HCL

Universitas Sumatera Utara
Repositori Institusi USU http://repositori.usu.ac.id

Fakultas Farmasi Skripsi Sarjana
2017
Penetapan Kadar Metformin dan

Glibenclamid dalam Sediaan Tablet
dengan Metode Spektrofotometri
Ultrataviolet Secara MeanCentering of
Ratio Spectra (MCR)
Sitohang, Exaudia
http://repositori.usu.ac.id/handle/123456789/1426
Downloaded from Repositori Institusi USU, Univsersitas Sumatera Utara
PENETAPAN KADAR METFORMIN DAN GLIBENKLAMID
DALAM SEDIAAN TABLET DENGAN METODE
SPEKTROFOTOMETRI ULTRAVIOLET SECARA MEAN
CENTERING OF RATIO SPECTRA (MCR)
SKRIPSI
OLEH:
EXAUDIA P SITOHANG
NIM 151524040
PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2018

DALAM SEDIAAN TABLET DENGAN
METODESPEKTROFOTOMETRI ULTRAVIOLET SECARA
MEAN CENTERING OF RATIO SPECTRA (MCR)
SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh
Gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
OLEH:
EXAUDIA P SITOHANG
NIM 151524040
PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2018

PENGESAHAN SKRIPSI

SPEKTROFOTOMETRI ULTRAVIOLET
SECARA MEAN CENTERING OF RATIO SPECTRA (MCR)
OLEH:
EXAUDIA P SITOHANG
NIM 151524040
Dipertahankan di Hadapan Panitia Penguji Skripsi

Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara
Pada Tanggal: November 2017
Disetujui oleh:
Pembimbing, PanitiaPenguji,
Prof. Dr. Muchlisyam, M.Si., Apt. Prof. Dr. rer. nat, Effendy De Lux Putra, S.U.,Apt.
NIP 195006221980021001 NIP 195306191983031001
Prof. Dr. Muchlisyam, M.Si., Apt.

NIP 195006221980021001
Prof. Dr. Muchlisyam, M.Si., Apt. Prof. Dr. Muchlisyam, M.Si., Apt.
NIP195006221980021001 NIP195006221980021001
Dra. TutyRoidaPardede, M.Si.,Apt
NIP 195401101980032001
NIP195006221980021001
Medan, Desember 2017

FakultasFarmasi
Prof. Dr. Muchlisyam, M.Si., Apt. Sumatera
Prof.Utara
Dr. Muchlisyam, M.Si., Apt.
Universitas
NIP195006221980021001 NIP195006221980021001
Dekan,
Prof. Dr. Masfria, M.S., Apt.

NIP 195707231986012001

NIP195006221980021001
SPEKTROFOTOMETRI ULTRAVIOLET SECARA MEAN
CENTERING OF RATIO SPECTRA (MCR)
ABSTRAK
Kadar yang diperoleh dari suatu senyawa dapat berbeda-beda, tergantung
metode yang digunakan pada penentuan kadar tersebut. Mean Centering of Ratio
Spectra (MCR) merupakan salah satu metode penetapan kadar untuk campuran
yang menggunakan software model matematis. Sehubungan dengan adanya
tumpang tindih antara spektrum Metformin dan Glibenklamid, maka dilakukan
aplikasi MCR terhadap penetapan kadar campuran Metformin dan Glibenklamid
dalam sediaan tablet.
Spektrum serapan rasio Metformin diperoleh dengan membagi
spektrumnya dengan divisor Glibenklamid konsentrasi 8,7 μg/ml dan spektrum
serapan rasio Glibenklamid diperoleh dengan membagi spektrumnya dengan
divisor Metformin konsentrasi 4 μg/ml. Nilai mean centering of ratio (MCR) yang
diperoleh diolah dengan software MATLAB versi 9,0 untuk menetapkan kadar
dengan menghubungkannya kedalam suatu persamaan garis regresi.
Hasil penetapan kadar Metformin dan Glibenklamid pada tablet G adalah
(102,76 ± 0,349) % dan (103,58 ± 0,572) %. Kadar yang diperoleh sesuai dengan
persyaratan sediaan tablet menurut Farmakope Indonesia Edisi V yaitu (95-105)%
untuk Metformin dan (95-105)% untuk Glibenklamid. Hasil uji validasi yang
dilakukan memenuhi persyaratan validasi metode yaitu untuk Metformin
diperoleh % recovery= 100,23%; simpangan baku relatif (RSD)=0,20% dan untuk
Glibenklamid diperoleh % recovery= 100,63%; simpangan baku relatif (RSD)=
0,17 %
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan, maka dapat disimpulkan
bahwa metode spektrofotometri ultraviolet secara MCR dapat digunakan untuk
menetapkan kadar metformin dan glibenklamid dalam sediaan tablet dan
memenuhi syarat validasi.
Kata kunci: Glibenklamid, Mean Centering Of Ratio Spectra (MCR),

Metformin, Metode Spektrofotometri Ultraviolet, Validasi
vii
DETERMINATION OF CONTENT OF METFORMINE AND
GLIBENCLAMID IN TABLET BY ULTRAVIOLET
SPECTROPHOTOMETRY WITH MEAN CENTERING OF
RATIO SPECTRA (MCR)
ABSTRACT
Levels of a compound have a difference, it is depending on the method
used in the determination of the levels. Mean Centering of Ratio Spectra (MCR)
is one of determination levels method to mixture that uses the software
mathematical model. With respect to the presence of spectral overlap between
Metformin and Glibenklamid, then do the application against the determination of
the levels of a mixture of MCR Metformin and Glibenklamid in the preparation of
tablets.
The Ratio of absorption spectrum of Metformin is obtained by dividing
their spectra with divisorGlibenklamid 8,7μg/ml concentration and absorption
spectrum of Glibenklamid ratio is obtained by dividing its divisor with Metformin
the concentration of 4μg/ml. Values of mean centering of ratio (MCR) obtained
with MATLAB software version 9.0 to assign levels by connecting into a
regression line equation.
The results of the determination of the levels of Metformin and
Glibenklamid on tablet G is (102.76 ± 0.349)% and (103.58 ± 0.572)%. The levels
obtained in accordance with the requirements of tablet preparation according to
the Pharmacopoeia Indonesia Edition V (95-105)% to Metformin and (95-105)%
to Glibenklamid. The results of validation testing performed meets the
requirements of validation methods is to Metformin retrieved% recovery =
100,23%; relatively raw junction (at) = 0,20% and for Glibenklamid retrieved%
recovery =100,63%; relatively raw junction (at) = 0,17%
Based on the results of the research conducted, it can be concluded that the
method of ultraviolet spectrophotometry in MCR can be used to set the levels of
metformin and glibenklamid in the preparation of tablets and qualified validation
Keywords:Glibenklamid, Mean Centering Of Ratio Spectra (MCR), Metformin,

Ultraviolet Spectrophotometry, Method Validation.
vii
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur penulis ucapkan kepada Tuhan Yang Maha Esa yang telah
memberkati dan mengasihi penulis sehingga dapat menyelesaikan penelitian dan
penyusunan skripsi ini.
Skripsi ini disusun untuk melengkapi salah satu syarat mencapai gelar
Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara dengan judul
“Penetapan Kadar Metformin dan glibenclamid dalam Sediaan Tablet dengan
Metode Spektrofotometri Ultrataviolet secara MeanCentering of Ratio Spectra
(MCR)”.
PenulismengucapkanterimakasihkepadaAyahanda Zalel Hasudungan
Sitohang dan Ibunda Lismawati Saragih yang menjadi motivator dalam hidup dan
menolong penulis baik moril maupun material selama menempuh pendidikan
hingga ke jenjang sarjana. Penulis juga mengucapkan terimakasih kepada ketiga
saudaraterkasih Exclesia Sitohang, Theresia Sitohang dan Moreno Sitohang yang
selalu memberi penulis semangat, senyum sukacita dan doa yang tak putus-
putusnya, serta seluruh keluarga yang tidak bisa penulis sebutkan satu per satu.
Pada kesempatan ini, penulis ingin menulis mengucapkanterimakasih
kepada BapakProf. Dr. Muchlisyam, M.Si., Apt.,selaku dosen pembimbing yang
selalu memberikan bimbingan dan ilmu dari awal penelitian sampai selesainya
penulisan skripsi ini.
Rasa hormat yang setulus- tulusnya, penulis sampaikan kepada: Prof. Dr.
Masfria, M.S., Apt., selaku pejabat dekan Fakultas Farmasi, Ibu Dra. Tuty Roida
Pardede, M.Si., Apt.,dan Prof.Dr. rer. nat. Effendi Deluxe Putera S.Si., Apt.,
vi
selaku dosen penguji yang telah memberikan masukan dan saran kepada penulis
hingga selesainya penulisan skripsi ini.
Penulis juga mengucapkan terimakasih kepada Partner penghibur
Gomgom Simanjuntak, Resnika Citra, Lasma Ida Pasaribu, Marshinta Hutabalian,
Fatrikia Sinaga, Delima Mega, teman-teman seperjuangan di Laboratorium
Penelitian Widia, Rona, Brian, Ruben, Willya, Kak Devi, Aji dan teman-teman
stambuk 2015 Ekstensi yang selalu memberikan semangat satu sama lain untuk
mencapai impian gelar Sarjana Farmasi.
Penulis menyadari bahwa tulisan ini masih memiliki banyak kekurangan,
oleh karena itu dengan segala kerendahan hati penulis bersedia menerima kritik
dan saran yang membangun pada skripsi ini. Semoga skripsi ini bermanfaat bagi
kita semua.
Medan, November2017
Penulis,
Exaudia Sitohang
NIM 151524040
vi
SURAT PERNYATAAN BEBAS PLAGIAT
Saya yang bertanda tangan dibawah ini :
Nama : Exaudia P Sitohang
NIM : 151524040
Program Studi : S-1 Ekstensi Farmasi
Judul Skripsi : Penetapan Kadar metformin dan glibenclamid dalam

Sediaan Tablet dengan Metode Spektrofotometri
Ultrataviolet secara MeanCentering of Ratio Spectra
(MCR)
Dengan ini menyatakan bahwa skripsi ini ditulis berdasarkan data dan
hasil pekerjaan yang saya lakukan sendiri, dan belum pernah diajukan orang lain
untuk memperoleh gelar kesarjanaan di perguruan tinggi lain, dan bukan plagiat
karena kutipan yang ditulis setelah disebutkan sumbernya didalam daftar pustaka.
Apabila dikemudian hari ada pengaduan dari pihak lain karena di dalam
skripsi ini ditemukan plagiat karena kesalahan saya sendiri, maka saya bersedia
menerima sanksi apapun oleh Program Studi Farmasi Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara, dan bukan menjadi tanggng jawab pembimbing.
Demikian surat pernyataan ini saya perbuat dengan sebenarnya untuk
dapat digunakan jika diperlukan sebagai mana mestinya.
Medan, November 2017

Yang Membuat Pernyataan
Exaudia P Sitohang
NIM 151524040
vi
DAFTAR ISI
Halaman
JUDUL ........................................................................................................ i
LEMBAR PENGESAHAN SKRIPSI ........................................................ iii
KATA PENGANTAR ................................................................................ iv
SURAT PERNYATAAN TIDAK PLAGIAT ........................................... vi
ABSTRAK .................................................................................................. vii
ABSTRACK ............................................................................................... viii
DAFTAR ISI ............................................................................................... ix
DAFTAR TABEL ....................................................................................... xiv
DAFTAR GAMBAR .................................................................................. xv
DAFTAR GAMBAR DALAM LAMPIRAN ............................................. xvii
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................... xviii
BAB I PENDAHULUAN ........................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ......................................................................... 1
1.2 Perumusan Masalah.................................................................. 3
1.3 Hipotesis ................................................................................... 3
1.4 Tujuan Penelitian...................................................................... 4
1.5 Manfaat Penelitian.................................................................... 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ................................................................. 5
2.1 Uraian Bahan............................................................................ 5
2.1.1 Metformin ....................................................................... 5
2.1.2 Glibenklamid .................................................................. 6
ix
2.2 Spektrofotometri Ultraviolet-visible (UV-Vis) ........................ 6
2.2.1 Pengertian spektrofotometri ultraviolet-visible (UV-Vis) 6
2.2.2 Kegunaan Spektrofotometri ............................................ 7
2.2.3 Komponen Spektrofotometri .......................................... 8
2.2.4 Hukum Lambert-beer ...................................................... 9
2.2.5 Analisis Multikomponen dengan Spektrofotometri

Ultraviolet ....................................................................... 10
2.3 Analisis Simultan secara Mean Centering Of Ratio Spectra ... 12
2.4 Validasi Metode ....................................................................... 14
2.4.1 Akurasi (Kecermatan) ..................................................... 15
2.4.2 Presisi (Keseksamaan) .................................................... 15
2.4.3 Spesifitas ......................................................................... 16
2.4.4 Batas deteksi dan Batas Kuantitasi ................................. 17
2.4.5 Batas Linieritas ............................................................... 17
2.4.6 Rentang ........................................................................... 17
2.4.7 Kekasaran dan ketahanan................................................ 18
BAB III METODE PENELITIAN.............................................................. 19
3.1 Jenis penelitian....................................................................... 19
3.2 Tempat dan waktu penelitian ................................................. 19
3.3 Alat......................................................................................... 19
3.4 Bahan ..................................................................................... 19
3.5 Pengambilan Sampel.............................................................. 19
3.6 Prosedur Penelitian ................................................................ 20
3.6.1 Pembuatan LIB Metformin .............................................. 20
3.6.2 Pembuatan LIB Glibenklamid ......................................... 20
x
3.6.3 Analisis Kuantitatif ........................................................ 21
3.6.3.1. Pembuatan spektrum serapan maksimum

Metformin ......................................................... 21
3.6.3.2. Pembuatan spektrum serapan maksimum

Glibenklamid .................................................... 21
3.6.4 Pembuatan spektrum serapan baku ................................. 21
3.6.4.1 Pembuatan spektrum serapan baku Metformin 21
3.6.4.2 Pembuatan spektrum serapan baku Gibenklamid 21
3.6.4.3 Pembuatan spektrum serapan campuran baku

Metformin dan Glibenklamid .......................... 22
3.6.5 Pembuatan spektrum serapan rasio ................................. 22
3.6.5.1 Pembuatan spektrum serapan rasio metformin . 22
3.6.5.2 Pembuatan spektrum serapan rasio Glibenklamid 23
3.6.5.3 Pembuatan spektrum serapan rasio camputan

metformin dan glibenklamid ............................ 23
3.6.6 Pembuatan spektrum serapan secara mean centering of

ratio spectra (MCR) ....................................................... 23
3.6.6.1 Pembuatan spektrum serapan Metformin secara

mean Centering Of Ratio spectra (MCR)......... 23
3.6.6.2 Pembuatan spektrum serapan glibenklamid secara

mean Centering Of Ratio spectra (MCR)......... 24
3.6.7 Pembuatan kurva kalibrasi secara mean centering of ratio

spectra (MCR) ................................................................ 24
3.6.7.1 Pembuatan Kurva kalibrasi Metformin secara

mean centering of ratio spectra (MCR) ........... 24
3.6.7.2 Pembuatan Kurva kalibrasi Metformin secara

mean centering of ratio spectra (MCR) ........... 24
3.7 Validasi Metode ..................................................................... 24
3.7.1 Akurasi ......................................................................... 24
xi
3.7.2 Presisi ........................................................................... 25
3.7.3 Linieritas ....................................................................... 26
3.7.4 Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitatif (LOQ) ..... 26
3.7.5 Analisis Data penetapan kadar secara statistik ............. 26
3.8 Penentuan kadar Metformin dan Glibenklamid dalam

Sediaan Tablet........................................................................ 27
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................... 29
4.1 Hasil Penentuan Spektrum Serapan Maksimum .................... 29
4.1.1 Spektrum serapan maksimum Metformin dan

Glibenklamid .................................................................. 29
4.2 Hasil Pengukuran spektrum serapan metformin dan

glibenklamid pada berbagai konsentrasi ................................ 30
4.3 Hasil spektrum serapan campuran baku metformin dan

Glibenklamid ......................................................................... 32
4.4 Hasil spektrum serapan Rasio Mrtformin dan Glibenklamid 32
4.5 Hasil Mean Centering of Ratio Spectra metformin,

Glibenklamid, dan Spektrum Tumpang tindih ...................... 34
4.6 Hasil pembuatan kurva kalibrasi secara Mean Centering Of

Ratio Spectra ......................................................................... 36
4.7 Hasil penetapan kadar metformin dan glibenclamid dalam

sediaan tablet.......................................................................... 36
4.8 Hasil validasi metode ............................................................. 43
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ...................................................... 44
5.1 Kesimpulan ............................................................................. 44
5.2 Saran ....................................................................................... 44
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................. 45
LAMPIRAN ................................................................................................ 48
xii
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
4.1 Nilai Mean Center( MC) Metformin dan Glibenklamid dalam

Tablet G ............................................................................................ 39
4.2 Kadar Metformin dalam Tablet G .................................................... 39
4.3 Kadar Glibenklamid pada Tablet G ................................................... 40
4.4 Kadar Metformin dan Glibenklamid pada Tablet G secara statistik 40
xiii
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
2.1 Rumus struktur Metformin ............................................................. 5
2.2 Rumus struktur Glibenklamid ........................................................ 6
2.3 Diagram spektrofotometri ultraviolet ............................................. 8
2.4 Spektra absorpsi senyawa X dan Y (tidak ada tumpang tindih

pada dua panjang gelombang yang digunakan) .............................. 11
2.5 Spektra serapan senyawa X dan Y (tumpang tindih satu arah) ....... 11
2.6 Spektra serapan senyawa X dan Y (tumpang tindih dua arah)........ 12
4.1 Spektrum serapan maksimum Metformin (4 μg/ml) ....................... 29
4.2 Spektrum serapan maksimum Glibenklamid (8,7 μg/ml) ............... 29
4.3 Tumpang tindih spektrum serapan Maksimum Metformin

(4 μg/ml) dan Glibenklamid (8,7 μg/ml) ......................................... 30
4.4 Spektrumserapan Metformin konsentrasi 2 μg/ml- 6 μg/ml ........... 30
4.5 SpektrumserapanGlibenklamidkonsentrasi4,7 μg/ml –

12,7 μg/ml ....................................................................................... 31
4.6 Spektrum Serapan Campuran baku Metformin dan Glibenklamid 32
4.7 Spektrum Rasio Metformin dengan spektrum serapan glibenklamid 33
8,7 μg/ml sebagai faktor pembagi .................................................. 33
4.8 Spektrum Rasio Glibenklamid dengan spektrum serapan metformin

4 μg/ml sebagai faktor pembagi ..................................................... 34
4.9 Hasil Mean Centering of ratio spectra (MCR) dari metformin ...... 34
4.10 Hasil Mean Centering of ratio spectra (MCR) dari Glibenklamid 35
4.11 Spektrum Tumpang tindih Metformin dan Glibenklamid secara

MCR ............................................................................................... 36
4.12Spektrum serapan pada Tablet G..................................................... 37
xiv
4.13 Spektrum Rasio Metformin pada Tablet G ................................... 38
4.14 Spektrum Rasio Glibenklamid pada Tablet.................................... 38
4.15 Spektrum MCR Metformin pada Tablet G..................................... 38
4.16 Spektrum MCR Metformin Pada Tablet G .................................... 41
4.17 Spektrum rasio Metformin Uji perolehan Kembali ........................ 42
4.18 Spektrum rasio Glibenklamid Uji perolehan kembali .................... 42
4.19 Spektrum Mean Centering of Ratio Spectra Metformin Uji

perolehan kembali ........................................................................... 43
4.20 Spektrum Mean Centering og Ratio Spectra Glibenklamid Uji

perolehan kembali ........................................................................... 43
xv
DAFTAR GAMBAR DALAM LAMPIRAN
Gambar Halaman
1 Gambar Sampel Tablet G ............................................................. 48
2 Gambar alat-alat ........................................................................... 50
3 Spektrum serapan Metformin konsentrasi 2 µg/ml - 6 µg/ml dan

Glibenklamid 4,7 µg/ml – 12,7 µg/ml ......................................... 82
4 Spektrum serapan campuran baku metformin dan Glibenklamid. 83
5 Spektrum rasio Metformin dan Glibeklamid pada berbagai

konsentrasi .................................................................................... 84
6 Spektrum rasio metformin dan Glibebklamid dalam campuran

baku Metformin dan Glibenklamid ............................................. 85
7 Spektrum MCR rasio Metformin dan Glibenklamid ................... 86
8 Spektrum serapan sampel tablet G ............................................... 87
9 Spektrum MCR serapan sampel tablet G .................................... 89
10 Spektrum, rasio Metformin pada tablet G .................................... 91
11 Spektrum MCR Metformin pada Tablet G .................................. 93
12 Spektrum MCR Glibenklamid pada tablet G ............................... 95
13 Spektrum serapan uji perolehan kembali (% recovery) pada

Tablet G ........................................................................................ 97
14 Spektrum MCR uji perolehan kembali (% recovery) Metformin 98
42 Spektrum MCR uji perolehan kembali (% recovery) Glibenklamid 99
43 Daftar nilai distribusi r ................................................................. 100
44 Daftar nilai distribusi t ................................................................. 101
45 Sertifikat Pengujian Glibenklamid ............................................... 102
xvi
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1 Gambar Sampel Tablet G .......................................................... 48
2 Daftar Spesifik Sampel G ........................................................... 49
3 Gambar alat-alat ......................................................................... 50
4 Bagan alir Pembuatan Larutan Induk Baku (LIB) dan serapan

Maksimum Metformin................................................................ 51
5 Bagan alir pembuatan Larutan Induk Baku (LIB) dan serapan

Maksimum Glibenklamid .......................................................... 52
6 Bagan alir pembuatan dan pengukuran serapan larutan standar

metformin ................................................................................... 53

Glibenklamid .............................................................................. 54

Glibenklamid .............................................................................. 55
9 Bagan Alir pembuatan Larutan Baku campuran Metformin dan

Glibenklamid .............................................................................. 56
10 Bagan alir pembuatan spektrum serapan rasio metformin ........ 57
11 Bagan alir pembuatan spektrum rasio Glibenklamid ................. 58
12 Bagan alir pe,buatan spektrum serapan rasio campuran baku

Metformin dan Glibenklamid ..................................................... 58
13 Bagan alir pembuatan spektrum serapan metformin secara mean

centering of ratio Spectra ........................................................... 58
14 Bagan alir pembuatan spektrum serapan Glibenklamid secara

mean centering of ratio Spectra ................................................ 59
15 Bagan alir pembuatan kurva kalibrasi metformin dan

Glibenklamid secara Mean centering of ratio spectra ............... 60
16 Bagan alir penentuan kadar metformin dan glibenklamid dalam
xvii
sediaan tablet G ......................................................................... 61
17 Bagan alir prosedur penelitian secara keseluruhan ..................... 62
18 Data perhitungan kalibrasi,persamaan regresi dan koefisien

korelasi Metformin ..................................................................... 63
19 Data perhitungan kalibrasi,persamaan regresi dan koefisien

korelasi Glibenklamid................................................................. 64
20 Contoh perhitungan kadar teoritis dari Metformin dan

Glibenklamid dalam tablet G .................................................... 66
21 Data penimbangan serbuk, kadar teoritis Metformin dan

Glibenklamid, serta konsentrasi Glibenklamid yang diadisikan
pada tablet G .............................................................................. 67
22 Konsentrasi perolehan Metformin dan Glibenklamid dalam

tablet G dari persamaan Regresi ................................................. 69
23 Data bobot teoritis, bobot praktek dan Kadar Metformin dan

Glibenklamid .............................................................................. 70
24 Perhitungan KadarMetformin daan Glibenklamid pada Tablet G 71
25 Perhitungan Kadar Metformin dan Glibenklamid secara statistik

pada tablet G ............................................................................. 74
26 Perhitungan simpangan baku relatig (RSD) Metformin dan

Glibenklamid .............................................................................. 75
27 Contoh perhitungan persentase perolehan kembali (% recovery)

sampel yang digunakan adalah Tablet G .................................. 78
28 Data hasil perolehan kembali (% recovery) Metformin pada

Tablet G dengan metode penambahan baku
(standard addition method) ........................................................ 79
29 Data hasil perolehan kembali (% recovery) Glibenklamid pada

Tablet G dengan metode penambahan baku
(standard addition method) ........................................................ 80
30 Perhitungan kadar perolehan kembali metformin dan

Glibenklamid secara Statistik ..................................................... 82
31 Spektrum serapan Metformin konsentrasi 2 µg/ml - 6 µg/ml dan

Glibenklamid 4,7 µg/ml – 12,7 µg/ml ...................................... 84
xviii
32 Spektrum serapan campuran baku metformin dan Glibenklamid 85
33 Spektrum rasio Metformin dan Glibeklamid pada berbagai

konsentrasi .................................................................................. 86
34 Spektrum rasio metformin dan Glibebklamid dalam campuran

baku Metformin dan Glibenklamid ........................................... 87
35 Spektrum MCR rasio Metformin dan Glibenklamid .................. 89
36 Spektrum serapan sampel tablet G ............................................ 91
37 Spektrum MCR serapan sampel tablet G ................................. 93
38 Spektrum, rasio Metformin pada tablet G .................................. 95
39 Spektrum MCR Metformin pada Tablet G ................................. 97
40 Spektrum MCR Glibenklamid pada tablet G ............................. 98
41 Spektrum serapan uji perolehan kembali (% recovery) pada

Tablet G ...................................................................................... 98
42 Spektrum MCR uji perolehan kembali (% recovery) Metformin 98
43 Spektrum MCR uji perolehan kembali (% recovery)

Glibenklamid ............................................................................. 99
44 Daftar nilai distribusi r ................................................................ 100
45 Daftar nilai distribusi t ................................................................ 101
46 Sertifikat Pengujian Glibenklamid ............................................. 102
xix
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Sediaan obat yang baik adalah apabila obat-obat tersebut mengandung
bahan- bahan yang sesuai dengan komposisi. Sediaan Farmasi, misalnya sediaan
tablet telah banyak yang mengandung lebih dari satu macam zat aktif. Campuran
ini bertujuan untuk meningkatkan efek terapi dan kemudahan dalam pemakaian.
Namun, dengan adanya lebih dari satu macam zat aktif dalam satu sediaan obat,
menimbulkan kesulitan dalam penetapan kadarnya (Ditjen POM R.I., 1979).
Metformin dan Glibenklamid merupakan kombinasi yang cocok untuk
penderita Diabetes Melitus tipe 2 pada pasien yang hiperglikemianya tidak bisa
dikontrol dengan single terapi, diet dan olahraga. Metformin satu-satunya
biguanid yang saat ini tersedia, digolongkan sebagai penyensitisasi insulin, obat
ini meningkatkan ambilan glukosa dan penggunaannya oleh jaringan-jaringan
target sehingga menurunkan resistensi insulin dan gliburid (glibenklamid) adalah
generasi ke II sulfanilurea yang potensi hipoglikemik lebih besar. Golongan obat
ini sering disebut sebagai insulin secretagogues, kerjanya merangsang sekresi
insulin dari granul sel-sel β Langerhans pankreas (Harvey dan Champe, 2013)
Pada pembuatan obat, pemeriksaan kadar zat aktif merupakan persyaratan
yang harus dipenuhi untuk menjamin kualitas sediaan obat. Sediaan obat yang
berkualitas baik akan menunjang tercapainya efek terapetik yang diharapkan.
Salah satu persyaratan mutu dan kemurnian yang tertera pada Farmakope (Ditjen
POM R.I., 1995). Jadi harga penetapan kadar obat dapat digunakan untuk
1
membandingkan kekuatan relatif senyawa asam lemah maupun basa lemahdan
juga dapat digunakan bersama sama dengan tetapan fisiokimia lain, termasuk data
kelarutan dan koefisien partisi, untuk berbagai jenis penerapan analitik, peracikan
dan penelitian.Kebanyakan molekul obat menyerap radiasi dalam sinar ultraviolet.
Dilihat dari struktur Metformin dan Glibenklamid yang mempunyai gugus
kromofor, maka senyawa ini dapat menyerap sinar radiasi pada daerah ultraviolet.
Glibenklamid dapat ditentukan kadarnya dengan spektrofotometri
ultraviolet pada pelarut methanol p.a dengan Glibenklamid pada panjang
gelombang 225 nm dan Metformin pada panjang gelombang 236 nm ( A11 =
1163b) (Moffat, dkk.,2011)
Metode Mean Centering Of Ratio Spectra (MCR) digunakan untuk
penetapan kadar secara simultan dari campuran biner dan terner tanpa langkah
pemisah terlebih dahulu maupun derivatisasi pada analisis campuran biner
(Afkhami dan Bahram, 2005)
Beberapa peneliti telah melakukan penetapan kadar campuran metformin
dan glibenclamid menggunakan metode kromatografi cair kinerja tinggi(KCKT)
menggunakan SPE-C-18 dan SPE-MIP monomer akrilamid (Aryanti, dkk.,2016)..
Selain itu, secara kromatografi lapis tipis (KLT) dengan menggunakan plat KLT
sebagai fase diam dan campuran metanol, air dan asam asetat (6:4:5) sebagai fase
gerak.
Beberapa peneliti telah melakukan penetapan kadar campuran obat
menggunakan metode Mean Centering of Ratio Spectra (MCR), antara lain
penetapan kadar campuran klorfenoksamin hidroklorida dan kafein (Mohsen,
dkk.,2013), campuran hidroklorotiazida dengan benazepril hidroklorida dan
2
campuran hidroklorotiazida dengan kandesartan silektesil dalam sediaan tablet,
demikian halnya campuran Parasetamol dan ibuprofen (Reginald,2017).hm
Berdasarkan hal tersebut, dalam penelitian ini akan dilakukan penetapan
kadar Metformin dan Glibenklamid dalam sediaan tablet secara spektrofotometri
ultraviolet dengan menggunakan aplikasi Mean Centering Of Ratio Spectra
(MCR) menggunakan pelarut metanol p.a.
1.2 Perumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang di atas, maka perumusan masalah dalam
penelitian ini adalah sebagai berikut:
a. Apakah Kadar Metformin dan Glibenklamid dalam sediaan tablet memenuhi
persyaratan kadar yang ditetapkan Farmakope Indonesia Edisi V (2014)?
b. Apakah uji validasi terhadap metode spektrofotometri pada Metformin dan
Glibenklamid dalam sediaan tablet memenuhi persyaratan uji validasi?
1.3. Hipotesis
Berdasarkan perumusan masalah di atas, maka dibuat hipotesis sebagai
berikut:
a. Kadar Metformin dan Glibenklamid dalam sediaan tablet memenuhi
persyaratan kadar yang ditetapkan Farmakope Indonesia Edisi V(2014)
b. Uji validasi terhadap metode spektrofotometri pada Metformin dan
glibenklamid dalam sediaan tablet memenuhi persyaratan uji validasi
3
1.4 Tujuan Penelitian
Berdasarkan hipotesis di atas, maka dibuat tujuan sebagai berikut:
a. Untuk mengetahui Kadar Metformin dan Glibenklamid dalam sediaan tablet
memenuhi persyaratan kadar yang ditetapkan Farmakope Indonesia Edisi V
b. Untuk mengetahui uji validasi terhadap metode spektrofotometri pada
Metformin dan Glibenklamid dalam sediaan tablet memenuhi persyaratan uji
validasi
1.5 Manfaat Penelitian
Manfaat penelitian yang dilakukan adalah untuk memberikan informasi
bahwa aplikasi metode spektrofotometri ultraviolet secara Mean Centering Of
Ratio Spectra (MCR) terhadap penetapan kadar Metformin dan Glibenklamid
dalam sediaan tablet dapat dilakukan.
4
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Uraian Bahan
2.1.1 Metformin
Menurut Ditjen BKAK (2014), uraian Metformin adalah sebagai berikut:
Gambar 2.1 Rumus struktur Metformin
Nama IUPAC : N1N-dimetilimidodikarbonimidik diamida
Rumus Molekul : C4H11N5HCL
Berat Molekul : 165,6
Pemerian : Serbuk hablur putih, tidak berbau atau hampir tidak
berbau; higroskopik
Kelarutan : Mudah larut dalam air, praktis tidak larut dalam eterdan
dalam kloroform, sukar larut dalam, etanol.
Metformin dapat ditentukan kadarnya dengan spektrofotometri
ultraviolet pada pelarut methanol p.a pada panjang gelombang 236 nm.
Metformin mungkin digunakan sendiri atau kombinasi dengan
sulfanilurea. Metformin bekerja terutama dengan jalan mengurangi pengeluaran
glukosa hati, sebagian besar dengan menghambat glukoneogenesis. Metformin
mudah diabsorbsi per-oral, tidak terkait dengan protein serum dan tidak
5
dimetabolisme. Eksresi melalui urin. Efek samping saluran cerna tinggi, sangat
jarang menimbulkan asidosis laktat yang fatal (Harvey dan Champe, 2013).
2.1.2 Glibenklamid
Menurut Moffat, dkk., (2011), uraian Glibenklamid adalah sebagai
berikut:
Gambar 2.2 Rumus struktur glibenklamid
Nama IUPAC :1-[4-(2-(5-kloro metoksibenzamido)etil]benzenasulfonil]-
3-sikloheksilurea
Rumus Molekul : C23H28CIN3O5S
Berat Molekul : 494,0
Pemerian : serbuk hablur putih atau hampir putih, tidak berbau atau
hampir tidak berbau
Kelarutan : Tidak larut dalam air, dan dalam eter, sukar larut dalam
etanol dan metanol, larut sebagian dalam kloroform.
Glibenklamid dapat ditentukan kadarnya dengan spektrofotometri
ultraviolet pada pelarut methanol p.a pada panjang gelombang 225 nm.
Menurut Harvey dan Champe (2013), Glibenklamid adalah generasi ke II
Sulfanilurea yang potensi hipoglikemik lebih besar. Golongan obat ini sering
disebut sebagai insulin secretagogues, kerjanya merangsang sekresi insulin dari
6
granul sel-sel β Langerhans pankreas. Rangsangannya melalui interaksinya
dengan ATP-Sensitive K Channel pada membran sel-sel β yang menimbulkan
depolarisasi membran dan keadaan ini akan membuat kanal Ca. Dengan
terbukanya kanal Ca maka ion Ca++ akan masuk sel- β, merangsang granula yang
berisi insulin dan akan terjadi sekresi insulin dengan jumlah yang ekuivalen
dengan peptida-C. Kecuali itu sulfanilurea dapat mengurangi klirens insulin di
hepar.
2.2 Spektrofotometri Ultraviolet-visible (UV-Vis)
2.2.1 Pengertian spektrofotometri ultraviolet-Visible (UV-Vis)
Spektrofotometri adalah alat untuk mengukur transmitan atau serapan
suatu sampel sebagai fungsi panjang gelombang. Spektrofotometri merupakan
penggabungan dari dua fungsi alat yang terdiri dari spektrofotometer yang
menghasilkan sinar dari spektrum dengan panjang gelombang tertentu dan
fotometer sebagai alat pengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan atau yang
diabsorbsi. Jika suatu molekul sederhana dikenakan radiasi elektromagnetik maka
molekul tersebut akan menyerap radiasi elektromagnetik. Interaksi antara molekul
dengan radiasi elektromagnetik ini akan meningkatkan energi dari tingkat dasar ke
tingkat tereksitasi (Rohman, 2007).
Bagian molekul yang bertanggung jawab terhadap penyerapan cahaya
disebut kromofor dan terdiri atas ikatan rangkap dua atau rangkap tiga,terutama
jika ikatan rangkap tersebut terkonjugasi. Semakin panjang ikatan rangkap dua
atau rangkap tiga terkonjugasi didalam molekul, molekul tersebut akan lebih
mudah menyerap cahaya (Rohman, 2007)
7
2.2.2 Kegunaan Spektrofotometri
Kegunaan spektrofotometri ultraviolet dalam analisis kualitatif sangat
terbatas karena rentang daerah radiasi yang relatif sempit hanya dapat
mengakomodasi sedikir sekali puncak absorpsi maksimum dan minimum, karena
itu identifikasi senyawa yang tidak diketahui tidak memungkinkan untuk
dilakukan. Akan tetapi, jika digabung dengan cara lain sepert spektroskopi
inframerah, resonansi magnet inti dan spektroskopi massa, maka dapat digunakan
untuk identifikasi atau analisis kualitatif senyawa tersebut (Rohman, 2007).
Ketika suatu atom atau molekul menyerap cahaya, maka energi tersebut
akan menyebabkan tereksitasinya elektron pada kulit terluar ke tingkat energi
yang lebih tinggi. Tipe eksitasi tergantung panjang gelombang cahaya yang
diserap. Sinar ultraviolet dan sinar tampak akan menyebabkan elektron tereksitasi
ke orbital yang lebih tinggi (Dachriyanus, 2004).
2.2.3 Komponen Spektrofotometer
Spektrofotometer yang sesuai untuk pengukuran di daerah spektrum
ultraviolet – visibel terdiri atas suatu sistem optik dengan kemampuan
menghasilkan sinar monokromatis dalam jangkauan panjanggelombang 200 – 800
nm (Dachriyanus, 2004).Suatu diagram sederhana spektrofotometer Ultraviolet -
Visible ditunjukkan pada Gambar 2.3.
8
Gambar 2.3 Diagram spektrofotometer ultraviolet – visible (Harris, 2007)
a. Sumber cahaya
Sumber cahaya atau lampu yang digunakan adalah dua lampu terpisah yang
digunakan secara bersama-sama, yang mencakup seluruh daerah ultraviolet-
visible. Untuk senyawa yang menyerap pada daerah ultraviolet diperlukan lampu
deuterium sedangkan untuk senyawa yang menyerap pada daerah visible
digunakan lampu tungsten (Sastrohamidjojo, 1985).
b. Celah
Celah dibuat dari logam yang kedua ujungnya diasah dengan sama
( Sastrohamidjojo, 1985).
c. Monokromator
Cahaya yang digunakan harus monokromatis, yaitu cahaya dengan satu
panjang gelombang tertentu. Cahaya monokromatis ini didapat dengan
melewatkan cahaya polikromatis pada sebuah monokromator (Sastrohamidjojo,
1985).
d. Tempat sampel
Kuvet yang digunakan untuk tempat sampel pada pengukuran didaerah ultraviolet
- visible biasanya terbuat dari silika atau glas (Sastrohamidjojo, 1985).
e. Detektor
Peranan detekor adalah memberikan respon terhadap cahaya pada
berbagai panjang gelombang (Sastrohamidjojo, 1985).
9
Biasanya spektrofotometer dilengkapi dengan software yang berfungsi untuk
mengolah data yang dapat dioperasikan malalui komputer yang telah terhubung
dengan spektrofotometer. Spektrofotometri derivatif merupakan metode
manipulatif terhadap spektra pada spektrofotometri UV-Visible (Watson, 2005).
2.2.4 Hukum Lambert-Beer
Menurut hukum Lambert, serapan berbanding lurus terhadap ketebalan
sel yang disinari, sedangkan menurut hukum Beer, serapan berbanding lurus
dengan konsentrasi. Kedua pernyataan ini dapat dijadikan satu dalam hukum
Lambert-Beer, sehingga diperoleh bahwa intensitas yang diteruskan berbanding
lurus terhadap konsentrasi dan ketebalan sel (Rohman, 2007). Hukum Lambert-
Beer umumnya dikenal sebagai persamaan berikut:
A= A11. b. c (g/100ml) atau
A= a. b. c (g/l)
Keterangan :
A = Serapan yang diukur
A11 = serapan larutan (1% b/v) dalam kuvet 1 cm
a = absorptivitas
= absorptivitas molar
b = ketebalan kuvet (cm)
c = konsentrasi larutan
2.2.5 Analisis Multikompenen dengan Spektrofotometri Ultraviolet
Sebuah spektrofotometer tak dapat menganalisis suatu sampel. Alat itu
menjadi berguna hanya setelah sampel diolah sedemikian rupa sehingga
pengukuran dapat ditafsirkan. Tetapi, dalam banyak hal tak perlu tiap komponen
individu dari sampel yang kompleks dipisahkan terlebih dahulu dari sampelnya.
10
Bila suatu larutan mengandung dua konsituen yang menyerap (X dan Y), rumit
tidaknya situasi bergantung pada spektra X dan Y (Day dan Underwood, 1986).
(i) Kasus 1
Spektra tidak tumpang tindih, atau sekurangnya dimungkinkan untuk
menemukan suatu panjang gelombang di mana X menyerap dan Y tidak, serta
panjang gelombang serapan dan panjang gelombang serupa untuk mengukur Y.
Spektra absorpsi senyawa X dan Y (tidak ada tumpang tindih pada dua
panjang gelombang yang digunakan) dapat dilihat pada Gambar 2.4.
Gambar 2.4 Spektra absorpsi senyawa X dan Y (tidak ada tumpang tindih
pada dua panjang gelombang yang digunakan)
(Day dan Underwood, 1986)
(ii) Kasus 2
Tumpang tindih satu arah (dari spektra): seperti ditunjukan dalam Gambar
2.4, Y tidak mengganggu pengukuran X pada λ1,tetapi X memang menyerap
cukup banyak bersama-sama Y pada λ2. Konsentrasi X ditetapkan langsung dari
absorbansi larutan pada λ1. Kemudian absorbans yang disumbangkan oleh
konsentrasi X pada λ2 dihitung absorptivitas molar X dan λ2. Sumbangan ini
dikurangkan dari absorbans terukur pada larutan λ 2, sehingga akan diperoleh
absorbans yang disebabkan oleh Y.
11
Spektra serapan senyawa X dan Y (tumpang tindih satu arah) dapat dilihat
pada Gambar 2.5.
Gambar 2.5 Spektra serapan senyawa X dan Y (tumpang tindih satu

arah)(Day dan Underwood, 1986)
(iii) Kasus 3
Tumpang tindih dua arah (dari spektra): dengan prinsip bahwa tidak ada
panjang gelombang di mana salah satu komponen dapat diukur tanpa gangguan
oleh yang lain.
Spektra serapan senyawa X dan Y (tumpang tindih dua arah) dapat dilihat
pada Gambar 2.6.
Gambar 2.6 Spektra serapan senyawa X dan Y (tumpang tindih dua arah)
(Day dan Underwood, 1986)
2.3 Analisis Simultan secara Mean Centering of Ratio Spectra (MCR)
Menurut Akhfami dan Bahram (2005) dan Mohsen, dkk., (2013), metode
ini dapat digunakan untuk penentuan kadar secara simultan dari campuran biner
12
dan terner tanpa langkah pemisahan terlenih dahulu. Untuk menjelaskan ekspresi
Mean Centering, dicontohkan vektor sebagai berikut:
5
y= 1
3
di MeanCenter kan vektor ini denganmengurangi dari rata-rata vektor
tersebut seperti :
3
y= 3
3
5 3 +2
MC (y) = y – y = 1 - 3 = −2
3 3 0
Hal ini dapat membuktikan bahwa jika vektor y dikalikan dengan n (angka
konstan), vektor hasil MC juga dikalikan dengan n, juga jika nilai konstan
ditambahkan pada vektor y, maka MCtidak berubah (Mohsen, dkk.,2013)..
Menurut Darwish, dkk., (2011), dimisalkan campuran mengandung dua
komponen yaitu X dan Y, jika memenuhi Hukum Beer untuk tiap komponen
dapat ditulis sebagai berikut:
Am = αxCx + αyCy (1)
Keterangan:
Am = vektor absorbansi dari campuran
αx, αy = vektor absorptivitas molar dari X, Vektor absorptivitas Y
Cx,Cy = vektor absorptivitas molar dari Y, Vektor absorptivitas Y
Jika persamaan (1) dibagi dengan αydari spektrum larutan standar Y yang
terdapat dalam campuranbinary mixtures, spektrum rasio pertama diperoleh dalam
bentuk persamaan (2) (tidak boleh digunakan nilai nolsebagai pembagi)

𝛼 𝑥 𝐶𝑥
B= Aαm = α𝑦
+ Cy (2)
y
13
Menurut Darwish, dkk., (2011), jika persamaan (2)dilakukan Mean
Center, dimana konstanta Cy adalah nol, diperoleh persamaan (3) sebagai berikut:
α 𝑥 𝐶𝑥
MC (B) = MC (3)
α𝑦
Dari persamaan (3)merupakan dasar matematika dari analisis campuran
binary mixtures yang memperbolehkan penetapan kadar konsentrasi dari setiap
komponen aktif dari larutan (X dalam persamaan tersebut) tanpa mengganggu
komponen aktif lain dari sistem campuran binary mixtures (Y dalam persamaan
tersebut). Dari persamaan (3) menunjukkan adanya hubungan yang linier antara
MC (B) dan konsentrasi X dalam larutan (Darwish, dkk., 2011).
Untuk membuat kurva kalibrasi dapat dibangun dengan memplot MC(B)
terhadap dengan cara memplotkan nilai MC (B) terhadap konsentrasi X dalam
campuran binary mixtures. Untuk sensitifitas yang lebih baik nilai MC(B), maka
panjang gelombang maksimum dan minimum yang dipilih (Darwish, dkk., 2011).
Menurut Rohman (2007), ada beberapa alasan mengapa harus
menggunakan panjang gelombang maksimum, yaitu:
a. Pada panjang gelombang maksimum, kepekaannya juga maksimal karena
panjang gelombang maksimal tersebut, perubahan absorbansi untuk setiap satuan
konsentrasi adalah yang paling besar.
b. Di sekitar panjang gelombang maksimum, bentuk kurva absorbansi datar dan
pada konsidi tersebut hukum Lambert-Beer akan terpenuhi.
c. Jika dilakukan pengukuran ulang maka kesalahan yang disebabkan oleh
pemasangan ulang panjang gelombang akan kecil sekali, ketika digunakan
panjang gelombang maksimum.
14
2.4 Validasi Metode
Tujuan utama yang harus dicapai dari suatu kegiatan analisis kimia adalah
dihasilkannya data hasil uji yang absah (valid). Secara sederhana hasil uji yang
absah dapat digambarkan sebagai hasil uji yang mempunyai akurasi (accuracy)
dan presisi (precission) yang baik. Validasi adalah suatu tindakan penilaian
terhadap parameter tertentu pada prosedur penetapan yang dipakai untuk
membuktikan bahwa parameter tersebut memenuhi persyaratan untuk
penggunaannya (Harmita, 2004). Parameter analisis yang ditentukan pada validasi
adalah akurasi, presisi, batas deteksi, batas kuantitasi, kelinieran, dan rentang
(Gandjar dan Rohman, 2012).
2.4.1 Akurasi (Kecermatan)
Akurasi adalah kedekatan antara nilai hasil uji yang diperoleh melalui
metode analitik dengan nilai sebenarnya. Untuk pengujian senyawa obat akurasi
diperoleh dengan membandingkan hasil pengukuran dengan bahan rujukan
standar (standar reference material SRM). Akurasi dinyatakan dalam persen
perolehan kembali (%recovery). Akurasi dapat ditentukan dengan tiga cara yaitu:
(1) membandingkan hasil analisis dengan CRM (certified reference material) dari
organisasi standar internasional; (2) spiked-placebo recovery; dan (3) standard
addition method (Gandjar dan Rohman, 2012).
Placebo recovery atau metode simulasi, analit murni ditambahkan (spiked)
kedalam campuran bahan pembawa sediaan farmasi, lalu campuran tersebut
dianalisis dan jumlah analit hasil analisis dibandingkan dengan jumlah analit
teoritis yang diharapkan. Jika plasebo tidak memungkinkan untuk disiapkan,
maka sejumlah analit yang telah diketahui konsentrasinya dapat ditambahkan
15
langsung kedalam sediaan farmasi. Metode ini dinamakan standard addition
method atau metode penambahan baku (Harmita, 2004).
2.4.2 Presisi (Keseksamaan)
Presisi dari suatu metode analisis adalah derajat kesesuaian diantara
masing-masing hasil uji, jika prosedur analisis diterapkan berulang kali pada
sejumlah cuplikan yang diambil dari satu sampel homogen. Presisi dapat diartikan
pula sebagai derajat keterulangan dari prosedur analisis pada kondisi kerja normal
(Watson, 2005).
Presisi ditentukan dengan menggunakan sejumlah aliquot secukupnya dari
satu sampel homogen agar dapat dihitung secara statistik perkiraan deviasi standar
atau deviasi standar yang sahih. Pada uji tersebut setiap cuplikan mendapat
perlakuan analisis yang sama, lengkap dan mandiri, mulai dari persiapannya
sampai dengan didapatkan hasil akhirnya (Watson, 2005).
Sesuai dengan ICH, presisi dilakukan pada 3 tingkatan yang berbeda yaitu
keterulangan (repeatibility), presisi antara (intermediate precision) dan ketertiruan
(reproducibility). Keterulangan yakni presisi pada kondisi percobaan yang sama
(berulang) baik orangnya, peralatannya, tempatnya maupun waktunya. Presisi
seringkali diekspresikan dengan SD atau standar deviasi relatif (RSD) dari
serangkaian data. Nilai RSD dirumuskan dengan:
100 X SD
RSD = ; dimana X merupakan rata-rata, dan SD adalah standar
X
deviasi serangkaian data, rumus menghitung SD adalah sebagai berikut:
(X−X)2 )
SD = ; dimana x adalah nilai dari masing-masing pengukuran; X
(n−1)
adalah rata-rata dari pengukuran; n adalah banyaknya data. Biasanya replikasi
16
dilakukan 6-15 kali dilakukan pada sampel tunggal untuk tiap konsentrasi
(Harmita, 2014).
2.4.3 Spesifitas
Spesifitas suatu metode analisis adalah kemampuan suatu metode analisi
untuk mengukur analit yang dituju secara tepat dan spesifik dengan adanya
komponen-komponen lain dalam matriks sampel, seperti adanya pengganggu,
prekursor sintetik, produk degradasi, dan komponen matriks. Salah satu
pendekatan praktik untuk menguji spesifitas metode analisis adalah dengan
membandingkan hasil-hasil analisis yang diperoleh dari sampel yang mengandung
pengotor (impurities) dengan sampel-sampel yang tidak mengandung pengotor
(Harmita, 2014).
2.4.4 Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi
Menurut Gandjar dan Rohman (2012), Limit deteksi dari suatu metode
analisi adalah nilai batas yaitu konsentrasi analit terendah yang masih dapat
dideteksi. Limit kuantitasi adalah konsentrasi analit terendah dalam sampel yang
dapat ditentukan dengan presisi dan akurasi yang dapat diterima pada kondisi
eksperimen yang ditentukan.
LOD dan LOQ dapat dihitung dengan rumus:
LOD = 3 x (SD/S)
LOQ = 10 x (SD/S)
Keterangan:
SD = standar deviasi
S = kemiringan (slope).
17
2.4.5 Linieritas
Linieritas menyatakan kemampuan metode analisis untuk mendapatkan
hasil pengujian yang sesuai dengan kisaran konsentrasi analit tertentu. Persamaan
garis yang digunakan pada kurva kalibrasi didapat dari persamaan y = ax + b.
Persamaan tersebut akan menghasilkan koefisien korelasi (r). Koefisien korelasi
ini digunakan untuk mengetahui linieritas suatu metode analsis yang digunakan
(Harmita, 2004).
2.4.6 Rentang
Rentang adalah interval antara batas konsentrasi tertinggi dan terendah
analit yang terbukti ditentukan menggunakan prosedur analisis, dengan presisi,
akurasi, dan linieritas yang baik. Rentang biasanya dinyatakan dalam satuan yang
sama dengan hasil uji (Harmita, 2004).
2.4.7 Kekasaran dan ketahanan
Kekasaran dan ketahanan tingkat reprodusibilitas hasil yang diperoleh
dibawah kondisi yang bermacam-macam yang diekspresikan sebagai persen
standar deviasi relatif. Kondisi- kondisi ini meliputi Laboratorium, analis, alat,
reagen, dan waktu percobaan yang berbeda (Gandjar dan Rohman, 2012).
Ketahanan merupakan kapasitas metode untuk tetap tidak terpengaruh oleh
adanya variasi parameter metode yang kecil. Ketahanan dievaluasi dengan
melakukan variasi parameter-parameter metode, seperti: persentase pelarut
organik, Ph, kekuatan ionik, suhu, dan sebagainya (Gandjar dan Rohman, 2012).
18
BAB III
METODE PENELITIAN
3.1 Jenis Penelitian
Penelitian ini termasuk jenis penelitian Eksperimental metode
spektrofotometri ultraviolet secara Mean Centering Of Ratio Spectra (MCR)
terhadap analisis campuran metformin dan glibenclamid yang terkandung dalam
satu sediaan tablet merek dagang.
3.2 Tempat dan waktu Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Penelitian Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara pada bulan Juli-Oktober 2017.
3.3 Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah Spektrofotometri
ultraviolet-visible lengkap (Shimadzu 1800) dengan Personal Computer (PC)
yang dilengkapi dengan softwareUV Probe 2,42 dan software MATLAB(Matrix
Laboratory) R2016a versi 9.0, neraca analitik (Boeco Germany), alat-alat gelas,
serta alat –alat lainnya yang diperlukan dalam penyiapan sampel. Beberapa alat
yang digunakan dapat dilihat pada Lampiran 2, Halaman 49.
3.4 Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian adalah baku Metformin
(Dexa Medica) dan Glibenclamid (Indofarma), metanol p.a
3.5 Pengambilan Sampel
Pengambilan sampel dilakukan secara purposif, yaitu ditentukan atas dasar
pertimbangan bahwa sampel yang terambil mempunyai karakteristik yang sama
dengan yang diteliti (Sudjana, 2005). Pengambilan sampel ditentukan tanpa
19
membandingkan sampel antara satu tempat dengan tempat yang lain karena
pengambilan sampel dianggap homogen. Sampel yang digunakan, yaitu tablet G
(Glucovance) yang mengandung 250 mg metformin dan 1,25 mg glibenclamid.
Gambar dan daftar spesifikasi tablet dapat dilihat pada Lampiran 1 dan 2,
Halaman 49 dan 50.
3.6 Prosedur Penelitian

3.6.1 Pembuatan Larutan Induk Baku (LIB) Metformin
Ditimbang seksama 50,3 mg baku metformin, kemudian dimasukkan
kedalam labu tentukur 50 ml, dilarutkan dalam pelarut Metanol p.a hingga larut,
Dicukupan volume dengan pelarut yang sama sampai garis tanda sehingga
didapatkan larutan dengan konsentrasi 1006 µg/ml (LIB I). Dari larutan LIB I,
dipipet 5 ml dan dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 ml, dicukupkan dengan
pelarut yang sama sampai garis tanda sehingga didapatkan larutan dengan
konsentrasi 50,3 µg/ml (LIB II). Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada
Lampiran 4, Halaman 52.
3.6.2 Pembuatan Larutan Induk Baku (LIB) Glibenklamid
Ditimbang seksama 25,2mg baku glibenklamid, kemudian dimasukkan
kedalam labu tentukur 25 ml, dilarutkan dalam pelarut Metanol p.a hingga larut,
Dicukupan volume dengan pelarut yang sama sampai garis tanda sehingga
didapatkan larutan dengan konsentrasi 1008 µg/ml (LIB I). Dari larutan LIB I,
dipipet 2,5 ml dan dimasukkan ke dalam labu tentukur 25ml dicukupkan volume
dengan pelarut yang sama sampai garis tanda sehingga didapatkan larutan dengan
konsentrasi 100,8 µg/ml. Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada
Lampiran 5, Halaman 53.
20
3.6.3 Analisis Kualitatif
3.6.3.1 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum Metformin
Dipipet sebanyak 0,75 ml larutan induk baku (LIB II) Metformin,
dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 ml, diencerkan dengan pelarut metanol p.a
hingga garis tanda, dikocok sampai homogensehingga diperlukan larutan dengan
konsentrasi 4µg/ml, kemudian diukur serapan pada rentang panjang gelombang
200-400 nm. Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 4,
Halaman 52.
3.6.3.2 Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum Glibenklamid
Dipipet 0,87 ml larutan induk baku (LIB II) Glibenclamid, dimasukkan
ke dalam labu tentukur 10 ml, diencerkan dengan pelarut methanol p.a hingga
garis tanda, dikocok sampai homogensehingga diperlukan larutan dengan
konsentrasi 8,7 µg/ml, kemudian diukur serapan pada rentang panjang gelombang
200-400 nm. Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 5
Halaman 53.
3.6.4 Pembuatan Spektrum Serapan Baku
3.6.4.1 Pembuatan Spektrum Serapan Baku Metformin
Larutan standar Metformin dibuat dalam 5 labu tentukur 10 ml yang
memiliki konsentrasi masing-masing 2 µg/ml; 3 µg/ml;4 µg/ml;5 µg/ml; dan 6
µg/ml , dengan cara memipet sebanyak 0,4 ml; 0,6 ml; 0,75ml; 0,92ml; 1,1ml
secara berurutan dari LIB II dan diencerkan dengan pelarut metanol p.a.
Kemudian dicukupkan dengan pelarut yang sama sampai garis tanda. Bagan alir
pengukuran serapan dapat dilihat pada Lampiran 6 Halaman 54.
21
3.6.4.2 Pembuatan Spektrum Serapan Baku Glibenklamid
Larutan standar Glibenclamid dibuat dalam 5 labu tentukut 10 ml yang
memiliki konsentrasi masing-masing 4,7 µg/ml; 6,7 µg/ml; 8,7 µg/ml;10,7
µg/ml;12,7 µg/ml , dengan cara memipet 0,47 ml; 0,67 ml; 0,87 ml;1,1 ml; 1,3 ml
secara berurutan dari LIB II dan diencerkan dengan pelarut methanol p.a
kemudian dicukupkan dengan pelarut yang sama sampai garis tanda. .Bagan alir
prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 7 Halaman 55.
3.6.4.3 Pembuatan Spektrum Serapan Campuran Baku Metformin dan

Glibenklamid
Ditimbang seksama masing-masing 10 mg baku metformin dan
glibenklamid, dimasukkan masing-masing kedalam labu tentukur 10 ml,
dilarutkan dengan pelarut metanol p.a sampai garis tanda, dan dihomogenkan.
Kemudian dipipet 0,75 ml dari metfomin dan dipipet 0,87 ml dari glibenklamid.
Kedua larutan dicampurkan kedalam labu tentukur 10 ml, dicukupkan dengan
pelarut metanol p.a sampai garis tanda, dan dikocok sampai homogen. Dari
larutan tersebut, dipipet 1 ml, dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml,
dicukupkan sampai garis tanda, dan dikocok sampai homogen. Diukur serapan
pada rentang panjang gelombang 200-400 nm. Bagan alir prosedur penelitian
dapat dilihat pada Lampiran 8 Halaman 56.
3.6.5 Pembuatan Spektrum Serapan Rasio

3.6.5.1 Pembuatan Spektrum Serapan Rasio Metformin
Spektrum serapan metformin pada berbagai konsentrasi dibagi dengan
spektrum serapan glibenklamid konsentrasi 8,7 µg/ml dengan bantuan software
UV Probe 2,42, di mana spektrum serapan Metformin yang telah disimpan di
manipulate dengan tipe data set kemudian dipilih operasi pembagian
22
(division)dengan tujuan untuk membagi spektrum Metformin dan Glibenklamid.
Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran9 Halaman 57.
3.6.5.2 Pembuatan Spektrum Rasio Glibenklamid
Spektrum serapan Glibenclamid pada berbagai konsentrasi dibagi dengan
spektrum serapan metformin konsentrasi 4µg/ml dengan bantuan software UV
Probe 2,42, di mana spektrum serapan glibenklamid yang telah disimpan di
manipulate dengan tipe data set kemudian dipilih operasi pembagian (division)
dengan tujuan untuk membagi spektrum glibenklamid dan metformin. Bagan alir
prosedur penelitian dapat dilihat pada Lampiran 10 Halaman 58.
3.6.5.3 Pembuatan Spektrum Serapan Rasio Campuran Metformin Dan

Glibenklamid
Spektrum serapan campuran metformin dan glibenklamid dibagi masing-
masing dengan spektrum serapan metformin konsentrasi 4 µg/ml untuk
penetapan kadar glibenclamid, spektrum campuran metformin dan glibenklamid
dibagi dengan spektrum glibenklamid dengan konsentrasi 8,7 µg/ml dengan
bantuan software UV Probe 2,42, di mana spektrum serapan campuran metformin
dan glibenclamid yang telah disimpan di-manipulate dengan tipe data-set
kemudian dipilih operasi pembagian dengan tujuan untuk membagi spektrum
campuran dengan spektrum glibenclamid dan metformin. Bagan alir prosedur
penelitian dapat dilihat pada Lampiran 11 Halaman 59.
3.6.6 Pembuatan Spektrum Serapan Secara Mean Centering Of Rasio Spectro

(MCR)
3.6.6.1 Pembuatan Spektrum Serapan Metformin Secara Mean Centering Of
Ratio Spectra (MCR)
Spektrum serapan metformin dibagi dengan spektrum serapan
glibenklamid konsentrasi 8,7 µg/ml dengan bantuan software UV probe 2.42
23
untuk memperoleh spektrum rasio pertama yang kemudian di-meancenter-kan
dengan bantuan software MATLAB versi 9.0. Bagan alir prosedur penelitian
dapat dilihat pada Lampiran 12 Halaman 60.
3.6.6.2 Pembuatan Spektrum Serapan Glibenklamid Secara Mean Centering

Of Ratio Spectra (MCR)
Spektrum serapan Glibenklamid dibagi dengan spektrum serapan
glibenClamid konsentrasi 4 µg/ml dengan bantuan software UV probe 2.42 untuk
memperoleh spektrum rasio pertama yang kemudian di-meancenter-kan dengan
bantuan software MATLAB versi 9.0. Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat
pada Lampiran 13 Halaman 61.
3.6.7 Pembuatan Kurva Kalibrasi Secara Mean Centering Of Ratio Spectra

(MCR)
3.6.7.1 Pembuatan Kurva Kalibrasi Metformin Secara Mean Centering Of
Ratio Spectra (MCR)
Nilai mean center (MC) atau ampitudo dari spektrum rasio pertama
metformin pada panjang gelombang maksimum yang diperoleh, dihitung, dan
diplot dengan konsentrasi untuk mendapatkan persamaan garis regresinya.Bagan
alir prosedur dapat dilihat pada Lampiran 14 Halaman 62.
3.6.7.2 Pembuatan Kurva Kalibrasi Glibenklamid Secara Mean Centering of

Ratio Spectra (MCR)
Nilai mean center (MC) atau ampitudo dari spektrum rasio pertama
glibenklamid pada panjang gelombang maksimum yang diperoleh, dihitung, dan
diplot dengan konsentrasi untuk mendapatkan persamaan garis regresinya.Bagan
alir prosedur dapat dilihat pada Lampiran 14 Halaman 62.
24
3.7 Validasi Metode
3.7.1 Akurasi
Uji akurasi dilakukan dengan metode penambahan baku(standard Addition
Method), yaitu dengan membuat 3 konsentrasi analit sampel dengan rentang
spesifik 80%, 100%, 120%, dimana masing –masing dilakukan sebanyak 3 kali
perlakuan. Setiap rentang mengandung 70% analit dan 30% baku pembanding,
kemudian dianalisis dengan perlakuan yang sama seperti pada penetapan kadar
(Harmita, 2004).
Spektrum serapan yang dihasilkan kemudian dibuat spektrum rasio untuk
masing-masing metformin dan glibenklamid, kemudian dilanjutkan dengan
pembuatan spektrum MCR dan dilakukan penetapan kadar seperti pada sampel.
Berikut dibawah merupakan rumus persen perolehan kembali:
𝐶𝐹−𝐶𝐴
% perolehan kembali = 𝑋 100%
𝐴𝐶∗
Keterangan:
CF =Konsentrasi sampel setelah penambahan baku
CA = konsentrasi sampel sebelum penambahan baku
CA = Jumlah baku yang ditambahkan
3.7.2 Presisi
Penentuan presisi berdasarkan nilai relative standard deviation (RSD)
dengan persyaratan simpangan baku relatif bernilai kurang dari 2% (Harmita,
2004). RSD dirumuskan sebagai berikut :
SD
𝑅𝑆𝐷 = _ x 100%
𝑋
Keterangan :
RSD = Standar deviasi relatif (%)
SD = Standar deviasi
X = Kadar rata-rata zat dalam sampel
25
3.7.3 Linieritas
Linieritas menyatakan kemampuan metode analisis untuk mendapatkan
hasil pengujian yang sesuai dengan kisaran konsentrasi analit tertentu. Persamaan
garis yang digunakan pada kurva kalibrasi didapat dari persamaan y= ax + b.
Persamaan tersebut akan menghasilkan koefisien korelasi (r). Koefisien korelasi
ini digunakan untuk mengetahui linieritas suatu metode analisis yang digunakan
(Harmita, 2004).
3.7.4. Batas Deteksi ( LOD) Dan Batas Kuantitatif ( LOQ)
Berdasarkan absorbansi pada panjang gelombang analisis dilakukan pula
perhitungan LOD dan LOQ.
𝛴(𝑌 − 𝑌𝑖)2
𝑆𝐵 =
𝑛−2
3 𝑥 𝑆𝐵
LOD = 𝑠𝑙𝑜𝑝𝑒
10 𝑥 𝑆𝐵
LOQ = 𝑠𝑙𝑜𝑝𝑒
Keterangan :
SB = Simpangan baku
Slope = a (y = ax+b)
3.7.5 Analisis Data Penetapan Kadar Secara Statistik
Data perhitungan kadar Metformin dan Glibenclamid dianalisis secara
statistik dengan menggunakan uji ttabel distribusi t dapat dilihat pada Lampiran 23.
Rumus yang digunakan adalah :
𝛴(𝑋 − 𝑋)2
𝑆𝐷 =
𝑛−1
Untuk mencari thitung digunakan rumus :
𝑋−𝑋
thitung = 𝑆𝐷/ 𝑛
26
Data diterima jika thitung< ttabel pada interval kepercayaan 99% dengan nilai α =
0.01
Keterangan :
SD = Standard deviation/simpangan baku
X = Kadar dalam satu perlakuan
X = Kadar rata-rata dalam satu perlakuan

n = Jumlah pengulangan
Α = Tingkat kepercayaan
3.8 Penentuan Kadar Metformin Dan Glibenclamid Dalam Sediaan Tablet
Ditimbang 20 tablet, kemudian digerus dalam lumpang sampai halus dan
homogen. Ditimbang seksama sejumlah serbuk setara 50 mg metformin
(penimbangan dilakukan sebanyak 6 kali pengulangan) dan dihitung kesetaraan
Glibenclamid yang terkandung didalamnya. Dimasukkan serbuk yang telah
ditimbang kedalam labu tentukur 50 ml, dilarutkan dengan pelarut metanol p.a
dan, dihomogenkan dengan sonikator selama 15 menit, dicukupkan sampai garis
tanda.Larutan tersebut disaring, lebih kurang 10 ml filtrat pertama dibuang, filtrat
selanjutnya ditampung. Kemudian dipipet sebanyak 0,1 ml dimasukkan kedalam
labu tentukur 25 ml. Kemudian ditambahkan 4,3 ml larutan baku glibenclamid
(konsentrasi 50,3µg/ml), dimasukkan kedalam labu tentukur 25 ml yang
didalamnya terdapat 0,1 ml filtrat, lalu dicukupkan dengan pelarut metanol p.a
sampai garis tanda sehingga diperoleh larutan yang mengandung metformin
konsentrasi 3,9984 µg/ml dan glibenclamid 8,6801 µg/ml. Diukur serapan yang
diperoleh, dibuat spektrum rasio masing-masing metformin dan glibenclamid,
kemudian di-meansenter-kan. Bagan alir prosedur penelitian dapat dilihat pada
Lampiran 15 Halaman 6.
27
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Penentuan Spektrum Serapan Maksimum

4.1.1 Spektrum Serapan Maksimum Metformin Dan Glibenklamid
Spektrum serapan maksimum Metformin dan Glibenklamid masing-
masing dapat dilihat pada Gambar 4.1 dan Gambar 4.2.
Gambar 4.1 Spektrum serapan maksimum Metformin (4 μg/ml)
4 μg/ml
Gambar 4.2 Spektrum serapan Maksimum Glibenklamid (8,7 μg/ml)
Penentuan spektrum serapan maksimum Metformin dan Glibenklamid
dibuat pada rentang panjang gelombang 200-400 nm. Berdasarkan hasil spektrum
serapan secara kualitatif, diperoleh panjang gelombang maksimum Metformin (
konsentrasi4 μg/ml) pada 235,6 nm dan untuk Glibenklamid ( konsentrasi 8,7
μg/ml) pada 228,2 nm.
28
Serapan Maksimum
Metformin(4 μg/ml)
Serapan Maksimum
Glibenklamid(8,7 μg/ml)
Gambar 4.3 Tumpang tindih spektrum serapan Maksimum Metformin (4 μg/ml)

dan Glibenklamid (8,7 μg/ml)
Spektrum pada Gambar 4.3 dibuat dengan menggabungkan serapan
maksimum dari Metformin (4μg/ml) dan glibenklamid (8,7μg/ml). Pada gambar
di atas menunjukkan bahwa spektrum serapan metformin bertumpang tindih
sepenuhnya dengan spektrum serapan Glibenklamid .
4.2 Hasil Pembuatan Spektrum Serapan Metformin Dan Glibenklamid Pada

Berbagai Konsentrasi
Spektrum serapan Metformin dan Glibenklamid pada berbagai konsentrasi
dapat dilihat pada gambar 3.4 dan gambar 3.5
Konsentrasi 23 μg/ml
Gambar 4.4 Spektrum serapan Metformin konsentrasi2 μg/ml -6 μg/ml
29
Spektrum serapan Metformin 2 μg/ml, 3 μg/ml, 4 μg/ml, 5 μg/ml, 6 μg/ml
dibuat sesuai dengan hukum Lambert-beer (absorbansi 0,2-0,8).
Konsentrasi 4,7 μg/ml
Gambar 4.5 Spektrum Serapan Glibenklamid pada konsentrasi 4,7 μg/ml – 12,7
μg/ml
Spektrum serapan Glibenklamid 4,7 μg/ml, 6,7 μg/ml, 8,7 μg/ml, 10,7
μg/ml, 12,7 μg/ml dibuat sesuai dengan hukum Lambert-beer (absorbansi 0,2-0,8).
spektrum Metformin dan Glibenklamid diatas menunjukkan bahwa bentuk
spektrum sama dan panjang gelombang tidak berybah pada berbagai konsentrasi.
4.3Hasil Spektrum Serapan Campuran Baku Metformin Dan Glibenklamid
Spektrum serapan campuran baku Metformin Dan Glibenklamid dapat
dilihat pada Gambar 4.6.
30
Gambar 4.6 Spektrum Serapan Campuran baku Metformin dan Glibenklamid
Pengukuran spektrum serapan campuran baku dilakukan berdasarkan
perbandingan konsentrasi sampel (obat). Dimana konsentrasi metformin dan
glibenklamid adalah 200:1. Dimana glibenklamid dilakukan adisi standar untuk
mencapai serapan maksimum untuk memenuhi hukum Lambert-beer, sehingga
konsentrasi Glibenklamid yang dibuat adalah 8,7 μg/ml.
Campuran baku Metformin konsentrasi 4 μg/ml dan glibenklamid 8,7
μg/ml
menghasilkan spektrum yang berbeda dengan spektrum metformin dan
glibenklamid masing-masing karena spektrum serapan campuran diatas
merupakan kombinasi dari spektrum zat penyusunnya.
4.4 Hasil Spektrum Serapan Rasio Metformin Dan Glibenklamid
Serapan rasio metformin dan glibenklamid dapat dilihat pada Gambar 4.7
dan Gambar 4.8 berikut ini
31
Konsentrasi 3μg/ml
μg/ml
μg/ml
μg/ml
Konsentrasi 5μg/ml
μg/ml
μg/ml
Gambar 4.7 Spektrum Rasio Metformin dengan spektrum serapan glibenklamid

glibenklamid 8,7 μg/ml sebagai faktor pembagi
Konsentrasi 4,7μg/ml
μg/ml
μg/ml
μg/ml
μg/ml
μg/ml
μg/ml
Konsentrasi 3μg/ml
μg/ml
μg/ml
μg/ml
μg/ml
Gambar 4.8 Spektrum Rasio Glibenklamid dengan spektrum serapan metformin

4 μg/ml sebagai faktor pembagi
Metode Mean Centering of ratio (MCR) diawali dengan membuat
spektrum rasio dan memilih konsentrasi faktor pembagi(divisor). Penentuan
konsentrasi pembagi diambil dari rentang konsentrasi yang memenuhi hukum
Lambert-beer. Konsentrasi faktor pembagi yang digunakan dalam penelitian ini
adalah metformin 8,7 μg/ml dan glibenclamid 4 μg/ml. Dasar pemilihan
konsentrasi faktor pembagi adalah tidak terdapat perbedaan pada letak panjang
32
gelombang maksimum dari zat-zat yang dibagi spektrumnya, yang berbeda hanya
tinggi puncak atau nilai absorbandi yang dihasilkan, sehingga yang dipilih
konsentrasi yang mendekati dengan perbandingan sampel (Harmita, 2004).
4.5 Hasil Mean Centering Of Ratio Spectra (MCR) Metformin , Glibenklamid,

Dan Spektrum Tumpang Tindih
Spektrum Mean Centering of ratio spectra (MCR)dari baku metformin
,glibenklamid, dan Tumpang Tindih dapat dilihat pada Gambar 4.9, Gambar 4.10,
dan 4.11.
Gambar 4.9 Mean Centering of ratio spectra (MCR) dari metformin
Gambar 4.10 Mean Centering of ratio spectra (MCR) dari Glibenklamid
33
Gambar 4.9 dan Gambar 4.10 diperoleh dari data-data absorbansi
spektrum serapan Metforminyang dianalisis dibagi dengan divisor yang telah
ditentukan menggunakan software UV Probe 2.42 maka diperoleh hasil
absorbansi rasio. Spektrum rasio kemudian di input kedalam software MATLAB
untuk mendapatkan nilai MC dari masing-masing spektrum dan di plot.
Gambar 4.11 Spektrum Tumpang Tindih Secara MCR
Pada gambar 4.11 dapat dilihat bahwa spektrum metformin dan glibenklamid
sudah terpisah sehingga tidak ada gangguan dari masing-masing zat setelah dibagi
dengan divisor. Dimana panjang gelombang dari metformin mengalami
pergeseran kearah yang lebih besar yang disebut batokromik (pergeseran merah)
sedangkan untuk glibenklamid mengalami pergeseran kearah yang lebih kecil atau
Hipsokromik (Pergeseran biru). Maka dapat dikatakan bahwa metformin dan
glibenklamid sudah terpisah menjadi zat tunggalnya sehingga dapat ditetapkan
kadar dari masing-masing zat aktif.
34
4.6 Hasil Pembuatan Kurva Kalibrasi Secara Mean Centering of Ratio
Spectra (MCR)
Persamaan regresi metformin yang diperoleh adalah Y= 0,1743 X +
0,0246dengan koefisien korelasi 0,9976
1.2
0.8
NILAI MC
0.6
0.4
0.2
0
0 1 2 3 4 5 6 7
KONSENTRASI (μg/ml)
Gambar 4.12 Kurva kalibrasi Metformin secara MCR
Persamaan regresi glibenklamid yang diperoleh adalah Y= 0,2499 X +0,0314
dengan koefisien korelasi 0,999.
10
9
8
7
NILAI MC
6
5
4
3
2
1
0
0 2 4 6 8 10 12 14
KONSENTRASI (μg/ml)
Gambar 4.13Kurva Kalibrasi Glibenklamid secara MCR
Nilai r > 0,995 menunjukkan adanya korelasi linier antara X dan Y (Moffat, dkk.,
2011).
35
Pembuatan kalibrasi dilakukan dengan memplot nilai Mean Center (MC)
atau amplitudo masing-masing metformin dan glibenclamid pada puncak panjang
gelombang maksimum yang dihasilkan oleh MCR dengan konsentrasi masing-
masing serapan (Afkhami dan Bahram, 2005).
4.7Hasil Penetapan Kadar Metformin dan Glibenclamid Dalam Sediaan

Tablet
Spektrum serapan tablet G dapat dilihat pada Gambar 4.14.
Gambar 4.14Spektrum serapan pada Tablet G
Pembuatan Larutan sampel pada tablet G dilakukan dengan metode adisi
standar sampai mencapai konsentrasi maksimum. Pengadisian Glibenklamid
dilakukan dengan alasan bahwa hasil orientasi, sampel yang diukur mengandung
Metformin dan Glibenklamid dengan perbandingan 1:200, dimana serapan
Glibenklamid yang terukur tidak memenuhi hukum Lambert-beer (serapan tidak
terdapat dalam rentang 0,2-0,6), sehingga dilakukan adisi sampai mencapai
konsentrasi maksimum.
Menurut Harmita (2004), dalam metode adisi, sejumlah sampel yang
dianalisi ditambah analit dengan kadar yang diperlukan dari kadar analit yang
diperkirakan, dicampur, dan dianalisis kembali. Selisih kedua hasil dibandingkan
dengan kadar yang sebenarnya.
36
Sampel yang telah dipreparasi kemudian diukur pada panjang gelombang
200-400 nm. Spektrum serapan sampel yang diperoleh merupakan campuran dari
spektrum Metformin dan Glibenklamid, kemudian spektrum sampel dibagi
dengan spektrum dengan spektrum Glibenklamid 8,7 μg/ml untuk mendapatkan
spektrum rasio Metformin dan dibagi dengan spektrum Metformin 4 μg/ml untuk
mendapatkan spektrum serapan rasio Glibenklamid. Spektrum rasio kemudian di
Mean Center (MC) untuk mendapatkan nilai MC yang kemudian dihitung
konsentrasnya menggunakan persamaan regresi dan dihitung kadarnya.
Spektrum rasio Metformin dan spektrum rasio Glibenclamid pada tablet
G dapat dilihat pada Gambar 4.15 dan Gambar 4.16.
Gambar 4.15 Spektrum Rasio Metformin pada Tablet G
Gambar 4.16Spektrum Rasio Glibenclamid pada Tablet G
37
Spektrum MCR Metformin dan Spektrum MCR Glibenclamid pada Tablet
G dapat dilihat pada Gambar 4.17 Dan Gambar 4.18.
Gambar 4.17Spektrum MCR Metformin pada Tablet G
Gambar 4.18Spektrum MCR Glibenclamid Pada Tablet G
Nilai mean center (MC) Metformin dan Glibenklamid pada Tablet G dapat dilihat
pada Tabel 4.1
38
Tabel 4.1 Nilai Mean Center (MC) Metformin dan Glibenklamid Pada tablet G
No Metformin Glibenklamid
1 0,7458 2,2057
2 0,7491 2,2058
3 0,7491 2,2058
4 0,7493 2,2057
5 0,7489 2,2057
6 0,7513 2,2058
Hasil penetapan kadar Metformin dan Glibenklamid dapat dilihat pada Tabel 4.2
Tablet 4.2 Kadar Metformin pada Tablet G
No Bobot Teoritis Bobot Perolehan (mg) Kadar (%)

(mg)
1 50,06 51,72 103,01%
2. 50,22 51,97 102,70%
3. 50,30 51,96 102,53%
4. 50,31 51,97 102,55%
5. 50,47 51,93 102,15%
6. 49,90 52,11 103,66%
39
Tabel 4.3 Kadar Glibenklamid pada Tablet G
No Bobot Bobot Perolehan Bobot Kadar(%)

Teoritis (mg) Glibenclamid
(mg) yang diadisikan
(mg)
1 0,2498 10,8501 10,8500 102,41%
2. 0,2511 10,8762 10,8498 103,97%
3. 0,2515 10,8762 10,8497 104,31%
4. 0,2498 10,8501 10,8499 102,38%
5. 0,2515 10,8752 10,8497 104,31%
6. 0,2495 10,8762 10,8500 104,15%
Contoh perhitungan Kadar Metformin dan Glibenklamid pada Tablet G dapat
dilihat pada Lampiran 23 Halaman 70.
Hasil Penetapan kadar secara statistik Metformin dan Glibenklamid pada
tablet G dapat dilihat pada Tabel 4.4
Tabel 4.4Kadar Metformin dan Glibenclamid pada tablet G secara statistik
No. Obat Kadar Kandungan Persyaratan
dalam etiket Kadar
1 Metformin (102,76 ± 0,349) % 250 mg (95-105)%
2 Glibenclamid (103,58 ± 0,572) % 1,25 mg (95-105)%
Rentang kadar pada Tablet G untuk Metformin dan Glibenklamid
masing-masing adalah 95 - 105 % dan 95-105%. Simpangan baku relatif (RSD)
untuk Metformin dan Glibenklamid adalah 0,43% dan 0,36% Metformin dan
glibenklamid mempunyai presisi yang baik karena nilai RSD keduanya kurang
dari 2%. Contoh perhitungan Kadar statistik Tablet G dapat dilihat pada
Lampiran24 Halaman 71.
40
4.8 Hasil Validasi Metode
Parameter validasi yang diuji adalah akurasi (kecermatan),
presisi(keseksamaan), batas deteksi (LOD), dan batas kuantitas (LOQ). Uji
akurasi dinyatakan dalam persen perolehan kembali (% recovery) yang ditentukan
dengan metode adisi standar. Pada penelitian ini dilakukan uji validasi dengan
metode adisi standar pada sampel tablet G.
Uji akurasi dilakukan dengan membuat tiga konsentrasi sampel dengan
rentang spesifik 80%, 100%, dan 120% dihitung dari kesetaraan penimbangan
pada penetapan kadar sampel, masing-masing rentang spesifik terdiri dari tiga kali
pengulangan yang mengandung 70% analit dan 30% baku.Spektrum serapan uji
perolehan kembali dapat dilihat pada Gambar 4.17 dan Gambar 4.18. dan
Spektrum MCR uji perolehan kembali dari Metformin dan Glibenklamid dapat
dilihat pada Gambar 4.19 dan 4.20.
Gambar 4.19Spektrum rasio Metformin Uji perolehan Kembali
41
Gambar 4.20Spektrum rasio Glibenklamid Uji perolehan kembali
Gambar 4.21Spektrum Mean Centering of Ratio Spectra Metformin Uji

perolehan kembali
42
Gambar 4.22Spektrum Mean Centering og Ratio Spectra Glibenklamid Uji
perolehan kembali
Rata-rata % recovery telah memenuhi syarat akurasi untuk validasi metode
karena rata-rata kadar perolehan kembali berada pada rentang 98%-102% dengan
untuk metformin 100,23% dan untuk glibenklamid 100,63%. Simpangan baku
relatif (RSD) memenuhi syarat presisi karena masing-masing kurang dari 2%
dengan 0,20% untuk Metformin dan 0,17% untuk Glibenklamid. Contoh
perhitungan RSD Metformin dan Glibenklamid dapat dilihat pada Lampiran 28
dan Lampiran 29 Halaman 79 dan 83.
43
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Berdasarkan penelitian yang dilakukan, maka dapat disimpulkan:
a. Kadar Metformin dan Glibenklamid dalam campuran sediaan tablet yang
ditentukan dengan metode spektrofotometri ultraviolet secara Mean
Centering of Ratio Spectra (MCR) memenuhi persyaratan kadar sediaan
tablet menurut Farmakope Indonesia Edisi V yaitu (102,76 ± 0,349)%
untuk Metformin dan(103,58 ± 0,572) % untuk Glibenklamid
b. Hasil uji validasi terhadap metode spektrofotometri ultraviolet secara
mean centering of ratio spectra (MCR) untuk penetapan kadar Metformin
dan Glibenklamid dalam sediaan tablet memenuhi syarat validasi.
5.2 Saran
Disarankan pada peneliti selanjutnya agar dilakukan penetapan kadar obat
yang mengandung 3 campuran dengan metode spektrofotometri ultraviolet secara
Mean Centering Of Ratio Spectra (MCR).
44
DAFTAR PUSTAKA
Afkhami, A., dan Bahram, M. (2005). Mean Centering Of Ratio Spectra As a new
Spectrophotometric Method for the Analysis of Binary and Ternery
Mixture. Elsevier. 66: 712-720
Dachriyanus. (2004). Analisis Struktur Senyawa Organik Secara Spektroskopi.

Padang: Andalas University Press. Halaman 12.
Darwish, H. W., Hassan, S. A., Salem, M. Y., dan El-Zeiny, B. A. (2011). Three
Different Spectrophotometric Methods Manipulating Ratio Spectra for
Determination of Binary Mixture of Amlodipine and Atorvastatin.
Elsivier. 83: 140-148
Day, R. A., dan Underwood, A. L. (1986). Quantitative Analysis. Fifth Edition:

Penerjemah: Pudjaatmaka, A. H. (1989). Analisis Kimia Kuantitatif. Edisi
Kelima. Jakarta: Erlangga. Halaman 413-415.
Ditjen BKAK. (2014). Farmakope Indonesia. Edisi Kelima. Jakarta; Kementrian

Kesehatan R. I. Halaman 498;848.
DitjenPOM R. I. (1979). Farmakope Indonesia. Edisi Ketiga. Jakarta:

Departemen Kesehatan R. I. Halaman 748.
Ditjen POM R. I. (1995). Farmakope Indonesia. Edisi Keempat. Jakarta;

Dapertemen Kesehatan R. I. Halaman 268,363-369.
Finkel, R., Clark, M. A., dan Cubeddu, L. X. (2009). Lippincott’s Illustrated

Reviews: Pharmacology. Penerjemah: Ramadhani, D., Muttaqin, H.,
Dwijayanthi, L., dan Rachman, L. Y. (2013). FarmakologiUlasan
Bergambar. Edissi 4. New Jersey: Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Halaman 67-73
Gandjar, G. I., dan Rohman, A. (2012). Analisis Obat. Yogyakarta: Pustaka

Pelajar. Halaman 47.
Harris, D. C. (2007). Quantitative Chemical Analysis. Edisi Ketujuh. Cetakan I.

New York: W. H. Freeman and Company. Halaman 345.
Harmita. (2004). Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara

Perhitungannya.MajalahIlmuKefarmasian.1(3); 117-1135
Hasanah, A. N., Martha, P. N., Saptarini, N. M dan Aryanti, A. D. (2016).

Optimasi Kondisi Pemisahan Glibenklamid Kombinasi Metformin
45
dengan KCKT-SPE MIP Akrilamid. Skripsi. Jawa Barat: Fakultas
Farmasi Universitas Padjajaran. Halaman 38.
Moffat, A. C., Osselton, M.D., dan Widdop, B. (2011). Clarke”s Analysis of

Drugs And Poisons. Fourth Edition. London: Pharmaceutical. Halaman
299.
Mohsen, A, M.,Lotfy,H. M., Badawey, A. M., Salem, H., dan Elkhateeb, S. Z.

(2013). Application oh Thrree Novel Spectrophotomethric Methods
Manipulating Ratio Spectra For Resolving a Pharmaceutical Mixture of
Chlorphenoxamine Hydrochloride and Caffein. International Journal of
Phamacy and Pharmaceutical Scienes.5(1): 478-487.
Reginald, E. (2017). Aplikasi Metode Spektrofotometri Ultraviolet Secara Mean

Centering Of Rasio Spectra (MCR) Terhadap penetapan Kadar Binary
Mixture Parasetamol Dan Ibuprofen Dalam Sediaan Tablet. Skripsi.
Medan; Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara. Halaman 27.
Rohman, A. (2007). Kimia Farmasi Analisi. Cetakan Pertama. Yogyakarta:

Pustaka Pelajar. Halaman 243,
Sastrohamidjojo, H. (1985). SPEKTROSKOPI. Yogyakarta: Liberty. Halaman:

23-42.
Sudjana. (2005). Metode Statistika. Edisi keenam. Cetak ulang ketiga. Bandung:
Penerbit Tarsito. Halaman 168.
Watson, D. G. (2005). Pharmaceutical Analysis: A Textbook for Pharmacy

Students and Pharmaceutical Chemists. Edisi 2. Penerjemah: Syarief,
W.R. (2009). Analisis Farmasi: Buku Ajar Mahasiswa Farmasi dan
Praktisi Kimia Farmasi. Edisi Kedua. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran
EGC. Halaman 105-107.
46
Lampiran 1. Gambar tablet
Tablet G
47
Lampiran 2. Daftar spesifikasi sampel pada tablet G
1. Tablet G
Nama Produk : Glucovance
Nomor Registrasi : DKI1301600117A1
Tanggal kadaluarsa : 01 0ktober 2018
Komposisi : Metformin ........... 250 mg
Glibenclamid ........1,25 mg
48
Lampiran 3. Gambar alat-alat
Spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu 1800)
Neraca analitik (Boeco)
Sonikator (Branson 1510)
49
Lampiran 4. Bagan alir pembuatan Larutan induk baku (LIB) dan serapan
maksimum Metformin secara kualitatif
Baku Metformin
Ditimbang saksama 50,6 mg

Dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 ml
Dilarutkan dan dicukupkan dengan pelarut Methanol P.a
sampai garis tanda
LIB Metformin ( 1006 µg/ml)
Dipipet 5 ml
Dicukupkan dengan pelarut yang sama sampai garis tanda
LIB Metformin (50,3 µg/ml)
Dipipet 0,75 ml
Metformin (3,73 µg/ml)
Diukur serapan pada panjang gelombang 200-400 nm.

Panjang Gelombang Maksimum ( λ)
Metformin =236,4 nm
50
Lampiran 5. Bagan alir pembuatan Larutan induk baku (LIB) dan Serapan
Maksimum Glibenklamid secara kualitatif
Baku Glibenklamid
Ditimbang saksama 25,2 mg

Dilarutkan dan dicukupkan dengan pelarut Methanol P.a
sampai garis tanda
LIB Glibenklamid (1008 µg/ml)
Dipipet 2,5 ml
LIB Glibenklamid (100,8 µg/

ml)
Dipipet 0,87 ml
Glibenklamid (8,7 µg/ml)
Diukur serapan pada panjang gelombang 200-400 nm.

Panjang Gelombang Maksimum ( λ)
Glibenklamid = 230 nm
51
Lampiran 6. Bagan alir pembuatan dan pengukuran serapan larutan standar
metformin
LIB II Metformin (50,3 µg/ml)
Dipipet masing- masing sebanyak 0,4 ml; 0,6 ml;0,75 ml;0,92

ml;1,1 ml
Dimasukkan masing-masing ke dalam labu tentukur 10 ml
Dicukupkan dengan pelarut methanol p.a sampai garis tanda
Larutan standar Metformin

( 2 µg/ml; 3 µg/ml; 4 µg/ml; 5
µg/ml; 6 µg/ml)
Diukur serapan pada panjang gelombang 200-400 nm

Dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan
Spektrum serapan Metformin
52
Lampiran 7. Bagan alir pembuatan dan pengukuran serapan larutan standar
Glibenklamid
LIB II Glibenklamid (100,8 µg/

ml)
Dipipet masing- masing sebanyak 0,47 ml; 0,67 ml, 0,87 ml;
1,1 ml; 1,3 ml
Dimasukkan masing-masing ke dalam labu tentukur 10 ml
Dicukupkan dengan pelarut methanol p.a sampai garis tanda
Larutan standar Glibenklamid

(4,7 µg/ml; 6,7 µg/ml; 8,7µg/
ml; 10,7 µg/ml; 12,7 µg/ml)
Diukur serapan pada panjang gelombang 200-400 nm

Dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan
Spektrum serapan Glibenklamid
53
Lampiran 8. Bagan alir pembuatan larutan baku campuran Metformin dan
Glibenklamid
Glibenklamid = 10
Metformin = 10 mg
mg
Dimasukkan kedalam labu 10 ml Dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 ml

Dilarutkan dan dicukupkan dengan Dilarutkan dan dicukupkan dengan
pelarut methanol p.a pelarut methanol p.a
Larutan Glibenklamid (1000μg/

Larutan Metformin (1000μg/ml)
ml)
Kedua larutan dicampurkan ke dalam labu tentukur 10

ml dan dicukupkan dengan pelarut methanol p.a
Dipipet 1 ml
Dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 ml dan

dicukupkan dengan pelarut methanol p.a
54
Lampiran 9. Bagan alir pembuatan spektrum serapan rasio Metformin
Spektrum Serapan Metformin

2-6 μg/ml
di-manipulate dengan tipe data set dan dipilih operasi division

dibagi dengan spektrum serapan glibenklamid ... μg/ml
Spektrum serapan rasio

metformin
55
Lampiran 10. Bagan Alir pembuatan spektrum serapan rasio Glibenclamid
Spektrum Serapan
Glibenklamid
di-manipulate dengan tipe data set dan dipilih operasi division

dibagi dengan spektrum serapan metformin ... μg/ml
Spektrum Serapan Rasio

Glibenklamid
56
Lampiran 11. Bagan alir pembuatan spektrum serapan rasio campuran baku
Metformin dan Glibenclamid
Spektrum serapan Campuran

Baku Metformin dan
Glibenklamid
Di- manipulate dengan tipe data
set dan dipilih operasi division
Dibagi dengan spektrum Dibagi dengan spektrum

serapan glibenklamid 8.7 μg/ml serapan metformin 4 μg/ml
Spektrum Serapan Rasio Spektrum Serapan Rasio

Metformin Glibenklamid
57
Lampiran. 12 Bagan alir pembuatan spektrum serapan metformin secara Mean
Centering Of Ratio Spectra (MCR)

Metformin
di-meansenter-kan dengan MATLAB versi 9.0
Spektrum serapan MCR

Metformin
58
Lampiran 13. Bagan alir pembuatan spektrum serapan Glibenklamid secara
Mean Centering Of Ratio Spectra (MCR)

glibenklamid

Glibenklamid
59
Lampiran 14. Bagan alir pembuatan kurva kalibrasi metformin dan Glibenclamid
secara Mean Centering Of Ratio Spectra (MCR)

Metformin dan Glibenklamid

Diambil nilai MC pada panjang gelombang
maksimum yang dihasilkan dari MCR
Diplot nilai MC dengan konsentrasi serapan
Persamaan regresi Metformin

dan Glibenklamid
60
Lampiran 15. Bagan alir penentuan kadar Metformin dan Glibenklamid dalam
sediaan tablet G
20 tablet
Ditimbang (berat 20 tablet= 6,1817 gr)

Digerus dengan lumpang sampai halus dan homogen
Serbuk
Ditimbang setara 50 mg Metformin (Penimbangan

dilakukan sebanyak 6 kali pengulangan
Dihitung kesetaraan Glibenklamid yang terkandung didalamnya
Dimaasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml
Dilarutkan dengan metanol p.a
Dihomogenjan dengan sonikator selama 15 menit
Dikocok sampai homogenn
Disaring larutan tersebut
Dibuang ± 10 ml filtrat pertama dan ditampung filtrat selanjutnya
Dipipet sebanyak 0,1 ml dan dimasukkan kedalam labu tentukur 25 ml
Dipipet 4,31 larutan baku Glibenklamid konsentrasi 50,3 µg/
ml dan dimasukkan ke dalam labu tentukur 25 ml
Diukur pada panjang gelombang 200-400 nm
Serbuk
Dibuat spektrum serapan rasio dan speltrum serapan MCR,

kemudiam dihitung konsentrasi masing-masing
Kadar
61
Lampiran 16. Bagan alir prosedur penelitian secara keseluruhan
Pembuatan Larutan Induk Baku (LIB)

Pembuatan Spektrum Serapan Maksimum

Hasil λ maksimum masing-masing
dibandingkan dengan hasil λ
maksimum dari campuran
Pembuatan Spektrum Serapan Campuran
Maksimum Metformin dan Glibenklamid
Penentuan λ yang akan dipilih dan
digunakan, dibandingkan dengan λ
hasil MCR
Pembuatan Spektrum Serapan Campuran
Baku Metformin dan Glibenklamid Spektrum seraoan masing-masing
dibagi dengan konsentrasi faktor
pembagi yang tepat dengan software
UV Probe 2.42
Pembuatan Spektrum Serapan Rasio
Data absorbansi rasio dipindahkan ke
software Microsoft Excel dan diolah
dengan Matlab
Pembuatan Spektrum Serapan MCR
Metformin dan Glibenklamid Dicatat nilai amplitudo sesuai dengan λ
yang telah ditentukan dan diplot
masing-masing amplitudo dengan
konsentrasi serapan baku
Pembuatan Kurva Kalibrasi secara MCR
Diperoleh hasil persamaan regresi
masing-masing
Pengujian Validasi Metode
Dilakukan sesuai dengan prosedur
yang dipaparkan pada prosedur
Penetapan Kadar Sampel penelitian
62
Lampiran 17. Data perhitungan kalibrasi, persamaan regresi dan koefisien
korelasi Metformin
No. Konsentrasi (μg/mL) (X) Absorbansi (Y)
1. 0,0000 0,00000
2. 2,0 0,3878
3. 3,0 0,5561
4. 4,0 0,7630
5. 5,0 0,8771
6. 6,0 1,0497
No. X Y XY X2` Y2
1. 0,0000 0,00000 0,00000 0,00000 0,0000000000
2. 2,0 0,3878 0,7756 4 0,1503888
3. 3,0 0,5561 1,6692 9 0,3092472
4. 4,0 0,7630 3,052 16 0,5821690
5. 5,0 0,8771 4,3855 25 0,7693044
6. 6,0 1,0497 6,2982 36 1,1018700
ΣY = 3,6337 ΣXY = Σ Y2 =
2
ΣX = 42X = ΣX = 90
Y = 0,6056 16,1805 2,9129794
Persaman regresi yang diperoleh adalah Y = 0,1743 X + 0,0246
63
Lampiran 18. Data perhitungan kalibrasi, persamaan regresi dan koefisien
korelasi Glibenklamid
No. Konsentrasi (μg/mL) (X) Absorbansi (Y)
1. 0,0000 0,00000
2. 4,7 1,1814
3. 6,7 1,7326
4. 8,7 2,3297
5. 10,7 2,6723
6. 12,7 3,1422
No. X Y XY X2` Y2
1. 0,0000 0,00000 0,00000 0,00000 0,0000000000
2. 4,7 1,1814
5,5525 22,0900 1,395705
3. 6,7 1,7326
11,6084 44,8900 3,001902
4. 8,7 2,3297
20,2683 75,6900 5,427502
5. 10,7 2,6723
28,5936 114,490 7,141187
6. 12,7 3,1422
39,9059 161,290 9,873420
ΣX = 42 ΣY = 8,4397 ΣXY = ΣX2 = Σ Y2 =

X= Y = 1,4066 105,9287 418,4500 26,83971
Persaman regresi yang diperoleh adalah Y = 0,2499 X + 0,0314
64
Lampiran 19. Contoh perhitungan kadar teoritis dari Metformin dan
Glibenklamid dalam tablet G
Berat 20 tablet = 6.1817 gr
Ditimbang sampel setara dengan 50 mg, maka dapat dihitung berat serbuk yang
ditimbang.
𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑆𝑒𝑡𝑎𝑟𝑎
Serbuk yang ditimbang = 20 𝑡𝑎𝑏 𝑙𝑒𝑡 𝑥 250 𝑚𝑔 𝑥 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 20 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡
50 𝑚𝑔
= 20 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡 𝑥 6.1817 𝑔𝑟
𝑥 250 𝑚𝑔
= 0.0618 gr
= 61.8 mg
Secara teoritis, didalam 0,0618 gr serbuk yang ditimbang terdapat kesetaraan
Metformin 250 mg dan Glibenklamid 1,25 mg.
Berat serbuk yang ditimbang adalah 0,0618 gr, maka berat setara metformin
sebenarnya adalah:
𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑒𝑡𝑎𝑟𝑎 𝑚𝑒𝑡𝑓𝑜𝑟𝑚𝑖𝑛

Serbuk yang ditimbang = 𝑥 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 20 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡
20 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡 𝑥 250 𝑚𝑔
𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑒𝑡𝑎𝑟𝑎 𝑚𝑒𝑡𝑓𝑜𝑟𝑚𝑖𝑛

0,0618 gr = 𝑥 6,1817
20 𝑥 250 𝑚𝑔
Berat setara Metformin = 49,98 mg
𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑒𝑡𝑎𝑟𝑎 𝑔𝑙𝑖𝑏𝑒𝑛𝑘𝑙𝑎𝑚𝑖𝑑

Serbuk yang ditimbang = 𝑥 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 20 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡
20 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡 𝑥 1,25 𝑚𝑔
𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑒𝑡𝑎𝑟𝑎 𝐺𝑙𝑖𝑏 𝑒𝑛𝑘𝑙𝑎𝑚𝑖𝑑

0,0618 gr = 𝑥 6,1817
20 𝑥 1,25𝑚𝑔
Berat setara Glibenklamid = 0,2499 mg
Dilarutkan dengan Metanol p.a dengan kuantitatif dalam labu tentukur 50 ml
sampai garis tanda

49,98 𝑚𝑔
Konsentrasi metformin = x 1000 µ𝑔 = 999,6 ppm
50 𝑚𝑙
65
Lampiran 19. (Lanjutan)
0.2499 𝑚𝑔
Konsentrasi glibenklamid = 𝑥 1000 µ𝑔 = 4,998 ppm
50 𝑚𝑙
Kemudian larutan ini dipipet sebanyak 0,1 ml dan dimasukkan ke dalam labu 25
ml dan dicukupkan dengan metanol p a sampai garis tanda, sehingga didapat
konsentrasi akhir metformin dan glibenklamid dalam labu tentukur 25 ml adalah
999,6𝜇𝑔 𝑚𝑙 𝑥 0.1 𝑚𝑙
Konsentrasi metformin dalam sampel = 25 𝑚𝑙
= 3,9984µg/ml
4,997𝜇𝑔 𝑚𝑙 𝑥 0.1 𝑚𝑙
Konsentrasi glibenklamid dalam sampel = 25 𝑚𝑙
= 0.0199 µg/ml
Konsentrasi glibenklamid yang akan diadisikan (Metode Adisi Standar)
Konsentrasi glibenklamid = 8.7 µg/ml – 0.0199 µg/ml
= 8.6801µg/ml
Volume larutan glibenklamid (50,3 µg/ml) yang dipipet untuk mengadisi :
V1.C1 = V2.C2
V1.50,3 µg/ml = 25 ml x 8.6801 µg/ml
V1 = 25 ml x 8.6801 µg/ml
V1 = 4.31 ml
Konsentrasi larutan baku Glibenklamid dalam volume yang dipipet
V1.C1 = V2.C2
4,31 ml.50,3 µg/ml = 25 ml x C2
C2 = 21,7002 µg/ml
Konsentrasi Larutan Glibenklamid yang diukur = 0,0199 µg/ml + 21,7002 µg/ml
= 21,72 µg/mL
66
Lampiran 20. Data penimbangan serbuk, kadar teoritis Metformin dan
Glibenklamid, serta konsentrasi Glibenklamid yang diadisikan pada
tablet G
Pengulangan Penimbangan Konsentrasi teoritis Konsentrasi
(mg) (µg/ml) Glibeklamid yang
Metformin Glibenklamid diadisikan(µg/ml)
1 61,9 4,0054 0,01999 8,6800
2 62,1 4,0183 0,02009 8,6799
3 62,2 4,0247 0,02012 8,6798
4 61,8 4,0248 0,01999 8,6801
5 62,2 4,0377 0,02012 8,6798
6 61,7 3,9924 0,01996 8,6800
67
Lampiran 21. Konsentrasi perolehan Metformin dan Glibenklamid dalam tablet
G dengan persamaan regresi
Dari hasil Mean Centering of Ratio Spectra (MCR), diperoleh nilai MC sebagai
berikut:
Pengulangan Nilai MC (Y)
Metformin Glibenclamid
1 0,7458 2,2057
2 0,7491 2,2058
3 0,7491 2,2058
4 0,7493 2,2057
5 0,7489 2,2057
6 0,7513 2,2058
Persamaan regresi Metformin yang diperoleh adalah:
Y= 0,174 X + 0,0246
Konsentrasi perolehan Metformin (X) dari masing-masing pengulangan adalah:
Pengulangan Nilai MC Metformin Konsentrasi Perolehan Metformin
(Y) (𝜇g/ml) (X)
1 0,7458 4,1376
2 0,7491 4,1573
3 0,7491 4,1572
4 0,7493 4,1581
5 0,7489 4,1551
6 0,7513 4,1691
Persamaan regresi Glibenklamid yang diperoleh adalah:
Y= 0,2499 X +0,0314
68
Konsentrasi perolehan Glibenclamid (X) dari masing-masing pengulangan adalah:
Pengulangan Nilai MC Konsentrasi Perolehan
Glibenclamid (Y) Glibenclamid (𝜇g/ml) (X)
1 2,2057 8,6801
2 2,2058 8,7010
3 2,2058 8,7010
4 2,2057 8,6801
5 2,2057 8,7002
6 2,2058 8,7010
69
Lampiran 22.Data bobot teoritis, bobot praktek, dan Kadar metformin dan
Glibenklamid
1. Metformin
Pengulangan Bobot Teoritis Bobot Praktek (mg) Kadar (%)

(mg)
1 50,06 51,72 103,01%
2. 50,22 51,97 102,70%
3. 50,30 51,96 102,53%
4. 50,31 51,97 102,55%
5. 50,47 51,93 102,15%
6. 49,90 52,11 103,66%
2. Glibenklamid
Pengulangan Bobot Teoritis Bobot Bobot Kadar(%)

(mg) Perolehan Glibenklamid
(mg) yang
diadisikan
(mg)
1 0,2498 10,8501 10,8500 102,41%
2. 0,2511 10,8762 10,8498 103,97%
3. 0,2515 10,8762 10,8497 104,31%
4. 0,2498 10,8501 10,8499 102,38%
5. 0,2515 10,8752 10,8497 104,31%
6. 0,2495 10,8762 10,8500 104,15%
Rumus kadar:
 Untuk Metformin digunakan rumus berikut:
𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑝𝑟𝑎𝑘𝑡𝑒𝑘 (𝑚𝑔 )

Kadar = 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 x % kemurnian baku
𝑡𝑒𝑜𝑟𝑖𝑡𝑖𝑠 (𝑚𝑔 )
 Untuk Glibenklamid digunakan rumus berikut:
𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑝𝑟𝑎𝑘𝑡𝑒𝑘 𝑚𝑔 −𝐵𝑎𝑘𝑢 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑎𝑚𝑏𝑎 𝑕𝑘𝑎𝑛 (𝑚𝑔 )

Kadar = x % kemurnian Baku
𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑡𝑒𝑜𝑟𝑖𝑡𝑖𝑠 (𝑚𝑔 )
70
Lampiran 23. Perhitungan Kadar Metformin dan Glibenclamid pada tablet G
4,1376
Pengulangan 1 Metformin = x 99,27% = 103,1%
4,0054
( 8,6801−8,6800)
Glibenclamid =
0,01999
x 99,00% = 102,41%
4,1573
4,0183
( 8,7010−8,6799)
Glibenclamid = x 99,00% = 103,97%
0,02009
4,1572
4,0247
( 8,7010−8,6798)
Glibenclamid = x 99,00% = 104,31%
0,01999
4,1581
4,0248
( 8,7002−8,6798)
Glibenclamid = x 99,00% = 102,38%
0,0199
4,1551
4,0377
( 8,7002−8,6798)
Glibenclamid = x 99,00% = 100,37%
0,02012
4,1691
3,9924
( 8,7010−8,6800)
Glibenklamid = x 99,00% = 104,15%
0,01996
71
Lampiran 24. Perhitungan kadar Metformin dan Glibenclamid secara statistik
pada tablet G
1. Kadar Metformin
No Kadar Akurasi (%) (x) ( X −X) ( X -X)2
1 103,01% 0,25 0,0625
2 102,70% -0,06 0.0036
3 102,53% -0,23 0,0529
4 102,55% -0,21 0,0441
5 102,15% -0,61 0,3721
6 103,66% 0,9 0,81
X = 102,76% Σ( X -X)2 = 0,2242
2
𝑋−𝑋 5,5445 5,5445
Uji statistik pada taraf SD = 𝑛−1
= = = 1,3594
6−1 5
kepercayaan 99% maka nilai α = 0,01 ; dk = 6-1 = 6-1 = 5
Diperoleh ttabel= (1 – ½ α); dk
= (1 – 0,005); 3
= 0,975; 5
= 4,03214
Dasar penerimaan data jika t hitung ≤ t tabel dan t hitung ≥ -t tabel.
X−X
t hitung = SD n
X−X 0,25
t hitung 1 = = = 0,482 (diterima)
SD n 0,212 6
𝑋−𝑋 −0,06
𝑆𝐷 𝑛 0,212 6
72
𝑋−𝑋 −0,23
𝑆𝐷 𝑛 0,212 6
𝑋−𝑋 −0,21
𝑆𝐷 𝑛 0,212 6
𝑋−𝑋 −0,61
𝑆𝐷 𝑛 0,212 6
𝑋−𝑋 0,9
t hitung 6 = 𝑆𝐷 𝑛
= = 1,734 (diterima)
0,212 6
Semua data diterima, maka kadar metformin sebenarnya adalah:

𝑆𝐷
μ = (𝑋 ± ttabel x )%
𝑛
0,212
= (102,76± 4,03214x )%
6
= (102,76± 0,349) %
= (102,41– 103,10)%
2. Kadar Glibenklamid
No Kadar Akurasi (%) (x) ( X −X) ( X -X)2
1 102,42 % -1,17 1,3689
2 103,97% 0,39 0,1521
3 104,31% 0,73 0,5329
4 102,38% -1,20 1,440
5 104,31% 0,73 0,5329
6 104,15% 0,57 0,3249
X = 103,58%
Σ( X -X)2 = 0,7252
2
𝑋−𝑋 0,7252
Uji statistik pada taraf SD = = = = 0,7252
𝑛−1 5
73
kepercayaan 99% maka nilai α = 0,01 ; dk = 6-1 = 6-1 = 5
Diperoleh ttabel= (1 – ½ α); dk
= (1 – 0,005); 5
= 0,975; 5
= 4,03214
Dasar penerimaan data jika t hitung ≤ t tabel dan t hitung ≥ -t tabel.
X−X
t hitung = SD n
X−X 1,17
SD n 0,3475 6
𝑋−𝑋 0,39
𝑆𝐷 𝑛 0,3475 6
𝑋−𝑋 0,73
𝑆𝐷 𝑛 0,3475 6
𝑋−𝑋 1,20
𝑆𝐷 𝑛 0,3475 6
𝑋−𝑋 0,73
𝑆𝐷 𝑛 0,3475 6
𝑋−𝑋 0,57
𝑆𝐷 𝑛 0,3475 6
Semua data diterima, maka kadar metformin sebenarnya adalah:

𝑆𝐷
μ = (𝑋 ± ttabel x )%
𝑛
0,3475
= (103,58± 4,03214x )%
6
= (103,58± 0,572) %
= (102,42– 104,15)%
74
Lampiran 25.Perhitungan simpangan baku relatif (RSD),Simpangan baku, batas
deteksi (LOD),dan batas kuantitas (LOQ)Metformin dan
Glibenklamid dalam tablet G
1. Metformin
X Y Yi Y-Yi (Y-Yi)2
0 0,0000 0,0246 -0,0246 0,0006051
2 0,3878 0,3732 0,0146 0,0002131
3 0,5561 ,5475 0,0086 0,0000739
4 0,7633 0,7218 0,0415 0,001722
5 0,8766 0,8961 -0,0195 0,0003812
6 1,0501 1,0764 -0,0264 0,0006969
(𝑌 − 𝑌𝑖)2 = 0,003691
0,212
RSD Metformin = X 100% = 0,20%
102,76
(𝑌−𝑌𝑖)2 0,003691
S𝑌 𝑋 = SB= = = 0,0009228 = 0,0303
𝑛 −2 4
3 𝑥 𝑆𝐵 3 𝑥 0,0303
LOD = = = 0,5214 µg/ml
𝑠𝑙𝑜𝑝𝑒 0,1743
10 𝑥 𝑆𝐵 10 𝑥 0,0303
LOQ = = = 1,73 µg/ml
2. Glibenklamid
X Y Yi Y-Yi (Y-Yi)2
0 0,0000 0,0314 -0,0314 0,000985
4,7 1,1814 1,2059 -0,0245 0,000600
6,7 1,7326 1,7057 0,0269 0,000723
8,7 2,3297 2,2055 0,1242 0,015425
10,7 2,6723 2,7053 -0,0330 0,001089
12,7 3,1422 3,2051 -0,0629 0,0039564
(𝑌 − 𝑌𝑖)2 = 0,0227784
0,3475
RSD Glibenklamid = X 100% = 0,33%
103,58
(𝑌−𝑌𝑖)2 0,0227784
S𝑌 𝑋 = SB= = = 0,005694 = 0,0754
𝑛 −2 4
3 𝑥 𝑆𝐵 3 𝑥 0,0754
LOD = = = 0,90 µg/ml
10 𝑥 𝑆𝐵 10 𝑥 0,0754
LOQ = = = 3,01 µg/ml
75
Lampiran 26. Contoh perhitungan persentase perolehan kembali (%recovery)
sampel yang digunakan adalah tablet G
Berat 20 tablet G = 6,1817 gr
Berat kesetaraan penimbangan sampel pada penetapan kadar = 50 mg
 Rentang Spesifik 80%

80
Metformin = 100 x 50 mg = 40 mg
70
Analit 70% = 100 x 50 mg = 28 mg
Penimbangan serbuk yang setara dengan 28 mg analit :

28 𝑚𝑔
Serbuk yang ditimbang = 20 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡 x 6,1817 gr
𝑥 250 𝑚𝑔
= 0,0346 gr
Jumlah Glibenclamid yang terkandung dalam serbuk analit:

0,0346 𝑚𝑔
Glibenclamid = 6,1817 𝑚𝑔 x 20 tablet x 1,25 mg
= 0,1399 mg
Total baku yang ditambahkan sebanyak 30 %, maka baku yang digunakan:

30
Total baku = x 40 mg =12 mg
100
Perbandingan Metformin dan Glibenklamid dalam sediaan tablet adalah 1:200,
maka:
200
Baku Metformin = 201 𝑥 12 𝑚𝑔 = 11,94 𝑚𝑔
Baku metformin yang ditimbang = 11,94 mg x 99,27 = 11,85 mg

1
Baku Glibenklamid = 𝑥 12 𝑚𝑔 = 0,06 𝑚𝑔
201
Baku Glibenklamid yang ditimbang = 0,06 mg x 99,00 %
= 0,06 mg
76

100
70
Analit 70% = 100 x 50 mg = 35 mg
235𝑚𝑔
𝑥 250 𝑚𝑔
= 0,0432 gr
Jumlah Glibenclamid yang terkandung dalam serbuk analit:

0,0432 𝑚𝑔
Glibenklamid = 6,1817 𝑚𝑔 x 20 tablet x 1,25 mg
= 0,1747 mg

30
Total baku = 100 x 50 mg =15 mg
Perbandingan Metformin dan Glibenclamid dalam sediaan tablet adalah 1:200,
maka:
200

1
201
= 0,0726 mg

120
70
Analit 70% = x 60 mg = 42 mg
100
77

42𝑚𝑔
𝑥 250 𝑚𝑔
= 0,0494 gr
Jumlah Glibenklamid yang terkandung dalam serbuk analit:

0,0494 𝑚𝑔
Glibenklamid = 6,1817 𝑚𝑔 x 20 tablet x 1,25 mg
= 0,1997 gr

30
Total baku = 100 x 60 mg =18 mg
Perbandingan Metformin dan Glibenklamid dalam sediaan tablet adalah 1:200,
maka:
200

1
201
= 0,0886 mg
𝐶𝐹−𝐶𝐴
Persentase perolehan kembali: % recovery = x 100%
𝐶𝐴∗
Keterangan:
CF = Konsentrasi sampel setelah penambahan baku
CA = Konsentrasi sampel sebelum penambahan baku
CA*= Jumlah baku yang ditambahkan
78
Lampiran 27. Data hasil uji perolehan kembali (%recovery) Metformin pada
tablet G dengan metode penambahan baku (standard addition
method)
No. Rentang Bobot

spesifik Sebelum Setelah Baku yang % Recovery
(%) penambahan penambahan ditambahkan
baku (mg) baku (mg) (mg)
1. 9,1673 21,2446 11,8528 101,89 %

2. 80% 9,3817 21,2412 11,8423 100,14 %
3. 9,3902 21,2423 11,8521 100,00 %
4 7,1735 21,9901 14,8164 100,00 %
5. 100% 7,1875 21,9911 14,8054 99,98 %
6. 7,1616 21,9803 14,8132 100,03 %
7. 4,4673 22,1685 17,7012 100,00 %
8. 120% 4,4811 22,1769 17,6981 99,98 %
9. 4,4560 22,1687 17,7124 100,00 %
Rata-rata % recovery
Standard Deviation (SD)
Relative Standard Deviation (RSD) (%)
Contoh Perhitungan:
 Rentang spesifik 80%-1
25 𝑚𝑙
Faktor pengenceran: 0,71 𝑚𝑙 = 147,05
Diperoleh konsentrasi sebelum penambahan baku adalah 0,2518 µg/ml,
maka bobotnya adalah:
Bobot dalam labu = 0,2518µg/ml x 147,05 x 50 ml
= 9,1673 mg
Diperoleh konsentrasi setelah penambahan baku adalah 2,8892 µg/ml
,maka bobotnya
Bobot dalam labu awal = 2,8892 µg/ml x 147,05 x 50 ml
= 21,2446 mg
79
Lampiran 28. Data hasil uji perolehan kembali (%recovery) Glibenklamid pada
tablet G dengan metode penambahan baku (standard addition
method)
No. Rentang Bobot

spesifik Sebelum Setelah Baku yang % Recovery
(%) penambahan penambahan ditambahkan
baku (mg) baku (mg) (mg)
1. 11,6809 11,7401 0,0591 100,16 %
2. 80% 11,6788 11,7384 0,0591 100,84 %
3. 11,6812 11,7411 0,0591 101,35 %
4 12,5856 12,6600 0,0734 101,36 %
5. 100% 12,6501 12,7238 0,0734 100,40 %
6. 12,5860 12,6597 0,0734 100,40 %
7. 16,5266 16,6112 0,0886 100,00 %
8. 120% 16,1810 16,2697 0,0886 100,11 %
9. 16,5229 16,6125 0,0886 101,12 %
Rata-rata % recovery 100,63 %
Standard Deviation (SD)
Relative Standard Deviation (RSD) (%)
 Rentang spesifik 80%-1
25 𝑚𝑙
Faktor pengenceran: 0,71 𝑚𝑙 = 147,05
Diperoleh konsentrasi dalam labu awal adalah 1,5865µg/ml, maka bobotnya
adalah:
Bobot dalam labu = 1,5865µg/ml x 147,05 x 50 ml
= 11,6904 mg
Diperoleh konsentrasi dalam labu akhir adalah µg/ml, maka bobotnya
adalah:
Bobot dalam labu awal = 1,5968µg/ml x147,05 x 50 ml
= 11,7401mg
80
Lampiran 29. Perhitungan Kadar perolehan kembali Metformin dan
Glibenklamid secara Statistik
1. Metformin
No. Kadar perolehan Kembali (%) ( X −X) ( X -X)2

1 101,89 % 1,66 2,7556
2 100,14 % -0,09 0,0081
3 100,00 % -0,21 0,0441
4 100,00 % -0,22 0,0484
5 99,98 % -0,25 0,0625
6 100,03 % -0,2 0,04
7 100,00 % -0,23 0,0529
8 99,98 % -0,25 0,0625
9 100,00 % -0,21 0,0441
X = 100,23 Σ( X -X)2= 0,3465
2
𝑋−𝑋 0,3464 0,3464
Uji statistik pada taraf SD = = = =
𝑛−1 9−1 8
𝑆𝐷
RSD = X 100% = 0,2080
𝑋
0,2080
RSD = X 100% = 0,20%
100,23
81
2. Glibenklamid
No. Kadar perolehan Kembali (%) ( X −X) ( X -X)2
1 100,16% 2,7556
2 100,84% 0,21 0,0081
3 101,35% 0,72 0,0441
4 101,36% 0,73 0,0484
5 100.40% -0,23sd 0,0625
6 100,40% -0,23 0,04
7 100,00% -0,52 0,0529
8 100,11% -0,52 0,0625
9 101,12% 0,49 0,0441
X = 100,63 Σ( X -X)2= 0,2447
2
𝑋−𝑋 0,2447 0,2447
Uji statistik pada taraf SD = 𝑛−1
= = = 0,1748 =
9−1 8
𝑆𝐷 0,1748
RSD = X 100% = 0,208RSD = X 100% = 0,17%
𝑋 100,23
82
Lampiran 30. Spektrum serapan Metformin konsentrasi 2 μg/ml -6 μg/ml dan
Glibenklamid 4,7 μg/ml,- 12,7 μg/ml
Gambar 5. Spektrum serapan Metformin konsentrasi 2 μg/ml -6 μg/ml
Gambar 6. Spektrum serapan Glibenklamid konsentrasi 4,7 μg/ml,- 12,7 μg/ml
83
Lampiran 31. Spektrum serapan campuran baku Metformin dan Glibenklamid
Gambar 7. Spektrum Serapan Campuran baku Metformin (4 μg/ml) dan

Glibenklamid (8,7μg/ml).
84
Lampiran32. Spektrum rasio Metformin dan Glibenklamid pada berbagai
konsentrasi
Gambar 8. Spektrum Rasio Metformin
Gambar 9. Spektrum rasio Glibenklamid
85
Lampiran 33. Spektrum rasio Metformin dan Glibenklamid dalam campuran
baku Metformin dan glibenklamid
Gambar 10. Spektrum rasio Metformin dalam campuran baku Metformin dan
Glibenklamid
Gambar 11. Spektrum rasio Glibenclamid dalam campuran baku Metformin dan
Glibenklamid
86
Lampiran 34 . Mean Centering spektrum rasio Metformin dan Glibenklamid
Gambar 12. Mean Centering of ratio (MCR) dari Metformin
Gambar 13. Mean Centering of ratio (MCR) dari Glibenklamid
87
Lampiran 35. Spektrum serapan sampel tablet G yang dibuat 6 kali pengulangan
Gambar 14. Pengulangan 1
88
Gambar 19.Pengulangan 6
89
Lampiran 36. Hasil Spektrum MCR serapan sampel tablet G yang dibuat
sebanyak 6 kali pengulangan
90
Lampiran 36. Spektrum rasio Metformin pada tablet G
91
Lampiran 37. Spektrum rasio Metformin pada tablet G
92
93
Lampiran38.Hasil spektrum rasio MCR Metformin tablet G yang dibuat
sebanyak 6 kali pengulangan
94
95
Lampiran 39. Spektrum rasio MCR Glibenklamid pada tablet G dengan
pengulangan 6 kali
ga
96
97
Lampiran 40. Spektrum serapan uji perolehan kembali (% recovery)pada tablet
Gambar 45. Rentang Spesifik 80%-1
98
Lampiran 41. Hasil Spektrum MCRuji perolehan kembali (%recovery )
Metformin
Gambar 48. Rentang spesifik 100%-2
99
Lampiran 42. Mean Centering of Spectra uji perolehan kembali (%recovery )
Glibenklamid
100
Lampiran 43. Daftar nilai distribusi r
101
Lampiran 44. Daftar nilai distribusi t
102
Lampiran 45. Sertifikat Pengujian Glibenclamid
103

HCL

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Deskripsi Asli:

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

HCL

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Universitas Sumatera Utara

Repositori Institusi USU http://repositori.usu.ac.id

Penetapan Kadar Metformin dan

PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI

Universitas Sumatera Utara

PROGRAM EKSTENSI SARJANA FARMASI

Universitas Sumatera Utara

PENETAPAN KADAR METFORMIN DAN GLIBENKLAMID

Dipertahankan di Hadapan Panitia Penguji Skripsi

Prof. Dr. Muchlisyam, M.Si., Apt.

Medan, Desember 2017

Prof. Dr. Masfria, M.S., Apt.

Prof. Dr. Muchlisyam, M.Si., Apt.

Kata kunci: Glibenklamid, Mean Centering Of Ratio Spectra (MCR),

Keywords:Glibenklamid, Mean Centering Of Ratio Spectra (MCR), Metformin,

memberkati dan mengasihi penulis sehingga dapat menyelesaikan penelitian dan

penyusunan skripsi ini.

“Penetapan Kadar Metformin dan glibenclamid dalam Sediaan Tablet dengan

Metode Spektrofotometri Ultrataviolet secara MeanCentering of Ratio Spectra

PenulismengucapkanterimakasihkepadaAyahanda Zalel Hasudungan

menolong penulis baik moril maupun material selama menempuh pendidikan

hingga ke jenjang sarjana. Penulis juga mengucapkan terimakasih kepada ketiga

saudaraterkasih Exclesia Sitohang, Theresia Sitohang dan Moreno Sitohang yang

Pada kesempatan ini, penulis ingin menulis mengucapkanterimakasih

kepada BapakProf. Dr. Muchlisyam, M.Si., Apt.,selaku dosen pembimbing yang

penulisan skripsi ini.

hingga selesainya penulisan skripsi ini.

Penulis juga mengucapkan terimakasih kepada Partner penghibur

Gomgom Simanjuntak, Resnika Citra, Lasma Ida Pasaribu, Marshinta Hutabalian,

Fatrikia Sinaga, Delima Mega, teman-teman seperjuangan di Laboratorium

mencapai impian gelar Sarjana Farmasi.

Penulis menyadari bahwa tulisan ini masih memiliki banyak kekurangan,

Saya yang bertanda tangan dibawah ini :

Nama : Exaudia P Sitohang

Program Studi : S-1 Ekstensi Farmasi

Judul Skripsi : Penetapan Kadar metformin dan glibenclamid dalam

Medan, November 2017

LEMBAR PENGESAHAN SKRIPSI ........................................................ iii

KATA PENGANTAR ................................................................................ iv

SURAT PERNYATAAN TIDAK PLAGIAT ........................................... vi

ABSTRAK .................................................................................................. vii

ABSTRACK ............................................................................................... viii

DAFTAR ISI ............................................................................................... ix

DAFTAR TABEL ....................................................................................... xiv

DAFTAR GAMBAR .................................................................................. xv

DAFTAR GAMBAR DALAM LAMPIRAN ............................................. xvii

DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................... xviii

BAB I PENDAHULUAN ........................................................................... 1

1.1 Latar Belakang ......................................................................... 1

1.2 Perumusan Masalah.................................................................. 3

1.3 Hipotesis ................................................................................... 3

1.4 Tujuan Penelitian...................................................................... 4

1.5 Manfaat Penelitian.................................................................... 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ................................................................. 5

2.1 Uraian Bahan............................................................................ 5

2.1.1 Metformin ....................................................................... 5

2.1.2 Glibenklamid .................................................................. 6

2.2.1 Pengertian spektrofotometri ultraviolet-visible (UV-Vis) 6

2.2.2 Kegunaan Spektrofotometri ............................................ 7

2.2.3 Komponen Spektrofotometri .......................................... 8

2.2.4 Hukum Lambert-beer ...................................................... 9

2.2.5 Analisis Multikomponen dengan Spektrofotometri