KATA PENGANTAR

Assalamualaikum warahmatullahi wabarakatuh

Segala puji bagi Allah SWT yang telah memberikan kami kemudahan sehingga
kami dapat menyelesaikan makalah ini dengan tepat waktu. Tanpa pertolongan-Nya
tentunya kami tidak akan sanggup untuk menyelesaikan makalh ini dengan baik.
Shalawat serta salam semoga terlimpah curahkan kepada baginda tercinta kita yaitu
Nabi Muhammad SAW yang kita nanti-nantikan syafa’atnya di akhirat nanti.
Penulis mengucapkan syukur kepada Allah SWT atas limpahan nikmat sehat-
Nya, baik itu berupa sehat fisik maupun akal pikiran, sehingga penulis mampu untuk
menyelesaikan pembuatan makalah s dari mata kuliah Teknik Kimia dengan Judul
“Elektroforesis”.
Penulis tentu menyadari bahwa makalah ini masih jauh dari kata sempurna dan
masih banyak terdapat kesalahan serta kekurangan di dalamnya. Untuk itu, penulis
mengharapkan kritik serta saran dari pembaca untuk makalah ini, supaya makalah ini
dapat menjadi makalah yang lebih baik lagi. Kemudian apabila terdapat banyak
kesalahan pada makalah ini penulis mohon maaf yang sebesar-besarnya.
Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada semua pihak yang telah
membimbing dalam menulis makalah ini.
Demikian, semoga makalah ini dapat bermanfaat. Terima Kasih.

Makassar, 29 Juni 2019

Penulis

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS i

 DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR..................................................................................................................................i
DAFTAR ISI...............................................................................................................................................ii
DAFTAR TABEL.......................................................................................................................................iii
DAFTAR GAMBAR..................................................................................................................................iv
DAFTAR LAMPIRAN................................................................................................................................v
BAB I PENDAHULUAN............................................................................................................................1
A. Latar Belakang..............................................................................................................................1
B. Tujuan.............................................................................................................................................2
C. Rumusan Masalah....................................................................................................................2
BAB II PEMBAHASAN.............................................................................................................................3
A. Definisi............................................................................................................................................3
B. Jenis-jenis Elektroforesis.............................................................................................................5
1. Elektroforesis kertas.................................................................................................................5
2. Elektroforesis gel.......................................................................................................................7
3. Elektroforesis kapiler................................................................................................................9
C. Medium pendukung................................................................................................................10
D. Komponen utama alat............................................................................................................11
E. Manfaat.........................................................................................................................................14
F. Prosedur kerja elektroforesis DNA...........................................................................................14
Bahan dan Alat................................................................................................................................14
Cara Kerja........................................................................................................................................15
Hasil..................................................................................................................................................16
BAB III PENUTUP..................................................................................................................................18
A. Kesimpulan..................................................................................................................................18
B. Saran............................................................................................................................................18
DAFTAR PUSTAKA...............................................................................................................................19

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS ii

 DAFTAR TABEL
Nomor Halaman

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS iii

 DAFTAR GAMBAR
Nomor Halaman

1. Skema Elektroforesis (gambar oleh: Daniele Pugliesi, CC BY-SA 3.0)........................5

2. Peralatan untuk elektroforesis kertas............................................................................6
3.Elektroforesis pada kertas selulosa asetat.....................................................................6
4.Elektroforesis Gel (gambar oleh: Jeffrey M. Vinocur, Multi-license with GFDL and
Creative Commons CC-BY 2.5)........................................................................................7
5. Prosedur Kerja Elektroforesis Gel.................................................................................8
6. Elektroforesis kapilar.....................................................................................................9
7. Rangkaian Alat elektroforesis......................................................................................12
8. Prinsip Kerja EOF........................................................................................................13

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS iv

 DAFTAR LAMPIRAN
Nomor Halaman

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS v

 BAB I
PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Metode pemisahan merupakan aspek penting dalam bidang ilmu kimia

karena kebanyakan materi yang terdapat dialam dapat berupa campuran. Untuk
memperoleh materi murni dari suatu campuran, kita harus melakukan suatu
pemisahan. Berbagai teknik  pemisahan dapat diterapkan untuk memisahkan
campuran. Seiring dengan kemajuan zaman yang semakin pesat di negara-
negara berkembang akan selalu diikuti pula dengan kemajuan ilmu pengetahuan
yang semakin marak di bidang teknologi. Salah satu diantaranya adalah
pengembangan di bidang Biologi Molekuler. Bidang ilmu pengetahuan Biologi
Molekuler ini telah dimulai pada akhir abad ke 19, setelah metode elektroforesis
ditemukan dan dipakai untuk menganalisa berbagai kegiatan penelitian di bidang
Kimia, Biologi (Genetika, Taksonomi dan Bio-sistematik). Ringkasnya metode
elektroforesis ini mulai berkembang akhir abad ke 19 setelah ditemukan
penelitian yang menunjukkan adanya efek dari listrik terhadap partikel-partikel
atau molekul-molekul yang bermuatan listrik, dalam hal ini termasuk juga protein
(Pornet, Quincke, Hardy, dalam Richardson dkk, 1986). menurut Passteur dkk.
(1988) elektroforesis berasal dari bahasa Yunani Ηλεκτροφόρηση yang
mempunyai arti “membawa elektron”.
Pemisahan elektroforesis pertama diterbitkan pada tahun 1930 oleh
ilmuwan Swedia, Arne Tiselius, ia memisahkan protein serum sesuai dengan
change mereka dalam tabung berbentuk U diisi dengan buffer. Karena
penemuan ini, Tiselius dianugerahi hadiah nobel pada tahun 1948. Tiselius,
dengan dukungan dari Yayasan Rockfeller, mengembangkan “Tiselius
Apparatus” untuk elektroforesis moving-boundary, yang dijelaskan pada esai
ternama di 1937, “A New Apparatus for Electrophoretic Analysis of Colloidal
Mixtures”.

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS 1

B. Tujuan
a. Mengetahui definisi teori elektroforesis.
b. Mengetahui jenis-jenis elektroforesis.
c. Mengetahui medium pendukung dari elektroforesis.
d. Mengetahui komponen alat elekroforesis.

C. Rumusan Masalah
a. Bagaimana definisi teori elektroforesis?
b. Apa saja jenis-jenis elektroforesis?
c. Apa saja medium pendukung dari elektroforesis?
d. Bagaimana komponen alat elektroforesis?

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS 2

 BAB II
PEMBAHASAN

A. Definisi
Elektroforesis adalah teknik pemisahan komponen atau molekul
bermuatan berdasarkan perbedaan tingkat migrasinya dalam aliran medan listrik
yang diberikan. Perbedaan tingkat migrasi disebabkan oleh perbedaan ukuran
dan berat molekul serta muatan listrik yang dimiliki oleh molekul yang akan
dipisahkan (Lutfi,dkk). Secara teknis, elektroforesis merupakan istilah yang
diberikan untuk migrasi partikel yang bermuatan akibat diberikan arus listrik
searah atau DC (Direct Current). Umumnya teknik dari cikal-bakal elektroforesis
digunakan untuk menentukan muatan dari suatu koloid (Patnaik 2004). Teknik
elektroforesis ditentukan oleh ciri molekular ionik dan adanya muatan sebagai
sifat fisik. arah dan laju pergerakan tergantung pada spot dan intensitas muatan
ionik (Rouessac 2007). Bufer elektroda digunakan untuk konduktor arus dengan
menjadi jembatan konduksi diantara dua elektroda sehingga memungkinkan
terjadinya aliran medan listrik (Skoog 2002).
Teknik ini dapat digunakan dengan memanfaatkan muatan listrik yang ada
pada makromolekul misalnya DNA yang bermuatan negatif. Jika molekul yang
bermuatan negatif dilewatkan melalui suatu medium, kemudian dialiri arus listrik
dari suatu kutub ke kutub yang berlawanan muatannya maka molekul tersebut
akan bergerak dari kutub negatif ke kutub positif. Kecepatan gerak molekul
tersebut tergantung pada nisbah muatan terhadap massanya serta tergantung
pula pada bentuk molekulnya. Pergerakan ini dapat dijelaskan dengan gaya
Lorentz, yang terkait dengan sifat-sifat dasar elektris bahan yang diamati dan
kondisi elektris lingkungan:
F́ e =q É
F adalah gaya Lorentz, q adalah muatan yang dibawa oleh objek, E adalah
medan listrik.

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS 3

 Secara umum, elektroforesis digunakan untuk memisahkan, mengidentifikasi,
dan memurnikan fragmen DNA. Pergerakan molekul terutama tergantung di
muatan yang ada pada permukaan partikel, tanda dan besarnya muatan
pembawa oleh variasi group ionogenik. Tergantung kepada kekuatan molekul
listrik dan pH dari medium dalam mengkateristik, sehingga pemisahan molekul
dapat terjadi karena efek seleksi dan medium yang sesuai.

 Prinsip kerja Elektrofoesis.

Elektroforesis (Reiner, 2004) adalah istilah umum yang menggambarkan
migrasi dan pemisahan partikel bermuatan (ion) di bawah pengaruh medan
listrik. Sistem elektroforesis terdiri dari dua elektroda yang bermuatan
berlawanan (anoda, katoda), dihubungkan oleh media konduktor yang disebut
elektrolit. Efek pemisahan pada partikel ionik dihasilkan dari perbedaan
kecepatan (v), yang merupakan produk dari mobilitas partikel (m) dan kekuatan
medan (E):
v = mE

Mobilitas (m) partikel ionik ditentukan oleh ukuran, bentuk, dan muatan
partikel, dan suhu selama pemisahan, dan konstan pada kondisi elektroforetik
yang ditentukan(Reiner, 2004).
Kondisi elektroforetik dicirikan oleh parameter listrik (arus, tegangan,
daya), dan faktor-faktor seperti kekuatan ion, nilai pH, viskositas, ukuran pori,
dll., Yang menggambarkan media di mana partikel bergerak(Reiner, 2004)..
Penghapusan panas yang dihasilkan oleh aliran arus listrik adalah salah
satu masalah utama dalam sebagian besar bentuk elektroforesis. Setiap
perbedaan suhu menyebabkan variasi dalam laju migrasi melalui medium,
menghasilkan distorsi pada pita-pita molekul yang terpisah(Reiner, 2004)..

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS 4

 Gambar 1. Skema Elektroforesis (gambar oleh: Daniele Pugliesi, CC BY-SA 3.0)

Dari gambar diatas dapat dilihat bahwa komponen yang bermuatan positif
akan bergerak searah dengan medan listrik menuju kutub negatif. Apabila dalam
campuran terdapat dua jenis komponen, yakni (1) komponen negatif (-), dan (2)
komponen netral (N), maka komponen negatif akan bergerak menuju kutub
positif (+) sedangkan komponen netral (N) akan tetap diam. Skema alat
elektroforesis secara sederhana dapat dilihat pada gambar di bawah ini. Pada
gambar tersebut dapat dilihat komponen yang bermuatan positif akan mengalir
ke arah kutub negatif, sedangkan komponen bermuatan negatif akan mengalir ke
arah kutub positif.

B. Jenis-jenis Elektroforesis.
1. Elektroforesis kertas.
Elektroforesis kertas adalah jenis elektroforesis yang terdiri dari kertas sebagai
fase diam dan partikel bermuatan yang terlarut sebagai fase gerak, terutama ialah
ion-ion kompleks. Pemisahan ini terjadi akibat adanya gradasi konsentrasi
sepanjang sistem pemisahan.

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS 5

 Gambar 2. Peralatan untuk elektroforesis kertas.

Pergerakan partikel dalam kertas tergantung pada muatan atau valensi zat
terlarut, luas penampang, tegangan yang digunakan, konsentrasi elektrolit,
kekuatan ion, pH, viskositas, dan adsorpsivitas zat terlarut.
Sesuai dengan perkembangan ilmu bahan, elektroforesis kertas menjadi fasa
pertama dari perkembangan elektroforesis zona. Dengan menggunakan medium
kertas, pemisahan dan analisis terhadap asam amino, peptida, nukleotida, dan ion-
ion logam yang kecil dapat dilakukan.Kelemahan penggunaan kertas selulosa
asetat adalah: adanya gangguan yang disebabkan oleh adanya gugus OH- yang
terdapat pada selulosa yang dapat berinteraksi dengan molekul polar sehingga
daya migrasi molekul tersebut terganggu dan menjadi lebih rendah (Harjadi 1993).
Kelemahan ini dapat diatasi dengan cara asetilasi gugus hidroksil dengan
menggunakan kertas selulosa asetat yang tidak polar.

Gambar 3.Elektroforesis pada kertas selulosa asetat.

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS 6

 Hal ini menyebabkan migrasi molekul polar tidak terganggu, resolusi lebih baik,
dan proses pemisahan berlangsung lebih cepat.
Keuntungan penggunaan kertas selulosa asetat adalah:
 proses migrasi lebih cepat;
 pemisahan spot menjadi lebih kecil;
 mudah memisahkan sampel dengan spektrofotometri;
 mudah dilarutkan dalam pelarut dalam jumlah sedikit.
Pada elektroforesis kertas selulosa asetat, kertas selulosa asetat harus
dibersihkan dengan cara kering dalam percobaan ini. Cara kering lebih baik
resolusinya dan spotnya lebih kecil daripada cara basah. Oleh karena itu,
percobaan ini menggunakan medium selulosa asetat.

2. Elektroforesis gel
Elektroforesis gel ialah elektroforesis yang menggunakan gel sebagai fase
diam untuk memisahkan molekul-molekul. Awalnya elektoforesis gel dilakukan
dengan medium gel kanji (sebagai fase diam) untuk memisahkan biomolekul yang
lebih besar seperti protein-protein. Kemudian elektroforesis gel berkembang
dengan menjadikan agarosa dan poliakrilamida sebagai gel media. 

Gambar 4.Elektroforesis Gel (gambar oleh: Jeffrey M. Vinocur, Multi-license with

GFDL and Creative Commons CC-BY 2.5).

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS 7

 Dalam elektroforesis gel terdapat dua material dasar yang disebut fase diam
dan fase bergerak (eluen). Fase diam berfungsi "menyaring" objek yang akan
dipisah, sementara fase bergerak berfungsi membawa objek yang akan dipisah.
Sering kali ditambahkan larutan penyangga pada fase bergerak untuk menjaga
kestabilan objek elektroforesis gel. Elektroda positif dan negatif diletakkan pada
masing-masing ujung aparat elektroforesis gel.
Zat yang akan dielektroforesis dimuat pada kolom (disebut well) pada sisi
elektroda negatif. Apabila aliran listrik diberikan, terjadi aliran elektron dan zat objek
akan bergerak dari elektroda negatif ke arah sisi elektroda positif. Kecepatan
pergerakan ini berbeda-beda, tergantung dari muatan dan berat molekul DNA. Kisi-
kisi gel berfungsi sebagai pemisah. Objek yang berberat molekul lebih besar akan
lebih lambat berpindah.

Gambar 5. Prosedur Kerja Elektroforesis Gel.

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS 8

3. Elektroforesis kapiler
Elektroforesis kapiler adalah metode elektroforesis yang digunakan untuk
memisahkan asam amino, protein, lipid, karbohidrat, dan nukleotida dengan
resolusi tinggi yang dilakukan pada pipa kapiler berisi buffer. Metode ini mulai
digunakan secara luas pada akhir tahun 1940 untuk aplikasi dalam berbagai bidang
seperti bioteknologi, kimia, lingkungan, dan analisis farmasi. Elektroforesis kapiler
menggunakan listrik bertegangan tinggi yang menyebabkan semua komponen ion
atau molekul netral bergerak ke katoda. Deteksi dapat dilakukan dengan teknik
pendeteksian spektrometri atau elektrokimia. Teknik pemisahan ini dipengaruhi oleh
tegangan listrik, koefisien difusi, panjang, dan diameter pipa kapiler, serta
konsentrasi sampel. Metode ini memiliki efisiensi dan selektivitas yang baik namun
boros listrik karena menggunakan tegangan tinggi dan alatnya juga mahal.

Gambar 6. Elektroforesis kapilar

Elektroforesis kapiler (CE), juga dikenal sebagai zona elektroforesis kapiler,

dapat digunakan untuk memisahkan spesies ion oleh muatan mereka dan gesekan
kekuatan dan radius hidrodinamika. Elektroforesis , bermuatan listrik bergerak analit
dalam konduktif cairan menengah bawah pengaruh suatu medan listrik.
Diperkenalkan pada tahun 1960-an, teknik elektroforesis kapiler (CE) dirancang
untuk spesies terpisah berdasarkan ukuran mereka untuk mengisi rasio dalam
interior sebuah kapiler kecil penuh dengan elektrolit.

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS 9

C. Medium pendukung
Elektroforesis untuk makromolekul memerlukan medium pendukung untuk
mencegah terjadinya difusi karena timbulnya panas dari arus listrik yang
digunakan. Gel poliakrilamid dan agarosa merupakan medium pendukung yang
banyak dipakai untuk separasi protein dan asam nukleat. Efek penguapan juga
dapat diturunkan minimal jika elektroforesis dilakukan di medium pendukung
yang dicelupkan dengan larutan buffer. Pemisahan sempurna suatu campuran
dapat terjadi efektif dalam zona tertentu.
Meskipun medium pendukung relatif stabil (inert), komposisinya mungkin akan
menyebabkan penyerapan, migrasi elektron (elektro osmosis) atau penyaringan
berdasarkan ukuran molekulnya, yang kesemuanya mempengaruhi kecepatan
gerak senyawa.
1. Cellulose asetat
2. Larutan Buffer
Larutan buffer (penyangga) ini menstabilkan pH medium pendukung. Buffer
juga dapat mempengaruhi kecepatan gerak senyawa karena beberapa hal,
yaitu :
a. Komposisi
Buffer harus tidak mengikat senyawa yang dipisahkan karena akan
mempengaruhi kecepatan gerak. Buffer borat dipakai untuk memisahkan
karbohidrat, karena dapat membentuk gabungan yang bermuatan listrik
dengan karbohidrat.
b. Konsentrasi
Dengan naiknya kekuatan ion buffer, jumlah arus listrik yang terbawa
meningkat dan bagian aliran yang dibawa sampel menurun, sehingga
memperlambat geraknya. Kekuatan ion tinggi dalam buffer akan
meningkatkan arus keseluruhan sehingga panas juga meningkat,
biasanya dipilih 0,05 -0,10M.
c. pH
Tingkat ionisasi asam-asam organik akan bertambah apabila pH
bertambah, sebaliknya untuk basa-basa organik,oleh sebab itu tingkat

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS 10

 kecepatan geraknya juga terpengaruh oleh pH. Kedua pengaruh dapat
terjadi pada senyawa seperti asam aminoyang memiliki sifat asam dan
basa.
3. Medan elektrik
Apabila voltase diberikan diantara dua elektroda, arus ditentukan oleh
tahanan dalam medium.
a. Voltase
Apabila jarak antara dua elektroda adalah 1 meter dan perbedaan
potensial antara keduanya adalah V volt sehingga gradient potensialnya
adalah V/1m. Kenaikan gradient potensial akan menyebabkan kecepatan
gerak ion.
b. Aliran listrik
Arus aliran listrik dalam larutan antara dua elektroda disebabkan
umumnya oleh ion buffer dan sedikit oleh ion dalam sampel. Kenaikan
voltase akan meningkatkan jumlah muatan yang dipindahkan setiap detik
kearah elektroda. Jarak yang ditempuh ion akan sebanding dengan
waktunya.
c. Tahanan
Medium elektroforesa menimbulkan pada aliran ion sebanding dengan
jenis medium, jenis buffer dan konsentrasinya. Tahanan akan meningkat
dengan bertambahnya jarak antara elektroda, namun berkurang dengan
bertambahnya luas permukaan elektroda dan konsentrasi ion dalam
buffer.

D. Komponen utama alat

1. Larutan elektrolit: larutan pembawa komponen umumnya buffer dengan pH
tertentu.
2. Zat pendukung: tempat pemisahan terjadi. Biasanya berupa kertas(selulosa
asetat, selulosa nitrat), gel kanji, gel polikrilamid, busa poliuretan, agar-agar.
3. Elektroda: dengan anoda dan katoda yang dihubungkan arus listrik.

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS 11

 Gambar 7. Rangkaian Alat elektroforesis

Berdasarkan bentuk alat, elektroforesis dibagi menjadi dua:

1. Elektroforesis Planar
2. Elektroforesis Kolom
Pemisahan pada elektroforesis, selain disebabkan oleh fenomena
elektrokinetik, juga dapat disebabkan karena adanya filtrasi, yakni interaksi
dengan fasa diam. Pemisahan yang disebabkan karena interaksi tersebut
tidak disebut elektroforesis, melainkan "elektrokromatografi". Arus yang
digunakan pada elektroforesis adalah arus DC dengan nilai tegangan kurang
dari 1000 volt. Apabila digunakan lebih dari 1000 volt maka akan terjadi efek
pemanasan pada media gel. Efek pemanasan tersebut disebut "efek Joule"
yang disebabkan karena adanya tumbukan partikel elektron. Efek
pemanasan dapat dihilangkan dengan dua cara, yakni:
1. Pendinginan
2. Efek Konveksi. Efek konveksi adalah suatu cara untuk membebaskan
panas dengan mengganti bentuk planar menjadi bentuk kolom atau
kapiler. Kapiler yang digunakan dibuat dari silika yang bermuatan netral
atau negatif. Bagian luar kapiler dilapisi dengan polimer agar bersifat
lentur.

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS 12

Electro Osmotic Flow (EOF)
Jika kapiler pada elektroforesis diberi tegangan, maka akan terjadi
perpindahan muatan ke arah kutub negatif (-). Perpindahan yang terjadi disebut
"electroosmotic flow (EOF)". Pergerakan elektrolit yang tidak dipengaruhi oleh
EOF disebut "elektroforetik". Prinsip kerja EOF dapat dilihat pada gambar
berikut.

Gambar 8. Prinsip Kerja EOF

Dari gambar diatas dapat dilihat bahwa terjadi pemisahan anatara muatan
positif dengan muatan negatif akibat adanya lapis rangkap listrik. Lapis rangkap
listrik terjadi akibat pemberian tegangan yang sangat tinggi pada dinding pipa
kapiler. Sebelum diberi tegangan, permukaan kapiler akan bermuatan netral,
setelah diberi tegangan, maka ion negatif akan menempel pada permukaan
sebagai lapis pertama. Ion positif akan mengikuti ion negatif membentuk lapisan
pada permukaan, dalam hal ini ion positif akan membentuk lapisan kedua.
Sistem ini disebut lapis rangkap listrik.
Kecepatan migrasi elektroforesis dipengaruhi oleh ukuran, bentuk, serta
muatan dari masing-masing komponen. Kecepatan migrasi yang tinggi akan
terjadi jika komponen memiliki muatan tinggi dan ukuran rendah, dengan kata
lain memiliki densitas muatan yang tinggi. Densitas muatan sendiri adalah

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS 13

 perbandingan anatara muatan dengan ukuran yang dimiliki oleh suatu
komponen.

E. Manfaat
Elektroforesis gel secara luas digunakan untuk memperkirakan ukuran
fragmen DNA , misalnya dalam pemetaan pembatasan DNA kloning. Metode ini
juga digunakan dalam diagnosis genetika molekuler atau sidik jari genetik
melalui analisis PCR. Elektroforesis gel agarosa juga digunakan untuk
menyelesaikan DNA melingkar dengan perbedaan superkoil topologi, dan untuk
menyelesaikan fragmen yang berbeda karena sintesis DNA. Selain menyediakan
media yang tepat untuk analisis ukuran fragmen, gel memungkinkan pemurnian
fragmen DNA.
F. Prosedur kerja elektroforesis DNA
Adapun prosedur kerja dalam melakukan elektroforesis DNA menggunakan
teknik elektroforesis gel agarosa sebagai berikut :

Bahan dan Alat

1. DNA marker, misalnya DNA λ yang dipotong dengan HindIII
2. Sampel DNA, misalnya :
3. DNA kromosom bakteri,
4. DNA plasmid hasil isolasi (uncut)
5. DNA plasmid hasil restriksi (cut)
6. Agarosa
7. Larutan buffer TAE 50x (242 g tris-base; 57,1 g asam asetat glacial; 100 ml
EDTA 0,5 M pH 8; dilarutkan dalam akuades hingga 1000 ml)
8. Akuades
9. Gelas Ukur 1000 ml
10. Labu Erlenmeyer 50 ml
11. Tabung mikrosentrifuga
12. Sarung tangan
13. Seperangkat mikropipet beserta tipnya (Bio-Rad dan Axygen Scientific)

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS 14

14. Kertas parafilm
15. seperangkat alat elektroforesis
16. Loading dye 6x (0,25% bromophenol blue; 0,25% xylene cyalol; 15% ficoll
tipe 4000; EDTA 120 mM)
17. larutan Etidium Bromid (EtBr)
18. UV transluminator
19. Kaca mata UV
20. kamera digital

Cara Kerja
1. Buat 250 ml larutan buffer TAE 1x dengan cara mencampurkan 5 ml TAE 50x
ke dalam 245 ml akuades.
2. Buat gel agarosa 1% dengan cara menimbang agarosa 0,2 g untuk dilarutkan
ke dalam bufer TAE 1x hingga volume 20 ml. Larutan agarosa dididihkan
hingga larut sempurna.
3. Siapkan baki gel agarosa, lekatkan selotip di tiap ujung baki gel agarosa
(pastikan bahwa selotip melekat kuat dan tidak ada lubang pada masing-
masing ujung baki)
4. Pasang sisir elektroforesis di salah satu ujung baki gel agarosa dengan posisi
hampir menyentuh dasar baki
5. Periksalah suhu larutan agarosa dengan cara menempelkan erlenmeyer ke
tangan, jika suhunya sudah turun hingga sekitar 50-60 0C, tambahkan 1 µl
etidium bromid (PERINGATAN KERAS!!, gunakan sarung tangan karena
bersifat karsinogenik).
6. Larutan agarosa dihomogenkan sebentar, kemudian tuangkan larutan ke
dalam baki gel agarosa, biarkan hingga larutan berubah menjadi gel yang
padat.
7. ambil sisir dengan hati-hati, lepaskan selotip dari ujung-ujung baki.
8. masukkan baki yang telah berisi gel agarosa ke dalam tangki elektroforesis
yang telah diisi dengan larutan bufer TAE 1x (pastikan bahwa gel terendam
seluruhnya dalam TAE).

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS 15

9. siapkan sekitar 5 cm kertas parafilm di dekat tangki elektroforesis.
10. masukkan 10 µl sampel DNA dan 2 µl loading dye 6x ke dalam sumuran gel
agarosa dengan cara mencampurkan kedua bahan tersebut terlebih dahulu
secara merata pada kertas parafilm menggunakan mikropipet.
11. buatlah catatan mengenai nomor sumuran dan jenis sampel DNA yang
dimasukkan.
12. hubungkan kabel dari sumber arus ke tangki elektroforesis (pastikan bahwa
kabel yang tersambung ke kutub negatif berada di dekat sumuran; jika tidak
demikian, ubahlah posisi baki/gel ke arah sebaliknya).
13. nyalakan sumber arus, aturlah volatase dan waktu running hingga diperoleh
angka 70 V dan 45 menit dengan cara menekan tombol yang sesuai pada
sumber arus.
14. jalankan elektroforesis (lakukan running) dengan cara menekan tombol run
pada sumber arus.
15. elektroforesis akan berhenti apabila waktu yang ditetapkan sudah habis, yang
ditandai oleh adanya bunyi alarm. Matikan sumber arus dan angkatlah baki
dari tangki elektroforesis.
16. keluarkan gel dan letakkan di atas UV transluminator (letakkan selubung kaca
hitam di atas UV transluminator).
17. nyalakan UV transluminator, amati pita-pita DNA yang tervisualisasi.

Hasil
Pita-pita DNA hasil elektroforesis dengan nomor sumuran dan jenis
sampelnya. Perkirakan ukuran masing-masing fragmen/pita dengan
membandingkannya dengan posisi migrasi pada DNA marker. Metode ini
didasarkan pada pergerakan molekul bermuatan dalam media penyangga
matriks stabil, di bawah pengaruh medan listrik. Media yang umum digunakan
adalah sel agarosa atau poliakrilamid. Elektroforesis gel agarosa digunakan
untuk memisahkan fragmen DNA yang berukuran lebih besar dari 100 pb dan
dijalankan secara horizontal, sedangkan elektroforesis poliakrilamid dapat

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS 16

memisahkan 1 pb dan dijalankan secara vertical. Elektroforesis poliakrilamid
biasanya digunakan untuk menentukan DNA (sekuensing).
Larutan yang bermuatan negatif dimasukkan ke dalam sumur-sumur yang
terdapat pada gel agarosa dan diletakkan di kutub negatif, apabila dialiri arus
listrik dengan menggunakan larutan buffer yang sesuai maka DNA akan
bergerak ke kutub positif. Laju migrasi DNA dalam medan listrik berbanding
terbalik dengan massa DNA. Migrasi DNA terutama ditentukan oleh ukuran
panjang dan bentuk DNA. Fragmen DNA yang berukuran kecil akan bermigrasi
lebih cepat dibandingkan yang berukuran besar, sehingga elektroforesis mampu
memisahkan fragmen DNA berdasarkan ukuran panjangnya. Untuk visualisasi
maka ditambahkan larutan etidium bromida yang akan masuk diantara ikatan
hydrogen pada DNA, sehingga pita fragmen DNA akan kelihatan dibawah
lammpu UV. Panjang amplikon bisa diperkirakan dengan membandingkannya
dengan pita DNA standar.
Karena pita-pita atau puncak-puncak protein terlalu rapat cenderung
saling tumpah-tindih, metode pemisahan satu dimensi, seperti elektroforesis gel
poliakrilamida SDS atau kromatografi, hanya mampu menguraikan protein dalam
jumlah yang relatif kecil (umumnya kurang dari 50). Sehingga digunakan
elektroforesis gel dua dimensi yang menggabungkan dua prosedur pemisahan
yang berbeda. metode ini dapat menguraikan lebih dari 1000 macam protein
melalui pemetaan dua dimensi.

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS 17

 BAB III
PENUTUP
A. Kesimpulan
Elektroforesis adalah teknik pemisahan komponen atau molekul bermuatan
berdasarkan perbedaan tingkat migrasinya dalam sebuah medan listrik . Medan listrik
dialirkan pada suatu medium yang mengandung sampel yang akan dipisahkan. Secara
umum, elektroforesis digunakan untuk memisahkan, mengidentifikasi, dan memurnikan
fragmen DNA.
Adapun jenis elektroforesis adalah elektroforesis kertas dan elektroforesis
gel.elektroforesis kapiler.

B. Saran
 Dalam praktikum setidaknya penjelasan demi penjelasan harus diperhatikan,
karna bagi kita dalam praktikum ini masih banyak yang belum dimengerti.

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS 18

 DAFTAR PUSTAKA

Yahya, L. A., Ita, U., Fredy, K.(2016). Pemanfaatan Nata de Coco sebagai Media Gel
Elektroforesis Pada Zat Warna Remazol:Pengaruh pH, Waktu dan Aplikasi
Pemisahan Gelatin. Jurnal Sains dan Seni ITS. Vol 5.No.2.2337-3520

Westermeier, R. 2004. Electrophoresis in Practice: A Guide to Methods and

Applications of DNA and Protein Seperations. Germany:Wiley-VCH Verlag
GmbH&Co.(9-43)

http://kumpulan-makalah-baru.blogspot.com/2012/06/elektroforesis.html

http://majalahkimia.blogspot.com/2011/12/elektroforesis.html

https://www.scribd.com/doc/183737663/Elektroforesis-adalah-teknik-pemisahan-
komponen-atau-molekul-bermuatan-berdasarkan-perbedaan-tingkat-migrasinya-docx

http://kamriantiramli.wordpress.com/2011/05/08/elektroforesis/

http://id.wikipedia.org/wiki/Elektroforesis

https://www.google.co.id/url?
sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=1&cad=rja&uac=8&ved=0CBwQFjAA&url=http
%3A%2F%2Fdownload.fa.itb.ac.id%2Ffilenya%2FHandout%2520Kuliah%2FAnalisis
%2520Senyawa%2520Aktif%2FEle

https://www.google.co.id/url?
sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=7&cad=rja&uact=8&ved=0CEIQFjAG&url=http
%3A%2F%2Fkrishnapcandra.files.wordpress.com%2F2011%2F06%2Fpertemuan-ke-
14-dan-15_color.pdf&ei=hYwsVLq3OsWpuwTN4oLYDA&usg=AFQjCNFnRvYLpwMP-
30osiIuKXS6oZ5HIg&sig2=0j2IrFakZu8xGqt2itoh6Q&bvm=bv.76477589,d.c2E

http://helensonitahabibie.blogspot.com/2012/05/teori-elektrophoresis-kapiler.html

http://blog.ub.ac.id/fathulmubin/

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS 19

DIAN PRASETYA | ELEKTROFORESIS 20