TUGAS TRANSLATE JURNAL INTERNASIONAL

(Theory of Gas Chromatography)

OLEH :
TYA AQILLA VITTORIO
18035082
PENDIDIKAN KIMIA

JURUSAN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS NEGERI PADANG
2020
 Theory of Gas Chromatography

ABSTRAK

Bab ini membahas teori dasar GC. Menjelaskan aspek paling mendasar yang diperlukan
untuk memahami caranya pekerjaan kromatografi gas. Dengan memberikan cara praktis untuk
aplikasi di laboratorium akan dibahas pada bab ini. Parameter retensi, faktor pemisahan, resolusi,
kapasitas puncak, perluasan pita termasuk teori lempeng, serta Persamaan van Deemter dan
Golay juga dibahas. Selanjutnya, aspek pemilihan Tingkat aliran gas optimal ditinjau.

2.1 Pendahuluan
Dalam kromatografi, kita menghadapi sejumlah interaksi dan proses yang cukup
kompleks yang tidak dapat sepenuhnya diprediksi atau dihitung secara apriori. Namun,
menggunakan angka asumsi, kita dapat menyederhanakan proses kompleks ini dan
menguranginya, prinsip-prinsip umum yang dapat dijelaskan secara memadai. Berbagai teori dan
model telah berevolusi dengan valid berdasarkan asumsi yang diberikan. Model ini tidak hanya
berguna untuk menjelaskan proses kromatografi dari teori sudut pandang, tetapi mereka juga
menawarkan input berharga untuk aplikasi praktis kromatografi gas. Dalam bab ini, kami tidak
bermaksud memberikan pengantar yang mendalam dalam teori kromatografi. Kami lebih
memilih untuk menyajikan sinopsis menyeluruh dasar-dasar kromatografi yang diperlukan untuk
memahami kromatografi proses dan yang memberikan input bermanfaat bagi pengguna GC.
Kita harus mempertimbangkan dua fenomena dasar untuk pemisahan kromatografi
campuran: pemisahan zat dan perluasan pita zat (Substansi atau pita kromatografi adalah zona
fase gerak yang mengandung substansi dan sesuai dengan puncaknya dalam kromatogram.)
Pemisahan ini disebabkan oleh tingkat migrasi yang berbeda karena interaksi kuat yang berbeda
dengan fase diam. Pemisahan ini ditumpangkan dengan proses pencampuran (Dispersi) selama
transportasi melalui kolom, yang menyebabkan perluasan pita zat dan menetralkan pemisahan
sejak pita lebar / menghambat puncak resolusi eluting erat. Oleh karena itu, kami bertujuan untuk
memaksimalkan secara perbedaan dalam tingkat migrasi dan meminimalkan penyebaran
komponen dengan memilih dimensi kolom yang sesuai dan parameter operasi.
 Tingkat migrasi suatu senyawa adalah jumlah dari laju transportasi melalui kolom dan
retensi dalam fase diam. Waktu yang dihabiskan dalam fase gerak sama untuk semua komponen
sampel, tetapi retensi hanya untuk spesifik senyawa.

Ini didasarkan pada distribusi analit antara fase diam dan fase gerak dan dinyatakan oleh
konstanta distribusi K. Karena fase gerak adalah gas dalam GC, distribusi komponen
berlangsung baik antara yang sangat kental dan cairan mendidih tinggi dan fase gas, yang disebut
kromatografi gas-cair (GLC), atau antara permukaan padatan dan fasa gas disebut gas-padatan
kromatografi (GSC).
Konstanta distribusi didefinisikan sebagai:
Cs
K=
Cm
Cs : konsentrasi komponen dalam fase diam
Cm : konsentrasi komponen dalam fase gerak
Pemisahan hanya berhasil jika konstanta distribusi sampel komponen berbeda. Semakin
besar K semakin lama komponen tetap berada di fase diam dan lebih lambat tingkat migrasi
keseluruhan melalui kolom. Konstanta distribusi dapat digambarkan secara grafis dengan isoterm
distribusi dengan konsentrasi zat terlarut dalam fase gerak dan stasioner sebagai x- dan sumbu y,
masing-masing. Konstanta distribusi tidak tergantung pada konsentrasi komponen (isoterm
linier) atau perubahan dengan konsentrasi (isoterm nonlinier). Dalam kasus terakhir, tingkat
migrasi efektif bergantung pada konsentrasi, yang menghasilkan pita terlarut yang tidak simetris.
Gambar 2.1 menunjukkan bagaimana profil konsentrasi atau bentuk puncak dari pita terlarut
bergerak dipengaruhi oleh bentuk distribusi isoterm.
Isoterm linier menghasilkan pita terlarut simetris (puncak) dan puncaknya maksimum
tidak tergantung pada jumlah zat terlarut. Isoterm nonlinier menghasilkan pita terlarut yang tidak
simetris dan lokasi puncak maksimum tergantung pada jumlah terlarut. Isoterm nonlinear dapat
berbentuk cembung atau cekung. Dalam kasus isoterm cekung, K meningkat dengan
meningkatnya konsentrasi yang dihasilkan di tepi depan dangkal dan tepi belakang tajam. Ini
disebut fronting. Sebagai akibatnya, puncak maksimum bergerak ke waktu retensi yang lebih
tinggi (lihat Bab 7, Gbr. 7.2). Dalam kasus yang berlawanan, isoterm cembung, K, berkurang
dengan meningkatnya konsentrasi yang menghasilkan tepi depan yang tajam dan tepi belakang
yang dangkal dari puncak. Ini disebut tailing. Puncak maksimum bergerak ke waktu retensi yang
lebih rendah. Dalam praktiknya, isoterm distribusi linier hanya ditemukan jika zat terlarut dan
stasioner Fase secara struktural serupa. Namun, seperti yang ditunjukkan Gambar 2.1, bahkan
untuk nonlinier isoterm distribusi, rentang ada pada konsentrasi rendah, yang memberikan
puncak simetris dengan waktu retensi yang independen dari zat terlarut jumlah. Harus diingat
untuk bekerja pada konsentrasi rendah jika nilai retensi digunakan untuk identifikasi (lihat Bab
7).
Tergantung pada bentuk isoterm distribusi, kami membedakan antara kromatografi linier
dan nonlinier untuk deskripsi kromatografi proses. Kami selanjutnya membagi ke dalam
kromatografi ideal dan nonideal. Ideal kromatografi menyiratkan pertukaran reversibel antara
dua fase dengan keseimbangan terbentuk dengan cepat karena transfer massa yang cepat. Proses
difusi yang mengakibatkan perluasan pita diasumsikan kecil dan diabaikan. Di kromatografi
ideal yang harus dimiliki profil konsentrasi zat terlarut yang dipisahkan profil persegi panjang.
Profil Gaussian yang diperoleh dalam praktik menunjukkan hal itu asumsi-asumsi ini tidak valid.
Dalam kasus kromatografi nonideal asumsi ini tidak dibuat. Dengan kedua jenis klasifikasi ini,
empat model berikut diperoleh untuk menggambarkan secara matematis proses pemisahan
kromatografi:
• Kromatografi linier, ideal
• Kromatografi linear, nonideal
 • Kromatografi ideal nonlinier
• Kromatografi nonlinier, nonlinier.
Dalam GC, kromatografi partisi yang paling banyak digunakan dapat diklasifikasikan
sebagai linear kromatografi nonideal. Dalam hal itu, puncak yang hampir simetris diperoleh dan
perluasan pita dijelaskan oleh teori kinetik menurut van Deemter.

2.2 Parameter Retensi

Nomenklatur dan simbol yang digunakan dalam literatur untuk menggambarkan
parameter retensi agak tidak konsisten, yang dapat membingungkan terutama saat membaca
makalah yang lebih tua. Pada tahun 1993, “Nomenklatur untuk Kromatografi” yang sepenuhnya
direvisi.
 Diterbitkan oleh IUPAC dan kami sebagian besar akan mengikuti rekomendasi ini.
Ringkasan nomenklatur IUPAC bersama dengan tambahanpendapat terdahulu istilah diberikan
dalam lampiran. Seperti yang telah disebutkan, pemisahan kromatografi campuran didasarkan
pada perbedaan distribusi komponen antara fase diam dan fase gerak. Konsentrasi yang lebih
tinggi dalam fase diam menghasilkan lebih lama retensi masing-masing zat terlarut dalam fase
diam (Gbr. 2.2). Pemisahan membutuhkan nilai yang berbeda dari konstanta distribusi zat
terlarut dalam campuran. Pertama mari kita pertimbangkan satu zat terlarut. Waktu yang
dihabiskan dalam kromatografi Kolom disebut waktu retensi t R berdasarkan pada kata Latin
retenare (retain). Gambar 2.3 menunjukkan kromatogram elusi skematis dengan sinyal detektor
(sumbu y) sebagai fungsi waktu (sumbu x).
Sinyal detektor sebanding dengan konsentrasi atau massa zat terlarut di eluent
meninggalkan kolom. Dengan perekam yang lebih tua, sinyal diukur dalam m V sementara sistem
berbasis komputer modern memberikan jumlah atau unit kelimpahan yanglebih banyak. Jika
tidak ada zat terlarut yang meninggalkan kolom, garis lurus idealnya disebut baseline, yang
ditandai dengan sedikit fluktuasi yang disebut baseline noise (lihat juga Bab 6). Jika zat terlarut
meninggalkan kolom, garis dasar naik ke maksimum dan turun kemudian kembali lagi. Bentuk
simetris idealnya adalah disebut puncak kromatografi. (Harap dicatat bahwa sinyal dalam
spektrometri massa juga disebut puncak, tetapi mereka adalah representasi dari massa yang
berlimpah rasio biaya.) Kromatogram memberikan persyaratan dasar berikut:
Waktu yang melewati antara injeksi sampel (titik awal) dan deteksi puncak maksimum
disebut waktu retensi tR dan terdiri dari dua bagian:
• Waktu yang dihabiskan dalam fase diam disebut tR waktu retensi yang disesuaikan
atau waktu retensi bersih yang sudah usang.
• Waktu yang dihabiskan dalam fase seluler disebut waktu penahanan t M, waktu mati,
atau waktu kosong.

Waktu penahanan tM adalah waktu yang dibutuhkan untuk mengangkut zat terlarut
melalui kolom, yang sama untuk semua zat terlarut dalam campuran. Waktu penahanan dapat
ditentukan oleh menyuntikkan senyawa, zat inert atau marker, yang tidak disimpan oleh fase
diam, tetapi itu dapat dideteksi dengan sistem deteksi yang diberikan, misal :
Pada kenyataannya, senyawa yang terdaftar di atas bukanlah zat inert yang ideal.

Tergantung pada kolom kromatografi, syaratnya harus dipilih sedemikian rupa sehingga retensi
oleh fase stasioner dapat diabaikan, misal dengan menggunakan suhu oven yang lebih tinggi.
Waktu penahanan juga dapat ditentukan berdasarkan waktu retensi tiga n-alkana berturut-turut
atau anggota lain dari seri homolog:
z : jumlah karbon n-alkana

t R(z) : waktu retensi n-alkana dengan nomor karbon z

t R(z + 1) : waktu retensi n-alkana dengan nomor karbon z + 1
t R(z + 2) : waktu retensi n-alkana dengan nomor karbon z + 2

Regresi linier dapat dilakukan dengan:

Selanjutnya, tM dapat dihitung berdasarkan dimensi kolom dan pembawa tekanan gas:
 L : Panjang kolom
r : kolom jari-jari dalam
η (T) : viskositas gas pembawa pada suhu kolom T
pi : tekanan masuk kolom (lihat juga catatan untuk persamaan 2.56)
po: tekanan keluar kolom (tekanan atmosfer)

Alat perangkat lunak tersedia dari produsen instrumen utama, seperti flow calculator dari
Agilent Technologies, yang dapat digunakan untuk menghitung tM. Waktu retensi yang
disesuaikan (t’R) tergantung pada konstanta distribusi zat terlarut dan karenanya pada interaksi
mereka dengan fase diam. Selanjutnya, waktu retensi dipengaruhi oleh dimensi kolom dan
kondisi operasi (Tekanan kepala kolom, aliran gas, suhu). Reproduksibilitas ini parameter cukup
terbatas pada hari-hari awal kromatografi gas, tetapi memiliki meningkat pesat dengan instrumen
modern yang digunakan saat ini. Mengalikan waktu retensi dengan aliran gas Fc dari fase gerak
menghasilkan masing-masing volume: volume retensi, volume retensi yang disesuaikan, dan
penahanan volume:

Di mana Fc adalah aliran gas pembawa di outlet kolom pada suhu kolom.

2.2.1 Faktor Retensi

Cara yang lebih dapat dilakukan untuk mengkarakterisasi retensi adalah
penggunaan retensi nilai relatif bukan nilai absolut. Faktor retensi k, juga dikenal sebagai
kapasitas faktor k0, menghubungkan waktu yang dihabiskan zat terlarut dalam fase diam
dengan waktu yang dihabiskan di fase seluler:
 Faktor retensi tidak berdimensi dan menyatakan berapa lama zat terlarut
dipertahankan dalam fase diam dibandingkan dengan waktu yang dibutuhkan untuk
mengangkut zat terlarut kolom. Dengan asumsi konstanta distribusi K tidak tergantung
pada konsentrasi zat terlarut (rentang linear dari isoterm distribusi), k sama dengan rasio
massa terlarut i dalam stasioner (Wi(S)) dan dalam fase gerak (Wi(M)) pada kesetimbangan:
Semakin tinggi nilai k, semakin tinggi jumlah zat terlarut i dalam stasioner fase,

yang berarti zat terlarut i dipertahankan lebih lama di kolom. Akibatnya, k adalah ukuran
retensi.

Menggunakan Persamaan. (2.2) dan (2.10) :

Dengan
kami memperoleh persamaan sederhana namun mendasar untuk waktu retensi
sebagai fungsi dari panjang kolom, kecepatan linier rata-rata dari fase gerak, dan faktor
retensi:
Waktu retensi berbanding lurus dengan panjang kolom dan secara tidak langsung
sebanding dengan kecepatan linier rata-rata fase gerak menurut ini persamaan. Namun,

kita tidak dapat secara bebas memilih kecepatan linier rata – rata fase ponsel, seperti yang
akan kita bahas dalam Sekte. 2.4.2, karena memiliki yang luar biasa pengaruh pada
perluasan pita dan akibatnya pada efisiensi pemisahan kolom.

2.3 Faktor Pemisahan

 Jika dua analit memiliki waktu retensi atau volume retensi yang sama pada kolom,
mereka tidak terpisahkan dan kami menyebutnya coelution. Pemisahan membutuhkan retensi
yang berbeda nilai-nilai. Semakin besar perbedaan-perbedaan ini, semakin baik efisiensi
pemisahan atau selektivitas fase diam untuk masing-masing pasangan analit. Selektivitas ini

dinyatakan sebagai faktor pemisahan α, juga disebut selektivitas atau koefisien selektivitas.
Faktor pemisahan α adalah rasio waktu retensi yang disesuaikan dari dua yang berdekatan
puncak:
Secara definisi α selalu lebih besar dari satu, artinya tR(1) > tR(2)
Nilai α yang diperlukan untuk pemisahan dasar dua puncak yang berdekatan tergantung
pada lebar puncak, yang akan kita bahas di bagian selanjutnya. Rasio t R(1) / tR(2) adalah juga
disebut retensi relatif r. Seringkali, satu analit digunakan sebagai referensi dan retensi analit
lainnya terkait dengan standar retensi ini (lihat juga Bab 7). Selektivitas fase diam cair sebagian
besar ditentukan oleh dua parameter: tekanan uap zat terlarut pada suhu kolom dan aktivitasnya
koefisien dalam fase diam. Fase diam cair dapat dianggap sebagai pelarut dengan titik didih
tinggi dengan tekanan uap yang dapat diabaikan dan analitnya adalah dilarutkan dalam pelarut
ini. Tekanan uap parsial dari zat terlarut sama dengan mereka konsentrasi kesetimbangan dalam
fase gas di atas pelarut. Korelasi antara konsentrasi zat terlarut dalam larutan (fase diam cair) dan
dalam fase gas dijelaskan oleh hukum Henrys:

Dalam kasus khusus solusi ideal f° = 1, Persamaan. (2.16) berubah menjadi hukum
Raoult. Jika kita mengasumsikan bahwa proses adsorpsi pada antarmuka dapat diabaikan dan
dilakukan selanjutnya menyederhanakan asumsi ke dalam akun (mis : hukum Henry, perilaku
gas ideal, pengenceran tinggi), persamaan berikut diturunkan untuk konstanta distribusi K dari a

terlarut saya:
R : Konstanta gas
 T : kolom absolut suhu (Kelvin)
VS : volume molar fase diam cair
MS : Berat molekul dari fase stasioner cair
dS : densitas fase diam cair

Ketergantungan K ~ 1 / p° x f° membawa kita ke korelasi penting, karena faktor retensi k

(k = k / β) kemudian juga berbanding terbalik dengan saturasi tekanan uap dan koefisien aktivitas
zat terlarut:
K - 1 / p° x f °
Jika kita menguji pemisahan dua analit, kita memperoleh persamaan berikut untuk faktor
pemisahan atau retensi relatif dengan menggabungkan Persamaan. (2.15) dan (2.18):

Versi log-transformed dari Persamaan. (2.19) adalah apa yang disebut pemisahan Herington
persamaan yang awalnya diturunkan untuk distilasi ekstraktif:

Persamaannya mengandung dua istilah: istilah tekanan uap, kadang-kadang tidak cukup
tepat disebut istilah titik didih, dan istilah aktivitas, yang juga disebut kelarutan atau istilah
interaksi. Menurut Persamaan. (2.20) dua analit dapat dipisahkan pada fase stasioner cair jika
mereka berbeda dalam tekanan uap dan / atau aktivitasnya koefisien dalam fase diam masing-
masing. Istilah tekanan uap tergantung pada struktur dari dua analit dan independen dari fase
diam yang dipilih. Namun, itu dipengaruhi oleh suhu kolom. Istilah ini tidak berkontribusi ke
pemisahan jika dua analit memiliki tekanan uap yang sama. Pemisahan adalah hanya mungkin
dalam kasus ini, jika koefisien aktivitas berbeda. Seperti yang akan kita lihat kemudian dalam
bab ini, kedua istilah tersebut dapat bertindak secara konkuren atau berlawanan. Persamaan
Herington pemisahan juga menunjukkan bahwa GLC dapat digunakan untuk menentukan
fisikokimia parameter seperti koefisien aktivitas, tekanan uap, dan parameter terkait.
Istilah aktivitas mengekspresikan kekuatan gaya antarmolekul antara pelarut (fase diam)
dan zat terlarut. Semakin kuat daya tarik, semakin tinggi zat terlarut di fase diam dan akibatnya
waktu retensi. Gaya antarmolekul tergantung pada struktur yang berinteraksi, pelarut dan
terlarut, seperti jenis dan jumlah fungsional kelompok, dan penjajaran spasial (hambatan
sterikal). Tergantung pada strukturnya, kita membedakan antara molekul polar, polarizable, dan
nonpolar yang berbeda dalam molekulnya kemampuan untuk membentuk kekuatan
antarmolekul:
 Molekul polar mengandung heteroatom dan / atau kelompok fungsional yang
mengarah pada suatu distribusi muatan yang tidak simetris dan akibatnya ke dipol
listrik permanen. Contohnya adalah eter, aldehida, keton, alkohol, dan senyawa
nitro dan sianokomponen.
 Molekul terpolarisasi adalah molekul nonpolar yang tidak memiliki molekul
permanen momen dipol listrik, tetapi di mana momen dipol dapat diinduksi oleh
yang berdekatan molekul kutub dan / atau medan listrik. Ini membutuhkan
struktur yang dapat dipolarisasi dalam molekul seperti ikatan rangkap atau
struktur aromatik.
 Molekul nonpolar adalah molekul tanpa momen dipol yang tidak rentan untuk
induksi momen dipol. Contoh umum adalah jenuh hidrokarbon. Gaya
antarmolekul adalah gaya tarik (atau tolakan) antara yang jenuh, molekul netral
listrik yang berada dalam jarak dekat. Energi dari gaya antarmolekul jauh lebih
rendah (<25 kJ / mol) daripada energi ikatan kimia (> 400 kJ / mol, gaya
intramolekul). Energi interaksi berkurang dengan meningkatkan jarak antara mitra
yang berinteraksi; lebih tepatnya, itu berbanding terbalik dengan kekuatan jarak.
Sementara kami sebagian besar tertarik retensi kromatografi yang disebabkan
oleh gaya antarmolekul, mereka juga bertanggung jawab atas apa yang disebut
sifat kohesi seperti leleh dan mendidih titik, kelarutan, ketidakcocokan, tegangan
permukaan, dan fenomena antarmuka. Dalam gas kromatografi gaya intermolekul
berikut (gaya van der Waals) adalah penting:
2.3.1 Pasukan Dispersi (Pasukan London)
Gaya nonpolar ini adalah gaya lemah, tidak diarahkan (tidak spesifik) di antara
semua atom dan molekul. Mereka selalu hadir baik untuk molekul nonpolar dan polar.
Mereka dapat dijelaskan dengan model dipol yang berfluktuasi. Kekuatan dispersi
meningkat dengan massa molekul molekul, yang menghasilkan titik didih yang lebih
tinggi.
2.3.2 Pasukan Induksi (Dipole-Induced Dipole, Debye Pasukan)
Gaya induksi adalah gaya yang diarahkan antara molekul polar (molekul dengan
dipol) dan molekul terpolarisasi.

2.3.3 Dipol – Pasukan Dipol (Pasukan Keesom)

Gaya dipol-dipol adalah gaya yang diarahkan antara molekul polar (molekul
dengan a dipol permanen).
2.3.4 Ikatan Hidrogen
Ikatan hidrogen adalah interaksi dipol-dipol elektrostatik terkuat:
X - H ………. IY,
di mana XH adalah donor proton, mis : –OH, –NH, dan IY akseptor proton (atom
dengan pasangan elektron gratis, donor elektron). Kekuatan interaksi meningkat dari
dispersi, lebih dari induksi untuk pasukan dipol. Gaya induksi dan dipol sering disebut
interaksi kutub. Kekuatan ikatan dipol dan hidrogen yang kuat misalnya bertanggung
jawab untuk titik didih tinggi molekul polar kecil seperti etanol atau asetonitril.
2.3.5 Interaksi Elektron-Donor-Akseptor
Interaksi antara molekul dengan donor elektron dan sifat akseptor karena transfer
elektron dari orbital tertinggi yang tidak terisi ke terendah, mis : nitroor senyawa sano
sebagai akseptor elektron dan aromatik sebagai donor elektron.
Dalam praktiknya, energi interaksi, yang berarti kekuatan gaya tarik, adalah
ditentukan oleh jumlah interaksi. Tabel 2.1 menunjukkan stasioner itu fase dengan
kelompok fungsional yang berbeda mampu menjalani interaksi yang beragam
menghasilkan sifat retensi variabel.
Gambar 2.4 menunjukkan bagaimana polaritas fase diam mempengaruhi
pemisahan (ditandai oleh faktor pemisahan α) dan urutan elusi menggunakan pemisahan
benzena (B) dan sikloheksana (C) pada fase diam yang berbeda sebagai contoh. Istilah
tekanan uap dari persamaan pemisahan Herington hanya memberikan kontribusi minimal
untuk pemisahan karena titik didih dari dua siklik
 hidrokarbon hampir identik. Kedua hidrokarbon adalah nonpolar, tetapi tidak
simetris, distribusi muatan dapat diinduksi dalam benzena karena mudah dipindahkan π-
elektronnya. Oleh karena itu, benzena mampu membentuk interaksi induksi dengan kutub
fase diam. Pada fase nonpolar OV-1 (100% dimethylpolysiloxane, lihat Bab. 3) hanya
pemisahan yang tidak lengkap yang tercapai. Pemisahan yang lebih baik membutuhkan
nomor pelat yang lebih tinggi. Elusi benzena sebelum sikloheksana terjadi diempatkan
sesuai dengan titik didih mereka. Karena π-elektron yang terdelokalisasi dalam gugus
fenil, fase fenil metilpolisiloksana (SB-5) 5% yang sering digunakan menjalani interaksi
induksi dan bersifat sedikit polar. Menariknya, keduanya hidrokarbon tidak dipisahkan
oleh fase ini. Ternyata, tekanan uap dan istilah kelarutan saling mengimbangi, yaitu,
kedua istilah sama tetapi dengan tanda-tanda yang berlawanan. Sebaliknya, dua fase
lainnya - methylpolysiloxane dengan 7%

fenil dan 7% sianopropil dan polietilen glikol (PEG) - jauh lebih polar dan
mempertahankan benzena lebih kuat, yang dinyatakan dalam nilai α tinggi. Harap
perhatikan, urutan elusi benzena dan sikloheksana pada fase stasioner kutub tidak ikuti
urutan titik didih lagi. Dengan memodifikasi polaritas kolom, kami secara sistematis
dapat mengubah urutan elusi. Ini dapat membantu dalam analisis jejak jika analit target
minor tumpang tindih oleh puncak besar. Dengan demikian, benzena (Bp. 80,1 °C)
memiliki retensi yang sangat tinggi pada fase sangat polis tris-sianoanooksi-propana
 (TCEP) menghasilkan elusi bahkan setelah n-dodekana (Bp. 216° C). TCEP berisi 3
cyano mengelompokkan dan memiliki sifat akseptor elektron yang kuat, tetapi
maksimum suhu fase diam ini hanya 150°C. Sekarang mari kita periksa pemisahan
kloroform CHCl3 (Bp. 61.2 °C) dan karbon tetraklorida CCl4 (Bp. 76,7 °C). Pada fase
diam nonpolar, the zat terlarut meninggalkan kolom sesuai dengan titik didihnya seperti
yang diharapkan. Namun, urutan elusi dibalik pada fase stasioner kutub: karbon
tetraklorida, 15 °C pelarut yang mendidih lebih tinggi meninggalkan kolom terlebih
dahulu. Sekali lagi, ini menunjukkan yang sebaliknya efek tekanan uap dan istilah
kelarutan pada kolom kutub. Dalam hal ini, istilah kelarutan memberikan kontribusi yang
lebih tinggi. Ini disebabkan oleh elektronegativitas yang kuat dari tiga atom kloro dalam
kloroform menghasilkan tidak simetris distribusi muatan dalam molekul. Karenanya,
kloroform adalah mitra kuat bagi yang kuat interaksi dengan fase diam kutub. Contoh
lebih lanjut untuk pengaruh polaritas kolom pada urutan elusi dan / atau interaksi tekanan
uap dan istilah kelarutan diberikan dalam Tabel 2.2.
Interpretasi dari tatanan elusi yang berbeda dapat didukung oleh yang disebut
aturan kesamaan: similia similibus solvuntur (Latin: Serupa akan larut serupa).
Karenanya, senyawa-senyawa adalah yang lebih mudah larut atau larut yang lebih mirip
struktur kimia. Solut nonpolar lebih baik larut dalam stasioner nonpolar fase dan zat
terlarut kutub dalam fase diam kutub, masing-masing. Kelarutannya bagus sesuai dengan
nilai retensi tinggi dan puncak simetris.

2.4 Perluasan Pita

Seperti yang telah disebutkan, lebar puncak kromatografi adalah hasil dari berbagai
variasi proses pencampuran selama pengangkutan zat terlarut melalui kolom. Karena itu, tidak
semua molekul zat terlarut mencapai detektor pada saat yang sama, yang akan menghasilkan
profil persegi panjang yang sempit, tetapi dispersi di sekitar puncak maksimum adalah diperoleh.
Profil konsentrasi tergantung waktu ini memiliki bentuk lonceng yang khas dan dapat dijelaskan
dalam perkiraan dekat dengan kurva Gaussian (Gbr. 2.5).
Dengan asumsi profil Gaussian, lebar puncak dapat ditentukan secara berbeda ketinggian.
Pada titik belok (60,6% dari ketinggian puncak), lebar puncak sama dengan dua standar deviasi
(σ) dan lebar puncak pada basis wb sama dengan 4σ (jarak antara perpotongan garis singgung
dari titik infleksi dengan garis dasar). Lebar puncak di setengah tinggi adalah w h = 2.355σ.
Parameter ini sering digunakan kembali ke waktu ketika daerah puncak tidak ditentukan secara
elektronik, tetapi puncak Lebar diukur dengan tangan menggunakan penggaris dan kertas plot.

Lebar puncaknya adalah diberikan dalam satuan waktu atau volume.

2.4.1 Teori Piring

Teori lempeng pertama kali diperkenalkan ke kromatografi partisi oleh James dan
Martin pada tahun 1952. Konsep ini dipinjam dari deskripsi kinerja kolom distilasi. Ini
membagi proses pemisahan berkelanjutan dalam sejumlah langkah individu diskrit.
Dengan demikian, kolom terdiri dari banyak segmen berurutan, disebut lempeng teoritis,
dan untuk setiap lempeng keseimbangan antara zat terlarut dalam Fase diam dan bergerak
diasumsikan. Semakin kecil segmen atau tinggi piring teoritis, semakin banyak piring
tersedia per meter kolom. Karena itu, lebih banyak langkah distribusi dapat dilakukan
sehingga memperluas pita relatif lebih sedikit dalam kaitannya dengan panjang kolom.
Jumlah pelat teoritis N dan tinggi dari pelat H berasal dari kromatogram menggunakan
waktu retensi suatu tes zat terlarut dan ukuran untuk lebar puncak:
di mana σ adalah standar deviasi, wb adalah lebar puncak di pangkal dan

di mana wh adalah lebar puncak di setengah tinggi.

Konversi antara ketinggian puncak yang berbeda mengasumsikan puncak
Gaussian (lihat Gambar 2.5). Tinggi pelat (H) diperoleh dengan membagi panjang kolom
(L) dengan nomor pelat (N):

Ketinggian lempeng juga sering disebut tinggi yang setara dengan satu lempeng
teoritis (HETP). Ketinggian plat adalah kriteria penting untuk menilai efisiensi kolom dan
dapat digunakan untuk membandingkan kolom. Kolom berkualitas tinggi dicirikan oleh
N tinggi dan H. rendah. Namun, kedua nilai tergantung pada kolom suhu, kecepatan gas
pembawa rata-rata, dan zat terlarut, yang harus selalu ditentukan. Perlu diingat, N dan H
ditentukan dalam kondisi isotermal (validitas teori lempeng). Kerugian dari model pelat
yang sering digunakan adalah penyederhanaan dibuat mengembangkan model. Yang
terpenting, kromatografi adalah proses yang dinamis dan keseimbangan lengkap tidak
tercapai, tetapi kami bekerja dalam kondisi tidak ada keseimbangan. Akibatnya, jumlah
pelat pada kenyataannya tidak sama dengan jumlah keseimbangan langkah-langkah yang
dicapai di kolom. Dampak H agak diperoleh oleh lebar puncak (standar deviasi σ) dalam

kaitannya dengan panjang gerakan terlarut L atau retensi waktu :

Dalam hal itu, ketinggian lempeng teoretis mengekspresikan sejauh mana
puncaknya memperluas dalam kolom untuk puncak dengan waktu retensi tR. Itu juga
menunjukkan itu lebar puncak (σ) sebanding dengan akar kuadrat dari waktu retensi.
Perhitungan N dan H menggunakan waktu retensi yang mengandung juga hold-up waktu
yang tidak berkontribusi pada pemisahan zat terlarut. Oleh karena itu, waktu retensi yang
disesuaikan kadang-kadang digunakan untuk menghitung nomor pelat efektif dan
ketinggian pelat efektif:

Sementara teori lempeng memberikan nilai untuk menilai efisiensi kolom, itu
tidak menjelaskan perluasan puncak. Ini pertama kali dicapai dengan teori laju oleh van
Deemter.
2.4.2 Teori Tingkat Menurut van Deemter
Teori laju diperkenalkan oleh van Deemter [2]. Ini melihat proses pemisahan
dalam kolom GLC yang dikemas dalam kondisi isotermal sebagai proses dinamis dari
perpindahan massa dan proses difusi independen yang menyebabkan pelebaran pita.
Difusi molekuler (berasal dari kata Latin diffunde = spread, bubar)
menggambarkan pergerakan acak molekul dalam cairan, seperti gas dan cairan. Jika
Gerakan ini didorong oleh perbedaan konsentrasi yang disebut difusi transport atau difusi
biasa. Dalam hal itu, lebih banyak molekul bergerak dari daerah-daerah yang tinggi
konsentrasi ke daerah konsentrasi rendah hingga perbedaan konsentrasi seimbang. Laju
gerakan ini berbanding lurus dengan konsentrasi gradien dan dalam sistem biner
dinyatakan sebagai koefisien difusi D (m2/s). Itu koefisien difusi dalam gas berkisar
antara 104 dan 105 m2 s, sementara itu 4-5 order besarnya lebih rendah dalam cairan (10 9
m2/s). Yang disebut van Deemter Persamaan menggambarkan hubungan ketinggian pelat
teoritis H dan rata-rata kecepatan linier dari fase gerak. Dalam bentuk kental
diungkapkan sebagai berikut:

H : ketinggian pelat teoritis

ū : kecepatan linier rata-rata dari fase seluler
A : Istilah difusi eddy
B : difusi longitudinal
C : istilah transfer massal
Kecepatan linier rata-rata dari fase seluler u = L/tM tidak identik dengan laju aliran
di kepala kolom atau outlet kolom karena kompresibilitas gas dan ketahanan pengepakan
kolom (lihat Bagian 2.8). Istilah A, B, dan C mewakili kontribusi dari proses yang
dibahas di atas untuk perluasan pita dan harus dijaga serendah mungkin.
Istilah A mengacu pada pelebaran pita yang disebabkan oleh dispersi (multi-
pathway) efek, yang disebut difusi Eddy:

λ : faktor koreksi untuk penyimpangan kemasan kolom

dp : diameter partikel rata-rata
Istilah B mewakili pelebaran pita dengan difusi longitudinal, molekul difusi baik
di dalam dan terhadap arah aliran:

γ : faktor labirin dari saluran pori (0 <γ <1)

DG : Koefisien difusi analit dalam fase gas
Istilah C mengacu pada pelebaran pita yang disebabkan oleh keterlambatan zat
terlarut karena massa transfer:

k : faktor retensi
dL : Ketebalan film rata-rata dari fase diam pada bahan pendukung
DL : Koefisien difusi analit dalam fase stasioner cair

Dari persamaan van Deemter dapat ditarik beberapa kesimpulan sangat penting
untuk aplikasi praktis.
Gambar 2.6 menunjukkan bahwa ketinggian pelat tergantung pada kecepatan
linier rata-rata fase seluler. Kurva H/u adalah hiperbola dengan minimum untuk H pada.
Membedakan Persamaan. (2.28) sehubungan dengan u dan pengaturan dH/du = 0

B
menghasilkan uopt =
√ C
. Dengan demikian, linear rata-rata optimal kecepatan fase gerak

ada untuk setiap kolom di mana kolom tertinggi efisiensi atau dengan kata lain puncak

tersempit dicapai. Yang optimal adalah hasil dari dependensi yang berbeda dari istilah A,
B, dan C pada kecepatan fase gerak. Istilah A tidak tergantung pada kecepatan. Istilah B
berkurang dengan meningkatkan kecepatan; dampak difusi longitudinal kurang jelas di
laju aliran yang lebih tinggi. Istilah C meningkat dengan meningkatnya kecepatan linier
rata-rata.
 Seperti yang telah disebutkan ketiga istilah harus serendah mungkin untuk dicapai
nilai H kecil (puncak sempit). Mari kita telaah masing-masing istilah lebih dalam detail
(lihat juga Gambar 2.7).

2.4.2.1 Istilah A
Pengangkutan fase gerak melalui pengepakan kolom dapat terjadi melalui saluran
aliran yang berbeda. Secara sederhana, molekul milik satu kaleng zat terlarut mengambil
jalur aliran berbeda di sekitar partikel yang menghasilkan panjang jalur berbeda dan
akibatnya puncak yang lebih luas. Efek ini disebut difusi Eddy. Tergantung pada ukuran
dan bentuk partikel serta penyimpangan kemasan kolom. Semakin tinggi diameter dan
ketidakteraturan partikel semakin kuat dispersi. Akibatnya, istilah A dapat diminimalisir
menggunakan partikel reguler kecil dan a pengemasan kolom seragam, tetapi dengan
biaya tekanan balik yang lebih tinggi. Selain itu, di kondisi aliran laminar hadir dalam
kromatografi, laju aliran lebih tinggi di tengah saluran aliran dan lebih rendah di tepi.
2.4.2.2 Istilah B
Istilah B berbanding lurus dengan koefisien difusi D G analit di fase seluler. Difusi
molekuler menutupi transpor zat terlarut di sepanjang kolom yang disebabkan oleh
penurunan tekanan. Difusi disebabkan oleh konsentrasiperbedaan dalam pita terlarut. Ini
adalah yang tertinggi di tengah dan lebih rendah di awal dan akhirnya menghasilkan
difusi. Komponen longitudinal dari difusi baik mempercepat transportasi zat terlarut
dalam arah longitudinal atau memperlambatnya. Karena difusi sekitar 100-1.000 kali
lipat lebih cepat dalam gas daripada dalam cairan, istilah B memiliki dampak yang jauh
lebih tinggi di Gc daripada di LC. Karena difusi dalam gas berkurang dengan
meningkatkan massa molekul gas, orang dapat menyimpulkan bahwa pembawa "lebih
berat" gas menguntungkan, tetapi kita akan melihat di bawah ini bahwa hal ini secara
negatif mempengaruhi istilah C.
2.4.2.3 Istilah C
Istilah C mengacu pada perpindahan massa antara fase diam dan bergerak. Ini
juga disebut resistensi terhadap transportasi massal. Kromatografi bersifat dinamis
proses. Keseimbangan partisi yang hampir lengkap hanya dicapai pada pembawa yang
sangat rendah laju aliran gas. Dengan demikian, istilah C meningkat secara linier dengan
kecepatan gas pembawa. Itu membutuhkan waktu yang terbatas untuk mencapai kondisi
keseimbangan yang mencakup transportasi fase ponsel ke antarmuka fase, transfer fase
(terlarut memasuki fase diam), dan pengangkutan zat terlarut ke dalam fase diam cair dan
kembali ke antarmuka fase. Proses transportasi ini ditentukan oleh aksial difusi (tegak
lurus terhadap arah aliran fase gerak). Oleh karena itu. Istilah C ditentukan oleh koefisien
difusi zat terlarut dalam perangkat seluler dan fase stasioner dan jarak pengangkutan,
yang paling penting ketebalan fase diam cair. Berbeda dengan istilah B, transfer massa

cepat membutuhkan tinggi nilai untuk koefisien difusi. Gas pembawa berat molekul
rendah menguntungkan untuk difusi cepat. Karena difusi dalam cairan lambat, film tipis
dari cairan fase diam bermanfaat. Seperti yang awalnya disebutkan, persamaan van
Deemter dikembangkan untuk kolom yang dikemas dengan fase diam cair di bawah
kondisi isotermal. Kemudian, itu dimodifikasi dan disempurnakan oleh beberapa peneliti
(Golay, Huber, Guiochon, Knox, Giddings, dan lainnya) mengambil kondisi spesifik dan
persyaratan kolom kapiler, fase diam padat, dan cairan kromatografi menjadi
pertimbangan. Selanjutnya, kompresibilitas pembawa gas diperhitungkan. Bentuk asli
dari persamaan van Deemter [Persamaan. (2.28) /(2.31)] tidak menjelaskan pelebaran pita
oleh difusi aksial dalam fase gerak (istilah CM). Kemudian, persamaan van Deemter
diperpanjang untuk memasukkan istilah CM itu diperkenalkan oleh Golay untuk kolom
kapiler (lihat di bawah) [9]. Istilah CM berisi koefisien difusi dalam DG fase gas dalam
penyebut:
DG : Koefisien difusi dalam fase gas
dp : diameter partikel rata-rata
ω : faktor penghambat tempat tidur

2.4.3 Pelebaran Pita di Kolom Kapiler: Golay

 Persamaan Persamaan dikembangkan oleh Golay untuk kolom kapiler dengan
stasioner cair fase tidak termasuk istilah A karena kolom ini tidak mengandung a

pengepakan partikel:
Istilah baru (CM) diperkenalkan untuk menjelaskan perluasan pita yang
disebabkan oleh difusi dalam fase gas, yang tidak termasuk dalam bentuk asli van
Persamaan deemter. Akibatnya, persamaan Golay berisi dua istilah C, C S dan CM,
menggambarkan perpindahan massa dalam fase diam dan bergerak. B, C S, dan Istilah CM
didefinisikan sebagai berikut:

k : faktor retensi
df : ketebalan film dari fase diam
DL : Koefisien difusi analit dalam fase stasioner cair
dc : diameter kolom
DG : Koefisien difusi analit dalam fase gas
 Sebagaimana dibahas di atas untuk kolom yang dikemas, istilah B dapat dikurangi
dengan menggunakan gas pembawa berat molekul yang lebih tinggi, seperti nitrogen atau
argon. Tapi ini kontradiktif ke perpindahan massa cepat yang diinginkan yang
membutuhkan ortogonal difusi cepat ke arah aliran fase gerak. Kontribusi istilah B untuk
band pelebaran dapat dikurangi dengan meningkatkan kecepatan linier gas pembawa,
tetapi secara bersamaan persyaratan C meningkat.
Penentu paling penting dari istilah CS adalah ketebalan dan difusi film koefisien
analit dalam fase seluler. Istilah CS dapat dikurangi dengan tipis film dan fase diam
dengan viskositas rendah. Istilah CM ditentukan oleh diameter dalam kapiler dan
koefisien difusi analit dalam fase gerak. Karena laju difusi berkurang dalam gas dengan
molekul yang lebih tinggi massa, plot H/u yang berbeda diperoleh untuk kolom tertentu
jika gas pembawa berbeda digunakan. Ini ditunjukkan pada Gambar. 2.8 untuk hidrogen,
helium, dan nitrogen.
Gambar tersebut menunjukkan bahwa ketinggian pelat minimum yang dapat
dicapai adalah serupa untuk tiga gas pembawa. Meskipun ketinggian plat sedikit lebih
rendah untuk yang berat nitrogen pembawa gas, perbedaannya kecil dan minimum untuk
nitrogen mencapai pada kecepatan gas linear rata-rata yang lebih rendah dan cukup
sempit. Minimum ketinggian plat untuk helium gas yang lebih ringan dan sebagian besar
dari semua hidrogen dicapai pada kecepatan gas linear rata-rata lebih tinggi dan mereka
jauh lebih luas. Dalam praktiknya, ini memungkinkan waktu analisis yang lebih singkat
dikombinasikan dengan puncak sempit (Gbr. 2.9).
 Tabel 2.3 menunjukkan kontribusi istilah B, CM, dan CS ke pelat tinggi H dalam
ketergantungan pada diameter dalam dc dan ketebalan film df dari kolom kapiler. Untuk
nilai-nilai rendah dari kedua dc dan df, istilah B mendominasi sedangkan dua istilah C
diabaikan. Pada ketebalan film yang rendah (di bawah 1 μm), the tinggi plat minimum
yang dapat dicapai Hmin kira-kira sesuai dengan bagian dalam diameter kolom.
Kontribusi istilah CS meningkat dengan film yang lebih tebal

pada dc konstan dan ketinggian plat meningkat. Untuk kolom dengan diameter bagian
dalam yang besar, persentase istilah CM menjadi signifikan dan pengaruh df diabaikan
untuk film tipis.
2.4.4 Kecepatan Gas Pembawa Optimal
Plot H/u menunjukkan bahwa keduanya untuk kolom packill dan kapiler tinggi
meningkat pada kecepatan gas linier rata-rata yang lebih rendah dengan istilah difusi,
sedangkan ketentuan transfer massa yang tidak lengkap mendominasi pada gas yang
lebih tinggi kecepatan. Rata-rata kecepatan gas linear optimal tidak ada untuk setiap
kolom. Di uopt ketinggian plat minimum (Hmin) dan akibatnya jumlah maksimum pelat
teoritis diperoleh menghasilkan efisiensi pemisahan tertinggi dan resolusi.

Posisi yang disebut Van Deemter rata-rata kecepatan gas linear optimal
uopt tergantung pada:
- Diameter dalam kolom kapiler
- Ukuran partikel bahan pengemasan kolom untuk kolom pengemasan
- Jenis fase seluler (nilai DG)
- Uji terlarut (nilai DG, nilai k)
 Sebenarnya uopt tidak sama untuk semua komponen sampel, tetapi perbedaannya
marginal jika k>2. Namun demikian, zat terlarut tes digunakan untuk menentukan
pemisahan efisiensi (N) harus selalu diberikan.
Secara umum kita tidak harus bekerja di cabang curam kiri kurva H/u untuk
menghindari puncak yang luas dan jangka panjang. Selanjutnya, kecepatan gas pembawa
di atas efisiensi yang optimal menghasilkan waktu lari yang lebih pendek tetapi dengan
biaya pemisahan yang lebih rendah efisiensi (Gbr. 2.10).
Oleh karena itu, kromatografer praktik ini bertujuan untuk u opt gas pembawa
mendapatkan waktu lari pendek dan ketinggian pelat minimum H min yang serendah itu
mungkin. Selain itu, kenaikan cabang kanan kurva H/u harus sedangkal mungkin untuk
mengaktifkan nilai u yang lebih tinggi tetapi tetap mempertahankan pemisahan yang
dapat diterima efisiensi. Persyaratan ini paling baik dipenuhi dengan menggunakan
hidrogen sebagai gas pembawa.

Ini sangat penting jika instrumen dioperasikan suhu diprogram dalam mode
tekanan konstan (tekanan masuk kolom konstan): Kecepatan gas pembawa akan turun
dengan meningkatnya suhu kolom, dan Akibatnya, uopt tidak dipertahankan selama
menjalankan sepenuhnya dan efisiensi pemisahan hilang. Namun, kami dapat memilih
kecepatan gas pembawa yang lebih tinggi (> uopt di cabang kanan Kurva H/u) pada awal
untuk menghindari tergelincir di cabang curam kiri kurva H/u pada akhir proses suhu
kolom tinggi, yang akan menjadi kombinasi dengan kerugian besar efisiensi pemisahan.
Saat ini, sebagian besar GC pemisahan dilakukan dalam mode aliran konstan memastikan
bahwa uopt disimpan seluruh proses. Sejauh ini, kami telah memeriksa efisiensi aliran
optimal (EOF) tanpa mengambil analisis waktu, yang bisa memakan waktu. Karena itu,
disebut kecepatan gas praktis optimal (OPGV) yang menentukan jumlah maksimum pelat
teoritis per waktu analisis. Kecepatan optimal ini mengalir (SOF) lebih tinggi dari
efisiensi aliran optimal oleh faktor 1,5-2 dan hasil meningkatkan ketinggian plat. Karena
dalam banyak kasus efisiensi pemisahan maksimum kolom tidak diperlukan, tetapi waktu
yang diinginkan lebih pendek. Pendekatan dapat digunakan untuk mengurangi waktu
analisis. Ini diilustrasikan pada Gambar 2.11. Pada efisiensi aliran optimal ketinggian plat
terendah yang mungkin dicapai, yang terutama ditentukan oleh diameter partikel untuk
kolom dikemas dp masing-masing diameter bagian dalam kolom dc untuk kolom kapiler:
Kolom yang dikemas: Hmin = 2–3 dp (terlepas dari diameter kolom) Kolom kapiler: Hmin =
dc, jika df 0,5 1μm (tidak tergantung gas pembawa) Jika kita menentukan tinggi pelat zat
terlarut yang tidak tertahan, kita memperoleh tidak hanya mengukur kualitas kolom,
tetapi juga dapat menarik kesimpulan tentang kualitas dari sistem kromatografi. Dengan
menghubungkan ketinggian pelat dengan partikel
 diameter atau diameter kolom, kita mendapatkan parameter tanpa dimensi (dikurangi)
awalnya diperkenalkan oleh Giddings.
Mengurangi ketinggian plat:

dp : diameter partikel
dc : diameter kolom

Kecepatan fase seluler berkurang:

Di mana DM adalah koefisien difusi analit dalam fase gerak (Atau, simbol D G
digunakan, jika fase gerak adalah gas.) Parameter yang dikurangi ini terbukti bermanfaat
dalam HPLC dan untuk perbandingan berbagai jenis kromatografi. Dengan demikian,
rata-rata linier kecepatan gas pembawa dibandingkan dengan laju difusi molekul.

2.5 Resolusi
Hingga saat ini, kami hanya membahas perilaku satu analit dalam perjalanannya kolom.
Namun, kromatografi bertujuan untuk memisahkan komponen campuran menjadi sinyal
individu. Tingkat pemisahan untuk pasangan puncak yang berdekatan adalah dijelaskan oleh
resolusi RS. Adapun teknik analitik lainnya, resolusinya adalah dicirikan oleh jarak antara sinyal
relatif dengan lebar sinyal (lihat Gambar 2.12). Untuk puncak dengan ketinggian yang sama dan
tanpa mengikuti yang berikut persamaan berlaku:

tR(1) : waktu retensi puncak pertama

tR(2) : waktu retensi puncak kedua
 wb(1) : lebar puncak di dasar puncak pertama
wb(2) : lebar puncak di dasar puncak kedua
Resolusi juga dapat dihitung menggunakan lebar puncak di setengah tinggi. Dengan
asumsi bentuk puncak Gaussian dengan wb = 4σ dan wh = 2.355σ (lihat Gambar 2.5), kami dapat
mengganti wb = 1.699 wh:

Jika lebar dua puncak yang berdekatan serupa, seperti yang sering diamati, maka

persamaan sederhana berikut ini dapat digunakan:

Jelas, nilai RS yang lebih tinggi sesuai dengan jarak yang lebih tinggi dari dua yang
berdekatan puncak. Resolusi juga dapat dinyatakan dengan menggunakan standar deviasi puncak
sigma (σ). Pada RS = 1.0 jarak maximal puncak setara dengan puncak lebar di dasar puncak
kedua, yang sama dengan 4σ. Pemisahan seperti itu disebut Pemisahan 4 sigma. Puncak
ketinggian yang sama sekitar 94% dipisahkan pada RS 1.0. Untuk analisis kuantitatif, nilai RS 1,5
dicita-citakan, yang sesuai dengan pemisahan 6 sigma. Puncak yang sama tingginya tanpa tailing
benar-benar terpisah (pemisahan garis dasar) di RS = 1.5. Namun, resolusi yang lebih tinggi
diperlukan jika kecil puncak yang berdekatan dengan puncak besar atau puncak asimetris harus
secara kuantitatif dianalisis.

2.5.1 Persamaan Resolusi

Definisi resolusi [Persamaan. (2.41), Gbr. 2.12] menunjukkan dua opsi umum
untuk meningkatkan resolusi pasangan puncak yang tidak sepenuhnya terpisah. Entah
puncaknya lebar dikurangi dengan peningkatan efisiensi kolom atau jarak antara puncak
ditingkatkan dengan meningkatkan selektivitas. Penjelasan rinci tentang interaksi antara
efisiensi kolom dan selektivitas diberikan oleh yang disebut persamaan resolusi:

N : Nomor plat
α : faktor pemisahan (selektivitas)
k2 : faktor retensi dari puncak kedua
Kesimpulan paling penting yang dapat diperoleh dari persamaan fundamental ini
adalah diilustrasikan menggunakan beberapa contoh untuk N, α, dan k dan istilah yang
dihasilkan dari persamaan (Gbr. 2.13).
Istilah efisiensi Nomor pelat N=L/H dapat ditingkatkan dengan menggunakan
kolom yang lebih panjang, tetapi resolusi hanya membaik dengan akar kuadrat dari N.
Bersamaan, tekanan kepala kolom dan waktu analisis meningkat dengan meningkatnya
panjang kolom. Ketinggian plat hanya dapat dikurangi hingga Hmin (efisiensi optimal).
Istilah pemisahan / selektivitas. Perubahan kecil α memiliki pengaruh kuat pada
resolusi. Alpha dapat dipengaruhi oleh perubahan suhu kolom atau oleh memilih fase
diam yang berbeda. Berbeda dengan kromatografi cair, di mana pemilihan fase seluler
yang berbeda juga memengaruhi selektivitas, penggunaan gas pembawa yang berbeda
dalam GC tidak mempengaruhi selektivitas. Namun, kita harus tetap bertahankeberatan
bahwa mengubah selektivitas untuk meningkatkan pemisahan pasangan puncak kritis
 dapat merusak pemisahan pasangan puncak yang berbeda di daerah lain dari
kromatogram dalam hal campuran kompleks. Istilah retensi Posisi dari pasangan puncak kritis
dalam kromatogram juga mempengaruhi resolusinya. Pemisahan sulit pada faktor retensi kecil.
Itu rentang retensi optimal untuk pasangan puncak kritis adalah antara nilai k 2-5. Lebih tinggi
nilai-nilai k tidak secara signifikan meningkatkan resolusi tetapi hanya menghasilkan tidak
masuk akal perpanjangan waktu analisis. Jika kita mengatur ulang persamaan resolusi ke N, kita
dapat menghitung angka pelat dan akibatnya panjang kolom dan waktu analisis yang diperlukan
untuk memisahkan dasar pasangan puncak yang diberikan:

2.6 Jumlah Pemisahan dan Kapasitas Puncak

Sejumlah parameter tambahan dapat digunakan untuk mengkarakterisasi kinerja kolom.
Konsep yang berguna untuk analisis multikomponen adalah mengevaluasi jumlah puncak yang
dapat dipisahkan dengan resolusi yang ditentukan dalam rentang tertentu kromatogram atau
seluruh kromatogram. Nomor puncak efektif (EPN), yang nomor pemisahan (SN), dan kapasitas
puncak (nc) dapat digunakan. Nomor pemisahan SN diperkenalkan oleh R. E. Kaiser pada tahun
1962. Singkatan TZ dari ungkapan Jerman Trennzahl digunakan. Perpisahan angka
menggambarkan jumlah puncak yang dapat dipisahkan antara dua berturut-turut n-alkane dengan
nomor atom karbon z dan z +1 dengan resolusi yang memadai (RS = 1.177):

tR(z) : waktu retensi n-alkana dengan atom karbon z

tR(z + 1) : waktu retensi n-alkana dengan z + 1 atom karbon
wh(z) : lebar puncak di setengah ketinggian n-alkana dengan atom karbon z
wh(z + 1) : lebar puncak di setengah ketinggian n-alkana dengan z + 1 atom karbon

Karena SN bergantung pada n-alkana yang digunakan, mereka harus selalu ditentukan
kapan mendiskusikan SN. SN dapat digunakan untuk suhu isotermal dan terprogram GC, yang
menghadirkan keuntungan besar. Selain itu, nomor pemisahannya mudah diturunkan jika sistem
indeks retensi (Kovats, indeks retensi linear) menggunakan n-alkana digunakan untuk
mengkarakterisasi retensi (lihat Bab 7). Ungkapan serupa, nomor efektif puncak (EPN),
diusulkan oleh Hurrell dan Perry tentang waktu yang sama. Ini juga menggunakan resolusi dua
berturut-turut n-alkana untuk mengevaluasi efisiensi kolom, tetapi menggunakan lebar puncak di
dasar untuk perhitungannya:
 wb(z) lebar puncak di dasar n-alkana dengan atom karbon z
wb(z + 1) lebar puncak di dasar n-alkana dengan z + 1 atom karbon

SN dan EPN dapat ditransformasikan menjadi satu sama lain :

Pada tahun 1967 Giddings memperkenalkan konsep kapasitas puncak nc. Ini didefinisikan
sebagai jumlah maksimum puncak yang dapat dipisahkan pada kolom tertentu dengan resolusi
yang ditentukan dalam jendela waktu retensi yang ditentukan, mis: mulai dari yang pertama
puncak (waktu penahanan) hingga puncak terakhir (waktu retensi atau faktor retensi yang
terakhir) puncak). Konsep ini diilustrasikan pada Gambar 2.14. Jelas, kapasitas puncak sangat

tergantung pada lebar puncak dan dengan itu pada efisiensi kolom.
Jika nomor pelat konstan untuk semua analit dalam kondisi isotermal, artinya lebar
puncak meningkat sebanding dengan waktu retensi, nc dihitung sebagai berikut:
N : Nomor plat
Rs : Resolusi
tM : waktu penahanan
t R(maks) : waktu retensi puncak terakhir
Contoh: Berapa banyak puncak yang dapat dipisahkan dalam 5 menit dengan resolusi 1
pada kolom dengan plat nomor 10.000 (tM =1 mnt):
 Konsep kapasitas puncak juga dapat diterapkan pada suhu terprogram GC. Jika lebar
puncak konstan selama putaran penuh, persamaan berikut dapat digunakan:

tM : waktu penahanan
t R(maks) : waktu retensi puncak terakhir
w : lebar puncak rata-rata (kriteria 4σ)
Namun, kita harus ingat bahwa kapasitas puncak serta SN / EPN adalah nilai-nilai
teoritis. Kapasitas puncak mengasumsikan bahwa puncak terdistribusi secara merata melintasi
kromatogram, yang sayangnya tidak pernah terjadi dalam kenyataan. Davis dan Giddings
menunjukkan bahwa resolusi puncak sudah terpengaruh jika jumlah zat terlarut melebihi 37%
dari kapasitas puncak.

2.7 Evaluasi Puncak Simetri

Teori kromatografi mengasumsikan puncak simetris dengan bentuk Gaussian, tetapi pada
kenyataannya, sering puncak asimetris diamati karena berbagai alasan. Untuk Misalnya,
kelebihan muatan kolom dalam hasil kromatografi partisi menjadi dangkal kemiringan frontal
dari puncak, yang disebut fronting. Adsorpsi molekul analit di situs aktif menghasilkan tepi
belakang dangkal dari puncak, yang disebut tailing. Tingkat asimetri puncak dan tailing puncak
dapat dinyatakan baik oleh asimetri tersebut faktor A S atau faktor TF tailing. Faktor asimetri
didefinisikan sebagai rasio dari setengah lebar puncak sisi belakang dan sisi depan puncak
kromatografi diukur pada 10% dari ketinggian puncak (lihat Gambar 2.15):
 a : setengah lebar depan diukur pada 10% dari ketinggian puncak
b : kembali setengah lebar diukur pada 10% dari ketinggian puncak

Nilai AS = 1 mewakili puncak simetris, AS> 1 menunjukkan puncak tailing, dan nilai <1
adalah puncak depan. Penyimpangan kecil dari Gaussian bentuk (0,9 <A S> 1.2) sebagian besar
dapat diabaikan dan bahkan dalam analisis sampel nyata Nilai AS sekitar 1,5 seringkali masih
dapat diterima. Namun, jika ada faktor asimetri lebih besar dari 2.0, ada sesuatu yang salah dan

masalah harus diatasi. Dalam industri farmasi faktor tailing TF digunakan sesuai dengan
Farmakope Amerika Serikat (USP):
a : setengah lebar depan diukur pada 5% dari ketinggian puncak
b : kembali setengah lebar diukur pada 5% dari ketinggian puncak
Untuk nilai kurang dari 2.0, AS dan TF hampir sama dan tidakhal mana yang digunakan
kecuali ditentukan oleh pedoman peraturan.
2.8 Laju Aliran Gas, Difusi, Permeabilitas, dan Penurunan Tekanan
Seperti disebutkan di atas, helium, hidrogen, dan nitrogen digunakan sebagai fase gerak
(gas pembawa) dalam kromatografi gas. Dengan menerapkan tekanan saluran masuk, gas
pembawa adalah melewati kolom. Aliran melalui kolom dapat dicirikan baik dengan laju aliran F
(mL/mnt) (volume gas melewati kolom per waktu) unit) atau dengan kecepatan gas linier u

(cm/s). Laju aliran sering diukur di outlet kolom menggunakan, misalnya, digital flow meter.
Jika meteran aliran gelembung sabun digunakan pada suhu kamar yang diukur nilai harus
dikoreksi oleh tekanan parsial uap air dan dihitung untuk suhu kolom:
F : mengukur laju aliran
Fa : Laju aliran pada suhu kamar
fc : Laju aliran pada suhu kolom
Pa : tekanan lingkungan
Pw : sebagian tekanan uap air
Ta : suhu lingkungan
Tc : Suhu kolom
Kecepatan gas linier pada outlet kolom uo dihitung dari laju aliran F dan luas penampang
kolom. Dalam hal kolom yang dikemas antarpartikel porositas kemasan harus dipertimbangkan:

F : Laju aliran
Ac : luas penampang kolom
ε : porositas antarpartikel
Menggunakan persamaan Hagen-Poiseulle uo dapat dihitung untuk kolom kapiler dari
dimensi kolom, viskositas gas pembawa pada suhu kolom, dan tekanan masuk dan keluar kolom:
dc : diameter kolom dalam
rc : radius kolom dalam
η : viskositas gas pembawa pada suhu kolom
L : Panjang kolom
P : Tekanan relatif, P = pi / po
Pi : Tekanan masuk absolut (catatan: Kebanyakan instrumen GC tidak menunjukkan pi,
tetapi perbedaan tekanan Δp = pi - po. Dalam hal ini tekanan atmosferik
memilikiditambahkan ke nilai yang ditampilkan.)
Po : tekanan outlet

2.8.1 Kecepatan Linear Rata-Rata

Dalam perjalanan melalui kolom tekanan gas turun dari inlet kolom ke outlet
kolom. Karena p v = konstan, kecepatan gas pembawa meningkat. Karena itu, tekanan
gas dan kecepatannya berbeda di setiap titik dalam kolom. Pada inlet kecepatan gas
adalah yang terendah. Karena kompresibilitas gas, tekanan jatuh melintasi kolom dan
peningkatan kecepatan gas tidak linier berbeda dengan kromatografi cair. Untuk
memperhitungkan kompresibilitas gas, the kecepatan linier rata-rata u digunakan, yang
telah kita gunakan pers. 2.4.2 hingga mendiskusikan perluasan puncak. Kecepatan linier
rata-rata berasal dari uo dan faktor koreksi untuk kompresibilitas gas j yang sudah
diperkenalkan oleh James dan Martin dalam publikasi fundamental mereka tentang
kromatografi partisi gas-cair pada tahun 1952 :

pi : tekanan masuk kolom absolut (lihat di atas)

po : tekanan outlet kolom
Namun, jauh lebih mudah untuk menurunkan Anda dari waktu retensi yang tidak
disimpan senyawa tM dan panjang kolom L:
2.8.2 Permeabilitas Khusus
Tekanan masuk kolom dan penurunan tekanan masing-masing yang diperlukan
untuk lulus fase gerak melalui kolom dengan laju aliran yang dibutuhkan terutama
dipengaruhi oleh Bo permeabilitas spesifik kolom dan tentu saja panjang kolom. B o
menggambarkan permeabilitas kolom untuk lewatnya fluida:

L : Panjang kolom
η : viskositas gas pembawa pada suhu kolom
pi : tekanan masuk absolut
po : tekanan outlet
Bo : permeabilitas spesifik
Menggunakan beberapa abstraksi, permeabilitas spesifik Bo disimpulkan untuk
dikemas dan kolom kapiler sebagai berikut:

Jelas, kolom kapiler memiliki permeabilitas yang jauh lebih tinggi daripada yang
dikemas kolom, yang memungkinkan untuk kolom yang lebih panjang. Persamaan
selanjutnya menunjukkan bahwa pengurangan ukuran partikel dalam kolom yang
dikemas atau bagian dalam yang lebih kecil diameter kolom kapiler mengurangi
permeabilitas spesifik yang membutuhkan lebih tinggi tekanan masuk.