A.

Tujuan
Mengetahui potensi imunomodulator suatu senyawa atau ekstrak bahan alam
melalui pengujian aktivitas fagositosis makrofag, ex vivo atau in vitro.

B. Cara Kerja
C.
Isolasi Sel Makrofag

Dikorbankan tikus dengan injeksi intra peritonial (i.p) Ketamin 0,9 mL

Diletakkan mencit dalam posisi terlentang dalam operation tray

Disterilkan abdomen mencit dengan etanol 70%

Dimasukkan media RPMI dingin ke dalam rongga peritonial (kira-kira 2-3 mL)
menggunakan syringe secara perlahan

Dibiarkan beberapa saat sambil ditekan rongga perut secara perlahan

DIbuat irisan dan dibuka kulit abdomen, diambil kembali cairan RPMI dari rongga
peritonial, dipindahkan aspirat ke dalam cairan tube 15 mL steril

Disentrifugasi aspirat selama 10 menit pada 1000 rpm, 40C

Di dalam BSC, dibuang supernatan dan disuspensikan pellet ke dalam media RPMI
komplit (tergantung banyak pelet)

Dihitung jumlah sel dengan hemositometer

Diambil 10 μL untuk counting

Uji AKtivitas Makrofag

Di dalam BSC, disiapkan coverslip steril dan 24 well plate, diberi label, diletakkan
coverslip ke dalam tiap sumuran

Diresuspensikan sel makrofag hasil counting ke dalam media RPMI (~1mL) sehingga
jumlah sel 2 x 105 sel/mL, dimasukkan 500 μL (105 sel/sumuran) ke dalam sumuran
sesuai kelompok masing-masing

Diinkubasi selama 4 jam s/d overnight pada inkubator CO2 suhu 370C

Disiapkan suspensi lateks ke dalam PBS (5 x 106 partikel/mL), ditambahkan 10 μL

suspensi lateks ke dalam tiap sumuran

Diinkubasi selama 1 jam pada inkubator CO2 suhu 370C

Di luar BSC, diambil dan dibuang media dari tiap sumuran

Dicuci 3x dalam 1 mL PBS

Difiksasi sel dengan 1 mL metanol dingin selama 30 detik-1 menit

Dibuang metanol dari tiap sumuran, dibiarkan coverslip di dasar sumuran kering
pada suhu ruang

Dilakukan pengecatan dengan 2% v/v Giemsa yang dibuat baru, diinkubasi pada suhu
ruang

Dibuang larutan Giemsa

Dicuci dengan PBS atau akuades hingga bersih

Dikeringkan coverslip pada suhu ruang

Diamati di bawah mikroskop (posisi upside down)

Ditentukan indeks fagositosis dan rasio fagositosis

KESIMPULAN

1. Aktivitas fagositosis makrofag terhadap lateks sebagai antigen sangat baik

dengan rasio fagositosis sebesar 98%
2. Indeks fagositosis makrofag rata-rat dari 1 golongan adlah 9.29