Pemisahan simultan dari kation dan anion dengan elektroforesis kapiler dengan deteksi
konduktivitas contactless menggunakan manifold analisis injeksi berurutan untuk
manipulasi fleksibel sampel colokan
Thanh Duc Maia,b,Peter C. Hausersebuah,*
University of Basel, Departemen Kimia, Spitalstrasse 51 , 4056 Basel, Swiss b Pusat Teknologi Lingkungan dan Pembangunan Berkelanjutan (CETASD), Universitas Sains Hanoi, Jalan Nguyen
Trai 334, Hanoi, Vietnam
articleinfo
Sejarah artikel: Tersedia online 11 April 2012
Kata kunci: Separasi elektroforesis kapiler simultan (CE) Capacitive ditambah deteksi
contactless konduktivitas (C4D) analisis injeksi sequential (SIA) Ganda akhir injeksi
tunggal
abstrak
skema yang berbedauntuk pemisahan simultan dari kedua kation dan anion
dilaksanakan di capil- elektroforesis lary menggunakan manifold analisis
injeksi berurutan untuk manipulasi fleksibel elektrolit latar belakang dan
sampel. Penggunaan konduktivitas tanpa kontak memungkinkan deteksi
sensitif dalam kapiler sempit berdiameter internal 10 m, yang pada
gilirannya memungkinkan penggunaan pompa hidrodinamik tanpa penalti
yang signifikan dalam dispersi yang disebabkan oleh sifat laminar dari
aliran. Hal ini memungkinkan untuk menempatkan sumbat sampel pada
tempat yang diinginkan di sepanjang kapiler sebelum pemisahan
elektroforetik atau untuk melakukan pemompaan bersamaan selama
pemisahan itu sendiri untuk optimisasi resolusi. Juga diimplementasikan
adalah injeksi dual-end tunggal, injeksi dua colokan sampel dari satu ujung
kapiler, dan ukuran kecil dari detektor konduktivitas tanpa kontak
memungkinkan penggunaan bersamaan dua sel pada titik yang berbeda di
sepanjang kapiler untuk menambah fleksibilitas. Yang sama
dipertimbangkan adalah efek dari nilai pH elektrolit latar belakang karena
hal ini sangat mempengaruhi aliran elektroosmotik, yang juga berpengaruh
pada protokol yang akan digunakan. Untuk reproduksibilitas dual-end
injeksi tunggal dalam waktu pemisahan sekitar 1-3% diperoleh dan daerah
puncak dapat direproduksi dalam waktu sekitar 3-5% (keduanya standar
deviasi). Batas deteksi untuk ion anorganik semuanya sekitar 1 M.
© 2012 Elsevier BV Semua hak dilindungi undang-undang.
1. Pendahuluan
Pengembangan metode yang memungkinkan pemisahan simultan
spesies anionik dan kationik dalam elektroforesis kapiler (CE) sangat
diminati karena jika tidak untuk sampel di mana analit dari kedua
muatan harus ditentukan, diperlukan dua putaran terpisah. Ini paling
sering menyiratkan perubahan elektrolit latar belakang dengan
rekondisi kapiler yang terkait. Pendekatan sederhana adalah dengan
menggunakan kondisi di mana aliran elektroosmotik tinggi (EOF)
hadir (pada nilai pH tinggi) sehingga anion dan kation tersapu dalam
arah yang sama menuju detektor [1-4]. Pendekatan lain adalah
kompleksasi spesies kationik dengan senyawa chelat untuk
mendapatkan spesies bermuatan negatif, yang dapat dipisahkan dengan
cara konvensional bersama-sama dengan analit anionik [5-11]. Teknik
terakhir dan sejauh ini yang paling sering dilaporkan, disebut “injeksi
ujung ganda”, diperkenalkan oleh Kuban dan Karlberg dan
menerapkan injeksi sampel ke kedua ujung kapiler, dengan deteksi
yang terjadi di dekat pusat kota. kapiler [12]. Aplikasi terbaru dari
teknik ini adalah
∗ Penulis yang sesuai. Tel .: +41 61 267 1003; faks: +41 61 267 1013.
Alamat email: Peter.Hauser@unibas.ch (PC Hauser).
dilaporkan oleh Nehmé et al. [13], yang lain dapat dilacak melalui
ulasan yang berbeda [14-16]. Metode-metode ini, bagaimanapun,
memiliki batasan yang berbeda, terutama resolusi terbatas untuk kation
atau anion untuk teknik pertama, penerapan hanya untuk ion alkali
tanah dan logam transisi untuk yang kedua, dan kurangnya otomatisasi
dan adaptasi untuk instrumentasi komersial CE saat ini untuk
pendekatan terakhir, masing-masing.
Instrumen CE konvensional memberikan batasan lebih lanjut karena
detektor UV standar tidak cocok untuk penentuan ion anorganik, yang
sebagian besar tidak menyerap dalam kisaran UV. Oleh karena itu
metode tidak langsung umumnya digunakan yang membuat optimasi
elektrolit latar belakang sulit untuk penentuan konsentrasi dan anion.
Deteksi konduktivitas di sisi lain sangat cocok untuk penentuan
langsung kedua jenis ion. Dalam bentuk kapasitif ditambah contactless
deteksi tivity conduc- (C4D) metode ini memang berulang kali telah
digunakan untuk penentuan simultan kation dan anion [13,17-
23],menggunakan teknik dual injection berlawanan-end. Dibandingkan
4
dengan detektor optik menggunakan UV-radiasi, C D sepenuhnya
elektronik dan kurang menuntut dalam konstruksi dan konsumsi daya.
Susunan tubulus aksial dari elektroda memungkinkan penyesuaian
tepat dan cepat dari titik deteksi hanya dengan menggerakkan sel
detektor di sepanjang kapiler. Berbeda dengan deteksi optik
0021-9673 / $ - lihat materi depan © 2012 Elsevier BV Semua hak dilindungi undang-
j an kami l an e: ngawww.elsevier.com/locate/chroma
Jurnal Kromatografi A, 1267 (2012) 266-272
Daftar isi tersedia di SciVerse ScienceDirect
Journal of Chromatography, A
TD Mai, PC Hauser / J. Chromatogr. A 1267 (2012) 266-272 267
tidak perlu untuk membuat jendela optik ke dalam lapisan polimer
kapiler silika leburan yang digunakan. Diskusi aplikasi eral gen- dari
C4D untuk CE dapat ditemukan dalam ulasan yang berbeda [24-29]
sedangkan untuk rincian mendasar merujuk ke [30-36].Keuntungan
lain yang luar biasa dari C 4D lebih detektor optik yang memungkinkan
deteksi sensitif dalam saluran pemisahan dengan diameter internal
sesedikit 10 m. Penggunaan kapiler sempit pada CE diinginkan karena
hal ini mengarah pada resolusi yang lebih baik karena pengurangan
pemanasan Joule, dan juga memungkinkan superimposisi pemompaan
hidrodinamik selama pemisahan elektroforetik tanpa perluasan pita
yang signifikan karena aliran laminar [37,38].
Penggunaan bermacam-macam analisis sekuensial-injeksi (SIA)
berdasarkan pompa jarum suntik dan katup multi-posisi untuk
pembilasan dan injeksi juga merupakan alternatif yang menarik untuk
instrumen konvensional dan sarana untuk miniaturisasi, otomatisasi,
dan perpanjangan CE. Salah satu kemungkinan adalah, misalnya,
pemisahan yang sangat cepat pada kapiler pendek [39,40], yang sangat
sulit diimplementasikan dalam instrumentasi CE konvensional.
Aplikasi kombinasi SIA-CE diringkas dalam [41] dan [42]. Manifold
SIA menunjukkan kemampuan yang sangat baik untuk kontrol presisi
presurisasi tidak hanya untuk injeksi hidrodinamik tetapi juga selama
pemisahan elektroforesis. Baru-baru ini Mai dan Hauser menggunakan
SIA- CE-C4sistem D untuk pemisahan berikutnya tanpa pengawasan
dari kation dan anion [43].Sistem ini juga digunakan untuk
menumpangkan aliran hidrodinamik dalam kapiler sempit selama
pemisahan dengan elektroforesis zona untuk mengoptimalkan resolusi
dan waktu analisis kation [38] dan anion [37]. Itu juga ditemukan
mungkin untuk menggunakan tekanan untuk pembalikan aliran
elektroosmotik dalam penentuan anion [37]. Di sini, skema novel yang
berbeda untuk pemisahan simultan otomatis dan deteksi kation dan
anion yang menggunakan pemompaan hidrodinamik sebagai proses
tambahan dalam elektroforesis zona kapiler disajikan.
2. Eksperimental
2.1. Bahan kimia dan bahanbahan
Semuakimia bersifat analitik atau reagen dan dibeli dari Fluka (Buchs,
Swiss) atau Merck (Darmstadt, Jerman), kecuali untuk 2-amino-1-
butanol dan 1-amino-2-propanol yang diperoleh dari Lancaster
(Morecambe, Inggris). Larutan stok 10 mmol L -1 digunakan untuk
persiapan standar anion anorganik dan organik, menggunakan garam
natrium atau kalium. Kation anorganik dibuat dari garam peredam.
Sebelum digunakan, kapiler didahului dengan 1 M NaOH selama 10
menit dan air deionisasi selama 10 menit sebelum disiram dengan
buffer. Air deionisasi yang dimurnikan menggunakan sistem dari
Millipore (Bedford, MA, USA) digunakan untuk persiapan semua
solusi.
2.2. Instrumentasi
undang. http://dx.doi.org/10.1016/j.chroma.2012.04.005
Diagram disederhanakan dari instrumen yang dilengkapi dengan dua
detektor diberikan pada Gambar. 1. Bagian SIA terdiri dari pompa
jarum suntik (Cavro XLP 6000) yang dilengkapi dengan jarum suntik
1 mL dan katup pemilihan saluran 6-port (Cavro Smart Valve)
(keduanya dibeli dari Tecan, Crailsheim, Jerman). Untuk
menghubungkan manifold SIA ke bagian CE, digunakan antarmuka
yang dibuat berdasarkan pada dua persimpangan-T yang berurutan
[43]. Katup isolasi yang digunakan untuk bertekanan, yang terletak di
outlet antarmuka, diperoleh dari pencarian NR (HP225T021,
Gümligen, Swiss). Catu daya tegangan ganda polaritas tinggi
(Spellman CZE2000, Pulborough, UK) dengan ±tegangan output
maksimum30 kV dan kapiler silika leburan berpelapis polimida
berukuran 365 m OD (dari Polymicro, Phoenix, AZ, USA)
digunakan untuk semua percobaan CE. Tekanan fluida dipantau
sejalan dengan sensor dari Honeywell (24PCFFM6G, dibeli dari
Distrelec, Uster, Swiss). Deteksi dilakukan dengan satu atau dua C 4D-
sistem yang dibangun di-rumah dilengkapi dengan 3,9 M umpan balik
resis- tor dan diposisikan pada titik-titik yang berbeda di sepanjang
kapiler. Detail tentang detektor ini dapat ditemukan di tempat lain [44].
Sistem akuisisi data 201 e-corder (eDAQ, Denistone East, NSW,
Australia) digunakan untuk merekam sinyal detektor. Paket
pemrograman LabVIEW (versi 8.0 untuk Windows XP, dari National
Instruments, Austin, TX, USA) digunakan untuk menulis kode kontrol.
Rincian lebih lanjut tentang instrumentasi dapat ditemukan dalam
publikasi sebelumnya [37,38,43].
2.3. Operasi
Semua operasi, termasuk pengkondisian kapiler, pembilasan, aspirasi
dan injeksi sampel hidro-dinamis, tekanan serta pemisahan dan
akuisisi data dilaksanakan secara otomatis. Rincian lebih lanjut tentang
prosedur khas dapat ditemukan dalam publikasi sebelumnya [43].
Secara singkat, untuk bertekanan untuk melakukan pemisahan
elektroforesis berbantuan tekanan, pembilasan kapiler dan pengiriman
steker sampel di sepanjang kapiler, kedua katup isolasi (dideskripsikan
sebagai V1 dan V2 pada Gambar. 1) ditutup saat memajukan jarum
suntik yang digerakkan oleh motor stepper. pompa dengan kenaikan
yang sesuai. Pembilasan antarmuka dicapai dengan membuka kedua
katup isolasi selama pemompaan. Hydrodynamic split-injection
diimplementasikan dengan memompa colokan sampel yang ditentukan
melewati kapiler in di antarmuka SIA-CE sementara sebagian
menekan manifold dengan menutup hanya V2, dengan rasio
pemisahan yang diinginkan diperoleh dengan menggunakan dua
polieter eter keton (MENGINTIP) tabung yang berbeda diameter dan
panjang bagian dalam. Rincian lebih lanjut tentang teknik injeksi ini
dapat ditemukan di [37]. Pemisahan dilakukan dengan penerapan
tegangan tinggi polaritas yang sesuai pada ujung detektor, sedangkan
ujung injeksi tetap membumi sepanjang
4
waktu.C Sel-seltidak
terpengaruh oleh pengaturan terbalik ini.
3. Hasil dan diskusi
 4 dilakukan dengan buffer pH 6, yang memberikan EOF kuat sedang ke
Penggunaan CE-C D dengan pompa hidrodinamik menawarkan
berbagai kemungkinan yang dapat dieksploitasi untuk pemisahan arah katoda, set kedua dengan buffer pH 4 dengan EOF rendah.
anion dan kation simultan yang dioptimalkan. Pertama, dimungkinkan Kapiler dengan diameter internal 10 m digunakan karena ini
untuk melakukan pemompaan hidrodinamik bersamaan selama proses memberikan hasil terbaik dalam hal resolusi dan toleransi untuk
elektroforesis seperti yang ditunjukkan untuk kation [38] dan anion pemompaan hidrodinamik. Beberapa data kuantitatif tentang efek
[37] sendiri. Kedua, sumbat sampel dapat ditempatkan pada posisi diameter dan laju aliran dapat ditemukan dalam publikasi kami
yang diinginkan di sepanjang kapiler dengan memompa secara sebelumnya [37,38].
terkontrol sebelum dimulainya pemisahan elektroforetik. Ketiga, biaya
4 3.1. Pemisahan serentak pada pH 6
rendah dan ukuran kecil C D memungkinkan posisi dari satu atau lebih
sel detector di setiap tempat yang diinginkan di sepanjang kapiler
[45].Berbagai pendekatan diselidiki memanfaatkan parameter operasi 3.1.1. Injeksi tunggal dengan pemompaan hidrodinamik bersamaan.
variabel ini. Faktor selanjutnya adalah nilai pH buffer karena ini sangat Seperti yang dibahas dalam pendahuluan, pendekatan paling sederhana
mempengaruhi EOF, yang pada gilirannya memiliki pengaruh kuat untuk pemisahan anion dan kation bersamaan adalah dengan
pada mobilitas efektif ion dan pemisahannya. Set percobaan pertama menggunakanEOFtinggi
Mai268 TD, PC Hauser / J. Chromatogr. A 1267 (2012) 266-272

Gambar. 1. Gambar skematis dari sistem SIA-CE-C4D dengan detektor konduktivitas nirkontak ganda untuk pemisahan kation dan anion secara bersamaan. C 4D: detektor konduktivitas tanpa
kontak; HV: catu daya tegangan tinggi; W: limbah; dan V1, V2: berhenti katup.

sehingga anion dan kation tersapu dalam arah yang sama ke arah dalam 3 menit. Perhatikan bahwa urutan anion berlawanan dengan
detektor. Namun, ini membutuhkan penggunaan elektrolit latar mobilitas mereka, dengan anion yang lebih lambat tiba lebih awal di
belakang (BGE) dengan nilai pH lebih tinggi dari 8 atau 9. Hal ini detektor. Paling tidak untuk beberapa ion, ada korelasi yang jelas dari
dapat menyebabkan masalah, dalam hal penyerapan CO2 dari udara ke ketinggian puncaknya dan mobilitasnya yang bergantung pada
dalam buffer pada pH tinggi dapat menyebabkan ketidakstabilan dasar ukurannya, yang diharapkan untuk deteksi konduktivitas karena
keduanya, pemisahan dan deteksi didasarkan pada sifat dasar yang
saat menggunakan C4D, dan juga banyak kation logam akan
sama. Bentuk tiga sudut puncak untuk beberapa ion adalah karena
mengendap sebagai hidroksida. Hal ini juga tidak akan bekerja untuk
elektrodispersi dan fitur umum dari elektroforesis zona kapiler.
amina yang tidak akan terprotonasi dalam kondisi seperti itu, dan
dengan demikian tidak akan cocok untuk jatah sepa- dan deteksi di
CE-C4D. Sebuah alternatif untuk teknik ini adalah kerja dari aliran 3.1.2. Injeksi tunggal dengan pemosisian sumbat sampel
hidrodinamik tekanan-induced untuk memaksa semua kation dan anion
Pendekatan yang disebutkan di atas dengan bantuan tekanan tidak
bergerak ke titik detektor. Operasi ini, mirip dengan yang dilaporkan
berlaku untuk anion migrasi cepat, karena terlalu besar tekanan harus
untuk CE yang dibantu tekanan untuk kation atau anion saja [37,38],
digunakan untuk mendorong mereka ke arah katoda, yang pada
dapat dengan mudah dilakukan dengan fungsi pemompaan unit SIA.
gilirannya akan mengurangi waktu tinggal dari kation di medan listrik
Pemisahan simultan dari beberapa amina organik dan asam karboksilat
yang menyebabkan pemisahan yang tidak memadai. Untuk mengatasi
menggunakan teknik ini ditunjukkan pada Gambar. 2. Buffer dari asam
keterbatasan ini, teknik lain diselidiki, menggunakan tekanan untuk
2- (N-morpholino) ethanesulphonic dan histidine (MES / His) pada pH
mengirimkan sumbat sampel ke posisi yang diinginkan di sepanjang
6 memastikan bahwa kedua kelas spesies hadir dalam bentuk
kapiler sebelum melakukan elektroforesis, tanpa memaksakan aliran
bermuatan mereka. Tekanan 2,2 bar cukup untuk menggerakkan
hidrodinamik.
semua kation dan anion dari ujung yang dibumikan ke ujung tegangan
Operasi semacam itu diilustrasikan pada Gambar. 3. Dalam mode ini,
4
tinggi kapiler. Dua C D-sel dipekerjakan. Salah satunya terletak pada
dua C4Ds digunakan, ditempatkan di kedua ujung kapiler. Setelah
posisi konvensional di dekat ujung HV kapiler dan digunakan untuk
injeksi hidrodinamik, sumbat sampel dikirim ke posisi 25 cm dari
mendeteksi kation yang bergerak cepat (lihat jejak A pada Gambar 2).
ujung kapiler yang dibumikan. Pada menyalakan tegangan tinggi, dari
Karena anion didorong berlawanan dengan arah migrasi elektroforesis,
titik ini kation dan anion bermigrasi secara elektroforetik dalam
mereka akan mencapai detektor ini lama setelah kation, dengan
pemisahan yang lebih dari cukup. Dalam rangka mengoptimalkan
4
waktu sis analisi kedua C D demikian diposisikan relatif awal pada
kapiler untuk mendeteksi anion (seperti dapat dilihat di jejak B dari
2Gambar.).Dengan pengaturan ini, pemisahan bersamaan dapat dicapai

AB
Gambar. 2. Pemisahan kation dan anion organik bersamaan dengan injeksi tunggal dan
dengan bantuan tekanan. Dual C4Ds denganef untuk kation = 43 cm danef untuk anion =
10 cm. Kondisi CE: E = 400 V / cm; ID kapiler 10 m dan panjang 50 cm; BGE: MES 90
mM / 90 mM-nya, pH 6; dan tekanan diterapkan = 2,2 bar. (A) Kation, 200 M, kecuali
Na+. (B) Anions, 200 M.
TD Mai, PC Hauser / J. Chromatogr. Sebuah 1267 (2012) 266- 272 269
AB
Gambar. 4. pemisahan serentak anion dan kation (semua 200 M) dengan dual suntikan
akhir single, tunggal C4D dan dengan tekanan dibantu CE. l eff untuk kation = 15 cm; l eff
untuk anion = 35 cm. Tekanan 2 bar diterapkan dari ujung ground. Kondisi CE: E = 400
V / cm; ID kapiler 10 m dan panjang 50 cm; dan BGE: MES 90 mM / 90 mM-nya, pH 6.
Gbr. 3. Pemisahan kation dan anion bersamaan dengan injeksi tunggal dan detektor
ganda. Steker sampel dikirim ke posisi 25 cm dari ujung kapiler yang dibumikan. Dual
C4Ds denganef untuk kation 18 cm danef untuk anion 15 cm. Kondisi CE: E = 400 V /
cm; ID kapiler 10 m dan panjang 50 cm; dan BGE: MES 90 mM / 90 mM-nya, pH 6.
(A) Kation, 200 M, kecuali Na+. (B) Anion, 200 M.
arah yang berbeda dan kation akan terdeteksi dengan C 4D dekat katoda
270 TD Mai, PC Hauser / J. Chromatogr. A 1267 (2012) 266-272
4
mengakhiri sedangkan anion akan dilacak dengan yang lain C D dekat
dengan anoda, seperti yang ditunjukkan pada jejak A dan B dari Fig. 3.
Perhatikan bahwa anion anorganik cepat, dilihat sebagai puncak
pertama jejak B, tidak dapat dideteksi dengan pendekatan yang
dijelaskan pada bagian sebelumnya. Pada pH 6 dari buffer MES / His,
EOF cukup kuat untuk mencegah anion karboksilat yang jauh lebih
lambat, seperti salisilat, sorbat, dan glukonat, agar tidak sampai di
anoda. Oleh karena itu, puncak anion semacam itu tidak terdeteksi atau
akan tiba sangat terlambat pada detektor ujung katoda.
3.1.3. Injeksi ganda dengan pemompaan hidrodinamik bersamaan
Kedua pendekatan yang dilaporkan di atas memiliki keterbatasan, baik
anion cepat atau lambat dikecualikan. Dengan kata lain, seperti yang
umumnya terjadi dalam elektroforesis zona, EOF harus dibalik, atau
setidaknya dihilangkan, untuk dapat menentukan anion cepat dan
lambat secara bersamaan. Sebelumnya telah ditunjukkan bahwa ini
dimungkinkan dengan pengaturan yang digunakan dalam pekerjaan ini
dengan melapiskan aliran hidrodinamik [37]. Agar tidak
mengkompromikan determinasi kation, diperlukan perkiraan
keseimbangan saat melakukan penentuan anion dan kation secara
simultan. Salah satu pendekatan yang mungkin adalah menempatkan
sampel tunggal di suatu tempat di sekitar pusat kapiler, kemudian
menerapkananodik
tegangandi ujung kapiler dan menyeimbangkan EOF secara dinamis,
dan menggunakan detektor yang berbeda untuk menentukan kation dan
anion. di ujung yang berlawanan dari kapiler. Kemungkinan berbeda
adalah menyuntikkan dua sumbat sampel yang terpisah, dan
menempatkannya di kedua ujung kapiler. Ini menyerupai pendekatan
injeksi ujung ganda yang berlawanan, tetapi kedua colokan sampel
secara aktual disuntikkan dari ujung yang sama. Setelah injeksi plug
pertama, tekanan antarmuka SI-CE ke 4,5 bar kemudian dipicu untuk
melakukan pengiriman plug sampel di dalam kapiler ke ujung. Saat
tekanan udara saat melahirkan sampel bekerja dengan menggunakan
4
C D diposisikan pada titik yang diinginkan untuk merekam sinyal
ketika sampel mencapai titik deteksi. Dibutuhkan 90 detik untuk
sumbat sampel untuk melakukan perjalanan ke ujung lain dari
kapasitor di bawah tekanan ini. Suntikan kedua kemudian dilakukan
secara normal. Metode ini diilustrasikan pada Gambar. 4 dengan
pemisahan anionik dan kation organik dan cepat, lambat dan lambat.
15 anion, dari asam kuat dan lemah, bersama-sama dengan 6 kation
pada dasarnya dipisahkan dalam satu elektropagogram. Perhatikan
bahwa untuk demonstrasi ini dua campuran standar yang berbeda
disuntikkan. Alasan untuk ini adalah bahwa garam yang digunakan
semuanya memiliki ion counter identik (klorida dan natrium atau
kalium untuk kation dan anion, masing-masing) yang jika tidak akan
menyebabkan ketidakseimbangan konsentrasi yang kuat. Tekanan 2
bar yang diterapkan ternyata sesuai untuk memastikan bahwa semua
anion mencapai detektor dalam jangka waktu yang singkat, sambil
tetap mempertahankan migrasi kation ke arah katoda. Penerapan
pemompaan hidrodinamik selama pemisahan adalah penyimpangan
lebih jauh dari metode injeksi ujung ganda yang konvensional.
Perhatikan juga bahwa hanya satu detektor diposisikan di tengah
kapiler digunakan dalam kasus ini bukan mempekerjakan dua C 4Ds di
dua ujung kapiler untuk mengurangi waktu tinggal dari kation. Untuk
mencegah tumpang tindih puncak antara kation dan anion, detektor
terletak di dekat anoda sehingga
Gbr. 5. Pemisahan kation anorganik dan anion bersamaan dengan injeksi single-end Gambar 6. Pemisahan kation dan anion anorganik bersamaan dengan injeksi dual-end
ganda dan deteksi tunggal. Kedua sumbat sampel (100 M) diinjeksikan pada ujung
kapiler yang dibumikan, dengan sumbat campuran anion dikirim ke ujung HV kapiler tunggal dan dengan dual C 4Ds. (A) Kation: NH4+ 100 M; K+ 100 M; Ca2+ 100 M; Na+

dengan tekanan 4,5 bar dalam waktu 90 detik. Kondisi CE: ef untuk kation = 35 cm dan ef
untuk anion = 15 cm; E = 400 V / cm; ID kapiler 10 m dan panjang 50 cm; dan BGE:
histidin 12 mM / 18-Crown-6 2 mM disesuaikan dengan pH 4 dengan asam asetat.
kation sepenuhnya melewati detektor sebelum kedatangan anion.
100 M; Mg2+ 50 M; Mn2+ 25 M; Zn2+ 25 M; Cd2+ 25 M; Ba2+ 100 M. (B) Anion: Cl - 50
M; S2O32- 50 M; NO3- 50 M; SO42- 50 M; dan NO2 - 50 M. Kedua sumbat sampel
diinjeksikan pada ujung kapiler yang dibumikan, dengan sumbat sampel anion dikirim
ke ujung HV kapiler dengan tekanan 4,5 bar dalam waktu 90 detik. Kondisi CE: E = 400
V / cm; ID kapiler 10 m dan panjang 50 cm; l eff untuk kation = 43 cm dan l eff untuk anion
= 35 cm; dan BGE: histidin 12 mM / 18-Crown-6 2 mM disesuaikan dengan pH 4
dengan asam asetat.

3.2. Pemisahan serentak pada pH 4

dapat diatasi dengan menempatkan detektor untuk anion pada jarak
3.2.1. Injeksi ganda dengan satu detektor. agak (13 cm dalam kasus ini) dari ujung kapiler anodik, sehingga
anion melewati detektor sebelum puncak EOF untuk sumbat kation.
Kation logam biasanya lebih baik ditentukan pada pH sedikit asam
Perhatikan, bahwa untuk elektrolit latar belakang pH yang lebih tinggi
karena ini menyebabkan EOF rendah dan dengan demikian
efek ini akan lebih serius karena EOF akan lebih cepat, dan karenanya
meningkatkan waktu tinggal dan karenanya pemisahan kation. Ini juga
meninggalkan waktu yang lebih singkat.
mencegah pengendapan hidroksida. Anion anorganik cepat juga dapat
dipisahkan dalam kondisi tersebut terhadap EOF katodik yang relatif
kecil. Dengan demikian, pemisahan bersamaan dari beberapa anion 3.3. Kinerja dan analisis
anorganik dan kation dilakukan dengan buffer histidin dan asam asetat
pada pH 4, seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 5. Injeksi ganda sampeldata kinerja utama untuk penentuan bersamaan anion dan kation
digunakan dengan single C4D sel terletak sekitar sepertiga dari pada pH 4, menggunakan ganda suntikan tunggal-end dan dual C 4sel
panjang dari sisi tegangan tinggi dari kapiler. Pemisahan garis dasar D, kemudian diperoleh dengan mengakuisisi data statistik untuk dua
diperoleh untuk kation dan anion dalam waktu analisis singkat dari campuran standar 9 kation dan 5 anion, masing-masing. Data diringkas
rahmat 3 menit hingga panjang efektif pendek ketika detektor dalam Tabel 1. Batas deteksi yang dicapai untuk kondisi berada dalam
diposisikan di tengah daripada di kedua ujung kapiler. kisaran M-rendah dan reproduksibilitas daerah puncak adalah sekitar
3,0-3,5% untuk kation dan 5,0-5,5% untuk anion, masing-masing.
3.2.2. Injeksi ganda dengan dua detektor Demikian pula kemampuan reproduksi waktu migrasi juga tidak begitu
baik untuk anion maupun kation. Ini harus dikaitkan dengan
Untuk situasi yang lebih kompleks, di mana jumlah anion dan kation
pemompaan sumbat yang dianalisis untuk anion sepanjang kapiler
anorganik yang akan dianalisis lebih tinggi, teknik detektor tunggal
sebelum pemisahan. Faktor yang berkontribusi mungkin adalah
tidak selalu tepat karena panjang kapiler efektif yang relatif pendek.
gangguan keseimbangan yang terbentuk antara elektrolit latar belakang
Penggunaan dua sel detektor kemudian menguntungkan, karena kation
dan permukaan bagian dalam kapiler saat melewati sumbat sampel.
dan anion dapat mengambil untung dari panjang kapiler penuh, dan
Namun demikian, kinerja harus tetap dapat diterima dalam kebanyakan
optimalisasi posisi detektor tunggal untuk kedua jenis ion tidak
kasus.
diperlukan. Pemisahan bersamaan dari sejumlah kation dan anion
anorganik menggunakan injeksi ganda dan deteksi ganda ditunjukkan Untuk demonstrasi lebih lanjut, penentuan kation organik utama dan
pada Gambar. 6. Pemisahan dasar dicapai untuk 9 kation dan 5 anion anion dalam air ledeng dilakukan denganCH / CO 3-nyabuffer(pH 4),
menggunakan injeksi dual-end tunggal dengan dual C 4Ds.
dalam sekali jalan.Satu kemungkinan kekhawatiran dengan pendekatan
Elektropherogram yang diperoleh untuk air ledeng ditampilkan
injeksi ganda - detektor ganda ditemukan adalah munculnya puncak
sistem dalam elektropherogram. Ditemukan bahwa tidak mungkin
untuk melakukan deteksi anion setelah puncak EOF untuk colokan
kation. Lintasan anion melalui zona konduktivitas rendah yang
diperluas menyebabkan gangguan signifikan pada pita mereka.
Masalah ini

AB
TD Mai, PC Hauser / J. Chromatogr. A 1267 (2012) 266-272 271

Tabel 1 Rentang kalibrasi, batas deteksi (LODs) dan reproduksibilitas untuk penentuan kation dan anion anorganik bersamaan dengan injeksi ujung tunggal ganda dan dengan dual C 4Ds pada pH

4. Kondisi:efek anion = 35 cm; lkation eff = 43 cm; E = 400 V / cm; dan BGE: 12 mM dan 18-Crown-6 2 mM disesuaikan dengan pH 4 dengan asam asetat.

Range (M)korelasi RSD% area puncak (n = 4)

Koefisien, r RSD% area puncak (n = 4)
LOD (M) RSD%pemisahan RSD% area puncak (n = 4)
RSD% area puncak (n = 4)
waktu(n = 4)

NH4+ 3–100 0,9989 1,5 0,9 K+ 3–100 0,9985 1,3 0,9 3,2 Ca 2+ 3–100 0,9988 1,3 1,0 3,2 Na+ 3–100 0,9982 1,5 0,9 Mg2+ 3– 50 0.9996 1.3 1.0 3.2 Mn2+ 1–20 0.9979 0.3 1.2 3.6 Zn2+ 1–25 0.9960

0.3 1.1 3.4 Cd2+ 1–25 0.9979 0.3 1.3 3.4 Ba2+ 3–100 0.9995 1.3 1.3 3.2 Cl- 5-100 0.9983 2.0 3.2 4.8 S2O32- 3–50 0.9982 1.5 3.1 5.0 NO3- 5–50 0.9986 2.0 3.2 5.3 SO4 2- 5–100 0.9985 1.5 3.2 5.3

NO2- 5–100 0.9987 2.0 3.5 5.4

Gambar. 7. pemisahan serentak kation anorganik utama dan anion dalam air keran pada yang berbeda, seperti nilai pH yang berbeda untuk mencapai ionisasi.
pH 4 dengan dual suntikan tunggal-end dan dengan dual C 4Ds. Air keran disaring dan
diencerkan 5 kali sebelum injeksi. Kondisi lain seperti untuk Gambar. 6.

pada Gambar. 7. Sebelum injeksi, penyaringan dan pengenceran yang

tepat dilakukan untuk menghindari kelebihan muatan. Kation utama
+ 2+ + 2+
K , Ca , Na , Mg dan anion utama Cl-, NO3-, SO42- ditemukan

dalamberbeda jumlah yang. Satu puncak tambahan untuk kation juga

terdeteksi dalam sampel, tetapi tidak ada upaya yang dilakukan untuk
mengidentifikasi spesies ini.
4. Kesimpulan
4
Universalitas C D untuk kuantifikasi ion dan ity suitabil- untuk kapiler
yang sempit, yang tidak menginduksi Band signifikan memperluas saat
memperkenalkan aliran hidrodinamik, memungkinkan pengembangan
skema canggih untuk zona elektroforesis. Penentuan kation dan anion
secara simultan adalah salah satu kemungkinan. Secara khusus, skema
injeksi ujung berlawanan ganda untuk penentuan bersama dapat
diimplementasikan sebagai injeksi ujung ganda ganda dengan
memindahkan sumbat sampel pertama ke ujung kapiler jauh sebelum
injeksi sumbat kedua dan pemisahan selanjutnya. Ini adalah
penyederhanaan yang signifikan, terutama dalam pertimbangan bahwa
penempatan sistem injeksi otomatis pada ujung tegangan tinggi dari
kapiler menimbulkan kesulitan. Kemungkinan lain untuk penentuan
bersama telah diindikasikan dalam pekerjaan ini, tetapi skema lebih
lanjut dapat dikembangkan untuk disesuaikan dengan aplikasi tertentu.
Perhatikan, bahwa tidak wajib untuk menggunakan manifold SIA
untuk mengimplementasikan skema pemompaan yang dilaporkan di
sini, sistem lain yang memungkinkan manipulasi colokan sampel
secara akurat, serta laju aliran
dan tekanan mungkin cocok juga. Perawatan harus diambil untuk
menghindari tumpang tindih yang tidak diinginkan dengan puncak
sistem atau puncak tidak diinginkan yang disebabkan oleh ion kontra
dengan optimalisasi penempatan C4D sel (s). Namun, metode ini
masih terbatas pada elektrolit latar tunggal. Penentuan bersamaan tidak
dimungkinkan jika kelas analit yang berbeda membutuhkan kondisi
Acknowledgements
217. [3] F. Foret, S. Fanali, L. Ossicini, P. Bocek, J. Chromatogr. 470 (1989) 299. [4]
SA Shamsi, ND Danielson, Anal. Chem 67 (1995) 4210. [5] S. Tomoyoshi, GA Ross, J.
Chromatogr. A 834 (1999) 65. [6] C. Sarazin, N. Delaunay, A. Varenne, C. Costanza, V.
Eudes, P. Gareil, J. Sep. Sci.
33 (2010) 3177. [7] OV Krokhin, H. Hoshino, OA Shpigun, T. Yotsuyanagi, J.
Chromatogr. A 776
(1997) 329. [8] SJ Chen, MJ Chen, HT Chang, J. Chromatogr. A 1017 (2003) 215. [9] P.
Kubáˇn, P. Kubáˇn, V. Kubáˇn, J. Chromatogr. A 836 (1999) 75. [10] I. Haumann, K.
Bächmann, J. Chromatogr. A 717 (1995) 385. [11] QP Wang, ZL Chen, GN Chen, JM
Lin, Int. J. Environ. Anal Chem 91 (2011)
255. [12] P. Kubáˇn, B. Karlberg, Anal. Chem 70 (1998) 360. [13] R. Nehmé, A.
Lascaux, R. Delépée, B. Claude, P. Morin, Anal. Chim. Acta 663
(2010) 190. [14] A. Padarauskas, Curr. Anal Chem 1 (2005) 149. [15] F. Priego-Capote,
MDL de Castro, Elektroforesis 25 (2004) 4074. [16] BS Weekley, JP Foley,
Electrophoresis 28 (2007) 697. [17] P. Kubáˇn, P . Kubáˇn, V. Kubáˇn, Electrophoresis
24 (2003) 1397. [18] P. Kubáˇn, P. Kubáˇn, PC Hauser, V. Kubáˇn, Electrophoresis 25
(2004) 35. [19] P. Kubáˇn, M. Reinhardt, B. Müller, PC Hauser, J. Environ. Monit. 6
(2004)
169. [20] P. Kubáˇn, P. Kubáˇn, V. Kubáˇn, Electrophoresis 23 (2002) 3725. [21] V.
Unterholzner, M. Macka, PR Haddad, A. Zemann, Analis 127 (2002) )
715. [22] P. Kubáˇn, B. Karlberg, P. Kubáˇn, V. Kubáˇn, J. Chromatogr. A 964 (2002)
227. [23] F. Tan, BC Yang, YF Guan, Chin. J. Anal. Chem 33 (2005) 313. [24] P.
Kubáˇn, PC Hauser, Elektroforesis 32 (2011) 30. [25] AA Elbashir, HY Aboul-Enein,
Biomed. Chromatogr. 24 (2010) 1038. [26] P. Kubáˇn, PC Hauser, Anal. Chim. Acta
607 (2008) 15. [27] M. Trojanowicz, Anal. Chim. Acta 653 (2009) 36. [28] V.
ˇ
Sonlínová, V. Kašicka, J. Sep. Sci. 29 (2006) 1743. [29] P. Kubáˇn, PC Hauser,
Electroanalysis 16 (2004) 2009. [30] WKT Coltro, RS Lima, TP Segato, E. Carrilho, DP
de Jesus, CL do Lago, JAF
da Silva, Anal. Methods 4 (2012) 25. [31] AJ Zemann, Electrophoresis 24 (2003) 2125.
[32] JGA Brito-Neto, JAF da Silva, L. Blanes, CL do Lago, Electroanalysis 17 (2005)
1207. [33] JGA Brito-Neto, JAF da Silva, L. Blanes, CL do Lago, Electroanalysis 17
(2005)
1198.

The authors would like to thank the Swiss National Science Foundation for partial funding (grant no. 200020-137676/1).

References

[1] PA Gallagher, ND Danielson, J. Chromatogr. A 781 (1997) 533. [2] C. Johns, WC Yang, M. Macka, PR Haddad, J. Chromatogr. A 1050 (2004)
272 TD Mai, PC Hauser / J. Chromatogr. A 1267 (2012) 266– 272

[34] P. Kubáˇn, PC Hauser, Electrophoresis 25 (2004) 3398. [35] P. Kubáˇn, PC Hauser,

Electrophoresis 25 (2004) 3387. [36] P. Kubáˇn, PC Hauser, Electrophoresis 30 (2009)
176. [37] TD Mai, PC Hauser, Electrophoresis 32 (2011) 3000. [38] TD Mai, PC
Hauser, Talanta 84 (2011) 1228. [39] A. Wuersig, P. Kubáˇn, SS Khaloo, PC Hauser,
Analyst 131 (2006) 944. [40] GA Blanco, YH Nai, EF Hilder, RA Shellie, GW
Dicinoski, PR Haddad, CM
Breadmore, Anal. Chem 83 (2011) 9068.
[41] P. Kubáˇn, B. Karlberg, Anal. Chim. Acta 648 (2009) 129. [42] M. Ryvolová, J.
Preisler, D. Brabazon, M. Macka, Trends Anal. Chem 29 (2010)
339. [43] TD Mai, S. Schmid, B. Müller, PC Hauser, Anal. Chim. Acta 665 (2010) 1.
[44] L. Zhang, SS Khaloo, P. Kubáˇn, PC Hauser, Meas. Sci. Technol. 17 (2006)
3317. [45] M. Macka, J. Hutchinson, A. Zemann, Z. Shusheng, PR Haddad,
Electrophoresis
24 (2003) 2144.