REVIEW JURNAL

Development of Oil in Water Microemulsions for The Oral Delivery of

Amphotericin B

Disusun Oleh:

1. Shinta Kartika Eka S (11161110)

2. Bena Monita Ryjki (11161130)
3. Guntur Dewantoro (11161140)

Kelas 2FA3

Sekolah Farmasi Bandung

Jl. Soekarno Hatta No. 754 Cibiru, Bandung – Jawa Barat

 1. PENDAHULUAN

Amphotericin B (AmB) adalah antibiotik polyene dengan anti-ampuh jamur dan

aktivitas leishmanicidal (Hartsel dan Bolard, 1996; Ibrahim et al., 2012). Struktur kimianya
ditandai oleh suatu lakton yang glikosilasi dengan suatu daerah polihroksil amfifilik,
kromofor heptana terkonjugasi dan pasangan ion amphoteric (Gbr. 1). Sebagai konsekuensi
dari kedua sisi apolar dan polar dari lac nada dering dan karena adanya karboksil dan amina
terionisasi kelompok, AmB molekul menyajikan baik amfoter dan amphiphilic perilaku
(Damasceno et al., 2012). Akibatnya, AmB kurang baik dalam media berair dan dalam
banyak pelarut organik (Torrado et al., 2008). Kelarutan yang rendah ini menyebabkan
terbatasnya bioavailabilitas dan permeabilitas brane, yang menghambat pengembangan
formulasi untuk rute oral yang merupakan rute yang paling nyaman dan dapat diterima untuk
pasien.
Di sisi lain, formulasi parenteral lipid efektif AmB punya telah dikembangkan dan
dipasarkan, tetapi mereka memiliki beberapa keterbatasan serius seperti ketidaknyamanan
dan kompleksitas intravena administrasi, yang kejadian akut serius efek samping infus dan
biaya tinggi yang menimbulkan dampak penting penghalang tant untuk pasien di negara
berkembang (Wasan et al., 2009).
Baru-baru ini, formulasi berbasis lipid telah banyak diinvestigasi. diikat sebagai
pendekatan yang sesuai untuk meningkatkan bioavailabilitas obat yang sulit larut setelah
pemberian oral (Han et al., 2009).
Ketika dimasukkan ke dalam sistem ini, molekul aktif diyakini tetap dalam larutan
sepanjang periode dalam gas- saluran cacing usus (Pouton, 2006). Selain itu, penyerapan obat
dapat ditingkatkan dengan kehadiran lipid sebagai akibat dari stimulasi sekresi empedu dan
pankreas oleh kantung empedu, peningkatan waktu tinggal lambung dan lain-lain (Dahan dan
Hoffman, 2008).
Sejak mikroemulsi (ME) mampu menggabungkan berbagai molekul obat, meningkatkan
solubilisasi dan bioavailabilitas mereka, dan mengurangi toksisitas mereka, mereka
menjanjikan sistem pengiriman untuk pemberian oral molekul lipofilik, seperti AmB (Fanun,
2012; Pestana et al., 2008). Oleh karena itu, tujuan dari pekerjaan ini adalah untuk
mengembangkan oil-in-water (O / W) ME berdasarkan rantai panjang dan menengah
trigliserida untuk meningkatkan kelarutan AmB dan memungkinkan penggunaannya oleh
rute oral

2. BAHAN DAN METODOLOGI

a. BAHAN

2.1.1. Chemicals

Sodium hydroxide (NaOH), chloride acid (HCl), amphotericin B (AmB) and HPLC
grade methanol were purchased from Sigma–Aldrich (Saint Quentin Fallavier,
France).

2.1.2. Surfactants

Span 20, Span 80, Span 85, Tween 20, Tween 80 and Tween 85 were purchased from
Sigma–Aldrich (Saint Quentin Fallavier, France).

2.1.3. Lipids
 Capryol 90 (C90), Capryol PGMC (CPGMC), Lauroglycol 90 (L90), Labrafac
lipophile WL 1349 (LWL), Labrafac PG (LPG) and Peceol (Pec) were kindly
supplied by Gattefossé S.A. (Saint-Priest, France). Corn oil and olive oil were
obtained from Sigma–Aldrich (Saint Quentin Fallavier, France).

2.2. Metode

2.2.1. Pemilihan minyak dan surfaktan hidrofilik

Surfaktan nonionik dari seri Tween® (Tween® 20, 80 dan 85) dan lipid ditimbang
dan ditaruh menjadi serangkaian tabung uji screwcap dalam rasio 0,1:0,9 ; 0,2:0,8 ; 0,3:0,7 ;
0,4:0,6 dan 0,5:0,5 (b/b) 1 g per batch, dicampur bersama dalam vortex sepenuhnya. Setelah
itu, 100 liter air suling ditambahkan ke masing-masing campuran minyak-surfaktan dalam
20-25 tetes dengan menggunakan mikropipet. Setelah setiap tetes air ditambahkan, sistem itu
vortexed selama 15 detik pada suhu kamar.
Pengamatan visual dilakukan, dan kejelasan atau kekeruhan dari setiap sampel
dicatat. Surfaktan membentuk sistem yang paling jelas dipilih sebagai surfaktan hidrofilik
yang paling cocok dengan lipid yang diuji.

2.2.2. Pemilihan campuran surfaktan

Surfaktan hidrofilik nonionik dicampur dengan surfaktan lipofilik dari seri Span® dalam
rasio 3: 2, 7: 3, 4: 1, dan 9: 1 (b / b) menghasilkan campuran surfaktan dengan berbagai HLB
di kisaran 9,7-14,4. Kapasitas solubilisasi dari campuran surfaktan dipelajari dengan
menggunakan yang sama metode seperti yang digunakan untuk mempelajari surfaktan lain
secara individual. Dipilih perpaduan surfaktan membentuk sistem yang jelas pada sebagian
besar rasio sebagai campuran yang paling cocok dengan HLB dari lipid yang diuji
2.2.3. Konstruksi diagram fase pseudoternary
Setelah pemilihan campuran surfaktan yang paling sesuai, pseu-doternary diagram fase
dibangun berdasarkan jenis sistem terbentuk ketika campuran lipid dan campuran surfaktan
secara serial dititrasi oleh air diikuti oleh sonication. Sistemnya dicirikan oleh pengamatan
visual seperti yang dijelaskan oleh Mahd et al. (2011) (Tabel 2). Sistem juga dinilai terkait
isotropi mereka dengan mikroskop cahaya terpolarisasi seperti yang dijelaskan dalam Bagian

2.2.4. Persiapan mikroemulsi

Berdasarkan diagram fase pseudoternary, yang paling sesuai dapat rasio minyak, campuran
surfaktan dan air untuk produksi
Mikroemulsi O/W dipilih campuran surfaktan yang dipilih untuk semua formulasi terdiri dari
campuran Tween® 80: Span® 80 di itu berat perbandingan dari 9: 1. SAYA 1, SAYA 2,
SAYA 3 dan SAYA 4 adalah Formulasi AmB-dibongkar sementara ME-AmB 1, ME-AmB
2, ME-AmB 3 dan ME-AmB 4 adalah formulasi AMB-loaded. Semua formulasi memiliki
83,3% air, 1,7% minyak dan 15% dari surfaktan Campur untuk ME 1, ME 3, ME-AmB 1 dan
ME-AmB 3, 3,4% dari minyak dan 13,3% campuran surfaktan untuk ME 2, ME 4, ME-AmB
2 dan ME-AmB 4. Formulasi yang mengandung AmB memiliki 0,08% AmB.
Campuran surfaktan di rasio berat 1: 9 dan 2: 8 dan 5 mL air (Tabel 3). Campuran itu vortex
dan tunduk
sonication di 140 V untuk 60 S (Digital Sonia, Model 450, Branson Ultrasonik SA, Prancis).

2.2.5.Penggabungan obat
Kelebihan AmB ditambahkan ke MEs kosong, dan sistem
divortex selama 2 menit. Setelah diaduk, campuran dibiarkan selama 10, 30 dan 60 menit
dibawah pengadukan magnet pada pH 11 untuk mengevaluasi waktu yang diperlukan untuk
memasukkan AmB ke dalam sistempada 25 ± 0,1 ◦C. Setelah itu, pH dinetralisir. The MEs
disentrifugasi pada 10.000 × g di Hitachi Himac CP-80 Ultracentrifuge (AS) selama 15 menit
untuk menghilangkan kelebihan obat. Supernatan itu pulih dan hati-hati disaring
menggunakan membran 0,22 m. Itu filtrat adalah diencerkan dan larut di metanol untuk itu
kuantitatif analisis AmB oleh HPLC.

2.2.6. Karakterisasi mikroemulsi

2.2.6.1. Droplet ukuran, distribusi dan morfologi hidrodinamik.
Ukuran dan distribusi hidrodinamik droplet dievaluasi oleh dynamic light scattering (DLS)
menggunakan Nano Malvern-Zetasizer ZS (Malvern, Worcestershire, UK). Morfologi tetesan
dipilih O / W ME diamati oleh transmisi elektron microscopy (TEM) menggunakan
mikroskop elektron JEOL 1400 (SamX- Plus, Prancis) dilengkapi dengan resolusi tinggi
CCD Gatan digital kamera (SC1000 Orius, Prancis) dan dioperasikan pada 60 kV sebagai
akselerasinya tegangan erasi.

2.2.6.2. Analisis kuantitatif AmB.

Penggabungan AmB ditentukan oleh kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) menggunakan
modul pemisahan Waters 2690, dengan Waters 2487 detektor absorbansi ganda (Waters,
Guyancourt, Perancis). Fase gerak terdiri dari larutan yang mengandung methanol :air
(80:20).

2.2.6.3. Perilaku rheologi.

Sifat rheologi dari AmB- ME ditentukan menggunakan rheometer

2.2.6.4. Absorpsi dan dichroism melingkar (CD).

Absorbance mea- Surements adalah terbuat oleh menggunakan Sebuah Perkin-Elmer Lambda
11 UV-vis spektrofotometer. Spektrum CD direkam dengan Jasco Dichrograph J-810, dan ∈
(M − 1 cm − 1) adalah molar diferensial Penyerapan koefisien dichroic. Pengukuran
spektroskopi ini adalah terbuat di kamar suhu (sekitar 20 ◦C) Setelah pengenceran di air
hingga konsentrasi AmB akhir 0,3 mg / mL (panjang lintasan dari kuarsa kuvet: 1 cm) untuk
mengevaluasi status agregasi AmB di formulasi

3. HASIL DAN PEMBAHASAN

3.1. Seleksi surfactant
Kontribusi dari kedua hidrofilik dan fragmen hidrofobik dari molekul surfaktan. Umumnya,
surfactants dengan nilai HLB antara 8 dan 20 dapat membentuk O / W ME, sementara W / O
ME terbentuk ketika rentang HLB adalah 4-7 Tween® 80 terbukti menjadi surfaktan
hidrofilik dengankapasitas solubilisasi tertinggi dibandingkan dengan Tween® 20 dan
Tween® 85. Emulator ini memiliki kepala kutub yang sama, tetapi berbeda ekor hidrofobik
(asam laurat, oleat dan oleat, masing-masingdi Tween 20, 80 dan 85). Panjang rantai
hidrofobik ini menentukan interaksi dengan itu minyak tahap (Mosca et Al., 2013).

Menurut diagram fase pseudoternary, beberapa tipe dispersi dapat diproduksi dengan
mencampur C90, CPGMC dan L90 dengan surfaktan memadukan M2 dan M8 diikuti dengan
titrasi dengan air. Misalnya, area besar emulsi, mikroemulsi dan beberapa area kristal cair
yang cukup besar dapat dideteksi juga sebagai area yang lebih kecil dari fase bicontinuous,
krim dan gel (Gambar 2 dan 3).
Baik surfactant memadukan M2 dan M8 mampu menghasilkan glikol ester dari asam kaprilat
tampaknya lebih tepat untuk persiapan emulsi O / W dan mikroemulsi dibandingkan
propilena glikol ester dari asam laurat. Selanjutnya, perilaku diagram fase Salah satu dari
lipid tersebut tidak hanya dipengaruhi oleh nilai HLB dari surfaktan, tetapi juga oleh struktur
co-surfaktan. Studi sebelumnya telah mengamati bahwa secara umum yang paling stabil
emulsi terbentuk ketika dua agen pengemulsi memiliki panjang rantai hidrokarbon yang
sama, seperti kombinasi antara Tween® 80 dan Span® 80, karenadari mereka serupan bahan
kimiastructure (Schmidts et al., 2009). Mahdi dan rekan kerjanya menyatakan itu tinggi
pelarutan kapasitas bisa menjadi diperoleh kapan surfaktan dengan itu nilai HLB terendah
dan tertinggi dicampur. Dalam kasus kami, kami percaya bahwa itu tiga rantai dari oleic Acid
ester diitu molekul dari Span® 85 menghalangi itu interaksi dengan Tween® 80.

3.2. Mikroemulsi karakterisasi

Terlepas dari fase minyak, DLS dan analisis TEM terungkap bahwa ME yang bebas obat dan
yang diisi obat terdiri dari bola tetesan non-agregat dengan ukuran rata-rata sekitar 80 dan
120 nm masing-masing. Peningkatan diameter tetesan ME ini setelah penggabungan AmB
dijelaskan oleh fakta bahwa AmB memiliki sifat permukaan karena perilaku amphiphilic dan
teradsorpsi di antarmuka minyak-air (Franzini et al., 2012; Santos et al., 2012). Indeks
polidispersitas ditunjukkan sekitar 0,25 dan 0,31 untuk diturunkan ME dan AMB-loaded ME,
masing-masing. Ketika kuantitas Amb yang dienkapsulasi diukur dengan HPLC, itu
menunjukkan bahwa penggabungan obat itu tergantung pada fraksi volume fase terdispersi
dan berkisar antara 70% dan 90%. Data ini menyoroti fakta bahwa ME mampu meningkatkan
kelarutan AmB hingga 1000 kali lipat jika dibandingkan dengan kelarutannya dalam air. Hal
ini membuktikan lebih lanjut untuk interaksi yang kuat antara itu hidrofobik AmB molekul).
Lebih tepatnya, ME mempertahankan C90 sebagai fasa minyak pada perbandingan berat 2: 8
(minyak: surfaktan) yaitu perbandingan paling tinggi dari penggabungan AmB.
Penggabungan waktu tidak mempengaruhi jumlah AmB yang dimasukkan, menunjukkan
bahwa asosiasi terjadi dengan cepat lebih dari 10 menit.

3.3. Rheologi
Karakterisasi fisikokimia sistem pengiriman adalah langkah penting dalam proses pra-
formulasi untuk memprediksi kelayakan produk akhir. Di antara parameter untuk
karakterisasi ME, rheology adalah pendekatan mendasar untuk selidiki properti struktural
dan dapatkan informasi yang bermanfaat tidak hanya pada stabilitas sistem tersebut, tetapi
juga pada penanganannya, transportasi penyimpanan dan jalur pipa dari ME (Formariz et al.,
2010;Pal, 2011). Meskipun analisis rheologi menunjukkan bahwa viskositas sangat rendah
untuk semua sampel, tampaknya menurun pada rendah laju geser antara 10−3 dan 10 s −1
dan tetap konstan pada tingkat geser lebih tinggi dari 10 s − 1. Namun, alirannya kurva
mengungkapkan bahwa semua sistem ME menunjukkan hubungan linear-kapal antara
tegangan geser dan laju geser, yang merupakan fitur bahan aliran Newton (Feng et al., 2009).
Hasil ini menegaskan bahwa sampel kami adalah ME yang terputus-putus. Seperti yang
dilaporkan oleh penelitian sebelumnya, ME yang diskontinyu menunjukkan viskositas stant
atas rentang yang lebih luas dari laju geser daripada bicontinuous ME (Acharya and Hartley,
2012). Sebagai akibat dari rendahnya viskositas, sistem tersebut dianggap cocok untuk
pengiriman oral (Lawrence and Rees, 2012).
3.5. Agregat bagian AmB
Untuk menentukan status agregasi molekul AmB setelah dimasukkan ke dalam ME,
formulasi dianalisis dengan circular dichroism dan penyerapan elektronik. Metode ini adalah
yang berguna dan sensitif untuk mengidentifikasi perubahan dalam konformasi AmB (Bolard
et al., 1981). Kehadiran 7 ikatan ganda terkonjugasi dalam molekul ini mengarah ke spektrum
sangat khas antara 300 dan 450 nm, yang bergantung pada perubahan konformasi sebagai
akibat dari asosiasi sendiri dalam air atau hubungannya dengan senyawa lain, seperti lipid
(Boudet dan Bolard, 1979; Espuelas et al., 1998).
Spektra serapan untuk ME pada konsentrasi yang sama dari AmB menunjukkan
puncak pada panjang gelombang yang sama, tetapi dengan intensitas yang berbeda. Selain
itu, puncak pada 318 nm terdeteksi pada intensi yang berbeda. ikatan untuk setiap formulasi.
Hal ini menunjukkan bahwa kehadiran molekul self-associated dari AmB. Jadi, bagian dari
AmB di ME ditunjukkan untuk dikumpulkan. Formulasi yang mengandung CPGMC sebagai
fase minyak pada perbandingan berat 1: 9 (ME-AmB 3) antara minyak untuk campuran
surfaktan menunjukkan proporsi agregat terendah dan proporsi monomer tertinggi.
Spektrumnya tampak sangat mirip dengan AmB dalam methanol. Hasil ini dikuatkan oleh
spectrum CD dari ME.

4. KESIMPULAN
Dari hasil pengamatan menunjukkan bahwa penting untuk memilih surfaktan dan
campuran dari Surfaktan. Tidak hanya kecocokan HLB butuh, tapi juga dengan kesamaan
struktural dengan fasa minyak yang dipilih untuk kestabilan formulasi ME. Campuran
surfaktan terbaik untuk menyediakan O / W ME dengan trigliserida rantai menengah
berdasarkan pada ester caprylic sebagai minyak fase ditunjukkan memiliki nilai HLB sekitar
13.Karena dapat meningkatkan kelarutan AmB hingga 1000 kali lipat dan menunjukkan
reologi yang sesuai untuk pemberian oral.

5. PUSTAKA
Acharya, D.P., Hartley, P.G., 2012. Progress in microemulsion characterization. Curr.
Opin. Colloid Interface Sci. 17, 274–280.
Barwicz, J., Beauregard, M., Tancrède, P., 2002. Circular dichroism study of inter-actions
of Fungizone or AmBisome forms of amphotericin B with human low
density lipoproteins. Biopolymers 67, 49–55.

Bolard, J., Vertut-Croquin, A., Cybulska, B.E., Gary-Bobo, C.M., 1981. Transfer of the
polyene antibiotic amphotericin B between single-walled vesicles of
dipalmi-toylphosphatidylcholine and egg-yolk phosphatidylcholine.
Biochim. Biophys. Acta Biomembr. 647, 241–248.

Boudet, G., Bolard, J., 1979. Interaction of the polyene antibiotic amphotericin B with
phospholipid bilayer membranes: a circular dichroism study. Biochem.
Biophys. Res. Commun. 88, 998–1002.

Dahan, A., Hoffman, A., 2008. Rationalizing the selection of oral lipid based drug
delivery systems by an in vitro dynamic lipolysis model for improved oral
bioavailability of poorly water soluble drugs. J. Control. Release 129, 1–
10.