A.2.

2 Size-Exclusion Chromatography

Size exclusion chromatography (SEC) merupakan metode kromatografi yang menggunakan

partikel berpori untuk memisahkan molekul dengan ukuran yang berbeda. Metode ini dapat
digunakan untuk pemurnian protein, dimana perbedaan ukuran dari protein menjadi dasar dari
proses pemisahan. Ukuran protein tergantung pada jumlah asam amino yang dikandungnya. Bahan
dari kolom kromatogafi terdiri dari matriks berpori , matriks berpori tersebut dapat medifusikan
protein berdasarkan perbedaan ukurannya. Protein yang lebih kecil akan terjerat di dalam material
berpori dan protein yang lebih besar tidak terjerat dan akan melewati matriks berpori. Oleh karena
itu pada proses elusi,molekul yang lebih besar akan menjadi yang pertama dielusi, sedangkan
molekul yang terkecil akan terakhir dielusi.

A.2.3 Kromatografi Afinitas

Kromatografi afinitas adalah metode pemisahan campuran senyawa berdasarkan interaksi

spesifiknya .Prinsip Kromatografi afinitas pada pemurnian protein adalah molekul yang memiliki
afinitas tinggi terhadap protein merupakan molekul yang dapat berinteraksi dengan protein.
Molekul-molekul ini dapat berupa co-faktor, substrat yang dimodifikasi,inhibitor atau karbohidrat.
Strategi pemurnian ini digunakan sebagian besar pada tahap akhir di mana protein sudah relatif
murni, dan metode ini diperlukan untuk pemurnian tambahan yang lebih spesifik.Bagian afinitas
atau molekul digabungkan ke matriks dan digunakan sebagai umpan untuk memancing protein
yang memiliki afinitas tinggi . Dalam kondisi tertentu peningkatan elusi protein dapat dilakukan
dengan menambahkan garam atau dengan peningkatan jumlah molekul afinitas itu sendiri.