LaboratoriumTeknik Lingkungan 16(2). 1-5.

Desember 2018

STERILISASI DAN PEMBUATAN MEDIA MIKROBIA

Herlina Astuti1, Anjar Pribadi2 dan Ika Oksi Susilawati,3

1
Program Studi Teknik Lingkungan, Fakultas Teknik, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan
Jend A. Yani Km 36,5, Banjarbaru, 70713, Indonesia
2,
3Laboratorium Mikrobiologi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A. Yani Km
36, Banjarbaru, 70713, Indonesia
1E-mail: herlinaastuti97@gmail.com

Abstrak
Media biakan merupakan suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi yang dipakai untuk menumbuhkan
mikroorganisme baik dalam mengkultur bakteri, jamur, dan mikroorganisme lain. Sebelum media biakan
digunakan untuk menumbuhkan bakteri, terlebih dahulu dilakukan sterilisasi untuk menghindari
kontaminasi bakteri lain. Sterilisasi adalah metode untuk membunuh pathogen dan jamur yang tidak
diharapkan pada media untuk perkembangan mikroba tertentu. Tujuan dilakukannya praktikum ini adalah
untuk mempelajari proses sterilisasi dan tahapan preparasi media tumbuh mikrobia. Metode yang
dilakukan adalah melakukan dan mengamati untuk teknik pembungkusan pada alat untuk disterilkan dan
pembuatan media mikroba. Hasil yang didapatkan adalah mahasiswa dapat mengetahui proses sterilisasi
dan tahapan preparasi media tumbuh mikroba. Sehingga dapat diambil kesimpulan bahwa untuk 75 mL
akuades diperlukan media NA sebanyak 1,5 gram dan media PDA sebanyak 2,92 gram. Sebelum peralatan
untuk pembuatan media digunakan perlu untuk disterilisasi terlebih dahulu agar mikroba yang tidak
diinginkan tidak muncul.

Kata kunci: media,mikroba,sterilisasi

I. Pendahuluan
Media biakan merupakan suatu bahan
yang terdiri atas campuran nutrisi yang
dipakai untuk menumbuhkan
mikroorganisme baik dalam mengkultur
bakteri, jamur, dan mikroorganisme lain.
Nutrisi yang dibutuhkan mikroorganisme
untuk dapat tumbuhan dan berkembangbiak
antara lain karbon, nitrogen, unsur non
logam seperti sulfur dan fosfor, unsur logam
seperti Ca, Zn, Na, K, Cu, Mn, Mg, dan Fe,
vitamin, air, dan energi. Media biakan dapat
berupa media cair, media kental (padat),
media yang diperkaya, media yang kering
dan media yang sintetik, media biakan
mikrooorganisme berupa media padat,
media cair dan media semi padat. Sebelum
media biakan digunakan untuk
menumbuhkan bakteri, terlebih dahulu
dilakukan sterilisasi untuk menghindari
kontaminasi bakteri lain. Sterilisasi adalah
metode untuk membunuh pathogen dan
jamur yang tidak diharapkan pada media
untuk perkembangan mikroba tertentu
(Djayasinga, 2017). Oleh karena itu,
praktikum ini bertujuan untuk mempelajari
proses sterilisasi dan tahapan preparasi
media tumbuh mikroba.
Perlakuan sterilisasi mutlak diperluka
n dalam pelaksanaan berbagai penelitian
yang bertujuan untuk mengetahui pengaruh
inokulasi mikroorganisme tertentu tanpa a
da pengaruh mikroorganisme indigenous.
Metode utama sterilisasi adalah: (1)
metode fisik, misalnya metode sterilisasi de
ngan panas, meliputi penggunaan panas
lembab (autoklaf/ uap bertekanan dan ua
p langsung), dan penggunaan panas keri
ng (oven/ udara panas dan pembakaran)
; (2) metode kimia, yaitu dengan menggu
nakan agen- agen kimia, misalnya metil
bromide, dan formaldehid. Untuk
kebanyakan benda, panas merupakan
metode sterilisasi yang paling praktis dan
efisien. Jumlah panas yang diperlukan untuk
mematikan berbeda dari satu organisme ke
organisme lain, yang harus diperhatikan

1
LaboratoriumTeknik Lingkungan 16(2). 1-5
adalah banyaknya panas (suhu) yang harus
dipergunakan dan lamanya waktu yang
diperlukan benda yang disterilkan untuk
dipanaskan pada suhu tertentu (Cahyani,
2009).
Penggunaan autoclave pada sterilisasi
media biakan memiliki beberapa kekurangan
yaitu membutuhkan daya listrik yang cukup
besar, dan biaya perawatan yang mahal,
sedangkan oven umumnya digunakan untuk
sterilisasi alat- alat laboratorium.
Penggunaan oven untuk sterilisasi media
pembiakan kurang tepat karena pada oven
tidak dihasilkan tekanan uap jenuh.
Berdasarkan beberapa kelemahan dari alat
sterilisasi di atas, digagaslah sebuah ide
baru dalam proses sterilisasi media biakan
alternatif yang lebih efektif dan efisien yaitu
menggunakan metode elektrosterilisasi.
Metode eletrosterilisasi merupakan metode
sterilisasi dengan bantuan arus listrik yang
dihantarkan melalui eletroda yang digunakan
pada proses elektrolisis. Keuntungan yang
didapatkan dari penggunaan metode ini
yakni, waktu yang dibutuhkan untuk
sterilisasi relatif lebih cepat, daya listrik yang
digunakan sedikit, rangkaian alat yang
digunakan sederhana, reaktor eletrolisis
dapat dibuat sesuai dengan kebutuhan,
serta dapat digunakan kembali. Keuntungan
lain dari metode elektrosterilisasi yaitu
desinfeksi dapat digantikan dengan klorinasi
yang dihasilkan dari gas klorin yang
berbahaya (Djayasinga, 2017).
Untuk pertumbuhan dan perkembangan
mikroba, diperlukan substrat yang disebut
media. Sedang media itu sendiri sebelum
dipergunakan harus dalam keadaan steril,
artinya tidak ditumbuhi oleh mikroba lain
yang tidak diharapkan. Penggunaan media
bukan hanya untuk pertumbuhan dan
perkembangbiakan mikroba, tetapi juga
untuk tujuan-tujuan lain, misalnya untuk
isolasi, seleksi,evaluasi dan diferensiasi
biakan yang didapatkan. Artinya
penggunaan beberapa jenis zat tertentu
yang mempunyai pengaruh terhadap
pertumbuhan dan perkembangbiakan
mikroba, banyak dilakukan dan
dipergunakan. Sehingga tiap-tiap media
mempunyai sifat (spesifikasi) tersendiri
Desember 2018
sesuai dengan maksudnya (Suriawiria,
2011).
PDA (Potato Dextrose Agar) adalah
media yang paling umum digunakan untuk
kultur jamur (Wongjiratthiti & Yottako, 2017).
PDA (Potato Dextrose Agar) adalah media
yang umum untuk pertumbuhan jamur di
laboratoroium karena memiliki pH yang
rendah (pH 4,5 sampai 5,6) sehingga
menghambat pertumbuhan bakteri yang
membutuhkan lingkungan yang netral
dengan pH 7,0 dan suhu optimum untuk
pertumbuhan antara 25-30° C. Berdasarkan
komposisinya PDA termasuk dalam media
semi sintetik karena tersusun atas bahan
alami (kentang) dan bahan sintesis (dextrose
dan agar). Kentang merupakan sumber
karbon (karbohidrat), vitamin dan energi,
dextrose sebagai sumber gula dan energi,
selain itu komponen agar berfungsi untuk
memadatkan medium PDA. Masing-masing
dari ketiga komponen tersebut sangat
diperlukan bagi pertumbuhan dan
perkembangbiakkan mikroorganisme
terutama jamur (Oktavia & Sri, 2017).
II. Materi & Metode
Alat
Alat-alat yang digunakan adalah labu
ukur, erlenmeyer, hot plate, magnetic stir,
neraca analitik, otoklaf, dan inkubator.
Bahan
Bahan-bahan yang digunakan
adalah nutrient agar, kentang dan aquades.
Metode
Metode yang digunakan dalam
praktikum ini adalah melakukan pengamatan
untuk teknik pembungkusan pada alat untuk
disterilkan (membungkus cawan petri,
menyumbat/membungkus tabung reaksi)
dan pembuatan media dengan memasukkan
media NA sebanyak 1,5 gram/L dan media
PDA sebanyak 2,92 gram/L (yang
didapatkan dari hasil perhitungan) ke dalam
erlenmeyer. Setelah itu, memasukkan 75 mL
akuades ke dalam erlenmeyer yang sudah
berisi media, kemudian memanaskan media
menggunakan hot plate. Media yang sudah
dipanaskan, diangkat dan didinginkan.
2
LaboratoriumTeknik Lingkungan 16(2). 1-5 Desember 2018

Setelah itu, mulut erlenmeyer disumbat 75 𝑚𝐿 𝑔𝑟

dengan kapas dan di tutup kertas diikat 𝐹𝑚 (𝑔𝐿−1 ) = 𝑥 39
1000 𝑚𝐿 𝐿
dengan karet. Medium disterilkandengan
autoklaf selama kurang lebih 15 menit, = 2,92 𝑔𝑟
kemudian diangkat dan disimpan.

III. Hasil dan Pembahasan B. Pembahasan

A. Hasil Pada praktikum kali ini yang akan
dilakukan adalah mempelajari proses
1. Medium Nutrient Agar (NA) sterilisasi dan tahapan preparasi media
tumbuh mikroba. Sebelum media biakan
digunakan untuk menumbuhkan bakteri,
terlebih dahulu dilakukan sterilisasi untuk
menghindari kontaminasi bakteri lain.
Sterilisasi adalah metode untuk membunuh
pathogen dan jamur yang tidak diharapkan
pada media untuk perkembangan mikroba
tertentu (Djayasinga, 2017). Oleh karena itu,
sterilisasi sangat penting dilakukan pada
Perhitungan : pembuatan media mikroba.Proses sterilisasi
Tsm/L media NA = 20 gr/L pada praktikum kali ini menggunakan
Volume needed (Vn) = 75 mL sterilisasi pemanasan yaitu menggunakan
Volume Total = 1000 mL autoklaf.
Untuk pembuatan media, pertama
𝑉𝑛 (𝑚𝐿) media NA ditimbang sebanyak 1,5 gram dan
𝐹𝑚 (𝑔𝐿−1 = 𝑉𝑡 (𝑚𝐿)
𝑥 𝑇𝑠𝑚/𝐿 media PDA sebanyak 2,92 gram. Angka
75 𝑚𝐿 𝑔𝑟 tersebut didapatkan dari hasil perhitungan
𝐹𝑚 (𝑔𝐿−1 ) = 𝑥 20 dengan membagi volume needed dengan
1000 𝑚𝐿 𝐿
volume total dikalikan dengan nilai Tsm/L
= 1,5 𝑔𝑟 yang terdapat pada media sehingga
didapatkan gram media PDA dan NA yang
2. Medium Potato Dextrose Agar akan digunakan untuk pembuatan media.
(PDA) Media NA dan PDA yang sudah ditimbang
kemudian di masukkan ke dalam erlenmeyer
yang berbeda. Akuades dimasukkan
kedalam gelas ukur sebanyak 75 mL,
kemudian dimasukkan ke dalam erlenmeyer
yang ada media NA nya. Setelah itu akuades
75 mL juga dimasukkan ke dalam
erlenmeyer yang ada media PDA nya.
Kemudian magnetic stir dimasukkan ke
dalam erlenmeyer yang berfungsi untuk
Perhitungan : pengaduk larutan, letakkan erlenmeyer ke
Tsm/L media PDA = 39 gr/L atas hot plate, hot plate dipanaskan sampai
Volume needed (Vn) = 75 mL larutan mendidih atau berbuih. Setelah
berbuih atau mendidih suhu hot plate
Volume Total = 1000 mL
diturunkan dan erlenmeyer yang ada
𝑉𝑛 (𝑚𝐿) medianya diangkat dan didinginkan.
𝐹𝑚 (𝑔𝐿−1 = 𝑉𝑡 (𝑚𝐿)
𝑥 𝑇𝑠𝑚/𝐿 Kemudian gelas erlenmeyer tersebut
disumbat dan dibungkus kertas pada bagian

3
LaboratoriumTeknik Lingkungan 16(2). 1-5
atas serta diikat pada leher erlenmeyer.
Setelah itu, media tersebut dimasukkan ke
dalam autoklaf untuk proses sterilisasi
selama kurang lebih 15 menit. Setelah 15
menit media tersebut diambil dan disimpan/
diinkubasi.
Sebelum melakukan pembuatan media,
semua peralatan yang digunakan harus
steril. Untuk mensterilkan peralatan yang
digunakan khususnya cawan dan tabung
reaksi. Pertama-tama cawan dibungkus
menggunakan kertas. Cara membungkus
cawan memerlukan satu lembar kertas hvs,
jika kertas tersebut mempunyai tulisan maka
bagian tersebut diletakkan di luarnya.
Letakkan cawan petri di tengah-tengah
kertas tersebut kemudian ujung-ujung kertas
tersebut dilipat. Pertemuan kedua ujung
lipatan tadi kemudian satukan. Rapikan
ujung-ujung lipatan kertas yang sudah
disatukan kemudian buatlah bentuk segitiga
pada kedua sisi kertas yang sudah
dilakukan. Setelah itu, periksa kembali hasil
lipatan segitiga tadi kemudian kencangkan
lipatan yang dianggap longgar karena dapat
membuat hasilnya akan kurang rapi jika
lipatannya tidak kencang. Setelah lipatan
segitiga tadi kencang, lipat kebagian bawah
dari cawan petri. Kemudian cawan petri yang
sudah dibungkus simpan di tempatnya atau
disterilisasi.
Untuk sterilisasi tabung reaksi juga perlu
dibungkus, tetapi sebelum dibungkus tabung
reaksi terlebih dahulu mulutnya disumbat
menggunakan kapas sampai berbunyi “plop”
ketika kapas tersebut dibuka. Setelah di
sumbat, tabung reaksi dibungkus
menggunakan kertas. Satu buah kertas hvs
bisa untuk 3 buah tabung reaksi. 3 tabung
reaksi tersebut dibungkus dengan bentuk
piramida di tengah-tengah kertas tersebut
kemudian mempertemukan kedua tepi
kertas tersebut. Kemudian melipat ke dalam
sebanyak dua kali pada pertemuan kertas
tersebut. Setelah itu merapikan ujung-ujung
lipatan kertas yang sudah disatukan
kemudian masing-masing ujung kertas
dilipat masuk ke dalam. Setelah itu
memerikasa kembali hasil lipatan tadi
kemudian mengencangkan lipatan.
Kemudian diberikan ikat karet agar tetap
Desember 2018
kencang. Setelah itu tabung reaksi dapat
disimpan atau sterilisasi.
IV. Kesimpulan
Kesimpulan dari penelitian sterilisasi dan
pembuatan media mikrobia dilakukan untuk
memberikan pelajaran mahasiswa proses
sterilisasi dan tahapan preparasi media
tumbuh mikroba. Hasil penelitian diketahui
bahwa untuk 75 mL akuades diperlukan
media NA sebanyak 1,5 gram dan media
PDA sebanyak 2,92 gram. Sebelum
peralatan untuk pembuatan media
digunakan perlu untuk disterilisasi terlebih
dahulu agar mikroba yang tidak diinginkan
tidak muncul.
V. Daftar Pustaka
Cahyani, V. R. 2009. Pengaruh Beberapa
Metode Sterilisasi Tanah Terhadap
Status Hara, Populasi Mikrobiota,
Potensi Infeksi Mikorisa dan
Pertumbuhan Tanaman.
Jurnal Ilmiah Ilmu Tanah dan Agrokli
matologi. 6(1): 43-52.
Djayasinga, R. 2017. Efktivitas Penggunaan
Voltase Rendah Pada Sterilisasi
Media Biakan Bakteri. Jurnal Farmasi
Lampung. 6(2): 30-37.
Oktavia, A., & Sri W. 2017. Perbandingan
Pertumbuhan Jamur Aspergillus
flavus Pada Media PDA (Potato
Dextrose Agar ) dan Media Alternatif
dari Singkong (Manihot esculenta
Crantz. Jurnal Analis Kesehatan.
6(2): 625-631.
Suriawiria, H. U. 2011. Mikrobiologi Dasar.
Penerbit Papas Sinar Sinanti, Jakarta.
Wongjiratthiti, A., & Yottakot, S. 2017.
Utilisation of Local Crops as
4
LaboratoriumTeknik Lingkungan 16(2). 1-5 Desember 2018

Alternative Media for Fungal Growth.

Pertanika Journals. 40(2): 295-304.