Lembaran Publikasi Minyak dan Gas Bumi Vol. 54 No.
2, Agustus 2020: 81 - 91
terminal bongkar muat tengah laut, tangki ballast dan
tangki bahan bakar, kecelakaan tanker (Sulistyono,
2013).
Kasus tumpahan minyak yang terjadi di Indonesia,
antara lain adalah kasus bocornya pipa Pertamina
Cilacap (King Fisher) berdampak terbuangnya
600.000 barel minyak mentah pada tahun 2000,
kasus Montara (75 hari) berdampak terbuangnya 400
barrel/hari pada tahun 2009, kasus tubrukan kapal
MT Alyarmouk dengan Kapal MV Sinar Kapuas
berdampak 4500 MT crude oil tumpah ke laut pada
tahun 2015, kasus tubrukan MT Wan Hai 301 dengan
MT APL Denver menyebabkan 300 ton minyak bumi
terbuang pada tahun 2017, kasus tumpahan minyak
Balikpapan yang menyebabkan 1.238.619 barrel
terbuang pada tahun 2018 (KKP). Tumpahan minyak
dapat berdampak kematian organisme, perubahan
reproduksi dan tingkah laku organisme, dampak
terhadap plankton, dampak terhadap ikan migrasi,
bau lantung (tainting), dampak pada kegiatan
perikanan budidaya dan kerusakan ekosistem (KKP).
Kawasan wisata bahari dan pelabuhan juga terkena
dampaknya hingga dapat menyebabkan aktivitasnya
berhenti (Kementrian Lingkungan Hidup, 2014).
Penyebaran minyak di laut dipengaruhi kondisi
tempat terjadi tumpahan minyak seperti angin,
pasang surut, dan arus laut serta sifat-sifat minyaknya
(Sabhan, dkk., 2014). Tumpahan minyak di laut akan
mengalami fotooksidasi, evaporasi, emulsifikasi,
disolusi, adsorpsi, sedimentasi, dan degradasi
(French-McCay, 2004). Proses itu terjadi secara alami
yang dipengaruhi oleh jumlah dan karakter minyak.
Namun frekuensi tumpahan minyak yang berlebih
menyebabkan beban pencemaran lingkungan
lebih besar dibandingkan proses degradasi zat
pencemar secara alamiah sehingga dibutuhkan
bantuan manusia dengan teknologi yang ada untuk
mengatasi pencemaran tersebut (Nugroho, 2010).
Proses untuk penyelesaian tumpahan minyak dapat
dilakukan secara fisika, kimia dan biologi. Proses
fisika seperti penggunaan teknik pengumpulan dan
skimming namun teknik ini berpotensi merusak biota
laut. Proses kimia seperti penggunaan dispersan
namun dapat menambah beban lingkungan karena
pemakaian bahan kimia (Susanthi, dkk., 2009).
Proses biologi seperti bioremediasi menggunakan
mikroorganisme untuk mendegradasi pencemar
lingkungan. Mikroorganismenya berupa bakteri
alami yang berasal dari daerah yang tercemar
maupun bakteri yang diisolasi dari daerah lain lalu
diintroduksi ke daerah yang tercemar (Vidali, 2001).
Bioremediasi merupakan metode yang aman dan
82
efektif karena menggunakan mikroba yang secara
alamiah sudah ada dilingkungan (tanah) dan tidak
menggunakan atau menambahkan bahan kimia
dalam prosesnya. Lebih lanjut, nutrient untuk
pertumbuhan mikroba menggunakan pupuk untuk
kegiatan pertanian dan perkebunan.
Kelompok bakteri yang mampu mendegradasi
senyawa hidrokarbon disebut bakteri
hidrokarbonoklastik. Secara alami, bakteri ini
dapat mengikat, mengemulsi, mentranspor dan
mendegradasi senyawa hidrokarbon (Prakasita &
Wulansarie, 2018). Bakteri hidrokarbonoklastik
di antaranya adalah Pseudomonas, Arthrobacter,
Alcaligenes, Brevibacterium, Brevibacillus, dan
Bacillus. Bakteri-bakteri ini tersebar di alam seperti
di dalam perairan atau sedimen tercemar minyak
(Lasari, 2010).
Komposisi hidrokarbon dicemaran minyak bumi
sangat kompleks sehingga tidak cukup hanya satu
jenis bakteri untuk mendegradasinya. Setiap spesies
bakteri membutuhkan substrat yang spesifik untuk
mendegradasi keseluruhan komponen penyusun
minyak bumi. Sehingga untuk sesuatu yang
kompleks dibutuhkan korsorsium mikroba. Pada
kultur campur (konsorsium) bakteri akan terjadi dua
kemungkinan yang dapat berpengaruh pada proses
bioremediasi yaitu sinergisme dan antagonisme.
Menurut Aditiawati (2001) bahwa proses sinergisme
(simbiosis mutualisme) bakteri kultur campur dapat
meningkatkan proses bioremediasi dan sebaliknya
jika antagonisme akan terjadi penurunan proses
bioremediasi.
Aplikasi bioremediasi didunia yang pernah
dilakukan seperti kecelakaan tanker Amoco Candiz
pada tahun 1979 di lepas pantai Perancis, kecelakaan
Exxon Valdiz pada tahun 1989 di Alaska. Sedangkan
aplikasi di Indonesia masih dalam tahap uji coba
lapangan dan umumnya dicoba di darat (Darmayati,
2017).
Penelitian ini merupakan peningkatan skala dari
penelitian Dwinovantyo (2015) dan modifikasi dari
penelitian Cappello, dkk. (2006) dan Darmayati,
dkk. (2015). Simulasi degradasi tumpahan minyak
dilakukan menggunakan media bervolume 8
liter berisi air laut yang tercemar tumpahan
minyak. Penelitian ini dilakukan di laboratorium
PPPTMGB “LEMIGAS” dengan tujuan menguji
kemampuan bakteri konsorsium yaitu Raoultella
sp., Pseudomonas sp., dan Enterobacter sp. untuk
Simulasi Biodegradasi Senyawa Hidrokarbon Minyak Bumi Menggunakan Aktifitas Bakteri Laut Dalam (Syafrizal, dkk.)
simulasi degradasi minyak bumi. Variabel dari
penelitian ini adalah variasi media yaitu seawater
nutrient broth (SWNB) dan air terformasi (AF).
Pengaruh komposisi media terhadap degradasi
minyak bumi diamati selama tujuh hari.
BAHAN DAN METODE
Bahan Kimia
n-C6H14, Na2SO4, akuades, Alkohol 96%, silika
gel, alumina, CH2Cl2, Test Kit Merck NH4+ (14752),
NO2- (14776), NO3- (14556) dan PO43- (14848),
pupuk NPK 1000 ppm dan pupuk urea 200 ppm.
Sampel minyak bumi dari lapangan minyak di
Riau. Nilai API dan berat jenis berturut-turut 42,85
dan 0,8116 g/cm3. Air laut dengan salinitas 31 psu.
Media
- Agar Miring. Nutrient agar diletakkan di dalam
incubator dengan suhu 37oC.
- Nutrient Broth (NB). 1 g beef extract, 2 g ekstrak
ragi, 5 g pepton, dan 5 g NaCl dalam 1 liter air
(Parshetti, et al., 2006).
- Sea Water Nutrient Broth (SWNB). 3 liter air
laut, 250 ml molase cair, 1.26 g MgSO4.7H2O, 1
g KCl, 2.5 g KH2PO4, 3.75 g Na2HPO4, dan 1.29
g NaNO3 (Okoro, 2010).
- Air terformasi (AF). Nitrogen : Fosfor = 5:1 dan
ditambahkan pupuk urea 200 ppm sebagai sumber
N dan pupuk NPK 1000 ppm sebagai sumber P
di dalam 100 ml air laut.
Peralatan
Peralatan untuk simulasi digunakan bejana kaca
(36 cm x 19 cm x 19 cm) dan pengaduk Heidolph
RZR 2102 Control. Peralatan untuk analisa pH
meter Boeco BT-600, fotometer MERCK SQ 118
Spectroquant, kolom kromatografi dan satu set GC
Agilent 7890A dengan detektor Agilent Inert MSD
5975C dan kolom HP-5MS (panjang 60 m, diameter
0.250 mm, dan fase diam 0.25 μm).
Preparasi Bakteri Konsorsium
Alat dan bahan yang digunakan dalam penelitian
ini disterilisasi untuk mengurangi kontaminasi yang
dapat mengganggu.
Preparasi bakteri meliputi isolate, kultivasi dan
adaptasi. Secara singkat, isolate bakteri berdasarkan
Dwinovantyo (2015) dengan dikultur media agar
miring. Bakteri berasal dari genus Pseudomonas
sp., Enterobacter sp., dan Raoultella sp. Kultivasi
di media NB steril. Hasil kultivasi masing-masing
genus diambil 10 ml dan dimasukkan ke dalam 100
ml media NB untuk kultivasi konsorsium bakteri.
Adaptasi dilakukan dengan dua media yaitu SWNB
dan AF. Minyak 0,1 % v/v ditambahkan ke media
tersebut kemudian dikocok dengan shaker pada suhu
ruang. Jika populasi bakteri meningkat lebih dari 106
CFU/ml maka bakteri dapat digunakan untuk proses
biodegradasi (Okoro, 2010).
Uji Biodegradasi Minyak dan Analisa
Bakteri sebanyak 500 ml dimasukkan ke
dalam media air laut pada benjana kaca kemudian
ditambahkan minyak bumi sebanyak 2500 ppm. Media
diaduk pada suhu 28-31°C (Dwinovantyo,2015).
Pengaruh perbedaan media yaitu media SWNB,
media AF dan control menjadi variable dalam
penelitan dengan waktu pengamatan pada hari 0,
3, 5, dan 7. Pada setiap waktu disampling 100 ml
untuk dua kali ulangan (duplo) analisis konsentrasi
minyak (SNI 06-6989.10: 2004), pH dan suhu (US
EPA EQ-01-07: 2004), salinitas (Horiba U-10),
populasi bakteri (OD600) dan nutrient (NH4+, NO2-,
NO3- dan PO43- ).
Fraksinasi dilakukan untuk memisahan komponen
Saturated, Aromatik, Resin dan Asphalthein (SARA)
dengan kromatografi kolom. Eluen yang ada
kemudian diuapkan pelarutnya dan dipindahkan ke
vial untuk Analisa lebih lanjut. Fraksi saturated dan
aromatic dianalisa lebih lanjut menggunakan GCMS.
Pengolahan data dilakukan menggunakan Microsoft
Excel 2007.
HASIL DAN DISKUSI
Penelitian ini menggunakan bakteri konsorsium
yang terdiri dari tiga bakteri yaitu Raoultella sp.,
Pseudomonas sp., dan Enterobacter sp. Pengunaan
bakteri konsorsium menurut perspektif aplikasi
lapangan dalam simulasi ini lebih baik dari
penggunaan kultur murni salah satu jenis bakteri
karena konsorsium bakteri lebih kuat dan memiliki
keragaman metabolisme yang dibutuhkan di
lingkungan alami (Tyagi, dkk., 2011).
Ketiga bakteri tersebut memiliki kemampuan untuk
mendegradasi minyak. Menurut Rodrigues, dkk.,
(2009), bakteri Raoultella sp. dapat mendegradasi
senyawa aromatic seperti toluena, xilena, naftalena,
83
 Lembaran Publikasi Minyak dan Gas Bumi Vol. 54 No. 2, Agustus 2020: 81 - 91

dan senyawa saturated seperti n-alkana. Bakteri Uji Biodegradasi

Enterobacter sp juga memiliki kemampuan sebagai
biosurfaktan dan efektif mendegradasi minyak
pada pH 7 dan suhu 30ºC (Ahmed, dkk., 2014).
Menurut Dawson & Chang (1992) Pseudomonas
sp. merupakan bakteri yang memiliki enzim spesifik
dengan kemampuan biodegradasi terhadap senyawa
hidrokarbon (Adzini, dkk., 2019).
Pengamatan secara visual dilakukan selama
proses uji biodegradasi. Pada hari ke 0, minyak
menyebar di permukaan air Ketika dicampurkan
dengan media. Hal ini diperlihatkan Gambar 1.
Proses biodegradasi berjalan ditandai dengan bentuk
minyak menjadi kecil dan air menjadi keruh. Hal
ini diperlihatkan Gambar 2. Pada media SWNB,

(a)
(a)
(a) (b)
(b) (b)

11 Uji
Uji biodegrasi
biodegrasi minyak
minyak pada media dan
mediamedia kontrol
hari ke-0. pada hari ke-0
Gambar 1
pada
Uji biodegrasi
media
minyak SWNB
SWNB
pada media
dan
SWNB dan
media kontrol
kontrol pada
pada hari ke-0

2 Uji biodegradasi minyak pada mediaGambar SWNB

SWNB 2 dan media
dan media control
control pada
Uji biodegradasi minyak pada media SWNB dan media control pada hari ke-7.
pada hari
hari ke-7
ke-7
Tabel 1
Konsentrasi minyak (mg/l) pada media SWNB dan AF dengan bakteri dan media kontrolnya

Hari SWNB Kontrol SWNB AF Kontrol AF

0 1696 1533 1848 1456

3 1098 1521 1364 1445
5 1086 1488 1236 1419
7 859 1438 1131 1323

84
 Simulasi Biodegradasi Senyawa Hidrokarbon Minyak Bumi Menggunakan Aktifitas Bakteri Laut Dalam (Syafrizal, dkk.)

hal ini disebabkan oleh pertumbuhan bakteri dan
campuran minyak. Pada media kontrol juga terjadi
kekeruhan namun dengan intensitas yang lebih
rendah dibandingkan media SWNB. Hal ini terjadi
karena proses emulsifikasi. Kekeruhan hanya
disebabkan oleh masukan minyak dalam media dan
minyak tidak terurai menjadi butiran kecil, sehingga
lebih banyak menetap di permukaan. Perubahan
bentuk minyak menjadi butiran kecil disebabkan oleh
emulsifikasi rhamnolipid yang berasal dari bakteri
genus Pseudomonas sp. dalam proses degradasi.
Bakteri menyebabkan emulsi minyak menjadi lebih
stabil, sehingga minyak lebih mudah terdispersi
dalam bentuk mikroskopis. Hal ini mempercepat
dekomposisi minyak di perairan.
Proses biodegradasi menurunkan konsentrasi
minyak pada media SWNB, AF dan control
masing-masing media yang diperlihatkan Tabel 1.
Konsentrasi minyak pada media SWNB dan AF
dengan bakteri menurun pada hari pengamatan. Pada
hari ke 0 sebesar 1696 mg/l menurun menjadi 859
mg/l pada hari ke 7.
Penurunan konsentrasi minyak pada media
kontrol disebabkan oleh pengaruh faktor fisik, seperti
pengaruh pengadukan pada media dan suhu ruangan,
yang menyebabkan proses weathering (Kurniawan
& Effendi, 2014).
Weathering merupakan proses minyak menyebar
dan bergerak di permukaan akibat angin dan
arus secara bersamaan terjadi perubahan kimia
dan fisika. Proses weathering yaitu menyebar,
evaporasi, disperse, emulsifikasi, dissolution,
oksidasi, sedimentasi dan singking, dan biodegradasi
(ITOPF). Proses ini diduga terjadi pada media
dengan bakteri. Pertumbuhan populasi bakteri
merupakan salah satu indikator terjadinya proses
biodegradasi. Gambar 4 memperlihatkan hubungan

Tabel 2
Persentase biodegadasi dan laju degradasi pada media penelitian

Hari SWNB Perlakuan

Kontrol SWNB AF
Presentase degradasi minyak (%)
Kontrol AF
0 1696 1533 1848 1456
Media SWNB 49,35
3 1098
Kontrol SWNB
1521 1364 6,20
1445
5 1086Media AF 1488 1236 38,80 1419
7 859Kontrol AF 1438 1131 9,13 1323

2000
2000

1800
1800
(mg/l)(mg/l)

1600
1600

1400
1400
minyak

1200
1200
Konsentrasi minyak

SWNB
1000
1000
Kontrol SWNB
Kontrol SWNB
800
Konsentrasi

800
AF
600
600
Kontrol AF
Kontrol AF
400
400
200
200
0
0
00 33 55 77
Hari
HariKe
ke

Gambar 3
Grafik penurunan konsentrasi minyak (mg/l) pada media SWNB, AF dan kontrolnya dengan bakteri.
Gambar 3. Grafik Penurunan Konsentrasi Minyak (mg/l) pada Media SWNB, AF dan Kontroln
dengan Bakteri
85

Pengaruh Nutrien tumpahan minyak , nutrient menjadi fac

Kadar nutrient mempengaruhi pembatas disaat terjadi peningkatan ka
 Lembaran Publikasi Minyak dan Gas Bumi Vol. 54 No. 2, Agustus 2020: 81 - 91

1800 3000
1696 Media SWNB 

x 100000
1800 3000
1600 1696 Media SWNB 

x 100000
2,62E+03
(mg/l)

(CFU/ml)
1600 2,62E+03 2500
(mg/l)

(CFU/ml)
1400 2500
1400
1200 2000
Minyak

1200 1098 1086 2000

Minyak

1000

Bakteri
1098 1086
1000 1500

Bakteri
859
800 1500
Konsentrasi

859
800
Konsentrasi

600 1000

Populasi
600 8,20E+02
1000

Populasi
400 8,20E+02
400 500
200 500
200 1,16E+02 1,93E+02
0 1,16E+02 1,93E+02 0
0 0 3 5 7 0
0 3 5 7
Hari Ke
Hari Ke
Konsentrasi Minyak (mg/l) Populasi Bakteri (CFU/ml)
Konsentrasi Minyak (mg/l) Populasi Bakteri (CFU/ml)

Media AF 
Media AF 
2000 5000
(mg/l)

x 10000
2000
1800 1848 5000
4500

(CFU/ml)
4,29E+03
(mg/l)

x 10000
1800 1848 4500

(CFU/ml)
1600 4000
4,29E+03
1600
1400 4000
3500
Minyak

1364
1400 3500
Minyak

1200 1364 1236 3000

1131

Bakteri
1200 1236 3000
1000 1131 2500

Bakteri
1000 3,08E+03 2500
Konsentrasi

800 2000
3,08E+03
Konsentrasi

800
600 2000
1500

Populasi
600 1500
Populasi
400 1000
400
200 6,29E+02 5,65E+02 1000
500
200 6,29E+02 5,65E+02 500
0 0
0 0 3 5 7 0
0 3
Hari Ke 5 7
Hari Ke
Konsentrasi Minyak (mg/l) Populasi Bakteri (CFU/ml)
Konsentrasi Minyak (mg/l) Populasi Bakteri (CFU/ml)
Gambar 4
Pengaruh penurunan konsentrasi minyak dengan populasi bakteri.

antara konsentrasi minyak dengan populasi bakteri. Pengaruh pH media

Gambar 4. gambar,
Terlihat pada Pengaruh Penurunan
penurunan konsentrasiKonsentrasi
minyak Minyak
pH padadengan Populasi Bakteri
Gambar
menyebabkan4. Pengaruh Penurunan
populasi bakteri pada mediaKonsentrasi
SWNB Minyak
Nilai dengan Populasi
media dengan Bakteri
bakteri menunjukkan
nilai yang semakin menurun. Namun nilai pH
terus meningkat dari hari ke-0 hingga mencapai pada media kontrol mengalami fluktuasi dan
populasi tertinggi di hari ke-5 dengan jumlah 2,62 cenderung meningkat (Gambar 5) Penurunan
x 108 CFU/ml dan mengalami penurunan di hari nilai pH disebabkan oleh aktivitas bakteri yang
Kandungan
ke-7. Hal yangnutrient antara
sama terjadi pada media AF,media
populasi Kadarmetabolit
membentuk fosfatasam, tinggi
serta hasil karena
degradasi dalam
Kandungan nutrient
mencapai populasi antara
tertinggi pada hari ke 7media
sebesar 4, Kadar fosfat tinggi karena dalam
WNB dan29AF 7memiliki kadar yang berbeda pembuatan
alkana berupa asam media
asetat dan SWNB
asam propionatmengandung
yang
WNB dan AF x 10 memiliki
CFU/ml. Padakadar
media iniyang
sempatberbeda
mengalami pembuatan
dapat menurunkanmedianilai pH. SWNB mengandung
ecara signifikan.
penurunan pada hari ke 3, namun jumlahkadar
Pada media SWNB, populasi Na2HPO4 dan KH2PO4 sedangkan pada AF
ecara signifikan. Pada media SWNB,dibutuhkan
kadar NaPengaruh
HPO4 Nutrien
dan KH2PO4 sedangkan pada AF
itrat dan fosfat berturut
bakteri tetap turutjumlah
memenuhi 225 yang– 187 mg/l 6 dari2 NPK. Fosfor dapat larut dalam air dan
itrat dan fosfat berturutdegradasi
untuk melakukan turut 225 – 187
lebih besar darimg/l
dari 10 dari Kadar
NPK.nutrient
Fosfor dapat larut
mempengaruhi dalam air dan
pertumbuhan
an 360-296 CFU/mlmg/l. Sedangkan
(Nugroho, 2006). pada media membentuk ion fosfat (Santoso 2007).
yang Kadar
an 360-296 mg/l. Sedangkan pada media membentuk ion fosfat (Santoso 2007).
bakteri untuk proses biodegradasi. Nutrien Kadar
AF , kadar nitrat dan fosfat berturut turut 5,6 – nitrit dan ammonium relative rendah
AF , kadar 86
nitrat dan fosfat berturut turut 5,6 – nitrit dan ammonium relative rendah
,9 mg/l dan 1,39-1,06 mg/l. Kadar nya ini dibandingkan nitrat dan fosfat. Nitrit tidak
,9 mg/l dan 1,39-1,06 mg/l. Kadar nya ini dibandingkan nitrat dan fosfat. Nitrit tidak
nggi karena perlakuan aerasi untuk nitrat dan dapat bertahan lama karena posisinya diantara
nggi karena perlakuan aerasi untuk nitrat dan dapat bertahan lama karena posisinya diantara
enambahan senyawa yang mengandung ammonia dan nitrat serta mudah teroksidasi
 Simulasi Biodegradasi Senyawa Hidrokarbon Minyak Bumi Menggunakan Aktifitas Bakteri Laut Dalam (Syafrizal, dkk.)

penting adalah nitrogen dan fosfor. Pada proses karena perlakuan aerasi untuk nitrat dan penambahan
biodegradasi tumpahan minyak, nutrient menjadi senyawa yang mengandung fosfat. Kadar nitrat tinggi
nitrit kemudian nitrat. Ammonium dan Selama pengamatan, kadar nutrient
faktor pembatas disaat terjadi peningkatan kadar karena ada perlakuan aerasi sehingga kandungan
Ammonia
nitrit kemudian
karbon sulit dipisahkan
secaranitrat.
signifikan. Ammonium dan penelitian
Sehingga dalam
dan ini cenderung
Selama
oksigen menurun
pengamatan,
terlarut diperlihatkan
meningkat kadar Gambar
(Komarawidjaja,nutrient5.
kesetimbangannya
Ammoniamenggunakan
sulit
nitrit bergantung
dipisahkan
media airnitrat.
nitritkemudian
kemudian pada
dan
lautnitrat.
yang pH
diperkaya
Ammonium
Ammonium dan
dalam
dengan
dandanHal ini
cenderung
2006). disebabkan
menurun
Proses
Selama
Selama ini populasi
menyebabkan
pengamatan,
pengamatan, bakteri
diperlihatkan
nitrogen
kadar meningkat
Gambar
dari urea 5.
kadarnutrient
nutrient
suhu. Pada
kesetimbangannyapH
nutrient.
Ammonia tinggi
Ammonia dan
bergantung suhu
sulitsulitdipisahkan tinggi
pada pH
dipisahkan akan
dan
dandan dalam
dalammaka mereka
Halcenderung
ini disebabkan
teroksidasi
cenderung memanfaatkan
pada
menurun populasi
media
menurun AF nutrient
bakteri
sedangkan
diperlihatkan
diperlihatkan pada
Gambar
Gambar untuk
meningkat
media
5. 5.
SWNB ada NaNO pada saat pembuatan.
suhu. Pada pH tinggi dan suhu tinggi akan maka mereka memanfaatkan nutrient untuktinggi
lebih banyak dalam
kesetimbangannya
Kandungan bentuk
kesetimbangannya
nutrient antara ammonia
bergantung
bergantung
media pada
SWNB padadan
pH pH
dandan
AF proses
dan HalHal
ini degradasi.
ini
disebabkan
disebabkan 3 Kadar
populasi
populasi nutrient
bakteri
bakteri yang
meningkat
meningkat
suhu.
suhu.
memiliki Pada
Pada
kadar pHpH
yang tinggi
tinggi
berbeda dan dan
secarasuhusuhutinggi
tinggi
signifikan. akan
akan maka
maka
mereka
merekamemanfaatkan
memanfaatkan nutrient
nutrient
untuk
untuk
dengan
lebih kondisi
banyaklebih
sebaliknya
dalam
lebihbanyak
banyak
bentuk
dalam
lebih
dalam
banyak
ammonia
bentuk
bentuk ammonia
danPada
dalam
ammonia dan
pada
proses
dan
Kadar
proses
media
proses
fosfat
degradasi.
degradasi.
degradasi.
tinggi karena
SWNBKadar
Kadar
Kadar
yang
nutrient
dalam
nutrient
nutrient
yang
pembuatan
menyebabkan
yang
yang
tinggi
tinggi
tinggi
media SWNB, kadar nitrat dan fosfat berturut turut media SWNB mengandung Na2HPO4 dan KH PO4
bentuk ammonium
dengan kondisi
225dengan
dengan
- 187 mg/l
(Purwono,
sebaliknya
kondisi
kondisi lebih
dansebaliknya
360-296
2017)
sebaliknyabanyak
lebih
mg/l. lebih dalam
banyak
banyak
Sedangkan dalam
dalam
pada
populasi
pada
pada media
pada bakteri
media
sedangkan media SWNB
SWNB
pada AF
lebih
SWNBdariyang
tinggi
yang dibandingkan
menyebabkan
yangmenyebabkan
NPK. menyebabkan
Fosfor
2
dapat larut
bentuk ammonium
bentuk
media bentuk (Purwono,
AF ,ammonium
ammonium
kadar dan 2017)
nitrat(Purwono,
(Purwono, 2017)
fosfat berturut pada
2017)turut 5,6 populasi
populasi bakteri
populasi
dalam bakteri
air bakteri
dan lebih
lebih media
lebih
membentuk tinggi
tinggi
tinggi (Santoso, AF
dibandingkan
iondibandingkan
dibandingkan
fosfat
- 0,9 mg/l dan 1,39-1,06 mg/l. Kadar nya ini tinggi pada pada
pada Kadar nitrit dan
2007). media
media
ammonium relativeAF
media AF AF
rendah
10,00
10,00
10,00
10,00
9,00 9,009,00
9,00
7,977,97
8,008,00 7,97
7,857,85
7,647,64 7,74
7,647,74 7,85
7,707,70 7,747,74
8,00 7,647,547,54 7,517,64
7,64 7,74
7,51 7,70 7,74
7,497,49
7,54 7,97 7,51 7,337,33 7,49
7,85 7,127,12 7,187,18
pH
pH

7,117,11 7,74 7,017,01 7,33 7,74 7,11

7,11
8,00 7,70 7,12 7,18
pH

7,64 7,64
7,54
7,007,00 7,11 7,51 7,01 7,49 7,11
7,33
7,00 7,18
pH

7,11 7,01 7,12 7,11

7,00 6,006,00

6,00
5,005,00
6,00 0 0 3 3 5 5 7 7
5,00 Hari Ke
Hari Ke
5,00 0 3 5 7
Media SWNB
Media SWNB Kontrol SWNB
Kontrol SWNB Media AF
Media AF Kontrol AF
Kontrol AF
0 3 Hari Ke 5 7
Hari Ke
Gambar
Gambar
5 Nilai
5 Nilai
pHpH Media SWNB
pada
pada
media
media
SWNB, Kontrol SWNB
AFAF
SWNB, dandan Media AF
kontrolnya
kontrolnya
selama
selama Kontrol AF
tujuh
tujuh
harihari
pengamatan
pengamatan
Media SWNB (a)
Kontrol SWNB Media AF Kontrol AF

Gambar 5 Nilai pH pada media SWNB, AF dan kontrolnya selama tujuh hari pengamatan
Media SWNB
Media SWNB Media AF
Media AF
Gambar 5 Nilai400pH
400
pada media SWNB, AF dan kontrolnya
6 6
selama tujuh hari pengamatan
360 360 5,6 5,6
350 350
Konsentrasi (mg/l)

Konsentrasi (mg/l)

Konsentrasi (mg/l)

Konsentrasi (mg/l)

5 5
300 300 300 300 296 296
4 4
250 250
225 225
200 200 Media SWNB 202 202 187 187 3 3 Media AF
150 150
2 2
400 100 100Media SWNB 6 1,39 1,39 Media AF
1,57 1,57
360
50 50
1 1 5,6 0,9 0,9 1,06
0,9 1,06
0,9
350
Konsentrasi (mg/l)

Konsentrasi (mg/l)

400 0 0 0,02 0,02

0,09 0,09 0,15 0,15
0,18 0,18 0,33 0,33
0,01 0,01
650 0
0,28 0,28
0,13 0,13 0,05 0,05
0,02 0,02 0 0
300 5,6 0,09 0,09
360 300 296 7 7
350 0 0 3 3 0 0 3 3 7 7
54
Konsentrasi (mg/l)

Konsentrasi (mg/l)

250 Hari Ke
Hari Ke Hari Ke
Hari Ke
300 225 300 296
200 202 187 43
250
150 225 NO3‐ NO3‐ NO2‐ NO2‐ NH4+ NH4+ PO4 PO4 NO3‐ NO3‐ NO2‐ NO2‐ NH4+ NH4+ PO4 PO4
200 202 187 32
100 1,57 1,39
150 (b) 1
1,06
50 0,9 0,9 2
Gambar
Gambar
5 Kadar
5 Kadar Nutrien
Nutrien
pada
padamedia media AF AFdandan
kontrolnya
kontrolnya 1,57
100 SWNB,
SWNB, 0,13 0,28 selama
1,39 selama
tujuhtujuh
hari
0,05 0,90,02 hari
pengamatan
pengamatan
0 0,02 0,09 0,15 0,18 0,01 0,33 10 0,09 0 1,06
0,9
50 Gambar 5
0 3 7 00,28 3 7
0 0,02 0,09 (a)
0,15 Nilai
0,18pH pada media
0,01 SWNB,
0,33 AF dan kontrolnya
0 0,13selama tujuh hari0,05
pengamatan,
0,02 0,09 0
0 Hari
(b) Kadar Ke
3 Nutrien pada media7 SWNB, AF dan kontrolnya0 selama tujuh hari Hari Ke
3pengamatan. 7
Hari Ke Hari Ke
NO3‐ NO2‐ NH4+ PO4 NO3‐ NO2‐ NH4+ PO4
87
NO3‐ NO2‐ NH4+ PO4 NO3‐ NO2‐ NH4+ PO4

Gambar 5 Kadar Nutrien pada media SWNB, AF dan kontrolnya selama tujuh hari pengamatan
 d. Analisis Gas Chromatography-Mass distribusi hidrokarbon nC15-nC27 , Pristane (Pr)
Spectrometry (GC-MS) dan Phytane (Ph). Karbon sebelum nC15 tidak
terlihat karena merupakan senyawa dengan
Sampel minyak bumi sebelum dan berat molekul rendah yang mudah menguap
sesudah biodegradasi dianalis
Lembaran Publikasi menggunakan
Minyak karena
dan Gas Bumi Vol. 54 No.weathering dan 81preparasi
2, Agustus 2020: - 91 sampel.
GC-MS untuk melihat perubahan komposisi Gambar 6B, sampel minyak setelah
hidrokarbonnya.
dibandingkan nitrat danSampel dipreparasi
fosfat. Nitrit dengan biodegradasi
tidak dapat hanya terlihat
Selama pengamatan, Pristanecenderung
kadar nutrient dan
bertahan lama karena
metode posisinya diantara
kromatografi kolomammonia untuk menurun
Phytane dengan persentase
diperlihatkan yang menurun
Gambar 5. Hal ini
dan nitrat serta mudah
memisahkan teroksidasi menjadi
fraksi-fraksinya nitrat.
yaitu Saturated, disebabkan populasidan
sebesar 24,33% bakteri meningkat
21,14% maka mereka
dibandingkan
ProsesAromatik,
ini disebut nitrifikasi yang merupakan proses
Resin dan Asphalthene Fraksi memanfaatkan untuk proses
nutrient Pristane
sebelum biodegradasi. degradasi.
dan Phytane
microbial dengan menurunkan senyawa nitrogen Kadar nutrient yang tinggi pada media SWNB
saturated dan aromatic yang diuji dengan GC - merupakan senyawa isoprenoid yang lebih
(terutama ammonia) teroksidasi berurutan menjadi yang menyebabkan populasi bakteri lebih tinggi
MS karena dalam proses biodegrasi akan tahan
nitrit dan nitrat. Hal yang sama dengan Ammonium
terhadap efek biodegradasi
dibandingkan pada media AF.
yang mudah
merupakan didegradasi. Fraksi dia
senyawa nitrogen, resinakandan dibandingkan n paraffin. Sehingga rasio
asphaltene resisten terhadap biodegradasi Analisis
antara Gas nC17Chromatography-Mass
/Pristane, nC18/Phytane dan
mudah teroksidasi menjadi nitrit kemudian nitrat.
Ammonium(Ogbo et dan 2008)
al.Ammonia sulit dipisahkan dan Pristane/Phytane (GC-MS)
Spectrometry dapat digunakan sebagai
Gambar 6 (A-B)
dalam kesetimbangannya bergantung pada pH danmemperlihatkan indikasi
Sampel biodegradasi.
minyak bumi tumpahan
sebelum danminyaksesudah
suhu. kromatogram
Pada pH tinggi dan komposisi hidrokarbon
suhu tinggi akan lebih dari biodegradasi
akibat pengaruh degradasi
dianalis microbialGC-MS
menggunakan di lokasi
untuk
banyakfraksi saturated sebelum dan sesudah tumpahan minyak. (Hansen et al, 2007).
dalam bentuk ammonia dan dengan kondisi melihat perubahan komposisi hidrokarbonnya.
sebaliknya lebih banyak
biodegradasi. Padadalam bentuk ammonium
Gambar 6A, sampel Sampel. dipreparasi dengan metode kromatografi
(Purwono, dkk., 2017). kolom untuk memisahkan fraksi-fraksinya yaitu

A B

Gambar 6 Fraksi saturated sebelum (A) danGambar

sesudah
6 (B) biodegradasi
Fraksi saturated sebelum (a) dan sesudah (b) biodegradasi.

A B

Gambar 7 Fraksi aromatik sebelum dan sesudah biodegradasi

Gambar 7
Fraksi aromatik sebelum dan sesudah biodegradasi.

88 Gambar 7 (A-B) memperlihat kromatogram IV. KESIMPULAN

komposisi hidrokarbon dari fraksi aromatik
sebelum dan sesudah biodegradasi. Pada
Simulasi Biodegradasi Senyawa Hidrokarbon Minyak Bumi Menggunakan Aktifitas Bakteri Laut Dalam (Syafrizal, dkk.)

Saturated, Aromatik, Resin dan Asphalthene Fraksi bakteri meningkat dengan menurunnya konsentrasi
saturated dan aromatic yang diuji dengan GC minyak. Kadar nutrient di media mempengaruhi
-MS karena dalam proses biodegrasi akan mudah pertumbuhan bakteri yang berhubungan dengan
didegradasi. Fraksi resin dan asphaltene resisten proses biodegradasi. Fraksi saturated lebih
terhadap biodegradasi (Ogbo & Okhuoya, 2008). mudah terdegradasi dibandingkan fraksi aromatic
Gambar 6 (A-B) memperlihatkan kromatogram berdasarkan analisa GCMS.
komposisi hidrokarbon dari fraksi saturated sebelum
dan sesudah biodegradasi. Pada Gambar 6A, sampel
minyak sebelum biodegradasi terlihat distribusi DAFTAR ISTILAH / SINGKATAN
hidrokarbon nC15-nC27 , Pristane (Pr) dan Phytane
(Ph). Karbon sebelum nC15 tidak terlihat karena Simbol Definisi Satuan
merupakan senyawa dengan berat molekul rendah
American Public Health
yang mudah menguap karena weathering dan APHA
Association
preparasi sampel. Gambar 6B, sampel minyak setelah
biodegradasi hanya terlihat Pristane dan Phytane API American Petroleum Institute
dengan persentase yang menurun sebesar 24,33% American Society and
ASTM
dan 21,14% dibandingkan sebelum biodegradasi. Testing Materials
Pristane dan Phytane merupakan senyawa isoprenoid CFU Colony-Forming Unit
yang lebih tahan terhadap efek biodegradasi CH2Cl2 Dichloromethane
dibandingkan n paraffin. Sehingga rasio antara nC17/
KCl Pottasium Chloride
Pristane, nC18/Phytane dan Pristane/Phytane dapat
digunakan sebagai indikasi biodegradasi. tumpahan KH2PO4
Pottasium dihydrogen
phospate
minyak akibat pengaruh degradasi microbial di lokasi
tumpahan minyak. (Hansen, dkk., 2007). MgSO4.7H2O
Magnesium sulfate
heptahydrate
Gambar 7 (A-B) memperlihat kromatogram
Na2HPO4 Disodium phospate
komposisi hidrokarbon dari fraksi aromatik
Na2SO4 Sodium sulfate
sebelum dan sesudah biodegradasi. Pada gambar
terlihat sebelum dan sesudah masih memiliki NaCl Sodium chloride
puncak-puncak senyawa hidrokarbon yang masih NaNO3 Sodium nitrate
masih banyak karena senyawa aromatic relative
n-C6H14 Normal-Hexane
lebih tahan degradasi bila dibandingkan dengan
senyawa saturated. Namun persentase sesudah NH4+ Ammonium
biodegradasi lebih rendah dibandingkan sebelum NO2- Nitrite
biodegradasi. Senyawa-senyawa aromatic yang ada
NO3- Nitrate
di sampel seperti benzene, naphthalene, anthrasena,
phenathrene beserta turunannya. Proses biodegradasi Nitrogen, Phosporus dan
NPK
Kalium
PAH dimulai dengan pemecahan cincin benzene oleh
bakteri dan katalis enzim dioksigenase. Benzena PO43- Phospate

yang terlepas dioksidasi menjadi senyawa-senyawa PSU Practical Salinity Units

lain dan digunakan sel mikroba untuk sumber energi.
Pupuk kimia dengan rumus
kimia CO(NH2)2 yang
Pupuk Urea
mengandung Nitrogen (N)
berkadar tinggi
KESIMPULAN DAN SARAN
Senyawa hidrokarbon jenuh
Penelitian penggunaan media SWNB dan bersifat non polar terdiri dari
AF dengan bakteri konsorsium Raoultella sp., Saturated rantai luruh (parafin),
Pseudomonas sp., dan Enterobacter sp. dapat bercabang (isoparafin) dan
siklik (napthene)
mendegradasi senyawa hidrokarbon minyak bumi.
Persentase penurunan kadar minyak untuk media Senyawa hidrokarbon sedikit
SWNB dan AF berturut-turut sebesar 49,35% Aromatik polar yang memiliki satu
dan 38,80% pada pengamatan hari ke 7. Populasi atau lebih cincin aromatik

Senyawa hidrokarbon
bersifat polar dan larut 89
Resin
dalam heptane (atau
pentane)
Senyawa hidrokarbon
bersifat polar dan tidak laruh
 Senyawa hidrokarbon jenuh
bersifat non polar terdiri dari
Saturated rantai luruh (parafin),
bercabang (isoparafin) dan
siklik (napthene)
Lembaran Publikasi Minyak dan Gas Bumi Vol. 54 No. 2, Agustus 2020: 81 - 91

Senyawa hidrokarbon sedikit

Aromatik polar yang memiliki satu
Dwinovantyo, A., Prartono, T. & Syafrizal, 2015.
Simbol Definisi
atau lebih cincin aromatik Satuan Potensi pemanfaatan bakteri sedimen laut dalam
untuk biodegradasi tumpahan minyak bumi skala
American hidrokarbon
Senyawa Public Health
APHA
Association
laboratorium. Bogor: IPB.
bersifat polar dan larut
Resin Energi dan Sumber Daya Mineral (ESDM), 2019.
dalam heptane (atau
API American Petroleum Institute
pentane) Handbook of Energy & Economic Statistics of
Senyawa
American hidrokarbon
Society and Indonesia. Jakarta: ESDM.
ASTM bersifat
Asphaltene Testing polar dan tidak laruh
Materials French-McCay, D. P., 2004. Oil spill impact modeling:
dalam heptane (atau
CFU Colony-Forming
pentane) berlebihUnit development and validation. 23(10), pp. 2441-
CH2Cl2 Dichloromethane
2456.
KEPUSTAKAAN Guo-liang, Z., Yue-ting, W., Xin-ping, Q. & Qin, M.,
KCl Pottasium Chloride
2005. Biodegradation of crude oil by Pseudomonas
Aditiawati, P., Pikoli, M. R. & Indriani A, D., 2001.
KH 2PO4
Pottasium dihydrogen aeruginosa in the presence of rhamnolipids.
Isolasi Bertahap Bakteri
phospate Pendegradasi Minyak
Journal of Zhejiang University Science, Volume
Bumi dari Sumur Bangko. Yogyakarta, IATMI.
MgSO4.7H2O
Magnesium sulfate 6, p. 725–730.
Adzini, I. N., Dermawan,
heptahydrateD. & Apriani, M., 2019.
Hansen, A. B., Daling, P. S., Faksness, L.-G. &
NaPengaruh
2HPO4 Penambahan Bakteri Pseudomonas
Disodium phospate
Sörheim, K. R., 2007. merging CEN Methodology
aeruginosa
Na2SO4
pada Bioremediasi
Sodium sulfate
Total Petroleum for Oil Spill Identification. In book: Oil spill
Hydrocarbon Penambangan Minyak Bumi environmental forensics: Fingerprinting and
NaCl Sodium chloride
Tradisional di Jawa Timur. Surabaya, Indonesia, source identification. .: Elsevier/Academic Press.
Conference
NaNO 3 Proceeding
Sodium nitrate on Waste Treatment
Kementerian Lingkungan Hidup, 2006. Pedoman
Technology.
n-C6H14 Normal-Hexane Penanggulangan Dampak Lingkungan Akibat
Ahmed,
NH4+
A. W., Alzubaidi,
Ammonium F. S. & Hamza, S. J., 2014. Tumpahan Minyak di Laut. Jakarta: Kementerian
Biodegradation of crude oil in contaminated water Lingkungan Hidup.
NO - Nitrite
by 2local isolates of Enterobacter cloacae. Iraqi Kementrian Kelautan dan Perikanan, 2021.
NO3-
Journal Nitrate 55(3A), pp. 1025-1033.
of Science, https://kkp.go.id/djprl/p4k. [Online]
Badan Available at: https://kkp.go.id/djprl/p4k/
NPKStandardisasi Nasional, 2011. Air dan air
Nitrogen, Phosporus dan
Kalium
limbah - Bagian 10 : Cara uji minyak dan lemak page/2626-tumpahan-minyak-oil-spill
secara
PO 4
3-
gravimetri.
PhospateJakarta: Badan Standardisasi [Accessed 2021].
Nasional.
PSU Practical Salinity Units Komarawidjaja, W., 2006. Pengaruh perbedaan dosis
Cappello, S, Caruso, G., Zampino, D., Monticelli, oksigen terlarut (DO) pada degradasi amonium
Pupuk kimia dengan rumus kolam kajian budidaya udang. Jurnal Hidrosfir
L.S., Maimone, G., Denaro,
kimia CO(NH 2)2 yang R., Tripodo, B.,
Pupuk Urea Indonesia, 1(1), pp. 32-37.
Troussellier,mengandung
M., Yakimov, M.,(N)
Nitrogen & Giuliano, L.,
berkadar tinggi
2006. Microbial community dynamics during Kuncowati, 2010. Pengaruh pencemaran minyak
assays of harbour oil spill bioremediation: a di laut terhadap ekosistem laut. Jurnal Aplikasi
Senyawa hidrokarbon jenuh Pelayaran dan Kepelabuhan, 1(1), pp. 18-22.
microscale simulation
bersifat non study. Journal
polar terdiri dari of Applied
102(1),
Microbiology,rantai
Saturated luruh pp. 184-194.
(parafin), Kurniawan, A. & Effendi, A. J., 2014. Biodegradasi
bercabang (isoparafin) dan residu total petroleum hidrokarbon di bawah
Darmayati, Y. &siklik
Afianti, N. F., 2017. Penerapan dan
(napthene) konsentrasi 1% (w/w) hasil proses bioremediasi.
Tingkat Efektivitas Teknik Bioremidiasi untuk Jurnal Manusia dan Lingkungan, 21(3).
Perairan Pantai Tercemar
Senyawa Minyak.sedikit
hidrokarbon OSEANA, 42(4).
Aromatik polar yang memiliki satu
Lasari, D. P., 2021. https://www.esdm.go.id/
Darmayati, Y., Sanusi, H.S., Partono, T., Santosa, id/media-center/arsip-berita. [Online]
atau lebih cincin aromatik
D.A., & Nuchsin, R., 2015. The effect of Available at: https://www.esdm.go.id/id/media-
biostimulationSenyawa
and biostimulation-bioaugmentation
hidrokarbon center/arsip-berita/bakteri-pengolah-limbah-
bersifat polar dan larut
on biodegradation of oil-pollution on sandy beaches
Resin minyak-bumi-yang-ramah-lingkungan
dalam heptane (atau
using mesocosms. International Journal of Marine
pentane) Nugroho, A., 2010. Biodegradasi sludge minyak bumi
Science, 5(27), pp. 1-11.
Senyawa hidrokarbon dalam skala mikrokosmos: simulasi sederhana
Dawson, T. D. &bersifat
Asphaltene Chang, polar
F.dan
H.,tidak laruh
1992. Screening test sebagai kajian awal bioremediasi land treatment.
dalam heptane (atau
of the biodegradative capability
pentane) berlebih of a new strain Makara Journal of Technology, 10(2).
of Pseudomonas gladioli (BSU 45124) on some Ogbo, E. M. & Okhuoya, J. A., 2008. Biodegradation
xenobiotic organics. Bulletin of Environmental of aliphatic, aromatic, resinic, and asphaltic
Contamination and Toxicology, 49(1), pp. 10-17. fractions of crude oil contaminated soils by Plero.

90
Simulasi Biodegradasi Senyawa Hidrokarbon Minyak Bumi Menggunakan Aktifitas Bakteri Laut Dalam (Syafrizal, dkk.)
African Journal of Biotechnology, 7(23), pp. 4291-
4297.
Okoro, C. C., 2010. Application of seawater microbial
inocula for the remediation of hydrocarbon polluted
mangrove swamp in the Nigerian oil rich Niger
Delta. Journal Nature and Science, pp. 152-162.
Parshetti, G., Kalme, S., Saratale, G. D. & Govindwar,
S. P., 2006. Biodegradation of malachite green
by Kocuria rosea MTCC 1532. Acta Chimica
Slovenica, 53(4), pp. 492-498.
Prakasita, I. G. F. & Wulansarie, R., 2018. Review
Analisis Teknologi Degradasi Limbah Minyak
Bumi untuk Mengurangi Pencemaran Air Laut di
Indonesia. Reka Buana Jurnal Ilmiah Teknik Sipil
dan Teknik Kimia, 3(2), pp. 80-86.
Purwono, Rezagama, A., Hibbaan, M. & Budihardjo,
M. A., 2017. Ammonia-Nitrogen (NH3-N) and
Ammonium-Nitrogen (NH4+-N) Equilibrium on
The Process of Removing Nitrogen By Using
Tubular Plastic Media. Journal of Materials and
Environmental Sciences, 8(S), pp. 4915-4922.
Rodrigues, D. F, Sakata, S.K., Comasseto, J.V.,
Bicego, M.C., & Pellizari, V.H., 2009. Diversity
of hydrocarbon-degrading Raoultella isolated
from hydrocarbon-contaminated estuaries. Journal
Applied Microbiology, 106(4), pp. 1304-14.
Sabhan , Mudin, Y. & Babanggai, . M., 2014.
emodelan tumpahan minyak di Teluk Lalong
Kabupaten Banggai. Natural Science, 3(2).
Santoso, A. D., 2007. Kandungan zat hara fosfat pada
musim barat dan musim timur di Teluk Hurun
Lampung. Jurnal Teknik Lingkungan, 8(3), pp.
207-210.
Sulistyono, S., 2013. Dampak Tumpahan Minyak (Oil
Spill) di Perairan Laut pada Kegiatan Industri
Migas dan Metode Penanggulangan. [Online]
Available at: http://ejurnal.ppsdmmigas.esdm.
go.id/sp/index.php/swarapatra/article/view/55
Susanthi, D., Sudiana, I. M. & Sembiring, L., 2009.
Bakteri laut isolat Pulau Pari pendegradasi
komponen crude oil. Yogyakarta, Universitas
Negeri Yogyakarta.
Tyagi, M., da Fonseca, M. & de Carvalho, C., 2011.
Bioaugmentation and biostimulation strategies
to improve the effectiveness of bioremediation
processes. Biodegradation, Volume 22, p. 231–241.
Vidali, M., 2001. Bioremediation. An Overview. Pure
Appl. Chem, 73(7), p. 1163–1172.
91