PLOS SATU
ARTIKEL PENELITIAN
a1111111111
a1111111111
a1111111111
a1111111111
a1111111111
AKSES TERBUKA
Kutipan: Ju C, Park E, Kim T, Kim T, Kang M, Lee
KS, dkk. (2020) Efektivitas stimulasi listrik pada
regenerasi saraf setelah cedera remuk:
Perbandingan antara stimulasi invasif dan
noninvasif. PLoS SATU 15(5): e0233531.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531
Editor: Tracy Criswell, Fakultas Kedokteran
Universitas Wake Forest, AMERIKA SERIKAT
Diterima: 3 Januari 2020
Diterima: 6 Mei 2020
Diterbitkan: 26 Mei 2020
Hak cipta: © 2020 Ju dkk. Ini adalah artikel akses
terbuka yang didistribusikan di bawah ketentuanLisensi
Atribusi Creative Commons, yang mengizinkan
penggunaan, distribusi, dan reproduksi tanpa batas
dalam media apa pun, asalkan penulis dan sumber
aslinya dicantumkan.
Pernyataan Ketersediaan Data: Semua data yang
relevan ada di dalam naskah.
Pendanaan: Pekerjaan ini didukung oleh hibah
National Research Foundation of Korea (NRF) yang
didanai oleh pemerintah Korea (MSIT)
(2019R1A2C4070590, 2020R1A2C2005385,
2017R1A5A1015596).
Kepentingan bersaing: Para penulis telah menyatakan
bahwa tidak ada kepentingan yang bersaing.
PLOSON | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531
Efektivitas stimulasi listrik pada regenerasi
saraf setelah cedera remuk: Perbandingan
antara stimulasi invasif dan non-invasif
1☯ 2,3☯ 2 2,3
Chanyang JuIndo , Eunkyoung Park , Taewoo Kim , Taekyung KimIndo , Min Hee Kang2,3
,
Kyu-Sung Lee2,3,4*, Sung-Min Park 1
Indo *
1 Departemen Teknik TI Kreatif, Universitas Sains dan Teknologi Pohang, Pohang, Republik Korea, 2 Pusat Penelitian
Teknik Biomedis, Institut Penelitian Kesehatan Cerdas, Pusat Medis Samsung, Fakultas Kedokteran Universitas
Sungkyunkwan, Seoul, Republik Korea, 3 Departemen Manajemen dan Penelitian Alat Kesehatan, SAIHST, Universitas
Sungkyunkwan, Seoul, Republik Korea,
4 Departemen Urologi, Pusat Medis Samsung, Fakultas Kedokteran Universitas Sungkyunkwan, Seoul, Korea
☯Para penulis ini berkontribusi sama untuk pekerjaan ini.
* ksleedr@skku.edu (KSL); sungminpark@postech.ac.kr (SMP)
Abstrak
Beberapa penelitian telah menyelidiki penggunaan metode stimulasi invasif dan non-invasif untuk meningkatkan
regenerasi saraf, dan berbagai tingkat efektivitas telah dilaporkan. Namun, karena penggunaan parameter yang berbeda
dalam studi ini, perbandingan yang adil antara efektivitas metode stimulasi invasif dan non-invasif tidak mungkin
dilakukan. Penelitian ini membandingkan efektivitas stimulasi invasif dan non-invasif menggunakan parameter serupa.
Delapan belas tikus Sprague Dawley diklasifikasikan menjadi tiga kelompok: kelompok iES yang distimulasi dengan
perangkat yang dapat diimplantasikan sepenuhnya, kelompok tES yang distimulasi dengan stimulasi saraf listrik
transkutan (TENS), dan kelompok cedera (tanpa stimulasi). Kelompok iES dan tES menerima stimulasi selama 6 minggu
dimulai segera setelah cedera. Fungsi motorik dievaluasi menggunakan indeks fungsional sciatic (SFI) setiap minggu. Nilai
SFI meningkat dari waktu ke waktu di semua kelompok; pemulihan fungsional yang lebih cepat dan superior diamati pada
kelompok iES daripada kelompok tES. Evaluasi histologis bagian saraf dan bagian otot gastrocnemius dilakukan setiap
minggu. Diameter akson dan area serat otot pada kelompok iES lebih besar, dan rasio g pada kelompok iES lebih dekat ke
0,6 dibandingkan kelompok tES. Untuk menilai penyebab perbedaan efisiensi, model anatomi tikus 3D digunakan untuk
mensimulasikan medan listrik induksi pada masing-masing kelompok. Konsentrasi dan intensitas yang lebih tinggi secara
signifikan di sekitar saraf siatik diamati pada kelompok iES daripada kelompok tES. Distribusi medan vektor menunjukkan
bahwa medan tersebut ortogonal terhadap penyebaran nervus sciaticus pada kelompok tES, sedangkan pada kelompok
iES sejajar; ini menunjukkan bahwa kelompok tES kurang efektif dalam stimulasi saraf. Hasil penelitian menunjukkan
bahwa meskipun tikus pada kelompok TENS menunjukkan pemulihan yang lebih baik daripada pada kelompok cedera,
namun belum dapat menggantikan stimulasi langsung karena tikus yang distimulasi dengan metode invasif menunjukkan
pemulihan yang lebih cepat dan hasil yang lebih baik. Ini kemungkinan disebabkan oleh yang lebih besar itu belum dapat
menggantikan stimulasi langsung karena tikus yang distimulasi dengan metode invasif menunjukkan pemulihan yang
lebih cepat dan hasil yang unggul. Ini kemungkinan disebabkan oleh yang lebih besar itu belum dapat menggantikan
stimulasi langsung karena tikus yang distimulasi dengan metode invasif menunjukkan pemulihan yang lebih cepat dan
hasil yang unggul. Ini kemungkinan disebabkan oleh yang lebih besar
konsentrasi dan distribusi paralel medan listrik terhadap saraf target.
26 Mei 2020 1 / 16
PLOS SATU Perbandingan efektivitas antara stimulasi invasif dan non-invasif pada regenerasi saraf

pengantar
Cedera saraf perifer biasanya terjadi selama kecelakaan lalu lintas, kecelakaan industri, atau cedera yang diderita
di rumah. Meskipun kemajuan terbaru dalam ilmu kedokteran, pemulihan lengkap setelah cedera saraf perifer
jarang terjadi dan cedera biasanya mengakibatkan hilangnya sebagian permanen fungsi motorik, fungsi sensorik,
atau keduanya.1]. Gordon dkk. menjelaskan tiga faktor utama yang bertanggung jawab atas pemulihan
fungsional yang tidak memadai: (1) pertumbuhan lambat dari regenerasi akson di seluruh situs koaptasi bedah
dan celah saraf; (2) penurunan kapasitas regeneratif neuron axotomiized dari waktu ke waktu; dan (3) jendela
waktu terbatas di mana sel Schwann yang mengalami denervasi dapat berhasil menyumbangkan lingkungan
regeneratif untuk regenerasi akson [2-4]. Defisit motorik dan sensorik pasca cedera akibat pemulihan yang tidak
adekuat dapat mempengaruhi kualitas hidup. Oleh karena itu, pengembangan metode untuk meningkatkan
regenerasi aksonal merupakan kunci penting untuk memfasilitasi pemulihan lengkap setelah cedera saraf perifer.

Beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa stimulasi listrik langsung pada saraf yang cedera dapat
meningkatkan regenerasi akson sensorik dan motorik, mempercepat pemulihan fungsional, dan memfasilitasi
reinervasi.2, 5-11]. Dalam sebuah studi oleh Mendonca et al., stimulasi saraf perifer yang cedera dengan arus
listrik 1 A terus menerus meningkatkan pemulihan fungsional secara signifikan dibandingkan dengan kelompok
kontrol [5]. Alrasdan dkk. mengamati bahwa 30 menit stimulasi listrik intensitas rendah mendorong regenerasi
saraf setelah cedera remuk [6]. Selanjutnya, Koo et al. menunjukkan bahwa hewan yang menerima stimulasi
listrik selama enam hari (1 jam per hari) menunjukkan fungsi motorik yang unggul dibandingkan dengan mereka
yang menerima stimulasi untuk periode yang lebih pendek [7].

Demonstrasi efek menguntungkan dari stimulasi listrik langsung pada regenerasi saraf setelah cedera
menghancurkan membangkitkan minat yang cukup besar dalam mengembangkan modalitas non-invasif
untuk stimulasi saraf dengan mata untuk meningkatkan aspek kenyamanan dan keamanan. Berbagai
metode telah diteliti untuk pengobatan cedera saraf, seperti stimulasi otot menggunakan elektroda
tempel karet.12] dan stimulasi saraf di lokasi cedera menggunakan medan magnet frekuensi rendah [13]
atau stimulasi saraf listrik transkutan (TENS) [14]. Studi-studi ini menunjukkan berbagai tingkat efektivitas
dalam mempercepat pemulihan setelah cedera; namun, sebagian besar penelitian menggunakan
parameter stimulasi yang berbeda, seperti frekuensi, amplitudo, lebar pulsa, durasi dan periode stimulasi,
serta jenis elektroda. Perbedaan parameter stimulasi yang digunakan dalam studi membuat sulit untuk
membandingkan efektivitas parameter yang berbeda serta lokasi elektroda. Oleh karena itu, satu set
parameter terapi yang optimal belum ditentukan.15-17].

Tidak ada konsensus yang jelas tentang efek terapeutik dari metode stimulasi yang berbeda pada
pemulihan saraf yang cedera. Tidak ada penelitian sebelumnya yang menganalisis efek dari metode
stimulasi yang berbeda pada regenerasi saraf yang cedera. Jika metode stimulasi invasif lebih baik
daripada metode stimulasi non-invasif (seperti TENS) sehubungan dengan regenerasi saraf, evaluasi efek
superiornya pada regenerasi saraf yang cedera sangat relevan secara klinis. Dalam konteks ini, tujuan
utama dari penelitian ini adalah untuk secara langsung membandingkan efektivitas stimulasi invasif dan
non-invasif pada regenerasi saraf dan pemulihan fungsional setelah cedera remuk.

Bahan dan metode

Semua prosedur eksperimental ditinjau dan disetujui oleh Institutional Animal Care and Use
Committee dari Samsung Medical Center, Seoul, Korea. Semua percobaan dilakukan sesuai
dengan National Institutes of Health Guide for Care and Use of Laboratory Animals. Hewan-
hewan ditempatkan di kandang individu denganad libitum akses ke makanan dan air dan terkena
siklus terang/gelap 12 jam. Delapan belas tikus jantan Sprague Dawleyley

PLOSON | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531 26 Mei 2020 2 / 16

PLOS SATU Perbandingan efektivitas antara stimulasi invasif dan non-invasif pada regenerasi saraf

(180-200 g) digunakan dalam penelitian ini. Hewan-hewan secara acak dibagi menjadi tiga
kelompok (n = 6 per setiap kelompok): (1) cedera (cedera naksir, tidak ada stimulasi listrik); (2) iES
(crush injury, invasif dan stimulasi listrik langsung); dan (3) tES (crush injury, non-invasif dan TENS).

Prosedur operasi
Semua tikus dibius dengan isofluran (1 L/menit oksigen, 5% isofluran) pada awalnya dan dengan
isofluran (1 L/menit oksigen, 1-3% isofluran) selama operasi. Kulit dicukur dan dibersihkan dengan
air dan alkohol sebelum operasi. Area yang dicukur lebih besar dari elektroda tempel yang
digunakan pada kelompok stimulasi TENS. Sayatan sepanjang 2 cm dibuat untuk mengekspos saraf
siatik kaki belakang kiri. Dua jenis prosedur operasi yang dilakukan: operasi cedera (crush injury,n =
12) dan operasi implantasi (luka remuk dengan stimulator implan, n = 6). Penjahitan ganda
menggunakan jahitan semi-kasur terputus dan jahitan Amerika dilakukan di lokasi sayatan untuk
mencegah pembukaan kembali luka. Selanjutnya, situs sayatan didesinfeksi setiap hari untuk
mencegah kemungkinan kerusakan. Hewan yang dioperasi cedera dibagi menjadi kelompok cedera
dan kelompok tES. Lesi hancur ditimbulkan dua kali pada saraf siatik kiri setiap tikus dengan
pemegang jarum masing-masing selama 3 detik. Elektroda manset saraf silinder yang disesuaikan
(diameter dalam 2 mm, diameter luar 3 mm, panjang 5,25 mm, Microprobes Inc.,
MD, USA) dan koil mini untuk menerima daya yang ditransmisikan secara nirkabel sepenuhnya
ditanamkan setelahnya, menutupi kedua lesi remuk. Kaki belakang kanan tidak dioperasi dan otot
gastrocnemius serta saraf skiatiknya berfungsi sebagai kontrol di dalam hewan. Profilaksis
antibiotik (Baytril, 5 mg/kg) diberikan pascaoperasi untuk mencegah infeksi luka.

Prosedur stimulasi listrik

Tikus dalam kelompok iES menerima perawatan stimulasi listrik invasif menggunakan stimulator dan
elektroda manset yang sepenuhnya dapat ditanamkan dan ditransmisikan secara nirkabel. Stimulator
implan sepenuhnya yang digunakan dalam penelitian ini mewakili versi perangkat yang disempurnakan
yang dikembangkan oleh Montgomery [18]. Stimulasi listrik terapeutik (25Hz, 2-3 V, lebar pulsa 0,1 ms)
diterapkan pada hewan melalui stimulator implan tanpa anestesi (Gambar 1A dan 1B). Pada kelompok
tES, elektroda diposisikan di punggung dan paha bagian dalam hewan untuk menghasilkan medan listrik
antara dua elektroda di sekitar saraf yang terluka (Gambar 1C). Semua hewan dicukur dan dibersihkan
sebelum penempatan elektroda dan lapisan konduktor gel diterapkan antara elektroda dan kulit untuk
pemasangan. Saraf sciatic kemudian dirangsang dengan menerapkan stimulasi listrik terapeutik (25 Hz,
1-3 mA, lebar pulsa 0,1 ms), menggunakan perangkat khusus dari TPD-NH1 (NuEyne, Seoul, Korea).
Hewan dibius dengan isofluran (1 L/menit oksigen, 1-3% isofluran) selama stimulasi tES. Kontraksi otot
yang terlihat pada kaki belakang hewan ditetapkan sebagai ambang batas intensitas rangsangan listrik.
Semua hewan dalam kelompok iES dan tES menerima stimulasi 30 menit setiap hari, lima kali seminggu,
selama 6 minggu sejak hari cedera karena pemulihan fungsi motorik cenderung jenuh setelah 5 minggu [
13].

Evaluasi fungsional
Indeks fungsional sciatic (SFI) digunakan untuk menilai pemulihan fungsi saraf setelah
menginduksi lesi naksir pada tikus. Semua tikus dilatih untuk tes selama seminggu sebelum
operasi. Tikus dievaluasi setiap minggu, termasuk pada hari operasi.
Nilai SFI dihitung menggunakan persamaan yang dijelaskan oleh Bain et al. [19]. Hewan-hewan
itu dipaksa berjalan melalui koridor terbatas, yang panjangnya 50 cm dan lebar 15 cm, dengan
kertas putih diletakkan di lantai dan seprai menutupi bagian atas dan ujung jalan. Cakar belakang
tikus ditekan ke spons yang direndam tinta untuk mempertahankan jejak kaki mereka

PLOSON | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531 26 Mei 2020 3 / 16

PLOS SATU Perbandingan efektivitas antara stimulasi invasif dan non-invasif pada regenerasi saraf

Gambar 1. Ilustrasi skema sistem stimulasi listrik. A) Sistem stimulasi bertenaga nirkabel untuk stimulasi saraf dalam kelompok iES; gambar yang diperbesar
menunjukkan elektroda manset implan (diameter dalam 2 mm, diameter luar 3 mm, panjang 5,25 mm) yang terletak di saraf sciatic. B) Skema sistem stimulasi implan
sepenuhnya. C) Elektroda tembaga 7 × 7 mm dipasang tepat di atas tulang paha dan paha bagian dalam dan dihubungkan ke NuEyne TPD-NH1 untuk stimulasi pada
kelompok tES.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531.g001

kertas putih; sidik kaki kiri yang terluka memberikan data eksperimental dan jejak kaki
kanan memberikan data normal. Tiga parameter diukur dari jejak kaki: (1) panjang
cetak (PL); (2) penyebaran jari kaki (TS); dan (3) penyebaran kaki perantara (IT). Ketiga
pengukuran diperoleh dari sisi eksperimen (E) dan sisi normal (N). SFI dihitung
dikalibrasi menggunakan persamaan berikut:

EIT NIT
EPL NPL ETS NTS
SFI ¼ 38:3 þ 109:5 þ 13:3 8:8 ð1Þ
NPL NTS NIT

Setiap 2 minggu setelah operasi, dua ekor tikus dari masing-masing kelompok di-eutanasia
dengan CO2 dan saraf sciatic dan otot gastrocnemius dibedah dari kedua kaki. Saraf dan otot-
cle dari kaki kanan berfungsi sebagai kontrol dalam hewan. Sampel segera direndam
dalam larutan paraformaldehyde 4% dan disimpan pada suhu 4˚C̊ untuk fiksasi.

PLOSON | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531 26 Mei 2020 4 / 16

PLOS SATU Perbandingan efektivitas antara stimulasi invasif dan non-invasif pada regenerasi saraf

Analisis histomorfometrik
Sampel otot gastrocnemius didehidrasi, dipotong melintang setebal 1 m, dan
diwarnai dengan hematoxylin dan eosin (H&E). Sampel saraf sciatic didehidrasi,
ditembus dengan propilen oksida, dan dipolimerisasi. Mereka dipotong menjadi
bagian setebal 1 m menggunakan mikrotom (Leica EMUC6, Leica Biosystems,
Mount Waverley, Australia) dengan pisau berlian dan diwarnai dengan toluidine
blue. Foto otot gastrocnemius pada pembesaran ×200 diperoleh menggunakan
mikroskop optik (Olympus IX70; Olympus Optical Co, Ltd., Tokyo, Jepang). Area serat
otot dihitung dalam tiga area berbeda yang dipilih secara acak menggunakan
perangkat lunak ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA). Juga,2,
setidaknya 30% dari total luas. Dari setiap area yang dipilih secara acak, diameter
akson () dan diameter terpendek dari serabut saraf bermielin () diukur. G-ratio, yang
merupakan perbandingan antara diameter dalam dan luar selubung mielin,
dihitung dengan menggunakan rumus berikut:/β.

Simulasi medan listrik dan vektor

Simulator elektromagnetik biomedis (Sim4Life, Zürich MedTech AG, Swiss), yang merupakan alat
simulasi virtual untuk mensimulasikan penetrasi pulsa elektromagnetik pada model anatomi,
digunakan untuk mensimulasikan medan listrik dan distribusi medan vektor dalam model anatomi
tikus 3D, sebuah tikus jantan besar (Sprague Dawley, 567 g) [20]. Model anatomi 3D, yang
merupakan hantu hewan komputasi dengan geometri realistis dan sifat jaringan, sebenarnya
dihasilkan berdasarkan gambar MRI yang diambil dari tikus Sprague Dawley. Parameter jaringan
masing-masing ditetapkan pada frekuensi 25 Hz dengan parameter yang ditunjukkan padaTabel 1 [
21]. Simulasi dilakukan dengan asumsi elektro-kuasi-statis.

E r: ð2Þ

Dimana persamaan Laplace diselesaikan menggunakan kondisi batas tegangan konstan

Dirichlet tanpa arus sumber:

r s þ jHaiεrφ 0; ð∵Jsumber ¼ 0; ð3Þ

dimana ε adalah permitivitas, adalah konduktivitas listrik efektif, dan adalah frekuensi sudut.
Gambar 2 menunjukkan elektroda diposisikan pada model tikus untuk kedua invasif dan non-inva-
stimulasi sif. Untuk pemodelan grup iES, virtual elektroda manset ditempatkan pada sebagian besar

Tabel 1. Sifat material untuk simulasi pada 25 Hz.

Bahan 25Hz
dan
Bersamaproduktivitas (S/m) Permitivitas Relatif ε Sebuah
r

Udarab 0 1
Kulit 2 × 104 1135,98
Lemak 1,6686 × 102 3.9622 × 106
Otot 0.211123 2.33605 × 107
Darah 0,7 5259.95
Gel 0.6 76,5

SebuahPermitivitas relatif εr = /ε0 b

Latar Belakang

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531.t001

PLOSON | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531 26 Mei 2020 5 / 16

PLOS SATU Perbandingan efektivitas antara stimulasi invasif dan non-invasif pada regenerasi saraf

Gambar 2. Elektroda ditempatkan pada model anatomi tikus 3D, a tikus jantan besar, mensimulasikan pengaturan eksperimental. A) model simulasi kelompok iES; gambar diperbesar
menunjukkan elektroda manset ditempatkan pada saraf siatik. B) model simulasi kelompok tES; elektroda blok ditempatkan tepat di atas tulang paha dan paha bagian dalam (kiri) dan
penampang yang menunjukkan elektroda blok yang menempel pada kulit dan saraf siatik (kanan).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531.g002

kemungkinan daerah saraf siatik (Gambar 2A). Tegangan konstan 2V dari sumber tegangan tunggal
digunakan untuk parameter simulasi karena transmisi tegangan rata-rata ke elektroda manset dalam
pengaturan eksperimental (2V) diukur sebelumnya. Sebaliknya, untuk pemodelan kelompok tES, dua
elektroda virtual ditempatkan di bagian belakang tikus dan paha bagian dalam (Gambar 2B) untuk meniru

PLOSON | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531 26 Mei 2020 6 / 16

PLOS SATU Perbandingan efektivitas antara stimulasi invasif dan non-invasif pada regenerasi saraf

penempatan elektroda dalam percobaan. Tegangan beban antara elektroda adalah 17 V puncak ke
puncak untuk mensimulasikan sumber arus 5 mA.
Setelah penetrasi pulsa elektromagnetik dalam model dihitung, medan listrik simulasi
diekstraksi sepanjang bidang xy dan yz untuk menentukan distribusi medan. Intensitas medan
listrik diterapkan pada saraf siatik dihitung dengan rata-rata nilai yang diperoleh dari 15 voxel di
tengah penampang yang dipilih. Penampang melintang yang terletak pada jarak yang sama dari
cincin dua logam dari elektroda manset dipilih. Bidang vektor diekstraksi sepanjang bidang xy,
yang sejajar dengan penyebaran saraf sciatic, untuk menentukan arah bidang sepanjang arah
pertumbuhan saraf.

Analisis data
Data SFI disajikan dalam plot pencar dan dipasang ke persamaan Boltzmann, karena ukuran sampel yang
bervariasi dari waktu ke waktu. Nilai SFI yang diperoleh dari persamaan yang dipasang digunakan untuk
menghitung rentang peningkatan regenerasi fungsional, dengan mengurangkan nilai minimum (minggu 1) dari
nilai maksimum (minggu 6). Data non-parametrik direpresentasikan sebagai median dan kuartil. Karena ukuran
sampel yang kecil, data histomorfometrik disajikan dalam boxplot dengan data individu dari setiap kelompok
disajikan dalam boxplot bertitik. Data juga dipasang secara linier untuk membandingkan tingkat pemulihan
antara kelompok dengan kemiringannya.

Hasil
Evaluasi fungsional
Fungsi motorik dievaluasi menggunakan SFI. Tes menunjukkan fungsi neurologis normal ketika SFI mendekati 0
dan gangguan fungsi neurologis ketika SFI mendekati -100. Pengamat yang sama menganalisis sidik jari kaki
belakang yang diperoleh setiap minggu, termasuk catatan praoperasi, selama penelitian. SFI direpresentasikan
dengan persamaan Boltzmann sebagai fit sigmoidal regresi non-linier. Nilai R-kuadrat dari semua kelompok,
0,999, mendukung kelayakan model pemasangan. Nilai rata-rata SFI di semua kelompok eksperimen
menunjukkan penurunan tajam setelah cedera remuk mencapai 80 dan kemudian meningkat secara bertahap
selama 6 minggu (Gambar 3). Namun, meskipun ketiga kelompok menunjukkan tren regenerasi yang sama,
perbedaan diamati sehubungan dengan tingkat pemulihan. Nilai SFI pada masing-masing kelompok meningkat
dari minggu pertama sampai minggu keenam, dengan rentang masing-masing 62,39, 44,92, dan 35,59 pada
kelompok iES, tES, dan cedera; ini mencerminkan perbedaan yang jelas dalam peningkatan fungsi motorik. Selain
itu, setelah 6 minggu percobaan, nilai rata-rata SFI pada kelompok iES, tES, dan cedera masing-masing adalah
-19,66, -36,47, dan -47,70, menunjukkan bahwa kelompok iES mencapai regenerasi yang lebih baik daripada
kelompok lainnya.

Evaluasi histomorfometrik
histologi saraf. Temuan histologis (Gambar 4) mendukung kecenderungan yang diamati dalam
evaluasi fungsional. Dibandingkan dengan distribusi reguler serabut saraf berdiameter kecil dan besar
pada saraf normal, penampang saraf yang hancur didominasi oleh serat berdiameter kecil dengan
selubung mielin tipis setelah 2 minggu. Peningkatan jumlah serat selubung mielin tebal berdiameter lebih
besar diamati pada minggu-minggu berikutnya. Selanjutnya, kelompok iES paling mirip dengan kelompok
normal di antara kelompok yang cedera dan serat pada kelompok tES memiliki akson yang relatif lebih
besar dan selubung mielin yang lebih tebal daripada kelompok cedera. Pengamatan ini mencerminkan
tren regenerasi saraf yang sama seperti yang diamati dalam evaluasi fungsional (Gambar 4A dan 4B).

PLOSON | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531 26 Mei 2020 7 / 16

PLOS SATU Perbandingan efektivitas antara stimulasi invasif dan non-invasif pada regenerasi saraf

Gambar 3. Perubahan temporal pada Sciatic Functional Index (SFI) pada masing-masing kelompok. Pemulihan fungsional diukur setiap minggu mulai
seminggu setelah operasi menggunakan SFI yang menyebar di jari kaki. Garis titik pada grafik paling cocok untuk titik data SFI masing-masing kelompok
menggunakan persamaan Boltzmann.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531.g003

Diameter akson (Gambar 4C) dan rasio-g (Gambar 4D) dievaluasi dalam cedera, iES, dan
kelompok tES setiap 2 minggu setelah operasi. Pada minggu ke-2 setelah operasi, diameter akson dari
setiap kelompok berkurang tanpa perbedaan yang signifikan antar kelompok. Diameter akson di setiap
kelompok meningkat dari waktu ke waktu, dengan kemiringan 0,861, 0,744, dan 0,661 di iES, tES, dan
kelompok cedera, masing-masing; ini mencerminkan perbedaan yang jelas dalam kecepatan peningkatan
dengan kelompok iES pulih lebih cepat daripada dua kelompok lainnya. Nilai optimal dari g-ratio, yaitu
rasio antara diameter dalam dan luar selubung mielin, adalah 0,6 untuk saraf perifer.22]. Seiring waktu, g-
rasio semua kelompok mendekati nilai optimal dengan kemiringan
- 0,043, -0,036, dan -0,023 di iES, tES, dan kelompok cedera, masing-masing (Gambar 4D); ini menunjukkan tren
yang sama dari kelompok iES pulih lebih cepat dari dua kelompok lainnya.
Histologi otot. Gambar mikroskopis representatif dari otot gastrocnemius yang dipotong melintang
dari masing-masing kelompok yang diperoleh setiap dua minggu ditunjukkan pada: Gambar 5.
Dibandingkan dengan serat otot normal, serat otot dari kaki yang cedera semuanya lebih kecil dan bulat,
terutama pada minggu-minggu sebelumnya. Karakteristik histologis serat otot pada kelompok iES pada
minggu ke-6 mirip dengan serat otot pada kelompok normal. Area serat otot pada kelompok cedera dan
tES meningkat dari waktu ke waktu, tetapi juga menunjukkan tanda-tanda fibrosis, dibandingkan dengan
kelompok normal dan iES (Gambar 5A dan 5B). Gambar 5C menunjukkan tren yang sama. Area serat otot
berkurang tajam setelah operasi dan meningkat seiring waktu dengan kemiringan 390.988, 305.994, dan
221.478 di iES, tES, dan kelompok cedera, masing-masing. Perbedaan antara lereng mencerminkan tren
pemulihan yang sama seperti yang diamati pada hasil sebelumnya.

Simulasi medan listrik dan vektor

Simulasi medan listrik dan vektor untuk grup iES dan tES dilakukan menggunakan simulator
elektromagnetik biomedis Sim4Life (Zürich MedTech AG). Gambar 6 menunjukkan
penampang distribusi medan E yang disimulasikan yang disebabkan oleh arus stimulasi di
dalam tubuh tikus, serta distribusi medan vektor antara atau di sekitar elektroda, yang
divisualisasikan dengan menghitung hasil dari Persamaan (2) dan (3). Dengan simulasi grup
iES (Gambar 6A), bidang E sangat terlokalisasi di sekitar elektroda manset, yang diposisikan

PLOSON | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531 26 Mei 2020 8 / 16

PLOS SATU Perbandingan efektivitas antara stimulasi invasif dan non-invasif pada regenerasi saraf

Gambar 4. Evaluasi histomorfometrik bagian saraf sciatic. Bagian saraf transversal diwarnai dengan toluidin biru dari A) normal dan B) setiap kelompok dari waktu ke waktu. C),
D) Diameter akson dan g-rasio masing-masing kelompok dari waktu ke waktu diwakili dalam boxplot (garis padat); data individu masing-masing kelompok ditunjukkan sebagai plot kotak bertitik; grafik
sisipan menunjukkan tren peningkatan diameter akson dan rasio-g dari waktu ke waktu oleh garis yang dipasang secara linier. Garis horizontal dan bujur sangkar di dalam setiap kotak menunjukkan
median dan mean, masing-masing; batas atas dan bawah setiap kotak mewakili kuartil pertama dan ketiga; kumis menunjukkan persentil ke-1 dan ke-99. Batang = 50 m.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531.g004

pada saraf siatik. Karena konsentrasi tinggi di sekitar elektroda, intensitas medan E tertinggi diperoleh
di dekat elektroda dua cincin dari elektroda manset yang ditanamkan. Intensitas rata-rata Efield yang
ditimbulkan pada bagian saraf skiatik yang dipilih adalah 1039 V/m. Sebaliknya, bidang E dari simulasi
grup tES (Gambar 6C) terkonsentrasi pada kulit tikus di dekat elektroda yang terpasang, yang
menghasilkan intensitas medan E rendah (23 V/m) pada bagian saraf siatik yang dipilih. Intensitas
medan-E pada saraf sciatic hampir lima puluh kali lebih rendah dari pada stimulasi langsung.
Selanjutnya, distribusi medan vektor (panah diGambar 6B) menunjukkan bahwa dalam kasus stimulasi
langsung, medan listrik berkembang di sepanjang saraf siatik, sejajar dengan penyebarannya;
sebaliknya, dalam kasus TENS, medan vektor dikembangkan antara

PLOSON | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531 26 Mei 2020 9 / 16

PLOS SATU Perbandingan efektivitas antara stimulasi invasif dan non-invasif pada regenerasi saraf

PLOSON | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531 26 Mei 2020 10 / 16

PLOS SATU Perbandingan efektivitas antara stimulasi invasif dan non-invasif pada regenerasi saraf

Gambar 5. Evaluasi histomorfometri bagian otot gastrocnemius. A) Bagian otot melintang dari setiap kelompok dari waktu ke waktu; panah hitam menunjukkan fibrosis. B) Bagian
otot transversal dari tikus normal dengan pewarnaan H&E; poligon hijau menunjukkan myofiber. C) luas serat otot tiap kelompok dari waktu ke waktu disajikan dalam boxplot; area serat
otot yang dipasang secara linier terlampir dalam grafik. Batang = 100 m.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531.g005

dua elektroda yang menempel pada kulit, menunjukkan distribusi ortogonal ke saraf sciatic (
Gambar 6D).

Diskusi
Berbagai metode dan parameter telah diusulkan untuk stimulasi non-invasif untuk meningkatkan
regenerasi saraf perifer; namun, efektivitasnya dibandingkan dengan stimulasi invasif tidak ditandai
dengan baik. Oleh karena itu, apakah stimulasi non-invasif dapat menggantikan metode invasif
konvensional masih belum jelas. Penelitian sebelumnya yang membandingkan stimulasi invasif vs
noninvasif menggunakan parameter yang berbeda, seperti frekuensi, waktu stimulasi, dan periode
stimulasi; ini mencegah perbandingan yang berarti antara dua modalitas. Jadi, kami membandingkan efek
stimulasi langsung pada regenerasi saraf menggunakan elektroda implan penuh dan TENS di bawah
parameter yang sama dalam lingkungan yang dapat direproduksi dan dikendalikan dan mengevaluasi
perubahan temporal dalam fungsi dan karakteristik histologis.
Sejumlah penelitian telah melaporkan bahwa regenerasi saraf sciatic dapat dipercepat dengan
stimulasi listrik langsung ke tempat yang cedera. Daerah yang distimulasi menunjukkan
peningkatan ekspresi faktor neurotropik yang diturunkan dari otak dan reseptor tirosin kinase B
yang mengurangi kerentanan kerucut pertumbuhan di tempat yang cedera, mendorong regenerasi
saraf.9, 23, 24]. Penerapan medan listrik selama pertumbuhan saraf telah terbukti secara langsung
mempengaruhi percabangan saraf.25, 26]. Hasil ini memberikan alasan ilmiah di balik efek positif
stimulasi listrik pada pemulihan, dan konsisten dengan hasil evaluasi fungsional dan
histomorfometrik dalam penelitian ini.
Dalam penelitian ini, kami melakukan evaluasi fungsional menggunakan metode SFI. Keandalan dan
reproduktifitas metode ini untuk mengevaluasi fungsi kaki belakang tikus telah dibuktikan [27]. Jejak kaki
belakang dari dua kelompok stimulasi dan satu kelompok kontrol diukur setiap minggu, mulai dari satu minggu
setelah operasi. Umumnya, nilai SFI normal adalah sekitar 0. Nilai SFI tikus dengan cedera saraf menunjukkan
penurunan tajam satu minggu setelah cedera diikuti dengan peningkatan bertahap dari minggu ke-2 dan
seterusnya [5, 28]. Gambar 3 menunjukkan tren yang sama; nilai rata-rata SFI pada minggu pertama di antara
kelompok-kelompok itu sekitar -80, yang menyiratkan bahwa hewan-hewan itu hampir tidak dapat berdiri di atas
kaki mereka yang terluka. Ini diikuti oleh peningkatan progresif dalam SFI selama beberapa minggu berturut-
turut. Data SFI dicocokkan dengan persamaan Boltzmann dengan nilai R-kuadrat 0,999 pada semua kelompok.
Rentang perbaikan dihitung menggunakan nilai SFI yang diperoleh dari persamaan yang dipasang, dengan
mengurangkan nilai minimum (minggu 1) dari nilai maksimum (minggu 6). Setiap kelompok menunjukkan
peningkatan fungsi sciatic dari minggu pertama hingga keenam, dengan rentang masing-masing 62,39, 44,92,
dan 35,59 di kelompok iES, tES, dan cedera. Peningkatan nilai SFI terbesar diamati pada kelompok iES, dengan
kelompok tES menunjukkan peningkatan yang lebih besar daripada kelompok cedera. Hasilnya menunjukkan
bahwa efisiensi regenerasi pada kelompok iES lebih besar daripada pada kelompok tES karena peningkatan nilai
SFI yang lebih cepat menyiratkan pemulihan yang lebih cepat dan lebih baik. Selanjutnya, nilai rata-rata SFI pada
kelompok iES, tES, dan cedera pada minggu ke-6 berturut-turut adalah -19,66, -36,47, dan -47,70, dengan tanda
saturasi sekitar minggu ke-5. Kecenderungan kejenuhan yang serupa di sekitar minggu ke-5 sebelumnya
dilaporkan dengan regenerasi cedera naksir [13]. Tanda-tanda kejenuhan yang diamati dari minggu ke-5 dan ke-6
dapat diartikan sebagai hasil regenerasi yang lebih baik pada kelompok iES dibandingkan dengan dua kelompok
lainnya. Dengan demikian, kelompok iES tidak hanya menunjukkan tingkat regenerasi yang lebih cepat selama
pemulihan, tetapi juga menunjukkan hasil fungsional yang unggul pada akhir percobaan.

PLOSON | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531 26 Mei 2020 11 / 16

PLOS SATU Perbandingan efektivitas antara stimulasi invasif dan non-invasif pada regenerasi saraf

Gambar 6. Simulasi E-field dan distribusi medan vektor. Distribusi E-field dinyatakan pada penampang tikus jantan besar untuk
A) kasus stimulasi langsung dan C) kasus TENS; peta warna sesuai dengan intensitas E-field, dengan hitam sebagai nol; dan medan vektor

PLOSON | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531 26 Mei 2020 12/16

PLOS SATU Perbandingan efektivitas antara stimulasi invasif dan non-invasif pada regenerasi saraf

distribusi untuk B) kasus stimulasi langsung dan D) kasus TENS; panah menunjukkan arah bidang-E; warna panah sesuai dengan
intensitas medan-E. Penampang sesuai dengan bagian yang ditunjukkan padaGambar 2B, melewati saraf sciatic dari tikus jantan
besar. Tabung transparan mewakili saraf siatik.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531.g006

Hasil evaluasi histomorfometrik juga menunjukkan bahwa stimulasi listrik pada saraf yang cedera mempercepat regenerasi saraf. Neuron yang

dirangsang menunjukkan diameter akson yang lebih besar dan rasio g mendekati 0,6, seperti yang dilaporkan sebelumnya [5, 6, 8, 22]. Namun, penelitian

sebelumnya tentang fitur histomorfometrik saraf cedera yang diobati dengan TENS melaporkan hasil histologis dan morfologis yang berbeda sesuai dengan

frekuensi stimulasi; hasilnya menunjukkan bahwa stimulasi frekuensi rendah lebih baik daripada stimulasi frekuensi tinggi [14]. Bagian saraf yang dirangsang

oleh frekuensi yang relatif rendah ditunjukkan pada gambarGambar 4; sementara semua kelompok menunjukkan pemulihan yang stabil seperti yang

ditunjukkan oleh parameter yang ditingkatkan, kelompok iES memiliki diameter akson yang lebih besar daripada kelompok tES pada minggu ke-4; perbedaan

menjadi lebih jelas pada minggu ke-6. Kelompok tES juga cenderung memiliki diameter akson yang lebih besar daripada kelompok cedera, yang membuktikan

efek menguntungkan dari stimulasi listrik pada regenerasi. Perbedaan kemiringan lereng dengan nilai masing-masing 0,861, 0,744, dan 0,661 pada kelompok

iES, tES, dan cedera menunjukkan kecenderungan yang sama; kelompok iES memiliki kemiringan terbesar dan kelompok tES memiliki kemiringan yang lebih

besar daripada kelompok cedera. Kemiringan pada g-ratio dengan nilai -0,043, -0,036, dan -0,023 pada kelompok iES, tES, dan injury masing-masing

menunjukkan tren yang sama, dengan g-ratio kelompok iES menurun lebih cepat dari dua kelompok lainnya. Selanjutnya, meskipun g-rasio mendekati 0,6 di

semua kelompok dari waktu ke waktu sebagai tanda regenerasi, hanya kelompok iES yang menunjukkan perbedaan yang cukup besar dibandingkan dengan

kelompok lain pada minggu ke-6 dan memiliki rasio-g yang sama dengan normal. Ini tidak hanya menunjukkan pemulihan yang lebih baik dari kelompok iES

daripada kelompok tES atau cedera setelah 6 minggu stimulasi, tetapi juga menunjukkan kemungkinan kelompok iES mendapatkan kembali saraf yang serupa

dengan yang normal pada akhirnya. Hasil ini menunjukkan kecenderungan regenerasi saraf yang lebih baik pada kelompok iES dibandingkan kelompok lain

dalam aspek morfologi. Ini tidak hanya menunjukkan pemulihan yang lebih baik dari kelompok iES daripada kelompok tES atau cedera setelah 6 minggu

stimulasi, tetapi juga menunjukkan kemungkinan kelompok iES mendapatkan kembali saraf yang serupa dengan yang normal pada akhirnya. Hasil ini

menunjukkan kecenderungan regenerasi saraf yang lebih baik pada kelompok iES dibandingkan kelompok lain dalam aspek morfologi. Ini tidak hanya

menunjukkan pemulihan yang lebih baik dari kelompok iES daripada kelompok tES atau cedera setelah 6 minggu stimulasi, tetapi juga menunjukkan

kemungkinan kelompok iES mendapatkan kembali saraf yang serupa dengan yang normal pada akhirnya. Hasil ini menunjukkan kecenderungan regenerasi

saraf yang lebih baik pada kelompok iES dibandingkan kelompok lain dalam aspek morfologi.

Kelompok iES memiliki area serat otot yang lebih besar daripada kelompok tES pada
minggu ke 4 dan 6, dan kelompok tES memiliki area serat otot yang lebih besar daripada
kelompok cedera pada minggu ke 6. Selain fakta bahwa kelompok iES tidak memiliki tanda-
tanda fibrosis. , yang bisa terjadi dengan regenerasi otot yang tertunda [29], dan
menunjukkan gambaran histologis yang serupa dengan kelompok normal pada minggu ke-6,
evaluasi histologis otot juga menunjukkan kecenderungan stimulasi invasif lebih efisien
daripada TENS untuk regenerasi saraf. Selanjutnya, area serat otot meningkat dari waktu ke
waktu dengan kemiringan 390.988, 305.994, dan 221.478 di iES, tES, dan kelompok cedera,
masing-masing; pengamatan ini mencerminkan tren pemulihan yang sama dengan hasil
sebelumnya. Peningkatan pesat pada area serat otot antara minggu ke-4 dan ke-6 berbeda
dari parameter histologis, yang meningkat pesat antara minggu ke-2 dan ke-4; ini
menyiratkan bahwa regenerasi dan reinervasi serat otot dimulai setelah perkembangan
regenerasi aksonal.
Semua hasil eksperimen menunjukkan bahwa stimulasi listrik memfasilitasi regenerasi saraf yang cedera;
stimulasi langsung menyebabkan pemulihan yang lebih baik daripada TENS sehubungan dengan parameter
fungsional dan morfologis selama enam minggu percobaan. Selanjutnya, kelompok iES menunjukkan pemulihan
yang lebih cepat di setiap aspek dan pemulihan fungsi motorik yang lebih baik di akhir percobaan. Ini
menunjukkan bahwa stimulasi langsung jauh lebih disukai daripada TENS karena mempercepat regenerasi saraf
dan memfasilitasi pemulihan fungsional yang lebih besar setelah cedera.
Untuk memahami mengapa kelompok iES menunjukkan kemanjuran yang lebih baik daripada
kelompok tES, simulasi dilakukan untuk kedua kelompok. Di bagian hasil, kami merinci distribusi medan E
yang disimulasikan di dalam tubuh tikus serta distribusi medan vektor antara dan di sekitar

PLOSON | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531 26 Mei 2020 13 / 16

PLOS SATU Perbandingan efektivitas antara stimulasi invasif dan non-invasif pada regenerasi saraf

elektroda. Dengan stimulasi langsung menggunakan elektroda manset, medan-E terkonsentrasi di sekitar
elektroda yang ditempatkan pada saraf skiatik, yang memungkinkan konsentrasi dan intensitas medan-E yang
tinggi di sekitar lokasi cedera dengan risiko efek samping yang relatif lebih kecil. Sebaliknya, medan E
terkonsentrasi di sepanjang elektroda yang menempel pada kulit tikus dengan TENS, yang menghasilkan
intensitas medan E yang lebih rendah di dekat saraf siatik dibandingkan dengan stimulasi langsung. Konsentrasi
dan intensitas medan E yang lebih tinggi di dekat saraf sciatic dalam kasus stimulasi langsung mungkin menjadi
salah satu faktor yang mempengaruhi perbedaan efisiensi, terutama karena intensitas medan E yang diinduksi
oleh TENS memiliki batas atas karena iritasi kulit. pada pengaturan yang lebih tinggi. Selain itu, distribusi medan
vektor dalam kedua kasus mungkin juga mempengaruhi hasil. Dalam kasus stimulasi langsung, medan listrik
berkembang di sepanjang saraf skiatik, sejajar dengan penyebarannya, sedangkan medan vektor antara dua
elektroda yang menempel pada kulit dalam kasus TENS didistribusikan secara ortogonal ke saraf skiatik.
Beberapa penelitian telah melaporkan bahwa sensitivitas saraf di bidang paralel lebih besar daripada di bidang
ortogonal, menunjukkan bahwa neuron dari kelompok tES kurang rentan terhadap rangsangan dibandingkan
dengan kelompok iES [30, 31]. Hasil ini dapat dikaitkan dengan paradigma stimulasi saraf untuk pemulihan yang
lebih besar dengan menyarankan kebutuhan untuk memfokuskan medan listrik di sekitar saraf sciatic dan untuk
menyelaraskan medan vektor dengan penyebaran saraf sciatic.

Kesimpulannya, stimulasi listrik invasif dan non-invasif pada saraf siatik yang cedera dapat meningkatkan
regenerasi saraf dan mempercepat pemulihan fungsional. Namun, evaluasi fungsional dan analisis
histomorfometrik menunjukkan bahwa tikus yang dikenai stimulasi langsung oleh elektroda implan setelah
cedera remuk menunjukkan regenerasi yang lebih baik daripada tikus dengan stimulasi TENS. Distribusi medan-E
dan medan vektor yang disimulasikan dari kedua metode menunjukkan perlunya medan-E terfokus di area yang
ditargetkan dan untuk penempatan elektroda yang dihitung untuk memfasilitasi penyebaran medan-E di
sepanjang penyebaran saraf siatik. Ini mudah dicapai dengan elektroda implan; namun, karena operasi
tambahan diperlukan untuk pengangkatan elektroda selanjutnya, pengembangan elektroda bioresorbable yang
disetujui secara klinis akan lebih bermanfaat [7]. Namun, untuk juga mencegah operasi implantasi awal, ada
kebutuhan untuk mengembangkan metode stimulasi non-invasif baru, seperti stimulasi interferensi temporal
untuk mencapai regenerasi saraf [32]. Sementara itu, stimulasi langsung pada saraf yang cedera harus
digunakan untuk pemulihan yang lebih baik. Studi mendalam lebih lanjut dengan kelompok hewan yang lebih
besar diperlukan untuk menentukan
menambang parameter optimal dan mengembangkan perangkat untuk aplikasi klinis.

Kontribusi Penulis
Konseptualisasi: Eunkyoung Park, Taekyung Kim.

Kurasi data: Chanyang Ju, Taewoo Kim.

Analisis formal: Chanyang Ju, Eunkyoung Park.

Akuisisi pendanaan: Eunkyoung Park, Kyu-Sung Lee, Sung-Min Park.

Penyelidikan: Chanyang Ju, Taewoo Kim.

Metodologi: Chanyang Ju, Taewoo Kim, Taekyung Kim, Minhee Kang.

Administrasi proyek: Eunkyoung Park, Taewoo Kim.

Sumber daya: Eunkyoung Park, Kyu-Sung Lee.

Perangkat lunak: Chanyang Ju.

Pengawasan: Minhee Kang, Kyu-Sung Lee, Sung-Min Park.

Validasi: Taekyung Kim, Minhee Kang, Sung-Min Park.

PLOSON | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531 26 Mei 2020 14 / 16

PLOS SATU Perbandingan efektivitas antara stimulasi invasif dan non-invasif pada regenerasi saraf

Visualisasi: Chanyang Ju.

Menulis – draf asli: Chanyang Ju.

Menulis – meninjau & mengedit: Taman Eunkyoung, Taman Sung-Min.

Referensi
1. Menorca RM, Fussell TS, Elfar JC. Fisiologi saraf: mekanisme cedera dan pemulihan. Klin Tangan. 2013; 29(3):317–
30. Epub 2013/07/31.https://doi.org/10.1016/j.hcl.2013.04.002 PMID: 23895713; PMCID Pusat PubMed:
PMC4408553.

2. Haastert-Talini K, Grothe C. Stimulasi listrik untuk mempromosikan regenerasi saraf perifer. Int Rev Neurobiol.
2013; 109(0074–7742):111–24. Epub 2013/10/08.https://doi.org/10.1016/B978-0-12420045-6.00005–5 PMID:
24093609.
3. Tessa Gordon OARS, dan Adil Ladakz. STIMULASI LISTRIK UNTUK MENINGKATKAN REGENERASI: DIMANA
BERDIRI? Tinjauan Internasional Neurobiologi. 2009; 87.https://doi.org/10.1016/S0074-7742(09)87024-4

4. Gordon T, Tyreman N, Raji MA. Dasar untuk pemulihan fungsional yang berkurang setelah perbaikan saraf
perifer yang tertunda. J Neurosci. 2011; 31 (14):5325–34. Epub 2011/04/08.https://doi.org/10.1523/
JNEUROSCI.6156-10.2011 PMID: 21471367.
5. Mendonça AC, Barbieri CH, Mazzer N. Arus listrik searah intensitas rendah yang diterapkan secara langsung
meningkatkan regenerasi saraf perifer pada tikus. Jurnal Metode Neuroscience. 2003; 129(2):183–90.https://
doi.org/10.1016/s0165-0270(03)00207-3 PMID: 14511820
6. AlrashdanMS, Park JC, Sung MA, Yoo SB, Jahng JW, Lee TH, dkk. Stimulasi listrik intensitas rendah selama tiga
puluh menit mendorong regenerasi saraf setelah cedera saraf sciatic pada model tikus. Acta Neurologica
Belgica. 2010; 110(2):168–79. WOS:000281966700006. PMID:20873447
7. Koo J, MacEwan MR, Kang SK, Won SM, StephenM, Gamble P, dkk. Sistem elektronik bioresorbable nirkabel
memungkinkan terapi neuroregeneratif nonfarmakologis berkelanjutan. Obat Alam. 2018; 24 (12): 1830–+.
https://doi.org/10.1038/s41591-018-0196-2WOS:000452392200011. PMID:
30297910
8. Asensio-Pinilla E, Udina E, Jaramillo J, Navarro X. Stimulasi listrik yang dikombinasikan dengan olahraga
meningkatkan regenerasi aksonal setelah cedera saraf perifer. Exp Neurol. 2009; 219(1):258–65. Epub
2009/06/09.https://doi.org/10.1016/j.expneurol.2009.05.034 PMID: 19500575.
9. Geremia NM, Gordon T, Brushart TM, Al-Majed AA, Verge VMK. Stimulasi listrik mendorong regenerasi neuron
sensorik dan ekspresi gen terkait pertumbuhan. Neurologi Eksperimental. 2007; 205
(2):347–59. https://doi.org/10.1016/j.expneurol.2007.01.040WOS:000247108200006. PMID:
17428474
10. Vivo M, Puigdemasa A, Casals L, Asensio E, Udina E, Navarro X. Stimulasi listrik langsung meningkatkan regenerasi
dan reinervasi serta memodulasi perubahan plastik tulang belakang setelah cedera dan perbaikan saraf sciatic. Exp
Neurol. 2008; 211(1):180–93. Epub 2008/03/05.https://doi.org/10.1016/j.expneurol.
2008.1.01.020 PMID: 18316076.
11. Stimulasi Listrik Gordon T. untuk Meningkatkan Regenerasi Akson Setelah Cedera Saraf Perifer pada Model
Hewan dan Manusia. Neuroterapi. 2016; 13(2):295–310. Epub 2016/01/13.https://doi.org/
10.1007/s13311-015-0415-1 PMID: 26754579; PMCID Pusat PubMed: PMC4824030.

12. Gigo-Benato D, Russo TL, Geuna S, Domingues NR, Salvini TF, Parizotto NA. Stimulasi listrik merusak pemulihan
fungsional awal dan menonjolkan atrofi otot rangka setelah cedera saraf sciatic pada tikus. saraf otot. 2010;
41(5):685–93. Epub 2010/04/21.https://doi.org/10.1002/mus.21549
PMID: 20405500.
13. Bervar M. Pengaruh medan magnet frekuensi rendah sinusoidal yang lemah dan terputus pada regenerasi saraf
pada tikus: evaluasi fungsional. Bioelektromagnetik. 2005; 26(5):351–6. Epub 2005/05/12.https://doi.org/
10.1002/bem.20108 PMID: 15887258.
14. Cavalcante Miranda de Assis D, Martins Lima E, Teixeira Goes B, Zugaib Cavalcanti J, Barbosa Paixao
A, Vannier-Santos MA, dkk. Parameter stimulasi saraf listrik transkutan sangat penting untuk efek regeneratifnya
bila diterapkan tepat setelah lesi sciatic crush pada tikus. Biomed Res Int. 2014; 2014:572949. Epub 2014/08/26.
https://doi.org/10.1155/2014/572949 PMID: 25147807; PMCID Pusat PubMed: PMC4131508.

15. Millard RE, Gembala RK. Stimulator yang dapat ditanamkan sepenuhnya untuk digunakan pada hewan laboratorium kecil. J
Neurosci Metode. 2007; 166(2):168–77. Epub 2007/09/28.https://doi.org/10.1016/j.jneumeth.2007.07.009
PMID: 17897719; PMCID Pusat PubMed: PMC2001238.

PLOSON | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531 26 Mei 2020 15 / 16

PLOS SATU Perbandingan efektivitas antara stimulasi invasif dan non-invasif pada regenerasi saraf

16. Rui B, Guo S, Zeng B, Wang J, Chen X. Stimulator listrik implan yang digunakan untuk rehabilitasi saraf perifer
pada tikus. Exp Ada Med. 2013; 6(1):22–8. Epub 2013/08/13.https://doi.org/10.3892/etm.
2013.1110 PMID: 23935712; PMCID Pusat PubMed: PMC3735806.
17. Lu MC, Ho CY, Hsu SF, Lee HC, Lin JH, Yao CH, dkk. Efek stimulasi listrik pada frekuensi yang berbeda pada
regenerasi saraf perifer yang ditranseksi. Perbaikan Saraf Neurorehabil. 2008; 22(4):367–
73. Epub 2008/07/30. https://doi.org/10.1177/1545968307313507 PMID: 18663248.
18. Montgomery KL, Yeh AJ, Ho JS, Tsao V, Mohan Iyer S, Grosenick L, dkk. Optogenetika internal sepenuhnya
bertenaga nirkabel untuk sirkuit otak, tulang belakang, dan periferal pada tikus. Metode Nat. 2015; 12(10)::969–
74. Epub 2015/08/19. https://doi.org/10.1038/nmeth.3536 PMID: 26280330; PMCID Pusat PubMed: PMC5507210.

19. Kanaya F, Firrel JC, BreidenbachWC. Indeks fungsi sciatic, tes konduksi saraf, kontraksi otot, dan aksonmorfometri
sebagai indikator regenerasi. Plast Reconstr Surg. 1996; 98(7):1264–71, diskusi 72–4. Epub 1996/12/01.https://
doi.org/10.1097/00006534-19961200-00023 PMID:
8942915.
20. KainzW, Nikoloski N, OeschW, Berdinas-Torres V, Frohlich J, Neubauer G, dkk. Pengembangan pengaturan
paparan seluruh tubuh baru untuk tikus yang memberikan efisiensi tinggi, kompatibilitas Program
Toksikologi Nasional (NTP) dan paparan yang dicirikan dengan baik. Phys Med Biol. 2006; 51(20):5211–29.
Epub 2006/10/05.https://doi.org/10.1088/0031-9155/51/20/009 PMID: 17019034.
21. Gabriel C. Kompilasi sifat dielektrik jaringan tubuh pada frekuensi RF dan gelombang mikro. KING'S COLL
LONDON (UNITED KINGDOM) FISIKA DEPTOF. 1996.

22. Rushton WA. Sebuah teori tentang efek ukuran serat pada saraf medula. J. Fisiol. 1951; 115(1):101–22. Epub
1951/09/01.https://doi.org/10.1113/jphysiol.1951.sp004655 PMID: 14889433; PMCID Pusat PubMed: PMC1392008.

23. Al-Majed AA, Brushart TM, Gordon T. Stimulasi listrik mempercepat dan meningkatkan ekspresi BDNF dan
trkBmRNA dalam regenerasi motoneuron femoralis tikus. Jurnal Ilmu Saraf Eropa. 2000; 12(12):4381–90.https://
doi.org/10.1111/j.1460-9568.20000.01341.x PMID: 11122348

24. Frostick SP, Yin Q, Kemp GJ. Sel Schwann, faktor neurotropik, dan regenerasi saraf perifer. Bedah mikro. 1998;
18(7):397–405.https://doi.org/10.1002/(sici)1098-2752(1998)18:7<397::aidmicr2>3.0.co;2-f PMID: 9880154

25. McCaig CD, Sangster L, Stewart R. Neurotropin meningkatkan bimbingan kerucut pertumbuhan terarah medan
listrik dan percabangan saraf terarah. Dinamika Dev. 2000; 217(3):299–308.https://doi.org/10.1002/(Sici)
1097-0177(200003)217:3<299::Aid-Dvdy8>3.0.Co;2-GWOS:000085645600008.

26. Chang F, Minc N. Kontrol elektrokimia sel dan polaritas jaringan. Annu Rev Sel Dev Biol. 2014; 30:317–36. Epub
2014/07/26.https://doi.org/10.1146/annurev-cellbio-100913-013357 PMID:
25062359.
27. VarejSebuaho ASP, Meek MF, Ferreira AJA, Patr´ı́cio JAB, Cabrita AMS. Evaluasi fungsional regenerasi saraf perifer
pada tikus: analisis jalur berjalan. Jurnal NeuroscienceMethods. 2001; 108
(1): 1–9. https://doi.org/10.1016/s0165-0270(01)00378-8 PMID: 11459612
28. Zhang X, Xin N, Tong L, Tong XJ. Stimulasi listrik meningkatkan regenerasi saraf perifer setelah cedera remuk
pada tikus. Mol Med Rep. 2013; 7(5):1523–7. Epub 2013/04/03.https://doi.org/10.3892/mmr.
2013.1395 PMID: 23545781.
29. Huard J, Li Y, Fu FH. Cedera dan perbaikan otot: tren saat ini dalam penelitian. J Bedah Sendi Tulang Am.
2002; 84(5):822–32. Epub 2002/05/11. PMID:12004029.

30. Roth BJ, Basser PJ. Model stimulasi serabut saraf dengan induksi elektromagnetik. IEEE Trans Biomed Eng.
1990; 37(6)::588–97. Epub 1990/06/01.https://doi.org/10.1109/10.55662 PMID:
2354840.
31. Patterson M. Teknik Penelitian Stimulasi Listrik: Elsevier Science; 2013.

32. Grossman N, Bono D, Dedic N, Kodandaramaiah SB, Rudenko A, Suk HJ, dkk. Stimulasi Otak Dalam Noninvasif
melalui Medan Listrik yang Mengganggu Sementara. Sel. 2017; 169(6)::1029–41 e16. Epub 2017/06/03.https://
doi.org/10.1016/j.cell.2017.05.024 PMID: 28575667; PMCID Pusat PubMed: PMC5520675.

PLOSON | https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233531 26 Mei 2020 16 / 16