UJI EFEKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK

DAUN SIRIH MERAH (Piper crocatum)

TERHADAP BAKTERI Streptococcus sanguinis

SKRIPSI

Untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memeroleh Gelar

Sarjana Kedokteran Gigi

Oleh
Sheren Shesar Natashya
NIM 4211171035

PROGRAM STUDI KEDOKTERAN GIGI

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS JENDERAL ACHMAD YANI
CIMAHI
2020
 LEMBAR PENGESAHAN

Judul : Uji Efektivitas Antibakteri Ektrak Daun Sirih Merah (Piper crocatum)
Terhadap Bakteri Streptococcus sanguinis
Nama : Sheren Shesar Natashya
NIM : 4211171035

Cimahi, Oktober 2020

Menyetujui,

Pembimbing Utama Pembimbing Pendamping

Herryawan, drg., Sp.Perio Hillda Herawati, drg., Sp.Ort

NID. 412182479 NID. 412173067

Mengetahui,

Wakil Dekan I Ketua Program Studi

Kedokteran Gigi

Yudith Yunia K, dr., M.Kes, SpPD Hillda Herawati, drg., Sp.Ort

NID. 412139771 NID. 412173067
 LEMBAR PENYATAAN TIDAK PLAGIAT

Saya yang bertanda tangan di bawah ini:

Nama : Sheren Shesar Natashya
NIM : 4211171035
Program studi : Pendidikan Dokter Gigi
Fakultas : Kedokteran

Menyatakan dengan sebenarnya bahwa naskah usulan penelitian ini benar-benar

merupakan hasil karya saya sendiri, bebas dari peniruan terhadap karya dari orang
lain, kecuali dari arahan dan masukan dosen pembimbing. Kutipan pendapat dan
tulisan orang lain ditunjuk sesuai dengan cara-cara penulisan karya ilmiah yang
berlaku.
Apabila di kemudian hari terbukti atau dapat dibuktikan bahwa dalam naskah
usulan penelitian ini terkandung ciri-ciri plagiat dan bentuk-bentuk peniruan lain
yang dianggap melanggar peraturan, maka saya bersedia menerima sanksi atas
perbuatan tersebut sesuai dengan aturan yang berlaku.

Cimahi, Oktober 2020

Yang membuat pernyataan,

Sheren Shesar Natashya

4211171035

iii
 KATA PENGANTAR

Puji dan syukur penulis panjatkan atas kehadirat Allah SWT karena atas ridho
dan rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan naskah usulan penelitian yang
berjudul “Uji Efektivitas Antibakteri Ektrak Daun Sirih Merah (Piper crocatum)
Terhadap Bakteri Streptococcus sanguinis”. Penyusunan naskah usulan penelitian
ini telah dibantu oleh banyak pihak. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis
ingin mengucapkan terimakasih kepada :
1. Dekan, Wakil Dekan I, Wakil Dekan II, dan Wakil dekan III, Ketua Program
Studi Pendidikan Dokter Gigi, beserta seluruh staf Fakultas Kedokteran
Universitas Jenderal Achmad Yani dan Tim Skripsi.
2. Herryawan, drg., Sp.Perio sebagai dosen pembimbing utama yang telah
membimbing dengan penuh kesabaran, meluangkan waktu, memberikan
arahan, dukungan, saran, dan masukan dalam penyusunan naskah usulan
penelitian ini.
3. Hillda Herawati, drg., Sp.Ort sebagai sebagai dosen pembimbing pendamping
telah banyak memberikan masukan, bimbingan, pengarahan, dan saran dalam
penyusunan naskah skripsi ini.
4. Orang tua penulis, Deru , Eni Nuraeni dan Linda, beserta adik penulis Shenia
Shesar, Sekar, Tasya dan Dzikri yang telah mendoakan dan memberikan
dukungan dalam meyelesaikan skripsi ini.
5. Semua pihak yang turut membantu dalam penyelesaian naskah usulan
penelitian ini, yang tidak dapat disebutkan satu persatu.
Penulis menyadari bahwa naskah usulan penelitian ini masih jauh dari kata
sempurna. Oleh karena itu, penulis mengharapkan kritik dan saran yang bersifat
membangun dari semua pihak agar pada saat pelaksanaan serta penulisan naskah
usulan penelitian akan menjadi lebih baik. Penulis juga berharap dari penulisan
usulan penelitian ini dapat memberikan manfaat dan tambahan ilmu bagi pembaca.
Akhir kata, penulis berharap agar Allah swt membalas semua kebaikan dari semua
pihak yang telah membantu dalam penyusunan naskah usulan penelitian ini.

iv
 Cimahi, Oktober 2020

Penulis

v
 DAFTAR ISI

LEMBAR PENGESAHAN .............................................................................. ii

LEMBAR PENYATAAN TIDAK PLAGIAT .............................................. iii
KATA PENGANTAR ..................................................................................... iv
DAFTAR ISI .................................................................................................... vi
DAFTAR TABEL .......................................................................................... viii
DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... ix
DAFTAR SINGKATAN .................................................................................. x
BAB I PENDAHULUAN ................................................................................. 1
1.1 Latar Belakang ............................................................................................. 1
1.2 Rumusan Masalah ........................................................................................ 3
1.3 Tujuan Penelitian .......................................................................................... 3
1.3.1 Tujuan Umum ............................................................................................ 3
1.3.2 Tujuan Khusus ........................................................................................... 3
1.4 Manfaat Penelitian ........................................................................................ 4
1.4.1 Manfaat Akademik .................................................................................... 4
1.4.2 Manfaat Praktis .......................................................................................... 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ...................................................................... 5
2.1 Plak gigi ........................................................................................................ 5
2.1.1 Klasifikasi Plak Gigi ................................................................................. 5
2.1.2 Komposisi Plak Gigi ................................................................................. 5
2.1.3 Pembentukan Plak Gigi............................................................................. 6
2.2 Kontrol Plak ................................................................................................. 7
2.3 Streptococcus sanguinis ............................................................................... 9
2.3.1 Karakteristik dan Morfologi Streptococcus sanguinis.......................... 9
2.4 Sirih Merah (Piper crocatum) .................................................................... 10
2.4.1 Karakteristik dan Morfologi Sirih Merah (Piper crocatum) .............. 11
2.4.2 Kandungan Kimia dan Manfaat Daun Sirih Merah (Piper crocatum)
.............................................................................................................................. 11
2.5 Kerangka Pemikiran ................................................................................... 13
2.6 Premis ......................................................................................................... 14
2.7 Hipotesis ..................................................................................................... 15
BAB III METODE PENELITIAN ............................................................... 16

vi
3.1 Rancangan Penelitian ................................................................................. 16
3.2 Objek Penelitian ......................................................................................... 16
3.2.1 Kriteria Inklusi dan Ekslusi .................................................................... 16
3.3 Jumlah Sampel ........................................................................................... 16
3.4 Variabel Penelitian ..................................................................................... 17
3.5 Definisi Operasional ................................................................................... 17
3.6 Alat dan Bahan Penelitian .......................................................................... 18
3.6.1 Alat Penelitian .......................................................................................... 18
3.6.2 Bahan Penelitian ...................................................................................... 19
3.7 Prosedur Penelitian ..................................................................................... 19
3.7.1 Persiapan Bahan dan Pembuatan Ekstrak Daun Sirih Merah ............ 19
3.7.2 Sterilisasi Alat dan Bahan....................................................................... 20
3.7.3 Prosedur Peremajaan Bakteri Streptococcus sanguinis ...................... 20
3.7.4 Prosedur Reidentifikasi Bakteri ............................................................. 20
3.7.5 Pembuatan Suspensi ................................................................................ 21
3.7.6 Pelaksanaan Uji Efektivitas Antibakteri Ekstrak Daun Sirih Merah 21
3.7.7 Alur Penelitian ......................................................................................... 22
3.8 Analisis Data .............................................................................................. 23
3.9 Tempat dan Waktu Penelitian .................................................................... 23
3.10 Jadwal Penelitian ...................................................................................... 24
DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... 26

vii
 DAFTAR TABEL

Tabel 3. 1 Definisi Operasional ........................................................................................ 18

Tabel 3. 2 Jadwal Penelitian ............................................................................................. 24

viii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Scanning Electron Micrograph (SEM) Streptococcus sanguinis ........ 9

Gambar 2.2 Sirih merah ........................................................................................ 11
Gambar 2.3 Kerangka pemikiran .......................................................................... 14
Gambar 3.1 Alur Penelitian…………………………………………...………….22

ix
 DAFTAR SINGKATAN

RISKESDAS : Riset Kesehatan Dasar

ATCC : The American Type Culture Collection
CFU : Colony Forming Unit
DMSO : Dimethyl sulfoxide
MHA : Mueller Hinton Agar
SEM : Scanning Electron Micrograph
SPSS : Statistical Product and Service Solutions

x
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Plak gigi merupakan lapisan lunak tidak berwarna yang terdiri dari berbagai
jenis mikroorganisme. Plak merupakan penyebab lokal dari terjadinya penyakit
pada rongga mulut, hal ini disebabkan karena aktivitas dari mikroorganisme yang
terkandung di dalam plak. Pembentukan plak diawali dengan adanya pelikel yang
menjadi media melekatnya bakteri ke permukaan gigi.Salah satu bakteri yang dapat
membentuk plak gigi adalah Streptococcus sanguinis.1,2
Streptococcus sanguis adalah flora normal rongga mulut manusia. Bakteri ini
termasuk jenis bakteri Gram positif dan bersifat anaerob fakultatif. Bakteri ini dapat
memfasilitasi bakteri lain untuk berkolonisasi sehingga memudahkan terbentuknya
plak di permukaan gigi.2 Bakteri ini juga dapat menyebabkan karies gigi dan
gingivitis kronik, karena aktivitas biokimia (produksi asam organik) plak gigi
berperan penting dalam perjalanan plak mikroba yang berefek pada gigi dan
gingiva.3
Plak melekat kuat pada permukaan gigi serta permukaan keras lainnya dalam
rongga mulut, sehingga sulit lepas hanya dengan berkumur air saja. Diperlukan
tindakan kontrol plak untuk dapat membersihkan plak dari permukaan gigi.
Pembersihan yang kurang tepat dan maksimal akan menyebabkan plak semakin
melekat dan menumpuk, sehingga lama kelamaan akan terkalsifikasi menjadi
karang gigi atau dental kalkulus.4,5
Kontrol plak diartikan sebagai salah satu upaya untuk memelihara kesehatan
gigi dan mulut dengan cara menghilangkan plak gigi dan mencegah penumpukan
plak kembali. Metode kontrol plak dapat dilakukan secara mekanik maupun
kimiawi. Kontrol plak secara mekanik dilakukan dengan menyikat gigi
menggunakan sikat dan pasta gigi, serta penggunaan benang gigi (flossing). Adapun
kontrol plak secara kimiawi dilakukan dengan berkumur menggunakan obat kumur.
Kedua metode tersebut cukup efektif dalam menghilangkan plak di permukaan gigi.

1
 2

Meskipun plak akan terbentuk kembali setelah menggosok gigi, akan tetapi upaya
meminimalkan plak melekat pada permukaan gigi sangat penting untuk mencegah
penumpukan plak.5,6
Pasta gigi dan obat kumur umumnya mengandung substansi kimia yang
memiliki sifat antiseptik atau antibakteri dan juga menimbulkan efek samping.
Maka dari itu, untuk mengatasi efek samping dari bahan kimia ini,
dikembangkanlah obat yang berasal dari bahan alami seperti tanaman yang dapat
dimanfaatkan sebagai obat. Bahan alami secara umum dinilai lebih aman
dibandingkan obat kimia dikarenakan memiliki efek samping yang lebih kecil.7,8,9
Seiring perkembangan zaman dengan melimpahnya sumber alam, dalam
perkembangan ilmu bahan kedokteran gigi ini banyak dilakukan penelitian-
penelitian dengan memanfaatkan sumber alam yang banyak manfaatnya bagi dunia
kedokteran khususnya dalam dunia kedokteran gigi. Tidak dipungkiri bahwa obat
alternatif berbahan dasar herbal tradisional saat ini masih dipergunakan kembali
oleh masyarakat. Salah satu bahan herbal tradisional yang diyakini oleh masyarakat
memiliki khasiat untuk penyakit tertentu dan berpotensi sebagai obat adalah
tanaman sirih merah (Piper crocatum). Tanaman ini secara empiris diyakini dapat
menyembuhkan penyakit infeksi maupun non infeksi.10,11 Penapisan fitokimia
menyimpulkan bahwa sirih merah memiliki kandungan bermanfaat seperti
flavonoid, minyak atsiri, tanin dan alkaloid yang bersifat antibakteri.12,13
Berdasarkan penelitian Herryawan dan Sabirin (2018), ekstrak daun sirih merah
terbukti memiliki kemampuan dalam menghambat bakteri patogen (Gram negatif)
Aggregatibacter actinomycetemcommitans (Aa) dan Porphyromonas gingivalis
(Pg) pada konsentrasi 2,5%, 5%, dan 10%.14 Berbeda dengan penelitian tersebut,
Yulianti (2020), dalam penelitian efektivitas ekstrak daun sirih merah (piper
crocatum) terhadap pertumbuhan Streptococcus sanguinis dengan konsentrasi
2,5%, 5%, dan 10% tidak efektif dalam menghambat pertumbuhan bakteri
Streptococcus sanguinis15.
Puspita, dkk (2019) melakukan penelitian mengenai aktivitas antibakteri
ekstrak daun sirih merah dengan konsentrasi yang lebih tinggi yaitu 25%, 50%,
75% dan 100%. Hasilnya terbukti bahwa ekstrak daun sirih merah dengan
 3

konsentrasi tersebut dapat mengahambat pertumbuhan bakteri Gram positif

(Bacillus subtilis) maupun Gram negatif (Pseudomonas aeruginosa), dengan daya
hambat tertinggi pada konsentrasi 100% yaitu sebesar 1,12 mm untuk Bacillus
subtilis dan 1,03 mm untuk Pseudomonas aeruginosa.16 Penelitian lain yang
dilakukan oleh Pujiastuti (2015) menyatakan bahwa ekstrak daun sirih merah
efektif menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif Streptococcus viridans pada
konsentrasi 100%.17
Berdasarkan latar belakang tersebut maka penulis tertarik untuk melakukan
penelitian lebih lanjut mengenai efektivitas ekstrak daun sirih merah (Piper
crocatum) terhadap pertumbuhan bakteri Streptococcus sanguinis dengan
konsentrasi 25%, 50%, 75% dan 100%.

1.2 Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang yang telah diuraikan, maka didapatkan rumusan
masalah sebagai berikut:
1. Bagaimana efektivitas ekstrak daun sirih merah dengan konsentrasi 25%, 50%,
75% dan 100% dalam menghambat pertumbuhan bakteri Streptococcus
sanguinis?
2. Bagaimana perbandingan efektivitas daya hambat ekstrak daun sirih merah pada
setiap konsentrasi terhadap pertumbuhan bakteri Streptococcus sanguinis?

1.3 Tujuan Penelitian

1.3.1 Tujuan Umum
Mengetahui efektivitas antibakteri ekstrak daun sirih merah terhadap bakteri
Streptococcus sanguinis.
1.3.2 Tujuan Khusus
1. Mengetahui efektivitas ekstrak daun sirih merah dengan konsentrasi 25%, 50%,
75% dan 100% dalam menghambat pertumbuhan bakteri Streptococcus
sanguinis.
2. Mengetahui perbandingan efektivitas daya hambat ekstrak daun sirih merah
pada setiap konsentrasi terhadap pertumbuhan bakteri Streptococcus sanguinis.
 4

1.4 Manfaat Penelitian

1.4.1 Manfaat Akademik
1. Memberikan informasi ilmiah dan pengetahuan mengenai efektivitas antibakteri
dari ekstrak daun sirih merah, khususnya dalam menghambat pertumbuhan
bakteri Streptococcus sanguinis.
2. Memperluas pengetahuan tentang khasiat ekstrak daun sirih merah, sehingga
dapat digunakan sebagai acuan untuk penelitian selanjutnya.
1.4.2 Manfaat Praktis
1. Meningkatkan pemanfaatan potensi alam seperti tanaman obat tradisional
Indonesia yang dapat dikembangkan untuk pengobatan dan pemeliharaan
kesehatan, khususnya kesehatan gigi dan mulut.
2. Penelitian ini dapat memberikan data ilmiah yang dapat mendukung penggunaan
dan penggembangan daun sirih merah (Piper crocatum) sebagai bahan dasar
herbal yang efektif dan aman digunakan oleh masyarakat untuk memelihara
kesehatan gigi dan mulut.
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Plak gigi

Plak gigi merupakan lapisan bening, lunak, dan tipis yang terdiri dari
mikroorganisme dan melekat erat pada permukaan gigi.2,5 Terjadinya plak diawali
dengan terbentuknya acquired pellicle yang berwarna transparan pada permukaan
gigi, kemudian bakteri akan menempel dan berproliferasi sehingga warnanya akan
berubah menjadi kekuningan bila telah matang.18 Lokasi awal tempat
terakumulasinya plak biasanya pada permukaan gigi yang kasar serta di sepertiga
servikal. Penggunaan disclosing solutions sebagai zat pewarna plak dapat
membantu untuk mengidentifikasi plak yang sulit terlihat. 19

2.1.1 Klasifikasi Plak Gigi

Menurut lokasinya, jenis plak dibagi menjadi 2 tipe, yaitu dapat diklasifikasikan
sebagai plak supragingiva dan plak subgingiva. Plak supragingiva berada pada atau
diatas margin gingiva dan mungkin juga kontak langsung dengan margin gingiva
ditemukan pada 1/3 mahkota gigi, bagian interproksimal, serta pada pit dan fissure
gigi. Sedangkan plak subgingiva terletak di bawah margin gingiva di antara gigi
dan epitel poket atau sulkus gingiva. Secara visual, plak supragingiva lebih mudah
teridentifikasi bila dibandingkan dengan plak subgingiva..20,21

2.1.2 Komposisi Plak Gigi

Plak gigi bermula dari adanya pelikel yang merupakan lapisan aseluler
berprotein yang melapisi gigi, terdiri dari glikoprotein saliva, phosphoprotein,
lemak, komponen dari cairan sulkus gingiva, sisa dinding sel bakteri yang mati, dan
produk hasil mikroba lain.22 Komponen plak gigi pada rongga mulut terdiri dari
berbagai bakteri selain leukosit, neutrofil, makrofag, dan limfosit yang
berkontribusi positif terhadap kesehatan individu. Diperkirakan bahwa bagian

5
 6

utama dari plak terdiri dari air yang bakteri menyumbang sekitar 70% (yang sedikit
kurang dari 3/4) dan polisakarida dan glikoprotein membentuk 30% sisanya.
Beberapa studi penelitian telah memvalidasi peran Streptococcus mutan dan
beberapa bakteri anaerob dalam perlekatan awal pada permukaan gigi dan
karenanya dianggap sebagai penjajah primer dan mereka bertanggung jawab untuk
pembentukan komunitas biofilm premature.23
Terdapat lebih dari 750 jenis mikroba yang dapat ditemukan pada plak gigi,
dengan lebih dari 100 spesies yang berbeda pada setiap individu. Komposisi bakteri
plak di bagian permukaan luar terdiri dari bakteri aerob, sedangkan pada permukaan
bagian dalam terdiri dari bakteri anaerob. Koloni bakteri yang paling banyak
ditemukan pada awal pembentukan plak terdiri dari bakteri Gram positif seperti
Streptococcus mitis, Streptococcus sanguinis, Streptococcus mutans, Streptococcus
oralis, Actinomyces oris, Actinomyces naeslundii, dan bakteri lainnya. Jenis
mikroorganisme lain yang juga dapat ditemukan pada plak adalah spesies
Mycoplasma, yeast, protozoa, dan virus.21,24

2.1.3 Pembentukan Plak Gigi

Pembentukan plak gigi di dalam rongga mulut dibentuk pertama kali oleh
substansi saliva dan karbohidrat dari sisa-sisa makanan, kemudian dilanjutkan
dengan serangkaian proses yang berurutan. Plak terbentuk ketika pelikel, sisa
makanan dan bakteri bergabung. Plak pada gigi dapat terlihat 1 - 2 hari tanpa adanya
tindakan oral hygiene, plak bisa berlanjut dan terus berakumulasi sampai sebuah
keseimbangan tercapai antara penghapusan plak dengan pembentukan plak. Proses
pembentukan plak dibagi menjadi tiga fase yakni pembentukan plak, kolonisasi
awal, koloni sekunder dan maturasi plak 21,25
Tahap pertama proses pembentukan plak gigi adalah melekatnya pelikel pada
email gigi. Pelikel adalah lapisan tipis protein saliva yang melekat pada permukaan
gigi hanya dalam beberapa menit setelah dibersihkan. Lapisan ini disebut pelikel
saliva acquired yang tipis (0,5μm), lembut, tidak berwarna dan transparan. Melekat
pada permukaan gigi dan dapat dihilangkan hanya dengan gesekan ringan. Pelikel
 7

berfungsi sebagai penghalang protektif yang akan bertindak sebagai pelumas

permukaan dan mencegah desikasi (pengeringan) jaringan.21
Tahap kedua proses pembentukan plak gigi adalah kolonisasi awal dan
pelekatan bakteri. Dalam waktu beberapa menit setelah terdepositnya pelikel,
pelikel ini akan terpopulasi dengan bakteri. Bakteri dapat terdeposit langsung pada
email, tetapi biasanya bakteri melekat terlebih dahulu pada pelikel dan bakteri dapat
menyelubungi glikoprotein saliva. Bakteri awal yang berkolonisasi dengan pelikel
pada permukaan gigi sebagian besar adalah bakteri Gram positif fakultatif seperti
Actinomyces viscosus dan Streptococcus sanguis.21,26
Tahap ketiga koloni sekunder dan maturasi plak. Koloni sekuder adalah
mikroorganisme yang pada awalnya tidak berkoloni pada permukaan gigi termasuk
Prevotella intermedia, Prevotella loescheii, Capnocytophaga spp, Fusobacterium
nucleatum dan Porphyromonas gingivalis. Mikroorganisme ini melekat pada sel
bakteri yang telah berada dalam plak.21 Selama proses ini kondisi lingkungan
perlahan akan berubah dan menyebabkan terjadinya pertumbuhan yang selektif.

2.2 Kontrol Plak

Pengendalian plak merupakan bagian yang tidak dapat dipisahkan dari
penatalaksanaan penyakit periodontal. Plak memiliki peranan yang besar pada
timbulnya penyakit periodontal, maka akumulasi plak perlu dicegah dengan
pelaksanaan plak kontrol. Kontrol plak merupakan upaya mencegah terjadinya
penumpukan plak. Upaya tersebut dapat dilakukan secara mekanis maupun
kimiawi.2,6
1. Tindakan Secara Mekanis
Tindakan secara mekanis adalah tindakan membersihkan gigi dan mulut dari
sisa makanan dan debris yang bertujuan untuk mencegah terjadinya penyakit pada
jaringan keras maupun jaringan lunak.27 Tindakan secara mekanis untuk
menghilangkan plak dapat dilakukan dengan menggunakan alat fisioterapi oral.
Alat fisioterapi oral adalah alat yang digunakan untuk membantu membersihkan
gigi dan mulut dari sisa sisa makanan dan debris yang melekat pada permukaan
gigi.28
 8

Sikat gigi adalah salah satu alat fisioterapi oral yang digunakan secara luas
untuk membersihkan gigi dan mulut. Pasar merupakan tempat ditemukannya
beberapa macam jenis sikat gigi, baik manual maupun elektrik, namun harus
diperhatikan juga keefektifan sikat gigi untuk membersihkan gigi dan mulut. Hal-
hal yang harus diperhatikan dalam memilih sikat gigi, seperti kenyamanan bagi
setiap individu meliputi ukuran, tekstur dari bulu sikat, mudah digunakan, mudah
dibersihkan dan cepat kering sehingga tidak lembab, awet dan tidak mahal, bulu
sikat lembut tetapi cukup kuat dan tangkainya ringan, ujung bulu sikat
membulat.6,29
2.Tindakan Secara Kimiawi
Berbagai usaha untuk mencegah bakteri berkolonisasi di atas permukaan gigi
membentuk plak berdasarkan sifat-sifat mikrobiologisnya. Meskipun menyikat gigi
dianggap paling efektif dalam membersihkan gigi dan mengendalikan plak, namun
obat kumur banyak digunakan sebagai tambahan untuk memberikan agen aktif ke
jaringan periodontium. Saat ini perhatian beralih kepada penggunaan senyawa
antimikroba dari bahan alami untuk melawan efek yang merugikan, meningkatkan
potensi terhadap antiplak dan anti gingivitis, dan untuk mengurangi meningkatnya
resistensi mikroba sebagai antiseptik dan antibiotik konvensional.2,28
Bahan antimikroba yang dapat digunakan sebagai obat kumur adalah
klorheksidin, fluoride, dan povidone iodine. Klorheksidin dipercaya sebagai obat
kumur yang mampu mengurangi pembentukan plak, menghambat pertumbuhan
plak dan mencegah terjadinya penyakit periodontal, karena mampu melekat secara
ionik pada gigi dan permukaan mukosa oral dalam konsentrasi tinggi selama
berjam-jam. Hal ini menunjukan bahwa obat kumur yang mengandung klorheksidin
sangat efektif untuk pengontrol plak.30,31
 9

2.3 Streptococcus sanguinis

Streptococcus sanguinisis merupakan bakteri pelopor dalam pembentukan
kolonisasi plak di rongga mulut. Bakteri ini merupakan bakteri Gram positif yang
berperan dalam kolonisasi bakteri dalam rongga mulut. Streptococcus sanguinisis
bertindak sebagai jangkar untuk perlekatan mikroorganisme rongga mulut lainnya,
sehingga berkontribusi pada pengembangan karies, gingivitis, dan penyakit
periodontal.32,33 Streptococcus sanguinis memiliki klasifikasi yang termasuk dalam
kingdom Bacteria, divisi Firmicutes, kelas Bacilli, ordo Lactobacilalles, famili
Streptococcaceae, genus Streptococcus, dan spesies Streptococcus sanguinis.34

Gambar 2.1 Scanning Electron Micrograph (SEM) Streptococcus sanguinis

Dikutip dari : Scimat / Science Source

2.3.1 Karakteristik dan Morfologi Streptococcus sanguinis

Streptococcus sanguis merupakan bakteri gram positif berbentuk kokus (bulat)
dengan diameter 0,6–1,0 μm tersusun seperti rantai. Streptococcus sanguis bersifat
nonmotil (tidak bergerak), katalase negatif, tumbuh optimum pada suhu 370C
dengan pH 7,4–7,6, bewarna opak, permukaannya kasar (hanya 7% bersifat
mukoid). Streptococcus sanguis termasuk jenis bakteri golongan Streptococcus
hemoliticus tipe alpha disebut sebagai tipe strain nonhemolitik yang secara normal
dapat ditemukan dalam rongga mulut. Berdasarkan struktur dinding sel, bakteri ini
digolongkan pada bakteri Gram positif karena memiliki lapisan multilayer
peptidoglikan yang tebal dari pada Gram negatif. Pertumbuhan bakteri ini tidak
dihambat oleh optokin dan koloninya larut dalam empedu.34
 10

Streptococcus sanguis memiliki stuktur DNA terdiri dari 2.388.435 bp.

Organisme ini mempunyai kode 2.274 protein yang terdiri dari 61 transfer RNA
(tRNA) dan ribosa RNA (rRNA). Gen dalam bakteri Streptococcus sanguis dapat
mempertahankan sintesis protein adesi pada permukaan sel. Morfologi koloni
Streptococcus sanguis berbeda, tergantung media yang digunakan walaupun pada
media padat sering muncul koloni kasar, koloni halus dan lembut juga sering
ditemukan.35

2.4 Sirih Merah (Piper crocatum)

Sirih merupakan tumbuhan yang dikenal oleh masyarakat yang digunakan
sebagai obat di Asia Tenggara.36 Tanaman sirih merah dapat tumbuh pada berbagai
jenis tanah. Curah hujan merupakan salah satu faktor menentukan untuk
perumbuhan sirih. Sirih tidak dapat bertahan terhadap genangan dan intensitas
cahaya tinggi. Pertumbuhan yang optimal bagi tanaman sirih merah diperoleh pada
ketinggian 10-300 m dpl. Namun beberapa jenis sirih dapat tumbuh sampai
ketinggian lebih dari 1.000 m dpl.37 Beragam jenis sirih di Indonesia dibedakan
berdasarkan bentuk daun, rasa dan aroma, yaitu sirih merah, sirih hijau, sirih banda,
sirih cengkih dan sirih hitam.36
Sirih merah (Piper crocatum) diketahui tanaman asli Peru, Amerika Selatan
yang saat ini banyak keberadaannya di Indonesia. Menurut Astuti (2011),
berdasarkan hasil kegiatan eksplorasi pada tahun 2001 sampai 2010 di kawasan
pulau Sulawesi dilaporkan terdapaat keberadaan bukti koleksi dari tanaman sirih
merah.38 Tanaman sirih merah ini termasuk kedalam famili Piperaceae. Adapun
klasifikasi dari tanaman sirih merah yaitu termasuk dalam kingdom Plantae, divisi
Spermatophyta, kelas Dicotyledonae, ordo Piperales, famili Piperaceae, genus
Piper, spesies Piper crocatum (Ruiz & Pav).39
Tanaman sirih merah menyukai tempat yang teduh dan dapat tumbuh dengan
subur pada pengairan yang baik dan cahaya matahari yang diterima sebanyak 60 –
75%. Bila terlalu banyak terkena sinar matahari, batangnya akan cepat mengering
dan warna daunnya akan memudar. Sebaliknya bila terlalu banyak terkena air, akar
dan batangnya akan membusuk.40 Berdasarkan hasil penelitian Afiff (2017), ekstrak
 11

daun sirih merah dengan konsentrasi yaitu 0%, 40%, 60%, dan 80% dapat
mempengaruhi pertumbuhan besar zona hambat bakteri Staphylococcus aureus.
Hal ini enynjukan bahwan ekstrak daun sirih merah efektif sebagai antibakteri.10

Gambar 2.2 Sirih merah

Dikutip dari: Dokumen pribadi

2.4.1 Karakteristik dan Morfologi Sirih Merah (Piper crocatum)

Sirih merah (Piper crocatum) merupakan tanaman yang tumbuh merambat atau
menjalar, panjangnya dapat mencapai sekitar 5-10m. Tanaman ini memiliki batang
berbentuk bulat atau silindris, terdapat ruas dengan jarak buku 5-10 cm, beralur
tegas, serta dapat ditumbuhi satu daun pada setiap bukunya. Daunnya bertangkai
membentuk jantung dengan bagian atas meruncing, bertepi rata, dan permukaannya
mengilap atau tidak berbulu. Panjang daunnya bisa mencapai 15-20 cm. Warna
daun bagian atas hijau bercorak warna putih keabu-abuan. Bagian bawah daun
berwarna merah hati cerah. 38,41

2.4.2 Kandungan Kimia dan Manfaat Daun Sirih Merah (Piper crocatum)
Sirih merah (Piper crocatum) merupakan salah satu tanaman obat tradisional
yang potensial dan diketahui secara empiris memiliki manfaat untuk
menyembuhkan berbagai jenis penyakit, seperti diabetes, hipertensi, hiperglikemia,
 12

kanker, sakit gigi, mengurangi perdarahan pada gusi, mencegah nafas yang tidak
sedap pada rongga mulut, serta sebagai antioksidan.10,42
Menurut Pasril (2014), sirih merah juga mempunyai manfaat sebagai antiseptik
seperti halnya pada sirih hijau, yaitu sebagai obat kumur, pembersih kewanitaan,
dan obat untuk radang pada mata. Khasiat dari sirih merah tersebut berasal dari
sejumlah senyawa aktif yang dikandungnya.13 Berikut merupakan peranan dari
senyawa aktif yang terkandung pada sirih merah yaitu:
1. Alkaloid
Alkaloid adalah zat aktif pada tanaman yang berfungsi sebagai obat maupun
aktivator kuat bagi sel imun yang dapat menghancurkan bakteri, virus, jamur,
dan sel kanker. Zat ini mempunyai aktivitas antimikroba yang kuat, dengan cara
mengganggu komponen peptidoglikan pada sel bakteri, sehingga lapisan dinding
sel tidak terbentuk dan menyebabkan kematian bakteri.40,43
2. Flavonoid
flavonoid memiliki fungsi sebagai antibakteri dengan cara membentuk senyawa
fenol yang dapat bersifat koagulator protein. Flavanoid bertindak sebagai
antibakteri dengan membentuk senyawa kompleks terhadap protein ekstraseluler
yang akan mengganggu integritas dinding sel bakteri. 40,43
3. Tanin
Tanin merupakan senyawa polifenol yang larut dalam air, dapat mengikat dan
mengendapkan protein. Senyawa ini memiliki aktivitas antibakteri dengan cara
dinding bakteri yang telah lisis oleh senyawa saponin dan flavonoid, sehingga
senyawa tanin dapat mudah masuk ke dalam sel bakteri sehingga mengkoagulasi
protoplasma sel bakteri.44
4. Minyak Atsiri
Minyak atsiri merupakan salah satu hasil proses metabolisme dalam tanaman
yang terbentuk karena reaksi berbagai senyawa kimia dan air. Minyak atsiri dan
ekstraknya dapat melawan beberapa bakteri Gram positif dan Gram negatif.
Minyak atsiri daun sirih, bahan kimia yang utama adalah fenol dan alkohol.
Fenol merupakan bahan kimia yang paling antiseptik ditemukan dalam tanaman.
 13

Alkohol ini bersifat sangat antiseptik, antibakteri, anti jamur, antibiotik dan obat
yang baik untuk sistem saraf dan merangsang respon imun tubuh. 36,33
2.5 Kerangka Pemikiran
Perkembangan zaman yang semakin modern seperti sekarang ini, pemakaian
dan pendayagunaan obat tradisional di Indonesia masih di gunakan oleh
masyarakat. Obat- obatan tradisional masih digunakan masyarakat sebagai salah
satu alternatif pengobatan. Tanaman sirih merah memiliki banyak potensi untuk
mengobati berbagai penyakit. Berdasarkan kandungan senyawa kimia dari sirih
merah seperti alkaloid, flavonoid, tanin, dan minyak atsiri tanaman ini diduga dapat
berpotensi sebagai daya antimikroba. 36, 45
Flavanoid bertindak sebagai antibakteri dengan membentuk senyawa kompleks
terhadap protein ekstraseluler yang akan mengganggu integritas dinding sel bakteri.
Alkaloid mempunyai aktivitas antimikroba dengan mengganggu komponen
40,46
peptidoglikan pada sel bakteri yang dapat menyebabkan kematian bakteri.
Tanin memiliki aktivitas antibakteri dengan cara melisiskan dinding sel oleh
senyawa saponin dan flavonoid,sehingga senyawa tanin dapat mudah masuk ke
dalam sel bakteri sehingga mengkoagulasi protoplasma sel bakteri.44 Minyak atsiri
dan ekstraknya dapat melawan beberapa bakteri Gram positif dan Gram negatif.36
Ekstrak daun sirih merah telah terbukti memiliki kemampuan dalam
menghambat bakteri plak patogen terhadap jaringan periodontal seperti
Aggregatibacter actinomycetemcommitans (Aa) dan Porphyromonas gingivalis
(Pg) pada konsentrasi 2,5%, 5%, dan 10% dengan semakin besar konsentrasi
ekstrak daun sirih merah, akan semakin besar efektivitasnya dalam menghambat
pertumbuhan bakteri.14 Streptococcus sanguinis merupakan bakteri yang berperan
sebagai pionir dalam kolonisasi bakteri pada proses pembentukan plak.2 Plak gigi
merupakan lapisan bening, lunak dan tipis yang melekat erat pada permukaan gigi
yang terdiri dari mikroorganisme.1,2 Keberadaan plak tersebut menjadi faktor
penyebab yang berkaitan dengan timbulnya karies gigi maupun penyakit
periodontal.1
 14

Ekstrak daun
sirih merah
(Piper crocatum)

Kontrol plak secara kimiawi alami

Alkaloid Flavonoid Tanin Minyak atsiri

melisiskan dan mengganggu mengkerutkan mengganggu

mengganggu integritas dinding sel proses
komponen penyusun membran sel bakteri terbentuknya
peptidoglikan pada bakteri dinding sel
sel bakteri bakteri

Pertumbuhan bakteri terhambat Bakteri pionir

(Streptococcus sanguinis) pembentukan plak

Pembentukan plak terhambat

Gambar 2.3 Kerangka pemikiran

2.6 Premis
Premis 1 : Plak gigi merupakan lapisan bening, lunak dan tipis yang melekat
erat pada permukaan gigi yang terdiri dari mikroorganisme.2,5

Premis 2 : Streptococcus sanguinis merupakan bakteri pionir yang berperan

dalam pembentukan plak.2

Premis 3 : Sirih merah memiliki aktivitas antibakteri dan berpotensi sebagai

bahan kontrol plak kimiawi alami.9

Premis 4 : Kandungan senyawa aktif seperti flavonoid, alkaloid, tanin, dan

minyak atsiri dalam daun sirih mampu menghambat pertumbuhan
 15

bakteri dengan cara mengganggu serta menghancurkan integritas

sel bakteri.12

Premis 5 : Semakin besar konsentrasi ekstrak daun sirih merah, semakin besar
efektivitasnya dalam menghambat pertumbuhan bakteri.14

2.7 Hipotesis
Berdasarkan kerangka pemikiran dan premis-premis di atas, maka didapatkan
hipotesis sebagai berikut:
1. Ekstrak daun sirih merah memiliki efektivitas dalam menghambat
pertumbuhan Streptococcus sanguinis (premis 1, 2, 3, 4).
2. Ekstrak daun sirih merah dengan konsentrasi 100% memiliki daya hambat atau
aktivitas antibakteri paling besar terhadap pertumbuhan Streptococcus
sanguinis (premis 5)
 BAB III
METODE PENELITIAN

3.1 Rancangan Penelitian

Jenis penelitian ini adalah eksperimental murni dengan rancangan penelitian
yaitu Post Test Only Control Group Design secara in vitro. Penelitian akan
dilakukan dengan metode difusi agar, untuk mengetahui efektivitas ekstrak daun
sirih merah (Piper crocatum) dalam menghambat pertumbuhan bakteri
Streptococcus sanguinis.

3.2 Objek Penelitian

Objek yang digunakan pada penelitian ini adalah bakteri Streptococcus
sanguinis yang sudah bersertifikat (ATCC 10556) dan didapatkan dari isolat murni
serta telah diidentifikasi secara mikroskopis di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas
Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani.
3.2.1 Kriteria Inklusi dan Ekslusi
1. Kriteria Inklusi : Koloni bakteri Streptococcus sanguinis murni yang
tumbuh pada media lempeng agar.

2. Kriteria Eksklusi : Koloni bakteri Streptococcus sanguinis yang tumbuh

pada media lempeng agar disertai dengan kontaminan
bakteri lain.

3.3 Jumlah Sampel

Penentuan jumlah sampel pada penelitian ini dilakukan dengan menggunakan
perhitungan rumus Federer :
(n – 1) (t – 1) ≥ 15
Keterangan :
n = Jumlah ulangan tiap perlakuan
t = Jumlah kelompok perlakuan

16
 17

Kelompok dalam penelitian ini dibagi menjadi 5 kelompok perlakuan yaitu:

1. Kelompok kontrol negatif : kelompok yang hanya diberi perlakuan dengan
DMSO (Dimethyl sulfoxide).
2. Kelompok perlakuan dengan ekstrak sirih merah dengan konsentrasi 25% (P1)
3. Kelompok perlakuan dengan ekstrak sirih merah dengan konsentrasi 50% (P2)
4. Kelompok perlakuan dengan ekstrak sirih merah dengan konsentrasi 75% (P3)
5. Kelompok perlakuan dengan ekstrak sirih merah dengan konsentrasi 100% (P4)
Sehingga :
(n – 1) (t – 1) ≥ 15
(n – 1) (5 – 1) ≥ 15
(n – 1) (4) ≥ 15
(4n – 4) ≥ 15
4n ≥ 19
n ≥ 4,75 ~ 5

Berdasarkan perhitungan dari rumus tersebut, didapatkan jumlah pengulangan

yang dibutuhkan adalah sebanyak 5 pengulangan dari setiap kelompok perlakuan.

3.4 Variabel Penelitian

Penelitian ini terdiri dari dua kelompok variable yang akan digunakan, yaitu:
1. Variabel independen (bebas) : Ekstrak daun sirih merah
2. Variabel dependen (terikat) : Pertumbuhan Streptococcus sanguinis

3.5 Definisi Operasional

Definisi operasional yang dibutuhkan untuk mempermudah prosedur penelitian
ini dilihat pada tabel 3.1
 18

Tabel 3. 1 Definisi Operasional

Hasil Skala
No Variabel Definisi Operasional Alat Ukur
Ukur Ukur
1. Ekstrak daun Daun sirih merah yang Mikropipet ml Numerik
sirih merah diekstraksi
(Piper menggunakan metode
crocatum) maserasi dengan pelarut
etanol 96% dan dibuat
dengan konsentrasi
25%, 50%, 75% dan
100%
2. Pertumbuhan Kondisi tumbuh dan Jangka mm Numerik
Streptococcu berkembangnya bakteri sorong
s sanguinis Streptococcus sanguinis
(suatu bakteri Gram
positif berbentuk kokus)
pada media agar.
Apabila ekstrak daun
sirih merah dapat efektif
menghambat
pertumbuhan bakteri,
akan ditandai adanya
daerah zona bening di
sekitar paper disk

3.6 Alat dan Bahan Penelitian

3.6.1 Alat Penelitian
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah autoklaf, rotary evaporator,
oven, spektrofotometer untuk uji McFarland, inkubator, cawan petri (beserta tutup),
tabung reaksi, rak tabung reaksi, gelas ukur, beaker glass mikroskop cahaya,
micropipette, pipet media, bunsen (spirtus), korek api, jangka sorong, paper disk,
batang pengaduk, timbangan analitik, spatula, plastic wrap, vortex, ose bulat, kaca
objek, pinset, stiker label, masker, sarung tangan, alat tulis (spidol), pensil kaca,
kertas saring, bibulous paper, tempat sampah,dan tisu.
 19

3.6.2 Bahan Penelitian

Bahan yang digunakan adalah ekstrak daun sirih merah dengan konsentrasi 25%,
50%, dan 75%, bakteri Streptococcus sanguinis ATCC 10556, media lempeng agar
darah, media Mueller Hinton Agar (MHA), aquades, NaCl fisiologis 0,9%, karbol
gentian violet, gram’s iodine, safranin, alkohol 70%, alkohol 95%, Etanol 96%,
minyak emersi dan DMSO (Dimethyl sulfoxide).

3.7 Prosedur Penelitian

3.7.1 Persiapan Bahan dan Pembuatan Ekstrak Daun Sirih Merah
Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan bahan daun sirih merah yang
sudah cukup tua atau matur dengan warna daun berwarna hijau tua dan warna merah
hati yang cerah. Kemudian dilakukan determinasi tumbuhan untuk mencocokkan
ciri-ciri morfologi yang ada pada tanaman sirih merah dan dibuktikan. Setelah
dideterminasi, daun sirih merah dibuatkan menjadi ekstrak daun sirih merah.
Prosedur pembuatan ekstrak, dilakukan pembuatan simplisia terlebih
dahulu, setelah daun sirih merah terkumpul lalu dilakukan pembersihan daun sirih
merah (Piper crocatum) menggunakan air bersih yang mengalir. Kemudian daun
sirih merah dikeringkan dengan oven bersuhu 50oC hingga kering. Setelah menjadi
simplisia kering (penetapan kadar air simplisia), daun sirih merah dihaluskan
dengan menggunakan mesin penggiling hingga menjadi simplisia serbuk yang
halus, lalu disimpan pada wadah yang bersih dan tertutup rapat, sehingga tidak
mudah mengalami kelembaban. Pada pembuatan ekstrak daun sirih merah, serbuk
simplisia dimaserasi dengan pelarut etanol 96%, sehingga simplisia dapat terendam
seluruhnya selama 24 jam dan disertai pengadukan. Setelah 24 jam, ekstrak disaring
menggunakan kertas saring dan ampasnya diperas. Tambahkan pelarut pada ampas,
kemudian diaduk dan disaring kembali hingga hasil akhir dari maserasi diperoleh
suatu ekstrak encer. Ekstrak encer diuapkan dengan alat penguap rotary evaporator
sampai menjadi kental, kemudian dilanjutkan pemanasan dengan menggunakan
oven bersuhu antara 40oC-50oC. Hasil akhir dari proses ini, diperoleh ekstrak pekat
daun sirih merah, lalu dilakukan penimbangan.12,47
 20

Penelitian ini membutuhkan konsentrasi ekstrak daun sirih merah yaitu 25%,
50%, 75% dan 100%. Penentuan konsentrasi ekstrak dilakukan dengan cara
menimbang ekstrak daun sirih merah yang telah dibuat sesuai dengan masing-
masing konsentrasi yaitu 2,5g, 5g, 7,5g dan 10 g, lalu ditambahkan 10 mL larutan
DMSO.
3.7.2 Sterilisasi Alat dan Bahan
Sebelum melakukan penelitian, alat-alat dan bahan yang digunakan harus
disterilisasikan terlebih dahulu menggunakan autoklaf untuk mencegah
kontaminasi pada saat penelitian. Proses sterilisasi dilakukan pada suhu 121ºC
selama 15 menit.48
3.7.3 Prosedur Peremajaan Bakteri Streptococcus sanguinis
Media agar darah digunakan sebagai proses meremajakan bakteri Streptococcus
mutans dengan menggunakan metode streak, kemudian bakteri disimpan dan
dilakukan inkubasi selama 24 jam pada suhu 35ºC.48
3.7.4 Prosedur Reidentifikasi Bakteri
Prosedur reidentifikasi bakteri dalam penelitian ini dilakukan untuk memastikan
bahwa bakteri uji yang akan digunakan merupakan bakteri Streptococcus sanguinis.
Pengamatan reidentifikasi koloni bakteri dilakukan secara mikroskopis setelah
dilakukan pewarnaan gram. Prosedur reidentifikasi bakteri Streptococcus
sanguinis, yaitu :48,49
1. Kaca objek dibersihkan dengan kapas yang telah diberi alkohol 70% lalu
diberi label. Kaca objek dibersihkan dari lemak dengan memanaskannya di
atas api spirtus dan lakukan juga pada ose bulat. Beri tanda lingkaran yang
dibuat pada kaca objek menggunakan pensil kaca untuk menandai tempat
olesan bakteri.
2. Satu tetes NaCl dan bakteri uji (Streptococcus sanguinis) diambil
menggunakan ose yang telah dipanaskan di atas api/bunsen sebelumnya,
kemudian dioleskan pada kaca objek yang sudah ditandai.
3. Preparat dikeringkan dan bakteri difiksasi di atas api spirtus selama 1 detik
sebanyak 3 kali.
4. Pewarnaan gram dilakukan apabila preparat sudah kering.
 21

5. Larutan karbol gentian violet dituangkan ke atas preparat selama satu menit,
kemudian dibuang dan dibersihkan dengan air mengalir.
6. Larutan Gram’s iodine dituangkan pada preparat selama satu menit,
kemudian dibuang dan dibersihkan dengan air mengalir.
7. Alkohol 95% diaplikasikan tetes demi tetes secara mengalir, kemudian
dibilas dengan air mengalir.
8. Larutan safranin dituangkan pada preparat selama 45 detik, kemudian
dibersihkan dengan air mengalir. Preparat dikeringkan menggunakan kertas
saring atau bibulous paper.
9. Perparat yang telah dilakukan pewarnaan gram diamati dengan
menggunakan mikroskop, dengan hasil yang didapatkan berupa gambaran
coccus, berwarna ungu yang membuktikan bahwa bakteri Streptococcus
sanguinis merupakan bakteri Gram positif.
3.7.5 Pembuatan Suspensi
Proses pembuatan suspensi diawali dengan pengambilan bakteri Streptococcus
sanguinis yang sudah dilakukan peremajaan pada media agar darah yang diambil
sebanyak 1-2 ose dan disuspensikan ke dalam tabung yang berisi 5 mL NaCl 0,9%.
Kemudian dihomogenkan dengan vortex hingga mencapai kekeruhan sesuai
standar McFarland 0,5 (1,5 x 108 CFU/ml) menggunakan spektrofotometer.22
3.7.6 Pelaksanaan Uji Efektivitas Antibakteri Ekstrak Daun Sirih Merah
Pengujian efektivitas daya hambat antibakteri ekstrak daun sirih merah
dilakukan dengan metode difusi agar (Kirby-Bauer), menggunakan paper disc
diffusion pada media Mueller-Hinton Agar (MHA). Media agar yang telah dibuat,
dilakukan inokulasi suspensi bakteri Streptococcus sanguinis dengan metode streak
secara merata pada permukaan media dengan menggunakan ose steril. Setelah itu,
paper disk direndam ke dalam masing-masing konsentrasi ekstrak daun sirih merah
25%, 50%, 75%, 100% dan DMSO selama 15 menit. Kemudian paper disk tersebut
diletakkan di atas permukaan media agar menggunakan pinset dengan tekanan
ringan agar dapat menempel. Masing-masing cawan petri diberikan label nama
sesuai dengan perlakuan yang diberikan dan dibungkus menggunakan plastik wrap.
Setelah itu, diinkubasi pada suhu 35ºC selama 1 hari di dalam inkubator. Kemudian
 22

dilakukan pengamatan dan pengukuran dengan menggunakan jangka sorong dalam

satuan milimeter (mm) untuk mengetahui lebar daerah hambat dari masing-masing
paper disk terhadap pertumbuhan bakteri. Lebar daerah hambat tersebut diukur dari
diameter zona bening yang terbentuk disekeliling paper disk pada media agar.12,49
3.7.7 Alur Penelitian

Penentuan jumlah sampel

Persiapan alat dan bahan penelitian

Pembuatan ekstrak daun sirih Reidentifikasi dan pembiakan

merah (Piper crocatum) bakteri Streptococcus
sanguinis

Pelaksanaan uji daya hambat

dengan metode difusi agar

Ekstrak daun Ekstrak daun Ekstrak daun Ekstrak daun Kontrol (-)
sirih merah sirih merah sirih merah sirih merah DMSO
konsentrasi konsentrasi konsentrasi konsentrasi
25% 50% 75% 100 %

Pengamatan dan pengukuran zona daya hambat

Pengolahan dan analisis data

Hasil dan kesimpulan

Gambar 3. 1 Alur Penelitian

 23

3.8 Analisis Data

Analisis data pengukuran daya hambat ektrak daun sirih merah terhadap bakteri
pertumbuhan bakteri Streptococcus sanguinis dilakukan dengan uji statistik
menggunakan software statistik untuk windows seperti SPSS. Pengolahan data
terlebih dahulu dilakukan uji normalitas dengan menggunakan uji Saphiro-wilk
untuk mengetahui apakah data penelitian yang diperoleh terdistribusi normal atau
tidak. Jika data berdistribusi normal, dilakukan uji One Way ANOVA untuk
mengetahui apakah perlakuan yang diberikan menunjukkan pengaruh yang nyata
atau tidak. Namun, jika data berdistribusi tidak normal, dilakukan uji Kruskall-
Wallis. Selanjutnya dilakukan analisis Post Hoc T-test untuk mengetahui
konsentrasi perlakuan yang terbaik. Apabila tidak terdapat daya hambat,
pengolahan data dari hasil penelitian dilakukan secara deskriptif.

3.9 Tempat dan Waktu Penelitian

Tempat penelitian dilakukan di Laboratorium Determinasi Tumbuhan Pusat
Penelitian Biologi Bidang Botani (LIPI) Cibinong untuk mengidentifikasi tanaman
sirih merah, Laboratorium Riset dan Inovasi Institut Teknologi Bandung untuk
membuat ekstrak daun sirih merah, dan Laboratorium Mikrobiologi Fakultas
Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani Cimahi untuk pengujian efektivitas
ekstrak daun sirih merah dalam menghambat pertumbuhan Streptococcus sanguinis
dengan waktu dari bulan November 2020 hingga Januari 2021.
 24

3.10 Jadwal Penelitian

Tabel 3. 2 Jadwal Penelitian

Bulan/Tahun
Kegiatan
11/20 12/20 1/21 2/21 3/21
Determinasi tanaman

Pembuatan ekstrak daun sirih

merah

Persiapan alat dan bahan

Sterilisasi alat yang akan

digunakan

Pelaksanaan penelitian

- Reidentifikasi bakteri
Streptococcus sanguinis
- Peremajaan atau
penanaman bakteri
Streptococcus sanguinis
pada media agar
- Pembuatan suspensi bakteri
Streptococcus sanguinis
- Pembuatan konsentrasi
ekstrak
- Pelaksanaan uji efektivitas
antibakteri ekstrak daun
sirih merah
Pengolahan dan Analisis Data

Penyusunan laporan
 26

DAFTAR PUSTAKA

1. Zhu B, Macleod LC, Kitten T, Xu P. Streptococcus sanguinis biofilm formation

& interaction with oral pathogens. Future Microbiol. 2018;13(8):915–32.

2. Zakki M. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Cathechin Teh Putih Terhadap

Streptococcus Sanguinis. ODONTO Dent J. 2017;4(2):108.

3. Samaranayake L. Essential Microbiology for Dentistry fourth edition,. 2012.

4. Menon L, Ramamurthy J. New Vistas in Plaque Control. IOSR J Dent Med

Sci. 2014;13(3):64–8.

5. Fatimah S, Adhani R. Perbandingan skor indeks plak sebelum dan sesudah

berkumur dengan air rebusan daun sirih ( Piper betle L ) pada ibu hamil
tinjauan pada ibu hamil di Puskesmas Sungai Jingah kota Banjarmasin. J
Kedokt Gigi Dentino. 2017;I(1):91.

6. Pyrus A, Plak P. Pengaruh pasta gigi dengan kandungan buah program

pendidikan sarjana kedokteran universitas di Ponegoro tahun 2011. 2011;

7. Ahmad I. pemanfaatan limbah cangkang kerang darah (Anadara granosa)

sebagai bahan abrasif dalam pasta gigi. J Galung Trop. 2017;6(1):49–59.

8. Pratiwi R. Perbedaan daya hambat terhadap Streptococcus mutans dari

beberapa pasta gigi yang mengandung herbal. Dent J (Majalah Kedokt Gigi).
2005;38(2):64–7.

9. Warongan MSJ, Anindita PS, Mintjelungan CN. Perbedaan indeks plak

penggunaan obat kumur beralkohol dan non alkohol pada pengguna alat
ortodontik cekat. e-GIGI. 2015;3(2).

10. Afiff F., Amilah S. Efektivitas ekstrak daun mengkudu (Morinda citrifolia L.)
dan daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) terhadap zona hambat
pertumbuhan Staphylococcus aureus. Stigma J Mat dan Ilmu Pengetah Alam
Unipa. 2017;10(01):12–6.

11. Juliantina Rachmawaty F, Mahardika Akhmad M, Hikmah Pranacipta S,

Nabila Z, Muhammad A. Optimasi ekstrak etanol daun sirih merah (Piper
Crocatum) sebagai antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus Aureus.
Mutiara Med J Kedokt dan Kesehat. 2018;18(1):13–9.

12. Moerfiah, Supomo FDS. Pengaruh ekstrak daun sirih merah (Piper cf. fragile
Benth.) terhadap bakteri penyebab sakit gigi. Ekologia. 2011;11(1):30–5.
 27

13. Pasril Y, Yuliasanti A, Umy GF. Daya antibakteri ekstrak daun sirih merah (
Piper crocatum ) terhadap bakteri Enterococcus faecalis sebagai bahan
medikamen saluran akar dengan metode dilusi anti-bacterial power of red batel
leaves ( Piper crocatum ) to Enterococcus faecalis bacteria as. Idj.
2014;3(1):88–95.

14. Herryawan H, Sabirin IPR. The effectiveness of red betel leaf (Piper crocatum)
extract against periodontal pathogens. Bali Med J. 2018;7(3):732–5.

15. Yulianti, SS. Efektivitas ekstrak daun sirih merah ( Piper crocatum ) dalam
menghambat pertumbuhan Streptococcus sanguinis. 2020. p. 32–3.

16. Puspita PJ, Safithri M, Sugiharti NP. Antibacterial Activities of Sirih Merah
(Piper crocatum) Leaf Extracts. Curr Biochem. 2019;5(3):1–10.

17. Pujiastuti P, Lestari S, Fakultas P, Gigi K, Jember U, Konservasi B, et al.

Perbedaan Efektifitas Antibakteri Ekstrak Daun Sirih Merah (Piper crocatum)
pada Porphyromonas gingivalis dan Streptococcus viridans. JKG Unej.
2015;12(1):1–4.

18. Ladytama RS, Nurhapsari A, Baehaqi M. Efektivitas larutan ekstrak jeruk nipis
(Citrus aurantifolia) sebagai obat kumur kumur terhadap penurunan indeks
plak pada remaja usia 12-15 tahum - Studi di SMP Nurul Islami, Mijen,
Semarang. Odonto Dent J. 2014;1(1):39.

19. Ekoningtyas EA, Triwiyatini, Nisa F. Potensi kandungan kimiawi dari ubi jalar
ungu (Ipomoea batatas L) sebagai bahan identifikasi keberadaan plak pada
permukaan gigi. J Kesehat Gigi. 2016;03(1):1–6.

20. Ion, I.R. viorica C. Dental Plaque – Classification , Formation ,. Int J Med
Dent. 2013;17:139–43.

21. Goyena R, Fallis A. Newman and carranza’s clinical periodontologi. Vol. 53,
Journal of chemical information and modeling. 2019. 119–126 p.

22. Dan I, Sensitivitas UJI, Pada B, Gigi P. Identifikasi dan uji sensitivitas bakteri
pada plak gigi pasien di Puskesmas Ranotana Weru Manado terhadap
antibiotik golongan penisilin dan kuinolon. Pharmacon. 2017;6(3):37–45.

23. Vasudevan R. Dental Plaques: Microbial Community of the Oral Cavity. J

Microbiol Exp. 2017;4(1):1–9.

24. Senjaya AA. Buah Dapat Menyebabkan Gigi Karies. J Ilmu Gizi.
2014;5(1):15–21.

25. Agung JT. The effect of leaf extract salam ( Eugenia polyantha Wight ) on the
 28

dental plaque formation pengaruh berkumur ekstrak daun salam ( Eugenia

polyantha Wight ) terhadap pembentukan plak gigi. Irmanita Wiradona Erni
Mardiati Sariyem Jurusan Keperawatan Gigi Po. 2015;4(2):768–72.

26. Putri MH, Herijulianti E NN. Deposit yang melekat pada permukaan gigi. Ilmu
Pencegah penyakit Jar keras dan Jar pendukung gigi. 2010;56–7.

27. Rambe S. Perbandingan tindakan menjaga kebersihan rongga mulut dan status
oral hygiene pada anak usia sekolah dasar di daerah perkotaan dan pedesaan. J
Syiah Kuala Dent Soc. 2016;1(2):143–6.

28. Megananda Hiraya Putri MK, Isminarti DS, Ptd DHC, Abral D, Jane Maramis
S, Nurjanah.M.Kes DN, et al. Buku ajar preventive dentistry. forum
komunikasi jurusan kesehatan gigi politeknik kesehatan -depkes RI. 2008. 1–
139 p.

29. Sanjaya AA. Menyikat gigi tindakan utama untuk kesehatan gigi. J Skala
Husada. 2013;10(2):194–9.

30. Sinaredi BR, Pradopo S, Wibowo TB. Daya antibakteri obat kumur
chlorhexidine, povidone iodine, fluoride suplementasi zinc terhadap,
Streptococcus mutans dan Porphyromonas gingivalis (Antibacterial effect of
mouth washes containing chlorhexidine, povidone iodine, fluoride plus zinc on
Strep. Dent J (Majalah Kedokt Gigi). 2014;47(4):211.

31. Ristianti N, Kusnanta JW, Marsono. Perbedaan efektivitas obat kumur herbal
dan non herbal terhadap akumulasi plak di dalam rongga mulut. 2015;2:31–6.

32. Pertiwi FC, Erlita I. Comparison of inhibitory activity of kelakai leaf ekstrak
and 0.2% Chlorhexid gluconate against Streptococcus sanguinis.
2019;IV(2):145–50.

33. Diniasti M, Zakki M. Antibacterial effect of white pomegranate peel extract

(Punica granatum L) againts Streptococcus sanguinis. J Chem Inf Model.
2019;53(9):1689–99.

34. Suwandi T. Pengembangan potensi antibakteri kelopak bunga Hibiscus

sabdariffa L. (rosela) terhadap Streptococcus sanguinis penginduksi gingivitis
menuju obat herbal terstandar. 2012;40–257.

35. Xu P, Alves JM, Kitten T, Brown A, Chen Z, Ozaki LS, et al. Genome of the
opportunistic pathogen Streptococcus sanguinis. J bacteriol.
2007;189(8):3166–75.

36. Candrasari A, Romas MA, Astuti OR. Uji daya antimikroba ekstrak etanol
daun sirih merah (Piper Crocatum Ruiz & Pav.) terhadap pertumbuhan
 29

Staphylococcus aureus ATCC 6538, Eschericia coli ATCC 11229 DAN

Candida albicans ATCC 10231 secara in vitro. Biomedika. 2011;5(1):9–16.

37. Widiyastuti Y, Haryanti S, Subositi D. Karakterisasi morfologi dan kandungan

minyak Atsiri beberapa jenis sirih (Piper sp.) Yuli. 2016;(April):20–1.

38. Astuti IP, Munawaroh E. Karakteristik morfologi daun sirih merah: Piper
crocatum Ruitz & Pav dan Piper porphyrophyllum N.E.Br. Koleksi Kebun
Raya Bogor. Berk Penel Hayati Ed Khusus. 2011;7A:83–5.

39. Hellaliaghdam H, Mohammadzadeh H, Hemmingsson T, Melin B, Allebeck P,

Lundberg I, et al. Identifikasi dan uji aktivitas antibakteri minyak atsiri daun
sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav.) Magelang. Intelligence.
2010;7(2):1–10.

40. Juliantina F. Manfaat sirih merah (Piper crocatum) sebagai agen anti bakterial
terhadap bakteri gram posotif dan gram negatif.

41. Sarjani TM, Mawardi M, Pandia ES, Wulandari D. Identifikasi morfologi dan
anatomi tipe stomata famili Piperaceae di kota Langsa. J IPA Pembelajaran
IPA. 2017;1(2):182–91.

42. Pratiwi I, Suswati I. Efek ekstrak daun sirih merah ( Piper Crocatum Ruiz &
Pav ). 2012;8(1):1–5.

43. Veransa BM, Hadidjah D, Rusminah N. Effectivity of pipper crocatum leaf

solution on plaque. Padjadjaran J Dent. 2018;27(2):129–32.

44. Majidah D, Fatmawati DWA, Gunadi A, Gigi K, Jember U, Gigi FK, et al.
Daya antibakteri ekstrak daun seledri ( Apium graveolens L .) terhadap
pertumbuhan Streptococcus mutans sebagai alternatif obat kumur (
Antibacterial activity of celery leaves extract [ Apium graveolens L . ] against
Streptococcus mutans as an alternative. 2014;

45. Puspita J, Safithri M, Sugiharti N. Antibacterial activities of sirih merah ( Piper

crocatum ) leaf extracts. 2018;5(3):1–10.

46. Veransa BM, Hadidjah D, Rusminah N. Effectivity of Pipper crocatum leaf

solution on plaque. Padjadjaran J Dent. 2018;27(2):1–5.

47. Kusuma EW, Andriani D. Karakterisasi ekstrak daun sirih merah (Piper
crocatum, Ruiz&Pav) sebagai obat antidiabetes menuju obat herbal terstandar.
J Kesehat Kusuma Husada. 2019;0017(0):71–6.

48. Zulfa, E., Rizqi, P.R dan Andriani RS. Aktivitas antibakteri daun suji (
Pleomele angustifolia N . E Brown ) pada bakteri Streptococcus mutans. J Ilm
 30

Cendekia Eksakta. 2018;15–8.

49. JG C, N S. Microbiology: a Laboratory Manual 11th ed. New York: Pearson

Education.; 2014.