ISOLASI DNA HEWAN

Alat

- Microtube 1,5 ml (ependorf)

- Inkubator 4˚C (Freezer)
- Waterbath
- Timbangan analitik
- Vortex
- Inkubator
- Micropipette
- Mortar dan pastel
- Tip
- Sentrifuse

Bahan
- GsyncTM DNA Extraction Kit
- Bulu ayam, itik, dan unggas lain

Cara Kerja
a. Sampel bulu sebanyak lima helai dipotong ujungnya sepanjang 1 mm, yaitu pada
bagian calamus.
b. Sampel bulu yang telah dipotong-potong dimasukkan kedalam microtube 1,5 ml dan
ditambahkan 200ul GST buffer dan20ul Proteinase-K.
c. Campuran dihomogenkan menggunakan vorteks dan diinkubasi pada suhu 60˚C
selama 1 jam.
d. Setiap 5 menit, sampel divortex
e. Setelah itu, ditambahkan 200ul GSB Buffer dan divortex kembali.
f. Selanjutnya, campuran tersebut diinkubasi pada suhu 60˚C selama 20 menit dansetiap
5 menit sampel divortex.
g. Sampel disentrifugasi padakecepatan 3.000 g selama 5 menit.
h. Supernatan diambil dan ditambahkan 200ul ethanol absoluter dingin dan
dihomogenkan menggunakan vorteks.
i. Suspensi tersebut dipindahkan ke dalam column dan collection tube.
j. Sentrifugasi 12.000 g selama1 menit.
k. Cairan yang berada di collection tube dibuang dan dipasang lagi.
l. Selanjutnya ditambahkan 400ul Nash buffer I pada suspensi dan disentrifugasi 12.000
g selama 1 menit.
m. Cairan yang berada dicollection tube dibuang dan dipasang lagi. Setelah itu,
ditambahkan 600ul wash buffer II pada suspensi dan disentrifugasi 12.000 g selama 4
menit.
n. Collection tube dibuang dan column dipindah ke microtube 1,5 ml.
o. Suspensi pada column ditambahkan 100ul elution buffer dan diinkubasi pada suhu
ruang selama 3 menit.
 p. Suspensi disentrifugasi 12.000 g selama 30 detik.
q. Column dibuang dan DNA disimpan pada microtube 1,5 mlpada suhu -20˚C.

Fungsi bahan kimia

a. GST buffer berfungsi untuk menghancurkan jaringan pada sampel.
b. Proteinase K digunakan untuk menghancurkan protein pada sampel.
c. GSB buffer digunakan untuk merusak atau melisis sel dan RNA.
d. Ethanol absolute dingin digunakan untuk presipitasi atau pemurnian DNA.
e. Wash buffer untuk mencuci DNA dari pengotor.
f. Elution buffer yang berfungsi untuk mengikat pengotor selain DNA agar DNA
terpisah sempurna dari pengotor.

Link Video

https://www.youtube.com/watch?v=lruyGq5DX4M

https://www.youtube.com/watch?v=0HrhN-ixFpA