Teofil in

PENETAPAN KADAR TEOFILIN DAN SALBUTAMOL
DALAM TABLET SECARA SPEKTROFOTOMETRI

DERIVATIF
SKRIPSI
OLEH:
DESI EKA PUTRI
NIM 141524008
PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2017
Universitas Sumatera Utara

DERIVATIF
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
OLEH:
DESI EKA PUTRI
NIM 141524008
PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2017

PENGESAHAN SKRIPSI

DERIVATIF
OLEH :
DESI EKA PUTRI
NIM 141524008
Dipertahankan di Hadapan Panitia Penguji Skripsi

Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara
Pada Tanggal: 01 Februari 2017
Disetujui Oleh:
Pembimbing I, Panitia Penguji
Prof. Dr.Muchlisyam, M.Si., Apt. Drs. Fathur Rahman Harun, M.Si., Apt.
NIP 195006221980021001 NIP 195201041980031002
Pembimbing II, Prof. Dr.Muchlisyam, M.Si., Apt.

NIP 195006221980021001
Dra. Tuty Roida Pardede, M.Si., Apt. Dra. Masria L.Tambunan, M.Si., Apt.
NIP195401101980032001 NIP 195005081977022001
Dra. Tuty Roida Pardede, M.Si., Apt.

NIP195401101980032001
Medan, Februari 2017

Fakultas Farmasi
Dekan,
Prof. Dr. Masfria, M.S., Apt.

NIP 195707231986012001

KATA PENGANTAR
Puji dan syukur kepada Allah SWT atas segala karunia dan rahmatNya,
sehingga penulis dapat menjalani masa perkuliahan dan penelitian hingga
akhirnya menyelesaikan penyusunan skripsi dengan judul “Penetapan Kadar
Teofilin dan Salbutamol dalam Tablet secara Spektrofotometri Derivatif”. Skripsi
ini diajukan sebagai salah satu syarat guna memperoleh gelar Sarjana Farmasi dari
Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.
Pada kesempatan ini penulis ingin menyampaikan rasa terima kasih
kepada Ibu Prof. Dr. Masfria, M.S., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara yang telah memberikan fasilitas selama masa
pendidikan dan penelitian.
Rasa hormat dan terima kasih yang setulus-tulusnya penulis sampaikan
kepada Bapak Prof. Dr. Muchlisyam, M.Si., Apt., dan Ibu Dra. Tuty Roida
Pardede, M.Si., Apt., selaku dosen pembimbing yang telah banyak memberikan
bimbingan dan motivasi dengan penuh kesabaran dan keikhlasan selama
penelitian dan penulisan skripsi ini berlangsung, juga kepada Bapak Drs. Fathur
Rahman Harun, M.Si., Apt., dan Ibu Dra. Masria L.Tambunan, M.Si., Apt., selaku
penguji yang telah memberikan kritik dan saran demi kesempurnaan skripsi ini.
Penulis menyampaikan rasa terima kasih serta penghargaan yang tulus
kepada kedua orang tua penulis yang tercinta, Ayahanda Mardansyah Nasution,
Ibunda Dra. Roslaini Lubis., abang Rizki Ardiansyah Nasution S.T., adik
Syahrijal Efendi Nasution, Meilani Dwi Putri Nasution, Ainul Padilah Nasution
serta seluruh keluarga besar saya yang selalu menyemangati, dan telah
iv
memberikan dukungan terbesar, doa, serta materil selama perkuliahan hingga
penyelesaian skripsi ini.
Pada kesempatan ini juga penulis ingin menyampaikan rasa terima kasih
kepada teman-teman seperjuangan di Laboratorium Penelitian, penulis juga
mengucapkan terima kasih kepada teman-teman terdekat khususnya Christine
Natalia Pasaribu, Rumiris Kristia V. Silaen, Tri Agustina Siregar, Eva Fahyana,
Zulaikha, dan Bahrul Amri serta teman-teman seangkatan Ekstensi 2014 yang
telah banyak memberikan saran, dukungan, dan doa selama penelitian dan
penyusunan skripsi ini berlangsung.
Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih memiliki banyak kekurangan,
oleh sebab itu dengan segala kerendahan hati penulis bersedia menerima kritik
dan saran yang membangun untuk kesempurnaan skripsi ini. Semoga skripsi ini
dapat bermanfaat bagi kita semua.
Medan, Januari 2017

Penulis,
Desi Eka Putri

NIM 141524008
v
SURAT PERNYATAAN BEBAS PLAGIAT
Saya yang bertanda tangan di bawah ini ,
Nama : Desi Eka Putri
Nomor Induk Mahasiswa : 141524008
Program Studi : S1 Ekstensi Farmasi
Judul Skripsi : Penetapan Kadar Teofilin dan Salbutamol dalam

Tablet secara Spektrofotometri Derivatif
Dengan ini menyatakan:
1. Bahwa isi skripsi yang saya tulis tersebut di atas adalah tidak merupakan
ciplakan dari skripsi atau karya ilmiah orang lain.
2. Apabila terbukti di kemudian hari skripsi tersebut adalah ciplakan, maka
segala akibat hukum yang timbul menjadi tanggungjawab saya.
Demikian pernyataan ini saya buat dengan sebenarnya tanpa ada paksaan atau
tekanan dari pihak manapun.
Medan, Januari 2017

Penulis,
Desi Eka Putri

NIM 141524008
vi
PENETAPAN KADAR TEOFILIN DAN SALBUTAMOL DALAM
TABLET SECARA SPEKTROFOTOMETRI DERIVATIF
ABSTRAK
Campuran teofilin dan salbutamol merupakan salah satu jenis kombinasi

dalam sediaan tablet. Pada sediaan tablet mengandung teofilin 130 mg dan
salbutamol 1 mg, teofilin dan salbutamol memiliki perbandingan kadar yang
cukup jauh sehingga dilakukan penetapan kadar secara spektrofotometri derivatif.
Tujuan penelitian ini adalah untuk menguji validasi metode spektrofotometri
derivatif dalam menetapkan kadar campuran teofilin dan salbutamol dalam
sediaan tablet.
Metode penelitian yang dilakukan adalah pengambilan sampel secara
purposif terhadap campuran tablet teofilin dan salbutamol dalam tablet X dan
penetapan kadar secara spektrofotometri derivatif metode zero crossing dalam
pelarut NaOH 0,1 N.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa panjang gelombang analisis untuk
teofilin dan salbutamol pada derivat pertama masing – masing pada panjang
gelombang 270 nm dan 275 nm. Nilai kadar teofilin pada sampel (100,0 ± 0,56)%
dan kadar salbutamol pada sampel (99,7 ± 0,27)%. Pada persen perolehan kembali
untuk teofilin diperoleh = 99,05%, RSD = 1,0% dan untuk salbutamol diperoleh =
99,35%, RSD =1,0%.
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan maka dapat disimpulkan
bahwa metode spektrofotometri derivatif pada derivat pertama dapat digunakan
untuk penetapan kadar teofilin dan salbutamol. Penetapan kadar dengan metode
spektrofotometri derivatif memenuhi persyaratan akurasi dan presisi.
Kata Kunci : Teofilin, Salbutanol, Spektrofotometri Derivatif, Zero Crossing,

Derivat Pertama, Validasi.
vii
DETERMINATION OF THEOPHYLLINE AND SALBUTAMOL
MIXTURE IN TABLETS BY DERIVATIVE SPECTROPHOTOMETRIC
ABSTRACT
The mixture of theophylline and salbutamol is one of combination in

tablet. In preparation containing theophyline 130 and salbutamol 1 mg,
theophyline and salbutamol has comparison levels are far enough apart that the
assay performed in derivative. The aim of this study was to test the validation of
derivative spectrophotometric method in determination the content theophylline
and salbutamol in tablets.
The method of this research was done by purposive sampling to
theophylline and salbutamol mixture of the sample X in tablets content using
derivativen spectrophotometric with zero crossing technique and determination in
NaOH 0,1N.
The research results were obtained the theophyline and salbutamol mixture
were determined by measuring the first derivative ratio amplitudes, at 270 nm and
275 nm. Value levels on the sample theophyline (100.02 ± 0.56)% and salbutamol
(99.75 ± 0.27)%. The results of validation test on the tablet, the percent recovery
for theophylline is 99.05%, relative standard deviation (RSD) = 1.0% and for
salbutamol, the percent recovery = 99.35%, RSD = 1.0%.
Based on the results of research, that derivative spectrophotometric
method can be used to determination of theophylline and salbutamol in the tablets
at the second derivate. Assay of the derivative spectrophotometric method meet
the requirements of accuracy and precision.
Keywords : Theophyline, Salbutamol, Derivative Spectrophotometric, Zero

Crossing, First Derivatives, Validation.
viii
DAFTAR ISI
Halaman
JUDUL ...................................................................................................... i
LEMBAR PENGESAHAN ...................................................................... iii
KATA PENGANTAR ............................................................................. iv
SURAT PERNYATAAN BEBAS PLAGIAT.......................................... vi
ABSTRAK ................................................................................................ vii
ABSTRACT .............................................................................................. viii
DAFTAR ISI ............................................................................................. ix
DAFTAR TABEL ..................................................................................... xiii
DAFTAR GAMBAR ................................................................................ xiv
DAFTAR GAMBAR DALAM LAMPIRAN .......................................... xv
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................. xvi
BAB I PENDAHULUAN ......................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ........................................................................ 1
1.2 Perumusan Masalah ................................................................ 3
1.3 Hipotesis .................................................................................. 3
1.4 Tujuan Penelitian .................................................................... 4
1.5 Manfaat Penelitian .................................................................. 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ............................................................... 5
2.1 Uraian Bahan ........................................................................... 5
2.1.1 Salbutamol .................................................................... 5
2.1.1.1 Farmakologi................................................... 5
ix
2.1.2 Teofilin ......................................................................... 7
2.2 Spektrofotometri..................................................................... 8
2.2.1 Hukum Lambert-Beer .................................................. 9
2.2.2 Kegunaan Spektrofotometri ......................................... 10
2.3 Spektrofotometri Derivtif ........................................................ 11
2.3.1 Komponen Spektrofotometer Derivatif ......................... 13
2.3.2 Kegunaan Spektrofotometri Derivatif ........................... 15
2.4 Validasi Metode Analisis ........................................................ 15
2.4.1 Akurasi .......................................................................... 15
2.4.2 Presisi ............................................................................ 16
2.4.3 Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi ............................... 16
2.4.4 Linearitas ....................................................................... 16
2.4.5 Rentang.......................................................................... 17
BAB III METODE PENELITIAN............................................................ 18
3.1 Jenis Penelitian ........................................................................ 18
3.2 Tempat dan Waktu Penelitian ................................................. 18
3.3 Alat .......................................................................................... 18
3.4 Bahan ....................................................................................... 18
3.5 Pengambilan Sampel ............................................................... 19
3.6 Prosedur Penelitian .................................................................. 19
3.6.1 Pembuatan Pelarut ......................................................... 19
3.6.2 Pembuatan Larutan Induk Baku dan Standar ................ 19
3.6.2.1 Pembuatan Larutan Induk Baku Teofilin.......... 19
3.6.2.2 Pembuatan Larutan Induk Baku Salbutamol... . 19
x
3.6.2.3 Pembuatan Larutan Standar Teofilin ............... 20
3.6.2.4 Pembuatan Larutan Standar Salbutamol .......... 20
3.6.3 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum ................... 20
3.6.3.1 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum

Teofilin.............................................................. 20
3.6.3.2 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum

Salbutamol ........................................................ 20
3.6.4 Pembuatan Spektrum Serapan Derivatif ....................... 21
3.6.4.1 Pembuatan Spektrum Serapan Derivatif

Teofilin.............................................................. 21
3.6.4.2 Pembuatan Spektrum Serapan Derivatif

Salbutamol ........................................................ 21
3.6.5 Penentuan Zero Crossing .............................................. 21
3.6.6 Penentuan Panjang Gelombang Analisis....................... 21
3.6.7 Pembuatan dan Penentuan Linearitas Spektrum

Kalibrasi ........................................................................ 22
3.6.7.1 Pembuatan dan Penentuan Linearitas

Spektrum Kalibrasi Teofilin ............................. 22
3.6.7.2 Pembuatan dan Penentuan Linearitas

Spektrum Kalibrasi Salbutamol ........................ 23
3.6.8 Penetapan Kadar Teofilin dan Salbutamol dalam

Tablet ............................................................................ 23
3.6.9 Analisis Data Penetapan Kadar Secara Statistik ........... 24
3.6.10 Uji Validasi ................................................................. 25
3.6.10.1 Uji Akurasi ................................................... 25
3.6.10.2 Uji Presisi ..................................................... 26
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................. 27
4.1 Hasil Penentuan Kurva Serapan Maksimum........................... 27
xi
4.2 Hasil Penentuan Kurva Serapan .............................................. 28
4.3 Hasil Penentuan Panjang Gelombang Analisis ....................... 29
4.4 Hasil Penentuan Linearitas Kurva Kalibrasi ........................... 34
4.4.1 Kurva Kalibrasi ............................................................. 34
4.4.2 Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi ............................... 35
4.5 Hasil Penentuan Kadar Teofilin dan Salbutamol Dalam

Sediaan Tablet ........................................................................ 36
4.6 Hasil Uji Validasi .................................................................... 37
4.6.1 Hasil Uji Akurasi ........................................................... 37
4.6.2 Hasil Uji Presisi ............................................................. 38
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN .................................................... 39
5.1 Kesimpulan ............................................................................. 39
5.2 Saran ...................................................................................... 39
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................... 40
LAMPIRAN .............................................................................................. 42
xii
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
4.1 Panjang Gelombang Analisis dan Absorbansi pada Derivat
Pertama........................................................................................... 33
4.2 Kadar Teofilin dan Salbutamol dalamTablet .............................. .. 37
4.3 Kadar Teofilin dan Salbutamol dalam Tablet Hasil Perolehan

Kembali Teofilin dan Salbutamol Dengan Penambahan Baku
Standar (standard addition method) pada Tablet............................ 38
xiii
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
2.1 Struktur Salbutamol .................................................................... 5
2.2 Spektrum Salbutamol .................................................................. 6
2.3 Struktur Teofilin.......................................................................... 7
2.4 Spektrum Teofilin ....................................................................... 8
2.5 Kurva Serapan Derivat Pertama Sampai Derivat Keempat ...... 12
2.6 Kurva Sederhana Aplikasi Zero Crossing .................................. 13
2.7 Diagram Spektrofotometer Ultraviolet-Visible ........................... 13
4.1 Kurva Serapan Maksimum Teofilin 6 µg/mL............................. 27
4.2 Kurva Serapan Maksimum Salbutamol 7 µg/mL ....................... 27
4.3 Kurva Tumpang Tindih Serapan Maksimum Teofilin dan

Salbutamol.................................................................................. 28
4.4 Kurva Tumpang Tindih Serapan Teofilin ................................... 29
4.5 Kurva Tumpang Tindih Serapan Salbutamol ............................. 29
4.6 Kurva Serapan Teofilin Konsentrasi 10 µg/mL .......................... 30
4.7 Kurva Serapan Salbutamol Konsentrasi 6 µg/mL ...................... 30
4.8 Kurva Serapan Teofilin dan Salbutamol Konsentrasi 10 µg/mL

dan 6 µg/Ml.................................................................................. 30
4.9 Kurva Tumpang Tindih Serapan Teofilin dan Salbutamol pada

Derivat Pertama........................................................................... 31
4.10 Kurva Tumpang Tindih Serapan Derivat Pertama Teofilin,

Salbutamol dan Campuran Teofilin dan Salbutamol.................. 31
4.11 Panjang Gelombang Analisis Teofilin λ = 270 nm .................... 32
4.12 Panjang Gelombang Analisis Salbutamol λ = 275 nm ............. 32
4.13 Kurva Kalibrasi Teofilin pada λ = 270 nm ................................. 35
4.14 Kurva Kalibrasi Salbutamol pada λ =275 nm ............................. 35
xiv
DAFTAR GAMBAR DALAM LAMPIRAN
Gambar Halaman
1 Tablet X ...................................................................................... 42
2 Spektrofotometer UV-VIS (Shimadzu 1800) ............................. 43
3 Neraca analitik (Mettler Toledo) ................................................ 43
4 Sonikator (Branson 1510) ........................................................... 43
5 Kurva serapan teofilin ................................................................. 51
6 Kurva serapan salbutamol ........................................................... 52
7 Kurva serapan sampel X ............................................................... 59
8 Kurva serapan perolehan kembali 80% pada sampel X........... 70
9 Kurva serapan perolehan kembali 100% pada sampel X ........... 71
10 Kurva serapan perolehan kembali 120% pada sampel X ......... 72
xv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1 Sampel Tablet ........................................................................... 42
2 Komposisi Tablet...................................................................... 43
3 Gambar Alat ............................................................................. 44
4 Perhitungan Pembuatan NaOH 0,1N ........................................ 45
5 Bagan Alir Prosedur Penelitian ................................................ 46
6 Spektrum Serapan Teofilin Baku dan Salbutamol Baku ......... 51
7 Data Kalibrasi Teofilin BPFI, Persamaan Regresi dan

Koefisien Korelasi..................................................................... 53
8 Data Kalibrasi Salbutamol BPFI, Persamaan Regresi dan

Koefisien Korelasi...................................................................... 55
9 Perhitungan Batas Deteksi (Limit of Detection, LOD) dan

Batas Kuantitasi (Limit of Quantitation, LOQ) Teofilin............ 57
10 Perhitungan Batas Deteksi (Limit of Detection, LOD) dan

Batas Kuantitasi (Limit of Quantitation, LOQ) Salbutamol...... 58
11 Spektrum Serapan Derivat Pertama Sampel............................. 59
12 Hasil Analisis Kadar Teofilin dan Salbutamol dalam Sediaan

Tablet.......................................................................................... 61
13 Contoh Perhitungan Kadar Teofilin dan Salbutamol pada

Tablet X...................................................................................... 62
14 Perhitungan Statistik Teofilin pada Tablet X............................ 66
15 Perhitungan Statistik Salbutamol pada Tablet X....................... 68
16 Spektrum Serapan X pada Uji Perolehan Kembali................... 70
17 Data Hasil Persen Perolehan Kembali Teofilin pada Tablet

X dengan Metode Penambahan Baku........................................ 73
18 Data Hasil Persen Perolehan Kembali Salbutamol pada

Tablet X dengan Metode Penambahan Baku........................ .. 74
xvi
19 Perhitungan Persentase Perolehan Kembali (%recovery)......... 75
20 Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi Dan Relatif Standar

Deviasi Perolehan Kembali Teofilin pada Tablet X.................. 81
21 Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi Dan Relatif Standar

Deviasi Perolehan Kembali Salbutamol pada Tablet X............ 82
22 Daftar Nilai Distribusi t ............................................................ 83
23 Sertifikat Teofilin ..................................................................... 84
24 Sertifikat Salbutamol ................................................................ 85
xvii
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Teofilin dan salbutamol adalah kombinasi obat yang digunakan sebagai
obat asma. Kombinasi ini bertujuan untuk meningkatkan efek terapi dan
kemudahan dalam pemakaian. Teofilin sebagai bronkodilator yang berfungsi
sebagai relaksasi langsung otot polos bronki, sedangkan salbutamol bekerja
terhadap α dan β-adrenoseptor yang digunakan untuk bronkodilator, dekongestan
hidung (Tan dan Rahardja, 2007).
Penetapan kadar teofilin dan salbutamol, dalam bentuk tunggal dapat
ditetapkan dengan spektrofotometri ultraviolet dalam pelarut basa teofilin pada
panjang gelombang 275 nm (A11 = 650a) dan salbutamol 245 nm (A11 = 510a)
(Moffat, dkk., 2005). Pada sediaan tablet mengandung teofilin 130 mg dan
salbutamol 1 mg, teofilin dan salbutamol memiliki perbandingan kadar yang
cukup jauh sehingga dilakukan penetapan kadar secara spektrofotometri derivatif.
Teofilin dan salbutamol memiliki panjang gelombang yang berdekatan dan saling
tumpang tindih sehingga bisa dilakukan derivatisasi (Nurhidayati, 2007).
Menurut USP 30-NF 25 (2007) persyaratan kadar untuk tablet teofilin
yaitu tidak kurang dari 94,0% dan tidak lebih dari 106,0% dari jumlah yang
tertera pada etiket sedangkan menurut Farmakope Indonesia Edisi IV (1995)
untuk sediaan tablet salbutamol yaitu tidak kurang dari 98,5% dan tidak lebih dari
101,0% dari jumlah yang tertera pada etiket.
Metode zero crossing adalah prosedur yang paling umum untuk
menentukan campuran biner yang spektranya saling tumpang tindih. Metode zero
1
crossing dapat digunakan pada derivatif pertama dan kedua dengan pemilihan
panjang gelombang untuk pengukuran (Nurhidayati, 2007). Selain metode zero
crossing juga metode lain yang biasa digunakan adalah ratio spectra yaitu
berdasarkan pada pembagian spektrum campuran menjadi spektrum standar setiap
analisis (El-Sayed dan El-Salem, 2005). Metode zero crossing memiliki kelebihan
yaitu lebih cepat, lebih mudah dan lebih sederhana dibandingkan dengan metode
ratio spectra.
Metode spektrofotometri derivatif adalah salah satu metode
spektrofotometri yang dapat digunakan untuk analisis campuran beberapa zat
secara langsung tanpa harus melakukan pemisahan terlebih dahulu walaupun
dengan panjang gelombang yang berdekatan (Nurhidayati, 2007).
Selain dalam bidang farmasi, spektrofotometri derivatif telah diaplikasikan
secara luas didalam analisis klinik dan metode ini juga sudah banyak digunakan
dalam analisis-analisis senyawa anorganik, senyawa organik, farmasi, senyawa
biologis, analisis makanan, dan analisis lingkungan (Ojeda dan Rojas, 2013).
Dalam penetapan kadar campuran beberapa zat dengan metode
spektrofotometri derivatif harus memenuhi persyaratan validasi dengan beberapa
parameter yaitu akurasi yang dinyatakan dalam persen perolehan kembali yang
ditentukan dengan menggunakan metode penambahan baku, presisi yang
digunakan dengan menggunakan parameter RSD dan batas deteksi dan batas
kuantitasi ditentukan dengan rumus Limit of Detection (LOD) dan Limit of
Quantitation (LOQ) (Harmita, 2004).
Berdasarkan hal tersebut, dalam penelitian ini akan dilakukan penetapan
2
kadar campuran teofilin dan salbutamol pada sediaan tablet dengan metode
spektrofotometri derivatif dengan zero crossing.
1.2 Perumusan Masalah
Berdasarkan uraian di atas, maka permasalahan dalam penelitian ini dapat
dirumuskan sebagai berikut :
a. Apakah campuran teofilin dan salbutamol dalam sediaan tablet dapat
ditetapkan kadarnya dengan menggunakan spektrofotometri derivatif metode
zero crossing dan memenuhi syarat validasi metode?
b. Apakah kadar campuran teofilin dan salbutamol dalam sediaan tablet yang
ditetapkan kadarnya menggunakan spektrofotometri derivatif memenuhi
persyaratan tablet tunggal yang ditetapkan dalam Farmakope Indonesia?
1.3 Hipotesis
Berdasarkan rumusan masalah di atas, maka hipotesis dari penelitian ini
sebagai berikut :
a. Campuran teofilin dan salbutamol dalam sediaan tablet dapat ditetapkan
kadarnya dengan menggunakan spektrofotometri derivatif metode zero
crossing dan memenuhi syarat validasi metode.
b. Campuran teofilin dan salbutamol dalam sediaan tablet yang ditetapkan
kadarnya menggunakan spektrofotometri derivatif memenuhi persyaratan
tablet tunggal yang ditetapkan dalam Farmakope Indonesia?
3
1.4 Tujuan Penelitian
Adapun tujuan dari penelitian ini adalah :
a. Melakukan penetapan kadar campuran teofilin dan salbutamol dalam sediaan
tablet menggunakan spektrofotometri derivatif metode zero crossing dan
melakukan uji validasi terhadap metode yang digunakan.
b. Membandingkan hasil yang diperoleh pada penetapan kadar campuran
teofilin dan salbutamol dalam sediaan tablet menggunakan spektrofotometri
derivatif dengan persyaratan tablet tunggal yang ditetapkan dalam Farmakope
Indonesia.
1.5 Manfaat Penelitian
Adapun manfaat penelitian ini adalah untuk memberikan informasi bahwa
penggunaan metode spektrofotometri derivatif dengan cara penentuan zero
crossing dapat dilakukan untuk penetapan kadar campuran teofilin dan salbutamol
pada sediaan tablet.
4
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Uraian Bahan
2.1.1 Salbutamol
Menurut Ditjen POM RI (1995), uraian mengenai salbutamol adalah
sebagai berikut:
Rumus Struktur :
Gambar 2.1 Struktur Salbutamol
Nama Kimia : α’- (tert-Butilamino)metil-4 hidroksi- m-xilena– α, α’ diol
Rumus Molekul : C13H21NO3
Berat Molekul : 239,31
Pemerian : Serbuk hablur, putih
Kelarutan : Mudah larut dalam air, sukar larut dalam etanol, dalam
kloroform dan dalam eter
2.1.1.1 Farmakologi
Derivat isoprenalin merupakan adrenergikum pertama pada tahun 1968
yang daya kerja biasanya memiliki daya kerja yang lebih kurang spesifik terhadap
reseptor beta-adrenergik. Selain berdaya bronchodilatasi yang baik salbutamol
juga sangat efektif untuk mencegah maupun meniadakan serangan asma. Obat ini
sudah lazim digunakan dalam bentuk dosis aerosol berhubung efeknya pesat
5
dengan efek samping yang lebih ringan daripada penggunaan per oral (Tan dan
Rahardja, 2007).
Salbutamol termasuk dalam golongan obat agonis reseptor beta-2
adrenergik. Golongan ini merupakan obat terbaik untuk mengurangi serangan
asma secara tiba – tiba dan untuk mencegah serangan yang mungkin dipicu oleh
olahraga. Bronkodilator ini merangsang pelebaran saluran udara oleh reseptor
beta-adrenergik dan bekerja pada semua reseptor beta-adrenergik yang
menyebabkan efek samping berupa sakit kepala, pusing – pusing, mual dan
tremor tangan (Tan dan Rahardja, 2007).
Gambar 2.2 Spektrum Salbutamol (Moffat, dkk., 2005)
Dalam asam, salbutamol memiliki panjang gelombang maksimum sebesar
276 nm (A11 = 71a) dan dalam basa memiliki panjang gelombang maksimum
sebesar 245 (A11 = 510a), penetapan kadar salbutamol dapat juga dilakukan
dengan menggunakan GC (Gas Chromatography), HPLC (High Performance
Liquid Chromatography), IR (Infra Red) (Moffat, dkk., 2005).
6
2.1.2 Teofilin
Menurut Ditjen POM RI (1995), uraian mengenai teofilin adalah sebagai
berikut:
Rumus struktur :
Gambar 2.3 Struktur Teofilin
Nama Kimia : 1,3-dimethyl-1H-purine-2,6-dione
Rumus Molekul : C7H8N4O2
Berat Molekul : 180,17
Pemerian : Serbuk hablur, putih, tidak berbau, rasa pahit, stabil di udara
Kelarutan : Sukar larut dalam air, tetapi lebih mudah larut dalam air
panas, mudah larut dalam larutan alkali hidroksida dan dalam
amonium hidroksida, agak sukar larut dalam etanol, dalam
kloroform dan dalam eter.
Teofilin merupakan derivat xantin yang menyebabkan relaksasi otot polos,
terutama otot polos bronkus, serta merangsang otot jantung, dan meningkatkan
diuresis. Senyawa teofilin digunakan sebagai bronkodilator yang diperlukan pada
serangan asma yang berlangsung lama. Selain itu, teofilin juga digunakan sebagai
profilaksis terhadap serangan asma (Setiawati dan Gan, 2007). Teofilin
mempunyai efek samping berupa mual dan muntah, baik pada penggunaan oral
7
maupun parenteral. Pada overdose terjadi efek sentral (gelisah, sukar tidur, tremor
dan konvulsi) serta gangguan pernafasan, juga efek kardiovaskuler, seperti
tachycardia, aritmia dan hipotensi (Tan dan Rahardja, 2007).
Gambar 2.4 Spektrum Teofilin (Moffat, dkk., 2005)
Dalam asam, teofilin memiliki panjang gelombang maksimum sebesar 270
nm (A11 = 536a) dan dalam basa memiliki panjang gelombang maksimum sebesar
275 (A11 = 650a), penetapan kadar salbutamol dapat juga dilakukan dengan
menggunakan GC (Gas Chromatography), HPLC (High Performance Liquid
Chromatography), IR (Infra Red) (Moffat, dkk., 2005).
2.2 Spektofotometri
Spektrofotometer adalah alat yang terdiri dari spektrometer dan fotometer.
Spektrofotometer merupakan penggabungan dari dua fungsi alat yang terdiri dari
spektrometer yang menghasilkan sinar dari spektrum dengan panjang gelombang
tertentu dan fotometer sebagai alat pengukur intensitas cahaya yang
ditransmisikan atau yang diabsorpsi (Khopkar, 1985).
Teknik analisis spektrofotometri berdasarkan interaksi radiasi
elektromagnet dengan komponen atom atau molekul yang menghasilkan
fenomena bermakna sebagai parameter analisis (Satiadarma, dkk., 2004).
8
Jika suatu molekul sederhana dikenakan radiasi elektromagnetik maka
molekul tersebut akan menyerap radiasi elektromagnetik yang energinya sesuai.
Interaksi antar molekul dengan radiasi elektromagnetik ini akan meningkatkan
energi potensial elektron pada keadaan tereksitasi (Gandjar dan Rohman, 2012).
Bagian molekul yang bertanggung jawab terhadap penyerapan cahaya
disebut kromofor dan terdiri atas ikatan rangkap dua atau rangkap tiga, terutama
jika ikatan rangkap tersebut terkonjugasi. Semakin panjang ikatan rangkap dua
atau rangkap tiga terkonjugasi di dalam molekul, molekul tersebut akan lebih
mudah menyerap cahaya (Cairns, 2008).
Selain adanya gugus-gugus penyerap (kromofor), faktor-faktor yang
mempengaruhi penyerapan antara lain : pengaruh pelarut yang digunakan untuk
melarutkan sampel, pengaruh suhu, ion-ion anorganik dan pengaruh Ph (Gandjar
dan Rohman, 2012).
Penyerapan radiasi ultraviolet dan sinar tampak dibatasi oleh sejumlah
gugus fungsional (yang disebut dengan kromofor) yang mengandung elektron
valensi dengan tingkat energi eksitasi yang relatif rendah. Elektron yang terlibat
pada penyerapan radiasi ultraviolet dan visibel ada tiga, yaitu elektron sigma,
elektron phi, dan elektron bukan ikatan (non bonding electron) (Gandjar dan
Rohman, 2012).
2.2.1 Hukum Lambert-Beer
Dasar analisa kuantitatif senyawa obat dengan spektrofotometri ultraviolet
– visible adalah hukum Lambert – Beer yang menyatakn bahwa ada hubungan
antara absorbansi dengan konsentrasi senyawa obat. Hukum Lambert – Beer
diformulasikan sebgai berikut :
9
A = abc
Keterangan: A = Absorbansi
a = Absorptivitas
b = Tebal kuvet (cm)
c = Konsentrasi
Absorptivitas (a) merupakan suatu konstanta yang tidak tergantung pada
konsentrasi, tebal kuvet dan intensitas radiasi yang mengenai larutan sampel.
Absorptivitas tergantung pada suhu, pelarut, struktur molekul dan panjang
gelombang radiasi (Gandjar dan Rohman, 2012).
Absorbansi yang terbaca pada spektrofotometer hendaknya antara 0,2
sampai 0,6. Anjuran ini berdasarkan anggapan bahwa pada kisaran nilai
absorbansi tersebut kesalahan fotometrik yang terjadi adalah paling minimal
(Gandjar dan Rohman, 2012).
2.2.2 Kegunaan Spektofotometri
Metode spektrofotometri memiliki beberapa keuntungan antara lain
kepekaan yang tinggi, ketelitian yang baik, mudah dilakukan, cepat pengerjaannya
dan dapat digunakan untuk menentukan senyawa campuran (Munson, 1984).
Pada analisis kuantitatif dengan cara penetapan kadar, larutan standar obat
yang akan dianalisis disiapkan, serapan sampel dan standar dapat ditentukan
(Cairns, 2008), dimana konsentrasi zat dalam sampel dihitung dengan rumus
Ct At
sebagai berikut: Cs =
As
Keterangan: As = Absorbansi baku pembanding

At = Absorbansi zat dalam sampel
Cs = Konsentrasi baku pembanding
Ct = Konsentrasi zat dalam sampel
10
2.3 Spektrofotometri Derivatif
Spektrofotometri derivatif merupakan metode manipulatif terhadap spektra
pada spektrofotometri ultraviolet dan visibel. Pada spektrofotometri derivatif plot
A lawan λ, ditansformasikan menjadi plot dA/d λ lawan λ untuk derivatif pertama
dan d2A/d λ2 lawan λ untuk derivatif kedua (Hayun, dkk., 2006).
Konsep derivatif telah diperkenalkan pertama kali pada tahun 1950,
dimana terlihat memberikan banyak keuntungan. Aplikasi utama spektrofotometri
derivatif ultraviolet – visibel adalah untuk identifikasi kualitatif dan analisis
senyawa dalam sampel. Metode spektrofotometri derivatif sangat cocok untuk
analisis pita absorpsi yang overlapping atau tumpang tindih (Owen, 1995).
Pada spektrofotometri konvensional, spektrum serapan merupakan plot
serapan (A) terhadap panjang gelombang (λ). Pada spektrofotometri derivatif, plot
serapan terhadap panjang gelombang
Dimana:
A = f (λ), order nol
dA / dλ = f ′ (λ), order pertama
d2A / dλ2 = f ″ (λ), order kedua
dan seterusnya ( Owen, 1995).
11
Gambar 2.5 Kurva serapan derivat pertama sampai derivat keempat (Owen,
1995).
Ada dua aplikasi spektrofotometri derivatif yang sering digunakan dalam
anlisa kuantitatif antara lain metode zero crossing dan metode peak to peak
(Talsky, 1994).
Panjang gelombang zero crossing adalah panjang gelombang dimana
senyawa tersebut mempunyai serapan nol dan menjadi panjang gelombang
analisis untuk zat lain dalam campurannya. Metode zero crossing memisahkan
campuran dari spektrum derivatifnya pada saat panjang gelombang komponen
pertama tidak ada sinyal. Pengukuran pada zero crossing tiap komponen dalam
campuran merupakan fungsi tunggal konsentrasi dari yang lainnya (Nurhidayati,
2007).
Panjang gelombang serapan maksimum pada suatu senyawa akan menjadi
panjang gelombang zero crossing pada spektrogram derivat pertama, panjang
gelombang tersebut tidak mempunyai serapan atau dA/ d λ = 0. Bila campuran zat
memiliki gelombang zero crossing lebih dari satu maka yang dipilih menjadi
12
panjang gelombang analisis adalah panjang gelombang zero crossing yang
serapan pasangannya dan campurannya persis sama karena pada panjang
gelombang tersebut secara selektif mengukur senyawa pasangannya dan memiliki
serapan yang paling besar. Pada serapan yang paling besar, serapannya lebih
stabil sehingga kesalahan analisis dapat diperkecil (Nurhidayati, 2007). Kurva
sederhana aplikasi zero crossing dapat dilihat pada Gambar 2.6.
Gambar 2.6 Kurva sederhana aplikasi zero crossing (Talsky, 1994).
2.3.1 Komponen Spektrofotometer Derivatif
Komponen-komponen pada spektrofotometer UV-Visibel biasa sama
dengan komponen pada spektrofotometer derivatif. Alat spektrofotometer harus
dilengkapi dengan peralatan sedemikian rupa untuk dapat menghasilkan spektrum
derivatif.
Gambar 2.7 Diagram spektrofotometer ultraviolet – visibel (Cairns, 2008).
13
Menurut Day dan Underwood (1998) dan Satiadarma, dkk., (2004), unsur -
unsur terpenting suatu spektrofotometer adalah sebagai berikut:
1. Sumber-sumber lampu: lampu deuterium digunakan untuk daerah UV
pada panjang gelombang dari 190-350 nm, sementara lampu halogen
kuarsa atau lampu tungsten digunakan untuk daerah visibel pada panjang
gelombang antara 350- 900 nm.
2. Monokromotor: digunakan untuk memperoleh sumber sinar yang
monokromatis. Alatnya berupa prisma untuk mengarahkan sinar
monokromatis yang diinginkan dari hasil penguraian.
3. Kuvet (sel): digunakan sebagai wadah sampel untuk menaruh cairan ke
dalam berkas cahaya spektrofotometer. Kuvet itu haruslah meneruskan
energi radiasi dalam daerah spektrum yang diinginkan. Pada pengukuran
di daerah sinar tampak, kuvet dapat digunakan, tetapi untuk pengukuran
pada daerah ultraviolet kita harus menggunakan sel kuarsa karena gelas
tidak tembus cahaya pada daerah ini. Kuvet tampak dan ultraviolet yang
khas mempunyai ketebalan 1 cm, namun tersedia kuvet dengan ketebalan
yang sangat beraneka, mulai dari ketebalan kurang dari 1 mm sampai 10
cm bahkan lebih.
4. Detektor: digunakan sebagai alat yang menerima sinyal dalam bentuk
radiasi elektromagnetik, mengubah, dan meneruskannya dalam bentuk
sinyal listrik ke rangkaian sistem penguat elektronika. Respon tiap jenis
detektor terhadap bagian dari spektrum radiasi tidak sama, sehingga setiap
spektrofotometer menggunakan detektor yang paling cocok untuk daerah
pengukurannya.
14
2.3.2 Kegunaan Spektrofotometri Derivatif
Spektrofotometri derivatif dapat digunakan untuk analisis kuantitatif zat
dalam campuran yang spektrumnya mungkin tersembunyi dalam suatu bentuk
spektrum besar yang saling tumpang tindih dengan mengabaikan proses
pemisahan zat yang bertingkat – tingkat (Nurhidayati, 2007).
Beberapa keuntungan dari spektrofotometri derivatif antara lain yaitu
spektrum derivatif memberikan gambaran struktur yang terinci dari spektrum
serapan dan gambaran ini makin jelas dari spektum derivatif pertama ke derivatif
keempat (Munson, 1984).
Selain itu dapat dilakukan analisis kuantitatif suatu komponen dalam
campuran dengan panjang gelombangnya saling berdekatan. Bila dibandingkan
dengan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT), metode spektrofotometri
derivatif relatif lebih sederhana, alat dan biaya operasionalnya lebih murah dan
waktu analisisnya lebih cepat (Nurhidayati, 2007).
2.4 Validasi Metode Analisis
Hasil validasi metode dapat digunakan untuk memutuskan kualitas,
reabilitas, dan konsistensi dari hasil analisis. Adapun karakteristik dalam validasi
metode yaitu akurasi, presisi, spesifisitas, batas deteksi, batas kuantitasi, linieritas,
rentang, dan kekuatan/ketahanan (Huber, 2007).
2.4.1 Akurasi
Akurasi (kecermatan) adalah ukuran yang menunjukkan derajat kedekatan
hasil analisis dengan kadar analit sebenarnya. Akurasi dinyatakan sebagai persen
perolehan kembali (recovery) analit yang ditambahkan dan dapat ditentukan
15
melalui dua cara yaitu metode simulasi (spiked placebo recovery) dan metode
penambahan bahan baku atau standard addition method (Ermer dan McB. Miller,
2005; Harmita, 2004).
2.4.2 Presisi
Presisi adalah ukuran keterulangan metode analisis, termasuk di antaranya
kemampuan instrumen dalam melakukan hasil analisis yang reprodusibel. Presisi
dinyatakan sebagai standar deviasi relatif atau koefisien variasi. Keterulangan
dilakukan dengan cara menganalisis sampel yang sama oleh analis yang sama
menggunakan instrumen yang sama dalam periode waktu yang singkat. Presisi
antara dikerjakan oleh analis yang berbeda, sedangkan reprodusibilitas dikerjakan
oleh analis yang berbeda dan di laboratorium yang berbeda. Syarat koefisien
variasi bernilai kurang dari 2% (Satiadarma, dkk., 2004).
2.4.3 Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi
Batas deteksi adalah nilai parameter, yaitu konsentrasi analit terendah
yang dapat dideteksi yang masih memberikan respon signifikan dibandingkan
dengan blanko. Batas deteksi merupakan batas uji yang secara spesifik
menyatakan apakah analit yang dianalisis berada di atas atau di bawah nilai
tertentu. Batas kuantitasi adalah jumlah analit terkecil dalam sampel yang masih
dapat diukur dalam kondisi percobaan yang sama dan memenuhi kriteria cermat
dan seksama (Harmita, 2004).
2.4.4 Linearitas
Linieritas menunjukkan kemampuan suatu metode analisis untuk
memperoleh hasil pengujian yang sesuai dengan kisaran konsentrasi analit
tertentu. Hal ini dapat dilakukan dengan cara membuat kurva kalibrasi dari
16
beberapa set larutan baku yang telah diketahui konsentrasinya. Persamaan garis
yang digunakan pada kurva kalibrasi diperoleh dari persamaan y = ax + b.
Persaman ini akan menghasilkan koefisien korelasi (r). Koefisien korelasi inilah
yang digunakan untuk mengetahui linieritas suatu metode analisis. Kelinieran
suatu metode analisis adalah kemampuan untuk menunjukkan bahwa nilai hasil
uji langsung atau setelah diolah secara matematika, proporsional dengan
konsentrasi analit dalam sampel dalam batas rentang konsentrasi tertentu
(Satiadarma, dkk., 2004).
2.4.5 Rentang
Rentang adalah konsentrasi terendah dan tertinggi yang mana suatu
metode analitik menunjukkan akurasi, presisi dan linieritas yang cukup. Rentang
suatu prosedur dapat divalidasi lewat pembuktian bahwa prosedur analitik
tersebut mampu memberikan presisi, akurasi dan linieritas yang dapat diterima
ketika digunakan untuk menganalisis sampel (Ermer dan McB. Miller, 2005).
17
BAB III
METODE PENELITIAN
3.1 Jenis Penelitian
Penelitian ini termasuk jenis penelitian deskriptif dengan metode
spektrofotometri derivatif terhadap analisa campuran teofilin dan salbutamol yang
terkandung pada sediaan tablet.
3.2 Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilakukan pada bulan Juni sampai dengan Juli 2016 di
Laboratorium Penelitian Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.
3.3 Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah spektrofotometer UV-
visibel, Personal Computer (PC) yang dilengkapi software UV probe 2.42 (UV-
1800 Shimadzu), neraca analitik (Mettler Toledo), kuvet, kertas saring, bola karet,
spatula, alat-alat gelas dan alat-alat lainnya yang diperlukan dalam penyiapan
sampel.
3.4 Bahan
Bahan yang digunakan adalah NaOH 0,1 N, Baku Teofilin, Baku
Salbutamol, Sampel Tablet.
18
3.5 Pengambilan Sampel
Sampel yang digunakan yaitu tablet yang dijual dipasaran dengan merek X
yang mengandung teofilin 130 mg dan salbutamol 1 mg.
3.6 Prosedur Penelitian
3.6.1 Pembuatan Natrium Hidroksida 0,1 N (Ditjen POM RI, 1979)
Dilarutkan 4 gram NaOH dalam akuades bebas CO2 kemudian dicukupkan
sampai 1000 mL.
3.6.2 Pembuatan Larutan Induk Baku dan Larutan Standar
3.6.2.1 Pembuatan Larutan Induk Baku Teofilin
Ditimbang dengan seksama 50 mg baku teofilin kemudian dimasukkan ke
dalam labu tentukur 50 mL, dilarutkan dengan NaOH 0,1 N hingga larut,
dicukupkan volume dengan NaOH 0,1 N sampai garis tanda sehingga didapatkan
larutan dengan konsentrasi 1000 µg/mL (LIB I). Dari larutan LIB I dipipet 2,5
mL dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 mL dicukupkan dengan NaOH 0,1 N
sampai garis tanda sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi 100 µg/mL
(LIB II).
3.6.2.2 Pembuatan Larutan Induk Baku Salbutamol
Ditimbang dengan seksama 50 mg baku salbutamol kemudian dimasukkan
ke dalam labu tentukur 50 mL, dilarutkan dengan NaOH 0,1 N hingga larut,
dicukupkan volume dengan NaOH 0,1 N sampai garis tanda sehingga didapatkan
larutan dengan konsentrasi 1000 µg/mL (LIB I). Dari larutan LIB I dipipet 2,5
mL dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 mL dicukupkan dengan NaOH 0,1 N
19
sampai garis tanda sehingga didapatkan larutan dengan konsentrasi 100 µg/mL
(LIB II).
3.6.2.3 Pembuatan Larutan Standar Teofilin
Dipipet LIB II teofilin (konsentrasi 100 µg/mL) sebanyak 0,2 mL; 0,4 mL;
0,6 mL; 0,8 mL; 1 mL. Masing-masing dimasukkan ke dalam labu tentukur 10
mL, lalu diencerkan dengan NaOH 0,1 N hingga garis tanda. Kemudian dikocok
sampai homogen sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 2 µg/mL; 4
µg/mL; 6 µg/mL; 8 µg/mL; 10 µg/mL.
3.6.2.4 Pembuatan Larutan Standar Salbutamol
Dipipet LIB II salbutamol (konsentrasi 100 µg/mL) sebanyak 0,5 mL; 0,6
mL; 0,7mL; 0,8 mL; 0,9 mL. Masing-masing dimasukkan ke dalam labu tentukur
10 mL, lalu diencerkan dengan NaOH 0,1 N hingga garis tanda. Kemudian
dikocok sampai homogen sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 5
µg/mL; 6 µg/mL; 7 µg/mL; 8 µg/mL; 9 µg/mL.
3.6.3 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum
3.6.3.1 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum Teofilin
Dipipet sebanyak 0,6 mL LIB II teofilin (konsentrasi 100 µg/mL) lalu
dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 mL. Kemudian diencerkan dengan NaOH
0,1 N hingga garis tanda. Kemudian dikocok sampai homogen sehingga diperoleh
larutan dengan konsentrasi 6 µg/mL. Diukur serapannya pada panjang gelombang
200-400 nm.
3.6.3.2 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum Salbutamol
Dipipet sebanyak 0,7 mL LIB II salbutamol (konsentrasi 100 µg/mL) lalu
dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 mL. Kemudian diencerkan dengan NaOH
20
0,1 N hingga garis tanda. Kemudian dikocok sampai homogen sehingga diperoleh
larutan dengan konsentrasi 7 µg/mL. Diukur serapannya pada panjang gelombang
200-400 nm.
3.6.4 Pembuatan Spektrum Serapan Derivatif
3.6.4.1 Pembuatan Spektrum Serapan Derivatif Teofilin
Dibuat spektrum serapan (tanpa diderivatkan) dari larutan standar teofilin
dengan konsentrasi 10 µg/mL pada panjang gelombang 200-400 nm. Kemudian
spektrum ditransformasikan menjadi spektrum serapan derivat pertama dengan Δλ
= 2 nm.
3.6.4.2 Pembuatan Spektrum Serapan Derivatif Salbutamol
Dibuat spektrum serapan (tanpa diderivatkan) dari larutan standar
salbutamol dengan konsentrasi 6 µg/mL pada panjang gelombang 200-400 nm.
Kemudian spektrum ditransformasikan menjadi spektrum serapan derivat pertama
dengan lambda Δλ = 2 nm.
3.6.5 Penentuan Zero Crossing.
Penentuan zero crossing diperoleh dengan menumpangtindihkan spektrum
serapan masing-masing derivat dalam berbagai konsentrasi larutan. Zero crossing
masing-masing zat ditunjukkan oleh panjang gelombang yang memiliki serapan
nol pada berbagai konsentrasi.
3.6.6 Penentuan Panjang Gelombang Analisis
Dibuat larutan teofilin dengan konsentrasi 10 µg/mL, larutan salbutamol
dengan konsentrasi 6 µg/mL, dan larutan campuran teofilin 10 µg/mL dan
salbutamol 6 µg/mL. Kemudian ketiga larutan itu diukur serapannya pada panjang
gelombang 200-400 nm. Selanjutnya ditransformasikan menjadi spektrum serapan
21
derivat pertama dari masing-masing zat tunggal dan dari campuran teofilin dan
salbutamol. Spektrum serapan derivat pertama dari larutan zat tunggal dan
campuran keduanya ditumpangtindihkan. Yang dipilih menjadi panjang
gelombang analisis adalah yang pada panjang gelombang tertentu, serapan
tunggal salah satu senyawa nol sedangkan serapan tunggal senyawa pasangannya
dan campuran keduanya hampir sama atau persis sama karena pada panjang
gelombang tersebut dapat secara selektif mengukur serapan salah satu senyawa
tanpa diganggu oleh serapan senyawa pasangannya.
3.6.7 Pembuatan dan Penentuan Linearitas Kurva Kalibrasi
3.6.7.1 Pembuatan dan Penentuan Linearitas Kurva Kalibrasi Teofilin
Dibuat larutan standar teofilin dengan konsentrasi 2 µg/mL; 4 µg/mL; 6
µg/mL; 8 µg/mL; 10 µg/mL, kemudian diukur serapan derivat pertama (Δλ = 2
nm) pada panjang gelombang analisis yang telah ditentukan. Kemudian dilakukan
analisis hubungan antara konsentrasi dan nilai serapan sehingga diperoleh
persamaan regresi linear y = ax + b. Dan berdasarkan nilai serapan pada panjang
gelombang analisis, dilakukan pula perhitungan limit deteksi / limit of detection
(LOD) dan limit kuantitasi / limit of quantitation (LOQ). Menurut Sudjana (2005)
untuk menentukan batas deteksi (LOD) dan batas kuantitasi (LOQ) dapat
digunakan rumus :
∑(𝑦−𝑦𝑖)2
SB = √ 𝑛−2
3XSB
LOD = slope
10XSB
LOQ = slope
22
Keterangan :
SB = Simpangan Baku
LOD = Limit of Detection
LOQ = Limit of Quantitation
3.6.7.2 Pembuatan dan Penentuan Linearitas Kurva Kalibrasi Salbutamol
Dibuat larutan standar salbutamol dengan konsentrasi 5 µg/mL; 6 µg/mL; 7
µg/mL; 8 µg/mL; 9 µg/mL, kemudian diukur serapan derivat pertama (Δλ =
2 nm) pada panjang gelombang analisis yang telah ditentukan. Kemudian
dilakukan analisis hubungan antara konsentrasi dan nilai serapan sehingga
diperoleh persamaan regresi linear y = ax + b. Dan berdasarkan nilai serapan pada
panjang gelombang analisis, dilakukan pula perhitungan limit deteksi / limit of
detection (LOD) dan limit kuantitasi / limit of quantitation (LOQ). Perhitungan
untuk menentukan LOD dan LOQ seperti pada rumus sebelumnya.
3.6.8 Penentuan Kadar Teofiilin dan Salbutamol dalam Tablet
Dua puluh tablet yang mengandung teofilin 130 mg dan salbutamol 1 mg
ditimbang lalu digerus dalam lumpang sampai halus dan homogen. Kemudian
ditimbang seksama sejumlah serbuk setara dengan 50 mg teofilin, kemudian dari
berat sampel yang ditimbang setara 50 mg teofilin ini dihitung kesetaraan
salbutamol yang terkandung di dalamnya (penimbangan serbuk sebanyak 6 kali
pengulangan), dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL dan ditambahkan
NaOH 0,1 N sampai garis tanda. Larutan kemudian dihomogenkan dengan
pengaduk ultrasonik selama 10 menit. Larutan tersebut kemudian disaring, lebih
kurang 10 mL filtrat ini dibuang kemudian filtrat penyaringan selanjutnya
ditampung, dipipet sebanyak 0,1 mL ke dalam labu 10 mL, dan diencerkan
dengan NaOH 0,1 N hingga garis tanda. Diukur serapannya pada panjang
23
gelombang 200-400 nm, kemudian spektrumnya diderivatkan pada derivat
pertama (Δλ = 2 nm); panjang gelombang 270 nm dan 275 nm.
3.6.9 Analisis Data Penetapan Kadar Secara Statistik
Data perhitungan kadar teofilin dan salbutamol dianalisis secara statistik
dengan menggunakan uji T. Menurut Sudjana (2005) rumus yang digunakan :
2
∑(𝑋𝑖−𝑋̅ )
SD = √ 𝑛−1
Untuk mencari t hitung digunakan rumus:

𝑋𝑖− 𝑋̅
thitung = |𝑆𝐷/ |
√𝑛
Data diterima jika –ttabel < 𝑡hitung < 𝑡tabe𝑙 pada interval kepercayaan 99% dengan
nilai α = 0,01.
Keterangan:
SD = Standar deviation / simpangan baku

Xi = Kadar dalam satu perlakuan
𝑋̅ = Kadar rata – rata dalam satu sampel (mg/100g)
n = Jumlah perlakuan
α = Tingkat kepercayaan
Menurut Sudjana (2005) untuk menghitung kadar teofilin dan salbutamol
sebenarnya dalam sampel statistik dapat digunakan rumus :
µ = 𝑥̅ ± (t(α/2, dk) x SD/√𝑛
Keterangan:
SD = Standar deviation / simpangan baku

𝑥̅ = Kadar rata–rata dalam satu sampel (mg/100g)
n = Jumlah perlakuan
t = Harga ttabel sesuai dengan derajat kepercayaan
24
3.6.10 Uji Validasi
3.6.10.1 Uji Akurasi
Uji akurasi dilakukan dengan cara penambahan bahan baku yaitu dengan
membuat 3 konsentrasi analit sampel dengan rentang spesifik 80%, 100%, 120%.
Dimana pada masing-masing rentang spesifik digunakan 70% sampel dan 30%
baku yang akan ditambahkan (Harmita, 2004).
Dua puluh tablet yang mengandung teofilin 130 mg dan salbutamol 1 mg
ditimbang lalu digerus dalam lumpang sampai halus dan homogen. Pada masing-
masing rentang spesifik, ditimbang seksama sejumlah serbuk setara dengan 70%
analit teofilin dalam sampel yang setara dengan 50 mg, kemudian dari berat
serbuk yang ditimbang 70% teofilin ini dihitung kesetaraan salbutamol yang
terkandung di dalamnya, kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 mL.
Ditambahkan baku teofilin dan baku salbutamol masing-masing sebanyak 30%,
lalu ditambahkan pelarut NaOH 0,1 N sampai garis tanda. Larutan kemudian
dihomogenkan dengan pengaduk ultrasonik selama 10 menit. Larutan tersebut
kemudian disaring, lebih kurang 10 mL filtrat ini dibuang kemudian filtrat
penyaringan selanjutnya ditampung, dipipet sebanyak 0,1 mL ke dalam labu 10
mL, dan diencerkan dengan NaOH 0,1 N hingga garis tanda (Faktor Pengencer =
10/0,1 = 100 kali).
Kemudian campuran sampel dan baku diukur serapannya pada panjang
gelombang 200-400 nm, selanjutnya spektrum serapan ditransformasikan menjadi
spektrum serapan derivat pertama dengan Δλ = 2 nm pada panjang gelombang
analisis teofilin dan salbutamol masing masing 270 nm dan 275 nm. Menurut
25
Harmita (2004), persen perolehan kembali dapat dihitung dengan menggunakan
rumus sebagai berikut:
𝐶𝑓 −𝐶𝐴
% perolehan kembali = x 100 %
𝐶𝐴∗
Keterangan:
CF = Konsentrasi sampel setelah penambahan bahan baku
CA = Konsentrasi sampel sebelum penambahan bahan baku
C*A= Jumlah baku yang ditambahkan
3.6.10.2 Uji Presisi
Presisi diukur sebagai simpangan baku relatif atau koefisien variasi.
Presisi merupakan ukuran yang menunjukkan derajat kesesuaian antara hasil uji
individual ketika suatu metode dilakukan secara berulang untuk sampel yang
homogen. Nilai simpangan baku relatif yang memenuhi persyaratan menunjukkan
adanya keseksamaan metode yang dilakukan (Harmita, 2004).
Menurut Gandjar dan Rohman (2008), uji presisi (keseksamaan)
ditentukan dengan parameter RSD dengan rumus :

𝑆𝐷
RSD = x 100%
𝑋̅
Keterangan :
X = Kadar rata-rata sampel

SD = Standard Deviation
RSD = Relative Standar Deviation
26
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Penentuan Kurva Serapan Maksimum
Penentuan kurva serapan maksimum dilakukan pada panjang gelombang
200-400 nm. Hasil penentuan kurva serapan maksimum teofilin dan salbutamol
masing-masing dapat dilihat dari Gambar 4.1 dan 4.2. Kurva tumpang tindih
serapan maksimum teofilin dan salbutamol dapat dilihat pada Gambar 3.3.
0,44008
0,40000
0,20000
Abs.
0,00000
-0,10561
230,00 250,00 300,00 350,00 400,00
nm .
Gambar 4.1 Kurva serapan maksimum teofilin 6 µg/mL
Dari Gambar 4.1 diatas dapat dilihat serapan maksimum teofilin terdapat
pada panjang gelombag 270 nm.

0,44008
0,40000
0,20000
Abs.
0,00000
-0,10561
230,00 250,00 300,00 350,00 400,00
nm .
Gambar 4.2 Kurva serapan maksimum salbutamol 7 µg/mL
Dari Gambar 4.2 diatas dapat dilihat serapan maksimum salbutamol terdapat
pada panjang gelombang 244,5 nm dan 275 nm.
27
0,44008
0,40000
Teofilin 6 µg/mL
Salbutamol 7 µg/mL
0,20000
Abs.
0,00000
-0,10561
230,00 250,00 300,00 350,00 400,00
nm .
Gambar 4.3 Kurva tumpang tindih serapan maksimum teofilin dan salbutamol.
Pada Gambar 4.3 dapat dilihat bahwa komponen tunggal teofilin dan
salbutamol saling tumpang tindih sehingga dilakukan derivatisasi untuk
memperoleh zero crossing terhadap masing-masing komponen.
4.2 Penentuan Kurva Serapan
Hasil penentuan kurva serapan dibuat dengan membuat larutan teofilin
dengan konsentrasi 2 µg/mL; 4 µg/mL; 6 µg/mL; 8 µg/mL; 10 µg/mL dan larutan
salbutamol 5 µg/mL; 6 µg/mL; 7 µg/mL; 8 µg/mL; 9 µg/mL, kemudian dibuat
kurva serapan pada panjang gelombang 200-400 nm. Kurva serapan dari masing-
masing zat pada berbagai konsentrasi tersebut ditumpangtindihkan. Kurva serapan
tumpangtindih serapan teofilin dan salbutamol masing-masing dapat dilihat pada
Gambar 4.4 dan 4.5.
28
1,36653
1,00000 2 µg/mL
4 µg/mL
6 µg/mL
Abs.
0,50000 8 µg/mL
10 µg/mL
0,00000
-0,38029
230,00 250,00 300,00 350,00 400,00
nm .
Gambar 4.4 Kurva tumpang tindih serapan teofilin
1,36653
5µg/mL
1,00000 6 µg/mL
7 µg/mL
8 µg/mL
Abs.
0,50000 9 µg/mL
0,00000
-0,38029
230,00 250,00 300,00 350,00 400,00
nm .
Gambar 4.5 Kurva tumpang tindih serapan salbutamol
4.3 Penentuan Panjang Gelombang Analisis
Hasil penentuan panjang gelombang analisis dilakukan dengan cara
membuat larutan teofilin dengan konsentrasi 10 µg/mL, salbutamol dengan
konsentrasi 6 µg/mL, dan larutan campuran teofilin dan salbutamol dengan
konsentrasi masing-masing 10 µg/mL dan 6 µg/mL. Kemudian dibuat spektrum
serapan derivat pertama dari masing-masing zat tunggal dan campuran zat.
Spektrum serapan derivat pertama dari larutan zat tunggal dan campuran
keduanya ditumpangtindihkan. Kurva serapan derivat pertama teofilin konsentrasi
10 µg/mL, salbutamol konsentrasi 6 µg/mL dan campuran keduanya dapat dilihat
masing-masing pada Gambar 4.6, 4.7 dan 4.8. Kurva tumpang tindih serapan
29
derivat pertama teofilin dan salbutamol konsentrasi masing-masing 10 µg/mL dan
6 µg/mL dapat dilihat pada Gambar 4.9.
0,04504
0,04000
0,02000
Abs.
0,00000
-0,02000
-0,04000
-0,04938
220,00 250,00 300,00 350,00 400,00
nm .
Gambar 4.6 Kurva serapan teofilin konsentrasi 10 µg/mL
0,02208
0,02000
0,01000
Abs.
0,00000
-0,01000
-0,02052
220,00 250,00 300,00 350,00 400,00
nm .
Gambar 4.7 Kurva serapan salbutamol konsentrasi 6 µg/mL

0,04504
0,04000
0,02000
Abs.
0,00000
-0,02000
-0,04000
-0,04938
230,00 250,00 300,00 350,00 400,00
nm .
Gambar 4.8 Kurva serapan teofilin dan salbutamol konsentrasi masing-masing

10 µg/mLdan 6 µg/mL
30
0,04504
0,04000
270 nm
233 nm Teofilin10 µg/mL
Abs. 0,02000
Salbutamol 6 µg/mL
0,00000
-0,02000
-0,04000 224,5 nm 275 nm

-0,04938
220,00 250,00
nmnmnm
300,00 350,00 400,00
nm .
Gambar 4.9 Kurva Tumpang tindih serapan teofilin dan salbutamol pada derivat
pertama
Dari Gambar 4.9 dapat dilihat hasil tumpang tindih serapan derivat pertama
teofilin dan salbutamol diperoleh zero crossing pada panjang gelombang 270 nm,
233 nm untuk teofilin dan 275 nm, 224,5 nm untuk salbutamol.
Untuk menentukan panjang gelombang analisis pada spektrum serapan pada
derivat dilakukan dengan mengamati panjang gelombang yang menunjukkan
serapan senyawa pasangannya nol dan serapan senyawa lain dan campurannya
memiliki nilai serapan sama atau hampir sama. Kurva tumpang tindih serapan
derivat pertama teofilin konsentrasi 10 µg/mL, salbutamol konsentrasi 6 µg/mL
dan campuran teofilin dan salbutamol konsentrasi masing-masing 10 µg/mL dan
6 µg/mL dapat dilihat pada Gambar 4.10. Spektrum panjang gelombang analisis
teofilin dan salbutamol dapat dilihat pada Gambar 4.11 dan 4.12.
0 ,0 4 5 0 4
0 ,0 4 0 0 0
Teofilin10 µg/mL
0 ,0 2 0 0 0
Salbutamol 6 µg/mL
Campuran Teofilin10 µg/mL
Abs.
0 ,0 0 0 0 0
Salbutamol 6 µg/mL
-0 ,0 2 0 0 0
-0 ,0 4 0 0 0
-0 ,0 4 9 3 8
2 3 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0 0 ,0 0
nm .
Gambar 4.10 Kurva Tumpang tindih serapan derivat pertama teofilin, salbutamol
dan campuran teofilin dan salbutamol
31
0,04504
0,04000
270 nm
Teofilin10 µg/mL
Salbutamol 6 µg/mL
0,02000
Campuran Teofilin10
µg/mL Salbutamol 6
Abs.
0,00000
µg/mL
-0,02000
-0,04000
-0,04938
230,00 250,00 300,00 350,00 400,00
nm .
Gambar 4.11 Panjang gelombang analisis teofilin λ = 270 nm

0,04504
0,04000
Teofilin10 µg/mL
Salbutamol 6 µg/mL
0,02000 275
Campuran Teofilin10
µg/mL Salbutamol 6
Abs.
0,00000
µg/mL
-0,02000
-0,04000
-0,04938
260,00 300,00 350,00 400,00
nm .
Gambar 4.12 Panjang gelombang analisis salbutamol λ = 275 nm
Panjang gelombang analisis ditentukan dengan cara menumpangtindihkan
spektrum serapan masing-masing derivat teofilin, salbutamol dan campuran
teofilin dan salbutamol. Selanjutnya ditentukan panjang gelombang dimana
absorbansi salah satu dari zat berada pada nilai nol sedangkan zat lain memiliki
nilai serapan yang sama atau hampir sama dengan campurannya. Pada serapan
derivat pertama, panjang gelombang analisis untuk teofilin dan salbutamol dapat
ditentukan, sehingga penetapan kadar campuran teofilin dan salbutamol pada
sediaan tablet bisa dilakukan derivat pertama.
Setelah spektrum serapan derivat pertama dari kedua zat dan campuran
ditumpangtindihkan, didapatkan panjang gelombang analisis untuk teofilin 270
32
nm dan salbutamol 275 nm. Panjang gelombang analisis dan absorbansi pada
derivat pertama dapat dilihat pada Tabel 4.1.
Tabel 4.1 Panjang Gelombang Analisis dan Absorbansi pada Derivat Pertama
Panjang Absorbansi
Gelombang Teofilin 10 µg/mL Salbutamol Campuran
(nm) 6 µg/mL Teofilin dan
Salbutamol
244,50 0,0008 0,0000 -0,0720
233 0,0000 0,0093 -0,0169
270 0,0154 0,0000 0,0164
275 0,0000 0,0015 0,0017
Berdasarkan Tabel 4.1 diperoleh panjang gelombang analisis teofilin dan
salbutamol yang digunakan masing-masing 270 nm dan 275 nm. Penentuan
panjang gelombang analisis didasarkan pada nilai absorbansi ketiga larutan pada
panjang gelombang tersebut.
Menurut Hayun, dkk., (2006), ada beberapa ketentuan untuk dijadikan
panjang gelombang zero crossing yaitu:
a. Serapan senyawa pasangannya dan campurannya sama atau hampir
sama, karena pada panjang gelombang tersebut dapat secara selektif
mengukur senyawa pasangannya.
b. Memiliki serapan yang paling besar, karena pada serapan tersebut,
serapannya lebih stabil sehingga kesalahan analisisnya dapat
diperkecil.
Pada panjang gelombang analisis 270 nm, nilai absorbansi salbutamol
adalah nol, sedangkan nilai absorbansi untuk salbutamol dan larutan campuran
kedua zat tersebut memiliki nilai serapan hampir sama yaitu masing-masing
0,0154 dan 0,0164 sehingga panjang gelombang analisis untuk teofilin adalah
270. Panjang gelombang analisis 275 nm nilai absorbansi dari teofilin adalah nol
33
sedangkan untuk salbutamol dan larutan campuran kedua zat tersebut memiliki
nilai serapan yang hampir sama yaitu 0,0015 dan 0,0017 sehingga anjang
gelombang analisis untuk salbutamol adalah 275. Dari semua titik zero crossing,
pada panjang gelombang 270 nm dan 275 nm yang menunjukkan nilai absorbansi
lebih besar daripada yang lainnya serta bernilai positif. Karena pada panjang
gelombang tersebut dapat secara selektif mengukur serapan senyawa pasangannya
dan memiliki serapan yang paling besar. Pada serapan yang paling besar, serapan
lebih stabil sehingga kesalahan analisis bisa diperkecil. Prinsip ini dibutuhkan
untuk memperkecil kesalahn analisis sampel (Nurhidayati, 2007).
4.4 Hasil Penentuan Linearitas Kurva Kalibrasi
4.4.1 Kurva Kalibrasi
Linearitas kurva kalibrasi menunjukkan hubungan yang linear antara
absorbansi dengan konsentrasi. Persamaan regresi teofilin, Y = 0,00161X +
0,00006 dengan korelasi r = 0,9998 dan salbutamol, Y = 0,00025X + 0,00004
dengan korelasi r = 0,9998. Nilai r > 0,995 menunjukkan adanya korelasi linier
antara X dan Y (Moffat,et al., 2005). Kurva kalibrasi teofilin dan salbutamol pada
masing-masing panjang gelombang 270 nm dan 275 nm dapat dilihat pada
Gambar 4.13 dan 4.14. Data kalibrasi, persamaan regresi dan koefisien korelasi
dapat dilihat pada Lampiran 7 halaman 54 dan Lampiran 8 halaman 56 .
34
0,018
0,016
0,014
0,012
0,01
0,008
0,006
0,004
0,002
0
0 2 4 6 8 10 12
Gambar 4.13 Kurva kalibrasi teofilin pada panjang gelombang 270 nm
0,0025
0,002
0,0015
0,001
0,0005
0
0 2 4 6 8 10
Gambar 4.14 Kurva kalibrasi salbutamol pada panjang gelombang 275 nm
4.4.2 Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi
Batas deteksi dan batas kuantitasi dihitung dari persamaan regresi yang
diperoleh dari kurva kalibrasi. Batas deteksi teofilin dan salbutamol adalah 3,1823
μg/mL dan 0,0711 μg/mL secara berturut-turut dan batas kuantitasi teofilin dan
salbutamol adalah 1,0577 μg/mL dan 0,2370 µg/mL secara berturut-turut.
35
Perhitungan batas deteksi dan batas kuantitasi tersebut dapat dilihat pada
Lampiran 9 halaman 58 dan Lampiran 10 halaman 59 .
Hal tersebut menunjukkan bahwa penentuan kadar teofilin dengan
konsentrasi 10 μg/mL dan salbutamol dengan konsentrasi 6 μg/mL dapat dideteksi
dan diukur menggunakan metode spektrofotometri derivatif.
Batas deteksi adalah konsentrasi analit terendah dalam sampel yang masih
dapat dideteksi. Batas kuantitasi didefenisikan sebagai konsentrasi analit terendah
dalam sampel yang masih dapat memenuhi kriteria cermat dan seksama (Gandjar
dan Rohman, 2008).
4.5 Hasil Penentuan Kadar Teofilin dan Salbutamol dalam Sediaan Tablet
Penentuan penetapan kadar teofilin dan salbutamol dalam tablet yang
beredar diapotik mengandung masing-masing teofilin 130 mg dan salbutamol 1
mg. Sedangkan pengukuran teofilin dan salbutamol baku pada keduasediaan
masing-masing teofilin 10 μg/mL dan salbutamol 6 μg/mL.
Sampel yang telah dipreparasi kemudian diukur pada panjang gelombang
200 – 400 nm. Selanjutnya spektrum hasil serapan ditransformasikan menjadi
spektrum serapan derivat pertama dengan Δλ = 2 nm. Berdasarkan spektrum
tersebut dapat ditentukan absorbansi teofilin dan salbutamol pada panjang
gelombang analisis yang telah diperoleh sebelumnya, yaitu panjang gelombang
270 nm dan 275 nm.
Data hasil perhitungan kadar teofilin dan salbutamol pada sediaan dagang X
setelah dilakukan analisa secara statistik dapat dilihat pada Tabel 4.2.
36
Tabel 4.2 Kadar teofilin dan salbutamol dalam tablet
Sediaan Kadar Teofilin (%) Kadar Salbutamol (%)
Tablet X (100,02 ± 0,56)% (99,75 ± 0,27)%
Dari Tabel 4.2 dapat dilihat bahwa kadar teofilin dan salbutamol pada tablet
X telah memenuhi persyaratan kadar. Persyaratan kadar untuk sediaan tablet
teofilin menurut USP 30-NF 25 (2007) persyaratan kadar untuk tablet teofilin
yaitu tidak kurang dari 97,0% dan tidak lebih dari 102,0% dari jumlah yang
tertera pada etiket dan persyaratan kadar untuk sediaan tabletsalbutamol menurut
Farmakope Indonesia Edisi IV (1995) yaitu tidak kurang dari 98,5% dan tidak
lebih dari 101% dari jumlah yang tertera pada etiket.
4.6 Hasil Uji Validasi
4.6.1 Hasil Uji Akurasi

Uji akurasi dengan parameter persen perolehan kembali dilakukan dengan
menggunakan tablet X. Metode penambahan baku dilakukan dengan
menambahkan sejumlah tertentu larutan baku ke dalam sampel yang telah diadisi.
Kemudian larutan diukur serapannya sesuai panjang gelombang analisis yang
digunakan. Spektrum serapan uji perolehan kembali teofilin dan salbutamol dalam
tablet X dapat dilihat pada Lampiran 16 halaman 72. Sedangkan data dan
perhitungan uji perolehan kembali teofilin dan salbutamol dalam tablet dapat
dilihat pada Lampiran 17 halaman 76 dan Lampiran 18 halaman 77.
37
Tabel 4.3 Hasil perolehan kembali teofilin dan salbutamol dengan metode
penambahan baku standar (standard addition method) pada tablet X
Rentang Spesifik Perolehan Perolehan kembali

% kembali Salbutamol(%)
Teofilin (%)
98,99 98,91
80 99,49 99,34
98,97 99,34
99,22 98,43
100 98,78 100,34
100,42 100,34
101,2 98,26
120 101,02 98,26
101,02 101,01
Rata-rata (% recovery) 99,09 99,35
Standard Deviation (SD) 1,0 1,0
Relative Standard Deviation (RSD) (%) 1,0 1,0
Tabel 4.3 menunjukkan bahwa rata-rata persen perolehan kembali yang
diperoleh yaitu 99,09 untuk teofilin dan 99,35 untuk salbutamol. Dimana rata-rata
persen perolehan kembali memenuhi syarat akurasi untuk validasi prosedur
analitik karena rata-rata berada diantara rentang 98-102% (Harmita, 2004).
4.6.2 Hasil Uji Presisi
Uji presisi dilakukan dengan perhitungan simpangan baku relatif.
Berdasarkan data perhitungan terhadap kadar teofilin dan salbutamol, diperoleh
simpangan baku relatif untuk teofilin dan salbutamol yaitu 1,0% dan 1,0%. Hasil
simpangan baku relatif untuk teofilin dan salbutamol memenuhi persyaratan yaitu
≤ 2% (Harmita, 2004). Perhitungan dan data simpangan baku relatif untuk teofilin
dan salbutamol dapat dilihat pada Lampiran 20 halaman 83 dan Lampiran 21
halaman 84.
38
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
a. Campuran teofilin dan salbutamol dalam sediaan tablet dapat ditetapkan
kadarnya dengan menggunakan spektrofotometri derivatif dengan zero
crossing dan memenuhi syarat validasi metode
b. Kadar campuran teofilin dan salbutamol dalam sediaan tablet yang
ditetapkan kadarnya menggunakan spektrofotometri derivatif memenuhi
persyaratan kadar sediaan
5.2 Saran
Disarankan agar dilakukan penelitian lebih lanjut pada penetapan kadar
campuran teofilin dan salbutamol pada sediaan tablet dengan menggunakan
pelarut yang berbeda pada metode spektrofotometri derivatif dengan zero
crossing.
39
DAFTAR PUSTAKA
Cairns, D. (2008). Essentials of Pharmaceutical Chemistry. Edisi III. London:

Pharmaceutical Press. Halaman 159 - 179.
Day, R.A., dan Underwood, A.L. (1998). Quantitative Analysis. Edition VI.
Penerjemah: Sopyan, I. (2002). Analisis Kimia Kuantitatif. Edisi VI. Jakarta:
Penerbit Erlangga. Halaman 413.
Ditjen POM RI. (1979). Farmakope Indonesia. Edisi III. Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 412.
Ditjen POM RI. (1995). Farmakope Indonesia. Edisi IV. Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 751.
El-Sayed, A.A.Y., dan El-Salem, N.A. (2005). Recent Development of Derivative
Spectrofotometry and Their Analytical Application. Analytical Science. The
Japan Society for Analytical Chemistry. 21: 595-596.
Ermer, J., dan McB. Miller, J.H. (2005). Method Validation in Pharmaceutical
Analysis: A Guide to Best Practice. Weinheim: Wiley-VCH. Halaman 63 -
99.
Gandjar, I.G., dan Rohman, A. (2012). Analisis Obat Secara Spektroskopi dan
Kromatografi. Yogyakarta: Pustaka Pelajar. Halaman 60 - 97.
Gandjar, I.G., dan Rohman, A. (2008). Kimia Farmasi Analisis. Cetakan

Pertama. Yogyakarta: Pustaka Pelajar. Halaman 240, 241, 242.
Harmita. (2004). Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara

Perhitungannya. Majalah Ilmu Kefarmasian I(3). Halaman 117–135.
Hayun, Harinto, dan Yenti. (2006). Penetapan Kadar Tripolidina Hidroklorida dan
Pseudoefedrin Hidriklorida dalam Tablet Anti Influenza Secara
Spektrofotometri Derivatif. Majalah Ilmu Kefarmasian. 3(1): 94-98.
Huber, L. (2007). Validation and Qualification in Analytical Laboratories. Edisi

II. New York: Informa Healthcare USA, Inc. Halaman 125-126.
Khopkar, S. M. (1985). Basic Concepts of Analytical Chemistry. Penerjemah:
Saptorahardjo, A. (1990). Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta:
Universitas Indonesia. Halaman 215, 216.
Moffat, A.C., Osselton, M.D., dan Widdop, B. (2005). Clarke’s Analysis of Drug
and Poisons. Edition III. London: Pharmaceutical Press. Halaman 97-
102.
40
Munson, J.W. (1984). Pharmaceutical Analysis: Modern Methods. Part B.
Penerjemah: Harjana. (1991). Analisis Farmasi: Metode Modern. Parwa B.
Surabaya: Airlangga University Press. Halaman 334 dan 385.
Nurhidayati, L. (2007). Spektrofotometri Derivatif dan Aplikasinya dalam Bidang
Farmasi. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia 5(2) : 93-99.
Ojeda, C.B., dan Rojas, F.S. (2013). Recent Aplication in Derivative

Ultraviolet/Visible Absorption Spectrophotometry: 2009-2011: Review.
Microchemical Journal. 106: 1-16.
Owen, A.J. (1995). Uses of Derivative Spectroscopy Aplication Note UV - Visible

Spectroscopy. HP Way: Agilent Technologies. Halaman 1-2.
Satiadarma, K., Mulja, H.M., Tjahjono, D.H., dan Kartasasmita, R.E. (2004). Asas
Pengembangan Prosedur Analisis. Edisi I. Surabaya: Airlangga University
Press. Halaman 46-47, 88-91, 97.
Setiawati, A., dan Gan, S. (2007). Penghambat Adrenergik. Dalam: Gunawan, S.

G., Setiabudy, R., dan Nefrialdi. (2007). Farmakologi dan Terapi Edisi V.
Jakarta: Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Halaman 85-104.
Sudjana.(2005). Metode Statistik. Edisi VI. Bandung: Penerbit Tarsito. Halaman

168.
Talsky, G. (1994). Derivative Spectrophotometry Low and Higher Order.

Germany: VCH Verlagsgesellschaft mbH. Halaman 33-36.
Tan, T.H., dan Rahardja, K. (2007). Obat-Obat Penting Kasiat, Penggunaan, dan
Efek-Efek Sampingnya. Edisi VI. Jakarta: PT. Elex Media Komputindo.
Halaman 646, 651.
USP 30-NF 25. (2007). The United States Pharmacopoeia 30 and The National
Formulary. Edition XXX: The United States Pharmacopoeial Convention.
Halaman 1586.
41
Lampiran 1. Gambar Sampel X
a.
b.
c.
Gambar 1. Tablet X
Keterangan :
a = Tablet X dalam kemasan
b = Tablet X
c = Tablet X sudah digerus homogen
42
Lampiran 2. Komposisi Tablet X
Daftar Spesifikasi Sampel
No. Reg : DKL9231102410A1
Expire Date : September 2017
Komposisi : Theophylline…………................... 130 mg
Salbutamol ……………….………. 1 mg
43
Lampiran 3. Gambar Alat
Gambar 2. Spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu 1800)
Gambar 3. Neraca analitik (Mettler Toledo)
Gambar 4. Sonikator (Branson 1510)
44
Lampiran 4. Perhitungan Pembuatan NaOH 0,1 N
𝑔𝑟𝑎𝑚 1000
N = X 𝑚𝐿 𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡𝑎𝑛
𝐵𝐸
𝑔𝑟𝑎𝑚 1000
0,1 = X 1000
40
gram NaOH = 4 gram
45
Lampiran 5. Bagan Alir Prosedur Penelitian
Teofilin
ditimbang 50 mg
dimas
dimasukkan kedalam labu
tentukur 50 mL
dilarutkan dan dicukupkan

dengan NaOH 0,1 N
LIB Teofilin 1000 µg/mL
dipipet 2,5 mL
dimasukk dimasukkan ke dalam labu
tentukur 25 mL
dengan NaOH 0,1 N
LIB Teofilin 100 µg/mL
dipipet dipipet dipipet dipipet dipipet

0,2 mL 0,4 mL 0,6 mL 0,8 mL 1 mL
dimasuk dimasuk dimasuk dimasuk dimasuk

kan ke kan ke kan ke kan ke kan ke
dalam dalam dalam dalam dalam
labu 10 labu 10 labu 10 labu 10 labu 10
mL mL mL mL mL
ditambah ditambah ditambah ditambah ditambah

kan NaOH kan NaOH kan NaOH kan NaOH kan NaOH
sampai sampai sampai sampai sampai
garis tanda garis tanda garis tanda garis tanda garis tanda
2 4 6 8 10
µg/mL µg/mL µg/mL µg/mL µg/mL
46
Lampiran 5. (Lanjutan)
Salbutamol
ditimbang 50 mg
dimasukk
dimasukkan kedalam labu
tentukur 50 mL

dengan NaOH 0,1 N
LIB Salbutamol 1000 µg/mL
dipipet 2,5 mL
dimasukk dimasukkan ke dalam labu
tentukur 25 mL
dengan NaOH 0,1 N
LIB Salbutamol 100 µg/mL
dipipet dipipet dipipet dipipet dipipet

0,5 mL 0,6 mL 0,7 mL 0,8 mL 0,9 mL
dimasuk dimasuk dimasuk dimasuk dimasuk

kan ke kan ke kan ke kan ke kan ke
dalam dalam dalam dalam dalam
labu 10 labu 10 labu 10 labu 10 labu 10
mL mL mL mL mL
ditambah ditambah ditambah ditambah ditambah

kan NaOH kan NaOH kan NaOH kan NaOH kan NaOH
sampai sampai sampai sampai sampai
garis tanda garis tanda garis tanda garis tanda garis tanda
5 6 7 8 9
µg/m µg/m µg/mL µg/mL µg/mL
L L L
47
Larutan Standar Teofilin
(2; 4; 6; 8; 10) µg/mL
diukur serapan pada λ 200-400 nm
ditrasformasikan ke serapan derivat

pertama
ditentukan zero crosisng
ditentukan panjang gelombang analisis
λ 270 nm
dibuat kurva kalibrasi
Persamaan Regresi
Y = 0,00161 X + 0,00006
48
Larutan Standar Salbutamol
(5; 6; 7; 8; 9) µg/mL
diukur serapan pada λ 200-400 nm
ditrasformasikan ke serapan derivat

pertama
ditentukan zero crosisng
ditentukan panjang gelombang analisis
λ 275 nm
dibuat kurva kalibrasi
Persamaan Regresi
Y = 0,00025 X + 0,00004
49
20 Tablet
ditimbang
digerus dalam lumpang sampai halus dan

homongen
Serbuk
ditimbang setara 50 mg teofilin

dihitung kesetaraan salbutamol
yang terkandung didalamnya (penimbangan
dilakukan sebanyak 6 kali pengulangan)
dimasukkan kedalam labu tertukur 50 mL
dilarutkan dengan NaOH 0,1 N
dihomongenkan dengan sonikator
selama 15 menit
dicukupkan dengan NaOH sampai garis tanda
disaring, dibuang ± 10 mL fitral pertama
ditampung fitral selanjutnya
dipipet 0,1 mL
dimasukkan kedalam labu tertukar 10 mL
dicukupkan dengan NaOH 0,1 N
sampai garis tanda
diukur serapan pada derivat pertama, panjang
gelombang 270 nm dan 275 nm
Nilai Absorbansi
Kadar
50
Lampiran 6. Spektrum Serapan Teofilin Baku dan Salbutamol Baku
a. 0 ,9 1 1 8 8
Abs. 0 ,5 0 0 0 0
0 ,0 0 0 0 0
-0 ,3 0 0 2 6
2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0 0 ,0 0
nm .
b. 0 ,9 1 1 8 8
0 ,5 0 0 0 0
Abs.
0 ,0 0 0 0 0
-0 ,3 0 0 2 6
2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0 0 ,0 0
nm .
c. 0 ,9 1 1 8 8
0 ,5 0 0 0 0
Abs.
0 ,0 0 0 0 0
-0 ,3 0 0 2 6
2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0 0 ,0 0
nm .
d. 0 ,9 1 1 8 8
0 ,5 0 0 0 0
Abs.
0 ,0 0 0 0 0
-0 ,3 0 0 2 6
2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0 0 ,0 0
nm .
e. 1 ,3 4 2 3 0
1 ,0 0 0 0 0
Abs.
0 ,5 0 0 0 0
0 ,0 0 0 0 0
-0 ,1 1 3 7 5
2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0 0 ,0 0
nm .
Gambar 5. Kurva serapan teofilin

Keterangan:
a = Kurva serapan teofilin konsentrasi 2 µg/mL
b = Kurva serapan teofilin konsentrasi 4 µg/mL
c = Kurva serapan teofilin konsentrasi 6 µg/mL
d = Kurva serapan teofilin konsentrasi 8 µg/mL
e = Kurva serapan teofilin konsentrasi 10 µg/mL
51
a. 1 ,3 4 2 3 0
1 ,0 0 0 0 0
Abs.
0 ,5 0 0 0 0
0 ,0 0 0 0 0
-0 ,1 1 3 7 5
2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0 0 ,0 0
nm .
b. 0 ,3 0 7 2 9
0 ,2 0 0 0 0
Abs.
0 ,1 0 0 0 0
0 ,0 0 0 0 0
-0 ,0 7 1 2 6
2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0 0 ,0 0
nm .
c. 0 ,5 1 5 6 7
0 ,4 0 0 0 0
Abs.
0 ,2 0 0 0 0
0 ,0 0 0 0 0
-0 ,0 4 3 9 3
2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0 0 ,0 0
nm .
d. 0 ,5 1 5 6 7
0 ,4 0 0 0 0
Abs.
0 ,2 0 0 0 0
0 ,0 0 0 0 0
-0 ,0 4 3 9 3
2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0 0 ,0 0
nm .
e. 0 ,5 1 5 6 7
0 ,4 0 0 0 0
Abs.
0 ,2 0 0 0 0
0 ,0 0 0 0 0
-0 ,0 4 3 9 3
2 0 0 ,0 0 2 5 0 ,0 0 3 0 0 ,0 0 3 5 0 ,0 0 4 0 0 ,0 0
nm .
Gambar 6. Kurva serapan salbutamol
Keterangan:
a = Kurva serapan salbutamol konsentrasi 5 µg/mL
b = Kurva serapan salbutamol konsentrasi 6 µg/mL
c = Kurva serapan salbutamol konsentrasi 7 µg/mL
d = Kurva serapan salbutamol konsentrasi 8 µg/mL
e = Kurva serapan salbutamol konsentrasi 9 µg/mL
52
Lampiran 7. Data Kalibrasi Teofilin BPFI, Persamaan Regresi dan Koefisien
Korelasi
Kalibrasi Serapan Derivat Pertama Teofilin pada Panjang Gelombang 270 nm

No. Konsentrasi (μg/mL) (X) Absorbansi (Y)
1 0 0,00000
2 2 0,00346
3 4 0,00655
4 6 0,00985
5 8 0,01280
6 10 0,01600
Perhitungan Persamaan Garis Regresi

No. X Y X2 Y2 XY
1 0 0,00000 0 0,000000000 0,00000
2 2 0,00346 4 0,000011972 0,00692
3 4 0,00655 16 0,000042903 0,02620
4 6 0,00985 36 0,000097023 0,05910
5 8 0,0128 64 0,000163840 0,10240
6 10 0,016 100 0,000256000 0,16000
∑ X = ∑ Y = ∑ X2= ∑ Y2= ∑XY=
30 0,04866 220 0,000571737 0,35462
(∑ XY)−(∑ X)(∑ Y)/n (0,35742)−(30)(0,04896)/6 0,11262

a= = (220)−(30)2 /6
= = 0,00161
(∑x 2)−(∑x)2/n 70
y̅ = ax̅ + b
b = 𝑦̅ – a𝑥̅ = 0,00811 – 0,00161(5) = 0,00006
Maka persamaan garis regresinya adalah Y = 0,00161X + 0,00006
53
(∑ XY)−(∑ X)(∑ Y)/n

r=
√[∑x 2)−(∑x)2/n][∑Y 2)−(∑Y)2/n]
(0,35462)−(30)(0,04866)/6
=
√[(220)−(30)2/6][(0,000571737)−(0,04866) 2/6]
0,11132
= 0,11134
= 0,9998
54
Lampiran 8. Data Kalibrasi Salbutamol BPFI, Persamaan Regresi dan Koefisien
Korelasi
Kalibrasi Serapan Derivat Pertama Salbutamol pada Panjang Gelombang 270 nm

No. Konsentrasi (μg/mL) (X) Absorbansi (Y)
1 0 0,00000
2 5 0,00130
3 6 0,00155
4 7 0,00179
5 8 0,00205
6 9 0,00226
Perhitungan Persamaan Garis Regresi

No. X Y X2 Y2 XY
1 0 0 0 0 0
2 5 0,0013 25 0,000001690 0,0065
3 6 0,00155 36 0,000002403 0,0093
4 7 0,00179 49 0,000003204 0,01253
5 8 0,00205 64 0,000004203 0,01640
6 9 0,00226 81 0,000005108 0,02034
∑X = ∑Y= ∑ X2 = ∑ Y2 = ∑ XY =
35 0,00895 255 0,000016607 0,06507
(∑ XY)−(∑ X)(∑ Y)/n (0,06525)−(35)(0,00897)/6 0,01292

a= (∑x 2)−(∑x)2/n
= (255)−(35)2 /6
= 50,83
= 0,00025
y̅ = ax̅ + b
b = 𝑦̅ – a𝑥̅ = 0,00149 – 0,00025 (5,83) = 0,00004
Maka persamaan garis regresinya adalah Y = 0,00025X + 0,00004
55
(∑ XY)−(∑ X)(∑ Y)/n

r=
√[∑x 2)−(∑x)2/n][∑Y 2)−(∑Y)2/n]
(0,06507)−(35)(0,00895)/6
=
√[(255)−(35)2/6][(0,000016607)−(0,00895) 2 /6]
0,01287
= 0,01288
= 0,9998
56
Lampiran 9. Perhitungan Batas Deteksi (Limit of Detection, LOD) dan Batas
Kuantitasi (Limit of Quantitation, LOQ) Teofilin
No. X Y Yi Y-Yi (10-5) (Y-Yi)2 (10-10)

1 0 0 0,00004 -40 2
2 2 0,00346 0,000054 34,06 11601
3 4 0,00655 0,0065 50 3
4 6 0,00985 0,00972 13 17
5 8 0,0128 0,01294 -14 20
6 10 0,016 0,01616 -16 26
∑(𝑌 − 𝑌𝑖)2 11667
∑(Y−Yi) 2 11667.10−10
SB =√ n−2
=√ = 1,7078 x 10-3
6−2
3 X SB 3 x 1,7078 x 10−3
LOD = = = 3,1823µg/mL
slope 0,00161
10 X SB 10 x1,7078 x 10−3
LOQ = = = 1,0577 µg/mL
slope 0,00161
57
Lampiran 10. Perhitungan Batas Deteksi (Limit of Detection, LOD) dan Batas
Kuantitasi (Limit of Quantitation, LOQ) Salbutamol
No. X Y Yi Y-Yi (10-5) (Y-Yi)2 (10-10)

1 0 0 0,00003 -3 90
2 5 0,00130 0,00128 2 40
3 6 0,00155 0,00153 2 40
4 7 0,00179 0,00178 1 10
5 8 0,00205 0,00203 2 40
6 9 0,00226 0,00228 -2 40
∑(𝑌 − 𝑌𝑖)2 260
∑(Y−Yi) 2 260 .10−10

SB =√ n−2
=√ = 5,9274 x 10-6
6−2
3 X SB 3 x 5,9274 x10−6
LOD = = = 0,0711µg/mL
slope 0,00025
10 X SB 10 x 5,9274 x10−6
LOQ = = = 0,23709µg/mL
slope 0,00025
58
Lampiran 11. Spektrum Serapan Derivat Pertama Sampel
a.
No. Wavelength nm. Absorbance Description

1 270.00 0.01598 teofilin
2 275.00 0.00150 salbutamol
b.

1 270.00 0.01620 teofilin
2 275.00 0.00152 salbutamol
c.

1 270.00 0.01598 teofilin
2 275.00 0.00152 salbutamol
Gambar 7. Kurva serapan sampel X
Keterangan:
a = Kurva serapan sampel X pada pengulangan I
b = Kurva serapan sampel X pada pengulangan II
c = Kurva serapan sampel X pada pengulangan III
59
d.

1 270.00 0.01620 teofilin
2 275.00 0.00152 salbutamol
e.

1 270.00 0.01621 teofilin
2 275.00 0.00152 salbutamol
f.
No. Wavelength nm. Absorbce Description

1 270.00 0.01620 teofilin
2 275.00 0.00152 salbutamol
Gambar 7. (Lanjutan)
Keterangan:
d = Kurva serapan sampel X pada pengulangan IV
e = Kurva serapan sampel X pada pengulangan V
f = Kurva serapan sampel X pada pengulangan VI
60
Lampiran 12. Hasil Analisis Kadar Teofilin dan Salbutamol dalam Tablet
1. Kadar Teofilin dalam Sediaan Tablet (mengandung 130 mg teofilin dalam satu
tablet)
Nama Penimban Setara Absorban Konsentra Konsentrasi Kadar
sediaan gan (mg) si (270 si teori perolehan (%)
(gram) nm) (µg/mL) (µg/mL)
Tablet 0,0761 49,4959 0,01598 9,8991 9,8881 99,80
X 0,0769 50,0162 0,01620 10,0032 10,0248 100,13
0,0769 50,0162 0,01620 10,0032 10,0248 100.13
0,0770 50,0813 0,01620 10,0162 10,0248 100,08
0,0767 49,8861 0,01598 9,9772 9,8881 100,52
0,0775 50,4065 0,01621 10,0813 10.0310 99,50
2. Kadar Salbutamol dalam Sediaan Tablet (mengandung 1 mg salbutamol dalam

satu tablet)
Nama Penimban Setara Absorban Konsentra Konsentrasi Kadar
sediaan gan (gram) (mg) si (275 si teori perolehan (%)
nm) (µg/mL) (µg/mL)
Tablet 0,0761 0,3807 0,00150 5,8633 5,84 99,60
X 0,0769 0,3847 0,00152 5,9250 5,92 99,91
0,0769 0,3847 0,00151 5,9250 5,88 99,81
0,0770 0,3852 0,00152 5,9320 5,92 99,79
0,0767 0,3837 0,00151 5,9095 5,88 99,50
0,0775 0.3877 0,00152 5,9250 5,92 99,91
61
Lampiran 13. Contoh Perhitungan Kadar Teofilin dan Salbutamol dalam
Sediaan Tablet
Berat 20 tablet = 3,9975 g = 3997,5 mg
Ditimbang analit setara dengan 50 mg teofilin, maka jumlah analit yang ditimbang
adalah;
50 mg
X1 = 20 x 130 x 3997,5 mg = 76,875 mg = 0,0769 g
Kemudian dihitung kesetaraan salbutamol yang terkandung dalam 0,0769 g

serbuk
0,0769 g
X2 = 3,9975 g x 20 x 1 mg = 0,3845 mg
Dilarutkan analit dalam NaOH 0,1N dalam labu tentukur 50 mL sampai garis
tanda. Larutan kemudian dihomogenkan dengan pengaduk ultrasonik selama 15
menit. Larutan tersebut kemudian disaring, lebih kurang 10 mL filtrat pertama
dibuang. Filtrat selanjutnya ditampung (larutan A).
50 mg
Konsentrasi analit teofilin larutan A = 50 mL x 1000 µg = 1000 µg/mL
0,3845 mg
Konsentrasi analit salbutamol larutan A = x 1000 µg = 7,7 µg/mL
50 mL
Kemudian dari larutan A dipipet 0,1 mL dan dimasukkan kedalam labu tentukur
10 mL dan diencerkan dengan NaOH 0,1 N hingga garis tanda (Larutan B).
1000 µg/mLx0,1mL
Konsentrasi teofilin larutan B = = 10 µg/mL
10mL
7,7 µg/mLx0,1mL
Konsentrasi salbutamol larutan B = = 0,077 µg/mL
10 mL
Kosentrasi analisis untuk salbutamol 6 µg/mL, sedangkan konsentrasi dalam

larutan B adalah 0,077 µg/mL maka untuk mendapatkan konsentrasi analisis
dilakukan penambahan baku salbutamol untuk metode adisi. Penambahan baku
dilakukan dengan pembuatan LIB konsentrasi 6 µg/mL.
Konsentrasi yang dibutuhkan adisi = 6 µg/mL - 0,077 µg/mL = 5,92 µg/mL
62
5,92 µg/mL x 10mL

Volume salbutamol dari LIB = = 7,69 mL
7,7 µg/mL
Maka volume analisis untuk salbutamol adalah
= Volume salbutamol larutan B + Volume salbutamol dari LIB
= 0,1 mL + 7,69 mL
= 7,7 mL
7,7 µg/mL x 7,7mL

Jadi konsentrasi salbutamol = = 5,9µg/mL
10mL
63
Berat serbuk yang ditimbang 0,0770 g
0,0770 g
Kesetaraan teofilin = 3,9975 g x 20 x 130 mg = 50,0813 mg
50,0813 mg
Konsentrasi teofilin = x 1000 µg = 1001,626 µg/mL
50 mL
1001,626 µg/mL
Konsentrasi teoritis teofilin = x 0,1 mL = 10,01626 µg/mL
10 mL
0,0770 g
Kesetaraan salbutamol = 3,9975 g x 20 x 1 mg = 0,3852 mg
0,3852 mg
Konsentrasi salbutamol = x 1000 µg = 7,7040 µg/mL
50 mL
7,7040 µg/mL
Konsentrasi teoritis salbutamol = x 7,7 mL = 5,9320 µg/mL
10 mL
Absorbansi teofilin pada derivat pertama pada panjang gelombang 270 nm adalah
0,01620
Kadar teofilin dihitung dari persamaan regresi pada panjang gelombang analisis
teofilin
Y = 0,00161x + 0,00006
Konsentrasi teofilin : Y = 0,00161X+ 0,00006
0,001620 = 0,00161X + 0,00006
X = 10,0248 µg/mL
64
10,0248 µg/mL
Kadar teofilin = x 99,92 % = 100,08 %
10,0813 µg/mL
Absorbansi salbutamol pada derivat pertama pada panjang gelombang 275 nm
adalah 0,00152
Kadar salbutamol dihitung dari persamaan regresi pada panjang gelombang
analisi salbutamol Y = 0,00025X - 0,00004
Konsentrasi salbutamol : Y = 0,00025X - 0,00004
0,00152 = 0,00025X - 0,00004
X = 5,92 µg/mL
5,92 µg/mL
Kadar teofilin = 5,9320µg/mL x 100 % = 99,79 %
65
Lampiran 14. Perhitungan Statistik Teofilin pada Tablet X
X (X- ̅
X) (X- ̅
X)2
No. Kadar (%)
1 99,8 -0,2266 0,0513
2 100,13 0,1033 0,0106
3 100,52 0,4933 0,2433
4 100,08 0,0533 0,0028
5 99,5 -0,5266 0,2773
6 100,13 0,1033 0,0106
∑X = 600,16 ̅)2 = 0,5963
∑ (X- X
𝑋 =100,0267
∑(𝑋− ̅̅̅̅
𝑋) 2 0,5963
SD = √ 𝑛−1
=√ 6−1
= 0,3453
Pada iterval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01,dk = n-1 = 5 maka t(α/2,dk) =
4,0321
Data diterima jika t hitung < t tabel
x− x̅ 0,2266
thitung = |SD/ n| = | 0,3453/ 6| = 1,6077
√ √
x− x̅ 0,1033
thitung = |SD/ n| =|0,3453/ 6| = 0,7329
√ √
x− x̅ 0,4933
thitung = |SD/ n| = |0,3453/ 6| = 3,4993
√ √
x− x̅ 0,0533
thitung = |SD/ n| = |0,3453/ 6| = 0,3783
√ √
x− x̅ 0,5266
thitung = |SD/ n| = |0,3453/ 6| = 3,7357
√ √
x− x̅ 0,1033
thitung = |SD/ n| = |0,3453/ 6| = 0,7329
√ √
66
Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung , t tabel, maka
semua data tersebut diterima
Kadar teofilin dalam tablet:
µ = x̅ ± (t(α/2,dk) x SD/√n)
= 100,0267 ± (4,0321 x 0,3453/√6)
= (100,02 ± 0,56)%
67
Lampiran 15. Perhitungan Statistik Salbutamol pada Tablet X
X
No. Kadar (%) X- ̅
X (X- ̅
X)2
1 99,6 -0,1533 0,0235
2 99,91 0,1566 0,0245
3 99,79 0,0366 0,0013
4 99,5 -0,2533 0,0641
5 99,81 0,0566 0,0032
6 99,91 0,1566 0,0245
∑X = 598,52 ∑ (X- ̅
X)2 = 0,1413
̅̅̅̅̅̅
𝑋 = 99,7533
∑(𝑋− ̅̅̅̅
𝑋) 2 0,1413
SD = √ =√ = 0,1681
𝑛−1 6−1
Pada iterval kepercayaan 99% dengan nilai α = 0,01,dk = n-1 = 5 maka t(α/2,dk) =
4,0321
Data diterima jika t hitung < t tabel
x− x̅ 0,1533
thitung = | |=| | = 2,2342
SD/√n 0,1681/√6
x− x̅ 0,1566
thitung = |SD/ n| =|0,1681/ 6| = 2,2827
√ √
x− x̅ 0,0367
thitung = |SD/ n| = |0,1681/ 6| = 0,5342
√ √
x− x̅ 0,2533
thitung = |SD/ n| = |0,1681/ 6| = 3,6912
√ √
x− x̅ 0,0567
thitung = |SD/ n| = |0,1681/ 6| = 0,8256
√ √
x− x̅ 0,1566
thitung = |SD/ n| = |0,1681/ 6| = 2,2827
√ √
68
Dari hasil perhitungan tersebut diperoleh bahwa semua t hitung , t tabel, maka
semua data tersebut diterima
Kadar salbutamol dalam tablet:
µ = x̅ ± (t(α/2,dk) x SD/√n)
= 99,75333 ± (4,0321 x0,16812/√6)
= (99,75 ± 0,27)%
69
Lampiran 16. Spektrum Serapan X pada Uji Perolehan Kembali
a.

1 270.00 0.01294 teofilin
2 275.00 0.00122 salbutamol
b.

1 270.00 0.01290 teofilin
2 275.00 0.00123 salbutamol
c.

1 270.00 0.01292 teofilin
2 275.00 0.00123 salbutamol
Gambar 8. Kurva serapan perolehan kembali 80% pada sampel X
Keterangan:
a = Kurva serapan perolehan kembali 80% pada sampel X pengulangan I
b = Kurva serapan perolehan kembali 80% pada sampel X pengulangan II
c = Kurva serapan perolehan kembali 80% pada sampel X pengulangan III
70
Lampiran 16. (lanjutan)
a.

1 270.00 0.01621 teofilin
2 275.00 0.00152 salbutamol
b.

1 270.00 0.01620 teofilin
2 275.00 0.00152 salbutamol
c.

1 270.00 0.01620 teofilin
2 275.00 0.00152 salbutamol
Keterangan:
71
Lampiran 16. (lanjutan)
a.

1 270.00 0.01950 teofilin
2 275.00 0.00182 salbutamol
b.
a.

1 270.00 0.01949 teofilin
2 275.00 0.00180 salbutamol
c.

1 270.00 0.01950 teofilin
2 275.00 0.00182 salbutamol
Keterangan:
72
Lampiran 17. Data Hasil Persen Perolehan Kembali Teofilin pada Tablet X dengan
Metode Penambahan Baku (Standard Addition Method)
N Kon Penimb Absorba Konsentrasi Baku Persen

0 sentr angan nsi Setelah Sebelum yang peroleh
asi (g) (270 nm) penambah penambah ditambah an
(%) an an kan (mg) lembali
baku(mg) baku(mg) (%)
1 0,0431 0,01294 40,0000 28,0707 11,9904 99,49
2 80 0,0432 0,01290 39,5757 28,1358 11,9904 98,99
3 0,0428 0,01292 39,9378 28,0707 11,9904 98,97
4 0,0537 0,01621 49,8136 34,9419 14,9880 99,22
5 100 0,0538 0,01621 49,8136 34,9419 14,9880 98,78
6 0,0539 0,01620 50,1242 35,0720 14,9880 100,42
7 0,0648 0,01949 60,3416 42,1384 17,9856 100,20
8 120 0,0649 0,01950 60,3726 42,2034 17,9856 100,02
9 0,0649 0,01950 60,3726 42,2034 17,9856 100,02
73
Lampiran 18. Data Hasil Persen Perolehan Kembali Salbutamol pada Tablet X
dengan Metode Penambahan Baku (Standard Addition Method)
N Kon Penimb Absorba Konsentrasi Baku Persen

0 sentr angan nsi Setelah Sebelum yang peroleh
asi (g) (270 nm) penambah penambah ditambah an
(%) an an kan (mg) lembali
baku(mg) baku(mg) (%)
1 0,0431 0,00122 0,3064 0,2148 0,0922 98,91
2 80 0,0432 0,00123 0,3090 0,2152 0,0922 99,34
3 0,0432 0,00123 0,3090 0,2152 0,0922 99,34
4 0,0537 0,00151 0,3818 0,2679 0,1152 98,43
5 100 0,0539 0,00152 0,3844 0,2688 0,1152 100,34
6 0,0539 0,00152 0,3844 0,2688 0,1152 100,34
7 0,0644 0,00180 0,4571 0,3212 0,1383 98,26
8 120 0,0644 0,00180 0,4571 0,3212 0,1383 98,26
9 0,0647 0,00152 0,4623 0,3226 0,1383 100,01
74
Lampiran 19. Contoh Perhitungan Persentase Perolehan Kembali (%recovery)
Mengandung teofilin 130 mg dan salbutamol 1 mg
Berat 20 tablet = 3,9975 g = 3997,5 mg
Berat kesetaraan penimbangan sampel pada penetapan kadar = 50 mg
Perolehan 80%
80
Teofilin 80% = 100 x 50 mg = 40 mg
70
Analit teofilin 70% = 100 x 40 mg = 28 mg
Penimbangan serbuk analit setara 28 mg teofilin
28 mg
Sampel yang ditimbang = 20 x 130 mg x 3,9975 g = 0,0430 g
30
Baku teofilin yang ditambahkan 30% = 100 x 40 mg = 12 mg
Jumlah analit salbutamol dalam serbuk yang ditimbang:
0,04305g
x 20 x 1 mg = 0,21538 mg
3,9975 g
Baku salbutamol 30% yang ditambahkan:
30 40 mg
(1 mg x 130 mg ) = 0,0923 mg
100
Perolehan 100%
100
Teofilin 100% = 100 x 50 mg = 50 mg
70
35 mg
75
30
0,0538 g
x 20 x 1 mg = 0,2691 mg
3,9975 g
30 50 mg
(1 mg x 130 mg ) = 0,11538 mg
100
Perolehn 120%
120
Teofilin 120% = 100 x 50 mg = 60 mg
70
42 mg
30
0,06457 g
x 20 x 1 mg = 0,32305 mg
3,9975 g
30 60 mg
(1 mg x 130 mg ) = 0,13846 mg
100
76
Contoh perhitungan % perolehan kembali pada perolehan 80%
Misalnya absorbansi analisis (Y)
Penimbangan sampel = 0,0431
Teofilin (270 nm) = 0,01294
A. Teofilin
Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis teofilin (λ=270)
Y = 0,00161X + 0,00006
Konsentrasi teofilin :
Y = 0,00161X+ 0,00006
0,01294 = 0,00161X + 0,00006
0,01294 - 0,00006 = 0,00161X
X = 8,000 µg/mL
Jumlah awal setelah penambahan bahan baku (Cf):
konsentrasi teofilin (µg/mL)

= x volume (mL) x faktor pengencer
1000
8,000 µg/mL
= x 50 mL x 100
1000
= 40,0000 mg
Jumlah sampel sebelum penambahan bahan baku (CA):
Penimbangan Sampel
CA = X (B x C)
A
Keterangan:
A = Berat sampel yang akan ditimbang setara dengan 28 mg analit teofilin 70%
B = Analit teofilin 70%
C = Kadar rata-rata sampel
77
0,0431
CA = X (28 mg x 100,2%)
0,0430
= 28,0707 mg
Jumlah baku yang ditambahkan (C*A) = D x E
Keterangan :
D = baku teofilin 30%

E = % kadar baku teofilin dari sertifikat analisis
(C*A) = 12 x 99,92%
= 11,9904 mg
Maka % perolehan kembali teofilin:
Cf− CA
% perolehan kembali = x 100%
C∗A
Keterangan :
Cf = Jumlah awal setelah penambahan bahan baku

CA = Jumlah sampel sebelum penambahan bahan baku
C*A = Jumlah baku yang ditambahan
40,0000 − 28,0707mg
11,9904 mg
= 99,49%
B. Salbutamol
Persamaan regresi pada panjang gelombang analisis salbutamol
Y = 0,00025 X + 0,00004
Konsentrasi salbutamol :
Y = 0,00025 X + 0,00004
0,00122 = 0,00025 X + 0,00004
78
0,00122- 0,00004 = 0,00025 X
X = 4,72 µg/mL
Jumlah awal setelah penambahan bahan baku (Cf):
konsentrasi teofilin (µg/mL)

= x volume (mL) x faktor pengencer
1000
4,72 µg/mL
= x 50 mL x 1,2820
1000
= 0,3064 mg
Jumlah sampel sebelumpenambhan bahan baku (CA):
Penimbangan Sampel
CA = X (B x C)
A
Keterangan:
A = Berat sampel yang akan ditimbang setara dengan 28 mg analit teofilin 70%
B = Jumlah salbutamol dalam serbuk analit yang ditimbang
C = Kadar rata-rata sampel
0,0431 g
CA = X (0,2154 mg x 99,75%)
0,0430 g
= 0,2152 mg
Jumlah baku yang ditambahkan (C*A) = D x E
Keterangan :
D = Baku salbutamol 30%

E = % kadar baku salbutamol dari sertifikat analisis
(C*A) = 0,0922 x 99,87%
= 0,0922 mg
Maka % perolehan kembali salbutamol:
Cf− CA
% perolehan kembali = x 100 %
C∗A
79
Keterangan :
Cf = Jumlah awal setelah penambahan bahan baku

CA = Jumlah sampel sebelum penambahan bahan baku
C*A = Jumlah baku yang ditambahan
0,3064 mg− 0,2148 mg
0,0922 mg
= 98,91%
80
Lampiran 20. Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar deviasi
Perolehan Kembali Teofilin pada Tablet X
No Kadar Perolehan Kembali [X] (%) Xi-X (Xi-X)2

1 98,99 0,9111 0,8301
2 99,49 0,4111 0,1690
3 98,97 0,9311 0,8669
4 99,22 0,6811 0,4639
5 98,78 1,1211 1,2568
6 100,42 -0,5188 0,2692
7 101,2 -1,2988 1,6871
8 101,02 -1,1188 1,2519
9 101,02 -1,1188 1,2519
∑x = 899,11 ∑(Xi-X)2 = 8,0470
̅̅̅̅̅̅
𝑋 = 99,9011
∑(X− ̅X)
̅̅̅ 2 8,0470
SD = √ =√ = 1,003
n−1 9−1
SD
RSD = ̅ x 100%
X
1,003
= 99,9011 x 100%
= 1,004%
81
Lampiran 21. Perhitungan Rata-Rata, Standar Deviasi dan Relatif Standar
Deviasi Perolehan Kembali Salbutamol pada Tablet X
No Kadar Perolehan Kembali [X] (%) Xi-X (Xi-X)2
1 98,91 0,4488 0,2015
2 99,34 0,0188 0,0003
3 99,34 0,0188 0,0003
4 98,43 0,9288 0,8628
5 100,34 -0,9811 0,9625
6 100,34 -0,9811 0,9625
7 98,26 1,0988 1,2075
8 98,26 1,0988 1,2075
9 101,01 -1,6511 2,7261
∑x = 894,23 ∑(Xi-X)2 = 8,1314
̅̅̅̅̅̅
𝑋 = 99,35889
∑(X− ̅X)
̅̅̅ 2 8,1314
SD = √ =√ = 1,0083
n−1 9−1
SD
RSD = ̅ x 100%
X
1,0083
= 99,3588 x 100%
= 1,014%
82
Lampiran 22.Daftar Niliai Distribusi t
83
Lampiran 23.Sertifikat Teofilin
84
Lampiran 24.Sertifikat Salbutamol
85

Teofil in

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Teofil in

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

PENETAPAN KADAR TEOFILIN DAN SALBUTAMOL

DALAM TABLET SECARA SPEKTROFOTOMETRI

PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI

Universitas Sumatera Utara

Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI

Universitas Sumatera Utara

PENETAPAN KADAR TEOFILIN DAN SALBUTAMOL

Dipertahankan di Hadapan Panitia Penguji Skripsi

Pembimbing II, Prof. Dr.Muchlisyam, M.Si., Apt.

Dra. Tuty Roida Pardede, M.Si., Apt.

Medan, Februari 2017

Prof. Dr. Masfria, M.S., Apt.

Universitas Sumatera Utara

sehingga penulis dapat menjalani masa perkuliahan dan penelitian hingga

akhirnya menyelesaikan penyusunan skripsi dengan judul “Penetapan Kadar

Teofilin dan Salbutamol dalam Tablet secara Spektrofotometri Derivatif”. Skripsi

Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

Pada kesempatan ini penulis ingin menyampaikan rasa terima kasih

Universitas Sumatera Utara yang telah memberikan fasilitas selama masa

pendidikan dan penelitian.

Rasa hormat dan terima kasih yang setulus-tulusnya penulis sampaikan

bimbingan dan motivasi dengan penuh kesabaran dan keikhlasan selama

Penulis menyampaikan rasa terima kasih serta penghargaan yang tulus

penyelesaian skripsi ini.

kepada teman-teman seperjuangan di Laboratorium Penelitian, penulis juga

mengucapkan terima kasih kepada teman-teman terdekat khususnya Christine

penyusunan skripsi ini berlangsung.

Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih memiliki banyak kekurangan,

dapat bermanfaat bagi kita semua.

Medan, Januari 2017

Desi Eka Putri

Saya yang bertanda tangan di bawah ini ,

Nama : Desi Eka Putri

Nomor Induk Mahasiswa : 141524008

Program Studi : S1 Ekstensi Farmasi

Judul Skripsi : Penetapan Kadar Teofilin dan Salbutamol dalam

Dengan ini menyatakan:

Medan, Januari 2017

Desi Eka Putri

Campuran teofilin dan salbutamol merupakan salah satu jenis kombinasi

Kata Kunci : Teofilin, Salbutanol, Spektrofotometri Derivatif, Zero Crossing,

The mixture of theophylline and salbutamol is one of combination in

Keywords : Theophyline, Salbutamol, Derivative Spectrophotometric, Zero

LEMBAR PENGESAHAN ...................................................................... iii

KATA PENGANTAR ............................................................................. iv

SURAT PERNYATAAN BEBAS PLAGIAT.......................................... vi

ABSTRAK ................................................................................................ vii

ABSTRACT .............................................................................................. viii

DAFTAR ISI ............................................................................................. ix

DAFTAR TABEL ..................................................................................... xiii

DAFTAR GAMBAR ................................................................................ xiv

DAFTAR GAMBAR DALAM LAMPIRAN .......................................... xv

DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................. xvi

BAB I PENDAHULUAN ......................................................................... 1

1.1 Latar Belakang ........................................................................ 1

1.2 Perumusan Masalah ................................................................ 3

1.3 Hipotesis .................................................................................. 3

1.4 Tujuan Penelitian .................................................................... 4

1.5 Manfaat Penelitian .................................................................. 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ............................................................... 5

2.1 Uraian Bahan ........................................................................... 5

2.1.1 Salbutamol .................................................................... 5