LAPORAN PRAKTIKUM VI

AKTIVITAS SPESIFIK ENZIM α-AMILASE

Nama : Lifiany Annisa (24030116120039)

Kelompok :4
Hari/Tanggal Praktikum : Rabu, 26 September 2018
Asisten : Erlina Haryono

JURUSAN KIMIA
FAKULTAS SAINS DAN MATEMATIKA
UNIVERSITAS DIPONEGORO
SEMARANG
2018
 Daftar isi

I. TUJUAN................................................................................................................4

II. TINJAUAN PUSTAKA.....................................................................................4

2.1 Enzim..............................................................................................................4

2.2 Enzim α-amilase.............................................................................................5

2.3 Aktivitas Spesifik Enzim................................................................................5

2.4 Penentuan Aktivitas Enzim α-amilase............................................................6

2.5 Spektrofotometer UV-VIS..............................................................................6

2.6 Tekhnik Sentrifugasi.......................................................................................6

2.7 Metode Nelson-Soumogyi..............................................................................7

2.8 Metode Lowry.................................................................................................7

2.9 Analisa Bahan.................................................................................................7

2.9.1 Amilum.........................................................................................................7

2.9.2 Glukosa.........................................................................................................7

2.9.3 ZnSO4...........................................................................................................8

2.9.4 Ba(OH)2........................................................................................................8

2.9.5 Akuades........................................................................................................8

2.9.6 Reagen Lowry...............................................................................................8

2.9.7 Buffer Phosfat...............................................................................................8

2.9.8Reagen Nelson-Somougyi.............................................................................9

III. METODE PERCOBAAN................................................................................10

3.1 Alat dan Bahan..............................................................................................10

3.1.1 Alat............................................................................................................10

2
 3.1.2 Bahan..........................................................................................................10

3.2 Cara kerja......................................................................................................10

3.2.1 Penentuan aktivitas enzim α-amilase..........................................................10

3.2.2 Penentuan kadar gula pereduksi dengan metode Nelson-Somougyi..........11

3.2.3 Penentuan kadar protein dengan metode lowry..........................................12

IV. DATA PENGAMATAN..................................................................................13

V. PEMBAHASAN..................................................................................................15

5.2 Penentuan Aktivitas enzim α-amilase...........................................................15

5.2 Penentuan kadar gula pereduksi dengan metode Nelson-Soumogyi............16

5.3 Penentuan kadar Protein dengan Metode Lowry...............................................18

VI. PENUTUP........................................................................................................20

6.1 Kesimpulan........................................................................................................20

6.1.1 Penentuan aktivitas enzim α-amilase dapat di lakukan dengan metode

spektrofotometri menggunakan metode Nelson-soumogyi dan Lowry..............20

6.2 Saran..................................................................................................................20

6.2.1 Sebaiknya teliti dalam mengamati perubahan warna yang terjadi............20

6.2.2 Cuci alat sebelum dan sesudah praktikum..................................................20

6.2.3 Sebelum praktikum sebaiknya praktikan membaca langkah-langkah kerja

terlebih dahulu.....................................................................................................20

DAFTAR PUSTAKA..................................................................................................21

LEMBAR PENGESAHAN.........................................................................................22

PERHITUNGAN.........................................................................................................23

3
 PERCOBAAN 6
AKTIVITAS SPESIFIK ENZIM α-AMILASE

I. TUJUAN
Menentukan aktivitas spesifik enzim α-amilase hasil isolasi dan pemurnian awal.

II. TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Enzim
Enzim merupakan protein yang berfungsi sebagai biokatalis dalam sel
hidup. Enzim telah banyak digunakan dalam bidang industri pangan, farmasi
dan industri kimia lainnya. Dalam bidang pangan misalnya amilase, glukosa-
isomerase, papain, dan bromelin, sedangkan dalam bidang kesehatan
contohnya amilase, lipase, dan protease. Enzim dapat diisolasi dari hewan,
tumbuhan dan mikroorganisme. Kelebihan enzim dibandingkan katalis biasa
adalah : dapat meningkatkan produk beribu kali lebih tinggi; bekerja pada pH
yang relatif netral dan suhu yang relatif rendah; dan bersifat spesifik dan
selektif terhadap subtrat tertentu.
K1 K3
Enzim + substrat Kompleks Enzim + Produk
K2
Kesetimbangan untuk pembentuk adalah :
[ E ] [S]
Km =
[ ES]
Dengan Es adalah kompleks enzim substrat, E adalah enzim, S adalah substrat
, dan Km adalah tetapan kesetimbangan (Azmi, 2006).

4
2.2 Enzim α-amilase
Enzim alfa amilase merupakan salah satu jenis enzim yang berperan
atau berfungsi menghidrolisis atau memecah molekul-molekul pati menjadi
molekul-molekul lain yang lebih sederhana seperti dekstrin, maltosa, dan
glukosa. Mekanisme kerja dari enzim alfa amilase adalah dengan cara
memecah ikatan α-1,4 glikosidik rantai glukan pati. Enzim enzim alfa amilase

bekerja optimum pada pH sekitar 6 dan pada suhu 37oC. Jika suhu
ditingkatkan, pH optimum juga meningkat sampai sekitar 7. Jika α-amilase
berasal dari Bacillus licheniformis maka akan menghidrolisis pati dengan
hasil utama maltoheksosa, malopentosa dengan jumlah glukosa yang lebih
tinggi (8 – 10%). Enzim alfa amilase mampu meningkatkan rasa manis pada
ekstrak sari buah karena aktivitas enzim alfa amilase yang mampu
menghidrolisis pati pada pisang menjadi gula lain yang lebih sederhana
(Darmajana and Agustina, 2008).

2.3 Aktivitas Spesifik Enzim

Aktivitas spesifik hanya dapat digunakan untuk preparat enzim yang
murni, yaitu jumlah satuan enzim per miligram enzim protein, tetapi aktivitas
spesifik dapat pula ditentukan pada enzim tidak murni. Aktivitas spesifik
enzim murni menunjukkan derajat kemurnian enzim dalam suatu sampel.
Bila berat molekul enzim diketahui, maka aktivitasnya dapat
dinyatakan dalam bentuk aktivitas molekular adalah jumlah satuan substrat
permikromol enzim. Atau dapat pula diartikan sebagai jumlah molekul
substrat di ubah setiap menit oleh setiap molekul enzim. Aktivitas molekuler
merupakan sifat enzim individu, jadi dapat dgunakan untuk menentukan
kemurnian enzim seperti halnya aktivitas enzim (Poedjiadi, 1994).

5
2.4 Penentuan Aktivitas Enzim α-amilase
Metode yang digunakan dalam mengukur aktivitas enzim α-amilase
yaitu metode spektrometri. Prosedurnya berupa penentuan produk (glukosa)
dengan bantuan sinar, sesuai hukum lambert-Beer :
-Log T = A = Є . b . c
Dimana : T = transmitansi
A = absorbansi
Є = koefisien ekstingsi molar
b = tebal kuvet
c = konsentrasi
Untuk menentukan banyaknya produk glukosa yang terbentuk dari reaksi
enzimatis maka digunakan kurva standar glukosa. Produk dinyatakan dalam
satuan unit aktivitas yang didefinisikan banyaknya mol glukosa dan reaksi
enzimatis pada kondisi optimum (Hardjono, 2001).

2.5 Spektrofotometer UV-VIS

Secara umum semua molekul dapat menyerap radiasi dalam daerah UV-
VIS karena mereka mengandung elektron yang dapat tereksitasi ke tingkat
energinya yang lebih tinggi. Panjang gelombang yang terjadi tergantung pada
beberapa kuat elektron ini terikat pada molekul. Absorbansi larutan bertambah
dengan penguraian kekuatan sinar, bila konsentrasi materi yang dilewati
cahaya bertambah maka cahaya lebih banyak diserap. Jadi absorbansi
berbanding lurus dengan ketebalan b dan dengan konsentrasi c (Hardjono,
2001).

2.6 Tekhnik Sentrifugasi

Tekhnik sentrifugasi adalah suatu tekhnik pemisahan berdasarkan sifat
partikel dalam medan gaya sentrifugal. Partikel yang berbeda berat jenis,

6
ukuran dan bentuknya mengendap searah dengan gaya sentrifugal dengan
kecepatan berbeda. Partikel yang akan dipisahkan biasanya disuspensi dalam
medium cair yang dimasukan dalam tabung sentrifugal yang dapat
ditempatkan dalam rotasi yang berputar, rotor terletak pada pusat sumbu
simetri (Lehninger, 1999).

2.7 Metode Nelson-Soumogyi

Penentuan aktivitas enzim α-amilase dilakukan dengan metode
spektrofotometri di mana dilakukan penentuan terhadapproduk enzimnya
yaitu glukosa dengan metodeNelson-Soumagyi yang prinsipnya adalah
pemanasan gula dengan larutan alkali dari tembaga tartrat dan terbentuk cupri
oksida (Lehninger,1999).

2.8 Metode Lowry

Protein dengan asam fosfotungstien-fosfomolibdat pada suasana alkali
akan memberi warna biruyang intensitasnya tergantung pada konsentrasi
protein. Larutan A terdiri atas fosfotungstein, fosfomolibdat. Larutan B (2%
Na2CO3 dalam NH4OH 0,1 N, CuSO4 dan Na-K tartrat 2%). Cara
penentuannya adalah sebagai berikut, 1 ml larutan protein ditambah 0,5 ml
lowry B, digojog dan biarkan 20 menit. Selanjutnya diamati OD nya pada λ
yang terpilih. Cara lowry 20 kali lebih sensitif pada cara UV atau buret
(Lehninger, 1999).

2.9 Analisa Bahan

2.9.1 Amilum
Polisakarida yang banyak terdapat dari tumbuhan, dalam bahasa sehari-
hari disebut pati, terdapat pada umbi, daun, batang, dan biji-bijian. Terdiri

7
atas dua macam polisakarida yaitu amilosa dan amilopektin (Poedjiadi,
1994).
2.9.2 Glukosa
- Sifat Fisika : BM :60,16
- Sifat Kimia : larut dalam larutan fehling, tollens dan eter, sulit larut
dalam alkohol, memiliki dua jenis yaitu D-glukosa dan L-glukosa.
(Daintith, 1994)
2.9.3 ZnSO4
- Sifat Fisika : Senyawa kristalis, berwarna putih
- Sifat Kimia : Larut dalam air, dibuat lewat pemanasan bijih zink sulfida
diudara dan melarutkan dan mengkristalisasi sulfatnya.
(Daintith, 1994)

2.9.4 Ba(OH)2
- Sifat Fisika :Padatan putih, titik leleh 780C.
- Sifat Kimia : Sedikit larut dalam air, bentuk yang umum adalah
oktahidrat, monoklinik,.
(Daintith, 1994)
2.9.5 Akuades
- Sifat Fisika : Cairan tak berwarna, titik leleh 00C, titik didih 1000C, tidak
berbau dan tidak berasa.
- Sifat Kimia : Terdiri dari satu molekul H2O dengan ikatan H-OH 1050
(Daintith, 1994)
2.9.6 Reagen Lowry
- Reagen lowry A
Larutan asam phospo-fungatic-phospo-molybdic.
- Reagen lowry B

8
 100 ml 2% Na2CO3 dalam larutan NaOH 0,1 N dengan 1 ml CuSo4.
5H2O 1% dan 1 ml natrium-kalium tartat 2%.
(Sudarmadji, 1997)
2.9.7 Buffer Phosfat
Larutan A = 0,2 M larutan Na-Phospat monobasis (27,8 g dalam 1000 ml)
Larutan B = 0,2 M larutan Na-phosphat dibasis (52,65 g)
(Sudarmadji, 1997)
2.9.8Reagen Nelson-Somougyi
- Reagen A
12 g K.Na tartat : 1,6 g Na-bikarbonat, 14,4 g Na-sulfat anhidrat, 2,4 g
Na-karbonat anhidrat dilarutkan dengan akuades.
- Reagen B
2 g CuSo4.5H2O ditambah 18 g Na2SO4 anhidrat dilarutkan sampai 100
ml (Reagen Nelson Soumogyi : 1 bagian Nelson A + 1 bagian Nelson
A)
(Sudarmadji, 1997)

9
III. METODE PERCOBAAN
3.1 Alat dan Bahan
3.1.1 Alat
1. Tabung reaksi 5. Gelas ukur
2. Sentrifuge 6. Gelas bekker
3. Inkubator 7. Spektrofotometer UV-VIS
4. Pipet tetes
3.1.2 Bahan
1. Sampel enzim 6. CuSO4
2. amilum 7. Buffer fosfat
3. larutan glukosa 8. Reagen Nelson-Soumogyi
4. akuades 9. Reagen Lowry
5. Ba(OH)2

3.2 Cara kerja

3.2.1 Penentuan aktivitas enzim α-amilase

1 ml larutan amilum
Tabung reaksi

Penambahan 0,1 ml larutan enzim

Penambahan 3,9 ml buffer fosfat

Penikubasian pada T = 30,37,40,50,600C

masing-masing selama 20,30,40,50,60 menit.

10
 Hasil
3.2.2 Penentuan kadar gula pereduksi dengan metode Nelson-Somougyi
0,1 ml larutan inkubasi
Tabung reaksi

Penambahan akuades 1,5 ml

Penambahan 0,2 ml larutan Ba(OH)2 0,01 M

Penambahan larutan ZnSO4 0,2 ml 0,01 M

Penggojogan dan sentrifugasi

1 ml supernatan
Tabung reaksi

Penambahan 1 ml reagen Nelson-

Somougyi
Pemanasan selama 15
menit
Pendinginan

Penambahan 1 ml reagen arsenomolibdat

Pengenceran dengan air hingga volume menjadi 10 ml

Penentuan konsentrasi dengan spektrofotometer UV-VIS pada λ = 520 nm

Pengulangan terhadap larutan standar glukosa

11
 Hasildengan metode lowry
3.2.3 Penentuan kadar protein
0,2 ml larutan enzim
Tabung reaksi

Penambahan 1 ml reagen C

Penambahan 0,1 ml reagen D

Pendiaman 30 menit

Pengukuran absorbansi pada λ = 750 nm

Pengulangan terhadap blanko

Hasil

12
IV. DATA PENGAMATAN
No Perlakuan Hasil
1 Penentuan aktivitas enzim α-amilase
1 ml larutan amilum 1% + 0,1 ml enzim + 3,9 ml
buffer fosfat, inkubasi
2 Penentuan kadar gula pereduksi dengan metode
Nelson-Soumogyi
-0,1 ml larutan inkubasi + 1,5 ml akuades + 0,2
ml Ba(OH)2 0,01 M + ZnSO4 0,2 ml 0,01 M,
a. ekstrak kasar Larutan bening
b. fraksi I Larutan bening
c. fraksi II Larutan bening
-1 ml larutan supernatan + 0,8 ml reagen Nelson-
soumogyi, dipanaskan dalam larutan mendidih
selama 15 menit, didinginkan
a. ekstrak kasar Biru
b. fraksi I Biru makin pekat
c. fraksi II Biru

-Penambahan 1 ml larutan arsenomolibdat,

pengenceran
a. ekstrak kasar Kuning kehijauan
b. fraksi I Kuning kehijauan
c. fraksi II Kuning kehijauan
-Penentuan konsensentrasi dengan spektra UV
a. ekstrak kasar -0,052A, -0,016A
b. fraksi I -0,064A, -0,064A
c. fraksi II -0,220A, -0,216A
3 Penentuan kadar Protein metode Lowry
-Penambahan larutan sampel dengan 1 ml reagen
C, kocok
a. ekstrak kasar -Biru tua
b. fraksi I -Biru tua
c. fraksi II -Biru tua

-Penambahan 0,1 ml reagen D, kocok

a. ekstrak kasar -Biru tua makin
b. fraksi I gelap
c. fraksi II -biru tua makin
gelap

13
-Pengukuran absorbansi -biru tua makin gelap
a. λ max
b. ekstrak kasar
c. fraksi I 750 nm
d. fraksi II 0,025 A, 0,021 A
0,014 A, 0,011 A
0,009 A, 0,012 A

14
V. PEMBAHASAN
Percobaan aktivitas spesifik enzim α-amilase bertujuan untuk
menentukan aktivitas spesifik enzim α-amilase hasil isolasi dan pemurnian
awal. Sampel yang digunakan adalah tempe yang mengandung enzim α
amilase. Enzim merupakan protein yang berfungsi sebagai biokatalis dalam
sel hidup. Enzim α-amilase merupakan enzim yang dapat menguraikan
amilum dengan memutuskan ikatan α-1,4 glikosida dalam pati secara acak
dari bagian dalam molekul, baik pada amilase maupun amilopektin. Enzim

enzim alfa amilase bekerja optimum pada pH sekitar 6 dan pada suhu 37oC.
Prinsip percobaan ini adalah Penentuan aktivitas spesifik enzim α-amilase
secara spektrofotometri. Metode pada percobaan ini yaitu metode Nelson
Somougyi yaitu penentuan kadar gula pereduksi, Metode Lowry yaitu
penentuan kadar protein, dan metode spektrofotometri (pengukuran
absorbansi).
5.2 Penentuan Aktivitas enzim α-amilase
Percobaan ini bertujuan untuk menentukan aktivitas spesifik enzim α-
amilase hasil isolasi dan pemurnian awal menggunakan metode inkubasi.
Tujuan isolasi enzim adalah untuk mengendapkan protein di dalam tempe
menjadi ekstrak kasar, fraksi 1 dan fraksi 2, dengan asumsi ada juga protein
enzimatik. Digunakan amilum karena enzim α-amilase dapat menghidrolisis
amilum. Fungsi penambahan buffer PO4 adalah sebagai larutan penyangga
agar pH-nya tetap. Di mana aktivitas α-amilase berada pada range pH 5,4-6,4,
maka digunakan buffer PO4 dengan pH 6,1 (buffer asam), di mana pH ini
merupakan pH optimum aktivitas α-amilase. Jika pH-nya di atas pH optimum
maka enzim akan mengalami deprotonasi atau perubahan pH baik di atas
maupun di bawah pH optimum akan menyebabkan enzim terdenaturasi,
sehingga aktivitas enzim menurun.

15
 Campuran diinkubasi pada suhu 370C karena suhu tersebut merupakan
suhu optimum aktivitas enzim α-amilase. Hal ini sebanding dengan energi
aktivasi (Ea) untuk setiap enzim membentuk kompleks enzim-substrat dan
kemudian membentuk produk dan enzim kembali. Jika suhu inkubasi lebih
tinggi maka protein akan terdenaturasi yang mengakibatkan aktivitas enzim
menurun. Begitu pula jika diinkubasi pada temperatur yang lebih rendah maka
aktivitas enzim α-amilase kurang optimal.

5.2 Penentuan kadar gula pereduksi dengan metode Nelson-Soumogyi

Percobaan ini betujuan untuk penentuan kadar gula pereduksi dengan
menggunakan metode Nelson-Soumogyi. Penentuan kadar gula pereduksi
merupakan wujud dari uji aktifitas enzim α-amilase. Aktivitas enzim
merupakan unit aktivitas enzim permiligram protein, sedangkan satu unit
aktivitas enzim α-amilase merupakan aktivitas enzim yang menyebabkan
terbentuknya 1µmol produk glukosa dari substrat amilum persatuan waktu
inkubasi pada kondisi temperatur dan PH tertentu. Uji aktivitas spesifik enzim
α-amilase diawali dengan reaksi enzimatis, yaitu dengan menambahkan
larutan amilum 1% dan buffer fosfat ke dalam enzim kasar dan enzim halus.
E + S ES E + P
Enzim αsubstrat enzim-substrat enzim produk
Pada reaksi enzimatis diperlukan proses inkubasi, dimana pada proses
inkubasi ini terjadi kontak antara enzim α-amilase dengan substrat dalam
membentuk produk yaitu glukosa. Reaksi :

CH 2OH CH2 OH
O
alf a - amilase
OH O OH O + Buf f er Fosf at
O
OH OH

16
 CH2 OH CH2 OH CH 2OH
O O
OH OH
OH O OH OH
HO HO
OH OH OH

Maltosa Glukosa
Kadar gula pereduksi dapat ditentukan dengan metode Nelson-
Soumogyi. Penambahan larutan Ba(OH)2 bertujuan untuk meminimalisasi
masuknnya oksigen dari luar ke dalam larutan yang dapat mengoksidasi kupri
oksida (Cu2O) dan penambahan ZnSO4 bertujuan untuk mengendapkan
protein. Larutan yang terbentuk ditambahkan reagen Nelson-Soumogyi dan
dipanaskan (dengan tujuan untuk mempercepat reaksi). Penambahan reagen
Nelson-Soumogyi menyebabkan terbebtuknya kupri oksida. Reagen Cu-tartrat
akan direduksi oleh glukosa, hal ini karena glukosa mempunyai gugus gula
pereduksi, yaitu gugus aldehid.
Reaksi reduksi Cu2+ :
Cu2+ + e Cu2+
Ion Cu+ akan mengendap sebagai Cu2O dalam suasana basa :
2 Cu + + 2 OH- Cu2O + H2O
Reaksi terbentuknya kupri oksida :
CHO CHO
H C OH H C OH
OH C H
Cu2+ OH C H
+ Cu2O
H C OH Alkali
H C OH
H C OH H C OH
CH 2OH CH 2OH

Glukosa asam D-glukonat

Metode Nelson-Soumogyi menganalisa secara kuantitatif. Produk reaksi
enzimatis berupa glukosa, akan tetapi metode ini memiliki kekurangan karena
gula non pereduksi (sukrosa) tidak dapat terdeteksi dan hanya bisa mendeteksi
gula pereduksi (glukosa-fruktosa) padahal produk dari pemecahan amilum

17
 oleh enzim α-amilase bukan glukosa melainkan maltosa, sukrosa dan gula non
pereduksi yang lain.
Gula dapat direduksi dengan sinar UV karena memiliki elektron-
elektron yang dapat tereksitasi dari keadaan dasar ketingkat energi yang lebih
tinggi. Biasanya transisi elektron disebabkan oleh elektron π dimana dalam
molekul glukosa mengandung gugus karbonil yang dibentuk oleh elektron π.
Penentuan kadar glukosa dilakukan dengan mengukur absorbansi
larutan tersebut dengan menggunakan spektrofotometer UV-VIS pada λ 660
nm. Panjang gelombang 660 nm ini merupakan panjang gelombang
maksimum, dimana terjadi serapan maksimum oleh larutan glukosa. Kadar
gula pereduksi ditentukan dengan membandingkan absorbansi larutan sampel
terhadap kurva larutan standar glukosa.
Pengukuran absorbansi dilakukan 2 kali. Absorbansi sampel yang
pertama diperoleh yaitu pada fraksi I adalah –0,064, fraksi II adalah -0,220,
dan untuk enzim kasar -0,052. Absorbansi yang kedua diperoleh yaitu pada
fraksi I adalah -0,064, fraksi II adalah -0,216, dan untuk enzim kasar adalah
-0,016. Dari hasil perhitungan diperoleh glukosa pada ekstrak kasar yaitu
-0,016889574 mg/ml, fraksi 1 yaitu -0,029749657 mg/ml, dan fraksi 2 yaitu
-0,095764746 mg/ml.

5.3 Penentuan kadar Protein dengan Metode Lowry

Percobaan ini bertujuan untuk menentukan kadar protein dari larutan
sampel enzim (tempe). Metode yang digunakan adalah metode lowry.
Penentuan kadar protein dengan metode lowry didasarkan pada warna
kompleks yang yang dibentuk yang intensitas warnanya bervariasi
berdasarkan jenis protein atau jumlah asam amino aromatik pada protein.
Warna yang timbul disebabkan oleh reaksi tembaga alkali dengan protein
seperti dalam tes Biuret dan reduksi fosfomolibdat oleh tirosin dan triptofan

18
yang terdapat dalam protein. Intensitas warna tergantung pada jumlah asam-
asam amino aromatik yang ada dan bisa bervariasi untuk protein yang
berbeda.
Reagen yang digunakan reagen Folin Ciocalteu yang merupakan
campuran natrium tungstat dan natrium molibdat dalam asam. Campuran
asam ini akan mereduksi protein yang digunakan dalam percobaan melalui
penguraian Cu2+ sehingga campuran asam ini kehilangan satu atau lebih atom
oksigen dan kompleks biru yang dihailkan merupakan kompleks antara
protein dengan Cu2+.
Struktur kompleks biru :
HN NH
R CH C O
Cu2+
O C HC R
HN NH

Penentuan kuantitatif kadar protein secara lowry didasarkan pada

absorbansi sinar oleh kompleks biru. Absorbansi diukur dengan menggunakan
spektrofotometri UV-VIS. Pengukuran absorbansi dilakukan 2 kali.
Absorbansi sampel yang pertama diperoleh yaitu pada fraksi I adalah 0,014,
fraksi II adalah 0,009, dan untuk enzim kasar 0,025. Absorbansi yang kedua
diperoleh yaitu pada fraksi I adalah 0,011, fraksi II adalah 0,012, dan untuk
enzim kasar adalah 0,021. Dari perhitungan kita memperoleh protein dari
ekstrak kasar yaitu -511,67 mg/ml, fraksi 1 yaitu -686,67 mg/ml, dan fraksi 2
yaitu -720 mg/ml.

19
 VI. PENUTUP

6.1 Kesimpulan
6.1.1 Penentuan aktivitas enzim α-amilase dapat di lakukan dengan metode
spektrofotometri menggunakan metode Nelson-soumogyi dan Lowry.

6.2 Saran
6.2.1 Sebaiknya teliti dalam mengamati perubahan warna yang terjadi.
6.2.2 Cuci alat sebelum dan sesudah praktikum.
6.2.3 Sebelum praktikum sebaiknya praktikan membaca langkah-langkah
kerja terlebih dahulu.

20
 DAFTAR PUSTAKA
Azmi. 2006. Penentuan Kondisi Optimum Fermentasi Aspergillus Oryzae Untuk
Isolasi Enzim Amilase Pada Medium Pati Biji Nangka. Pekanbaru:
Laboratorium Kimia Jurusan PMIPA FKIP Universitas Riau.
Daintith. 1994. Kamus Lengkap Kimia. Jakarta: Erlangga.
Darmajana And Agustina. 2008. Pengaruh Konsentrasi Enzim α-Amilase
Terhadap Sifat Fisik Dan Organoleptik Filtrat. Subang: Balai Besar
Teknologi Tepat Guna – Lipi.
Hardjono. 2001. Spekstroskopi. Yogyakarta: Liberty.
Lehninger. 1999. Biokimia Dasar. Jakarta: Erlangga.
Poedjiadi. 1994. Dasar-dasar Biokimia. Jakarta: UI Press.
Sudarmadji, S, B. Haryono dan Suhardi. 1997. Prosedur Analisa Untuk Bahan
Makanan dan Pertanian Edisi Keempat. Yogyakarta: Liberty

21
 LEMBAR PENGESAHAN
Semarang, 25 September 2018
Mengetahui,

Asisten Praktikan

Erlina Haryono Lifiany Annisa

24030115130097 24030116120039

22
 PERHITUNGAN

1. Perhitungan gula pereduksi (glukosa)

Diketahui :
- Y = ax + b ( y adalah absorbansi)
Y = 0,0108 x + 0,0054
- V. Enzim : 0,1 ml
- V. Sampel : 1 ml
- V. Analit : 2 ml
- V. Total : 5 ml
(−0,052+ (−0,016 ))
- Absorbansi ekstrak kasar : =−0,034
2
(−0,064 + (−0,064 ))
- Absorbansi fraksi 1 : =−0,064
2
(−0,220+ (−0,216 ) )
- Absorbansi fraksi 2 : =−0,218
2
- Waktu inkubasi : 30 menit
- BM glukosa : 180 g/mol
Ditanya : x.....?
Dijawab :
a. Ekstrak kasar

X =

y−b Volume total Volume sampel 1 1

× × × ×
a volume enzim volume analit BM glukosa waktuinkubasi
−0,034−0,0054 5 mL 1 mL 1 1
= × × × ×
0,0108 0,1mL 2 mL 180 g /mol 30 menit
= -0,016889574 mg/ml
b. Fraksi 1

23
 X =
y−b Volume total Volume sampel 1 1
× × × ×
a volume enzim volume analit BM glukosa waktuinkubasi

−0,064−0,0054 5 mL 1 mL 1 1
= × × × ×
0,0108 0,1mL 2 mL 180 g /mol 30 menit

= -0,029749657 mg/ml

c. Fraksi 2

X =
y−b Volume total Volume sampel 1 1
× × × ×
a volume enzim volume analit BM glukosa waktuinkubasi

−0,218−0,0054 5 mL 1 mL 1 1
= × × × ×
0,0108 0,1 mL 2 mL 180 g/ mol 30 menit

= -0,095764746 mg/ml

2. Perhitungan kadar protein

Diketahui :
- Y = m x + c ( y adalah absorbansi)
Y = 0,0006 x + 0,0537
0,025+0,021
- Absorbansi ekstrak kasar : =0,023
2
0,014+0,011
- Absorbansi fraksi 1 : =0,0125
2
0,009+0,012
- Absorbansi fraksi 2 : =0,0105
2
- Faktor pengenceran : 10 kali
Ditanya : x......?
Dijawab :
a. Ekstrak kasar

24
 y−c
X = × fp
m
0,023−0,0537
= ×10
0,0006
= -511,67 mg/ml
b. Fraksi 1
y−c
X = × fp
m
0,0125−0,0537
= ×10
0,0006
= -686,67 mg/ml

c. Fraksi 2
y−c
X = × fp
m
0,0105−0,0537
= ×10
0,0006
= - 720 mg/ml

3. Aktivitas enzim spesifik

kadar glukosa
Aktivitas enzim spesifik =
kadar protein
a. Ekstrak kasar
−0,016889574
Aktivitas enzim spesifik =
−511,67
= 0,000033
b. Fraksi 1
−0,029749657
Aktivitas enzim spesifik =
−686,67
= 0,000043
c. Fraksi 2

25
 −0,095764746
Aktivitas enzim spesifik =
−720
= 0,000133

26