4 No.4. Universitas
Hasanuddin, Makassar

Dwidjoseputro, D. 1994, Dasar-Dasar Mikrobiologi, Djambatan, Jakarta.

Fathnur, S. 2017, Metodologi Penelitian Farmasi Komunitas dan Eksperimental,

Penerbit Deepublish, Yogyakarta.

Gavin, J.J. 1957, “Microbiological Process Report, Analytical Microbiology, Vol.

V; 25-33.
Gritter, R J., J M Bobbitt, A E Schwarting. 1991, Pengantar Kromatografi.
Penerbit ITB, Bandung.

Gunawan, S.G(ed). 2012, Farmakologi dan Terapi, edisi 5, UI Press, Jakarta.

Gomez, 1995, Prosedur statistik untuk penelitian pertanian,EdisiKedua.,
Penerjemah: Endang samsudin, Justika S. Baharsyah, UIPress, Jakarta.
Hanani, E. 2015, Analisis Fitokimia, EGC, Jakarta.

Harbone J B. 1987, Metode Fitokimia, Penerbit ITB, Bandung.

Harni, B. 2015, Wawasan Edukasi Perbandingan Ganda. Tersedia di:

http://www.wawasan-edukasi.web.id/2015/10/uji-perbandingan-ganda.html
(Diakses, 20 Oktober 2015).

60
Ibrahim, A.M. 2013,“Uji Efektifitas Ekstrak Daun Sirih Hijau (Piper betle Linn)
terhadap Pertumbuhan Bakteri Streptococcus viridians dengan Metode Disc
Diffusion, Skripsi, S.Ked., Fakultas kedokteran dan Ilmu Kesehatan, UIN
Syarif Hidayatullah, Jakarta.

Jawetz, Melnick. 2005, Mikrobiologi Kedokteran, EGC, Jakarta.

Kusmayanti dan Agustin. 2007, “Uji Aktivitas Senyawa Antibakteri dari

Mikroalga Porphyridium cruentum, ISSN: 1412-033 X, Vol. 8 No.1, 48-53.
Ludya, H.Br.T., Putri, R.N., Abdillah, I.N. 2017, “Pengaruh Ekstrak Buah Timun
Suri (Cucumis sativus L.) sebagai Antibakteri Alami dalam Menghambat
Pertumbuhan Enterococcus faecalis, Journal Caninus Denstistry Vol 2.

Ma‟sum J., isnaini, R.P., Annuryanti. 2014, “Perbandingan Aktivitas Antioksidan

Ektrak Aseton Tomat Segar dan Pasta Tomat terhadap 1,1-Diphenyl-2-
Picrylhidrazyl (DPPH). Jurnal Farmasi dan Ilmu Kefarmasian Indonesia.
Fakultas Farmasi Universitas Airlangga. Vol 1 no.2.
Monoai, F. (2016), Pengaruh Cara Pengeringan Terhadap Mutu Simplisia
Sambiloto. Bull.Littro. 17 (1), 1-5.
Mukhriani. 2014. Ekstraksi Pemisahan Senyawa dan Identifikasi Senyawa Aktif.
Jurnal Kesehatan Vol.VII. No.236.
Naim, R. 2004, senyawa Antimikroba dari tanaman (Online). Tersedia:
http://www. Kompas.com/kompas-cetak/0409/15/sorotan/1265264.htm (20
Juli 2008).
Nilsson., Lars., Flock., Pei., Lindberg., Guss. 1998, A Fibrinogen-Binding Protein
of Staphylococcus epidermidis, Infection and Immunity, 66 (6): 2.666-2.673.
Notoatmodjo, S. 2012, Metodologi Penelitian Kesehatan, Rineka Cipta, Jakarta.
Pelczar dan Chan, 1986, Dasar-Dasar Mikrobiologi, Jilid 1, UI Press, Jakarta.

Prabawati. 2008, Tekonologi Pasca Panen dan Teknik Buah Pisang. Penyunting.
Wisnu Broto. Balai Besar Penerbit dan Pengembangan Pertanian.

Pradana, et al. 2013, Uji Daya Hambat Ekstrak Kulit Batang Rhizophora
mucronata Terhadap Pertumbuhan Bakteri Aeromonashydrophila,
Streptococcus agalactiae dan Jamur Saprolegnia sp Secara In Vitro.
Departemen Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Sumatra Utara
Pramasanti. 2008, Teknik Pembuatan Kultur Media Bakteri, Balai Penelitian.
Veteriner. Bogor.

61
Pratiwi, A. 2017, „Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Ceplukan
(Physalis angulata L.) Terhadap Bakteri Staphylococcus epidermidis, Karya
Tulis Ilmiah, Amd.Farm, Akademi Farmasi Bina Husada, Kendari.

Pratiwi, S.T. 2008, Mikrobiologi Farmasi, Erlangga Medical series, Jakarta.

Putri M A., Diar, H., Nety, K. 2015, “Pengembangan Metode Analisis Antibiotik
Tetrasiklin dalam Hati Ayam Menggunakan Kromatografi Cair Kinerja
Tinggi (KCKT), Prodi Farmasi. Fakultas MIPA Unisba, Bandung.

Radji, M. 2011, Buku Ajar Mikrobiologi Panduan Mahasiswa Farmasi dan

Kedokteran, Penerbit Buku Kedokteran, EGC, Jakarta.

Raina. 2011, Tanaman Obat Untuk Kesehatan, Citra Pustaka, Yogyakarta.

Retno. 2010, “Pemanfaatan Ekstrak Sereh Sebagai Alternatif Antibakteri

Staphylococcus epidermidis Pada Deodoran Parfum Spray, FMIPA,
Yogyakarta.

Rowe, R.C. Paul J.S, Sian C.O, 2009, Handbook of pharmaceutical Excipients:
fifth edision, Pharmaceutical Press, USA.

Sabir, A. 2005, Uji Aktivitas Antibakteri Flavonoid Propolis Trigona sp Terhadap

Bakteri Streptococcus mutans (in vitro), Majalah Kedokteran Gigi. 38, (3),
135-141.

Sebastian, P., Schaefer, H., Ian, R. H., Telfordc., Susanne, S., Rennera. 2010,
Cucumber (Cucumis sativus) and melon (Cucumis melo) have numerous
wild relatives in Asia and Australia, and the sister species of melon is from
Australia, Department of Biology, University of Munich, Germany;
Organismic and Evolutionary Biology, Harvard University, Cambridge, and
School of Environmental and Rural Science, University of New England,
Armidale NS, Australia.

Setiabudy dan Gan.1955, Antimikroba dalam Farmakologi dan Terapi, edisi 4,

Gaya baru, Jakarta.

Sheikh, M., Abdullah R.M., M.K., Meghavanshi and Irshad, M. 2012, “Studies on
Some Plant Extract for Their Antimicrobial Potential Against Certain
Pathogenic Microorganisms, American Journal of Plant Sciences. 3. 209-
213.

Sinaga, E. 2004, Infeksi Nosokomial dan Staphylococcus epidermidis. EGC,

Jakarta.

62
Suriaman, E., Permana A.S.H., Warman M. 2016, “Aktivitas Antibakteri Ekstrak
Etanol Buah Mentimun (Cucumis sativus Linn) Terhadap Salmonella typhi
dan Bacillus cereus Secara In Vitro, Stigma Journal of science 9(1).

Thakur, H.A. 2014, Antimicrobial and Antifungi Activity of Cucumis melo L.

(Cucurbitaceae) and Pergularia daemia frosk. (Asclepiadaceae) An
Ethomedicinal Plants. International Journal of Bioassays Science College,
Nashik 422 005, Maharashtra State, India.

Tiwari, P. Kumar, B. Kaur, G. Kaur, H. 2011, Phytochemical Screening and

Extraction: A Review. Internationale Pharmaceutica Sciencia. Vol. 1.
Issue.1.

Tjay dan Rahardja. 2007, Obat-obat Penting, Edisi ketiga, Elex Media
Komputindo, Jakarta.
Voigt. 1994, Teknologi Farmasi, UGM Press, Yogyakarta.

63
 LAMPIRAN

Lampiran 1. Perhitungan Konsentrasi Sampel

A. Konsentrasi 30% dalam 10 mL
b
= v x 10
30
= 100 x 10
= 3 gram.

B. Konsentrasi 60% dalam 10 mL

b
= v x 10
60
= x 10
100
= 6 gram.

C. Konsentrasi 80% dalam 10 mL

b
= v x 10
80
= 100 x 10
= 8 gram.

64
Lampiran 2. Perhitungan Pelarut Ekstrasi
10 𝐵𝑎𝑔𝑖𝑎𝑛 𝑆𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 1
=
7,5 𝐵𝑎𝑔𝑖𝑎𝑛 𝐶𝑎𝑖𝑟𝑎𝑛 𝑃𝑒𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡 7,5

Bobot sampel yang ditimbang = 500 gram

Pelarutnya = 3.750 mL

500 gram x 7,5 = 3.750 mL (pelarut yang digunakan).

𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑘𝑒𝑛𝑡𝑎𝑙

Rendamen Ekstrak = 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 x 100%
𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 𝑘𝑒𝑟𝑖𝑛𝑔

50 𝑔𝑟𝑎𝑚
= 500 𝑔𝑟𝑎𝑚 x 100%

= 10 %.

65
Lampiran 3. Perhitungan Media NA

NA (Nutrien agar) 23 gram dalam 1 liter

Dibuat dalam 200 mL

𝑁𝐴 𝑑𝑎𝑙𝑎𝑚 1 𝑙𝑖𝑡𝑒𝑟 (𝑔𝑟𝑎𝑚 )
NA = x volume yang akan dibuat (mL)
1.000 𝑚𝐿

23 𝑔𝑟𝑎𝑚
= 1.000 𝑚𝐿 x 200 mL = 4,6 gram.

66
Lampiran 4. Pembuatan Kontrol positif 1% dalam 100 mL
𝑏
1% = x 100%
10 𝑚𝐿

1 𝑥 10
b = 100

10
b = 100

b = 0,1 gram

Timbang setara
𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡
Bobot rata-rata = 10

6,3
= = 0,63 gram
10

𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑟𝑎𝑡𝑎 − 𝑟𝑎𝑡𝑎

Yang ditimbang = x kesetaraan
𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑒𝑡𝑖𝑘𝑒𝑡

630 x 0,1
= 250 mg

63
= 250 mg

= 0,252 gram.

67
Lampiran 5. Perhitungan uji daya hambat

A. Konsentrasi 30%

B. Konsentrasi 60%

1. Perlakuan 1

AB −ab 1,40 − 0,8 0,6

a. Perhitungan 1 : = = = 0, 3 cm = 3 mm
2 2 2

CD −cd 1,32 − 0,8 0,52

b. Perhitungan 2 : = = = 0,26 cm = 2,6 mm
2 2 2

EF−ef 1,36 − 0,8 0,56

c. Perhitungan 3 : = = = 0,28 cm = 2,8 mm
2 2 2

perhitungan 1 + perhitungan 2 +(perhitungan 3)

Zona hambat = 3

3 + 2,6 + 2,8
= 3

8,4
= 3

= 2,8 mm

2. Perlakuan 2

AB −ab 1,23 − 0,8 0,43

a. Perhitungan 1 : = = = 0, 215 cm = 2,15 mm
2 2 2

CD −cd 1,31 − 0,8 0,51

b. Perhitungan 2 : = = = 0,255 cm = 2,55 mm
2 2 2

EF−ef 1,36 − 0,8 0,56

c. Perhitungan 3 : = = = 0,28 cm = 2,8 mm
2 2 2

perhitungan 1 + perhitungan 2 +(perhitungan 3)

Zona hambat = 3

2,15 + 2,55 + 2,8

= 3

7,5
= 3

= 2,5 mm

68
 3. Perlakuan 3

AB −ab 1,47 − 0,8 0,67

a. Perhitungan 1 : = = = 0, 35 cm = 3,35 mm
2 2 2

CD −cd 1,32 − 0,8 0,52

b. Perhitungan 2 : = = = 0,26 cm = 2,6 mm
2 2 2

EF−ef 1,41 − 0,8 0,61

c. Perhitungan 3 : = = = 0,305 cm = 3,05mm
2 2 2

perhitungan 1 + perhitungan 2 +(perhitungan 3)

Zona hambat =
3

3,35 + 2,6 + 3,05

= 3

9
=3

= 3 mm

perhitungan 1 + perhitungan 2 +(perhitungan 3)

Rata – rata zona hambat = 3

2,8 + 2,5 +3
= 3

8,3
= 3

= 2,77 mm

C. Konsentrasi 80%

1. Perlakuan 1

AB −ab 1,60 − 0,8 0,8

a. Perhitungan 1 : = = = 0, 4 cm = 4 mm
2 2 2

CD −cd 1,46 − 0,8 0,66

b. Perhitungan 2 : = = = 0,33 cm = 3,3 mm
2 2 2

EF −ef 1,49 − 0,8 0,69

c. Perhitungan 3 : = = = 0,345 cm = 3,45 mm
2 2 2

perhitungan 1 + perhitungan 2 +(perhitungan 3)

Zona hambat = 3

4 + 3,3 + 3,45
=
3

69
 10,75
= 3

= 3,58 mm

2. Perlakuan 2

AB −ab 1,65 − 0,8 0,85

a. Perhitungan 1 : = = = 0, 425 cm = 4,25 mm
2 2 2

CD −cd 1,34 − 0,8 0,54

b. Perhitungan 2 : = = = 0,27 cm = 2,7 mm
2 2 2

EF−ef 1,44 − 0,8 0,64

c. Perhitungan 3 : = = = 0,32 cm = 3,2 mm
2 2 2

perhitungan 1 + perhitungan 2 +(perhitungan 3)

Zona hambat =
3

4,25 + 2,7 + 3,2

= 3

10,15
= 3

= 3,38 mm

3. Perlakuan 3

AB −ab 1,40 − 0,8 0,67

a. Perhitungan 1 : = = = 0, 3 cm = 3 mm
2 2 2

CD −cd 1,48 − 0,8 0,68

b. Perhitungan 2 : = = = 0,34 cm = 3,4 mm
2 2 2

EF−ef 1,47 − 0,8 0,67

c. Perhitungan 3 : = = = 0,335 cm = 3,35 mm
2 2 2

perhitungan 1 + perhitungan 2 +(perhitungan 3)

Zona hambat = 3

3 + 3,4 + 3,35
= 3

9,75
= 3

= 3,25 mm

70
 perhitungan 1 + perhitungan 2 +(perhitungan 3)
Rata – rata zona hambat = 3

3,58 + 3,38 +3,25

= 3

10,21
= 3

= 3,40 mm

D. Kontrol positif (Tetracycline 250 mg)

1. Perlakuan 1

AB −ab 4,73 − 0,8 3,93

a. Perhitungan 1 : 2
= 2
= 2
= 1,96 cm = 19,6 mm

CD −cd 4,52 − 0,8 3,72

b. Perhitungan 2 : = = = 1,86 cm = 18,6 mm
2 2 2

EF−ef 4,91 − 0,8 4,11

c. Perhitungan 3 : = = = 2,0 cm = 20 mm
2 2 2

perhitungan 1 + perhitungan 2 +(perhitungan 3)

Zona hambat = 3

19,6 + 18,6 + 20
= 3

58,2
= 3

= 19,4 mm

2. Perlakuan 2

AB −ab 5,1 − 0,8 4,3

a. Perhitungan 1 : = = = 2,15 cm = 21,5 mm
2 2 2

CD −cd 5,6 − 0,8 4,8

b. Perhitungan 2 : = = = 2,4 cm = 24 mm
2 2 2

EF−ef 5,0 − 0,8 4,2

c. Perhitungan 3 : = = = 2,1 cm = 21 mm
2 2 2

perhitungan 1 + perhitungan 2 +(perhitungan 3)

Zona hambat = 3

21,5 + 24 + 21
= 3

71
 66,5
= 3

= 22,1 mm

3. Perlakuan 3

AB −ab 5,0 − 0,8 4,2

a. Perhitungan 1 : = = = 2,1 cm = 21 mm
2 2 2

CD −cd 5,0 − 0,8 4,2

b. Perhitungan 2 : = = = 0,21 cm = 21 mm
2 2 2

EF−ef 5,0 − 0,8 0,42

c. Perhitungan 3 : = = = 0,21 cm = 21 mm
2 2 2

perhitungan 1 + perhitungan 2 +(perhitungan 3)

Zona hambat =
3

21+ 21+21
= 3

63
= 3

= 21 mm

perhitungan 1 + perhitungan 2 +(perhitungan 3)

Rata – rata zona hambat = 3

19,4 + 22,1 +21

= 3

62,5
= 3

= 20,83 mm

72
Lampiran 6. Dokumentasi Kegiatan Penelitian

a. Penyiapan Sampel

(Pemetikan) (Buah balongga)

(pencucian dengan air mengalir) (Setelah pemotongan buah balongga)

(Pengeringan)

73
b. Pembuatan Ekstrak buah balongga dengan Metode Maserasi

(Penimbangan) (Maserasi)

(Penyaringan) (Penguapan dengan rotavapor)

(Ekstrak kental)

74
c. Pembuatan Media Nutrien Agar (NA)

(Media NA) (Penimbangan media) (Pengadukan di magnetic stirrer)

d. Sterilisasi alat dan media

(Autoklaf) (Oven)

e. Penimbangan sampel dengan konsentrasi 30%, 60% dan 80% serta kontrol

positif 1% dalam 2 mL aquadest.

(Konsentrasi 30%) (Konsentrasi 60%)

75
 (Konsentrasi 80%) (Kontrol porsitif)

f. Suspensi bakteri Staphylococcus epidermidis

g. Pengujian daya hambat

76
h. Hasil pengujian daya hambat

30%

-
+ 60%

80%

(Replikasi I)

30%

- + 60%

80%

(Replikasi II)

77
 30%

-
+
60%

80%

(Replikasi III)

78
Lampiran 6. Dokumentasi Kegiatan Penelitian

a. Penyiapan Sampel

(Pemetikan) (Buah balongga)

(pencucian dengan air mengalir) (Setelah pemotongan buah balongga)

(Pengeringan)

79
b. Pembuatan Ekstrak buah balongga dengan Metode Maserasi

(Penimbangan) (Maserasi)

(Penyaringan) (Penguapan dengan rotavapor)

(Ekstrak kental)

80
c. Pembuatan Media Nutrien Agar (NA)

(Media NA) (Penimbangan media) (Pengadukan di magnetic stirrer)

d. Sterilisasi alat dan media

(Autoklaf) (Oven)

e. Penimbangan sampel dengan konsentrasi 30%, 60% dan 80% serta kontrol

positif 1% dalam 2 mL aquadest.

(Konsentrasi 30%) (Konsentrasi 60%)

81
 (Konsentrasi 80%) (Kontrol porsitif)

f. Suspensi bakteri Staphylococcus epidermidis

g. Pengujian daya hambat

82
h. Hasil pengujian daya hambat

30%

-
+ 60%

80%

(Replikasi I)

30%

- + 60%

80%

(Replikasi II)

83
 30%

-
+
60%

80%

(Replikasi III)

84
Lampiran 7. Hasil Analisis Anova dengan SPSS 20,0

Descriptives

Daya Hambat

N Mean Std. Std. Error 95% Confidence Minimu M Between-

Deviation Interval for Mean m a Component

Lower Upper x Variance

Bound Bound i
m
u
m

Ekstrak 30% 3 .0000 .00000 .00000 .0000 .0000 .00 .00

Ekstrak 60% 3 2.7667 .25166 .14530 2.1415 3.3918 2.50 3.00

Ekstrak 80% 3 3.4033 .16623 .09597 2.9904 3.8163 3.25 3.58

kontrol+ 3 20.8333 1.35769 .78387 17.4606 24.2060 19.40 22.10
kontrol - 3 .0000 .00000 .00000 .0000 .0000 .00 .00
Total 15 5.4007 8.13351 2.10006 .8965 9.9049 .00 22.10
Fixed
.62198 .16059 5.0428 5.7585
Mo Effects

del Random
3.92064 -5.4848 16.2861 76.72827
Effects

Test of Homogeneity of Variances

Daya Hambat

Levene Statistic df1 df2 Sig.

4.876 4 10 .219

ANOVA

DayaHambat

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 922.287 4 230.572 596.008 .000
Within Groups 3.869 10 .387
Total 926.155 14

85
Lampiran 8. Hasil Uji BNT

Analisis Uji Lanjutan BNT dengan SPSS 20,0

Multiple Comparisons
(I) (J) Mean Std. Sig. 95% Confidence Interval
perlakuan perlakuan Difference (I- Error
Lower Upper
J)
Bound Bound
Ekstrak 60% -2.76667* .50785 .000 -3.8982 -1.6351
*
Ekstrak Ekstrak 80% -3.40333 .50785 .000 -4.5349 -2.2718
30% kontrol+ -20.83333* .50785 .000 -21.9649 -19.7018
kontrol - .00000 .50785 1.000 -1.1315 1.1315
Ekstrak 30% 2.76667* .50785 .000 1.6351 3.8982
Ekstrak Ekstrak 80% -.63667 .50785 .238 -1.7682 .4949
60% kontrol+ -18.06667* .50785 .000 -19.1982 -16.9351
kontrol - 2.76667* .50785 .000 1.6351 3.8982
Ekstrak 30% 3.40333* .50785 .000 2.2718 4.5349
Ekstrak Ekstrak 60% .63667 .50785 .238 -.4949 1.7682
80% kontrol+ -17.43000* .50785 .000 -18.5615 -16.2985
kontrol - 3.40333* .50785 .000 2.2718 4.5349
Ekstrak 30% 20.83333* .50785 .000 19.7018 21.9649
Ekstrak 60% 18.06667* .50785 .000 16.9351 19.1982
kontrol+
Ekstrak 80% 17.43000* .50785 .000 16.2985 18.5615
kontrol - 20.83333* .50785 .000 19.7018 21.9649
Ekstrak 30% .00000 .50785 1.000 -1.1315 1.1315
Ekstrak 60% -2.76667* .50785 .000 -3.8982 -1.6351
kontrol - *
Ekstrak 80% -3.40333 .50785 .000 -4.5349 -2.2718
kontrol+ -20.83333* .50785 .000 -21.9649 -19.7018
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

86
Lampiran 9. Grafik Analisis SPSS

Dari grafik di atas menunjukan posisi λ berada pada tengah data

sehingga membentuk transformasi grafik yang normal dengan tidak
membentuk posisi λ menceng ke kiri atau ke kanan.

87
Lampiran 10. Hasil Determinasi Buah Balongga

88
Lampiran 11. Hasil Skrining Fitokimia Buah Balongga

89
Lampiran 12. Surat Keterangan Pelaksanaan Penelitian

90
91
92
93