METODE KERJA

1.1 ALAT DAN BAHAN

1. ALAT
- Alat degassing
- Alat sanikasi
- Beker glass 250 ml
- Beker glass 500 ml
- Elenmeyer 500 ml
- Gelas ukur
- Labu ukur 250 ml
- pH meter
2. BAHAN
- ACN (Asetonitril ) 280 ml
- Asam fosfat
- Aquadest
- KH2PO4

1.2 CARA KERJA

Eluen = ACN (asetonitril) : Buffer Fosfat pH 3 = 70 : 30

A. PREPARASI ELUEN ( FASE GERAK)
1. Perhitungan Bahan
- Estimasi eluen yang digunakan untuk 4 jam ,laju alir HPLC 1ml/menit
1 jam = 60 menit
4 jam = 240 menit eluen (HPLC) = 240 ml /menit

70
Asetonitril = x 400 = 280 ml
1000
30
Buffer fosfat Ph 3 = x 400 = 120 ml
100

2. Pembuatan buffer fosfat pH

- Ditimbang 0,85 g KH2PO4
- dimasukkan ke dalam beker glass 500 ml dilarutkan dengan aquadest 200 ml add
larut
- adjust ke pH 3 menggunakan asam fosfat
- di atur pH dengan alat pH meter
- dimasukkan dalam labu ukur 250 ml larutan yang sudah pH3 lalu di add aquadest
hingga tanda batas

3. Pembuatan eluen (Fase gerak) Buffer fosfat dan asetonitril ( 30:70)

- Ukur bahan buffer fosfat pH 3 sebanyak 120 ml
 - Ukur bahan asetonitril sebanyak 280 ml
- Dicampurkan add hingga homogeny dalam elenmeyer 500ml , dilakukan
degassing selama 15 menit mengunakan ultra sonic bath

B. PREPARASI LARUTAN SAMPEL

- Kadar flavanoid total dalam ekstrak etanolik sambiloto sebesar 46,322 g/kg
ekstrak atau 4,63 % terhadap kuersetin
- Sampel sebanyak 25 g dimasukkan dalam 25 ml pelarut

46,522 g 46,522 g x
= =
1 kg 1000 g 25 g

46,322 g−25 g
x =
1000 g

x = 1,158 = 1,2 g