Instrumen Kimia HPLC

06.32 | Diposting oleh bambang

A. Sejarah

Kromatografi ditemukan oleh Tswett pada tahun 1903. D.T. Day  juga menggunakan 
kromatografi untuk memisahkan fraksi-fraksi petroleum, namun Tswett lah yang pertama diakui
sebagai penemu. Dasar kromatografi lapisan tipis (TLC) ditetapkan pada tahun 1938 oleh
Izmailov dan Schreiber, dan kemudian disempurnakan oleh Stahl pada tahun 1958. Hasil karya
yang baik sekali dari Martin dan Synge pada tahun 1941 (untuk ini mereka memenangkan
Nobel) untuk pengembangan kromatografi gas dan kromatografi kertas. Pada tahun 1952 Martin
dan James mempublikasikan makalah pertama mengenai kromatografi gas.Pada akhir  tahun
1960 an, semakin banyak  usaha dilakukan untuk pengembangan kromatografi cair sebagai 
suatu teknik mengimbangi kromatografi gas. High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
telah berhasil dikembangkan dari usaha ini. 
B. Kegunaan
-Untuk pemisahan sejumlah senyawa organik, anorganik, maupun senyawa biologis
—-Analisis ketidakmurnian (impurities)
—-Analisis senyawa-senyawa tidak mudah menguap (non-volatil)
—-Penentuan molekul-molekul netral, ionic, maupun zwitter ion
—-Isolasi dan pemurnian senyawa
—-Pemisahan senyawa-senyawa yang strukturnya hampir sama.
—-Pemisahan senyawa-senyawa dalam jumlah sedikit (trace elements), dalam jumlah banyak
dan dalam skala proses industri. 
C. Jenis-jenis HPLC
-Kromatografi padatan cair (LSC)
—-Kromatografi partisi
—-Kromatografi penukar ion (IEC)
—-Kromatografi eksklusi
—-Kromatografi pasangan ion (IPC) 
D. Prinsip Kerja
Kromatografi merupakan teknik yang mana solute atau zat-zat terlarut terpisah oleh perbedaan
kecepatan elusi, dikarenakan solute-solut ini melewati suatu kolom kromatografi. 

  
 Detektor HPLC 
             Yang umum digunakan adalah detektor UV 254 nm. Variabel panjang
gelombang dapat digunakan  untuk mendeteksi banyak  senyawa dengan
range yang lebih luas. Detektor indeks refraksi juga digunakan secara luas,
terutama pada kromatografi eksklusi, tetapi umumnya kurang  sensitif jika
dibandingkan dengan detektor UV.
Detektor-detektor lainnya antara lain:
eter                    : Senyawa yang mempunyai sifat fluoresen.                      
lndeks               :    Senyawa yang tidak memiliki kromofor
imia               : Senyawa organik yang dapat dioksidasi atau direduksi secara
elektrokimia          
                         :    Senyawa yang mempunyai kromofor spesifik
otometer Massa
  Detektor lonisasi nyala   

      Detektor Reaksi Kimia

      Detektor Nitrogen Phospor (NPD)          
      Detektor penangkap elektron (ECD)

HPLC dengan prinsip kromatografi adsorpsi banyak digunakan

pada industri farmasi dan pestisida. Zat-zat dengan kepolaran berbeda, yaitu
antara sedikit polar sampai polar dapat dipisahkan dengan HPLC
berdasarkan partisi cair-cair. Asam-asam nukleat dapat dipisahkan dengan
kolom penukar ion yang dikombinasikan dengan kolom butiran berlapiskan
zat berpori. Pemakaian HPLC pada kromatografi eksklusi dilakukan dengan
kolom panjang, tujuan utama kerjanya tetap sama yaitu penentuan berat
molekul polimer dan masalah-masalah biokimia. Pada umumnya teknik ini
dapat digunakan pada setiap metode kolom kromatografi