LAPORAN AWAL PRAKTIKUM

MIKROBIOLOGI FARMASI

ISOLASI MIKROBA DARI OBAT, MAKANAN, KOSMETIKA,

LINGKUNGAN DAN TUBUH MANUSIA

Oleh :

NAMA : Muhammad Iqbal Abdul Razzaq

NO BP: 2011012030

SHIFT/KELOMPOK : 1/E

REKAN KERJA : 1. Suci Triamarta 2011011006

2. Ristin Anggraini 2011011033

3. Aisyah Nur karima 2011013027

4. Rona Salsabila Rivaldi 2011013027

Laboratorium Mikrobiologi Farmasi

Fakultas Farmasi

Universitas Andalas

Padang

2021
 ISOLASI MIKROBA DARI OBAT, MAKANAN, KOSMETIKA,
LINGKUNGAN DAN TUBUH MANUSIA

I. Tujuan

1. Praktikan dapat mengetahui cara-cara dan teknik isolasi mikroba dari berbagai
sumber.

2. Praktikan dapat mengisolasi bakteri dari berbagai sumber secara baik dan
benar.

3. Praktikan dapat memahami aplikasi mikrobiologi secara umum dibidang

farmasi.

II. Prinsip
Pada praktikum objek ini melakukan teknik isolasi mikroba baik secara streak
plate, spread plate, maupun pour plate dengan baik, serta bisa mengaplikasikannya pada
bidang farmasi
III. Teori
Mikroorganisme biasanya tumbuh di habitat alami dalam populasi yang
bercampur serta beberapa spesies mikroorganisme tertentu. Bagi para ahli mikrobiologi
bisa menjadi masalah karena satu jenis mikroorganisme tidak dapat dipelajari secara
baik dalam kultur campuran. Kultur murni diperlukan dalam memahami suatu
mikroorganisme serta sangat penting sehingga penemuan teknik kultur murni oleh ahli
bakteriologi Jerman Robert Koch dapat mengubah perkembangan ilmu mikrobiologi.
[ CITATION Pre02 \l 1057 ]

Robert Koch,sebagai bapak mikrobiologi medis telah menyadari bahwa bakteri

tertentu dapat menyebabkan infeksi penyakit, maka bakteri patogen tersebut perlu
diisolasi serta mengakrakterisasi dari semua bakteri patogen. Dari studi yang lakukan,
beliau telah menyumbangkan banyak teknik untuk ilmu mikrobiologi, termasuk metode
kultur murni. Kultur murni hanya mengandung satu jenis mikrooganisme, dimana kultur
yang terkontaminasi mengandung organisme yang diinginkan tetapi juga organisme
yang tidak diinginkan. Dengan kultur murni, kita dapat mempelajari karakteristik kultur,
morfologi, dan fisiologis suatu organisme. [ CITATION Bro12 \l 1057 ]

Dalam waktu sekitar 20 tahun setelah penemuan teknik kultur murni, sebagian
besar patogen yang menyebabkan penyakit utama oleh bakteri pada manusia dapat
diisolasi. [ CITATION Pre02 \l 1057 ]

Sebagian besar infeksius seperti nanah, dahak, dan urin serta sampel tanah, air,
atau makanan mengandung beberapa jenis bakteri. Jika bakteri ini di pindahkan ke
media padat, koloni akan membentuk salinan persis dari organisme aslinya. Koloni
yang terlihat muncul dari satu spora atau sel vegetatif atau dari sekelompok
mikroorganisme yang sama yang terikat satu sama lain dalam rumpun atau rantai.
Diperkirakan hanya sekitar 1% bakteri di ekosistem yang menghasilkan koloni dengan
metode kultur konvensional. Koloni mikroba seringkali memiliki penampilan yang khas
yang membedakan satu mikroba dengan mikroba lainnya. Bakteri harus tersebar cukup
luas sehingga koloni terlihat terpisah satu sama lain. [ CITATION Tor19 \l 1057 ]

Hal yang perlu diperhatikan saat melakukan isolasi mikrooganisme sehingga

biakan murni terbebas dari kontaminan, merupakan organisme yang tidak diinginkan
ada bersama biakan murni yaitu prosedur teknik aseptik, jenis medium yang digunakan,
teknik isolasi, teknik pemilihan sumber biakan (koloni), dan penyimpanan pasca isolasi
mikroorganisme [ CITATION Bro12 \l 1057 ]

Sementara itu, jenis medium yang cocok digunakan untuk memperoleh biakan
murni adalah medium padat, khususnya medium padat dalam cawan petri. Medium
padat dapat menghentikan pergerakan sel-sel, kemudian mengizinkan sel-sel mikroba
untuk tumbuh dan membentuk massa yang tampak sebagai sebuah entitas tersendiri
yang disebut koloni. Koloni merepresentasikan perbanyakan dari sebuah organisme
tunggal (Cappucino & Sherman, 2002)

Jika campuran mikroba tersebar pada permukaan media agar sehingga setiap
mikroba tumbuh menjadi koloni yang benar-benar terpisah, pertumbuhan atau
kelompok mikroorganisme yang terlihat secara makroskopis pada media padat, setiap
koloni mewakili kultur murni. [ CITATION Pre02 \l 1057 ]

Koloni murni juga dapat diperoleh dari metode sterak plate. Campuran mikroba
dipindahkan ke tepi cawan agar-agar dengan loop atau kapa inokulasi dan kemudian
digoreskan ke permukaan dalam salah satu dari beberapa pola. Di beberapa titik dalam
proses, sel tunggal jatuh dari loop saat digosok di sepanjang permukaan agar-agar dan
berkembang menjadi koloni yang terpisah. [ CITATION Pre02 \l 1057 ]

Kebanyakan pekerjaan ahli mikrobiologi membutuhkan kultur murni, atau klon,

dari bakteri. Metode isolasi yang paling umum digunakan untuk mendapatkan kultur
murni adalah streak plate method [ CITATION Tor19 \l 1057 ].

Metode streak-plate adalah prosedur yang paling sering digunakan oleh ahli
mikrobiologi untuk mendapatkan kultur murni. Ini sederhana dan memungkinkan
penghematan material. Namun, itu membutuhkan tingkat keterampilan tertentu yang
hanya diperoleh melalui latihan. [ CITATION Bro12 \l 1057 ]

Lingkaran inokulasi steril dicelupkan ke dalam kultur campuran yang berisi lebih
dari satu jenis mikroba dan digoreskan dalam pola di atas permukaan media nutrisi. Saat
pola dilacak, bakteri digosok dari lingkaran ke media. Sel-sel terakhir yang akan
dihapus dari lingkaran cukup jauh untuk tumbuh menjadi koloni yang terisolasi. Koloni
ini dapat diambil dengan loop inokulasi dan dipindahkan ke tabung reaksi media nutrisi
untuk membentuk kultur murni yang hanya mengandung satu jenis bakteri. [ CITATION
Tor19 \l 1057 ]

Metode streak plate bekerja dengan baik jika organisme yang akan diisolasi ada
dalam jumlah besar dibandingkan dengan total populasi. Namun, jika mikroba yang
akan diisolasi hanya ada dalam jumlah yang sangat kecil, jumlahnya harus sangat
ditingkatkan dengan pengayaan selektif sebelum dapat diisolasi dengan metode streak
plate. [ CITATION Tor19 \l 1057 ]

Koloni murni bisa juga didapatkan dari metode pour plate, dengan sejumlah kecil
kultur campuran ditempatkan dalam cawan kultur steril. Media agar cair kemudian
dituangkan ke dalam cawan dan dibiarkan mengeras. Selama inkubasi 24 hingga 48
jam, sel membelah untuk membentuk koloni terpisah di seluruh agar. [ CITATION Tor19 \l
1057 ]

Banyak digunakan dengan bakteri dan jamur, pour plate juga dapat menghasilkan
koloni yang terisolasi. Sampel asli diencerkan beberapa kali untuk mengurangi populasi
mikroba secukupnya untuk mendapatkan koloni terpisah saat pelapisan. Kemudian
sejumlah kecil sampel yang diencerkan dicampur dengan agar-agar cair yang telah
didinginkan hingga sekitar 45 ° C, dan campuran tersebut segera dituangkan ke dalam
cawan kultur steril. Kebanyakan bakteri dan jamur tidak mati karena paparan singkat
pada agar-agar hangat. Setelah agar-agar mengeras, setiap sel dipasang di tempatnya
dan membentuk koloni individu. Piring yang berisi antara 30 dan 300 koloni dihitung.
Jumlah koloni sama dengan jumlah mikroorganisme yang dapat hidup dalam sampel
yang diencerkan. Koloni yang tumbuh di permukaan juga dapat digunakan untuk
menginokulasi media segar dan menyiapkan kultur murni. [ CITATION Pre02 \l 1057 ]

Metode pemisahan satu spesies bakteri dari yang lain ini terdiri dari pengenceran
satu loop penuh organisme dengan tiga tabung agar nutrien cair sedemikian rupa
sehingga salah satu cawan yang dituangkan akan memiliki jumlah organisme optimal
untuk memberikan isolasi yang baik. [ CITATION Bro12 \l 1057 ]

Metode spread plate adalah cara yang mudah dan langsung untuk mencapai hasil
ini. Sejumlah kecil campuran mikroba encer yang mengandung sekitar 30 hingga 300
sel dipindahkan ke bagian tengah piring agar-agar dan disebarkan secara merata ke
seluruh permukaan dengan batang kaca bengkok yang steril. Sel-sel yang tersebar
berkembang menjadi koloni yang terisolasi. Karena jumlah koloni harus sama dengan
jumlah organisme yang dapat hidup dalam sampel, pelat sebar dapat digunakan untuk
menghitung populasi mikroba. [ CITATION Pre02 \l 1057 ]

Perhitungan jumlah koloni akan lebih muda dan cepat jika pengenceran
dilakukan secara desimal. Sebagai contohnya misalnya penetapan jumlah
mikroorganisme pada air minum isi ulang. Pengenceran awal 1 : 10 (= 10-1) dibuat
dengan cara mengencerkan 1 ml sampel air minum ke dalam 9 ml larutan pengencer,
dilanjutkan dengan pengenceran yang lebih tinggi, misalnya sampai 10-3. Jika setelah
inkubasi misalnya diperoleh 60 dan 64 koloni masing-masing pada cawan duplo yang
mengandung sampel dengan pengenceran 10-4, maka jumlah koloni dapat dihitung
sebagai berikut (1 ml larutan pengencer dianggap mempunyai berat 1 g):

= Pengenceran x Jumlah
Faktor sampel
pengenceran = 10-4 x 1
= 10-4

Jumlah koloni
= Jumlah koloni x 1/Fa
= (60 + 64)/2 x 1/10-4
= 6,2 x 105

Untuk melaporkan suatu hasil analisis mikrobiologi digunakan suatu “Standar

Plate Count” (SPC) yang menjelaskan mengennai cara menghitung koloni pada cawan
serta cara memilih data yang ada untuk menghitung jumlah koloni di dalam suatu
sampel. Cara menghitung koloni pada cawan adalah sebagai berikut:
1. Cawan yang dipilih dan dihitung adalah yang mengandung jumlah koloni antara 30 –
300.
2. Beberapa koloni yang bergabung menjadi satu merupakan satu kumpulan koloni yang
besar dimana jumlah koloninya diragukan sehingga dapat dihitung sebagai satu koloni.
3. Suatu deretan (rantai) koloni yang terlihat sebagai suatu garis tebal dihitung sebagai
satu koloni

IV. Metode Percobaan

1. Buat suspensi sampel 10% dalam labu Erlenmeyer 250 ml. Jika dalam bentuk
padat: 10 gram dalam 100 ml akuades, cair: 10 ml dalam 100 ml

2. Cairkan media dalam penangas air sampai suhu ± 45oC

 3. Buat pengenceran 10-1 s/d 10-4 dari sampel, tandai setiap tabung dengan tingkat
pengencerannya.

4. Pipet 1 ml cairan dari pengenceran 10-3 dari 10-4, masukan kedalam cawan petri
yang
telah ditandai
5. Tuangkan agar kedalam cawan dan goyang cawan dengan gerakan searah jarum
jam
5 kali gerakan dan berlawanan arah jarum jam sebanyak 5 kali.
6. Biarkan lempengan agar membeku (10 menit) setelah membeku, balik
lempengan
agar dan masukan kedalam incubator (30-37oC) selama 24 - 48 jam.
7. Amati pertumbuhan koloni bakteri, catat semua pengamatan

Daftar Pustaka
Brown, A., & Smith, H. (2012). BENSON’S MICROBIOLOGICAL APPLICATIONS:
LABORATORY MANUAL IN GENERAL MICROBIOLOGY, SHORT VERSION,
THIRTEENTH EDITION. United States of America: McGraw-Hill Education.

Prescott, L. M. (2002). Microbiology 5th edition. United State America: The

McGraw−Hill.

Tortora, G. J. (2019). Microbiology : an introduction. Boston: Pearson.

o Cappuccino, J. G. & N. Sherman. 2002. Microbiology: A laboratory manual.