LAPORAN PRAKTIKUM ANALISIS OBAT, MAKANAN, DAN MINUMAN

PENETAPAN KADAR PROTEIN DALAM SUSU

DENGAN METODE FORMOL

Kelas / Klmpk :H–1

Nama Anggota Kelompok :
 Novrilia Wahyuningtias / 110117030 / 1
 Grace Natali / 110118039 / 2
 DevinaVerina / 110118046 / 3
Tanggal Praktikum : 21 April 2021
Judul Praktikum : Penetapan Kadar Protein dalam Susu Menggunakan Metode
Formol
Bentuk Sediaan : Larutan (Bentuk emulsi)
Pustaka Acuan : Slamet Sudarmadji, Prosedur Analisa Untuk Bahan Makanan dan
Pertanian, Edisi ke 4, Liberty, Yogyakarta, 1984, p. 70-71.

I. PROSEDUR ASLI
a. Pindahkan 10 ml susu atau larutan protein ke dalam Erlenmayer 125 ml dan tambahkan
20 ml aquades dan 0,4 ml larutan K-oksalat jenuh (K-oksalat : air = 1 : 3. Perhatian : K-
oksalat beracun) dan 1 ml phenolphtalein 1%. Diamkan selama 2 menit
b. Titrasilah larutan contoh dengan 0,1 N NaOH (lihat lampiran 16) sampai mencapai warna
seperti warna standar di bawah ini, atau sampai warna merah jambu.
Lampiran 16 (Standarisasi larutan 0,1 N NaOH)
 Ditimbang dengan teliti lebih kurang 0,1 g asam oksalat (C 2H2O4.2H2O) BM = 126;
dimasukkan ke dalam Erlenmayer 250ml dan ditambah aquades 25 ml. setelah larut
ditambah 2-3 tetes indikator phenolphtalein dan dititrasi dengan larutan NaOH yang
akan distandarisasi sampai warna merah jambu. Perhitungan N NaOH dari hasil rata-
rata 3 kali ulangan.

N larutan NaOH =
  Larutan NaOH harus disimpan dalam botol tertutup (lebih baik kalau dilengkapi
dengan alat penyaring CO2).
c. Warna standar : 10 ml susu + 10 ml aquades + 0,4 ml K-oksalat jenuh + 1 tetes 0,01%
indikator rosanilin-chlorida (lihat Lampiran 17).
Lampiran 17 (Larutan indikator Rosanilin-HCl)
 Dilarutkan 0,01 g kristal Rosanilin-HCl (C20H19N3.HCL) dalam ethanol 95% sampai
100 ml
d. Setelah warna tercapai, tambahkan 2 ml larutan formaldehid 40% dan titrasilah kembali
dengan larutan NaOH sampai warna seperti warna standar tercapai lagi. catatlah titrasi
kedua ini.
e. Buatlah titrasi blanko yang terdiri dari : 20 ml aquades + 0,4 ml larutan  K-oksalat jenuh 
+ 1 ml indikator phenolphtalein  + 2 ml larutan formaldehid; dan titrasilah dengan larutan
NaOH.
f. Titrasi terkoreksi yaitu titrasi kedua dikurangi titrasi blanko merupakan titrasi formol.
Untuk mengetahui % protein, harus dibuat percobaan serupa dengan menggunakan
larutan yang telah diketahui kadar proteinnya (misalnya dengan cara Kjeldahl).
g. Untuk susu dapat digunakan faktor 1,83 :
% Protein susu = 1,83 x ml titrasi formol
% Kasein = 1,63 x ml titrasi formol

%N=

Data yang diberikan

Saat praktikum didapatkan data sebagai berikut:

Volume titrasi pertama (mL) Volume titrasi kedua (mL)

0,00-2,22 2,22 – 5,23

0,00-2,19 2,19 – 5,20

 0,00-2,20 2,20 – 5,20

0,00-2,15 2,15-5,20

Volume NaOH yang diperlukan pada titrasi blanko: 0,50 ml

N NaOH = 0,1002 N (hitung kadar protein dalam susu)

Pada laporan tetap harus ditulis

1. Bagaimana perencanaan kerja/SOP yang akan anda lakukan, bahan dan alat yang digunakan
2. Langkah-langkah yang harus dikerjakan
3. Hasil yang didapat: Diambil dari data diatas. Perhatikan cara penulisan titran yang didapat
dari buret
4. Buat perhitungan yang benar
5. Buat kesimpulan
6. Buat pembahasan berdasarkan teori yg anda pernah dapat dan berdasar kesimpulan yg
diperoleh. Dasar teori apa yang digunakan?
7. Jangan lupa menulis tanggal, nama anggota kel, dan tanda tangan seperti seharusnya.

II. RENCANA KERJA

a. Prinsip Reaksi
b. Prinsip Kerja
- Pembuatan larutan baku primer asam oksalat
- Pembakuan larutan baku sekunder NaOH dengan larutan baku primer asam oksalat
- Titrasi blanko
- Penetapan kadar protein dalam susu dengan metode formol
c. Perhitungan Rencana Kerja
1. Asam oksalat
N asam oksalat = 0,1 N

N asam oksalat =

0,1 N =

Jadi Asam Oksalat = 0,63035g = 630,35mg ±5%598,8325mg – 661,8675 mg

2. NaOH
Untuk pembakuan:
Mgrek Asam oksalat = Mgrek NaOH
Vas. Oksalat x Nas. Oksalat = VNaOH x NNaOH
10,0 ml x 0,1 N = VNaOH x 0,1002 N
VNaOH = 9,98 ml (untuk 1 kali replikasi)
d. Alat

Jumlah
Nama Alat Fungsi
Alat
Timbangan milligram 1 set
Anak timbangan 1 set Untuk menimbang baku primer dan sampel
Timbangan analitik 1 set
Botol timbang tanpa Wadah untuk menimbang baku primer dan sampel
1 set
tutup
Labu Ukur 100,0 ml 1 buah Untuk pelarutan baku primer
Buret 10,0 ml 1 buah Untuk larutan NaOH
Gelas Ukur 25 ml Untuk mengukur air bebas mineral yang
1 buah
ditambahkan
Pipet volume:
2,0 ml 1 buah Untuk memipet larutan formadehid 40% (formalin)
10,0 ml 1 buah Untuk memipet larutan baku primer dan sampel
Pipet tetes Untuk mengambil larutan K-Okslaat, indikator
3 buah
phenolphtalein 1%, indikator Rosaline HCl 0,01%
Corong Untuk membantu memasukkan larutan NaOH ke
1 buah
dalam buret, asam oksalat dalam labu ukur
Erlenmeyer

125 ml 1 buah Untuk wadah penetepan kadar sampel

250 ml 3 buah Untuk pembakuan larutan NaOH dengan larutan
asam oksalat, wadah titrasi blanko, dan wadah
pembuatan warna standar
Batang pengaduk Untuk membantu memasukkan larutan NaOH ke
dalam buret, asam oksalat dalam labu ukur
Sendok tanduk 1 Untuk mengambil baku primer
Beaker glass
100 ml 1 Untuk mengukur air bebas mineral sebelum
ditambahkan ke baku primer
250 ml 1 Untuk wadah air bebas mineral pembilasan alat
Klem dan statif 1 Untuk tempat penyangga buret
Pinset 1 Untuk mengambil anak timbangan

e. Bahan
 Nama Bahan
Sampel susu
Serbuk Asam Oksalat
Larutan Formaldehid 40%
(Formalin)
Larutan NaOH 0,1 N
Larutan K2C2O4 Jenuh (dengan
perbandingan K2C2O4 : Air = 1: 3)
Indikator phenolphtalein 1%,
Indikator Rosaline HCl 0,01%
Air bebas mineral
Kertas saring
Jumlah Bahan
Untuk warna standart = 10,0 ml x 1 replikasi = 10,0 ml
Untuk sampel susu = 10,0 ml x 4 replikasi = 40,0 ml
Jadi sampel susu yang di ambil = 50,0 ml
630,35 mg ± 5%
Untuk sampel susu = 2,0 ml x 4 replikasi = 8,0 ml
Untuk blanko = 2,0 ml x 1 replikasi = 2,0 ml
Jadi formaldehid 40% yang di ambil = 10,0 ml
Untuk pembakuan (5 kali replikasi) = 10,0 ml x 5 =
50,0 ml
Untuk sampel (4 kali replikasi) = 9,98 ml x 4 = 39,92
ml
Untuk blanko (1 kali replikasi) = 0,50 ml x 1 = 0,50 ml
Jadi NaOH yang diambil = 50,0 ml + 39,92 ml + 0,50
ml = 90,42 ml ~ dilebihkan menjadi 125 ml
Untuk sampel = 0,4 ml x 4 replikasi = 1,6 ml
Untuk warna standart = 0,4 ml x 1 replikasi = 0,4 ml
Untuk blanko = 0,4 ml x 1 replikasi = 0,4 ml
Jadi kalium oksalat jenuh yang diambil = 2,4 ml ~
dilebihkan menjadi 5 ml
3 tetes untuk setiap pemakaian, diamsusikan 1 ml = 20
tetes
-Untuk pembakuan NaOH = 3 x 5 replikasi = 15 tetes
-Untuk titrasi blanko = 3 tetes
-Untuk penetepan kadar = 3 x 4 replikasi = 12 tetes
Jumlah kebutuhan pp = 30 tetes = 2 ml
1 ml
Untuk titrasi sampel = 20 mL x 4 = 80 mL
Untuk titrasi blanko = 20 mL x 1 = 20 mL
Untuk warna standar = 10 mL x 1 = 10 mL
Untuk pembuatan larutan baku = 100 mL x 1 = 100mL
Untuk pembilasan alat = 250 ml
Total aquadem yang dibutuhkan   = 460 mL ~ 500 mL
Secukupnya
 Kertas perkamen Secukupnya

f. Prosedur Kerja
 Pembuatan Larutan Baku Primer Asam Oksalat
1. Diukur air bebas mineral sebanyak 100 mL menggunakan beaker glass 100 mL
2. Ditimbang asam oksalat standar sebanyak 630,35 mg ± 5% (598,8325 mg –
661,8675 mg) dengan kertas perkamen menggunakan timbangan milligram.
3. Asam Oksalat yang berada dalam kertas perkamen dimasukkan ke dalam botol
timbang tanpa tutup yang sudah ditara dan ditimbang kembali di timbangan
analitik dan didapat 0,6303 gram.
4. Setelah penimbangan, dilarutkan serbuk asam oksalat dengan air bebas mineral
sebanyak ¾ tinggi botol timbang kemudian diaduk dan dipindahkan secara
kuantitatif (3-4x) ke dalam labu ukur 100,0 mL menggunakan bantuan corong kaca
dan batang pengaduk.
5. Ditambahkan air bebas mineral sampai tanda batas 100,0 ml
6. Labu ukur ditutup dengan penutupnya, ditahan penutupnya dan dibalik kemudian
dikocok sampai homogen.

 Pembakuan Larutan Baku Sekunder NaOH dengan Larutan Baku Primer Asam
Oksalat
1. Dipipet larutan baku primer asam oksalat sebanyak 10,0 ml, dimasukkan ke dalam
Erlenmeyer 250 ml.
2. Ditambahkan indikator phenolphthalein sebanyak 3 tetes ke dalam Erlenmeyer.
3. Dititrasi dengan larutan baku sekunder NaOH hingga larutan berubah warna
menjadi merah muda sekali (mms) => Titik akhir titrasi.
4. Dicatat volume NaOH untuk titrasi pada buret
5. Dilakukan replikasi sebanyak 5 kali

 Pembuatan Warna Standar (Untuk pembanding)

 1. Dipipet sampel susu sebanyak 10,0 ml dimasukkan ke dalam Erlenmeyer 250 ml
2. Ditambahkan 10,0 ml air bebas mineral yang telah diukur dengan gelas ukur 25 ml,
kemudian ditambahkan 0,4 ml K-Oksalat jenuh dan 1 tetes 0,01% indikator
rosanilin-klorida.
3. Diamati warna standar yang muncul, digunakan sebagai warna pembanding untuk
sampel maupun blanko.

 Titrasi Blanko
1. Diukur air bebas mineral sebanyak 20,0 ml dalam gelas ukur 25 ml, dimasukkan ke
dalam Erlenmeyer 250 ml
2. Ditambahkan 0,4 ml K-Oksalat jenuh, kemudian ditambahkan indikator
phenolphthalein 1% sebanyak 1 ml dan larutan formaldehid 40% sebanyak 2 ml.
3. Dititrasi dengan menggunakan larutan baku sekunder NaOH hingga titrat berubah
warna menjadi seperti warna standar atau merah muda sekali (mms) => Titik akhir
titrasi
4. Dicatat volume NaOH untuk titrasi blanko.

 Penetapan Kadar Protein dalam Susu dengan Metode Formol

1. Dipipet sampel susu 10,0 ml, dimasukkan ke dalam Erlenmeyer 250 ml
2. Ditambahkan air bebas mineral sebanyak 10,0 ml yang telah diukur dengan gelas
ukur 25 ml, kemudian ditambahkan 0,4 ml K-Oksalat jenuh dan indikator
phenolphthalein 1% sebanyak 1 ml.
3. Dititrasi dengan larutan baku sekunder NaOH hingga titrat berubah warna menjadi
seperti warna standar atau merah muda sekali (mms) => Titik akhir titrasi
4. Dicatat volume titran untuk titrasi ~ titrasi pertama
5. Dilanjutkan dengan menambahkan 2,0 ml larutan formaldehid 40% ke dalam labu
Erlenmeyer hasil titrasi tersebut.
6. Dititrasi kembali dengan larutan baku sekunder NaOH hingga titrat berubah warna
menjadi seperti warna standar atau merah muda sekali => Titik akhir titrasi
7. Dicatat volume titran untuk titrasi tersebut ~ titrasi kedua
8. Dilakukan replikasi sebanyak 4 kali.
 9. Ditetapkan kadar protein dalam sampel susu.

III. HASIL YANG DIDAPAT

Replikasi  Volume Volume NaOH Volume NaOH Volume NaOH Volume NaOH 0,1002
Pemipetan 0,1002 N titrasi 0,1002 N titrasi 0,1002 N (mL) N Blanko (ml)
Sampel (ml) pertama (mL) kedua (mL)

1 10,0 0,00-2,22 2,22 – 5,23 3,01 0,00-0,50

2 10,0 0,00-2,19 2,19 – 5,20 3,01 0,00-0,50

3 10,0 0,00-2,20 2,20 – 5,20 3,00 0,00-0,50

4 10,0 0,00-2,15 2,15-5,20 3,05 0,00-0,50

IV. PERHITUNGAN HASIL AKHIR

 Pembuatan baku primer H2C2O4 .2H2O (Permisalan)
Bobot botol timbang + H2C2O4 .2H2O= 23,9535 g
Bobot botol timbang kosong = 23,3232 g –
Bobot baku primer = 0,6303 g

N H2C2O4 .2H2O = x ekiv = x x 2 = 0,0999920679 N

 Pembakuan Baku Sekunder NaOH (Permisalan)

No V baku N baku V titran (ml) N titran (N)
primer (ml) primer (N)
1 10,0 0,0999920679 0,00 – 9,89 Vas.oksalat . Nas.oksalat = VNaOH . NNaOH
10,0 . 0,0999920679 = 9,89 . NNaOH
 NNaOH = 0,1011042143

Vas.oksalat . Nas.oksalat = VNaOH . NNaOH

10,0 . 0,0999920679 = 9,89 . NNaOH
2 10,0 0,0999920679 0,00 – 9,90
NNaOH = 0,1010020888

Vas.oksalat . Nas.oksalat = VNaOH . NNaOH

10,0 . 0,0999920679 = 9,89 . NNaOH
3 10,0 0,0999920679 0,00 – 9,88
NNaOH = 0,1012065465

Vas.oksalat . Nas.oksalat = VNaOH . NNaOH

4 10,0 0,0999920679 0,00 – 9,87 10,0 . 0,0999920679 = 9,89 . NNaOH

NNaOH = 0,101309086
Vas.oksalat . Nas.oksalat = VNaOH . NNaOH
10,0 . 0,0999920679 = 9,89 . NNaOH
5 10,0 0,0999920679 0,00 – 9,88
NNaOH = 0,1012065465

X = 0,1011656964 SD = 1,166678342 x 10-4 KV = 0,1153235121% = 0,12%

 Penetapan Kadar Sampel

Diketahui N NaOH = 0,0998

V
V NaOH
V NaOH NaOH
V 0,1002 N
0,1002 N 0,1002
Replikasi sampel titrasi % Protein
titrasi kedua N
(ml) pertama
(ml) Blanko
(ml)
(ml)
1 10,0 0,00-2,22 2,22 – 5,23 0,00-
% protein = ((Vt-Vb) x x 1,83) %
= 3,01 0,50

= ((3,01-0,50) x x 1,83) %
 = (2,51 x 1,002 x 1,83) % = 4,6024866
% = 4,60 %

% protein = ((Vt-Vb) x x 1,83) %

2,19 – 5,20 0,00-

2 10,0 0,00-2,19 = ((3,01-0,50) x x 1,83) %
= 3,01 0,50

= (2,51 x 1,002 x 1,83) % = 4,6024866

% = 4,60 %

% protein = ((Vt-Vb) x x 1,83) %

2,20 – 5,20 0,00-

3 10,0 0,00-2,20 = ((3,00-0,50) x x 1,83) %
= 3,00 0,50

= (2,5 x 1,002 x 1,83) % = 4,58415 %

= 4,58 %

% protein = ((Vt-Vb) x x 1,83) %

2,15-5,20 = 0,00-
4 10,0 0,00-2,15 = ((3,05-0,50) x x 1,83) %
3,05 0,50

= (2,55 x 1,002 x 1,83) % = 4,675833 %

= 4,68 %
RATA – RATA % PROTEIN (4,60 + 4,60 + 4,58 + 4,68)/4 = 4,615% =
4,62%

V. PEMBAHASAN
Protein adalah suatu senyawa polimer yang terbentuk dari monomer-monomer asam
amino dan dihubungkan oleh ikatan peptida antara asam amino satu dengan asam amino
lainnya. Fungsi dari protein adalah sebagai sumber energi bagi tubuh makhluk hidup,
membentuk jaringan tubuh, pertumbuhan, sebagai enzim (merupakan katalisator), transport
molekul di dalam darah dan sel, sebagai hormon contohnya hormon insulin, sebagai
pembentuk antibody, molekul yang membantu kontraksi otot, keseimbangan cairan dan
transmisi saraf.
 Pada praktikum ini dilakukan penetapan kadar protein dalam susu dengan metode titrasi
formol. Prinsip dari metode titrasi formol adalah menetralkan larutan protein dengan basa
(NaOH) kemudian ditambahkan formaldehid yang akan membentuk dimethilol. Dimethilol
yang terbentuk menandakan gugus asam aminonya sudah terikat dan tidak akan
mempengaruhi reaksi antara asam (gugus karboksil) dengan basa NaOH.
Pertama-tama, dibuat larutan baku primer asam oksalat dengan dengan menimbang asam
oksalat sebesar 0,6303 gram dan dilarutkan dalam 100,0 ml air bebas mineral. Selanjutnya,
disiapkan NaOH untuk dibakukan dengan larutan baku primer asam oksalat yang telah
dibuat. Akan terjadi reaksi antara asam oksalat dengan NaOH yang merupakan reaksi antara
asam lemah dengan basa kuat. Reaksi antara asam lemah dan basa kuat mencapai titik
ekivalen pada pH > 7, sehingga harus digunakan indikator yang memiliki trayek kerja pada
pH diatas 7. Indikator yang digunakan pada percobaan adalah indikator PP (phenolphtalein)
yang memiliki trayek pH antara 8,2-10,0 dengan perubahan warna dari tidak berwarna
menjadi merah muda sekali.
Selanjutnya, dibuat warna standar yang akan digunakan sebagai pembanding. Dipipet
sampel sebanyak 10,0 ml yang ditambahkan 10 ml air bebas mineral, 0,4 ml larutan K 2C2O4
jenuh dan 1 tetes indikator rosanilin klorida 0,01 % hingga timbul warna (merah jambu).
Warna yang timbul tersebut digunakan sebagai patokan penetapan kadar sampel.
Lalu, dilakukan penetapan kadar protein pada sampel. Ditambahkan air bebas mineral
dan kalium oksalat jenuh yang bertujuan untuk mengikat kasein (kalsium dalam susu),
sehingga asam amino dari protein susu bisa bereaksi dengan formaldehid 40% (formalin)
dan di titrasi. Titrasi pertama sampel dititrasi (dinetralkan) dengan menggunakan NaOH
sampai terjadi perubahan warna menjadi merah muda sekali. Tujuan titrasi ini adalah untuk
menetralkan asam asam lemak bebas dari susu. Selanjutnya, dilakukan penambahan
formaldehid 40% (formalin) yang bertujuan untuk membentuk gugus dimethilol. Gugus
tersebut akan dititrasi kembali (titrasi kedua) dengan baku sekunder NaOH dan akan
bereaksi. Dicatat jumlah NaOH yang dibutuhkan, dengan cara mengurangkan hasil antara
titrasi kedua dengan titrasi pertama. Hal tersebut karena hasil titrasi pertama hanya
digunakan untuk menetralkan asam-asam lemak bebas dalam sampel. Sehingga hasil dari
titrasi pertama tidak dimasukkan kedalam perhitungan.
 Dalam penetapan kadar ini dilakukan titrasi blanko yang bertujuan untuk mengkoreksi
kesalahan pada saat titrasi karena adanya formaldehid yang teroksidasi menjadi asam
formiat. Blanko mengandung formaldehid 40% (formalin), saat menghitung kadar dilakukan
pengurangan antara volume titrasi (mengandung dimethilol dan formaldehid 40%) dengan
blanko, dengan tujuan supaya sampel yang dianalisis hanya mengandung dimethilol.
Penambahan formaldehid 40% berfungsi untuk membentuk gugus dimethilol sehingga dapat
bereaksi dengan basa NaOH nantinya.
Menurut BPOM no. 34 tahun 2019 kadar protein dalam susu tidak kurang dari 2,7%. Jadi
kadar protein dalam susu yang didapat dari praktikum ini adalah 4,62% sehingga sudah
memenuhi syarat.

VI. KESIMPULAN
Kadar protein dalam susu yang di dapat dengan menggunakan titrasi formol adalah 4,62%
sehingga sudah memenuhi persyaratan BPOM dimana menurut BPOM no 34 tahun 2019,
kadar protein dalam susu tidak kurang dari 2,7%.

VII. DAFTAR PUSTAKA

Sudarmadji, Slamet. 1984. Prosedur Analisa Untuk Bahan Makanan dan Pertanian Edisi ke
4. Liberty, Yogyakarta. p. 70-71.

Surabaya,21 April 2021