Laporan Praktikum
Laporan Praktikum
ENZIM AMILASE
KELOMPOK : 19
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
2020
LAPORAN PRAKTIKUM
ENZIM AMILASE
KELOMPOK 19
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
2020
i
DAFTAR ISI
IDENTITAS KELOMPOK........................................................................................................i
DAFTAR ISI........................................................................................................................... ii
BAB I PENGENALAN ALAT.................................................................................................1
1. PENDAHULUAN............................................................................................................. 2
1.1 Latar Belakang......................................................................................................... 2
2. LEMBAR KERJA.............................................................................................................6
2.1 SDS-Page................................................................................................................6
2.1.1 Komponen Alat dan Bahan serta Penjelasan....................................................6
2.1.2 Prosedur Kerja..................................................................................................7
2.1.3 Prinsip Kerja......................................................................................................8
2.2 PCR......................................................................................................................... 9
2.2.1 Komponen Alat dan Bahan serta Penjelasan....................................................9
2.2.2 Prosedur Kerja................................................................................................11
2.2.3 Prinsip Kerja....................................................................................................11
BAB II PENCARIAN DATA BIOINFORMATIK....................................................................13
1. PENDAHULUAN..............................................................................................................14
1.1 Latar Belakang.......................................................................................................14
2. PROSEDUR KERJA.........................................................................................................16
3. LEMBAR KERJA.............................................................................................................. 20
3.1 Tabel Nama Organisme dan Kode Akses Gen.......................................................20
3.2 Data Fasta Gen dan Protein...................................................................................20
BAB III BLAST (BASIC LOCAL ALIGNMENT SEARCH TOOL)........................................28
1. PENDAHULUAN........................................................................................................... 29
1.1 Latar Belakang.......................................................................................................29
2. PROSEDUR KERJA.....................................................................................................30
3. LEMBAR KERJA...........................................................................................................33
3.1 Hasil BLAST Bakteri...............................................................................................33
a. Screenshot Website Hasil .....................................................................................33
b. Interpretasi Ident dan Query (5 teratas).................................................................33
BAB IV MSA (MULTIPLE ALIGNMENT SEQUENCES)......................................................35
1. PENDAHULUAN........................................................................................................... 36
1.1 Latar Belakang.......................................................................................................36
2. PROSEDUR KERJA.....................................................................................................37
3. LEMBAR KERJA........................................................................................................... 44
3.1 Hasil MAS........................................................................................................... 44
3.2 Interpretasi Hasil MAS...........................................................................................45
3.3 Hasil Phylogenic Tree............................................................................................45
ii
3.4 Interpretasi Hasil Phylogenic Tree..........................................................................45
BAB V VISUALISASI STRUKTUR PROTEIN.....................................................................47
1. PENDAHULUAN........................................................................................................... 48
1.1 Latar Belakang.......................................................................................................48
2. PROSEDUR KERJA.....................................................................................................49
3. LEMBAR KERJA........................................................................................................... 53
3.1 Pemilihan Template Protein pada Bakteri..............................................................53
3.2 Hasil Visualisasi Protein pada Bakteri....................................................................53
3.3 Hasil Ramachandran Plots.....................................................................................53
3.4 Tabel MolProbity Result.........................................................................................54
3.5 Interpretasi Ramachandran....................................................................................54
DAFTAR PUSTAKA............................................................................................................ 59
iii
BAB I
PENGENALAN ALAT
KELOMPOK : 19
Kelas : T03
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
1
2020
1. PENDAHULUAN
metode yang paling banyak dipakai saat ini dalam percobaan biokimia dan biologi
molekuler (Magdeldin, 2012). Salah satu metode sederhana yang digunakan untuk
molekulnya saja.
digunakan untuk DNA. Pada prinsipnya DNA mempunyai muatan negatif dan
selama elektroforesis tergantung pada berat molekul DNA tersebut. Grafik log berat
molekul DNA terhadap jarak migrasi untuk kisaran berat molekul tertentu akan
menghasilkan garis lurus. Untuk pemisahan DNA berukuran kecil (< 200 pasang
besar digunakan gelagarosa. DNA dalam gel agarosa dapat terlihat dengan
penambahan red gel yang akan berikatan dengan DNA dan akan bersifat
2
A. Komponen Alat Uji Protein (SDS-Page)
menggunakan poliakrilamida
Com
Tray
berlangsungnya proses
elektroforesis
Chamber Elektroforesis
3
Adaptor Elektroforesis berfungsi
proses elektroforesis
Adaptor Elektroforesis
skala mikro
Micropipet
Rak Eppendrof
Microtube(eppendrof) berfungsi
Eppendrof
4
Yellow tip dan blue tip berfungsi
Blue tip
mengamplifikasi segmen
PCR
elektroforesis atau
mengelektroforasi gel
Electroporator
5
2. LEMBAR KERJA
menampung cairan/larutan
di dalam chamber
adaptor
gel
vortex
gel
skala mikro
proses elektroforesis.
6
b. Bahan yang digunakan
molekul
elektroforesis
Prosedur Kerja
Prosedur pertama yang harus dilakukan adalah menyiapkan semua alat dan komponen
yang dibutuhkan untuk metode SDS-Page. Seluruh alat dan komponen harus dalam kondisi
baik dan bersih. Selanjutnya adalah pembuatan stacking gel dan separating gel sesuai
dengan komposisinya. Kemudian siapkan dummy plate yang akan digunakan. Jepit dummy
plate tersebut di kedua sisi mengunakan clips. Lalu masukkan stacking gel yang telah dibuat
ke dalam celah antara kedua glass plate menggunakan micropipet. Kemudian diamkan
selama kurang lebih 30 menit agar gel memadat. Selanjutnya, masukkan separating gel dan
comb ke dalam wadah tersebut untuk membentuk well. Kemudian tuang sampel yang sudah
dipanaskan terlebih dahulu ke dalam wadah tersebut. Selanjutnya, lepaskan clips yang
menjepit dummy plates, lalu pasang dummy plates pada chamber elektroforesis. Chamber
7
sambungkan chamber elektroforesis dengan electric lead menggunakan adaptor, kemudian
Prinsip kerja SDS PAGE meliputi denaturasi awal komponen protein dengan deterjen
anionik.Detergen juga dapat mengikat protein sehingga semua protein memiliki muatan
negatif sebanding dengan berat molekul protein tersebut. Langkah ini dilanjutkan
dengan elektroforesis melalui matriks akrilamida gel berpori yang memisahkan protein
berdasarkan massa molekulnya (Nowakowski et al., 2014). Molekul yang lebih kecil
akan bergerak lebih cepat di dalam gel, sedangkan molekul yang lebih besar akan
bergerak perlahan, membentuk pita di dekat pori-pori dalam gel (Grabski dan Burgess,
2000). Prinsip kerja SDS-PAGE adalah ketika protein dipisahkan oleh elektroforesis
melalui matriks gel dan arus listrik diterapkan, protein dengan molekul yang lebih kecil
bermigrasi lebih cepat, sedangkan protein dengan molekul yang lebih besar terhalang
karena pergerakan yang lebih lambat. Efek lain pada tingkat migrasi didasarkan pada
struktur dan pemuatan protein. SDS adalah deterjen dengan efek denaturasi protein
yang kuat, yang dapat dikombinasikan dengan struktur protein. Dengan adanya SDS
dan zat pereduksi yang memutus ikatan disulfida, protein tampak seperti rantai linier
2.2 PCR
8
1. Tip berfungsi sebagai wadah atau tempat untuk
B.
Bahan menampung cairan/larutan
yang
2. Glass plate berfungsi sebagai pengapit atau pembatas
gel
di dalam chamber
adaptor
stacking gel
vortex
gel
skala mikro
proses elektroforesis
digunakan
9
1. Template DNA : berfungsi sebagai sampel DNA yang akan
diamplifikasi
polimerisasi DNA
Kunci reaksi PCR membutuhkan polimerase Taq, primer, DNA cetakan dan
dengan kofaktor yang dibutuhkan oleh enzim dan mengalami siklus pemanasan dan
2. Anil (55-65 ° C): Pada tahap hubungan ini, suhu anil primer akan melekat dan
3. Perpanjangan / Perpanjangan (72 ° C): Pada suhu ini, Taq polimerase meluas
(dNTPs) dalam reaksi termal, sehingga memperbanyak bagian tertentu dengan DNA
10
polimerase, yang dimulai dengan perlekatan primer (Raven dan Johson, 2002).
Proses PCR melibatkan beberapa tahapan, yaitu: (1) pra-denaturasi DNA template;
(2) denaturasi DNA template; (3) menempelkan primer pada template (annealing);
2000)Prinsip dasar PCR adalah memperkuat urutan DNA tertentu menjadi dua
salinan, lalu memperkuat menjadi empat salinan, dan seterusnya. Reproduksi ini
membutuhkan enzim khusus yang disebut polimerase. (Moch . Irfan Hadi, et al.
2020).
11
BAB II
Kelompok : 19
Kelas : T03
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
12
2020
1. PENDAHULUAN
tingkatan gene maupun tingkatan produk ekspresinya. Beberapa data gene dan protein
dapat dilihat pada beberapa laman online yang gratis. Sudah menjadi kesepakatan
bersama bahwa sebagian besar data-data sekuen biologi bersifat terbuka dan dapat
diakses oleh semua kalangan. Data-data sekuens tersebut dihimpun dalam suatu
database yang dapat diakses secara online. Saat ini, terdapat tiga situs penyedia databse
(Europe Bioinformatic Institute-England), dan DDBJ (DNA Data Bank of Japan) pada CIB
(Center for Information Biology-Jepang). Ketiga situs tersebut bertukar data setiap hari
sehingga database ketiganya relatif serupa. Perbedaan ketiganya hanya format tampilan
data.
Khusus untuk sekuen protein, database dapat diakses melalui situs Expasy
(Expert protein analysis). Situs ini menyediakan berbagai macam program untuk
Bioinformatic) dan EBI (Europe Bioinformatic Institute). Expasy juga menyediakan tautan
ke GenBank, EMBL, dan DDBJ.Data sekuen nukleotida yang ada di database biasanya
diperoleh dari para peneliti, baik yang tergabung dalam konsorsium ataupun individual. Meskipun
13
data tersebut di cek (integeritas dan kesalahan) oleh staf database repository, kualitas data tetap
menjadi tanggung jawab peneliti (author) yang menyerahkan data tersebut. Data sekuen yang
disumbangakan ke GenBank diusahakan tetap sesuai dengan aslinya. Tidak jarang terdapat
kesalahan data seperti adanya kontaminasi sekuen lain, tidak lengkap, salah penandaan ataupun
kesalahan sekuensing. Selain itu, data yang sama/sejenis mungkin muncul lebih dari sekali
(redundant) yang berasal dari para peneliti yang berlainan. Oleh karena itu, disarankan untuk tidak
terpaku pada informasi hanya dari sebuah sekuen saja, namun juga perlu dilihat informasi
keseluruhan sekuen yang ada di dalam database dan mengambil kesimpulan dari informasi yang
14
2. PROSEDUR KERJA
1. Pada praktikum Bioteknologi langkah awal yang harus dilakukan untuk mendapatkan
2. Langkah sselanjutnya yaitu klik all database dan pilih menu Gene untuk pencarian G
15
3. Masukkan gen enzim yang dicari kemudian klik Search
4. Filter pencarian data berdasarkan organisme dengan memilih menu Advence kemudian
enzim
16
5. Klik fasta pada hasil pencarian untuk menampilkan data fasta enzim
6. Masukkan data fasta yang sudah didapat pada lembar kerja praktikum
17
7. Dengan memasukkan data fasta di kolom, lalu klik translate, maka data gen fasta akan diubah
18
3. LEMBAR KERJA
948088
2 Bakteri Escherichia coli
3031010
3 Bakteri Bacillus licheniformis
19
ATGAATAAGCAATGGTGGAAAGAAGCAGTAGCATATCAAGTATATCCAAGAAGTTTTAATGATAGTAATC
ACGATGGTATTGGGGATTTACCTGGAATGATTGATAAATTGGACTACTTAAAAGATTTCGGTATCGATGT
CATTTGGCTCAGTCCAATGTTTAAATCACCTAATGATGACAATGGTTATGATATTAGTGACTACCAAGAG
ATTATGGATGAATTTGGAACGATGGAAGACTTTGATCGTTTATTAAAAGGTGTTCATGATAGAGGCATGA
AGCTTATTTTAGATTTAGTTGTAAATCATACATCTGATGAACATCCTTGGTTTATAGAATCCAAATCTAG
TAAAGACAATCCCAAACGTGATTGGTACATTTGGCAAGATCCAAAGCCAGATGGCTCTGAACCTAACAAC
TGGGAAAGTATATTTAATGGATCTACATGGGAATATGATGCTAATACTGAGCAATATTATTTCCATTTAT
TCAGTAAAAAACAACCTGATTTGAATTGGGGTAATCCGGAAGTTAGAGATGCTGTATTTGAAATGATGAA
CTGGTGGTTTGATAAAGGCATTGATGGATTTAGAGTAGATGCAATTACGCATATTAAGAAGACGTTTGAA
GCGGGTGACTTACCTGTACCTGAGGGTAAAACATATGCCCCAGCATTTGATGTAGATATGAATCAGCCAG
GTATACAAACTTGGTTACAAGAGATGAAAGATCGCTCATTAAGTAAGTATGACATTATGACTGTTGGTGA
AGCGAATGGTGTAAGCCCTGATGATGCTGATGACTGGGTCGGGGAAGAAAATGGTAAATTTAATATGATA
TTCCAATTTGAACATTTGGGACTGTGGAATAGTGGTGATTCTCACTTTGATGTAAATTCGTATAAATCTG
TATTAAATAGATGGCAAAAACAACTTGAAAATAAAGGTTGGAATGCGTTGTTTATTGAAAATCACGACCA
ACCACGACGTGTATCGACGTGGGGTGACGATGACAAGTATTGGTATGAATCAGCAACAAGTCATGCAGCT
GTTTATTTCTTGCAACAAGGTACGCCATTCATTTATCAAGGTCAAGAAATTGGTATGACGAATTATCCAT
TTGAAAGTATTGAAACGTTTAACGATGTTGCTGTTAAAAATGACTATCAAATAGTGAAAGCTCAAGGTGG
AGATGTAGACGCTTTACTTGCGAAATATAAAGATGAGAACCGAGATAATTCTCGCACACCAATGCAATGG
GATGATACGTTAAATGGAGGATTTACAAATGGTGAACCGTGGTTCCCAGTGAATCCGAATTATAAAACTA
TCAATGTTGCACAACAATTAGAAGATGAGCATTCAGTATTACAATTTTATAAAGATTTAATTCAATTAAG
AAAGTCTAATGATGTATACGTATATGGTCAATTTGATTTAGTAGATGCTGAAAATTCACAAGTTTTTGCG
TACACGAGAACATTAAATGAAAAGCAAGTTCTTATTGTAGGTAATCTTACTAACCACGAAGCAGAATTAA
CTGTACCATTTGATTTAAGCCATGGAGAAGTAAAGCTATTTAATTATGATGCCAAAGTTAATTTAAAACA
GTTACGTCCATATGAAGCATGTGTTATCGAACTAAATTAA
20
Nama Organisme : Escherichia coli
21
ATGAAACTCGCCGCCTGTTTTCTGACACTCCTTCCTGGCTTCGCCGTTGCCGCCAGCTGGACTTCTCCGG
GGTTTCCCGCCTTTAGCGAACAGGGGACAGGAACATTTGTCAGCCACGCGCAGTTGCCCAAAGGTACGC
G
TCCACTAACGCTAAATTTTGACCAACAGTGCTGGCAGCCTGCGGATGCGATAAAACTCAATCAGATGCTT
TCCCTGCAACCTTGTAGCAACACGCCGCCTCAATGGCGATTGTTCAGGGACGGCGAATATACGCTGCAA
A
TAGACACCCGCTCCGGTACGCCAACATTGATGATTTCCATCCAGAACGCCGCCGAACCGGTAGCAAGCC
T
GGTCCGTGAATGCCCGAAATGGGATGGATTACCGCTCACAGTGGATGTCAGCGCCACTTTCCCGGAAGG
A
GCCGCCGTACGGGATTATTACAGCCAGCAAATTGCGATAGTGAAGAACGGTCAAATAATGTTACAACCCG
CTGCCACCAGCAACGGTTTACTCCTGCTGGAACGGGCAGAAACTGACACATCCGCCCCTTTCGACTGGC
A
TAACGCCACGGTTTACTTTGTGCTGACAGATCGTTTCGAAAACGGCGATCCCAGTAATGACCAGAGTTAC
GGACGTCATAAAGACGGTATGGCGGAAATTGGCACTTTTCACGGCGGCGATTTACGCGGCCTGACCAAC
A
AACTGGATTACCTCCAGCAGTTGGGCGTTAATGCTTTATGGATAAGCGCCCCATTTGAGCAAATTCACGG
CTGGGTCGGCGGCGGTACAAAAGGCGATTTCCCGCATTATGCCTACCACGGTTATTACACACAGGACTG
G
ACGAATCTTGATGCCAATATGGGCAACGAAGCCGATCTACGGACGCTGGTTGATAGCGCACATCAGCGC
G
GTATTCGTATTCTCTTTGATGTCGTGATGAACCACACCGGCTATGCCACGCTGGCGGATATGCAGGAGTA
TCAGTTTGGCGCGTTATATCTTTCTGGTGACGAAGTGAAAAAATCGCTGGGTGAACGCTGGAGCGACTGG
AAACCTGCCGCCGGGCAAACCTGGCATAGCTTTAACGATTACATTAATTTCAGCGACAAAACAGGCTGGG
ATAAATGGTGGGGAAAAAACTGGATCAGAACGGATATCGGCGATTACGACAATCCTGGATTCGACGATCT
CACTATGTCGCTAGCCTTTTTGCCGGATATCAAAACCGAATCAACTACCGCTTCTGGTCTGCCGGTGTTC
TATAAAAACAAAATGGATACCCACGCCAAAGCCATTGACGGCTATACGCCGCGCGATTACTTAACCCACT
GGTTAAGTCAGTGGGTCCGCGACTATGGGATTGATGGTTTTCGGGTCGATACCGCCAAACATGTTGAGTT
GCCCGCCTGGCAGCAACTGAAAACCGAAGCCAGCGCCGCGCTTCGCGAATGGAAAAAAGCTAACCCCG
AC
AAAGCATTAGATGACAAACCTTTCTGGATGACCGGTGAAGCCTGGGGCCACGGCGTGATGCAAAGTGAC
T
ACTATCGCCACGGCTTCGATGCGATGATCAATTTCGATTATCAGGAGCAGGCGGCGAAAGCAGTCGACT
G
TCTGGCGCAGATGGATACGACCTGGCAGCAAATGGCGGAGAAATTGCAGGGTTTCAACGTGTTGAGCTA
C
CTCTCGTCGCATGATACCCGCCTGTTCCGTGAAGGGGGCGACAAAGCAGCAGAGTTATTACTATTAGCG
C
CAGGCGCGGTACAAATCTTTTATGGTGATGAATCCTCGCGTCCGTTCGGTCCTACAGGTTCTGATCCGCT
GCAAGGTACACGTTCGGATATGAACTGGCAGGATGTTAGCGGTAAATCTGCCGCCAGCGTCGCGCACTG
G
CAGAAAATCAGCCAGTTCCGCGCCCGCCATCCCGCAATTGGCGCGGGCAAACAAACGACACTTTTGCTG
A
AGCAGGGCTACGGCTTTGTTCGTGAGCATGGCGACGATAAAGTGCTGGTCGTCTGGGCAGGGCAACAGT
A
A
22
23
Nama Organisme : Bacillus licheniformis
ATGAAACAACAAAAACGGCTTTACGCCCGATTGCTGCCGCTGTTATTTGCGCTCATCT
TCTTGCTGCCTC
ATTCTGCAGCAGCGGCGGCAAATCTTAAAGGGACGCTGATGCAGTATTTTGAATGGT
ACATGCCCAATGA
CGGCCAACATTGGAAGCGCTTGCAAAACGACTCGGCATATTTGGCTGAACACGGTAT
TACTGCCGTCTGG
ATTCCCCCGGCATATAAGGGAACGAGCCAAGCGGATGTGGGCTACGGTGCTTACGA
CCTTTATGATTTAG
GGGAGTTTCATCAAAAAGGGACGGTTCGGACAAAGTACGGCACAAAAGGAGAGCTG
CAATCTGCGATCAA
AAGTCTTCATTCCCGCGACATTAACGTTTACGGGGATGTGGTCATCAACCACAAAGG
CGGCGCTGATGCG
ACCGAAGATGTAACCGCGGTTGAAGTCGATCCCGCTGACCGCAACCGCGTAATTTCA
GGAGAACACCGAA
TTAAAGCCTGGACACATTTTCATTTTCCGGGGCGCGGCAGCACATACAGCGATTTTAA
ATGGCATTGGTA
CCATTTTGACGGAACCGATTGGGACGAGTCCCGAAAGCTGAACCGCATCTATAAGTT
TCAAGGAAAGGCT
TGGGATTGGGAAGTTTCCAATGAAAACGGCAACTATGATTATTTGATGTATGCCGACA
TCGATTATGACC
ATCCTGATGTCGCAGCAGAAATTAAGAGATGGGGCACTTGGTATGCCAATGAACTGC
AATTGGACGGTTT
CCGTCTTGATGCTGTCAAACACATTAAATTTTCTTTTTTGCGGGATTGGGTTAATCATG
TCAGGGAAAAA
ACGGGGAAGGAAATGTTTACGGTAGCTGAATATTGGCAGAATGACTTGGGCGCGCT
GGAAAACTATTTGA
ACAAAACAAATTTTAATCATTCAGTGTTTGACGTGCCGCTTCATTATCAGTTCCATGCT
GCATCGACACA
GGGAGGCGGCTATGATATGAGGAAATTGCTGAACGGTACGGTCGTTTCCAAGCATCC
GTTGAAAGCGGTT
ACATTTGTCGATAACCATGATACACAGCCGGGGCAATCGCTTGAGTCGACTGTCCAA
ACATGGTTTAAGC
CGCTTGCTTACGCTTTTATTCTCACAAGGGAATCTGGATACCCTCAGGTTTTCTACGG
GGATATGTACGG
GACGAAAGGAGACTCCCAGCGCGAAATTCCTGCCTTGAAACACAAAATTGAACCGAT
CTTAAAAGCGAGA
AAACAGTATGCGTACGGAGCACAGCATGATTATTTCGACCACCATGACATTGTCGGC
TGGACAAGGGAAG
GCGACAGCTCGGTTGCAAATTCAGGTTTGGCGGCATTAATAACAGACGGACCCGGT
GGGGCAAAGCGAAT
GTATGTCGGCCGGCAAAACGCCGGTGAGACATGGCATGACATTACCGGAAACCGTT
CGGAGCCGGTTGTC
ATCAATTCGGAAGGCTGGGGAGAGTTTCACGTAAACGGCGGGTCGGTTTCAATTTAT
GTTCAAAGATAG
24
Nama Organisme : Bacillus pseudomycoides
ATGAAAAATCAGTTTCAATATTGTTGTATTGTCATTTTGTCTGTAGTGATGTTATTTGTA
TCATTATTAA
TTCCGCAAGCGAGTTCGGCAGCTGTAAATGGAAAAGGAATGAATCCAGATTACAAAG
CATATTTAATGGC
GCCATTAAAAAAGATACCGGAAGTAACAAATTGGGAGACATTTGAAAATGATTTACGA
TGGGCAAAACAA
AATGGTTTTTATGCTATTACAGTTGATTTTTGGTGGGGGGATATGGAAAAGAACGGAG
ATCAGCAATTTG
ATTTTTCATACGCACAGCGCTTTGCTCAATCGGTAAAAAATGCAGGTATGAAAATGAT
TCCTATTATTTC
CACACATCAGTGCGGTGGAAATGTTGGGGATGATTGCAATGTACCAATTCCTTCATG
GGTTTGGAATCAA
AAATCCGATGATAGCCTTTATTTTAAGTCTGAAACAGGAACTGTCAATAAAGAAACATT
AAATCCACTTG
CTTCAGATGTAATTCGAAAGGAATATGGTGAACTATATACAGCATTCGCAGCAGCTAT
GAAACCATATAA
AGATGTAATCGCAAAAATATATTTATCTGGAGGACCAGCTGGTGAACTAAGATATCCT
TCATATACAACT
TCCGATGGGACAGGATATCCCTCACGTGGAAAGTTTCAAGCGTATACAGAGTTTGCA
AAATCTAAATTTC
GTTTATGGGTATTAAATAAATATGGTTCTCTAAATGAAGTGAATAAAGCATGGGGCAC
GAAACTGATTTC
AGAGTTAGCCATTTTACCACCAAGCGATGGGGAACAATTCTTAATGAATGGATATCTT
TCTATGTATGGA
25
AAAGACTATTTAGAATGGTATCAGGGCATCTTGGAAAATCATACAAAATTAATTGGTG
AATTAGCACATA
ATGCATTTGACACAACTTTCCAAGTACCAATTGGTGCAAAAATTGCAGGCGTACATTG
GCAATATAATAA
CCCAACAATACCTCATGGAGCTGAAAAGCCTGCAGGGTATAATGATTATAGCCATTTA
CTTGATGCTTTC
AAAAGTGCAAAGCTAGATGTAACATTTACTTGTTTAGAAATGACAGATAAAGGTAGTTA
TCCGGAATATT
CAATGCCAAAAACATTGGTACAAAATATTGCAACATTAGCCAATGAAAAGGGAATTGT
ATTAAACGGTGA
AAATGCTTTAAGTATCGGAAATGAAGAAGAGTATAAAAGAGTTGCAGAAATGGCTTTC
AATTATAATTTT
GCTGGATTTACGTTACTTCGTTATCAAGATGTAATGTATAACAATTCATTAATGGGGAA
ATTTAAAGATT
TATTAGGTGTAACCCCTGTTATGCAAACGATTGTAGTAAAAAATGTTCCTACAACAATA
GGAGATACTGT
TTATATTACTGGGAATCGTGCGGAATTAGGAAGTTGGGACACAAAACAGTATCCAATT
CAATTATATTAT
GATTCTCATAGTAATGATTGGAGAGGAAATGTTGTGTTGCCAGCTGAAAGAAATATAG
AATTTAAAGCAT
TTATTAAAAGTAAAGATGGAACGGTTAAATCATGGCAAACAATACAACAAAGTTGGAA
TCCAGTGCCACT
AAAGACTACCTCTCATACAAGTAGTTGGTAA
26
BAB III
Kelompok : 19
Kelas : T03
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
2020
27
1. PENDAHULUAN
NCBI merupakan server yang memuat data base tentang informasi kesehatan
dan bioteknologi. Data base terus menerus di update sesuai dengan penemuan-
penemuan terkini yang menyangkut DNA, Protein, Senyawa aktif dan taksonomi.
Disamping data base, NCBI juga menyediakan berbagai macam software untuk
analisis DNA, protein 3D, pencarian primer, pencarian conserve doamain dan lain
sebagainya. NCBI merupakan salah satu bank data gen, protein dan literature
khususnya dib dang kesehatan yang terlengkap dan di acu oleh para peneliti didunia.
dengan data serupa yang telah dipublikasikan sebelumnya di gen bank. Salah satu
bentuk analisis yang dapat dilakukan misalnya adalah analisis penyejajaran. Analisis
Program yang digunakan untuk analisis penyejajaran yaitu program BLAST (Basic
Local Allignment Search Tools). Program ini dapat diakses melalui website National
dan dia tidak tau kekerabatanya salah satu cara untuk mengetahui adalah dengan
teknik BLAST.
28
2. PROSEDUR KERJA
Praktikum Bioteknologi materi BLAST yang akan dilakukan adalah sebagai berikut :
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/
29
3. Pilih menu BLAST untuk protein/nukleotida
30
6. Data BLAST akan muncul sebagai berikut
3. LEMBAR KERJA
31
b. Interpretasi Ident dan Query (5 Teratas )
Berdasarkan hasil praktikum pada program BLAST, diperoleh data query cover dan
indent lima teratas adalah dari genus Staphylococcus. Diperoleh juga data dari
spesies Staphylococcus aureus yang sama. Pada tabel lima teratas memiliki nilai
query cover 100% yang artinya setiap bagian tersebut telah diteliti. Untik nilai indent
diperoleh hasil yang sama yaitu 100%, yang artinya spesies tersebut memiliki
untuk tubuh manusia. Sekitar 30% populasi manusia terinfeksi bakteri ini
(IE) yaitu ketika lapisan jantung yang berhubungan dengan darah yang disebut
32
Kelompok : 19
Kelas : T03
BAB IV
MAS (MULTIPLE ALIGNMENT SEQUENCE)
33
TEKNOLOGI HASIL PERIKANAN FAKULTAS
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
2020
1. PENDAHULUAN
seberapa besar perubahan (evolusi) dari sekuen tersebut yang terjadi melalui proses
substitusi, delesi, dan insersi pada residu-residu sekuen tersebut. MSA berupa
karakteristik protein atau DNA, selain itu juga berfungsi untuk menemukan sequence
leluhur (sequence consensus). Ada banyak metode yang dapat digunakan untuk
MAS, salah satunya adalah metode MAFFT (Multiple Alignment Fast Fourier
Transform). Selain itu, ada juga software UGENE yang merupakan software
34
bioinformatika yang bersifat open source dan didevelop oleh perusahaan IT Rusia
Alignment Fast Fourier Transform) yang juga digunakan dalam praktikum ini.
2. PROSEDUR KERJA
Praktikum Pengantar Bioteknologi materi MAS prosedur kerja yang dilakukan adalah
sebagai berikut :
1. Menyiapkan fasta gen dari tiap-tiap organisme bakteri yang telah didapatkan dari
35
2. Pilih menu online version
3. Masukkan seluruh fasta beserta nama organisme bakteri (spesies) kedalam kolom input
36
5. Setelah itu tekan submit
37
6. Akan muncul tampilan seperti berikut. Terdapat tanda “-“ dalam baris sekuens yang
sudah disejajarkan. Tanda itu, mengartikan bahwa sekuens tersebut memiliki karakter
7. Untuk melihat secara detail sekuen yang telah disejajarkan, tekan view
38
8. Akan muncul tampilan seperti berikut. Tekan pada menu Start MSAViewer in this
window
10. Untuk melihat kekerabatan antara sekuen sekuen organisme bakteri, tekan Phylogenetic
39
Tree
40
12. Tekan view tree on phylo
13. Tampilan pohon kekerabatan antar sekuen akan mucul sebagai berikut
41
3. LEMBAR KERJA
42
3.1 Screenshoot Hasil MAS
Berdasarkan hasil pada program MAS, hasil yang diperoleh pada data
warna tersebut mengidentifikasikan sifat-sifat asam amino. Analisis yang didapat dari
MSA viewer tersebut menunjukkan bahwa dari keempat organisme bakteri dengan
spesies yang berbeda memiliki kekerabatan yang cukup dekat. Misalnya pada asam
amino ke 0-5 di mana keempat organisme tersebut memiliki asam amino yang sama
dan terletak pada ukuran yang sama. Tetapi, ada beberapa asam amino pada
terlalu dekat.
43
3.4 Interpretasi Hasil Pohon Phylogenic
Hal ini dibuktikan dengan jarak garis yang menunjukkan Staphylococcus aureus
dengan garis yang menunjuk Escherichia coli terbilang dekat. Kekerabatan terjauh
berdasarkan multiple sequence alignment (MSA) dengan 20 sekuen gen rRNA 16S
sekuennya (Identity) minimal 70%. Rekonstruksi pohon filogeni yang terbentuk dari
analisa tersebut yaitu Nighbour Joining berdasarkan jarak Juke-Cantor (Aisyah dkk.,
2017)
BAB V
Kelompok : 19
Kelas : TO3
44
PROGRAM STUDI TEKNOLOGI HASIL PERIKANAN
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
2020
1. PENDAHULUAN
Dua asam amino yang berikatan akan membentuk ikatan peptida, yaitu ikatan
kelompok amina pada asam amino kedua. Asam amino ini nantinya akan tersusun
secara linier yang membentuk struktur primer protein. Susunan asam amino tersebut
merupakan susunan unik yang menentukan sifat dasar dari berbagai protein dan
secara umum menentukan bentuk struktur sekunder dan tersier. Kemudian terjadi
lipatan akibat dari kekuatan tarik menarik antar-asam amino yang membuat bentuk
45
struktur sekunder. Struktur tersier terbentuk dari berbagai macam struktur sekunder.
Bagian bentuk sekunder ini dihubungkan dengan ikatan hidrogen, ikatan garam,
interaksi hidrofobik, dan ikatan disulfide. Maksud dari praktikum Bioteknologi Hasil
Bioteknologi Hasil Perikanan materi Visualisasi Struktur Protein adalah agar dapat
2. PROSEDUR KERJA
46
2. Selanjutnya pada all database dipilih protein dan masukan nama enzim
47
4. Klik FASTA maka akan muncul tampilan sebagai berikut
48
5. Selanjutnya copy FASTA dan masuk ke halaman
49
7. Kemudian akan muncul tampilan seperti berikut dan klik search for template
50
9. Untuk mengetahui hasil ramachandran, silahkan klik structure assessment
51
3. LEMBAR KERJA
52
3.3 Screenshoot Hasil Ramachandran Plots
53
3.5 Interpretasi Ramachandran
dapat diketahui suatu struktur protein mempunyai kualitas yang baik atau tidak (Arry,
2011) Plot Ramachandran memberikan representasi grafis dua dimensi sederhana dari
semua struktur protein yang mungkin dalam hal sudut torsi. Konformasi polipeptida
ditentukan oleh nilai phi dan psi. Sebagian besar nilai phi dan psi tidak diperbolehkan
karena interferensi sterik antara atom yang tidak terikat. Oleh karena itu, sebagian besar
diperbolehkan secara sterik karena tumbukan sterik antara rantai samping dan rantai
Berdasarkan tabel ramanchandran yang disajikan diatas, dapat dilihat bahwa spesies
bakteri escherichia coli memiliki presentase sebesar 86,99%, angka ini mengindikasikan
besar kemiripan hasil visualisasi protein yang mirip dengan aslinya. Besar presentase
pada ramachandran favoured yang semakin mendekati 100% dapat diartikan bahwa
kemiripannya sangat baik dengan aslinya. Dari data, dapat dilihat bahwa sebesar
54
DAFTAR PUSTAKA
Arry. ( 2011). A Review on Phylogenetic Analysis: A Journey through Modern Era. Journal
Dwi Pujiastuti.(2019). Lebih Kenal Dengan SDS PAGE. Artikel Sains FPK UNAIR.
Machsun dan Enny Zulaika.(2017). Profil Protein Bakteri Ureolitik. Jurnal Sains dan Seni
Moch . Irfan Hadi, et al.( 2020). Diversitas Kelelawar Di Kawasan Karst Malang Selatan
Narita, V; Arum; Arif, L; M, Siti, I; & Fawzya, Nuri, Y. (2012). Analisis Bioinformatika Berbasis
Tong, Steven Y.C., Joshua S. Davis, Emily E., Thomas L. Holland & Vance G. F.Jr. (2015).
1 VARIAN 1199 PADA SAMPEL BUFFY COAT PASIEN ANAK DENGAN LLA.
55
56