Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Teknik
pewarnaan
histologis dan
histokimia
LILI KARLINA
(06091181924001)
NABILA RIZKY LYANDINI
(06091281924013)
Teknik pewarnaan histologis dan histokimia

Noda dapat meningkatkan dan meningkatkan visibilitas spesimen.

Di dalam Selain itu, pewarna yang berbeda memiliki afinitas yang berbeda untuk
berbagai organel dan makromolekul.
Oleh karena itu, pemilihan dan penggunaan noda yang cermat juga dapat menunjukkan
sifat kimia dari bahan tersebut zat di dalam sel.
 Gpewarnaan histologis umum untuk bagian tangan bebas - Pewarnaan
Toluidine Blue O.
• Pewarna, toluidine blue O (TBO), adalah pewarna yang sangat baik untuk bagian
tangan yang bebas.
• Warna yang dihasilkan dapat memberikan informasi tentang sifat sel dan
dindingnya.
• Sediaan pewarna: Larutkan 0,1 g toluidin O biru dalam 100 ml buffer benzoat 0,1 M,
pH 4,4.(asam benzoat 0,25 g, natrium benzoat 0,29 g, air 200 ml). Buffer ini
direkomendasikan untuk keperluan histokimia. Jika buffer benzoat tidak tersedia,
untuk penggunaan umum, air keran dapat digunakan sebagai pelarut untuk TBO.
• Prosedur pewarnaan:

• 1.Siapkan bagian seperti yang dijelaskan pada bagian 1.

• 2.Pilih dan tempatkan bagian ke slide yang bersih.

• 3.Banji bagian-bagian tersebut dengan larutan encer larutan TBO 0,1% selama satu menit.

• 4. Hapus noda secara perlahan dengan menggunakan selembar kertas saring. Cuci bagian dengan membanjiri mereka
dengan air diikuti dengan penghapusan. Ulangi sampai tidak ada noda berlebih di sekitar bagian.

• 5.Tambahkan setetes air bersih di atas bagian dan oleskan kaca penutup. Slide siap untuk diperiksa.
 HASIL
• Pektin akan berwarna merah atau ungu kemerahan; lignin, biru; senyawa fenolik
lainnya, hijau sampai biru hijau. Parenkim berdinding tipis akan berwarna ungu
kemerahan; kolenkim, ungu kemerahan; elemen lignifikasi seperti elemen trakea dan
sklerenkim akan tampak hijau hingga biru-hijau; tabung saringan dan sel
pendamping, ungu; lamella tengah, merah hingga ungu kemerahan; callose dan pati,
tidak ternoda.
• (O'Brien et al., 1964).
 Uji Phloroglucinol-HCl untuk lignin
• Persiapan noda: Ada berbagai prosedur untuk membuat larutan pewarnaan tetapi umumnya dibuat
sebagai larutan jenuh floroglucinol dalam asam klorida 20%. Asam klorida yang digunakan adalah
sekitar 2 N.Pastikan untuk menangani solusi dengan hati-hati. Memakai sarung tangan. Siapkan
larutan ini di lemari asam.Pertama-tama larutkan floroglucinol (sekitar 2,0 g) dalam 80 ml larutan
etanol 20% dan kemudian tambahkan 20 ml HCl pekat (12 N) ke dalamnya.
• Prosedur:
• 1. Siapkan bagian tangan bebas seperti pada 1.
• 2. Tempatkan bagian-bagian ke dalam cawan Petri kecil dan nodai dengan pewarna phloroglucinol-HCl selama 2 menit
atau lebih. Jika elemen lignifikasi hadir, spesimen akan berubah menjadi merah dalam beberapa menit.
• 3. Gunakan sikat basah untuk memindahkan bagian ke slide yang bersih, tambahkan setetes air atau setetes larutan
gliserol 30% ke bagian tersebut. Pastikan untuk meletakkan kaca penutup di atas bagian tersebut sebelum pemeriksaan.
Periksa spesimen sekaligus. Warna memudar dengan cepat. R
• ingat untuk mencuci sikat dengan air keran yang mengalir untuk menghilangkan asam.

• Hasil: Dinding lignifikasi menjadi merah. Hasil: Dinding lignifikasi menjadi merah.
Gambar 9.2A. Sebuah
blok wortel dipangkas
untuk memegang spesimen
tipis.
 Uji Iodium-Kalium-Iodida (IKI)
• Persiapan Noda: Larutan IKI dibuat dengan terlebih dahulu melarutkan 2 g KI dalam 100 ml air,
dan menambahkan 0,2 g iodin ke dalam larutan KI. Siapkan larutan ini sebelumnya, karena yodium
membutuhkan waktu untuk larut. Simpan larutan dalam botol kaca gelap dan tutup rapat. Paparan
cahaya dan udara menurunkan kegunaan solusi. Yodium menyublim pada suhu kamar. Lebih baik
menyiapkan larutan di lemari asam. Noda, setelah disiapkan, dapat disimpan selama beberapa bulan
atau lebih lama, selama botol ditutup rapat.
• Prosedur:
• 1. Siapkan bagian tangan bebas seperti yang dijelaskan sebelumnya.
• 2.Transfer bagian ke slide.
• 3. Tempatkan setetes larutan IKI langsung pada spesimen. Tunggu beberapa menit dan oleskan kaca penutup dan periksa
spesimen dengan mikroskop. Spesimen dapat diperiksa tanpa menghilangkan kelebihan IKIsolusi dari sampel

• Hasil: Pati akan memberikan warna biru-hitam dalam beberapa menit. Pati yang baru terbentuk
mungkin munculmerah-ungu.
 Total Lipid - Pewarna Sudan
• Larutan pewarnaan: Larutan pewarnaan dibuat dengan melarutkan 0,7 g Sudan IV dalam
100 ml propilen atau etilena glikol. Panaskan larutan hingga 1008C dan aduk selama
beberapa menit. Saring larutan panas melalui kertas Whatman No. 2, dinginkan, dan
saring kembali. Berhati-hatilah saat menangani larutan panas.
• Prosedur:
• 1. Siapkan bagian tangan bebas seperti yang dijelaskan sebelumnya.
• 2. Pindahkan bagian dari silet langsung ke larutan pewarnaan Sudan IV. Noda bagian
selama sekitar 5 menit.
• 3. Pindahkan bagian-bagian tersebut ke 85% propilen atau etilena glikol dalam air, dan
goyangkan wadah secara perlahan selama sekitar 30 detik. Ini untuk menghilangkan
noda yang berlebihan dari bagian yang memungkinkan diferensiasi noda yang lebih baik
dalam berbagai struktur.
• 4. Bilas sebentar bagian tersebut dengan air suling dan masukkan ke dalam air atau
gliserol (gliserin; 30% dalam air).
• Hasil: Lemak, minyak, dan lilin akan berwarna merah. Kutikula daun, dinding suber dalam sel gabus,
• dan kasparia strip (pita suberin) jika ada akan berwarna merah karena sifat lipidnya
• struktur.
TERIMA KASIH