Biomedicine & Pharmacotherapy 127 (2020) 110189

Contents lists available at ScienceDirect

Biomedicine & Pharmacotherapy

journal homepage: www.elsevier.com/locate/biopha

Pemberian Bersama Ekstrak Hidroetanol Teucrium polium dan Gel Aloe

vera secara Topikal Memicu Penyembuhan Luka dengan Mempercepat
Proliferasi Sel pada Model Tikus Diabetes
Morteza Najaf zadeh Gharaboghaza, Mohammad Reza Farahpourb,*, Shahram Saghaiec
a Department of Basic Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, Urmia Branch, Islamic Azad University, Urmia, Iran
b Department of Clinical Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, Urmia Branch, Islamic Azad University, Urmia, 57159-44867, Iran
c Department of Pharmacology, Faculty of Veterinary Medicine, Urmia Branch, Islamic Azad University, Urmia, Iran

ABSTRAK

Luka diabetes merupakan masalah utama pada pasien diabetes. Tanaman obat Teucrium polium dan Aloe vera memiliki sifat
antioksidan dan anti inflamasi yang mungkin bermanfaat bagi penderita diabetes. Penelitian ini dilakukan untuk
mengevaluasi pengaruh pemberian bersama salep yang dibuat dari ekstrak hidroetanol Teucrium polium (TPEO) dan gel Aloe
vera (AVGO) terhadap penyembuhan luka bedah pada model tikus diabetes. Setelah diinduksi diabetes dan luka bedah
melingkar (7 mm), tikus dibagi menjadi enam kelompok, yaitu (I) tikus kontrol yang diberi mupirocin (sebagai obat standar),
(II dan III) tikus yang diberi perlakuan 5 dan 10% TPEO, (IV dan V) tikus yang diberi 5 dan 10% AVGO, dan (VI) tikus yang
diberi kombinasi 5% TPEO dan 5% AVGO (TPEO + AVGO). Untuk mengetahui luas luka, kami mengevaluasi lebih lanjut
rasio luas luka, analisis histologis dan kadar serum kapasitas antioksidan jaringan (TAC) dan malondialdehida (MDA), faktor
nekrosis tumor-α (TNF-α), dan interleukin-1β (IL -1β), pewarnaan imunohistokimia untuk faktor pertumbuhan endotel
vaskular (VEGF), faktor pertumbuhan mirip insulin (IGF-1), transporter glukosa-1 (GLUT-1) dan kolagen tipe 1, tingkat
ekspresi mRNA untuk VEGF, IGF-1, GLUT-1 dan faktor pertumbuhan fibroblas-2 (FGF-2). Hasil penelitian menunjukkan
bahwa pemberian salep terutama dalam bentuk kombinasi memperpendek fase inflamasi dan menurunkan kadar MDA
jaringan, TNF-α dan IL-1β dibandingkan dengan kelompok mupirocin (P <0,05). Selain itu, proliferasi fibroblas, deposisi
kolagen, VEGF, IGF-1, sel GLUT-1-positif dan kadar TAC, serta ekspresi VEGF, IGF-1, GLUT-1 dan FGF-2 meningkat secara
signifikan (P <0,05) pada TPEO dan AVGO, dan terutama pada tikus yang diberi perlakuan dengan bentuk campuran. Oleh
karena itu, pemberian TPEO + AVGO topikal mempercepat penyembuhan luka diabetes terbuka melalui memperpendek fase
inflamasi dan meningkatkan proliferasi sel dan deposisi kolagen.

Kata Kunci : Pengobatan luka diabetes, Teucrium polium Aloe vera, Glukosa transporter 1, Status Antioksidan

1. Pendahuluan
Sebagai kondisi berbahaya yang disebabkan oleh defisiensi insulin dan resistensi insulin autoimun, diabetes
menghambat penyembuhan luka dan meningkatkan sensitivitas pasien terhadap luka kronis yang tidak dapat disembuhkan
karena terjadinya hiperglikemia, insufisiensi vaskular, stres oksidatif dan infeksi mikroba [1,2]. Luka diabetik kronis
dikaitkan dengan status inflamasi yang persisten, peningkatan kadar sitokin pro-inflamasi dan kesalahan ekspresi faktor
pertumbuhan [1,3,4]. Penelitian telah menunjukkan bahwa makrofag menunjukkan fenotipe pro-inflamasi yang persisten
pada molekul pro-inflamasi tingkat tinggi seperti interleukin-1β (IL-1β) dan faktor nekrosis tumor-α (TNF-α) dalam
penyembuhan gangguan yang berhubungan dengan diabetes [4-6]. Sitokin pro-inflamasi dapat diinduksi oleh hiperglikemia
yang meningkatkan stres oksidatif dan inflamasi dengan memproduksi spesies oksigen reaktif (ROS) dan TNF-α [7,8].
Diduga bahwa faktor pertumbuhan dapat memiliki peran integral dalam tahapan penyembuhan luka normal, dan
pemberiannya ke lokasi luka dapat bertindak sebagai katalisator penyembuhan [9]. Faktor pertumbuhan mempengaruhi
proses penyembuhan luka dengan efek penghambatan dan stimulasi pada lingkungan luka lokal. Faktor pertumbuhan
fibroblas (FGFs) meningkatkan proliferasi sel dan mengontrol migrasi dan diferensiasi sel asal mesodermal, ektodermal dan
endodermal [1]. Ini dikenal sebagai faktor mitogenik karena beberapa jenis sel seperti fibroblas dan keratinosit yang ada di

Abbreviations: AVGO, Aloe vera gel ointment; FGF, fibroblast growth factors; IGF-1, insulin-like growth factor; IL-1β, interleukin-1 beta; GLUT-1, glucose transporter-1; MDA, malondialdehyde; TAC, total antioxidant
capacity; TNF-α, tumor necrosis factor alpha; TPEO, Teucrium polium extract ointment; VEGF, vascular endothelial growth factor ⁎ Corresponding author. E-mail address: mrf78s@gmail.com (M.R. Farahpour).
https://doi.org/10.1016/j.biopha.2020.110189
Received 12 April 2019; Received in revised form 15 April 2020; Accepted 19 April 2020
0753-3322/ © 2020 Published by Elsevier Masson SAS. This is an open access article under the CC BY-NC-ND license (http://creativecommons.org/licenses/BY-NC-ND/4.0/).
 M.N.z. Gharaboghaz, et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 127 (2020) 110189

lokasi luka [10]. Melalui peningkatan pensinyalan AKT/PI3K (Phospatidylinositol 3-kinase), insulin meningkatkan ekspresi
faktor pertumbuhan endotel vaskular (VEGF) pada keratinosit dalam proses penyembuhan luka eksisi pada model tikus
[11]. Selama diabetes, hiperglikemia menghambat penyembuhan luka karena peningkatan stres oksidatif dan penurunan
ekspresi insulin seperti faktor pertumbuhan-1 (IGF-1) dan biosintesis [12]. IGF-1 memainkan peran penting dalam
penyembuhan luka yang dihasilkan oleh jaringan tertentu seperti fibroblas dermal dan makrofag [2,13,14]. IGF-1 memiliki
efek stimulan pada fibroblas/proliferasi keratinosit dan reepitelisasi [14,15]. Pengangkut glukosa (GLUT) memainkan peran
utama dalam mengangkut glukosa ke dalam berbagai jenis sel. Selain itu, insulin tidak hanya mengatur pengambilan
glukosa oleh GLUT-1, tetapi juga meningkatkan total level GLUT-1 dan ekspresinya dalam membran plasma sel basal di
kulit [16].
Obat sintetik telah umum digunakan untuk pengobatan luka diabetes, tetapi penggunaannya memiliki keterbatasan
yang besar. Tanaman obat dan bahan aktifnya telah digunakan sebagai agen yang aman untuk pengobatan luka pada kondisi
diabetes [1,2,17-19]. Teucrium polium L. dari famili Lamiaceae memiliki jumlah senyawa fenolik dan kandungan flavonoid
yang tinggi serta memiliki sifat antiinflamasi, antinosiseptif, antibakteri, antihipertensi, hipolipidemik, antirheumatoid,
penurun gula darah dan antioksidan [ 20–23]. Aloe vera (L.) Burm.f. termasuk dalam famili Xanthorrhoeaceae yang umumnya
dibudidayakan di daerah tropis. Memiliki efek antioksidan dan antiinflamasi, tanaman ini digunakan untuk menyembuhkan
berbagai jenis luka karena glikoprotein dan polisakarida yang ada di pulp dan ekstraknya [24-28]. Tampaknya, bentuk
campuran Teucrium polium dan A. vera dapat meningkatkan penyembuhan luka pada tikus diabetes. Oleh karena itu,
penelitian ini dilakukan untuk mengevaluasi efek salep yang dibuat dari ekstrak alkoholik T. polium dan gel A. vera
(pemberian tunggal dan bersama) terhadap penyembuhan luka pada model tikus diabetes tipe 2. Penelitian ini dilakukan
melalui penilaian kapasitas antioksidan jaringan, profil ekspresi mRNA dari gen yang terlibat dalam proliferasi sel,
transporter glukosa, sintesis kolagen dan reepitelisasi setelah cedera jaringan.

2. Material dan Metode

2.1 Preparasi gel A. vera dan ekstrak T. polium
Gel A. vera dibeli dari Barij Essence Company (Kashan-Iran; Batch number: 10121) yang dibuat dari daun Aloe vera.
Berdasarkan brosur tersebut, asam benzoat, asam p-toluat, asam p-kumarat, asam p-salisilat, asam protokatekuat dan
antrakuinon merupakan senyawa utama dalam gel. Ekstrak alkohol yang mengandung flavonoid jaranol dan isorhoifolin,
monoterpens, glikosida verbaskosida dan poliumosida serta asam amino, dibeli dari Barij Essence Company (Kashan-Iran;
Nomor batch: 13143). Standarisasi ekstrak Teucrium polium dilakukan berdasarkan kandungan flavonoid total menggunakan
aluminium klorida seperti penelitian sebelumnya [29]. Selain itu, standarisasi gel A. vera dilakukan sesuai dengan
kandungan glukomanan dengan uji kolorimetri dan spektrofotometer [30].

2.2 Hewan percobaan

Tikus BALB/c jantan dengan berat awal 28 ± 2 g dibeli dari Pasture Institute, Teheran, Iran. Tikus dikelompokkan dan
diet berdasarkan standar laboratorium. Penelitian ini dilakukan sesuai dengan Komite Penelitian Hewan Universitas Azad
Islam Urmia (No. 110235 IAUU).

2.3 Induksi diabetes

Untuk menginduksi diabetes, Streptozotocin (Sigma-Aldrich Chemie Gmbh Munich, Jerman) dilarutkan dalam buffer
sitrat steril (0,05 mol/L natrium sitrat, pH 4,5) dan intraperitoneal (55 mg/kg) diberikan selama empat hari [2,26]. Tikus-
tikus tersebut dipantau selama dua minggu dan tikus yang memiliki kadar glukosa lebih tinggi dari 400 mg/dl dianggap
sebagai penderita diabetes [2]. Glukosa darah diperiksa dengan Accu-Check Active glucometer (Roche, Lyon, Prancis).

2.4 Formulasi salep

Untuk membuat 5 dan 10% (b/b) salep ekstrak T. polium (TPEO), 5 g dan 10 g ekstrak kering T. polium dilarutkan dalam
3 mL alkohol dan masing-masing dicampur dengan 95 g dan 90 g eucerin sebagai salep dasar. Gel A. vera (AVGO) juga
dibuat dengan metode di atas.

2.5 Pembuatan dan pengelompokan luka

Setelah induksi diabetes, model luka bedah diinduksi seperti prosedur standar [2]. Mengikuti prosedur rutin
pembedahan termasuk anestesi umum 60 mg/kg Ketamine (Alfasan Belanda) dan 20 mg/kg Xylazine (Alfasan, Belanda),
luka melingkar dibuat di punggung tikus dengan lubang 5 mm. Tikus secara acak dibagi menjadi enam kelompok dari total
18 ekor, termasuk (I) kelompok kontrol yang diberi mupirocin (sebagai kontrol positif atau obat standar), (II dan III) tikus
yang diberi 5 dan 10% TPEO, (IV dan V) tikus yang diberi 5% dan 10% AVGO dan (VI) tikus yang diberi campuran 5% TPEO
dan 5% AVGO (TPEO+AVGO). Salep dioleskan setiap hari selama 14 hari dalam bentuk topikal. Area luka diukur dengan
kertas transparan di atas luka berdasarkan metode yang dijelaskan sebelumnya [2].
 M.N.z. Gharaboghaz, et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 127 (2020) 110189

(𝐴𝑟𝑒𝑎 𝑙𝑢𝑘𝑎 𝑝𝑎𝑑𝑎 ℎ𝑎𝑟𝑖 𝑘𝑒 𝑛𝑜𝑙−𝐴𝑟𝑒𝑎 𝑙𝑢𝑘𝑎 𝑝𝑎𝑑𝑎 ℎ𝑎𝑟𝑖 𝑋)

𝑃𝑟𝑒𝑠𝑒𝑛𝑡𝑎𝑠𝑒 𝑝𝑒𝑛𝑢𝑡𝑢𝑝𝑎𝑛 𝑙𝑢𝑘𝑎 = × 100%
𝐴𝑟𝑒𝑎 𝑙𝑢𝑘𝑎 𝑝𝑎𝑑𝑎 ℎ𝑎𝑟𝑖 𝑘𝑒 𝑛𝑜𝑙
𝑋 = 𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ ℎ𝑎𝑟𝑖

2.6 Analisis histologi

Analisis histologi dilakukan pada hari ke 3, 7 dan 14 pasca bedah. Tikus di setiap kelompok dibius dengan alat CO2
khusus dan sampel standar dipotong bersama dengan 1-2 mm dari kulit normal di sekitarnya. Spesimen kemudian difiksasi
dalam 10% formalin dengan buffer netral. Sampel jaringan diproses dengan ditambahkan lilin parafin, dipotong pada 5 μm,
diwarnai dengan trikrom Masson dan diperiksa dengan mikroskop cahaya (Olympus CX31RBSF). Tiga bagian paralel
diperoleh dari masing-masing spesimen. Evaluasi lebih lanjut adalah infiltrasi seluler, sel imun, fibroblas dan fibrosit/satu
mm2 jaringan. Ketebalan epitel diukur menggunakan lensa morfometri (Olympus, Jerman) dan dicatat dalam μm [2,31,32].

2.7 Pewarnaan imunohistokimia untuk GLUT-1, IGF-1 dan VEGF

Bagian jaringan awalnya dipanaskan pada 60°C selama 25 menit dalam oven udara panas (Venticell, MMM,
Einrichtungen, Jerman). Potongan-potongan jaringan dideparafinasi dalam xilena dan direhidrasi dengan gradien alkohol.
Proses pengambilan antigen dilakukan dalam buffer natrium sitrat 10 mM. Pewarnaan imunohistokimia dilakukan
berdasarkan protokol produsen (Biocare, USA). Singkatnya, peroksidase endogen diblok menggunakan larutan pemblokir
peroksidase (hidrogen peroksida 0,03% yang mengandung natrium azida) selama 5 menit. Bagian jaringan secara perlahan
dicuci dengan buffer pencuci dan kemudian diinkubasi dengan GLUT-1 (Abcam, USA, Cat: ab115730), IGF (SantaCruz, USA,
Cat: sc-74116), VEGF (Abcam, USA, Cat: ab69479) dan kolagen tipe 1 (Abcam, USA, Cat: ab34710) antibodi primer
terbiotinilasi (1: 500) selama 15 menit. Bagian-bagian tersebut dibilas perlahan-lahan, menggunakan penyangga pencucian,
dan ditempatkan di bak penyangga. Bagian jaringan ditempatkan di ruang yang dilembabkan dengan streptavidin-HRP
(streptavidin terkonjugasi ke peroksidase dalam larutan saline buffer fosfat yang mengandung agen antimikroba). Bagian
jaringan kemudian diinkubasi selama 15 menit. Bagian jaringan kemudian dibilas dengan buffer pencuci dan ditempatkan
dalam buffer bath. Kromogen DAB dimasukkan ke dalam bagian jaringan, diinkubasi selama 5 menit, dan dicuci lalu
diwarnai ulang menggunakan hematoksilin selama 5 detik. Potongan-potongan tersebut dicelupkan ke dalam amonia lemah
(0,037 M/L), dibilas dengan akuades, dan penutupnya dibuka. Pewarnaan imunohistokimia positif teramati sebagai noda
coklat dengan mikroskop cahaya [2].

2.8 Penilaian kapasitas antioksidan total (TAC) dan malindialdehyde (MDA)

Sejumlah jaringan luka (0,3-0,4 g) dihomogenisasi dalam KCl dingin (150 mM), kemudian disentrifugasi pada 3000×g
selama 10 menit. Supernatan digunakan untuk mengevaluasi TAC dan MDA, yang pertama dilakukan atas dasar
pengurangan daya dalam uji antioksidan besi. Untuk menentukan laju peroksidasi lipid, kandungan MDA dari sampel
jaringan kulit yang dikumpulkan diuji menggunakan reaksi asam thiobarbituric. Hasil TAC dan MDA disajikan sebagai
nmol per mg protein sampel. Kandungan protein sampel diukur dengan metode Lowry [33].

2.9 Uji ELISA untuk Penilaian Sitokin Pro-inflamasi (TNF-α dan IL-1β)
Untuk menilai IL-1β dan TNF-α, enam hewan dalam setiap kelompok dipilih secara acak dan diujikan pada hari ke 3
dan 7, sampel darah diambil 3 mL dari jantung dan disentrifugasi selama 12 menit pada 310×g sampai sampel serum
tercukupi. Uji ELISA diterapkan untuk mengevaluasi kadar IL-1β dan TNF-α dalam serum menggunakan kit ELISA yang
tersedia secara komersial seperti yang direkomendasikan oleh petunjuk produsen.

2.10 Analisis kuantitatif real-time PCR (Qrt-pcr)

Pada hari ke 3, 7 dan 14 setelah induksi luka, kira-kira 4 g jaringan luka diambil dari setiap hewan, dimasukkan ke dalam
tabung yang berisi larutan RNase (Qiagen, Jerman), dan segera dipindahkan ke laboratorium. Setelah homogenisasi, RNA
diekstraksi menggunakan metode Trizol (Roche, Jerman) seperti yang direkomendasikan oleh petunjuk pabrik [6]. RNA
yang diekstraksi disimpan pada suhu -70°C. Jumlah RNA ditentukan dalam spektrofotometer (260 nm dan 260/280 = 1,8-
2,0) dan sampel disimpan pada suhu -70°C. Untuk RT-PCR, cDNA disintesis sesuai dengan protokol pabrik (Fermentas,
GmbH, Jerman). Reaksi qRT-PCR dilakukan pada volume total 25 μL yang mengandung campuran induk PCR, primer maju
dan mundur (masing-masing 0,75 μL), dan cDNA (1 μL) dan air bebas nuklease (10 μL). Urutan primer adalah VEGF, maju
(5′-GCTCCGTAGTAGCCGTGGTCT-3′) dan mundur (5'-GGAACCCGGCGGGACACGGAC-3′); GLUT-1, maju (5′-
TCAACACGGCCTTCACTG-3′) dan mundur (5′-CACGATGCTCAGATAGGACATC-3′); IGF-1, maju (5′-
AAAGCAGCCCCGCTCTATCCT-3′) dan mundur (5′-CTTCTGAGTCTTGGGCATGTCA-3′) dan FGF-2, maju (5′-
GGAACCCGGCGGGACACGGAC-3′) dan mundur (5′-CCGCTGTGGCAGCTCTTGGGG-3′). Rata-rata nilai siklus ambang
PCR target rangkap tiga (CT) dinormalisasi melalui pengurangan nilai CT rata-rata GAPDH. Tingkat ekspresi relatif dari
mRNA yang tertarik dihitung dengan: 2-(Ct target – Ct GAPDH).

2.11 Analisis statistik

 M.N.z. Gharaboghaz, et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 127 (2020) 110189

Hasilnya dituliskan sebagai mean ± SD. Semua analisis dilakukan dengan menggunakan PASW versi 18.0. Asumsi model
dievaluasi dengan memeriksa plot sisa. ANOVA dua arah digunakan untuk menganalisis hasil. Tes Dunnett untuk
perbandingan berpasangan digunakan untuk mengevaluasi pengaruh waktu dan perawatan. Perbedaan dianggap
signifikan jika P <0,05.

2.12 Analisis sitometri gambar

Untuk menilai parameter histologis, 20 bagian dari setiap sampel (N=6 sampel dari setiap kelompok) dianalisis dalam 5
bidang mikroskopis acak di setiap bagian. Intensitas berbasis piksel untuk imunoreaktivitas VEGF, IGF-1, GLUT-1 dan
kolagen dianalisis dengan perangkat lunak Image-Pro Insight (versi 9,00) per 2500 × 2500 μm.

3. Hasil
3.1 Standarisasi ekstrak T. polium dan gel Aloe Vera
Kandungan flavonoid total ekstrak T. polium adalah 509 μg ekuivalen rutin per miligram ekstrak kering. Kandungan
glukomanan dalam gel A. vera diperoleh 6,75 µg/g gel.

3.2 Kontraksi luka

Hasil pada Gbr. 1 menunjukkan peningkatan yang signifikan (P<0,05) pada laju kontraksi luka di semua kelompok
perlakuan dibandingkan dengan kelompok mupirocin. Selain itu, ukuran luka berkurang secara signifikan pada semua
kelompok yang diobati, namun efisiensi terendah diamati pada kelompok TPEO 5% dan mupirocin. Perubahan paling
signifikan terjadi pada hari ke-7. Rata-rata luas luka pada kelompok mupirocin, TPEO 5%, AVGO 10% dan TPEO+AVGO
10%, 17,3, 18,3%, dan TPEO+AVGO 10% tidak jauh berbeda. Bentuk campuran (TPEO+AVGO) menunjukkan efisiensi
kontraksi luka yang lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok mupirocin pada hari ke 7 dan 14. Secara keseluruhan
pemberian TPEO+AVGO memiliki efek yang lebih baik untuk mengurangi luas luka.

Gbr. 1. Pengaruh TPEO dan AVGO pada area luka (mm2) pada hari yang berbeda. n = 6 hewan di setiap kelompok. Superskrip a-d menunjukkan
perbedaan yang signifikan (P<0,05) antara kelompok yang ditandai pada hari yang sama.
 M.N.z. Gharaboghaz, et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 127 (2020) 110189

3.3 Penilaian histologi

Data histomorfometri untuk distribusi sel inflamasi, fibroblas, dan fibrosit ditunjukkan pada Gambar. 2. Analisis
histologis menunjukkan bahwa pemberian TPEO dan AVGO menghasilkan penghentian respon inflamasi yang lebih cepat.
Selain itu, hewan yang menerima dosis campuran, menunjukkan penurunan infiltrasi sel inflamasi yang signifikan 7 hari
setelah induksi luka. Dengan demikian, hewan dalam kelompok penerima dosis campuran menunjukkan penurunan yang
signifikan dalam distribusi sel kekebalan per satu mm2 jaringan. Sebaliknya, bagian jaringan dari hewan dalam kelompok
mupirocin menunjukkan infiltrasi sel inflamasi intensif per satu mm2 jaringan (P<0,05). Analisis histologis menunjukkan
tidak ada reaksi inflamasi seperti infiltrasi neutrofil dan edema, yang menunjukkan peradangan yang terkontrol sepenuhnya
pada semua kelompok yang diobati, terutama kelompok yang diobati dengan dosis campuran pada hari ke-14 dari induksi
luka. Pemberian TPEO dan AVGO meningkatkan proliferasi fibroblas per satu mm2 jaringan granulasi, yang berkembang
pada hari ke 7 setelah induksi luka (P<0,05). Membandingkan semua kelompok eksperimen (pada hari ke 7 setelah luka),
peningkatan yang signifikan diamati pada distribusi fibroblas pada kelompok TPEO + AVGO dibandingkan dengan
kelompok perlakuan lain (P<0,05).
Untuk mengevaluasi biosintesis kolagen, jaringan ikat fibrosa, bagian jaringan diwarnai dengan pewarnaan Masson-
trichrome dan Fluorescent. Pengamatan menunjukkan bahwa semua agen mampu memperkuat biosintesis kolagen, situasi
yang lebih jelas dalam bentuk dosis campuran (TPEO+AVGO). Sejalan dengan temuan kami, bagian jaringan dari kelompok
dosis campuran TPEO+AVGO menunjukkan sintesis/keselarasan kolagen yang secara signifikan lebih tinggi/lebih baik
pada hari ke 7 setelah pembuatan luka (Gbr. 3 dan 4). Analisis mikroskopis ringan kami untuk reepitelisasi menunjukkan
bahwa pemberian topikal dosis campuran (TPEO+AVGO) meningkatkan reepitelisasi pada hari ke 7 setelah induksi luka.
Namun, mengenai kelompok mupirocin, situasi ini terjadi pada hari ke-14. Reepitelisasi lengkap dan pembentukan jaringan
ikat yang matang diamati di area dermis dan subkutan 14 hari setelah pembuatan luka pada kelompok yang diobati dengan
TPEO+AVGO (Gbr. 3).

Gbr. 2. Distribusi rata-rata sel imun (IMN) dan distribusi fibroblas/fibrosit dalam kelompok yang berbeda, semua data disajikan dalam Mean ±
SD. Superskrip a-d menunjukkan perbedaan yang signifikan (P<0,05) antara kelompok yang ditandai pada hari yang sama.
M.N.z. Gharaboghaz, et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 127 (2020) 110189

Gbr. 3. Pewarnaan Masson-trichrome; (A) mupirocin, (B) 5% TPEO, (C) 10% TPEO, (D) 5% AVGO, (E) 10% AVGO dan (F) TPEO+AVGO. Baris
pertama mewakili dermis pada hari ke 7 setelah induksi luka. Lihat peningkatan biosintesis kolagen pada kelompok pengobatan. Baris kedua
menunjukkan kematangan epidermal dan dermal pada hari ke-14 setelah induksi luka. Perhatikan reepitelisasi yang terbentuk dengan baik di
semua kelompok yang diobati, yang secara signifikan lebih baik pada kelompok yang diobati dengan TPEO+AVGO, 400× dan 600×.
M.N.z. Gharaboghaz, et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 127 (2020) 110189

Gbr. 4. Pewarnaan fluoresen untuk ikatan dan ikatan kolagen; (A) mupirocin, (B) 5% TPEO, (C) 10% TPEO, (D) 5% AVGO, (E) 10% AVGO dan
(F) TPEO+AVGO. Kumpulan kolagen yang disajikan dalam fluoresen merah dan ikatan kolagen ditandai dengan fluoresen hijau. Perhatikan
peningkatan biosintesis ikatan kolagen pada semua kelompok perlakuan, yang secara signifikan lebih tinggi pada kelompok perlakuan 5% TPEO
+ 5% AVGO, 800×. Analisis perangkat lunak untuk intensitas ikatan kolagen direpresentasikan dalam pola yang sama untuk (A) mupirocin, (B)
5% TPEO, (C) 10% TPEO, (D) 5% AVGO, (E) 10% AVGO dan (F) TPEO+AVGO. Lihat peningkatan intensitas pada kelompok perlakuan
dibandingkan dengan kelompok mupirocin. Penampang lintang dari perlakuan TPEO+AVGO menunjukkan intensitas kolagen yang lebih tinggi
secara signifikan dibandingkan kelompok uji dan mupirocin lainnya.

3.4 Analisis imunohistokimia GLUT-1, IGF, dan VEGF

Hewan yang diberi TPEO dan AVGO, terutama dalam bentuk campuran (TPEO+AVGO), menunjukkan GLUT-1 yang
lebih tinggi (Gbr. 5), sel IGF-1 dan VEGF-positif (Gbr. 6). Dengan demikian, bagian dari kelompok yang disebutkan di atas
menunjukkan peningkatan yang signifikan pada sel GLUT-1+, IGF-1+ dan VEGF+ dibandingkan dengan kelompok lain.
Selain itu, untuk meminimalkan masalah bios, analisis perangkat lunak dilakukan untuk protein yang ditargetkan.
Pengamatan menunjukkan peningkatan yang lebih signifikan berkaitan dengan reaksi positif kromogen (warna coklat
mewakili protein yang ditargetkan) pada 2500×2500 μm jaringan di TPEO dan kelompok yang diobati dengan AVGO
dibandingkan dengan kelompok lain.

Gbr. 5. (A) Pewarnaan imunohistokimia untuk GLUT-1; (B) analisis perangkat lunak untuk intensitas kromogen berbasis piksel (reaksi positif
untuk GLUT-1). Lihat ekspresi GLUT-1 yang meningkat pada kelompok perlakuan versus kelompok mupirocin.
 M.N.z. Gharaboghaz, et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 127 (2020) 110189

Gbr. 6. (A) Pewarnaan imunohistokimia untuk IGF; (B) analisis perangkat lunak untuk intensitas kromogen berbasis piksel (reaksi positif untuk
IGF); (C) pewarnaan imunohistokimia untuk VEGF dan (D) analisis perangkat lunak untuk intensitas kromogen berbasis piksel (reaksi positif
untuk IGF). Lihat peningkatan ekspresi IGF dan VEGF pada kelompok perlakuan versus kelompok mupirocin.

3.5 Status antioksidan

Analisis biokimia menunjukkan bahwa, dibandingkan dengan kelompok mupirocin, kadar TAC dalam jaringan
granulasi meningkat secara signifikan (P<0,05) pada semua kelompok perlakuan, terutama kelompok dosis campuran
TPEO+AVGO (Gbr. 7) pada hari ke 3 dan 7 setelah induksi luka. Penurunan yang signifikan diamati lebih lanjut pada tingkat
MDA dari semua kelompok yang diobati, terutama pada kelompok TPEO+AVGO (P<0,05).

Gbr. 7. Perubahan rata-rata tingkat TAC dan MDA pada kelompok eksperimen. Semua data disajikan dalam Mean ± SD. Superskrip a-d
menunjukkan perbedaan yang signifikan (P<0,05) antara kelompok yang ditandai pada hari yang sama.

3.6 Tingkat sitokin pro-inflamasi

Analisis serum kadar IL-1β dan TNF-α menunjukkan bahwa kadar sitokin proinflamasi keduanya secara signifikan
(P<0,05) berkurang pada kelompok yang diobati dengan TPEO dan AVGO, terutama kelompok dosis campuran
TPEO+AVGO, dibandingkan dengan kelompok mupirocin (P<0,05) (Gbr. 8). Perubahan terbanyak diamati pada kelompok
TPEO+AVGO pada hari ke 7, berubah sebesar 50% (10 menjadi 5 pg/mL dari hari ke 3–7 untuk IL-1β) dan sebesar 57%
untuk TNF-α (2,8 hingga 1,6 pg/mL dari hari ke 3–7 untuk IL-1β).
M.N.z. Gharaboghaz, et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 127 (2020) 110189

Gbr. 8. Kadar serum (A) IL-1 β dan (B) TNF-α pada kelompok eksperimen (pg/mL) pada hari yang berbeda. n = 6 hewan di setiap kelompok.
Superskrip a-c mewakili perbedaan yang signifikan (P<0,05) antara kelompok yang ditandai pada hari yang sama.

3.7 Penilaian molekuler

Analisis qRT-PCR untuk kadar mRNA dari FGF-2, VEGF, GLUT-1 dan IGF-1 diperiksa pada hari ke 3, 7 dan 14 setelah
pembuatan luka. Hasil penelitian menunjukkan bahwa TPEO dan AVGO secara terpisah dan dalam bentuk campuran
(TPEO+AVGO) secara signifikan (P<0,05) meningkatkan kadar mRNA FGF-2, VEGF, GLUT-1 dan IGF-1 dibandingkan
dengan kelompok mupirocin (Gbr.9). Situasi ini berkembang tergantung waktu dari hari ke 3-7 setelah induksi luka.
Membandingkan data antara kelompok yang berbeda, TPEO dan AVGO (tanpa perbedaan statistik antara konsentrasi yang
berbeda) dan yang lebih signifikan, dosis campuran (TPEO + AVGO) dari agen ini diamati meningkatkan ekspresi FGF-2,
VEGF, GLUT-1 dan IGF-1 (P>0.05) pada hari ke 7 setelah induksi luka. Pada hari ke-14 setelah luka, kadar mRNA dari FGF-
2 dan VEGF berkurang pada semua kelompok.

Gbr. 9. Perubahan lipatan rata-rata dari VEGF, FGF-2, GLUT-1 dan IGF-1 mRNA. Semua data disajikan dalam mean ± SD. A-d mewakili
perbedaan yang signifikan (P<0,05) antara kelompok yang ditandai pada hari yang sama.

4. Pembahasan
Diabetes mengurangi penyembuhan luka karena tidak hanya memperlambat distribusi fibroblas, perkembangan sel
epidermis, angiogenesis dan pematangan jaringan, tetapi juga mengurangi kontraksi luka dan reepitelisasi selama proses
penyembuhan [6]. Diabetes lebih lanjut memperpanjang fase inflamasi [14]. Memang, fase inflamasi meningkatkan
ekspresi/sintesis sitokin pro-inflamasi selama proses penyembuhan. Dengan demikian, ekspresi sitokin pro inflamasi
meningkat pada tikus diabetes dibandingkan tikus sehat selama penyembuhan luka, sehingga menunda proses
penyembuhan luka [34,35]. Selain itu, sitokin pro-inflamasi meningkat oleh hiperglikemia, yang selanjutnya menambah
M.N.z. Gharaboghaz, et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 127 (2020) 110189

tekanan oksidatif dan inflamasi [1,36,37]. Selain itu, penekanan sitokin pro-inflamasi menghambat kerusakan jaringan dan
memperpanjang inflamasi [6,34]. Di sisi lain, penelitian sebelumnya telah menunjukkan bahwa sitokin pro-inflamasi
mempercepat penyembuhan luka selama tahap awal [6,14]. Sesuai dengan temuan kami, ekspresi IL-1β yang diatur naik
pada tahap inflamasi meningkat selama proses penyembuhan [6,38]. Dalam penelitian ini, sitokin pro-inflamasi dari TNF-α
dan IL-1β berkurang pada kelompok campuran (TPEO+AVGO), yang menunjukkan sifat antiinflamasi dari TPEO dan
AVGO. Mempertimbangkan bahwa hubungan silang antara inflamasi dan status antioksidan jaringan, perubahan yang
disebutkan di atas (pengurangan IL-1β dan TNF-α) dapat terjadi berdasarkan sifat antioksidan yang diinduksi TPEO dan
AVGO. Berdasarkan hasil yang berkaitan dengan kadar TAC dan MDA, dapat disimpulkan bahwa status antioksidan
jaringan yang diperbaiki secara signifikan menekan reaksi inflamasi. Penelitian yang berbeda lebih jauh mengungkapkan
sifat antioksidan dari T. polium [23] dan A. vera [26-29]. Telah dibuktikan dengan baik bahwa ekstrak T. polium
mengandung rutin dan apigenin tingkat tinggi, keduanya dikenal sebagai antioksidan bersumber herbal yang efektif [39,40].
Di sisi lain, gel A. vera memiliki aktivitas antioksidan dan memperbaiki stres oksidatif pada model tikus diabetes [2,41,42].
Sejalan dengan hal tersebut, pasien diabetes menunjukkan peningkatan produksi ROS selama proses penyembuhan yang
dipicu oleh perkembangan hipoksia. Oleh karena itu, perpanjangan hipoksia dan penurunan kadar glukosa darah
meningkatkan gangguan mikrovaskuler, produksi ROS dan reaksi inflamasi di jaringan [43-45].
Selain itu, pasien diabetes biasanya dihadapkan pada tantangan yang terkait dengan sistem antioksidan [46]. Dalam hal
ini, produksi malondialdehida pada tingkat tinggi dengan cara yang bergantung pada ROS, berhubungan dengan
peningkatan produksi ROS yang meningkatkan stres oksidatif dan merusak jaringan seperti membran, DNA, protein, dan
lipid dan produksi sitokin inflamasi [36,47,48]. Mengingat peran kunci ROS dan efek destruktifnya, penggunaan agen
antioksidan yang mengurangi fase inflamasi [49,50] direkomendasikan untuk pencegahan kerusakan jaringan [45,46].
Tampaknya, senyawa antioksidan TPEO dan AVGO memiliki interaksi sinergis dan meningkatkan sifat antioksidan dan
antiinflamasi, yang secara signifikan lebih terlihat dalam bentuk campuran (TPEO+AVGO). Penurunan inflamasi jaringan
dimulai bersamaan dengan angiogenesis, proliferasi fibroblas dan reepitelisasi. Untuk menilai bagaimana TPEO dan AVGO
menginduksi sifat tersebut, tingkat mRNA dari gen GLUT-1, IGF-1, FGF-2 dan VEGF dianalisis. Dalam baris ini, telah
ditetapkan dengan baik bahwa GLUT-1 memainkan peran penting dalam kelangsungan hidup sel [2,14], oleh karena itu
hipotesis bahwa peningkatan ekspresi GLUT-1 dalam kelompok yang diobati dengan TPEO dan AVGO meningkatkan
proses penyembuhan [2,14,38,51]. Sesuai dengan GLUT-1 dan perannya dalam proses penyembuhan, insulin meningkatkan
pertumbuhan dan perkembangan berbagai jenis sel dan mempengaruhi migrasi, proliferasi dan sekresi dari fibroblas,
keratinosit dan sel endotel [14]. Namun, setiap penekanan sekresi insulin dan/atau pengurangan interaksi insulin di kulit
menunda proses penyembuhan luka. Kondisi diabetes mengubah ekspresi GLUT-1 dan memengaruhi kadar insulin. Oleh
karena itu, TPEO dan AVGO dapat meningkatkan sekresi insulin dan secara tidak langsung meningkatkan penyembuhan
melalui penguatan ekspresi GLUT-1. Meskipun mekanisme di mana campuran TPEO dan AVGO dapat meningkatkan
proses penyembuhan belum sepenuhnya dipahami, dapat dikatakan bahwa agen-agen ini mampu memberikan efek sinergis
bila diberikan secara bersamaan. Untuk lebih memahami peran insulin dalam proses penyembuhan luka, harus diberikan
pada fakta bahwa insulin berinteraksi dengan IGF-1, dan interaksi antara IGF-1 dan GLUT-1 menghasilkan transisi glukosa
ke dalam sel, sehingga meningkatkan proliferasi sel dan migrasi di area luka [14]. IGF-1 telah terbukti mempercepat proses
penyembuhan pada tikus tua [52], dan mendorong proliferasi dan migrasi keratinosit dan fibroblas di area luka [14,53].
Dalam penelitian ini, TPEO dan AVGO secara signifikan meningkatkan distribusi sel IGF-1 mRNA dan IGF-1 +
dibandingkan dengan mupirocin dan kelompok lain. Secara keseluruhan, dapat disimpulkan bahwa TPEO dan AVGO
(terutama dalam bentuk campuran) mempercepat proses penyembuhan melalui pengaturan ekspresi GLUT-1 dan IGF-1.
VEGF memainkan peran penting dalam pertumbuhan dan pola vaskular dan limfatik [29] serta berpartisipasi dalam
perbaikan jaringan melalui peningkatan permeabilitas vaskular, proliferasi dan migrasi sel endotel yang sudah ada
sebelumnya [31]. VEGF mempertahankan dan mengembangkan angiogenesis [1,34]. Analisis molekuler kami menunjukkan
bahwa pemberian topikal TPEO dan AVGO secara terpisah dan dalam bentuk campuran (TPEO+AVGO) secara signifikan
meningkatkan tingkat mRNA dan protein (diwakili oleh sel VEGF+) dari VEGF versus mupirocin dan kelompok lain.
Penelitian sebelumnya telah menunjukkan bahwa gel A. vera memiliki β-sitosterol dan acemannan, keduanya meningkatkan
angiogenesis [25-29]. Hasil saat ini dengan jelas menunjukkan bahwa TPEO dan AVGO sendiri dan dalam bentuk campuran
(TPEO+AVGO) mampu secara signifikan meningkatkan ekspresi VEGF pada kondisi luka diabetes.
Selain peran yang diinduksi IGF-1 dan VEGF dalam penyembuhan luka, FGF-2 diketahui berperan penting selama proses
penyembuhan. Faktanya, dalam kaitannya dengan aktivitas VEGF dan tirosin kinase, FGF mempromosikan jalur transduksi
dan mengatur proliferasi, migrasi dan diferensiasi sel endotel di area luka [34]. Ini juga mempercepat angiogenesis dan
reepitelisasi dalam fase proliferatif dari proses penyembuhan luka [54], maka kesimpulan bahwa TPEO dan AVGO dapat
meningkatkan proses penyembuhan dengan mengatur ekspresi FGF-2 yang serupa dengan parameter lain yang disebutkan
di atas.
Terlibat dalam biosintesis kolagen, elastin dan glikosaminoglikan, fibroblas adalah sumber seluler penting dalam
jaringan ikat. Perlu dicatat bahwa peningkatan jumlah fibroblas dan fibrosit/mm2 dari area luka menyebabkan biosintesis
dan deposisi kolagen secara signifikan lebih tinggi. Meskipun fibroblas diketahui memiliki sifat seperti itu, interaksi
fisiologisnya sangat dipengaruhi oleh radikal bebas. Misalnya, produksi ROS yang berlebihan secara signifikan
mempengaruhi populasi fibroblas [55,56]. Sejalan dengan masalah ini, penelitian sebelumnya telah menunjukkan bahwa
senyawa polifenol, terutama flavonoid, memiliki sifat antioksidan dan mempercepat proses penyembuhan luka dengan
 M.N.z. Gharaboghaz, et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 127 (2020) 110189

meningkatkan fibroblas untuk mengekspresikan dan memproduksi serat kolagen [32]. Gel A. vera terbukti dapat
meningkatkan proliferasi fibroblas, produksi kolagen, dan epitelisasi ulang pada model luka yang berbeda [25-29]. Lebih
lanjut dilaporkan bahwa karena senyawanya, aplikasi topikal Teucrium polium meningkatkan produksi kolagen pada
model hewan [57]. Pemberian TPEO dan AVGO secara topikal, terutama dalam bentuk campuran (TPEO+AVGO),
meningkatkan distribusi fibroblas, yang berarti bahwa status antioksidan yang diperkuat TPEO dan AVGO pada gilirannya
mampu mendukung dan mempertahankan fibroblas, menghasilkan sintesis kolagen yang tepat dan pengendapan pada
hewan yang diobati dengan TPEO dan AVGO. Berdasarkan hasil kami, kami percaya bahwa TPEO dan AVGO membantu
pengaruh lain karena adanya interaksi sinergis antara senyawa aktifnya.

5. Kesimpulan
Data kami menunjukkan bahwa kelompok yang diobati dengan TPEO dan AVGO mempercepat proliferasi dan
memperpendek tahap inflamasi dengan mengatur ekspresi GLUT-1, IGF-1, FGF-2 dan VEGF. Sebagai hasil utama penelitian
saat ini menunjukkan bahwa meskipun tingkat dosis TPEO dan AVGO yang berbeda dalam bentuk terpisah dapat
mempercepat proses penyembuhan pada model luka diabetes, tidak ada perbaikan yang signifikan secara klinis yang
diamati. Namun, pemberian TPEO dan AVGO secara campuran menyebabkan efek klinis yang lebih efektif.

Deklarasi Persaingan Minat

Penulis menyatakan bahwa tidak ada konflik kepentingan.

Ucapan Terima Kasih

Penulis mengucapkan terima kasih kepada dr Farahnaz Tahery atas formulasi salep dan laboratorium Ayandeh untuk
penilaian laboratorium. Selain itu, saya ingin menyampaikan terima kasih kepada Board of Researcheditor.ir yang telah
memberikan layanan ilmiah dan editorial terbaik bagi para ilmuwan di Iran.

Daftar Pustaka

[1] S. Patel, S. Srivastava, M.R. Singh, D. Singh, Mechanistic insight into diabetic wounds: pathogenesis, molecular targets
and treatment strategies to pace wound healing, Biomed. Pharmacother. 1 (2019) 108615.
[2] F.S. Bonab, M.R. Farahpour, Topical co-administration of Pistacia atlantica hull and Quercus infectoria gall
hydroethanolic extract improves wound-healing process, Comp. Clin. Path. 26 (2017) 885–892.
[3] S.A. Eming, P. Martin, M. Tomic-Canic, Wound repair and regeneration: mechanisms, signaling, and translation, Sci.
Transl. Med. 6 (2014) 265–266.
[4] R.E. Mirza, M.M. Fang, E.M. Weinheimer-Haus, W.J. Ennis, T.J. Koh, Sustained inflammasome activity in macrophages
impairs wound healing in type 2 diabetic humans and mice, Diabetes 63 (2014) 1103–1114.
[5] R.E. Mirza, M.M. Fang, M.L. Novak, N. Urao, A. Sui, W.J. Ennis, T.J. Koh, Macrophage PPAR-gamma and impaired
wound healing in type 2 diabetes, J. Pathol. 236 (2015) 433–444.
[6] M. Modarresi, M.R. Farahpour, B. Baradaran, Topical application of Mentha piperita essential oil accelerates wound
healing in infected mice model, Inflammopharmacology 27 (2019) 531–537.
[7] P. Mohanty, W. Hamouda, R. Garg, A. Aljada, H. Ghanim, P. Dandona, Glucose challenge stimulates reactive oxygen
species (ROS) generation by leucocytes, J. Clin. Endocrinol. Metab. 85 (2000) 2970–2973.
[8] A. Aljada, J. Friedman, H. Ghanim, P. Mohanty, D. Hofmeyer, A. Chaudhuri, P. Dandona, Glucose ingestion induces an
increase in intranuclear nuclear factor kappa-B, a fall in cellular inhibitor kappaB, and an increase in tumor necrosis factor
alpha messenger RNA by mononuclear cells in healthy human subjects, Metabolism 55 (2006) 1177–1185.
[9] B. Buchberger, M. Follmann, D. Freyer, H. Huppertz, A. Ehm, J. Wasem, The importance of growth factors for the
treatment of chronic wounds in the case of diabetic foot ulcers, GMS Health Technol. Assess. 6 (2010), https://doi.org/10.
3205/hta000090.
[10] J. Abraham, T. Reed, Reshaping the carcinogenic risk assessment of medicines: international harmonisation for drug
safety, industry/regulator efficiency or both? Soc. Sci. Med. 57 (2003) 195–204.
[11] I. Goren, E. Muller, D. Schiefelbein, P. Gutwein, O. Seitz, J. Pfeilschifter, S. Frank, Akt1 controls insulin-driven VEGF
biosynthesis from keratinocytes: implications for normal and diabetes-impaired skin repair in mice, J. Invest. Dermatol.
129 (2009) 752–764.
[12] M.S. Bitar, F. Al-Mulla, ROS constitute a convergence nexus in the development of IGF1 resistance and impaired wound
healing in a rat model of type 2 diabetes, Dis. Model. Mech. 5 (2012) 375–388.
M.N.z. Gharaboghaz, et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 127 (2020) 110189

[13] B.M. Borena, A. Martens, S.Y. Broeckx, E. Meyer, K. Chiers, L. Duchateau, J.H. Spaas, Regenerative skin wound healing
in mammals: state-of-the-art on growth factor and stem cell based treatments, Cell Physiol. 36 (2015) 1–23.
[14] A. Daemi, M.R. Farahpour, A. Oryan, S. Karimzadeh, E. Tajer, Topical administration of hydroethanolic extract of
Lawsonia inermis (henna) accelerates excisional wound healing process by reducing tissue inflammation and amplifying
glucose uptake, Kaohsiung J. Med. Sci. 35 (2019) 24–32.
[15] R. Blakytny, E. Jude, The molecular biology of chronic wounds and delayed healing in diabetes, Diabetes Med. 23 (2006)
594–608.
[16] G.W. Gould, G.D. Holman, The glucose transporter family: structure, function and tissuespecific expression, Biochem. J.
295 (1993) 329–341.
[17] A. de Paula Ramos, L.C. Pimentel, Ação da Babosa no reparo tecidual e cicatrização/Effectiveness of Aloe vera on the
tissue repair and healing process, Braz. J. Health 24 (2013) 40–48.
[18] T.W. Lau, Y.W. Chan, C.P. Lau, K.M. Lau, C.B. Lau, K.P. Fung, P.C. Leung, Y.Y. Ho, Radix Astragali and Radix
Rehmanniae, the principal components of two antidiabetic foot ulcer herbal formulae, elicit viability‐promoting effects
on primary fibroblasts cultured from diabetic foot ulcer tissues, Phytother. Res. 23 (2009) 809–815.
[19] O.M. Ahmed, T. Mohamed, H. Moustafa, H. Hamdy, R.R. Ahmed, E. Aboud, Quercetin and low level laser therapy
promote wound healing process in diabetic rats via structural reorganization and modulatory effects on inflammation
and oxidative stress, Biomed. Pharmacother. 1 (2018) 58–73.
[20] M. Abdollahi, H. Karimpour, H.R. Monsef-Esfehani, Anti-nociceptive effects of Teucrium polium L total extract and
essential oil in mouse writhing test, Pharmacol. Res. 48 (2003) 31–35.
[21] C. Proestos, N. Chorianopoulos, G.J. Nychas, M. Komaiti, RP-HPLC analysis of the phenolic compounds of plant extracts.
Investigation of their antioxidant capacity and antimicrobial activity, J. Agric. Food Chem. 53 (2005) 1190–1195.
[22] A.M. Esmaeili, R. Yazdanparast, Hypoglycaemic effects of Teucrium Polium: Studies with rat pancreatic islets, J.
Ethnopharmacol. 95 (2004) 27–30.
[23] P. Ljubuncic, S. Dakwar, I. Portnaya, U. Cogan, H. Azaizeh, A. Bomzon, Aqueous extracts of Teucrium polium possess
remarkable antioxidant activity in vitro, Evid. Complement. Alternat. Med. 3 (2006) 329–338.
[24] A.D. Dat, F. Poon, K.B. Pham, J. Doust, Aloe vera for treating acute and chronic wounds, Cochrane Database Syst. Rev. 2
(2012) CD008762.
[25] S.W. Choi, B.W. Son, Y.S. Son, Y.I. Park, S.K. Lee, M.H. Chung, The wound-healing effect of a glycoprotein fraction
isolated from aloe vera, Br. J. Dermatol. 145 (4) (2001) 535–5545.
[26] J. Arbab, M.R. Farahpour, A.H. Roohollahi-Masoumi, The Effect of Co-administration of Aloe vera Gel and Cinnamon
zeynalicum Hydroethanolic Extract on Wound Healing Process in Diabetic Mice, Iran. J. Vet. Surg. 13 (2018) 40–48.
[27] M. Moriyama, H. Moriyama, J. Uda, H. Kubo, Y. Nakajima, A. Goto, J. Akaki, I. Yoshida, N. Matsuoka, T. Hayakaw,
Beneficial effects of the genus Aloe on wound healing, cell proliferation, and differentiation of epidermal keratinocytes,
PLoS One 11 (2016) e0164799.
[28] M. Hormozi, R. Assaei, M.B. Boroujeni, The effect of Aloe veraon the expression of wound healing factors (TGFβ1 and
bFGF) in mouse embryonic fibroblast cell: In vitro study, Biomed. Pharmacother. 88 (2017) 610–616.
[29] M.S. Stankovic, N. Niciforovic, M. Topuzovic, S. Solujic, total phenolic content, flavonoid concentrations and antioxidant
activity, of the whole plant and plant parts extracts fromTeucrium Montanum L. var. Montanum, F. Supinum (L.)
reichenb, Biotechnol. Biotechnol. 25 (2011) 2222–2227.
[30] A.R. Eberendu, G. Luta, J.A. Edwards, B.H. Mcanalley, B. Davis, S. Rodriguez, C. Ray Henry, Quantitative colorimetric
analysis of aloe polysaccharides as a measure of Aloe vera quality in commercial products, J. AOAC Int. 88 (2005) 684–
691.
[31] M.R. Farahpour, N. Mirzakhani, J. Doostmohammadi, M. Ebrahimzadeh, Hydroethanolic Pistacia atlantica hulls extract
improved wound healing process; evidence for mast cells infiltration, angiogenesis and RNA stability, Int. J. Surg. 17
(2015) 88–98.
[32] R. Manzuoerh, M.R. Farahpour, A. Oryan, A. Sonboli, Effectiveness of topical administration of Anethum graveolens
essential oil on MRSA-infected wounds, Biomed. Pharmacother. 109 (2019) 1650–1658.
[33] O.H. Lowry, N.J. Rosebrough, A.L. Farr, R.J. Randall, Protein measurement with the Folin phenol reagent, J. Biol. Chem.
193 (1951) 265–275.
[34] L. Pradhan, X. Cai, S. Wu, N.D. Andersen, M. Martin, J. Malek, P. Guthrie, A. Veves, F.W. LoGerfo, Gene expression of
pro-inflammatory cytokines and neuropeptides in diabetic wound healing, J. Surg. Res. 167 (2011) 336–342.
[35] R. Zhao, H. Liang, E. Clarke, C. Jackson, M. Xue, Inflammation in chronic wounds, Inter. J. Mol. Sci. 17 (2016) 2085.
[36] O.M. Ighodaro, Molecular pathways associated with oxidative stress in diabetes mellitus, Biomed. Pharmacother. 1 (2018)
656–662.
[37] M. Xia, Z. Ye, Y. Shi, L. Zhou, Y. Hua, Curcumin improves diabetes mellitus-associated cerebral infarction by increasing
the expression of GLUT1 and GLUT3, Mol. Med. Rep. 17 (2018) 1963–1969.
[38] S. Barrientos, O. Stojadinovic, M.S. Golinko, H. Brem, M. Tomic‐Canic, Growth factors and cytokines in wound healing,
Wound Repair Regen. 16 (2008) 585–601.
[39] F. Sharififar, G. Dehghn-Nudeh, M. Mirtajaldinic, Major flavonoids with antioxidant activity from Teucrium polium L,
Food Chem. 11 (2009) 885–888.
M.N.z. Gharaboghaz, et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 127 (2020) 110189

[40] S. Bahramikia, R. Yazdanparast, Phytochemistry and medicinal properties of Teucrium polium L.(Lamiaceae), Phytother.
Res. 26 (2012) 1581–1593.
[41] S.R.F. Tabatabaei, S. Ghaderi, M. Bahrami-Tapehebur, Y. Farbood, M. Rashno, Aloe vera gel improves behavioral deficits
and oxidative status in streptozotocin-induced diabetic rats, Biomed. Pharmacother. 96 (2017) 279–290.
[42] M. Akaberi, Z. Sobhani, B. Javadi, A. Sahebkar, S.A. Emami, Therapeutic effects of Aloe spp. In traditional and modern
medicine: a review, Biomed. Pharmacother. 84 (2016) 759–772.
[43] M. Cano Sanchez, S. Lancel, E. Boulanger, R. Neviere, Targeting oxidative stress and mitochondrial dysfunction in the
treatment of impaired wound healing: a systematic review, Antioxidants 7 (2018) 98–112.
[44] C. Dunnill, T. Patton, J. Brennan, J. Barrett, M. Dryden, J. Cooke, D. Leaper, N.T. Georgopoulos, Reactive oxygen species
(ROS) and wound healing: the functional role of ROS and emerging ROS‐modulating technologies for augmentation of
the healing process, Int. Wound J. 14 (2017) 89–96.
[45] S.A. Eming, T. Krieg, J.M. Davidson, Inflammation in wound repair: molecular and cellular mechanisms, J. Investig.
Dermatol. 127 (2007) 514–525.
[46] H. Eo, H.-J. Lee, Y. Lim, Ameliorative effect of dietary Genistein on diabetes induced hyper-inflammation and oxidative
stress during early stage of wound healing in alloxan induced diabetic mice, Biochem. Biophys. Res. Commun. 478 (2016)
1021–1027.
[47] S. Kwiecien, K. Jasnos, M. Magierowski, Z. Sliwowski, R. Pajdo, B. Brzozowski, T. Mach, D. Wojcik, T. Brzozowski, Lipid
peroxidation, reactive oxygen species and antioxidative factors in the pathogenesis of gastric mucosal lesions and
mechanism of protection against oxidative stress-induced gastric injury, J. Physiol. Pharmacol. 65 (2014) 613–622.
[48] M. Wlaschek, K. Scharffetter-Kochanek, Oxidative stress in chronic venous leg ulcers, Wound Repair Regen. 13 (2005)
452–461.
[49] D. Yang, X.C. Liang, Y. Shi, Q. Sun, D. Liu, W. Liu, H. Zhang, Anti-oxidative and anti-inflammatory effects of
cinnamaldehyde on protecting high glucose-induced damage in cultured dorsal root ganglion neurons of rats, Chin. J.
Integr. Med. 22 (2011) 19–27.
[50] P. Arulselvan, M.T. Fard, W.S. Tan, S. Gothai, S. Fakurazi, M.E. Norhaizan, S.S. Kumar, Role of antioxidants and natural
products in inflammation, Oxid. Med. Cell. Longev. (2016) 1–15.
[51] T. Yu, M. Gao, P. Yang, Q. Pei, D. Liu, D. Wang, X. Zhang, Y. Liu, Topical insulin accelerates cutaneous wound healing
in insulin-resistant diabetic rats, Am. J. Transl. Res. 9 (2017) 4682.
[52] M. Lisa, N. Haleagrahara, S. Chakravarthi, Insulin-Like Growth Factor-1 (IGF-1) Reduces is changes and increases
circulating angiogenic factors in experimentallyinduced myocardial infarction in rats, Vasc. Cell 3 (2011) 1–10.
[53] B.T. O’Neill, H.P. Lauritzen, M.F. Hirshman, G. Smyth, L.J. Goodyear, C.R. Kahn, Differential role of insulin/IGF-1
receptor signaling in muscle growth and glucose homeostasis, Cell Rep. 11 (2015) 1220–1235.
[54] M. Ghodrati, M.R. Farahpour, H. Hamishehkar, Encapsulation of Peppermint essential oil in nanostructured lipid
carriers: in vitro antibacterial activity and accelerative effect on infected wound healing, Colloids Surf. A 564 (2019) 161–
169.
[55] J.D. Lambeth, Nox enzymes, ROS, and chronic disease: an example of antagonistic pleiotropy, Free Radic. Biol. Med. 43
(2007) 332–347.
[56] B. Shen, J.C. Scaiano, A.M. English, Zeolite encapsulation decreases TiO2‐photosensitized ROS generation in cultured
human skin fibroblasts, Photochem. Photobiol. 82 (2007) 5–12.
[57] A.M. Alizadeh, H. Sohanaki, M. Khaniki, M.A. Mohaghgheghi, G. Ghmami, M. Mosavi, The effect of Teucrium
PoliumHney on the wound healing and tensile strenin rat, Iran. J. Basic Med. Sci. 14 (2011) 499.