Umapathiet al

Tropical Journal of Pharmaceutical Research Februari 2012; 11 (1): 107-116

© Grup Farmakoterapi,
Fakultas Farmasi, Universitas Benin,
Kota Benin, 300001 Nigeria.

Seluruh hak cipta.

Tersedia online di http://www.tjpr.org

http://dx.doi.org/10.4314/tjpr.v11i1.14

Artikel Penelitian

Penentuan Kuantitatif Metformin Hidroklorida dalam

Formulasi Tablet yang Mengandung Natrium
Croscarmellose sebagai Disintegran dengan HPLC dan
Spektrofotometri UV

PDepartemen
1
Umapathi 1*, J.Ayyappan2 dan S Darlin Quine3
Penelitian dan Pengembangan Analitik, Micro Labs Ltd, 67/68-A, Tahap Ketiga, Kawasan Industri Peenya,
Bangalore 560 058, 2Universitas SASTRA, Thanjavur, Tamil Nadu, 3PG dan Departemen Riset Kimia, Government Arts
College, Chidambaram, India.

Abstrak

Tujuan: Untuk mengembangkan dan memvalidasi metode yang sesuai untuk pengujian metformin hidroklorida (HCl) dalam
tablet yang mengandung natrium kroskarmelosa sebagai aditif.
Metode: Metanol dan etanol (99%) dinilai sebagai pelarut untuk preparasi sampel untuk pengujian
metformin HCl dalam tablet yang mengandung natrium kroskarmelosa dengan metode kromatografi
cair kinerja tinggi (HPLC) dan spektrofotometri ultra violet (UV). Metode yang diusulkan menjadi
sasaran uji validasi.
Hasil: Pemulihan metformin HCl dari sampel berduri plasebo adalah 95,1 hingga 96,9% sesuai metode BP dan
USP dibandingkan dengan 99,3 hingga 100,8% bila dianalisis dengan metode yang diusulkan. Penggunaan
metanol dan etanol sebagai pelarut menyelesaikan masalah retensi metformin HCl oleh natrium
kroskarmelosa dalam larutan selama persiapan larutan sampel.
Kesimpulan: Metode UV dan HPLC yang dimodifikasi cocok untuk penentuan metformin HCl dalam tablet
baik dengan adanya dan tidak adanya natrium kroskarmelosa. Metode ini spesifik, tepat, akurat, kuat,
kasar dan memberikan respon linier untuk estimasi kuantitatif metformin HCl dalam formulasi tablet.

Kata kunci: Tablet; Uji metformin HCl; natrium kroskarmelosa; etanol; metanol; HPLC, UV

Diterima: 18 Mei 2011 Revisi diterima: 2 Desember 2011

* Penulis yang sesuai: Surel: varasubio@rediffmail.com

Trop J Pharm Res, Februari2012;11 (1):107

 Umapathiet al
PENGANTAR
Metformin HCl adalah obat antidiabetes kelas
biguanidine yang diresepkan secara oral untuk
pengobatan diabetes mellitus yang tidak
tergantung insulin [1-4]. Pengujian metformin HCl
dalam tablet pelepasan segera biasanya dilakukan
dengan spektrofotometri UV sesuai dengan British
Pharmacopoeia (BP) dan United States
Pharmacopoeia (USP) sedangkan metode
pengujian HPLC telah diberikan dalam monografi
USP untuk tablet metformin pelepasan
diperpanjang [5- 6]. Beberapa metode telah
dilaporkan dalam literatur untuk estimasi
metformin HCl dengan adanya obat lain dalam
formulasi [7-19].
Dalam metode pengujian BP dan USP untuk tablet
metformin pelepasan segera, air digunakan untuk
preparasi sampel sedangkan asetonitril 10%
digunakan untuk preparasi sampel dalam kasus
pengujian tablet metformin pelepasan diperpanjang
dengan metode USP. Metode ini bekerja dengan baik
untuk tablet metformin yang tidak mengandung
natrium kroskarmelosa sebagai penghancur tetapi
tidak memuaskan untuk pengujian metformin HCl
dalam tablet metformin yang mengandung natrium
kroskarmelosa sebagai penghancur karena
pemulihan metformin yang buruk selama persiapan
larutan sampel. Banyak tablet komersial dari
metformin HCl berisi kroskarmelosa
natrium sebagai penghancur.
Telah dilaporkan dalam literatur bahwa ketika
metformin HCl dibubuhi larutan berair yang
mengandung natrium kroskarmelosa, interaksi
muatan yang kuat terjadi antara metformin HCl
dan natrium kroskarmelosa. Interaksi muatan ini
menghasilkan retensi metformin dalam natrium
kroskarmelosa yang mengarah pada pemulihan
obat yang lebih rendah selama persiapan larutan
sampel.
Dalam penelitian sebelumnya, arginin dipilih
untuk bersaing dengan metformin HCl untuk situs
pengikatan pada natrium kroskarmelosa. Laporan
tersebut menyatakan bahwa karena persaingan
dan interaksi yang lebih kuat antara arginin dan
natrium croscarmellose, dibandingkan dengan
interaksi antara metformin dan
natrium croscarmellose, pemulihan lengkap
metformin dicapai [20].
Oleh karena itu, tujuan dari penelitian ini adalah
untuk mengganti pelarut dari metode BP dan USP
dengan pelarut yang sesuai di mana natrium
kroskarmelosa kurang larut untuk mendapatkan
pemulihan metformin HCl yang memuaskan.
EKSPERIMENTAL
Reagen dan bahan
Standar kerja Metformin HCl (99,1% murni)
diperoleh dari Micro Labs Ltd, India. Garam
natrium asam sulfonat 1-heptana yang digunakan
adalah reagen analitis (AR) grade (Spectrochem,
India) Natrium klorida dan asam orto-fosfat
adalah tujuan umum (GR) grade (Merck, India),
etanol (99 % v/v , GR grade, Changshu Yangyuan
Chemicals, China), asetonitril dan metanol (kelas
HPLC, Merck, India) juga digunakan. Air yang
dimurnikan dengan sistem air Millipore (model
Elix 10 C) digunakan untuk pembuatan buffer.
Politetra-
filter membran fluoroethylene (PTFE) (0,45 , filter
jarum suntik – 25 mm GD/X-Whatman) digunakan
untuk menyaring larutan. Filter selulosa asetat
(0,45 , Sartorium, Sedim) digunakan untuk filtrasi
fase gerak.
Spektrofotometer UV
Sebuah spektrofotometer UV-tampak Shimadzu
(model UV-1700 PharmaSpec) digunakan untuk
eksperimen spektrofotometri UV.
Kondisi kromatografi
SEBUAHPerairan tinggi kinerja cair
sistem kromatografi (HPLC) yang dilengkapi
dengan sistem pengiriman pelarut 2695, injektor
otomatis Waters, kolom termostat
Trop J Pharm Res, Februari2012;11 (1):108
 Umapathiet al
kompartemen dan detektor array foto dioda
Waters 2998 digunakan untuk percobaan. Sampel
dianalisis menggunakan kolom Waters (Bondapak
C-18 kolom 300mm x 3.9mm id, ukuran partikel
10 ). Campuran buffer dan asetonitril dengan
perbandingan 90:10 (v/v) digunakan sebagai fase
gerak. Buffer untuk fase gerak dibuat dengan
melarutkan 1,0 g masing-masing 1-heptana asam
sulfonat garam natrium dan natrium klorida
dalam 1800 mL air, mengatur pH menjadi 3,85 ±
0,05 menggunakan asam fosfat 0,06M dan
membuat volume menjadi 2000 ml dengan air.
Campuran buffer dan asetonitril dihilangkan
gasnya dengan sonikasi dan disaring melalui filter
membran selulosa asetat 0,45 .
Persiapan solusi standar untuk metode yang
diusulkan
Pembuatan larutan standar metformin HCl
menggunakan etanol (99 %v/v)
(Solusi 1)
Sekitar 100 mg bubuk metformin HCl ditimbang
secara akurat ke dalam 100 mL kering
labu ukur dan disonikasi dengan 70 mL etanol
(99%v/v) dan dicukupkan hingga 100 mL dengan
etanol (99%v/v) dan disaring melalui
0,45 Filter membran PTFE. Filtrat (10
mL) diencerkan menjadi 100 mL dengan air
(larutan standar untuk metode HPLC
mengandung 100 g/mL metformin HCl). Larutan
standar ini (10 mL) diencerkan menjadi 100 mL
menggunakan air untuk mendapatkan larutan
standar untuk spektrofotometri UV
penentuan (10 g/mL metformin HCl).
Pembuatan larutan standar metformin HCl
menggunakan metanol (Larutan 2)
Solusi 2 disiapkan persis seperti Solusi 1 tetapi
menggunakan metanol sebagai pengganti etanol (99
%v/v).
Persiapan larutan standar untuk metode BP/
USP
Persiapan larutan standar untuk estimasi
spektrofotometri UV sesuai
Metode BP/USP (Solusi 3)
Sekitar 10 mg bubuk metformin HCl ditimbang
secara akurat, dilarutkan dalam 70 mL air dengan
sonikasi dan dibuat hingga 100 mL dengan air.
Larutan ini (10 mL) diencerkan menjadi 100 mL
dengan air (10 g/mL metformin HCl).
Persiapan larutan metformin HCl standar
untuk metode pengujian HPLC sesuai USP
(Larutan 4)
Sekitar 12,5 mg bubuk metformin HCl ditimbang
secara akurat dan dilarutkan dalam 70 mL
1,25% v/v larutan asetonitril dalam air dengan
sonikasi. Volume dibuat hingga 100 mL dengan
pengencer yang sama. Solusi ini (10
mL) diencerkan menjadi 100 mL dengan
pengencer (12,5 g/mL metformin HCl).
Persiapan larutan sampel tablet untuk metode
yang diusulkan
Persiapan larutan sampel tablet menggunakan
etanol (99% v/v) untuk penentuan
spektrofotometri UV dan HPLC (Larutan 5 dan 6)
Dua puluh tablet metformin HCl (mengandung
natrium kroskarmelosa sebagai salah satu aditif)
dibubuk dan bubuk tablet yang setara dengan
sekitar 100 mg metformin HCl ditimbang secara
akurat ke dalam labu ukur 100 mL kering. Sekitar
70 mL etanol (99% v/v) ditambahkan, disonikasi
selama 15 menit dengan pengocokan yang
terputus-putus dan volume dibuat hingga 100 mL
dengan etanol (99%v/v). Larutan ini disaring
melalui a
0,45 Filter membran PTFE. Filtrat (10
mL) diencerkan menjadi 100 mL dengan air untuk
mendapatkan larutan metformin HCl 100 g/mL
(Larutan 5 untuk metode HPLC). Selanjutnya 10
mL larutan 5 diencerkan menjadi 100 mL dengan
air hingga diperoleh larutan yang mengandung 10
Trop J Pharm Res, Februari2012;11 (1):109
 Umapathiet al
g/mL metformin HCl (Larutan 6 untuk metode
spektrofotometri UV).
Preparasi Larutan Sampel Tablet menggunakan
methanol sebagai pengencer untuk penentuan
spektrofotometri UV dan HPLC (Larutan 7 dan 8)
Solusi 7 dan 8 disiapkan persis seperti Solusi 5 dan
6 tetapi menggunakan metanol bukan etanol (99%
v/v).
Persiapan larutan sampel tablet sesuai metode
BP/USP
Persiapan untuk contoh solusi untuk UV
metode spektrofotometri sesuai BP/USP (Solusi
9)
Dua puluh tablet metformin HCl (mengandung
natrium kroskarmelosa sebagai salah satu aditif)
dibubuk dan bubuk tablet yang setara dengan
sekitar 100 mg metformin HCl ditimbang secara
akurat dan disonikasi dengan 70 mL air selama 15
menit dengan pengocokan yang terputus-putus.
Dicukupkan volumenya hingga 100 mL dengan air
dan larutan disaring melalui a
0,45 Filter membran PTFE. Filtrat (10
mL) diencerkan hingga 100 mL dengan air.
Selanjutnya, 10 mL larutan ini diencerkan menjadi
100 mL menggunakan air (10 g/mL metformin
HCl).
Persiapan larutan sampel untuk Metode
HPLC sesuai USP (Larutan 10)
Sepuluh tablet metformin HCl (mengandung
natrium kroskarmelosa sebagai salah satu aditif)
dibuat bubuk dan bubuk tablet yang setara
dengan sekitar 500 mg metformin HCl ditimbang
secara akurat ke dalam
wadah homogenisasi. Ditambahkan larutan
asetonitril 10% (500 mL), alternatif dihomogenkan
dan direndam sampai sampel benar-benar
homogen. Larutan kemudian disaring melalui
filter membran PTFE 0,45 . Filtrat (25 mL)
diencerkan menjadi 200 mL dengan air dalam 200
mL
labu ukur. Dari ini, 10 mL larutan diencerkan menjadi
100 mL dalam labu ukur 100 mL menggunakan 1,25%
asetonitril sebagai pengencer dalam air untuk
mendapatkan konsentrasi
12,5 g/mL metformin HCl.
Persiapan Larutan Metformin HCl dengan
adanya plasebo untuk metode yang diusulkan
Pembuatan larutan sesuai metode yang diusulkan
menggunakan etanol (99 %v/v) sebagai pengencer
untuk spektrofotometri UV dan HPLC
penentuan (Solusi 11 dan 12)
Metformin HCl (100 mg) dan 100 mg bubuk
plasebo yang mengandung natrium
kroskarmelosa 5 mg, povidone 5 mg, silikon
dioksida 1 mg, bedak 1 mg, magnesium stearat
0,2 mg, laktosa 12,8 mg, selulosa mikrokristalin 15
mg dan pati jagung 10 mg
ditimbang dengan teliti ke dalam labu ukur 100
mL kering. Sekitar 70 mL etanol (99% v/v)
ditambahkan dan disonikasi selama 15 menit
dengan pengocokan yang terputus-putus. Volume
dibuat hingga 100 mL dengan etanol (99%v/v) dan
disaring melalui filter membran PTFE 0,45 . Filtrat
(10 mL) diencerkan menjadi 100 mL dengan air
untuk mendapatkan larutan metformin HCl 100 g/
mL (Larutan 11 untuk metode HPLC). Selanjutnya,
10 mL Larutan 11 diencerkan menjadi 100 mL
dengan air untuk mendapatkan larutan yang
mengandung 10 g/mL metformin HCl (Larutan 12
untuk metode spektrofotometri UV).
Persiapan larutan sesuai metode yang
diusulkan menggunakan metanol sebagai
pengencer untuk spektrofotometri UV dan
estimasi HPLC (Larutan 13 dan 14)
Larutan 13 dan 14 dibuat dengan menggunakan
prosedur yang sama dengan larutan 11 dan 12,
masing-masing, kecuali bahwa metanol
digunakan sebagai pengganti etanol (99%v/v)
untuk pembuatannya.
Trop J Pharm Res, Februari2012;11 (1):110
 Umapathiet al
Pembuatan larutan metformin HCl
dengan adanya plasebo untuk BP/USP
metode
Persiapan dari larutan untuk UV
metode spektrofotometri sesuai BP/USP (Solusi
15)
Metformin HCl (100 mg) dan 100 mg bubuk
plasebo yang mengandung natrium
kroskarmelosa 5 mg, povidon 5 mg, silikon
dioksida 1 mg, bedak 1 mg, magnesium stearat
0,2 mg, laktosa 12,8 mg, selulosa mikrokristalin 15
mg dan pati jagung 10 mg adalah ditimbang
dengan teliti ke dalam labu takar 100 mL kering.
Air (70 mL) ditambahkan dan disonikasi selama 15
menit dengan pengocokan yang terputus-putus.
Volume dibuat hingga 100 mL dengan air dan
disaring melalui filter membran PTFE 0,45 . Filtrat
ini (10 mL) diencerkan menjadi 100 mL dengan air
dan 10 mL larutan ini selanjutnya diencerkan
menjadi 100 mL dengan air untuk mendapatkan
konsentrasi metformin HCl 10 g/mL (Larutan 15).
Persiapan larutan sesuai metode USP HPLC
(Larutan 16)
Metformin HCl (500 mg) dan 500 mg bubuk
plasebo yang mengandung natrium
kroskarmelosa (50mg) sebagai salah satu aditif
ditimbang secara akurat ke dalam wadah
homogenisasi. Sebuah larutan 10% asetonitril (500
mL) ditambahkan, alternatif dihomogenkan dan
direndam sampai sampel benar-benar homogen.
Larutan kemudian disaring melalui filter membran
PTFE 0,45 . Filtrat (25 mL) diencerkan menjadi 200
mL dengan air dan 10 mL larutan ini selanjutnya
diencerkan hingga 100 mL menggunakan
pengencer 1,25% asetonitril dalam air untuk
mendapatkan konsentrasi metformin HCl 12,5 g/
mL (Larutan 16)
Persiapan larutan metformin HCl dengan
adanya natrium kroskarmelosa untuk metode
yang diusulkan
Pembuatan larutan metformin HCl dalam natrium
kroskarmelosa dengan metode yang diusulkan
menggunakan etanol sebagai pengencer UV
spektrofotometri dan estimasi HPLC (Solusi
17-26)
Sekitar 100 mg zat metformin HCl dipindahkan ke
masing-masing 5 labu ukur 100 mL yang berbeda.
Ke dalam 5 labu ukur di atas jumlah yang berbeda
(5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, dan 100 mg) natrium
kroskarmelosa ditambahkan. Ke masing-masing
labu, 70 mL etanol (99% v/v) ditambahkan dan
disonikasi selama 15 menit dengan pengocokan
sebentar-sebentar. Volume masing-masing labu
dibuat hingga 100 mL dengan etanol dan disaring
melalui filter membran PTFE 0,45 . Filtrat (10 mL)
dari masing-masing 5 larutan diencerkan menjadi
100 mL dengan air dalam tujuh labu ukur 100 mL
yang terpisah untuk mendapatkan konsentrasi
metformin HCl 100 g/mL. (Solusi ini 17 sampai 21
digunakan untuk estimasi metformin HCl dengan
metode HPLC). Alikuot (10 mL) dari masing-
masing larutan 17 sampai 21 diencerkan menjadi
100 mL dalam 5 labu ukur terpisah dengan air
untuk mendapatkan konsentrasi metformin HCl
10 g/mL. (Larutan yang dihasilkan, 22 hingga 26,
digunakan untuk penentuan metformin HCl
dengan metode spektrofotometri UV).
Pembuatan larutan metformin HCl dalam
natrium kroskarmelosa dengan metode yang
diusulkan menggunakan pelarut metanol untuk
spektrofotometri UV dan estimasi HPLC (Larutan
27 hingga 36)
Solusi 27 sampai 36 disiapkan seperti yang dijelaskan
untuk Solusi 17 sampai 26 kecuali metanol yang
digunakan sebagai pengganti etanol.
Trop J Pharm Res, Februari2012;11 (1):111
 Umapathiet al
Persiapan larutan metformin HCl dengan
adanya natrium kroskarmelosa untuk metode
BP / USP
Pembuatan larutan metformin HCl dalam
natrium kroskarmelosa dengan metode
spektrofotometri UV sesuai BP / USP (Larutan
37- 41)
Sekitar 100 mg zat metformin HCl dipindahkan ke
masing-masing 5 labu ukur 100 mL yang berbeda.
Ke dalam 5 labu ukur di atas jumlah yang berbeda
(5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, dan 100 mg) natrium
kroskarmelosa ditambahkan. Ke masing-masing
labu ditambahkan 70 mL air dan disonikasi selama
15 menit dengan pengocokan sebentar-sebentar.
Volume masing-masing labu dibuat hingga 100
mL dengan air, diaduk rata, dan disaring melalui
filter membran PTFE 0,45 . Filtrat (10 mL) dari
masing-masing 5 larutan diencerkan menjadi 100
mL dengan air dan 10 mL masing-masing larutan
selanjutnya diencerkan hingga 100 mL
menggunakan air untuk mendapatkan
konsentrasi 10 g/mL metformin HCl untuk setiap
larutan. .
Pembuatan larutan metformin HCl dalam
natrium kroskarmelosa dengan metode HPLC
sesuai USP (Larutan 42- 46)
Tentang 500 mg zat metformin HCl dipindahkan ke
dulu masing-masing 5
wadah homogenisasi. Ke 5 bejana di atas jumlah
yang berbeda (25 mg, 50 mg, 125 mg, 250 mg,
dan 500 mg) natrium kroskarmelosa
ditambahkan. Ke masing-masing bejana, 500 mL
asetonitril 10% ditambahkan, sebagai alternatif
dihomogenkan dan direndam sampai sampel
benar-benar homogen. Masing-masing larutan
kemudian disaring melalui filter membran PTFE
0,45 . Filtrat (25 mL) dari masing-masing 5 larutan
diencerkan hingga 200 mL dengan air dan 10 mL
masing-masing larutan diencerkan lebih lanjut
hingga 100 mL menggunakan pengencer
1,25% v/v asetonitril dalam air untuk
mendapatkan konsentrasi metformin HCl 12,5 g/
mL dalam setiap larutan.
Estimasi spektrofotometri UV
Absorbansi larutan yang disiapkan untuk
penentuan spektrofotometri UV adalah
direkam pada 232 nm menggunakan air sebagai
blanko. Kandungan metformin HCl dihitung
dengan metode standar eksternal. Dalam metode
ini, analit referensi, pada saat yang sama
konsentrasi seperti analit uji dikromatografi.
Respon analit referensi, seperti nilai AUC,
digunakan untuk penentuan kuantitatif analit uji.
Parameter kromatografi
Untuk analisis HPLC, laju alir 1,0 mL/menit dan
panjang gelombang deteksi 218 nm digunakan.
Volume injeksi sampel adalah 20 L dan kolom
dipertahankan pada suhu 30 °C. Waktu berjalan
untuk setiap injeksi adalah 10 menit.
Validasi metode
Metode spektrofotometri UV dan HPLC divalidasi
untuk spesifisitas, linieritas dan jangkauan,
presisi, akurasi, ketahanan dan stabilitas larutan
menurut pedoman USP dan ICH.
Kekhususan
Kekhususan metode dievaluasi dengan
memasukkan metformin hidroklorida ke dalam
plasebo yang mengandung natrium
kroskarmelosa sebagai aditif dan memeriksa
gangguan plasebo dalam pengujian metformin
HCl. Stabilitas menunjukkan sifat metode HPLC
dievaluasi oleh studi stres pada zat obat, plasebo
dan formulasi menggunakan agen stres asam,
alkali dan oksidasi dengan hidrogen peroksida.
Degradasi termal dilakukan dengan memanaskan
bahan obat, plasebo dan formulasi dan
fotodegradasi dilakukan dengan memaparkan
bahan obat, plasebo dan formulasi ke sinar UV.
Kemurnian spektral dari puncak metformin adalah
Trop J Pharm Res, Februari2012;11 (1):112
 Umapathiet al
dievaluasi menggunakan perangkat lunak Empower,
versi 2.
Linearitas dan jangkauan
Linearitas dan jangkauan metode ini ditentukan
dengan merekam respon preparasi standar pada
5 yang berbeda
konsentrasi disiapkan dalam kisaran 50 sampai
150% dari konsentrasi median. Analisis regresi
linier terhadap data dilakukan dengan metode
kuadrat terkecil. Nilai koefisien korelasi telah
dilaporkan.
presisi
Ketepatan metode ditentukan dengan mengukur
keterulangan (presisi intra-hari) dan presisi
menengah (presisi antar-hari). Presisi adalah
dihitung dari enam penentuan tablet uji
metformin HCl pada hari yang sama (presisi intra-
hari) dan pada dua hari yang berbeda (presisi
antarhari). % RSD kandungan metformin HCl
dihitung.
Ketepatan
Keakuratan metode ditentukan dengan
memeriksa perolehan metformin HCl dari plasebo
yang dibubuhi metformin HCl. Metformin HCl
dibubuhi pada lima tingkat konsentrasi yang
berbeda (yaitu, 50 hingga 150% dari konsentrasi
median) ke dalam plasebo
mengandung natrium croscarmellose sebagai
aditif. Rentang % pemulihan dan % RSD pada
setiap tingkat dihitung.
Kekokohan
Kekokohan dibentuk dengan memvariasikan
kondisi kromatografi sehubungan dengan laju
aliran, pH buffer, % pengubah organik dan
panjang gelombang. Larutan standar dan sampel
disuntikkan dan % kandungan metformin dihitung
dalam kondisi yang dimodifikasi ini.
Stabilitas solusi
Stabilitas larutan larutan standar dan sampel
dipelajari selama 24 jam pada suhu lingkungan di
laboratorium. Perbedaan persentase area
puncak / absorbansi larutan standar dan larutan
sampel dicatat.
Analisis statistik
Nilai % RSD dan analisis regresi linier dengan
metode kuadrat terkecil0 dihitung menggunakan
aplikasi Microsoft Excel 2003.
HASIL
Hasil % perolehan kembali metformin HCl dari
matriks natrium kroskarmelosa yang dibubuhi
metformin HCl dengan perbandingan 1:1 disajikan
pada Tabel 1 sedangkan % perolehan kembali dari
campuran metformin HCl dan natrium
kroskarmelosa dengan metode USP/BP dan
metode yang diusulkan adalah diberikan pada
Tabel 2. Tabel 3 menyajikan hasil % recovery dari
tablet uji.
Metode UV dan HPLC yang diusulkan divalidasi
dan hasil validasi metode disajikan pada Tabel 4.
Data validasi, termasuk spesifisitas, linieritas,
jangkauan,
akurasi, presisi, ketahanan dan stabilitas solusi
semuanya dalam kriteria penerimaan untuk
metode UV dan HPLC.
DISKUSI
Pemulihan metformin HCl dari campuran
metformin HCl dan natrium kroskarmelosa
bervariasi secara signifikan dengan pelarut yang
digunakan dan > 99 % untuk metanol dan etanol.
Pemulihan hampir sama untuk kedua metode
spektrofotometri UV dan HPLC menggunakan
berbagai pelarut. Karena natrium kroskarmelosa
yang digunakan sebagai aditif dalam formulasi
tablet sangat sulit larut dalam metanol dan etanol,
metformin HCl tidak tertahan dalam larutan
karena interaksi muatan; karenanya, pemulihan
tinggi ketika metanol dan etanol digunakan untuk
preparasi sampel. Natrium kroskarmelosa adalah
Trop J Pharm Res, Februari2012;11 (1):113
 Umapathiet al

Tabel 1: Pemulihan metformin HCl dari natrium kroskarmelosa berduri dengan berbagai pelarut (n = 6)

% Pemulihan metformin HCl Sebuah

pengencer (rata-rata ± SD)
Metode UV metode HPLC
Asam klorida 0,1N 78,8 ± 0,5 80,1 ± 0,5
pH 4,5 Buffer Asetat pH 92,3 ± 0,7 93,5 ± 0,3
6,8 Buffer Fosfat 95,1 ± 0,3 96,3 ± 0,7
air 70,9 ± 0,6 71,3 ± 0,5
metanol 99,8 ± 0,3 99,4 ± 0,4
etanol 100,1 ± 0,5 99,6 ± 0,4
b b
Asetonitril - -
Air : Asetonitril (1:1) Air : 77,4 ± 0,2 78,1 ± 0,3
Metanol (1:1) Air : 74.1 ± 0.6 76,1 ± 0,5
Etanol (1:1) 79,8 ± 0,5 79,1 ± 0,6
Sebuah Pemulihan dari natrium Croscarmellose dibubuhi dengan Metformin HCl (1:1). bCatatan: Tidak ada pemulihan

karena metformin hidroklorida kurang larut dalam asetonitril

Meja 2: Pemulihan metformin HCl dari metformin HCl dibubuhi dengan rasio croscarmellose yang berbeda
natrium (n = 6)

% Pemulihan metformin HCl dengan metode UV dan HPLC (rata-rata ± SD) Sebuah
Rasio Metode BP/USP Metode yang diusulkan
metformin Air (sebagai 10,0%
hidroklorida menjadi pengencer) Asetonitril Metanol (sebagai pengencer) Etanol (sebagai pengencer)
kroskarmelosa sebagai pengencer

natrium dalam UV HPLC UV HPLC UV HPLC

sampel berduri metode metode metode metode metode metode
1: 0,05 96,7 ± 0,3 96,1 ± 0,5 99,8 ± 0,3 99,9 ± 0,7 99,9 ± 0,6 100.1 ± 0.7
1: 0,10 95,4 ± 0,5 95,2 ± 0,4 99,4 ± 0,5 100,3 ± 0,4 99,7 ± 0,5 100,3 ± 0,5
1: 0,25 91,5 ± 0,5 93,3 ± 0,7 100.1 ± 0.6 100,2 ± 0,7 100,6 ± 0,4 99,5 ± 0,5
1: 0,50 84,6 ± 0,7 84,9 ± 0,8 100,3 ± 0,9 99,8 ± 0,6 99,8 ± 0,4 99,8 ± 0,5
1 : 1.00 72,2 ± 0,7 75,5 ± 0,7 99,7 ± 0,8 100,5 ± 0,5 100,1 ± 0,6 100,5 ± 0,2

Tabel 3: Pemulihan metformin HCl dari tablet uji

pengencer metode UV (rata-rata ± SD) metode HPLC (rata-rata ± SD)

Tablet ujiSebuah
Pengencer BP/USP c 95,1 ± 0,5 96,6 ± 0,5
Pengencer yang diusulkan (metanol) 100,3 ± 0,5 99,2 ± 0,5
Pengencer yang diusulkan (etanol ) 99,5 ± 0,4 100,4 ± 0,3
Sampel plasebo berdurib
Pengencer BP/USP c 95.1 ± 0.4 96,9 ± 0,2
Pengencer yang diusulkan (metanol) 100,6 ± 0,4 99,3 ± 0,4
Pengencer yang diusulkan (etanol ) 100,8 ± 0,4 99,6 ± 0,2
Sebuah Tiap tablet (1000 mg) mengandung 50 mg Croscarmellose Sodium, 500 mg Metformin HCl dan 450 mg bahan
tambahan lainnya; b Bubuk plasebo (100mg) mengandung 10 mg Croscarmellose Sodium dan 90 mg eksipien lainnya; c
Air sebagai pengencer untuk metode UV dan 10,0% asetonitril dalam air sebagai pengencer untuk HPLC
metode

Trop J Pharm Res, Februari2012;11 (1):114

 Umapathiet al

Tabel 4: Data validasi metode untuk metode UV dan HPLC yang diusulkan
metode HPLC
Metode UV
Penerimaan
Parameter
metanol etanol metanol etanol kriteria
(sebagai pengencer) (sebagai pengencer) (sebagai pengencer) (sebagai pengencer)

Tidak Itu
Tidak
gangguan gangguan
Tidak gangguan
Tidak ada gangguan ditemukan / seharusnya
(i) Spesifisitas gangguan ditemukan /
ditemukan kemurnian puncak NIL/Puncak
ditemukan kemurnian puncak
melewati kemurnian harus
melewati
lulus.
(ii) Linearitas R = 0,99999 R = 0,9998 R = 0,9998 R = 0,9999 > 0,9990
5 sampai 15 50 hingga 150 50 hingga 150
(iii) Jangkauan 5 sampai 15 g/mL -
g/mL g/mL g/mL
(iv) Akurasi (% 99,3 sampai 99,6 hingga 100,3 99,2 hingga 100,6 99,8 sampai 98.0 – 102.0
Pemulihan) 100,6% % % 100,9% %
(v) Presisi (%RSD)
- Pengulangan 0,5%
0,6% 0,4% 0,6% ≤ 2.0%
- Menengah 0,4%
0,5% 0,6% 0,3%
presisi
Perubahan laju aliran, panjang
(vi) Kekokohan (% Perubahan dalam deteksi gelombang deteksi, pH buffer
Pengujian kadar logam) panjang gelombang dan fase gerak mobile
komposisi
98.0 – 102.0
99,5 sampai 99,3 sampai
99,3 hingga 100,4% 99,1 hingga 99,8% %
100,2% 100,7%
% Selisih nilai absorbansi /AUC dibandingkan
(vii) Stabilitas solusi
ke nilai awal
sampel berdiri Standa Contoh Standa Standar Samp sampel
Waktu
ard le rd rd le rd le
Setelah 6 jam 0,5 0,6 0.4 0,3 0.2 0.4 0,3 0,3 ≤ 2,0%
Setelah 12 jam 0,2 0,3 0.2 0.4 0.6 0.2 0,5 0.4
Setelah 18 jam 0,6 0,4 0.6 0,7 0,3 0,7 0.2 0.2
Setelah 24 jam 0,3 0,7 0,5 0.8 0.4 0,3 0.6 0.2

hampir seluruhnya dihilangkan dengan penyaringan
pada langkah pertama preparasi sampel yang diusulkan
metode, dengan demikian mencegah
interaksi.
Pemulihan metformin menurun dengan peningkatan
tingkat natrium kroskarmelosa dalam campuran
berduri ketika air dan 10% asetonitril (sesuai BP dan
USP) digunakan. % pemulihan turun menjadi sekitar
75% dengan pelarut ini ketika rasio metformin HCl
terhadap croscarmellose adalah 1:1 sedangkan untuk
metode yang diusulkan pelarut yang digunakan
(metanol dan etanol) mampu memulihkan sekitar
100% dari campuran 1:1. Dengan demikian,
pemulihan metformin HCl oleh pelarut yang
digunakan dalam metode yang diusulkan adalah
independen
kadar natrium kroskarmelosa dalam matriks
sampel hingga rasio 1:1.
biaya
Hal ini juga terbukti dari data yang diperoleh
bahwa pelarut yang digunakan dalam metode
yang diusulkan mampu memulihkan sekitar 99
hingga 100% metformin HCl dari sampel tablet
dan sampel plasebo berduri. Dengan demikian,
metode yang diusulkan yang menggunakan
metanol dan etanol (99%) sebagai pelarut
divalidasi dalam hal akurasi, linieritas, spesifisitas,
jangkauan, ketahanan dan stabilitas larutan.
KESIMPULAN
Metode yang dikembangkan yang menggabungkan
perubahan pelarut yang digunakan dalam BP/USP

Trop J Pharm Res, Februari2012;11 (1):115

 Umapathiet al

metode untuk pengenceran awal sampel tablet 9. mubeen G, Khalikha N, Vimala M N.

Metode Spektrofotometri untuk Estimasi
akan menghasilkan kuantifikasi akurat metformin
Metformin Hidroklorida. Int. J. ChemTech
HCl dengan adanya natrium kroskarmelosa. Res. 2010; 2: 1186-1187.
Metode yang dikembangkan berhasil divalidasi 10. Sakalgaonkar AA, Mirgane SR, Arbad BR.
dan harus digunakan untuk pengujian metformin Cairan kinerja tinggi yang divalidasi
metode indikasi stabilitas kromatografi untuk
hidroklorida dalam tablet metformin HCl yang
analisis metformin HCl. Int. J. Aplikasi
mengandung natrium kroskarmelosa sebagai lingkungan Sci. 2008; 1: 339–349
aditif. 11. Ghassempour A, Ahmali M, Ebrahimi SN, Aboul-
Eni HY. Penentuan Simultan Metformin dan
Glyburide dalam Tablet dengan HPTLC.
Kromatografi 2006; 64: 101-104.
PENGAKUAN 12. Mousumi K, Choudhury PK. Metode HPLC untuk
estimasi Metformin Hidroklorida dalam
Mikrosfer Terformulasi dan Bentuk Sediaan
Karya ini didukung oleh Micro Labs Limited, India
Tablet. Indian. J. Farmasi. Sci. 2009; 71: 318-
dan Shanmuga Arts, Science, Technology & 320.
Research Academy, India. 13. Florentin T, Monica A. Kekhususan Analitis
Metode Uji HPLC dari Metformin
Hidroklorida. Pdt. Chim. 2007; 52: 603-609.
REFERENSI
14. Lakshmi KS, Rajesh T, Shrinivas S. Bersamaan
1. Cai-Li Z, Jian-Jie J, Yan-Na W, Feng-Rui Y, Jun-
Penentuan Metformin dan Pioglitazone
Qui S, Jian-Shi L. Studi tentang farmakokinetik dan
dengan HPLC Fase Balik dalam Bentuk
bioavailabilitas tablet pelepasan berkelanjutan
Sediaan Farmasi. Int. J. Farmasi. Farmasi.
metformin hidroklorida dalam bahasa Cina yang sehat
Sci. 2009; 1: 162-166.
sukarelawan. Asia. J Farmakodina.
15. Xiaoyan C, Qi-Gu, Freng Q, Dafang Z. Rapid
Farmakokinet. 2010;10: 221-228.
penentuan metformin dalam plasma manusia
2. Obaid A, Roohi O, dan Syed WH. Hipoglikemik
oleh cair kromatografi-tandem massa
potensi dari tablet metformin 500mg
metode spektroskopi. J. Kromatografi.
(Glucophage & Metphage): Evaluasi titik
B 2004; 802: 377-381.
akhir farmakologis. Pak. J. Farmasi. Sci.
16. Dhabale PN, Seervi CR. UV simultan
2003; 6: 29-41.
Metode Spektrofotometri untuk Estimasi
3. Gusler G, Gorsline J, Levy G, Zhang SZ, Weston
Gliklazid dan Metformin Hidroklorida Dalam
Naret D, Berner B
Bentuk Sediaan Tablet. Int. J. ChemTech Res.
YAITU,

Farmakokinetik dari metformin lambung-

2010; 2: 813-817.
retensi tablet di sehat
17. Vasudevan M, Ravi J, Ravisankar S dan Suresh B.
sukarelawan. J.klin. farmasi. 2001; 41: 655-
Teknik kromatografi cair pasangan ion untuk
661.
itu perkiraan dari metformin di -nya
4. Alergi Viraj W. Metformin. India J.Pharcol.
bentuk sediaan multikomponen. J. Farmasi.
2011; 43: 216-217.
Bioma. dubur. 2001; 25: 77-84.
5. Farmakope Amerika Serikat dan Nasional
18. Saeed AM, Najma S, Hashim ZM, Urooj H. In vitro
Formularium (USP 34-NF29). Rockville, MD:
studi Interaksi antara Metformin dan
US Pharmacopoeia 2011; hal 3442-3443
NSAID (Non steroid Anti-Inflamasi
6. Farmakope Inggris. London Alat Tulis
Obat-obatan) menggunakan Spektrofotometri
Kantor/Obat-obatan dan Produk Perawatan Kesehatan
dan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi RP. J. Cil.
Badan Pengatur (MHRA), 2011; hal 2983
Kimia Soc. 2010; 55: 206-211.
7. Mohammed SA, Syed R, Mohsin G, Aamer RK.
19. Maria CR, Mihaela I, Lavinia H, Elena I, Valentina
Penentuan Metformin Secara Simultan
A, Aureliane R, Camelia ES, Constantin M.
Hidroklorida, Cyanoguanidine dan Melamin
Validasi metode HPLC untuk analisis
di Tablet oleh Mode Campuran HILIC.
simultan Metformin dan Gliclazide dalam
Kromatografi 2008; 67: 517-525.
plasma manusia. Farmasi. 2009; 57: 728-735.
8. Saeed AM, Najma S, Hashim ZM. Pengembangan
dan validasi metode RP-HPLC untuk analisis
20. Huang WX, Desai M, Tang Q, Yang R, Vivilecchia
metformin. Pak. J Farmasi. Sci. 2006; 19: 231-
RV, Joshi Y. Penghapusan metformin-
235.
interaksi natrium kroskarmelosa oleh
kompetisi. Int. J. Farmasi. 2008; 311: 33-39.

Trop J Pharm Res, Februari2012;11 (1):116