IDENTIFIKASI ASAM AMINO PADA SAMPEL UNKNOWN MELALUI TEKNIK

KROMATOGRAFI KERTAS
oleh,
Ni Ketut Devi Puspasari (1813031016)
Jurusan Pendidikan kimia, FMIPA, Universitas Pendidikan Ganesha
email: devipuspasari97@gmail.com

ABSTRAK

Tujuan dari percobaan ini adalah untuk mengetahui perbandingan koefisien distribusi (R f)
dari berbagai asam amino dan untuk menentukan kandungan asam amino pada sampel melalui
kromatografi kertas dengan teknik ascending. Protein tersusun atas monomer dari protein yaitu
asam α-amino. Terdapat 20 jenis asam amino dalam protein sebagai hasil langsung dari kode
genetik. Menentukan jenis asam amino maupun kuantitas masing-masing asam amino perlu
diadakan pemisahan antara asam-asam amino tersebut. Kromatografi merupakan suatu metode
pemisahan campuran yang memiliki dua fase yaitu fase diam dan fase bergerak yang digunakan
untuk menghitung nilai Rf atau derajat retensi suatu komponen dalam fase diam. Percobaan ini
dilaksanakan untuk menentukan nilai Rf pada larutan standar asam amino yang menggunakan
eluen fenol dan campuran n-butanol.Koefisien distribusi (R f) pada eluen fenol untuk asam amino
triptofan, leusin, tirosin, metionin, glisin berturut-turut adalah 0,79; 1,00; 0,95; 0,94; 0,92. Sampel I
yaitu 0,79; dan 0,52. Sampel II yaitu 0,8;0,94;0,92 sedangkan Sampel III yaitu 0,99;0,95. Pada
eluen campuran n-butanol, asam asetat glasial dan aquades nilai R f triptofan, leusin, tirosin,
metionin, glisin berturut-turut adalah yaitu 0,68; 0,79; 0,70; 0,88; 0,80. Sampel I yaitu 0,68.
Sampel II yaitu 0,68;0,82; 0,88. sedangkan Sampel III yaitu 0,79;0,70. Kromatografi kertas dengan
menggunakan eluen fenol-air Sampel I yakni triptofan. Sampel II terdiri dari 3 jenis asam amino
yakni triptofan, metionin, dan glisin, dan Sampel III yaitu leusin dan tirosin, sedangkan pada
kromatografi kertas dengan menggunakan eluen campuran n-butanol, aquades dan asam asetat
glasial Sampel I terdiri dari asam amino yaitu triptofan. Sampel II yaitu triptofan, metionin, dan
glisin sedangkan Sampel III yaitu leusin dan tirosin.
Kata kunci: eluen, kromatografi, nilai Rf
ABSTRACT
The purpose of this experiment is to determine the ratio of the distribution coefficient (Rf) of various
amino acids and to determine the amino acid content in the samples through ascending paper
chromatography techniques. Proteins are composed of monomers of the protein α - amino acid . There are
20 types of amino acids in the protein as a direct result of the genetic code .Determine the type and quantity
of amino acids of each amino acid should be a separation between the amino acids . Chromatography is a
method of separating a mixture of two phases, namely the stationary phase and mobile phase were used to
calculate the Rf value or degree of retention of a component in the stationary phase. This experiment was
conducted to determine the Rf values of standard solutions of amino acids were eluted using a mixture of
phenol and n – butanol.The distribution coefficient (Rf) in the eluent phenol for the amino acid tryptophan,
leucine, tyrosine, methionine, glycine respectively 0,79; 1,00; 0,95; 0,94; 0,92. The sample A is 0,79.
Samples B is 0,8;0,94;0,92 while the C sample is 0,99;0,95. In the eluent mixture of n-=butanol, glacial
acetic acid and distilled water Rf value of tryptophan, leucine, tyrosine, methionine, glycine respectively is
0,68; 0,79; 0,70; 0,88; 0,80. The sample A is 0,68. Samples B, 0.48; 0.12 while the C sample is 0,79;0,70.
Paper chromatography using phenol-water eluent sample A consists of 3 types of amino acids namely
leucine, methionine and tryptophan. Samples B, namely methionine and sample C, typtofhan, whereas on
paper chromatography using a mixture of n-butanol eluent, distilled water and glacial acetic acid sample A
is composed of three amino acid tryptophan, methionine, and glycine. Samples B, methionine and glycine,
while the sample C, leusyn and tyrosin.
Keywords: chromatography, eluent, Rf value
PENDAHULUAN
Kromatografi adalah salah satu
metode pemisahan kimia yang didasarkan
pada adanya perbedaan partisi zat pada fasa
diam (stationary phase) dan fasa gerak
(mobile phase). Fase gerak membawa zat
terlarut melalui media sehingga terpisah
dari zat terlarut lainnya yang terelusi lebih
awal atau lebih akhir. Fase diam dapat
bertindak sebagai penyerap, seperti alumina
dan slika gel atau dapat bertindak
melarutkan zat terlarut sehingga terjadi
partisi antara fase diam dan fase gerak.
Dalam proses ini suatu lapisan cairan pada
penyangga yang inert berfungsi sebagai
fase diam.
Dalam kromatografi selalu terdapat
salah satu kecenderungan sebagai berikut;
(a) kecenderungan molekul-molekul
komponen untuk melarut dalam cairan; (b)
kecenderungan molekul-molekul
komponen untuk melekat pada permukaan
padatan halus; (c) kecenderungan molekul-
molekul komponen untuk bereaksi secara
kimia (penukar ion); (d) kecenderungan
molekul-molekul tereklusi pada pori-pori
fasa diam. Pemisahan terjadi berdasarkan
perbedaan migrasi zat-zat yang menyusun
suatu sampel. Hasil pemisahan dapat
digunakan untuk keperluan identifikasi
untuk analisis kualitatif, penetapan kadar
untuk analisis kuantitatif, pemurnian suatu
senyawa (Soebagio,dkk. dalam Tika,
2010).
Terdapat berbagai macam jenis
kromatografi berdasarkan wujud fase gerak
dan fase diamnya. Salah satu contonya
adalah kromatografi kertas yang terdisi dari
fase diam dan fase gerak berupa cairan.
Adsorben dalam kromatografi kertas adalah
kertas saring, yakni selulosa. Sampel yang
akan dianalisis ditotolkan ke ujung kertas
yang kemudian digantung dalam wadah.
Kemudian dasar kertas saring dicelupkan
kedalam pelarut (fase gerak) yang dapat
berupa air, etanol, atau asam asetat.
Kromatografi kertas dapat digunakan untuk
mengidentifikasi asam amino yang terdapat
dalam suatu sampel. Hal ini pertama kali
dilakukan oleh seorang kimiawan Inggris
Richard Laurence Millington Synge (1914-
1994).
Senyawa kompleks yang tersusun
atas asam amino dapat disederhanakan
dengan menggunakan metode kromatografi
kertas. Saat campuran asam amino menaiki
lembaran kertas secara vertikal karena ada
fenomena kapiler, partisi asam amino
antara fasa mobil dan fasa diam (air) yang
teradsorbsi pada selulosa berlangsung
berulang-ulang. Ketiak pelarut mencapai
ujung atas kertas proses dihentikan. Setiap
asam amino bergerak dari titik awal
sepanjang jarak tertentu. Dari nilai Rf,
masing-masing asam amino
dapatdiidentifikasi.
Setiap komponen memiliki harga Rf
tertentu. Besaran Rf ini merupakan derajat
retensi suatu komponen dalam fasa diam.
Karena itu, Rf juga disebut dengan factor
retensi. Harga Rf dapat dihitung dengan
dengan jarak yang ditempuh oleh
komponen dibagi dengan arak tempuh
eluen (Tika, 2010)
Jarak yang ditempuh komponen
Rf =
Jarak yang ditempuh eluen
METODE
Alat yang digunakan dalam praktikum
ini yaitu pipa kapiler 8 buah, ruang
kromatografi 1 buah, gelas kimia 100 mL 2
buah, penggaris 1 buah, penjepit kayu 2
buah, dan pemanas.Bahan yang digunakan
dalam praktikum ini yaitu larutan elusi n-
butanol, asam asetat glasial, dan aquades,
kertas kromatografi ukuran 15cm x 25cm 4
buah, larutan asam amino glisin, leusin,
metionin, tirosin,triptofan, larutan
ninhidrin, fenol, sampel unknown I, II dan
III.
Prosedur kerja
Pembuatan larutan elusi
Sebanyak 100 mL larutan n-butanol
ditambahkan 24 mL asam asetat glasial dan
100 mL aquades dituangkan ke dalam
corong pisah kemudian dikocok. Lapisan
yang terbentuk dipisahkan.
Penyiapan kertas kromatografi
Kertas kromatografi disiapkan dengan
ukuran 15cm x 25cm kemudian diberi
tanda pada tepi bawah kertas sekitar 1,5 cm
dari tepi bawah.
Proses kromatografi dengan
menggunakan eluen fenol
Larutan standar asam amino dan
sampel unknown ditotolkan dengan pipa
kapiler pada kertas kromatografi secara
terpisah. Jarak totolan antara satu dengan
yang lainnya adalah 1,5 cm. Perlu
diperhatikan, tiap tetesan harus dikeringkan
terlebih dahulu dengan diangin-angikan
sebelum tetesan berikutnya ditotolkan.
Besar noda tidak melebihi 0,4 cm. Kertas
dijaga bersih dan sedapat mungkin tidak
tersentuh oleh jari. Selanjutnya kertas
digantungkan dalam ruang kromatografi
selama bebrapa jam agar elusi dapat
berjalan. Setelah larutan berjalan ± 10 cm
dari batas sampel, elusi dihentikan dan
kertas kromatografi dikeluarkan dari ruang
kromatografi. Batas larutan ditandai dengan
pensil dan kertas kromatografi dikeringkan.
Kemudian kertas yang telah kering
disemprot dengan larutan ninhidrin yang
selanjutnya dikeringkan kembali. Jarak
eluen dengan jarak warna yang terbentuk
diukur.
Proses kromatografi dengan
menggunakan eluen campuran n-
butanol, asam asetat glasial, dan aquades
Larutan standar asam amino dan sampel
unknown ditotolkan dengan pipa kapiler
pada kertas kromatografi secara terpisah.
Jarak totolan antara satu dengan yang
lainnya adalah 1,5 cm. Tiap-tiap tetesan
harus dikeringkan terlebih dahulu dengan
diangin-angikan sebelum tetesan
berikutnya ditotolkan. Besar noda tidak
melebihi 0,4 cm. Kertas dijaga bersih dan
sedapat mungkin tidak tersentuh oleh jari.
Karena diyakinkan ruang kromatografi
telah jenuh oleh uap eluen. Selanjutnya
kertas digantungkan dalam ruang
kromatografi dicelupkan tepi bawah ketas
kromatografi dalam eluen. Setelah larutan
berjalan ± 10 cm dari batas sampel, elusi
dihentikan dan kertas kromatografi
dikeluarkan dari ruang kromatografi. Batas
larutan ditandai dengan pensil dan kertas
kromatografi dikeringkan. Kemudian kertas
yang telah kering disemprot dengan larutan
ninhidrin yang selanjutnya dikeringkan
kembali. Noda-noda yang terlihat diukur
jaraknya dan dapat dihitung harga Rf-nya.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Percobaan ini dilakukan dengan
kromatografi kertas menggunakan eluen
yang berbeda yaitu eluen campuran n-
butanol, aquades, dan asam asetat glasial
dan eluen fenol-air, dimana percobaan ini
dilakukan dengan teknik ascending (eluen
bergerak dari bawah ke atas). Kromatografi
kertas ini dilakukan untuk menentukan
asam-asam amino yang terdapat pada suatu
sampel unknown, dimana penentuan asam
amino dilakukan dengan membandingkan
harga Rf masing-masing asam amino yang
terdeteksi pada sampel dengan harga Rf
asam amino standar yang telah ditetapkan
sebelumnya. Larutan standar asam amino
yang digunakan yaitu leusin, tirosin,
triptofan, metionin, glisin. Sedangkan
senyawa unknown yang digunakan diberi
nama sampel A, B, dan C.
Percobaan ini diawali dengan
menyiapkan larutan elusi (eluen).Ada dua
eluen yang digunakan dalam percobaan ini,
yaitu eluen pertama yang terdiri atas fenol
bersifat non polar dan air bersifat polar,
sedangkan eluen kedua terdiri atas n-
butanol, asam asetat glasial, dan air. Secara
teoritis, pembuatan eluen kedua dilakukan
dengan menambahkan sebanyak 100 mL
larutan n-butanol dengan 100 mL aquades
dan 24 mL asam asetat glasial. Ketiga
larutan tersebut ditempatkan dalam corong
pisah dan akan terbentuk dua lapisan.
Lapisan yang terbentuk dipisahkan. Bagian
bawah lapisan digunakan untuk
menjenuhkan wadah kromatografi
sedangkan bagian atas lapisan digunakan
sebagai eluen. Eluen yang digunakan
berupa larutan bening tak berwarna.
Pada percobaan pertama
menggunakan campuran n-butanol, asam
asetat glasial, dan aquades sebagai eluen,
dimana larutan eluen ini sudah disiapkan
sebelumnya. Dalam hal ini yang bertindak
sebagai fase gerak adalah pelarut non-polar
yaitu n-butanol, sedangkan sebagai fasa
diam adalah pelarut polar yaitu air. Adanya
asam asetat dalam eluen ini bertujuan untuk
mendistribusikan kedua pelarut yang tidak
saling bercampur, dimana n-butanol dan air
sama-sama dapat terdistribusi dalam asam
asetat sehingga perbandingan volumenya
tertentu dapat diperoleh campuran yang
mengandung n-butanol, asam asetat, dan air
digunakan untuk menjenuhkan kertas
kromatografi, campuran ini bermigrasi ke
seluruh kertas, dimana komponen polar
yaitu air akan teradsorpsi pada media
Eluen akan bermigrasi ke seluruh
bagian kertas. Proses bergeraknya eluen ini
yaitu dari bawah ke atas, sehingga
dinamakan proses ascending dan ini
melalui kapiler kertas mengangkut
campuran asam amino yang ada pada kertas
kromatografi. Asam amino yang paling
larut di dalam pelarut organik akan
pendukung (kertas). Molekul-molekul air
(sebagai fasa polar) akan terdistribusi pada
permukaan kertas. Dimana interaksi yang
terjadi merupakan hal yang sangat penting
dalam kromatografi kertas.
Molekul air (sebagai fasa diam)
yang teradsorpsi pada permukaan kertas,
menimbulkan ribuan tetesan kecil, hal ini
memungkinkan air bertindak sebagai fasa
diam. Tetesan fasa diam yang teradsorpsi
ini dilewati fasa gerak yaitu komponen
non-polar pada eluen yaitu n-butanol,
sehingga terjadi partisi atau pemisahan
campuran dapat terjadi. Hal ini mengingat
bahwa adanya perbedaan distribusi asam
amino yang menyusun campuran dengan
fasa gerak dan air (fasa diam). Sebelum
digunakan, wadah kromatografi (chamber)
dijenuhkan terlebih dahulu. Penjenuhan ini
dilakukan agar tekanan atmosfernya
terjaga, sehingga tercapai suatu
kesetimbangan sebelum pengaliran pelarut
pada kertas dilakukan yang nantinya akan
menghasilkan pemisahan dan
pengidentifikasian yang baik, serta dapat
mempercepat proses pemisahan. Bagian
yang digunakan untuk menjenuhkan wadah
kromatografi dimasukkan ke dalam
chamber, kemudian chamber ditutup
sampai jenuh.
Kertas kromatografi yang digunakan
yakni dengan ukuran 15 x 25 cm.Pada
bagian tepi bawah kertas ditandai dengan
pensil. Tanda yang dibuat berupa garis
horisontal yang berjarak 1,5 cm dari tepi
bawah kertas. Kertas kromatografi yang
telah disiapkan ditetesi atau ditotolkan
dengan larutan standar asam amino
(triptofan, leusin, tirosin, metionin, dan
glisin) dan larutan sampel (sampel A, B,
C).
dipengaruhi oleh gaya kapiler. Pada saat
kertas kromatografi ditotolkan sampel asam
amino, maka akan terjadi pemisahan,
dimana pelarut organik merambat ke atas
diangkut paling cepat dan asam amino yang
kurang larut akan tertinggal paling bawah.
Pada percobaan pertama dilakukan
dengan menggunakan eluen fenol. Setelah
kertas kromatografi ditotolkan dengan
larutan standar asam amino (larutan
triptofan, leusin, tirosin, metionin, glisin)
dan larutan sampel unknown A, B, C.
Proses kromatografi dilanjutkan
dengan mencelupkan tepi bawah kertas
kromatografi dalam eluen fenol. Setelah
jarak eluen mencapai titik yang ditandai
pada kertas kromatografi, kertas
kromatografi dipanaskan diatas pemanas
dan disemprotkan larutan ninhidrin. Noda
dari asam amino tidak dapat langsung
terdeteksi warnanya, baik asam amino
standar maupun sampel asam amino. Hal
ini karena pada bagian permukaan
kromatogram masih terdapat molekul air
yang teradsorpsi sehingga ninhidrin tidak
bereaksi sempurna dengan asam amino.
Dengan demikian diperlukan pemanasan,
dimana dengan pemanasan yang tinggi
molekul-molekul air akan menguap.
Setelah dilakukan pemanasan, barulah
terdeteksi noda-noda berwarna ungu yang
mengindikasikan adanya asam amino yang
terdistribusi.

O O
R
OH HO
+
OH(aq)
H2 N C COOH
(aq) NH3(g) + CO2(g) + RCHO(aq) +
H
H (aq)

O O
Ninhidrin asam -amino ninhidrin tereduksi

Gambar 1. Reaksi ninhidrin terhadap asam amino

Setelah timbul noda berwarna ungu diidentifikasikan sebagai asam amino yang
dan coklat pada kertas kromatografi, maka sama.
harga Rf-nya dapat dihitung. Koefisien Berdasarkan hasil pengamatan
distribusi (Rf) merupakan perbandingan diperoleh jarak tempuh setiap sampel
jarak yang ditempuh oleh sampel dari garis dalam kertas kromatografi sehingga dapat
dasar dengan jarak yang ditempuh eluen dihitung nilai Rf dari masing-masing
dari garis dasar. Untuk menentukan jenis sampel untuk mengetahui kandungan asam
asam amino yang terkandung dalam sampel amino dari setiap sampel unknown.
perlu dibandingkan nilai Rf larutan standar Sehingga dapat dibuat tabel sebagai
dengan larutan sampel. Apabila asam berikut.
amino dengan nilai Rf yang sama atau
mendekati dengan salah satu standar maka
Tabel 1. Data hasil kromatografi dengan eluen fenol
Asam Amino Jarak Tempuh Jarak Tempuh Rf
Eluen (cm) Komponen (cm)
Triptofan 12,8 7,1 0,55
Leusin 12,8 11,9 0,93
Tirosin 12,8 1,8 0,14
Meitionin 12,8 11,5 0,89
Glisin 14,5 11,3 0,78
Sampel Unknown 14,5 13,3 0,92
A 14,5 12,2 0,84
14,5 7,6 0,52
Sampel Unknown 14,5 13,0 0,89
B
Sampel Unknown 14,5 10,8 0,75
C
 Dalam menentukan asam amino yang
ada pada sampek unknown digunakan
selisih Rf paling kecil yang merupakan
asam amino yang dimaksud. Berdasarkan
data di atas, dapat diketahui bahwa sampel
A pada eluen fenol memiliki nilai Rf yang
mendekati leusin, metionin, dan triptofan.
Bila dilihat dari selisish antara Rf sampel A
dengan Rf dari larutan yang lebih kecil
(paling mendekati) sehingga sampel A
diduga mengandung asam aminonleusin,
metionin, dan triptofan. Selanjutnya nilai
Rf dari sampel B mendektai nilai Rf dari
asam amino metionin sehingga sampel B
diduga mengandung asam amino metionin.
Sampel C memiliki nilai Rf mendekati nilai
Rf dari asam amino glisin sehingga nilai Rf
diduga mengandung asam amino glisisn.
Adapun data selisih Rf sampel unknown
dengan Rf standar oasa Eleuen fenol
sebagai berikut.

Tabel 2. Data Selisish Rf Sampel Unknown sengan Rf Standar Pada Eluen Fenol

Sampel Selisih Rf sampel Hasil

dengan Rf asam amino
standar
Sampel Unknown 0,93 – 0,92 0,01 (Leusin)
A 0,89 – 0,84 0,05 (Metionin)
0,55 – 0,52 0,03 (Triptofan)
Sampel Unknown 0,89 – 0,89 0.00 (Metionin)
B
Sampel Unknown 0,78 – 0,75 0,04 (Glisin)
C

Percobaan yang kedua dilakukan percobaan menggunakan eluen fenol yaitu

kromatografi kertas dengan menggunakan
eluen campuran n-butanol, aquades, dan
asam aasetat glasial. Pada eluen n-butanol
wadah kromatografi juga dilakukan
penjenuhan, dengan memasukkan eluen n-
butanol serta campurannya. Kromatografi
menggunakan eluen n-butanol tekniknya
sam dengan kromatografi menggunkana
eluen fenol. Setelah proses kromatografi
selesai, kertas kromatografi juga diperlukan
sama seperti kertas kromatografi pada
mengeringkan di atas pemanas listrik dan
setelah kering diseprot dengan larutan
ninhidrin. Kemudian dikeringkan kembali
di atas pemanas listrik. Setelah dikeringkan
timbul warna ungu kemudia diukur jarak
tempuh eluen dan jarak sampel masing-
masing asam amino serta sampel A, B, dan
c yang terdapat pada kertas kromatografi.
Jarak tempuh eluen dan larutan sampel
dilakukan pengukuranpada masing-masing
kertas didapatkan data sebagai berikut.

Tabel 3. Data Hasil Kromatografi Dengan Eluen n-butanol

Asam Amino Jarak Jarak Tempuh Rf
 Tempuh Komponen (cm)
Eluen (cm)
Triptofan 10 5,9 0,59
Leusin 10 7,0 0,70
Tirosin 10 2,1 0,21
Meitionin 10 4,2 0,42
Glisin 10 2,0 0,20
Sampel Unknown A 10 5,0 0,50
10 3,0 0,30
10 1,6 0,16
Sampel Unknown B 10 4,8 0,48
10 1,2 0,12
Sampel Unknown C 10 5,8 0,58
10 2,5 0,25
antara Rf sampel A dengan Rf dari larutan
triptofan, metionin, dan glisin memiliki
Untuk mengetahui kandungan asam
nilai yang kecil sehingga sampel A diduga
amino pada sampel dilakukan perhitungan
mengandung asam amino triptofan,
selisish nilai Rf sampel dengan nilai Rf
metionin, dan glisisn. Selanjutnya nilai rf
larutan asam amino standar pada eluen
dari sampel B mendektai nilai Rf dari asam
campuran n-butanol, asam asetat glasial,
amino metionin dan glisisn sehingga
dan aquades. Dalam menentukan asam
sampel B diduga mengandung asam amino
amino yang ada pada sampel unknown
metionin dan glisisn. Kemudian nilai Rf
digunakan selisish Rf paling kecil yang
dari sampel C sama dengan nilai Rf dari
merupakan asam amino yang dimaksud.
asam amino triptofan dan glisisn sehingga
Berdasarkan data di atas dapat diketahui
sampel C diduga mengandung asam amino
bahwa sampel A pada eluen campuran n-
triptopan dan glisisn. Adapun data selisish
butanol, asam asetat glasial, dan aquades
Rf sampel unknown dengan Rf Standar
memiliki nilai Rf yang mendekati triptofan,
pada eluen campuran n-butanol, asam
metionin, dan glisin. Bila dilihat dari selisih
asetat glasial, dam aquades sebagai berikut.
Tabel 4. Data Selisis Rf Sampel Unknown Rf Standar Pada Eluen n-butanol
Sampel Selisih Rf sampel Hasil
dengan Rf asam amino
standar
Sampel Unknown A 0,59 – 0,50 0,09 (Triptofan)
0,42 – 0,30 0,12 (Metionin)
0,20 – 0,16 0,04 (Glisin)
Sampel Unknown B 0,48 – 0,42 0,06 (Metionin)
0,20 – 0,12 0,08 (Glisin)
Sampel Unknown C 0,59 – 0,58 0,01 (Triptofan)
0,25 – 0,20 0,05 (Glisin)

Glisin) Berdasarkan data yang diperoleh bahwa sampel unknown A

didapatkan pada kedua eluen yang berbeda, mengandung asam amino leusin, triptofan,
metionin, dan glisin. Sampel B pada kesulitan dalam mengidentifikasi zat
mengandung asam amino metionin dan
glisin, sedangkan pada sampel C
mengandung asam amino triptofan dan
glisin. Namun, terdapat perbedaan
kandungan yang ada dalam sampel
unknown pada saat menggunakan eluen
fenol dan eluen campuran n-butanol, asam
asetat glasial, serta akuades disebabkan
karena eluen yang belum terdistribusi
secara maksimal sehingga pemisahan
belum terjadi secara sempurna. Terjadi
sentuhan atau gesekan antar kromatogram
ketika proses elusi, sehingga berdampak
SIMPULAN
Dari hasil percobaan yang telah dilakukan
maka dapat disimpulkan bahwa
perbandingan koefisien distribusi (Rf) dari
asam amino triptofan, leusin, tirosin,
metionin dan glisin dalam eluen fenol
berturut-turut: 0,554, 0,92, 0,14, 0,89, dan
0,78. Perbandingan koefisien distribusi (Rf)
dari asam amino triptofan, leusin, tirosin,
metionin dan glisin dalam eluen n- butanol
berturut-turut: 0,59, 0,7, 0,21, 0,42 dan 0,2.
Sampel unknown A mengandung
asam amino leusin, triptofan, glisin
dan metionin, sampel unknown B
mengandung asam amino metionin
dan glisin, dan sampel unknown C
mengandung asam amino glisin dan
triptofan.
yang terkandung dalam sampel. Selain itu
juga karena ketidaktepatan saat menotolkan
larutan pada kertas kromatografi yang
seharusnya pentotolan larutan tidak
melebihi diameter 0,4 cm. Dengan
demikian pada eluen fenol distribusi noda
asam amino yang terkandung pada sampel
unknown sulit untuk diidentifikasi. Hal
inilah menjadi penyebab perbedaan asam
amino yang didapatkan pada sampel
unknown antara menggunakan elun fenol
dan eluen n-butanol.
UCAPAN TERIMA KASIH
Dalam praktikum ini, praktikan mendapat
banyak dukungan dan bimbingan dari
banyak pihak. Untuk itulah dengan penuh
rasa hormat praktikan ucapkan terimakasih
kepada Bapak Dr. I Nyoman Tika, M.Si.
selaku dosen pengampu praktikum biokimia
DAFTAR PUSTAKA
Poedjiana, A, & Supriyanti, T. 2009. Dasar
Dasar Biokimia. Jakarta. Universitas
Indonesia Press.
Redhana, I Wayan. 2010. Penuntun
Praktikum Biokimia. Singaraja:
UNDIKSHA.
Tika, I Nyoman. 2010. Penuntun Praktikum
Biokimia. Singaraja: UNDIKSHA.