Kemajuan dan Aplikasi Bioteknologi dalam Produksi

Biofuel:
Abstrak

Makalah ini menilai implikasi global dan sektoral dari meningkatnya permintaan
untuk input berbasis bio untuk produksi energi dan bahan bakar. Makalah ini juga
menunjukkan pentingnya harga relatif antara input berbasis bio dan fosil di
sektor minyak bumi dan listrik dan kemajuan saat ini dalam produksi biofuel.
Biofuel generasi pertama terus disubsidi secara substansial, dan ini
berkontribusi pada meningkatnya penggunaan bahan bakar tersebut. Laporan ini
meninjau status terkini dari biofuel generasi kedua dan ketiga. Biofuel generasi
kedua terbuat dari selulosa, yang persediaannya lebih banyak daripada bahan baku
biofuel generasi pertama. Padahal biofuel generasi ketiga telah menjadi
alternatif inovatif yang menawarkan berbagai macam manfaat luar biasa. Saat ini
produksi biodiesel dari mikroalga adalah opsi yang telah menarik minat kuat dari
komunitas ilmiah dan harus dievaluasi untuk menentukan keberlanjutan teknis,
teknologi, ekonomi dan lingkungan dari proses tersebut. Bioteknologi industri
dengan penggunaan teknologi berbasis bio yang kompetitif, bersih dan cerdas
dapat memainkan peran penting dalam membuat biofuel lebih berkelanjutan.

1. Pendahuluan

Setiap solusi sangat penting untuk beralih ke masa depan dengan sumber daya
energi yang berkelanjutan dan produksi barang sehat. Oleh karena itu sumber
energi harus lebih efisien dan proses untuk produksi sumber daya energi
berkelanjutan harus ditingkatkan dengan teknologi baru yang lengkap. Aplikasi
bioteknologi dengan penggunaan teknologi berbasis bio yang bersih dan kasar
dapat memainkan peran penting dalam membuat biofuel lebih berkelanjutan [1].
Bahan bakar fosil adalah hidrokarbon, terutama batu bara, bahan bakar minyak
atau gas alam, yang terbentuk dari sisa-sisa tumbuhan dan hewan yang mati. Bahan
bakar fosil karena potensi panas yang tinggi, ketersediaan, dan sifat
penyulutannya dan telah digunakan sebagai sumber untuk transportasi dan
keperluan energi lainnya [2]. Karena penipisan bahan bakar fosil yang cepat,
pemanasan global, meningkatnya kebutuhan dan permintaan energi di masa depan,
dan perubahan iklim karena emisi bahan bakar fosil, kami terpaksa mencari sumber
energi alternatif. Di antara berbagai sumber alternatif yang tersedia saat ini,
biofuel adalah salah satu sumber energi alternatif terbaik untuk mengurangi
ketergantungan pada bahan bakar fosil dengan menggantinya sepenuhnya atau
sebagian [3]. Melalui produksi biofuel yang berkelanjutan dan peningkatan cepat
yang berkelanjutan di kedua bahan baku bio dan proses untuk produksi biofuel,
adalah mungkin untuk mengurangi ketergantungan pada bahan bakar fosil yang tidak
terbarukan dan untuk menyediakan keamanan energi nasional [4]. Biofuel adalah
setiap bahan bakar padat, cair atau gas yang berasal dari biomassa organik yang
merupakan benda hidup seperti tanaman lapangan, produk kayu, tanaman air,

dan limbah padat kota yang diubah menjadi energi [5]. Sebagai alternatif untuk
bahan bakar fosil di bagian transportasi, biofuel dapat menjadi penting untuk
menyelesaikan masalah lingkungan karena alasan-alasan ini: ia meminimalkan emisi
gas rumah kaca (GRK), dan tidak memerlukan banyak modifikasi mesin, ia juga
meningkatkan keamanan nasional dan menyediakan lapangan kerja dan akhirnya
mendukung pembangunan pedesaan [2]. Untuk berhasil bergerak menuju masa depan
biofuel, penggunaan bioteknologi modern sangat penting dan biaya konversi dari
bahan baku bio menjadi biofuel telah dikurangi menggunakan bioteknologi modern
[4, 6].

2. Sejarah
Sejak manusia menemukan api, arang, potongan-potongan kayu dan kotoran ternak telah digunakan
sebagai sumber energi dan sampai sekarang manusia masih menggunakan bahan bakar padat ini
untuk memanaskan dan memasak di banyak bagian dunia. Pada pertengahan 1700-an dan awal
1800-an, Minyak yang diekstraksi dari ikan paus secara luas digunakan untuk keperluan penerangan
[7]. Sejak lebih dari seabad, biofuel telah ada di sekitar kita meskipun istilah "biofuel" muncul
beberapa tahun yang lalu. Rudolph Diesel pada akhir abad ke-19 menggunakan minyak kacang
untuk menghasilkan tenaga dan dialah yang mulai menggunakan minyak nabati untuk produksi
sumber energi. Diesel juga mengembangkan mesin kerja pertama yang menggunakan minyak
kacang di Pameran Dunia di Paris pada tahun 1900 [8, 9]. Henry Ford juga merupakan pendukung
awal biofuel dan ia mengembangkan mobil Model T pada tahun 1903 yang benar-benar dirancang
untuk menggunakan biofuel yang berasal dari rami sebagai bahan bakar [10].

Gambar 1. Evolusi produksi biofuel dunia dalam jutaan ton [11]

Karena fitur-fitur seperti produktivitas, kemampuan memperoleh, kandungan gas rumah kaca yang
rendah, biodegradabilitas dan pembaruan membuat biofuel lebih menguntungkan daripada bahan
bakar fosil tidak terbarukan lainnya dan produksi biofuel berkelanjutan ini meningkat pesat di
seluruh dunia setiap tahun [8]. Selama harga minyak fosil tetap mendekati US $ 20 per barel (bbl),
produksi biofuel mandek sekitar 10 Mtoe. Ketika harga minyak fosil mulai melonjak sejak tahun
2000, produksi biofuel mengikuti pola yang sama. Namun perlu dicatat bahwa penurunan harga
minyak fosil tahun 2009 tidak berdampak pada tren peningkatan produksi biofuel (Gambar 1) [11].
Pada 2007, sekitar 90% produksi biofuel global berasal dari AS, Brasil, dan Eropa [12].
3. Kemajuan dalam Produksi Biofuel
3.1. Biofuel primer
Kayu bakar seperti kepingan kayu, pelet, kotoran hewan dan sisa tanaman telah digunakan dalam
bentuk yang tidak diproses oleh manusia terutama untuk keperluan memasak dan memanaskan
sejak manusia menemukan api [5]. Kayu bakar, biomassa kayu yang umumnya tidak diolah,
biasanya digunakan untuk menghasilkan api khusus untuk memasak dan bentuk kayu bakar yang
paling umum.
adalah arang yang terutama terdiri dari karbon dan menghasilkan lebih banyak panas dan energi
[13]. Karena populasi dunia yang terus berkembang, membutuhkan lebih banyak makanan, lebih
banyak sumber daya, lebih banyak produksi dan lebih banyak infrastruktur, ada peningkatan besar
dalam pertumbuhan permintaan minyak dari tahun 1996 hingga 2012 seperti yang ditunjukkan pada
Gambar. 3.

Gambar 3. Permintaan minyak dunia.

3.2. Biofuel generasi pertama

Etanol adalah salah satu biofuel generasi pertama yang paling terkenal yang dibuat dari tebu atau
gula bit atau jagung dengan proses fermentasi. Alkohol yang berbeda dapat dibuat dengan
menggunakan organisme fermentasi yang berbeda seperti butanol. Keseluruhan produksi bioetanol
pada tahun 2006 adalah sekitar 51 miliar liter dengan Brazil dan Amerika Serikat yang keduanya
berkontribusi sekitar 18 miliar liter, atau 35 persen dari total. China dan India berkontribusi 11
persen untuk produksi etanol global pada tahun 2006. Gambar 4 jelas menunjukkan peningkatan
produksi bioetanol dunia dari sekitar 9 Mtoe (pada 1990) menjadi 40 Mtoe (pada 2009). Ada juga
peningkatan yang stabil dalam pangsa dunia untuk produksi berbagai biofuel seperti yang
ditunjukkan pada Gambar 5.

Gambar 4. Produksi etanol dan biodiesel dunia, 1975-2010.

 Gambar 5. Saham produksi sereal dunia, minyak nabati dan pabrik gula yang digunakan untuk
produksi biofuel

Alasan utama di balik peningkatan cepat dalam produksi biofuel generasi 1 di negara-negara OECD
adalah keamanan energi nasional, mendukung pembangunan pedesaan dan industri pertanian dan
pengurangan emisi GRK. Meskipun biofuel generasi pertama menunjukkan manfaat bersih dalam
hal alasan di atas, ia juga memiliki beberapa kelemahan yang mencakup biaya produksi yang lebih
tinggi, bersaing dengan tanaman pangan yang menyebabkan kenaikan harga pangan, menyebabkan
kelangkaan air di beberapa wilayah dan pengurangan emisi GRK yang terbatas [14]. Bioalalkohol
dan biofuel generasi pertama lainnya umumnya dibuat dari biofeedstock yang juga dapat digunakan
untuk produksi makanan manusia [15]. Peningkatan cepat dalam permintaan dan produksi biofuel,
terutama bioetanol dari jagung dan tebu, telah memiliki beberapa efek pada sistem pasokan dan
permintaan biji-bijian karena harga beras dan gandum serta tanaman lainnya telah meningkat
(Gambar 6).

Gambar 6. Harga Gandum Simulasi yang Nyata, 2000-2007 (US $ / metrik ton)
Catatan: Harga gabah adalah rata-rata tertimbang produksi beras, gandum, jagung, dan biji-bijian
kasar lainnya. (Sumber: DAMPAK IFPRI).

Dalam waktu dekat, pemanfaatan biofuel generasi pertama diperkirakan akan menimbulkan banyak
tantangan karena para bioteknologi dipaksa mencari alternatif atau
kemajuan dalam biofuel dan karenanya dengan bantuan bioteknologi maju, biofuel generasi kedua
muncul [16]. Bioetanol, biodiesel, biogas, syngas, dan biofuel padat adalah contoh biofuel generasi
pertama.
3.3. Biofuel generasi kedua
Produksi dunia dari biofuel generasi kedua telah meningkat pesat dalam beberapa tahun terakhir
karena fitur berkelanjutan tambahan atas biofuel generasi pertama yang terutama dibuat dari
tanaman pangan tetapi secara komersial biofuel ini belum diproduksi. Menurut sebuah survei yang
dilakukan oleh IEA, peningkatan cepat dalam permintaan biofuel generasi kedua telah diperhatikan
untuk menstabilkan konsentrasi CO2 di atmosfer pada 450 bagian per juta (ppm) [17]. Bahan bakar
hayati generasi kedua umumnya dihasilkan dari bahan baku hayati lignoselulosa yang tampaknya
memiliki potensi lebih besar untuk mengurangi emisi GRK dan pasokan bahan baku ini lebih
banyak dibandingkan dengan bahan bakar nabati generasi pertama [15]. Biofeedstock Lignoselulosa
memungkinkan penggunaan tanaman non-pangan dan biomassa yang lebih murah yang sepenuhnya
menggantikan penggunaan langsung tanaman pangan untuk produksi biofuel yang memiliki efek
buruk yang kuat pada pertanian di seluruh dunia [18]. Biofuel generasi kedua dapat diklasifikasikan
lebih lanjut dalam hal proses yang digunakan untuk mengubah biomassa menjadi bahan bakar:
biokimiawi atau termokimiawi.

3.3.1. Biofuel biokimia generasi kedua

Bahan bakar alkohol generasi kedua yang diproduksi secara biokimia sering disebut sebagai "etanol
selulosa" dan "biobutanol selulosa". Angka. 7 menunjukkan langkah-langkah dasar untuk
memproduksi bioetanol yang meliputi pra-perawatan, sakarifikasi, fermentasi, dan distilasi.
Pretreatment dirancang untuk membantu memisahkan selulosa, hemiselulosa dan lignin sehingga
molekul karbohidrat kompleks yang membentuk selulosa dan hemiselulosa dapat dipecah oleh
hidrolisis yang dikatalisis oleh enzim (penambahan air) menjadi gula sederhana konstituennya [19].
Molekul gula mudah difermentasi untuk etanol menggunakan mikroorganisme terkenal, dan
beberapa mikroorganisme untuk fermentasi menjadi butanol juga dikenal.

3.3.2. Biofuel termokimia generasi kedua.

Dalam metode ini, konversi biomassa menjadi biofuel melibatkan suhu dan tekanan tinggi daripada
proses biokimia. Konversi biomassa dimulai dengan gasifikasi atau pirolisis di mana biomassa
dipanaskan pada suhu tinggi mengubah biomassa menjadi campuran gas diikuti oleh penghilangan
kotoran seperti karbon dioksida yang hadir dalam campuran gas. Karbon monoksida (CO), hidrogen
(H2) dan sejumlah kecil metana (CH4) adalah konstituen utama gas bersih yang dikenal sebagai
syngas setelah penghilangan CO2. Dengan bantuan katalis, CO dan H2 saling bereaksi untuk
menghasilkan biofuel cair seperti yang ditunjukkan di bawah ini dalam Gambar 8 [1].

Gambar. 7. Penggambaran sederhana langkah-langkah proses untuk produksi etanol bahan bakar
generasi kedua [1]
 Gambar. 8. Penggambaran sederhana langkah-langkah proses untuk produksi biofuel termokimia
[1].

3.4. Biofuel generasi ketiga

Menanggapi masalah biofuel generasi kedua, pendekatan baru muncul dengan solusi memanfaatkan
biomassa alga dengan bantuan enzim mikroba untuk mencapai kualitas yang lebih baik dan biofuel
berkelanjutan yang lebih efisien [20]. Biaya minyak yang meningkat, tren untuk melanjutkan
tumbuh atau tetap pada tingkat melonjak dan kehabisan cadangan telah mempengaruhi keamanan
energi global. Biofuel generasi ketiga muncul sebagai alternatif yang menjanjikan untuk
menggunakan biomassa mikroalga menghindari penggunaan bahan baku yang berasal dari sumber
makanan [21]. Proses biokonversi yang berbeda seperti biokimiawi, termokimiawi, kimiawi dan
pembakaran langsung dapat digunakan untuk memperoleh berbagai jenis biofuel seperti yang
ditunjukkan pada Gambar 9. Permintaan bahan bakar cair dalam transportasi meningkat pada
tingkat yang mengkhawatirkan. Saat ini, ester metil asam lemak (FAME) dianggap digunakan
sebagai biofuel cair untuk mesin diesel. Mereka biasanya dibuat dari minyak nabati atau lemak
hewani. Karena bahan-bahan ini terutama dimaksudkan untuk konsumsi, sumber triacylglycerol
alami (TAG) terbarukan dicari. Salah satu alternatif yang paling menonjol adalah mikroalga [22].
Sebagian besar spesies mikroalga adalah photoautotrophic,
yaitu, mereka mengubah energi matahari menjadi bentuk kimia melalui fotosintesis. Mekanisme
fotosintesis mereka sebanding dengan tanaman berbasis lahan, tetapi karena struktur seluler yang
sederhana, dan habitat bawah laut mereka, di mana mereka memiliki akses yang efisien ke air, CO2
dan nutrisi lainnya, mereka umumnya lebih efisien dalam mengubah energi matahari menjadi
biomassa [23] . Mikroalga memiliki prospek yang sangat baik sebagai prekursor biodiesel karena
banyak dari mereka sangat kaya akan minyak, kadang-kadang dengan kandungan minyak lebih dari
80% dari berat keringnya, meskipun semua spesies tidak cocok sebagai minyak produksi biodiesel
[24]. Ada banyak keuntungan menggunakan mikroalga sebagai sumber produksi biofuel. Mereka
dapat menggandakan biomassa mereka dalam waktu kurang dari 24 jam. Selain itu mereka dapat
ditanam di air limbah, atau air yang tidak dapat diminum. Sintesis biodiesel mikroalga dapat
diintegrasikan dengan penghapusan CO2 dari fasilitas pembangkit listrik untuk pengolahan air
limbah dari mana mikroalga akan menghilangkan NH4 +, NO3- dan PO43- [25]. Namun, ada
beberapa batasan dalam menggunakan mikroalga untuk sintesis biofuel. Biofuel berbasis biomassa
mikroalga memiliki beberapa masalah yang meliputi optimalisasi kepadatan tinggi dan unit
produksi permukaan yang besar. Lokasi unit produksi mikroalga juga dapat menimbulkan kesulitan
[26].
 Gambar 9. Proses konversi untuk produksi biofuel dari biomassa alga [5]

Alternatif lain yang dapat dianggap sebagai biofuel generasi ketiga adalah biomassa selulosa.
Biomassa selulosa yang dibuang yang diperoleh dari sumber kehutanan, pertanian, dan kota
merupakan bahan baku prospektif untuk sintesis biofuel. Cara yang efisien untuk menghasilkannya
adalah konsolidasi bioproses (CBP). Dalam teknik ini, produksi selulosa, hidrolisis substrat, dan
fermentasi dilakukan dalam langkah proses tunggal oleh mikroorganisme yang mengekspresikan
enzim selulolitik (dan hemiselulolitik) [27]. Selain mikroalga, ada beberapa sumber lain untuk
menghasilkan biofuel dari biomassa berminyak. Beberapa prokariota dan eukariota dapat
mengakumulasi jumlah lipid yang tinggi. Tetapi, seperti halnya mikroalga, tidak semua spesies
cocok untuk produksi biodiesel karena perbedaan dalam jenis lipid penyimpanan. Dengan
demikian, sebagaimana dinyatakan oleh [28] banyak prokariota menghasilkan senyawa polimer
seperti poli (3-hidroksibutirat) (PHB) atau polihidroksialkanoat (PHA) lainnya, sedangkan hanya
beberapa genus yang menunjukkan akumulasi triasilgliserol (TAG) dan ester lilin (WEAG) tertentu.
dalam bentuk tubuh lipid intraseluler. Sebaliknya, TAG penyimpanan sering ditemukan dalam
eukariota, sementara PHA tidak ada, dan akumulasi WE hanya dilaporkan di jojoba. Semua lipid ini
adalah senyawa penyimpanan karbon dan energi yang menjamin metabolisme untuk kelangsungan
hidup selama tahap kelaparan. Analog dengan pembentukan PHA, TAGs dan WE, sintesis
dipromosikan oleh tekanan seluler dan selama pertumbuhan yang tidak seimbang; misalnya, dengan
kekurangan nitrogen bersamaan dengan berlimpahnya sumber karbon [29].

4. Aplikasi Bioteknologi dalam Produksi Biofuel

Bioteknologi menggunakan cara yang menarik untuk memproduksi biofuel yang meningkatkan
hasil tanpa banyak peningkatan energi yang dibutuhkan untuk produksi. Dalam beberapa dekade
terakhir, perbaikan yang signifikan telah dibuat dengan bantuan biologi molekuler untuk
meningkatkan aktivitas mikroba dan enzim [30]. Penggunaan Genetically Modified Organisms
(GMOs) ditemukan sebagai metode yang paling efisien dan cepat untuk meningkatkan konversi
biofuel, terutama dalam kasus biomassa lignoselulosa [31]. Dengan bantuan bioteknologi, struktur
dinding sel dan komposisi lignoselulosa dalam sel tanaman dapat dimodifikasi untuk meningkatkan
hasil etanol per hektar [32]. Bioteknologi dapat mempengaruhi kepadatan hasil dengan
memvariasikan fisiologi tanaman, arsitekturnya, bersama dengan efisiensi fotosintesisnya dan juga
menunjukkan kemampuannya untuk mengurangi input agronomis seperti herbisida dan pestisida.
Kemajuan dengan cepat dibuat pada karakter yang memungkinkan tanaman untuk mengambil dan
mengkonsumsi nutrisi lebih banyak sumber daya, sehingga memperlengkapi mereka untuk ditanam
dengan jumlah pupuk yang lebih sedikit. Memproduksi tanaman biomassa di lahan yang seharusnya
"marjinal", seperti tanah yang sangat kering, atau dengan karakteristik tanah yang kurang, dapat
meningkatkan skala produksi biofuel tanpa pengaruh pada hektar produksi pangan. Bioteknologi
berfokus pada pengembangan tanaman kekeringan, dingin, garam dan panas serta tanaman yang
dapat bertahan hidup pada berbagai kondisi tanah. Untuk pabrik bahan baku biomassa, kadar
selulosa dan hemi-selulosa yang lebih tinggi akan memberikan hasil fermentasi yang lebih baik dan
karenanya galon etanol per ton biomassa. Ini menghasilkan tambahan energi bersih per hektar dan
lebih banyak pendapatan. Penelitian telah berhasil dilakukan untuk kloning gen yang mengkode
selulase dan enzim polygalacturonase untuk mengembangkan strategi biorefinery berbiaya rendah
yang efektif untuk mencapai konversi biomassa maksimum dan meningkatkan metode kromatografi
gas-spektrofotometri massa yang telah dikembangkan oleh para peneliti di TAMUK dalam
pemahaman aksi katalitik dari enzim yang diekspresikan dalam proses biokonversi [33]. Kesulitan
yang dihadapi oleh biofuel
produsen dalam proses seperti pencernaan dan fermentasi mikroba dapat secara efektif mengurangi
dengan meningkatkan proses bioteknologi [6].

5. Kesimpulan
Menurut pengetahuan terkini, Gas Rumah Kaca dapat diringkas dalam 30-40 tahun ke depan dan
permintaan bahan bakar emisi karbon dioksida rendah dalam semua bentuk mobil sangat besar.
Karena harga minyak mentah yang tumbuh cepat dengan beberapa dampak buruk terhadap
lingkungan, permintaan untuk produksi biofuel telah meningkat. Biofuel cair seperti bioetanol,
biodiesel, dan biofuel gas seperti biometana, biohidrogen telah dikembangkan sebagai alternatif
yang efektif untuk sumber bahan bakar fosil. Untuk mengurangi ketergantungan pada bahan bakar
fosil, biofuel ditemukan sebagai alternatif paling efisien di antara berbagai sumber energi yang ada.
Biofuel dapat menggantikan penggunaan bahan bakar fosil yang efektif yang dikenal sebagai
penyebab efek rumah kaca. Penelitian telah menunjukkan bahwa biofuel generasi pertama yaitu
biofuel tanaman memiliki pengaruh yang tahan lama terhadap pertanian di seluruh dunia. Biofuel
generasi kedua umumnya dibuat dari biomassa non-tanaman dengan dua pendekatan fundamental
yang berbeda (biokimia generasi kedua biokimia dan termokimia). Selulosa karena ketersediaannya
yang mudah, harga, dan kemampuan untuk terdegradasi secara mahir oleh bakteri selulolitik, telah
menjadi biofeedstock yang menarik untuk produksi biofuel generasi kedua. Berbagai macam residu
pertanian dan industri, dari kehutanan lignoselulosa dan limbah domestik dapat digunakan sebagai
prekursor biofuel dengan bantuan enzim mikroba. Desain pabrik produksi biofuel, katalis heterogen
dan teknik imobilisasi enzim, rekayasa protein lipase, alkohol dehidrogenase atau hidrolase untuk
meningkatkan aktivitas dan penggunaan kembali, rekayasa genetika mikroba untuk memfasilitasi
pretreatment prekursor, serta sintesis dan pemurnian biofuel. Bioteknologi memainkan peran
penting dalam produksi biofuel. Ini membantu dalam mengurangi input agronomi, dalam
mengoptimalkan karakteristik proses dan dalam rekayasa pabrik untuk menghasilkan hasil tinggi
dan karenanya energi tinggi. Dengan kemajuan di bidang bioteknologi, perbaikan dalam sintesis
biofuel dapat diharapkan.
 Strategi Bioteknologi untuk Meningkatkan Kualitas Biomassa Tumbuhan untuk Produksi
Bioetanol
1. Pendahuluan
Tuntutan energi besar masyarakat modern dipenuhi dengan bahan bakar fosil seperti gas alam,
batubara, minyak bumi, dan turunannya seperti bensin dan solar. Penggunaan sumber energi ini
memiliki dampak lingkungan seperti polusi udara, air, dan tanah di lokasi ekstraksi, saluran, dan
kilang [1], dan mobilisasi antropogenik jutaan ton karbon dari lapisan tanah ke atmosfer merupakan
salah satu faktor utama menyebabkan pemanasan global [2]. Selain itu, negara-negara penghasil
minyak mengalami konflik, distorsi ekonomi jangka panjang, dan kurangnya keragaman teknologi
yang terkait dengan fluktuasi pasar energi dan ketergantungan minyak [3,4]. Misalnya, Meksiko,
mantan produsen minyak terkemuka, sekarang menjadi importir bersih minyak sulingan dari
Amerika Serikat [5]. Impor bensin dua kali lipat dalam dekade terakhir menciptakan spiral inflasi
dan keprihatinan sosial yang luas. Menurut arus Perkiraan ekonomi, situasi ini tidak akan dapat
diubah untuk dekade mendatang [6].
Di bawah skenario ini, biofuel diusulkan sebagai alternatif untuk bahan bakar fosil, terutama etanol
yang diproduksi sebagai produk fermentasi akhir dari ragi yang mengonsumsi karbohidrat alami,
seperti Saccharomyces cerevisiae, Pichia stipitis, atau Kluyveromyces marxianus, dan bakteri,
seperti Zymomonas mobilis [7] ] Strain mutan dan rekayasa genetika dari mikroorganisme ini dan
lainnya (mis., Pichia pastoris atau Escherichiacoli) juga telah diusulkan untuk meningkatkan hasil
etanol melalui peningkatan fermentasi pentosa, peningkatan toleransi etanol, dan penggunaan pati
atau selulosa asli sebagai substrat [7, 8] . Brasil adalah pelopor dalam menggunakan bioetanol untuk
bahan bakar transportasi, diikuti oleh AS. Kedua negara memiliki pengalaman masing-masing 20
dan 15 tahun, dan produksi global gabungan 90% [9]. Jus tebu (Saccharum spp.) Adalah bahan baku
tanaman di Brasil,
Di bawah skenario ini, biofuel diusulkan sebagai alternatif untuk bahan bakar fosil, terutama etanol
yang diproduksi sebagai produk fermentasi akhir dari ragi yang mengonsumsi karbohidrat alami,
seperti Saccharomyces cerevisiae, Pichia stipitis, atau Kluyveromyces marxianus, dan bakteri,
seperti Zymomonas mobilis [7] ] Strain mutan dan rekayasa genetika dari mikroorganisme ini dan
lainnya (mis., Pichia pastoris atau Escherichiacoli) juga telah diusulkan untuk meningkatkan hasil
etanol melalui peningkatan fermentasi pentosa, peningkatan toleransi etanol, dan penggunaan pati
atau selulosa asli sebagai substrat [7, 8] . Brasil adalah pelopor dalam menggunakan bioetanol untuk
bahan bakar transportasi, diikuti oleh AS. Kedua negara memiliki pengalaman masing-masing 20
dan 15 tahun, dan produksi global gabungan 90% [9]. Jus tebu (Saccharum spp.) Adalah bahan baku
tanaman di Brasil, sedangkan pati jagung (Zea mays) adalah bahan baku tanaman di AS. Dalam
tebu, sukrosa adalah karbohidrat gratis yang mudah dikeluarkan melalui ekstraksi mekanik; dalam
pati jagung, karena merupakan aglucose polimer, monomer gula harus dilepaskan oleh panas dan
hidrolisis enzimatik untuk membuat mereka tersedia untuk fermentasi. Proses ini disebut
sakarifikasi [10,11].
Selama dekade terakhir, selulosa, polimer tanaman paling melimpah di alam, juga telah diuji
sebagai bahan baku untuk produksi bioetanol. Ia juga harus menjalani sakarifikasi untuk
melepaskan monomer heksosa dan pentosa-nya. Polimer Starchisa dari kekambuhan sakarifikasi
rendah jika dibandingkan dengan selulosa yang membutuhkan langkah-langkah pemrosesan lebih
lanjut karena terkait dengan lignin, polimer tanaman yang terdiri dari monomer aromatik yang sulit
untuk diurai. Proses mekanik, kimia, dan enzimatik yang berbeda diperlukan untuk sakarifikasi
selulosa [11]. Studi ilmiah dan teknologi pada produksi bioetanol telah menarik perhatian dalam
beberapa tahun terakhir. Empat dekade lalu, hanya beberapa paten dari proses ini yang terdaftar;
namun, dalam dekade terakhir, ratusan di antaranya terisi [9]. Paten ini melibatkan semua tahap
proses, dari bioteknologi fermentasi untuk peningkatan strain mikroba, rekayasa enzim sakarifikasi,
dan perbaikan genetik bahan baku tanaman. Jika karbohidrat bebas, pati sakarifikasi / selulosa, atau
menggunakan kombinasi untuk meningkatkan efisiensi melalui penggunaan biomassa seluruh
tanaman [misalnya, [16]] dimaksudkan untuk produksi bioetanol, diperlukan peningkatan
kandungan molekul-molekul ini pada tanaman yang dibiakkan untuk industri bioetanol. [17–19].
Dalam penelitian ini, kami memperbarui pengetahuan tentang strategi bioteknologi tanaman dengan
aplikasi yang menjanjikan di industri bioetanol dan membahas dampak positif dalam pemahaman
kami saat ini tentang alokasi karbon pada tanaman.

2. Biomassa Tumbuhan sebagai Bahan Baku untuk Produksi Bioetanol

Biomassa tanaman telah digunakan selama berabad-abad sebagai sumber energi, misalnya, kayu
untuk pemanasan. Mengingat meningkatnya permintaan bahan terbarukan yang digunakan untuk
menggantikan produk industri, biomassa tanaman dianggap sebagai sumber daya strategis untuk
produksi biofuel, terutama bioetanol [20]. Selain itu, biomassa tanaman juga dapat menjadi sumber
molekul kimia lain yang menarik seperti laktat, aseton, furfural, pelumas, dan bahan bakar jet
[21,22].
Produksi etanol melalui fermentasi gula nabati untuk menghasilkan anggur, bir, dan minuman
beralkohol lainnya adalah proses yang dikenal baik oleh semua peradaban. Kita sekarang tahu
bahwa substrat dari proses ini adalah gula bebas atau terpolimerisasi. Masing-masing molekul ini
memiliki dinamika akumulasi, kompartementalisasi, dan fungsinya sendiri dalam tanaman.
Akumulasi gula bebas sangat penting dalam tanaman, karena perannya dalam produksi energi
ketika digunakan oleh sel untuk mendapatkan ATP dan NADH melalui glikolisis. Baru-baru ini,
karbohidrat juga telah ditentukan sebagai indikator kapasitas fotosintesis tanaman [25]. Misalnya,
proporsi sukrosa / trehalosa-6-fosfat yang tinggi menunjukkan kapasitas fotosintesis yang baik,
sedangkan proporsi yang rendah menunjukkan tekanan energi yang rendah [26]. Rincian protein
terlibat langsung dalam proses masih belum jelas; salah satu kandidat yang paling masuk akal untuk
memediasi proses homeostatis energi ini adalah enzim sukrosa non fermentasi-1 terkait kinase 1
(SnRK1) yang bertindak sebagai hub penginderaan melalui pensinyalan fosforilasi dari target
protein [27,28]. Pati adalah karbohidrat nonstruktural utama yang memainkan peran penting sebagai
molekul penyimpan energi. Ini terdiri dari amilopektin (70-80%) dan amilosa (20-30%); kedua
polimer terbuat dari D-glukosa. Amilosa adalah molekul rantai linier yang dihubungkan oleh 𝛼-
1,4bond, dimana amilopektin adalah polimer bercabang yang dihubungkan oleh ikatan 𝛼-1,6. Pati
memiliki struktur semi kristal dan tidak larut. Ini membentuk struktur superior, yaitu, butiran yang
bervariasi dalam ukuran dan bentuk (poligon, bulat, dan lenticular), rasio amilosa / amilopektin,
struktur nano, dan kristalinitas. Baik amilosa dan amilopektin membentuk 95-99% dari berat kering
butiran pati [23,24]. Selulosa dan hemiselulosa (polimer pentosa, terutama xilosa) adalah polimer
karbohidrat utama yang membentuk dinding sel tanaman. Selain itu, lignin, polimer monomer
fenolik yang disintesis dari asam amino aromatik, terkait silang dengan selulosa dan fibril
hemiselulosa. Proporsi ketiga komponen ini bervariasi tergantung pada tahap perkembangan
tanaman, organ, dan spesies. Dinding sel adalah struktur utama yang terlibat dalam pertumbuhan
tanaman, dukungan berat badan, dan perlindungan mekanis terhadap patogen [10,11].

3. Kelangsungan Hidup Tumbuhan dan Distribusi Karbon

Dalam perjalanan sejarah alam, tanaman telah mengembangkan mekanisme canggih untuk
merasakan lingkungan dan mengembangkan strategi yang memungkinkan untuk bertahan hidup.
Gerakan tanaman sangat terbatas karena sifat sesil mereka; situs tempat mereka berkecambah
kemungkinan besar adalah lokasi permanen mereka dan mereka harus berkembang dengan sumber
daya yang tersedia, berlimpah atau langka, untuk mendapatkan energi. Dalam proses pengambilan
keputusan, variabel yang berbeda, seperti panjang hari, kualitas cahaya, suhu, arah gravitasi, dan
molekul internal atau eksternal, harus dipertimbangkan, dan kemudian, respons seperti
perkecambahan, tingkat konsumsi energi, kecepatan pertumbuhan, arsitektur organ, dan transisi
remaja / maturitas dipicu [29,30].

Pati adalah molekul pilihan untuk penyimpanan energi dalam bentuk ikatan kimia. Homeostasis
antara sintesis dan konsumsi merupakan pusat kelangsungan hidup tanaman [23, 24]. Siang hari
melalui fotosintesis, kloroplas terus menangkap elektron dalam NADPH dan mengembalikan ikatan
fosfat berenergi tinggi dalam ATP; kedua molekul digunakan untuk memperbaiki CO2 atmosfer
dalam karbohidrat. Gula yang berasal dari fotosintesis dapat digunakan sebagai monomer untuk
sintesis polisakarida struktural yang menopang akumulasi biomassa (selulosa dan hemiselulosa),
digunakan untuk mentransfer energi ke mitokondria untuk metabolisme primer atau disimpan
sebagai pati dalam kloroplas [31].

Penelitian saat ini menggunakan model tanaman Arabidopsis thaliana menunjukkan bahwa tanaman
liar lebih suka strategi konservatif untuk manajemen homeostasis energi [32, 33]. Aliran dan
distribusi karbon dari atmosfer ke pati sangat penting untuk memastikan kelangsungan hidup
tanaman pada malam hari sampai subuh [34]. Jika tidak diperkirakan dengan benar, tanaman dapat
menghadapi gejala kelaparan yang parah dengan dampak negatif pada produktivitas [35]. Kontrol
ini dicapai melalui jaringan rumit dari mekanisme yang saling berhubungan di berbagai tingkat
aliran genetik informasi, misalnya, kontrol ekspresi sirkadian untuk mencapai ekspresi yang tepat
dari enzim katabolik (siang) dan anabolik (malam) [36], regulasi enzimatik alosterik untuk
memungkinkan respons cepat terhadap produk dan jalur lain [37, 38], hubungan sumber-wastafel
untuk mengoptimalkan transportasi gula jarak jauh dan mengatur pertumbuhan [31], autophagy
sebagai respons stres energi rendah atau daur ulang nutrisi dari daun tua [39], nutrisi mobilisasi
yang melibatkan metabolit penting lainnya seperti asam amino [40], dan pensinyalan molekuler
untuk merasakan kekuatan metabolik yang dimiliki sel dan tingkat organisme keseluruhan [41].
Hanya ketika akumulasi sumber daya dan konstruksi struktur menunjukkan keberadaan mesin
fotosintesis yang kuat, pabrik memprioritaskan dalam mengalokasikan sumber dayanya untuk
memenuhi kebutuhan energi pada tahap reproduksi [32]. Dalam kasus-kasus ekstrim, seperti
kekeringan atau pengembangan yang tertunda, ketika akumulasi sumber daya tidak tersedia, pabrik
berfokus pada tahap reproduksi dalam kondisi suboptimal, mempertaruhkan keberhasilan keturunan
daripada tidak memiliki [25].

4. Alokasi Karbon dan Bioteknologi

Selama ribuan tahun terakhir, domestikasi tanaman membentuk dasar pertanian modern untuk
mempertahankan nutrisi manusia. Itu dicapai melalui pemilihan individu tanaman dengan respons
yang dimodifikasi pada satu atau lebih strategi alokasi karbon yang disebutkan di atas. Sebagai
contoh, tanaman jagung modern mengkonsentrasikan fotosintat pada beberapa unit reproduksi
daripada banyak, seperti yang dilakukan oleh kerabat tipe liar [42]. Kultivar gandum yang diperoleh
selama Revolusi Hijau memiliki biomassa vegetatif yang lebih kecil yang mampu menopang tahap
reproduksi [43]. Tebu telah menggantikan pati untuk sukrosa sebagai molekul penyimpanan
utamanya [44]. Beberapa varietas kacang tidak sensitif terhadap foto kontrol periodik berbunga
[45]. Semua pencapaian ini dalam domestikasi tanaman memodifikasi strategi alami yang
digunakan untuk melestarikan dan mengalokasikan sumber daya karbon [43,46,47].

Strategi yang digunakan oleh tanaman jinak telah menimbulkan risiko tinggi untuk pengelolaan
energi dan karbon di alam liar, karena mereka hanya berhasil di ladang karena praktik pertanian
modern lebih terlihat oleh manusia. Beberapa contoh yang terakhir adalah pemilihan musim tanam,
jarak antar tanaman individu, jaminan penuh kebutuhan nutrisi, membatasi herbivora dan patogen,
dan menghilangkan pesaing sinar matahari dan puing-puing dari generasi sebelumnya. Melalui
strategi ini, bahaya alam yang menghambat sifat berani pada tanaman liar selama evolusi alami
sekarang dikontrol secara artifisial.

Fenotip tanaman baru diperlukan untuk beradaptasi dengan tantangan modern seperti meningkatnya
populasi manusia atau efek pemanasan global: kekeringan, banjir, dan rentang predator baru. Untuk
mengatasi masalah ini, tanaman dapat dimodifikasi untuk menginvestasikan lebih banyak energi
pada persepsi dan mekanisme perlindungan yang langka, kurang mendadak, atau dapat ditoleransi
di alam. Beberapa strategi yang berhasil adalah hibrida komersial yang ditransformasi dengan
bakteri
RNA chaperones (Dried gard; [48]) atau jalur padi non transgenik SUB 1 yang dapat bertahan hidup
lebih dari satu minggu lebih lama daripada kultivar tradisional [49]. Baru-baru ini, peningkatan
yang menjanjikan dalam produktivitas biomassa tanaman telah dilaporkan dengan memodifikasi
mekanisme perlindungan foto yang sangat konservatif pada tanaman [50]. Mickelbart et al. [51]
meninjau contoh sukses lainnya yang diterapkan pada tanaman yang dapat dimakan termasuk
beberapa gen penyalinan, penyaringan ekotipe dan kultivar, dan potensi penggunaan penyuntingan
genom presisi oleh CRISPR-Cas 9 atau transkripsi nukleasi efek seperti aktivator-transkripsi
(TALEN). Dua metode terakhir ini memungkinkan pengenalan perubahan sekuens DNA pada situs
kromosom tertentu; keduanya bergantung pada pembelahan DNA oleh nuklease dan selanjutnya
perbaikan trand oleh mekanisme alami [52, 53] dan dapat ditingkatkan dengan menambahkan
panduan oligonukleotida untuk meningkatkan efisiensi dan spesifisitas [54]. Pada tanaman,
penghapusan, substitusi, dan insersi mulai dari basa tunggal hingga penataan ulang kromosom telah
dilaporkan [55]. Strategi kerja ini saat ini dapat diterapkan untuk meningkatkan biomassa tanaman
untuk industri bioetanol. Meskipun lembaga dan perusahaan telah menghasilkan puluhan tanaman
yang diedit, sebagian besar aplikasi diarahkan pada solusi untuk industri makanan dan kontrol
patogen [55]. Hanya di tebu, TALEN telah secara eksplisit digunakan untuk meningkatkan kualitas
biomassa untuk industri bioetanol [56, dibahas lebih lanjut di bagian selanjutnya].
Distribusi karbon dalam kultivar bioetanol harus dialokasikan dalam karbohidrat dan harus tersedia
dengan sakarifikasi untuk fermentasi selanjutnya [10,43]. Sudah ada tanaman tradisional dengan
strategi alokasi karbon yang mendukung pati atau akumulasi gula gratis pada jaringan tanaman
tertentu, seperti jagung dan tebu; etanol yang dihasilkan dari jenis biomassa ini disebut bioetanol
generasi pertama [57]. Namun, beberapa sektor masyarakat khawatir tentang kemungkinan
teknologi ini, karena tebu dan areal jagung sehingga sumber unsur produk berlipat ganda, dan
kontroversi “makanan versus bahan bakar” meningkat yang melibatkan persaingan dalam
penggunaan lahan dan berdampak pada harga pangan di masa depan [58]. Untuk mengatasi
komplikasi ini, biomassa residu pertanian atau seluruh tanaman yang tidak digunakan untuk
konsumsi manusia, seperti rumput dan pohon, dan yang sudah tumbuh di lahan non pertanian dapat
dilestarikan, dikelola, dan dimanfaatkan [10, 59, 60]. Etanol yang dihasilkan dari spesies ini disebut
bioetanol generasi kedua.
Berbagai strategi telah diimplementasikan untuk mengidentifikasi akumulasi karbon baru dan pola
distribusi serta meningkatkan sifat sakarifikasi pada tanaman yang dimaksudkan untuk produksi
bioetanol, seperti penghambatan konstitutif atau temporal dari enzim pengurai pati [61], penundaan
waktu berbunga dengan faktor transkripsi [62] , ekspresi endogen enzim pendegradasi dinding sel
[63], dan pembungkaman enzim biosintetik lignin [64].
Dalam beberapa kasus, mengubah distribusi karbon pada penyimpanan penting atau molekul
arsitektur sedemikian radikal berdampak negatif terhadap tujuan pembangunan dan pertumbuhan
dasar dengan konsekuensi penalti dalam produksi biomassa. Mekanik sub optimal dan penghentian
hubungan hara / pengembangan harus dihindari. Untuk mengatasi tantangan-tantangan ini dalam
manipulasi lokasi karbon untuk secara eksplisit meningkatkan sifat-sifat tanaman yang menarik
bagi industri bioetanol, diperlukan strategi baru untuk menyelaraskan fluks karbon, menghindari
dampak negatif pada tahap perkembangan kritis, mengkompromikan integritas jaringan, dan
mengekspos pabrik secara berlebihan. untuk risiko patogen. Secara alami, tanaman sudah memiliki
mekanisme asuransi untuk kemunduran ini, misalnya, yang dinyatakan selama kasus paparan
oksigen rendah [40], sebelum fajar [30,35], dan cahaya yang berfluktuasi [50]. Pemahaman dan
karakterisasi jalur ini dapat mengarah pada aplikasi inovatif dalam bioteknologi konservasi dan
alokasi karbon.
5. Strategi Bioteknologi untuk Meningkatkan Sakarifikasi Biomassa Tumbuhan
Dengan semua informasi terkini tentang pengelolaan akumulasi karbon pada tanaman, berbagai
strategi telah diuji untuk meningkatkan sakarifikasi tanaman dan, akibatnya, hasil bioetanol. Saat
ini, mereka dapat diklasifikasikan oleh manipulasi waktu / lokasi faktor transkripsi (TF) dan enzim
untuk mencapai satu atau lebih dari tujuan berikut: penundaan waktu berbunga, konservasi pati, dan
mengurangi kekambuhan sakarifikasi komponen molekul dinding sel. Selain itu, penggunaan
keanekaragaman genetik tanaman juga dieksplorasi untuk menemukan faktor genetik baru dengan
dampak positif pada aplikasi ini. Pada bagian berikut, kami membahas contoh paradigmatik dari
strategi ini dan penelitian saat ini yang, dalam perspektif kami, sedang memajukan pengetahuan di
bidang bioteknologi ini.

5.1.Faktor-faktor Transkripsi.
TF adalah protein yang dapat mengikat DNA secara reversibel dan sekaligus mempromosikan dan /
atau menghambat
ekspresi beberapa gen. Dalam pandangan ini, beberapa TF telah ditemukan untuk mengendalikan
beberapa langkah biosintesis lignin, misalnya, keluarga protein MYB [65]. Ketika gen MYB4,
inhibitor transkripsional apartial dari gen biosintetik lignin diekspresikan pada rumput switch
(Panicum virgatum) tanpa kendali dari promotor asalnya tetapi di bawah kendali promotor
konstitutif yang kuat, penurunan kekambuhan biomassa terhadap sakarifikasi diamati (Gambar 1) .
Rumput ini memiliki potensi besar sebagai tanaman bioenergi. Dalam laporan yang sama ini,
pentingnya menguji garis transgenik berbeda dari konstruk yang sama disorot, karena situs tempat
transgen disisipkan akan mempengaruhi ekspresi gen yang diinginkan. Para penulis mengamati
bahwa garis yang sangat mengekspresikan transgen tidak bertahan dalam kondisi lapangan [12].
Penggunaan MYBs yang diekspresikan secara konstitutif juga diuji dalam tebu. Dua TF dianalisis
untuk menentukan mana yang secara bersamaan dapat menghambat lebih banyak gen biosintesis
dinding sel. Menariknya, juga ditemukan bahwa satu MYB dapat meningkatkan sukrosa gratis [66].
Keluarga TF lain yang telah digunakan untuk meningkatkan sakarifikasi biomassa tanaman adalah
FAKTOR TANGGUNG JAWAB ETHYLENE (ERFs). N ˜ u˜nez-L´opez et al. [13] mengeksplorasi
kapasitas dua ERF yang secara alami terlibat dalam respons tanaman terhadap stres akibat banjir,
stres yang membatasi energi, dan menemukan bahwa ekspresi berlebihan SUB1A-1 menghasilkan
aphenotype di mana konservasi pati digandakan, terutama pada tahap pra-penanaman (Gambar 2).
Dihipotesiskan bahwa SUB1A-1 menyebabkan efek ini melalui efek terkait penghambatan waktu
berbunga; SUB1A-1 sangat menekan ekspresi gen berbunga klasik CONSTANS dan FLOWERING
LOCUST [67].
Gambar 2: Peningkatan konsentrasi pati dengan menggunakan faktor transkripsi beras SUB1A 1.
(A) Tanaman jenis liar memiliki sistem sinyal berbunga utuh melalui CONSTANS (CO) dan
FLOWERING LOCUS T (FT). (b) Tumbuhan yang ditransformasi dengan gen FAKTOR
TANGGAPAN ETHYLENE SUBMERGENCE1A 1 (SUB1A) mengalami keterlambatan dalam
waktu berbunga melalui penghambatan transkripsi CO dan FT, untuk sementara mengumpulkan
pati yang bijaksana untuk pengembangan berbunga tofuel lainnya [13].

Resistensi dinding sel terhadap deformasi juga menurun. selain itu, efek samping dari strategi ini
adalah akumulasi biomassa yang lebih rendah setelah berbunga, menyoroti pentingnya menguji pola
ekspresi baru ruang dan waktu. Wuddineh et al. [68] melakukan penyaringan luas switchgrass ERF
untuk menemukan kandidat yang cocok untuk ekspresi pada jaringan yang muda dan berkembang.
Dengan cara ini, ERF001 dipilih dan ekspresi berlebihnya meningkatkan biomassa hampir dua kali
lipat dari tanaman tipe liar.

Berbunga juga telah dimanipulasi dengan TF keluarga SQUAMOSA PROMOTER BINDING

PROTEIN-LIKE (SPL). Ditemukan bahwa SPL berpartisipasi sebagai mekanisme berbunga upaya
terakhir diaktifkan oleh usia tanaman dan secara alami ditekan pada tanaman muda oleh miRNA156
[25]. Dengan cara ini, ketika mi RNA156 lebih diekspresikan dalam mutan alami atau tanaman
rekayasa genetika, fase remaja diperpanjang, dan, yang menarik, sakarifikasi dinding starc handcell
meningkat [62]; ini merupakan salah satu dari sedikit contoh di mana dua karakteristik yang sangat
diinginkan ini dalam biomassa tanaman untuk biofuel ditingkatkan secara bersamaan. TF dari
keluarga ZIP telah digunakan untuk meningkatkan kadar gula dalam buah tomat. Diamati bahwa
protein ini berada di bawah kendali domain upstream open reading frame (uORF) yang mampu
merespon konsentrasi seluler sukrosa. Ketika uORF dikeluarkan dan gen ZIP diekspresikan dari
promotor spesifik buah, konsentrasi glukosa dan fruktosa meningkat dalam tomat [69]. Pendekatan
inovatif ini dapat diperluas untuk merekayasa ZIP TF untuk industri bioetanol.

5.2. Enzim.
Berbagai enzim telah diuji sebagai alat bioteknologi untuk meningkatkan sakarifikasi.
Menggunakan informasi dari mutan arsitektur dinding sel Arabidopsis, Biswal et al. [70]
menemukan bahwa transferase glukosil yang berbeda (GT) berpartisipasi dalam beberapa langkah
biosintesis lignin. Untuk meningkatkan sakarifikasi Populus deltoides, pohon cuaca dingin dengan
sifat-sifat bioenergi yang diinginkan pada tahap remaja, pengujian selektif gen GT diuji. Diamati
bahwa kandungan lignin tidak berubah pada mutan ini; Namun, proporsi bahan kimia dari
komponennya telah dimodifikasi, dan biomassa dan sakarifikasi masing-masing meningkat hingga
38% dan 10%. Aplikasi terkait adalah penggunaan mutan hilangnya fungsi IRREGULAR XYLEM
9 (IRX9), gen koding aGT, dan itu adalah penekanan jenis kelamin dari promotor khusus axylem
(Gambar 3); ini menambah hingga 30% sakarifikasi dinding sel [14].

CAFFEOYL SHIKIMATE ESTERASE (CSE) adalah kode gen untuk enzim yang terlibat dalam
biosintesis lignin. Mutan hilangnya fungsi cse telah meningkatkan sakarifikasi dinding sel hingga
300% tetapi menderita cacat biomekanik yang parah dalam sistem vaskular tanaman [71]. Untuk
mengatasi penarikan ini, Vargas et al. [72] menyatakan CSE di bawah kendali promotor sistem
vaskular, jaringan yang paling kolaps dalam mutan cse. Pendekatan ini memperbaiki pembuluh
darah tanaman, perkembangan yang dinormalisasi, dan mempertahankan sifat sakarifikasi yang
lebih baik. Pengkodean gen lain untuk enzim biosintesis lignin yang telah digunakan dalam
sakarifikasi bioteknologi adalah CAFFEIC ACID O-METHYLTRANSFERASE (COMT). Untuk
menghindari fenotipe tanaman yang tidak diinginkan, strategi pembungkaman gen diuji di mana
ekspresi gen tidak sepenuhnya ditekan tetapi hanya berkurang. Tanaman dengan COMT yang
dibungkam tidak memiliki kerentanan patogen atau cacat bio mekanis yang meningkat, tetapi
kandungan lignin berkurang, dan bahan kering dan hasil sakarifikasi meningkat dengan total
peningkatan hasil bioetanol hingga 25% bila dibandingkan dengan tanaman jenis liar [ 73]. Data ini
diperoleh dalam uji coba lapangan, fitur yang luar biasa dari penelitian ini karena beberapa strategi
peningkatan sakarifikasi telah diuji pada tingkat ini [12,73]. Baru-baru ini, strategi ini telah
diimplementasikan dalam tebu melalui mutagenesis KOA multi-paralel TALEN yang dimediasi
oleh COMT dengan hasil yang sama [56], merupakan contoh pertama penyuntingan genom yang
tepat untuk peningkatan kualitas biomassa tanaman.

Rekayasa protein adalah alat bioteknologi inovatif yang baru-baru ini digunakan untuk memodulasi
sintesis lignin. Caietal. [15] menghambat polimerisasi lignin dengan mengekspresikan enzim
monolignol 4-O-metil transferase (OMT) di Populus. Urutan dari OMT yang digunakan adalah
varian buatan yang diperoleh oleh mutagenesis saturasi iteratif dari beberapa pabrik OMT dengan
kapasitas dan aktivitas katalitik yang berbeda [74]. Metode ini menurunkan pengujian efek
substitusi asam amino di situs aktif untuk mendapatkan aktivitas baru, dalam hal ini, metilasi
senyawa fenolik untuk menghambat penggunaannya sebagai substrat polimerisasi (Gambar 4).

Gambar 4: Pengurangan polimerisasi lignin dan peningkatan sakarifikasi melalui rekayasa protein
O-metil transferase (OMTs). (A) Dengan menggunakan studi komputasi, asam amino di situs aktif
enzim monolignol 4-O-metil transferase (OMT) diidentifikasi dan mengalami mutagenesis berulang
untuk mendapatkan enzim bermutasi (OMTm). (b) Pengkodean gen untuk OMTm diekspresikan
dalam tanaman a dari promotor spesifik sel ekspansi (pPAL). OMTm memetilasi bagian fenolik
lignin yang menghambat polimerisasi lebih lanjut [15]. pPAL: promotor PHENYLALANINE
AMMONIA LYASE.
 Pabrik yang dimodifikasi dengan OMT yang direkayasa menghasilkan etanol hingga 40% lebih
banyak daripada tanaman tipe liar [15]. Selanjutnya, menggunakan rekayasa protein, Yang et al.
[75] menyaring dan membuat protein chimeric yang menggabungkan domain pengikat karbohidrat
dan domain pengikat besi. Dengan cara ini, protein chimeric menangkap besi dan memekatkannya
secara in vivo di dinding sel di mana ia bertindak sebagai katalis organik untuk sakarifikasi.

Rekayasa protein adalah alat bioteknologi inovatif yang baru-baru ini digunakan untuk memodulasi
sintesis lignin. Caietal. [15] menghambat polimerisasi lignin dengan mengekspresikan enzim
monolignol 4 O metil transferase (OMT) di Populus. Urutan dari OMT yang digunakan adalah
varian buatan yang diperoleh oleh mutagenesis saturasi iteratif dari beberapa pabrik OMT dengan
kapasitas dan aktivitas katalitik yang berbeda [74]. Metode ini menurunkan pengujian efek
substitusi asam amino di situs aktif untuk mendapatkan aktivitas baru, dalam hal ini, metilasi
senyawa fenolik untuk menghambat penggunaannya sebagai substrat polimerisasi (Gambar 4).
Tanaman yang dimodifikasi dengan OMT yang direkayasa menghasilkan etanol hingga 40% lebih
banyak daripada tanaman jenis liar [15]. Selanjutnya, menggunakan rekayasa protein, Yang et al.
[75] menyaring dan membuat protein chimeric yang menggabungkan domain pengikat karbohidrat
dan domain pengikat besi. Dengan cara ini, protein chimeric menangkap besi dan memekatkannya
secara in vivo di dinding sel di mana ia bertindak sebagai katalis organik untuk sakarifikasi.

Alternatif lain yang dieksplorasi adalah kontrol enzimatik dari ekspansi sel. Sebelumnya
disebutkan, pabrik memiliki strategi alokasi karbon yang dapat dianggap konservatif, yaitu, tidak
mengekspresikan potensi penuh mereka untuk meningkatkan pertumbuhan untuk menjaga cadangan
energi yang melimpah ketika dihadapkan dengan tekanan yang tidak terduga. Gibberellic acid (GA)
adalah hormon aphyto yang terutama mengatur pemanjangan sel pada tanaman dan, sebagai
konsekuensinya, karbon dan komitmen energi dalam proses [32]. Dengan pengetahuan ini, Do et al.
[76] secara konstitusional mengekspres gen gibberellin 20 oxidase (GA20Ox) jagung, yang
mengkode enzim biosintesis GA, dalam rumput bioenergi P. virgatum. Tanaman berlipat ganda
dalam berat kering. Ketika homolog gen ini diekspresikan menggunakan promotor spesifik xilem,
biomassa batang tiga kali lipat dalam Populus [77]. Dalam kedua laporan ini, penulis tidak menguji
efek pada penghitungan kembali biomassa terhadap sakarifikasi; Namun, mungkin diharapkan
bahwa peningkatan biomassa akan meningkatkan hasil etanol kultivar ini.

Gambar 3: Peningkatan sakarifikasi dinding sel dengan menggunakan hilangnya fungsi latar
belakang genetik dan pelengkap oleh ekspresi spesifik jaringan. (a) Tumbuhan tipe liar memiliki
dinding sel dengan kandungan lignin yang tinggi, sifat biomekanis yang optimal, dan pembalikan
ke sakarifikasi. (b) Hilangnya fungsi mutan (gugurnya T-DNA, redinsersi) dari glukosil transferase
IRX9 telah menghancurkan sel-sel vaskular dengan bio sel optimal sifat mekanik. (c) Ekspresi
IRX9 di atas latar belakang mutan di bawah kendali promotor spesifik axylem menyelamatkan sifat
bio mekanis dan meninggalkan sisa sel dengan kandungan lignin yang rendah, citrat yang lebih
jarang, dan sakarifikasi yang lebih baik [14].

Pendekatan baru adalah untuk mencari polimer karbohidrat tanaman lain dengan kekambuhan
rendah terhadap sakarifikasi. Salah satu pilihan adalah mixed linkage glucan (MLG); dengan
kompleksitas struktur sekunder yang rendah, mudah dikenai sakarifikasi oleh campuran enzim
komersial. Namun, akumulasi dalam sel tanaman menyebabkan dampak perkembangan yang parah.
Untuk mengurutkan kerugian ini, Vega-S´anchez et al. [78] dinyatakan dalam Arabidopsis, gen
biosintetik MLG, SELULOSA
SYNTHASE LIKEF (CSLF4) menggunakan promotor khusus penuaan; tanaman yang
ditransformasi memiliki transisi normal melalui tahap perkembangan dan menunjukkan
peningkatan sakarifikasi pada tahap akhir. Strategi ini akan memungkinkan penggunaan biomassa
senescing yang biasanya tetap sebagai limbah pertanian di ladang.

5.3.Keragaman Genetika Alam dan Mutagenesis.

Salah satu alat klasik ilmu agronomi yang dapat digunakan dalam penelitian tanaman bioenergi
adalah penyaringan keanekaragaman yang diinduksi atau alami untuk sifat-sifat yang menarik. Li et
al. [79] menginduksi keragaman genetik dalam beras oleh bahan kimia (EMS) atau mutagenesis
biologis (TDNA) dan menemukan mutan dalam latar belakang genetik elit dengan sakarifikasi
dinding sel yang lebih tinggi; ini membuka kemungkinan menggunakan organ yang tidak dapat
dimakan untuk produksi bioetanol. Menggunakan tanaman model rumput Brachypodium
distachyon, Marriott et al. [80] menciptakan populasi yang dimutasi secara kimia (azide) dan
mengisolasi serangkaian mutan dengan hasil sakarifikasi yang lebih tinggi berkisar antara 20 hingga
60% lebih banyak daripada tanaman jenis liar; Menariknya, mutan dengan hasil sakarifikasi rendah
juga diisolasi, menyediakan bahan genetik untuk percobaan yang bertujuan menemukan rute
biokimia baru untuk industri. Akhirnya, Stamatiou et al. [81] merancang penyaringan massal mutan
Arabidopsis yang diketahui dan baru dan mengisolasi satu set fenotipe dalam sakarifikasi yang
meningkat yang disebabkan oleh cacat pada enzim pengurai pati, pengangkutan auksin yang
dimodifikasi, dan mekanisme lain yang belum diidentifikasi.

Mikroalga juga merupakan organisme fotosintetik dan penggunaannya dalam industri bioenergi
telah difokuskan pada bahan baku biodiesel karena kandungan lemaknya yang tinggi. Namun,
penelitian terbaru menunjukkan bahwa, dalam keragaman genetik mikroalga, mekanisme akumulasi
karbon berbeda yang berbeda dari tanaman darat dan yang mungkin menarik di masa depan dalam
bioteknologi etanol ada [60,82]. Keragaman alami mekanisme dekonstruksi sendiri dinding sel yang
diekspresikan oleh tanaman juga harus menjadi perhatian dalam pengembangan teknologi,
misalnya, pembentukan aerenchyma selama perendaman, ada mobilisasi nutrisi dari daun tua dan
absisnya, dan perluasan dinding sel selama pematangan buah dan pertumbuhan organ. . Dalam
kegiatan ini, enzim baru yang mampu mendegradasi berbagai polimer tanaman dapat ditemukan
[83].

Aspek lain dari keanekaragaman genetik alami adalah pencarian promotor genetik yang mampu
mengarahkan ekspresi protein yang menarik dengan pola inovatif. Gagasan ini telah membuktikan
nilainya dalam bidang bioteknologi ini (lihat Enzim). Perluasan promotor yang tersedia akan
memperkaya kotak alat genetik untuk merancang kultivar dengan konteks sakarifikasi berbeda pada
tingkat jaringan, pengembangan, dan lingkungan. Ko et al. [84] melakukan hibridisasi microarray
lebar genom dengan jaringan Populus yang berbeda untuk membuat katalog promotor dan pola
minatnya di bidang sakarifikasi. Dalam rumput bioenergi, donund Arundo, penelitian yang
bertujuan untuk mengkarakterisasi ekspresi spesifik jaringan untuk perbaikan genetik sifat
sakarifikasi telah dilakukan [85].
Untuk mempelajari keragaman genetik dalam tebu, sebuah penelitian dilakukan dengan nenek
moyang evolusinya. Menggunakan histo chemistry,
analisis dinding sel, dan uji sakarifikasi, DeCarlietal. [86] menemukan bahwa kekambuhan adalah
karakteristik multigene dan tidak homogen di antara jaringan. Karakteristik lain yang belum
dipelajari dengan menggunakan alat molekuler tetapi yang menarik di industri bioetanol adalah
resistensi penginapan, suatu sifat yang tidak diinginkan pada rumput besar yang tumbuh di daerah
tropis. Rueda et al. [87] melakukan penyaringan kultivar rumput bioenergi Cenchrus purpureus
infield kondisi dan menemukan perbedaan genetik yang berbeda dalam resistensi penginapan. Latar
belakang genetik ini harus memadai untuk mengungkap dasar molekuler dari fenomena ini untuk
secara signifikan meningkatkan kualitas tanaman sebagai bahan baku untuk industri bioenergi.

6. Kesimpulan
Transisi dari ekonomi kita saat ini dengan konsumsi hidrokarbon yang tinggi ke masa depan dengan
dampak lingkungan yang rendah membutuhkan pengembangan teknologi baru seperti biofuel
etanol. Komponen biomassa tanaman seperti pati, selulosa, hemiselulosa, dan polimer karbohidrat
lainnya secara langsung berdampak pada kualitas yang diperlukan agar industri ini berhasil.
Memahami berbagai faktor genetik (enzim, TF, dan promotor) yang mengendalikan anabolisme dan
katabolisme polimer karbohidrat tanaman adalah langkah pertama menuju pengembangan
bioteknologi. Strategi yang ditinjau di sini didasarkan pada manipulasi molekuler dari distribusi
karbon pada tanaman, dan bukti konsepnya telah menunjukkan keberhasilan pada model tanaman.
Beberapa pengetahuan ini telah diuji dalam tanaman yang memiliki signifikansi industri
 Produksi Bioetanol dari Limbah Lignoselulosa
abstrak
Minyak bumi dan bahan bakar fosil lainnya telah menjadi sumber energi utama untuk jangka waktu
yang lama dalam kehidupan manusia. Melalui sumber energi ini, dunia telah menjadi entitas yang
berkembang dan melakukan industrialisasi. Namun, disepakati bahwa sumber energi tradisional ini
tidak dapat bertahan selamanya karena tidak dapat diperbarui. Banyak ahli memperkirakan bahwa
produksi minyak akan terus menurun, karena sumur minyak saat ini terus berkurang dan semakin
sedikit cadangan minyak yang ditemukan. Hal ini menyebabkan kenaikan harga mineral dan
akhirnya membuatnya tidak berkelanjutan secara ekonomi. Dengan demikian, sumber energi
terbarukan harus bersumber. Bioetanol; sumber energi terbarukan sedang diproduksi dari bahan
makanan seperti tebu, jagung dll. Namun, jika ini akan digunakan untuk produksi energi, dunia
akan memasuki krisis lain karena mereka akan diperebutkan untuk makanan dan energi. Limbah
lignoselulosa seperti jerami padi, jerami gandum, jerami jagung dan ampas tebu mengandung
molekul gula yang sama untuk produksi bioetanol sehingga dapat digunakan untuk menghasilkan
energi terbarukan menggunakan teknik fisik, kimia dan biologi yang tepat. Makalah ini bertujuan
untuk mengeksplorasi proses produksi bioetanol dari limbah lignoselulosa.

KESIMPULAN
Untuk memenuhi meningkatnya permintaan akan sumber energi yang akan menggantikan minyak
dan gas, produksi bioetanol ikut berperan. Meskipun gula dan pati (g etanol / substrat g) adalah
sumber terbaik untuk produksi bioetanol, mereka tidak dapat digunakan untuk produksi bioetanol di
seluruh dunia karena permintaan tinggi dan lebih sedikit jumlahnya. Limbah pertanian yang disebut
biomassa lignoselulosa adalah bahan baku potensial untuk produksi bioetanol. Mereka tumbuh
berlimpah dan tidak menuntut tanah, air, dan energi yang terpisah. Namun bahan baku, teknologi
konversi, proses hidrolisis, dan konfigurasi fermentasi berfungsi sebagai kekurangan produksi
bioetanol dari bahan lignoselulosa. Sebagai kesimpulan dapat dikatakan bahwa untuk memecahkan
masalah teknologi dari proses konversi, sains dan teknologi yang efisien harus diterapkan, sehingga
bioetanol dapat diproduksi secara memadai dalam waktu dekat untuk mengalahkan permintaan
energi saat ini dari menipisnya minyak dan gas.

Peran bioteknologi tanaman dalam produksi bioenergi

Tanaman telah lama digunakan oleh manusia sebagai sumber utama makanan, obat-obatan,
serat, dan energi. Seiring waktu, aplikasi yang beragam ini secara bertahap diperluas dalam
cakupan, skala, dan kecanggihannya, dengan kemajuan terbaru berasal dari pengembangan
bioteknologi, menghasilkan peningkatan produktivitas dan kualitas tanaman yang sebelumnya tidak
terbayangkan. Baru-baru ini, meningkatnya kekhawatiran tentang menurunnya pasokan global
minyak fosil dari mana kami memperoleh bahan bakar transportasi dan berbagai bahan baku kimia
telah menghasilkan minat baru dan mendesak dalam memperluas aplikasi tanaman sehingga
menghasilkan alternatif untuk bahan-bahan tersebut. Juga diperdebatkan bahwa menambah atau
mengganti bahan bakar dan petrokimia berbasis minyak bumi dengan produksi pertanian, ekuivalen
terbarukan menarik dari sudut pandang lingkungan. Sementara pengembangan solusi berbasis
tanaman untuk tantangan ini mencakup seleksi dan pemuliaan tanaman tradisional, bersama dengan
riset aplikasi, kami juga mengantisipasi 'investasi' yang signifikan oleh bioteknologi tanaman
molekuler. Memang, bioteknologi tanaman mungkin terbukti menjadi alat penting dalam
mengembangkan tanaman dengan sifat-sifat baru untuk digunakan dalam produksi biofuel
transportasi dan fitokimia yang paling efisien.
Energi kimia yang cukup besar yang terkandung dalam biomassa tanaman dipanen dari
berbagai jenis (kayu, minyak biji, batang limbah dan dedaunan dll) telah lama digunakan sebagai
sumber energi termal, mekanik dan listrik yang berguna melalui konversi yang bergantung pada
proses sederhana ' pembakaran eksternal '. Dengan demikian ada sedikit keraguan bahwa, secara
teoritis, tanaman dapat membuktikan menjadi sumber energi yang produktif untuk kebutuhan
transportasi saat ini. Namun, tantangan yang disajikan dalam menambah minyak bumi untuk
kegunaan utamanya dalam transportasi modern adalah tantangan yang besar, karena aplikasi ini
sangat bergantung pada konversi bahan kimia menjadi energi mekanik dalam proses 'pembakaran
internal' yang hanya kompatibel dengan bahan bakar cair atau gas (percikan api). pengapian,
pengapian kompresi dan mesin turbin). Oleh karena itu, penyebaran biomassa tanaman sebagai
biofuel transportasi harus melibatkan tidak hanya produksi pertanian yang hemat biaya pada lahan
yang luas dengan input minimal, tetapi juga konversi kimia yang efisien menjadi senyawa fase cair
atau gas yang mempertahankan nilai kalori yang memadai dan sifat-sifat yang kompatibel dengan
mesin lainnya, dan yang sendiri siap diangkut (pipa atau diangkut dalam tangki).
Spesifikasi ini hanya akan dicapai melalui pengembangan dan optimalisasi serangkaian
karakteristik tanaman yang berkisar dari keseluruhan sifat 'agronomi' (kebiasaan tumbuh,
kompatibilitas dengan metode produksi dan panen, toleransi stres, efisiensi input, hasil, dll.), untuk
modifikasi tingkat molekul dalam konstituen seperti lignoselulosa yang akan memastikan kinerja
optimal dalam proses konversi pascapanen, dan mungkin ada atau tidak adanya metabolit sekunder
tertentu yang mempengaruhi kinerja produk akhir. Tujuan yang sangat menarik adalah
pengembangan tanaman yang dapat ditanam untuk keperluan ini di tanah yang saat ini tidak
digunakan untuk makanan, sehingga menghindari persaingan antara produksi pangan dan energi.
Mengingat keragaman dan urgensi modifikasi penting ini, bioteknologi tanaman tentunya memiliki
peran besar dalam pengembangan tanaman 'biofuel' yang sukses, maka pilihan kami atas topik ini
untuk Edisi Khusus Kedua dari Jurnal Bioteknologi Tanaman.
Terbitan khusus pertama dari Plant Biotechnology Journal diterbitkan pada Mei 2009. Para
kontributornya meninjau kemajuan dalam analisis single nucleotide polymorphism (SNP) (Henry
dan Edwards, 2009), sebuah teknologi yang dapat diterapkan untuk pengembangan pabrik untuk
semua aplikasi. Edisi Khusus kedua ini menampilkan aplikasi bioteknologi tanaman dalam
pengembangan tanaman yang akan menghasilkan biofuel. Masalah yang dibahas termasuk
manipulasi biosintesis komponen karbohidrat dan lignin dari biomassa tanaman dan teknologi yang
tersedia untuk konversi biomassa tanaman menjadi bahan bakar termasuk 'dalam produksi enzim'
planta untuk membantu konversi ini. Kemajuan dalam mengembangkan pabrik untuk digunakan
dalam produksi produk bernilai tinggi akan menjadi subjek Edisi Khusus di masa depan.

Produksi Bioetanol Rumput Laut: Tinjauan Seleksi Proses Hidrolisis dan Fermentasi
Abstrak:
Penipisan yang cepat dan masalah lingkungan yang terkait dengan penggunaan bahan bakar fosil
telah menyebabkan pengembangan luas biofuel seperti bioetanol dari rumput laut. Namun, prospek
jangka panjang dari produksi bioetanol rumput laut tergantung pada pemilihan proses dalam tahap
hidrolisis dan fermentasi karena efeknya yang terbatas pada hasil etanol. Tinjauan ini
mengeksplorasi faktor-faktor yang mempengaruhi tahap hidrolisis dan fermentasi produksi
bioetanol rumput laut dengan penekanan pada efisiensi proses dan aplikasi berkelanjutan.
Kandungan karbohidrat rumput laut yang paling penting untuk pemilihan substrat produksi etanol
adalah 52 ± 6%, 55 ± 12% dan 57 ± 13% untuk rumput laut hijau, coklat dan merah. Pembentukan
inhibitor dan selektivitas polisakarida ditemukan menjadi hambatan utama yang mempengaruhi
efisiensi asam encer dan hidrolisis enzimatik, masing-masing. Persiapan enzim saat ini digunakan,
dikembangkan untuk biomassa berbasis pati dan lignoselulosa tetapi tidak untuk rumput laut, yang
berbeda dalam komposisi dan struktur polisakarida. Juga, identifikasi organisme fermentasi yang
mampu mengubah gula monomer heterogen dalam rumput laut adalah faktor utama yang
membatasi hasil etanol selama tahap fermentasi dan bukan pemilihan jalur SHF atau SSF. Ini telah
menghasilkan variasi dalam hasil bioetanol, mulai dari 0,04 g / g DM hingga 0,43 g / g DM.

Kesimpulan dan Perspektif

Penelitian tentang produksi bioetanol dari rumput laut telah dijelaskan sebagai teknologi yang
sangat menjanjikan. Memang, proses hidrolisis dan fermentasi masih memiliki tantangan, yang
perlu diselesaikan tetapi prospeknya tetap lebih besar dibandingkan dengan tanaman darat dan
residu pertanian. Pemilihan proses hidrolisis untuk bioetanol rumput laut masih terbatas pada
metode hidrolisis asam dan enzimatik konvensional. Namun, metode konvensional ini saling
melengkapi untuk menghidrolisis rumput laut secara efisien. Alternatif yang kurang intensif energi,
biaya efektif dan tidak beracun masih diperlukan untuk secara efektif
melengkapi atau menggantinya. Kombinasi berkelanjutan dari berbagai proses hidrolisis adalah
perhatian utama. Tahap fermentasi terbatas dalam efisiensi, terutama, dengan mengidentifikasi
organisme fermentasi yang mampu mengubah heksosa, pentosa dan gula alkohol dari rumput laut
menjadi etanol dan tidak, pemilihan antara jalur SHF dan SSF. Perbedaan marjinal dalam hasil
etanol rumput laut antara SHF dan SSF saat ini dilaporkan. Pemanfaatan hanya fraksi karbohidrat
selama proses hidrolisis dan fermentasi dari seluruh biomassa rumput laut menghasilkan generasi
besar limbah organik (protein, lipid, polisakarida yang tidak terhidrolisis, monosakarida yang tidak
difermentasi) terutama pada skala komersial. Nilai ekonomi rumput laut untuk produksi bioetanol
dapat dimaksimalkan menggunakan pendekatan biorefery untuk pemrosesan biomassa. Dalam
pendekatan ini, selain dari produksi bioetanol, beberapa fraksi organik dan anorganik dari rumput
laut dapat dimanfaatkan melalui, ekstraksi hidrokoloid, pencernaan anaerob, oksidasi substrat
menjadi bioelektrik dan aplikasi pertanian (amandemen tanah dan persiapan pakan ternak).
 Ulasan Produksi Bioetanol Generasi Kedua dari Residual Biomass
Abstrak
Dalam konteks perubahan iklim dan menipisnya bahan bakar fosil, ada kebutuhan besar akan
alternatif untuk minyak bumi di sektor transportasi. Tinjauan ini memberikan tinjauan umum
tentang produksi bioetanol generasi kedua, yang dibedakan dari generasi pertama dan generasi
berikutnya dari bahan bakar nabati dengan penggunaan biomassa lignoselulosa sebagai bahan baku.
Komponen struktural dari biomassa lignoselulosa seperti selulosa, hemiselulosa dan lignin,
disajikan bersama dengan langkah unit teknologi termasuk pretreatment, hidrolisis enzimatik,
fermentasi, penyulingan dan dehidrasi. Tujuan dari langkah pretreatment adalah untuk
meningkatkan luas permukaan karbohidrat yang tersedia untuk sakarifikasi enzimatik, sambil
meminimalkan kandungan inhibitor. Melakukan hidrolisis enzimatik melepaskan gula yang dapat
difermentasi, yang dikonversi oleh katalis mikroba menjadi etanol. Hidrolisat yang diperoleh
setelah pretreatment dan hidrolisis enzimatik mengandung spektrum gula yang luas, terutama
glukosa dan xilosa. Mikroorganisme hasil rekayasa genetika diperlukan untuk melakukan ko-
fermentasi. Kelebihan inhibitor berbahaya dalam hidrolisat, seperti asam organik lemah, turunan
furan dan komponen fenol, dapat dihilangkan dengan detoksifikasi sebelum fermentasi. Sakarifikasi
yang efektif lebih lanjut membutuhkan penggunaan hemiselulase eksogen dan enzim selulolitik.
Spesies konvensional ragi penyuling tidak dapat memfermentasi pentosa menjadi etanol, dan hanya
beberapa mikroorganisme alami, termasuk spesies ragi seperti Candida shehatae, Pichia
(Scheffersomyces) stipitis, dan Pachysolen tannophilus, memetabolisme xylose menjadi etanol.
Hidrolisis dan fermentasi enzimatik dapat dilakukan dalam beberapa cara: dengan sakarifikasi dan
fermentasi terpisah, sakarifikasi dan fermentasi simultan atau bioproses secara konsolidasi.
Mikroorganisme pentosa-fermentasi dapat diperoleh melalui rekayasa genetika, dengan
memasukkan gen pengkode xilosa ke dalam metabolisme mikroorganisme terpilih untuk
mengoptimalkan penggunaan xilosa yang terakumulasi dalam hidrolisat.

Energi crops= tanaman energi

industrial waste= libah industri
agricultural waste= limbah pertanian
woody waste and forest biomass= limbah kayu dan biomassa hutan
wastes from greean area= limbah dari area hijau
municipal solid wastes= limbah padat kota

KESIMPULAN
Mengubah sektor transportasi dari minyak bumi dan bensin ke sumber energi yang lebih
berkelanjutan, terbarukan dan ramah lingkungan seperti bioetanol generasi kedua adalah salah satu
tantangan besar dalam bidang teknik. Produksi bioetanol lignoselulosa memerlukan perbaikan
terkait dengan tahap pra-perlakukan, hidrolisis enzimatik dan fermentasi, untuk meningkatkan
efektivitas biaya produksi etanol dan untuk melakukan transisi dari laboratorium ke skala industri /
komersial. Salah satu tujuan paling penting adalah untuk meningkatkan efisiensi proses fermentasi
ke titik di mana semua gula (pentosa dan heksosa) dilepaskan selama tahap pretreatment dan
hidrolisis difermentasi menjadi etanol. Hambatan teknis untuk produksi biofuel generasi kedua
meliputi komposisi variabel biomassa, generasi inhibitor selama perawatan presakarifikasi,
penghambatan produk akhir, stres osmotik dan oksidatif, dan akumulasi etanol. Namun, kemajuan
sedang dibuat dan hambatan teknis ini diharapkan dapat diatasi
dalam waktu dekat, mengoptimalkan jalur biokimia untuk produksi bioetanol cair generasi kedua.

Modifikasi Genetik Saccharomyces cerevisiae untuk Produksi Etanol dari Fermentasi Pati
Abstrak
Ada permintaan besar untuk mengembangkan teknologi baru untuk sumber energi alternatif karena
tingginya biaya minyak bumi dan produk sampingannya, menipisnya sumber bahan bakar yang
tidak terbarukan, dan untuk menghilangkan kerugian lokasi geopolitik dan pencemaran lingkungan
yang disebabkan oleh tingginya kadar karbon dioksida melepaskan. Ilmu pengetahuan sedang
berusaha untuk memenuhi permintaan ini dan karena teknik biologi molekuler telah berkembang,
alat rekayasa genetika telah disajikan sebagai solusi yang menjanjikan di masa depan dalam bentuk
mengoptimalkan proses fermentasi untuk meningkatkan hasil etanol dari berbagai sumber karbon
seperti pati. Karena Saccharomyces cerevisiae secara alami tidak dapat memfermentasi pati, maka
secara genetik dapat dimanipulasi dan dimodulasi untuk meningkatkan produksi bahan bakar dari
bahan bertepung dan jumlah biaya yang diperlukan untuk memproduksi etanol akan berkurang
dengan manipulasi ini. Modifikasi umum pada S. cerevisiae termasuk ekspresi gen spesifik untuk
mendapatkan sifat baru atau meningkatkan jalur yang ada. Tinjauan ini bertujuan untuk
memperoleh status saat ini dari produksi etanol melalui teknik alternatif menyeluruh dari pati
menggunakan aplikasi rekayasa genetika saat ini dan untuk memberikan arahan lebih lanjut untuk
fermentasi throughput tinggi menggunakan strain S. cerevisiae yang dimodifikasi secara genetik.

pengangkatan biaya energi dan berkontribusi terhadap pemanasan global karena penggunaan
berlebihan sumber energi berbasis minyak bumi; karenanya permintaan untuk bahan bakar turunan
biomassa yang terbarukan telah meningkat dalam beberapa tahun terakhir. Produksi sumber-sumber
alternatif semacam itu, yang juga dapat membantu membangun pasokan energi yang berkelanjutan
dan terbarukan, telah dipopulerkan. Beberapa negara telah menggunakan biofuel generasi pertama,
termasuk etanol, sebagai sumber energi primer sehingga produksi biofuel di seluruh dunia mencapai
106 miliar liter pada 2011 dan diperkirakan mencapai 155 miliar liter pada 2020 [1]. Bahan baku
yang kaya akan gula biasanya digunakan untuk produksi etanol melalui proses fermentasi. Sumber
gula utama untuk produksi etanol disajikan pada Gambar 1. Meskipun semua bahan bakar etanol
diperoleh dari glukosa jagung di AS [2] dan sukrosa di Brasil [3], bahan bertepung telah diterima
sebagai sumber biomassa terbarukan utama untuk produksi etanol karena dengan biaya rendah dan
kelimpahan [4]. Dalam baris ini, gandum jagung dan umbi-umbian dari tanaman bertepung
digunakan untuk produksi etanol di Amerika Utara, Eropa, dan negara-negara tropis [5].
Fermentasi Pati
Pati adalah sumber karbon yang murah, terbarukan, dan dapat difermentasi [17] ditemukan di
semua tanaman hijau dalam berbagai jumlah. Ada sekitar 70% kandungan pati dalam jagung,
triticale dan singkong [18]. Molekul pati umumnya dikaitkan dengan lipid, protein dan asam lemak,
dan jenis hubungan menentukan proses pra-perawatan yang akan diterapkan sebelum fermentasi
[19]. Pati terdiri dari monomer glukosa yang bergabung dengan ikatan glikosidik (rantai ikatan D-
glukopiranosa D-glukopiranosa yang terhubung dengan glucan) [18]. Ini terutama terdiri dari
amilosa polimer glukosa linier (20-30%) dan amilopektin bercabang tinggi (70-80%) (Gambar 2)
[20]. Amilosa memiliki sebagian besar α-1,4-D-glukopiranranosa terkait dan rantai D-
glukopiranranosa α-1,6 terkait (sekitar 0,3% hingga 0,5%), dan membentuk molekul fleksibel yang
mengarah pada interaksi dengan asam lemak, alkohol, dan yodium [21]. Amilopektin adalah helix
yang sangat bercabang seperti molekul terstruktur yang terdiri dari rantai α-1,4-D-glukopiranosa
[22]. Amilosa dan amilopektin, ditemukan dalam struktur pati dengan laju yang berbeda,
membentuk struktur yang saling berhubungan yang secara langsung menentukan karakteristik
kimiawi dari biomassa dan hasil fermentasi [23].

Kesimpulan dan Perspektif Masa Depan

Harga energi tumbuh cepat, terutama karena menipisnya sumber minyak bumi. Oleh karena itu,
sumber energi alternatif yang diperoleh dari matahari, angin dan biomassa menjadi menarik baru-
baru ini. Etanol, diproduksi oleh fermentasi dari biomassa, sebagai energi alternatif yang
menjanjikan adalah sumber yang dapat diangkut dan menguntungkan secara ekonomi. Selain itu,
produksi etanol dari berbagai bahan baku seperti pati mempertahankan potensi yang cukup besar
karena ketersediaan, aksesibilitas dan biaya yang relatif rendah dibandingkan dengan bahan baku
berbasis sukrosa dan glukosa. Teknologi DNA rekombinan menawarkan peluang berharga untuk
proses bioproses konsolidasi fermentasi biomassa. Sampai saat ini, mengubah jalur baru dan
ekspresi berlebih dari satu atau sekelompok enzim belum mengambil fermentasi biomassa melalui
S. cerevisiae ke tingkat yang memuaskan untuk arena industri. Meskipun ada ratusan penelitian
yang mengklaim produksi etanol lebih tinggi dari bahan bertepung, sebagian besar telah diuji pada
skala laboratorium saja dan tidak pada skala besar (Tabel 1). Beberapa strain ragi laboratorium telah
terbukti menunjukkan kapasitas fermentasi pati yang luar biasa dan menghasilkan jumlah etanol
yang tinggi, tetapi mentransfer teknologi rekayasa ke strain S. cerevisiae industri tetap tidak
mencukupi. Mereka tidak nyaman untuk aplikasi skala besar yang diulang karena stabilitas
modifikasi yang rendah, biaya proses yang tinggi, produksi etanol yang rendah dan laju fermentasi.
Meskipun menggunakan amilase dan glukoamilase eksogen tampaknya meningkatkan hasil total,
mengembangkan strain ragi yang cukup untuk seluruh proses fermentasi adalah hal yang
diinginkan. Amilase dan glukoamilase baru dari sumber yang berbeda harus disajikan dan diselidiki
untuk aktivitasnya (sendiri atau dalam kombinasi) dan kompatibilitas dengan noda ragi industri.
Para peneliti harus terus melakukan studi pada dua bidang utama; hidrolisis yang efisien dan
fermentasi biomassa, yang menghasilkan tingkat produksi etanol yang tinggi dan kombinasi aplikasi
bioproses yang ditingkatkan dengan alat rekayasa genetika dalam pandangan produktivitas dan
proses skala besar.

Etanol untuk Masa Depan Energi Berkelanjutan

Bahan bakar fosil (minyak, batu bara, dan gas) mewakili 80,1% dari total pasokan energi dunia,
energi nuklir 6,3%, dan energi terbarukan 13,6%. Bagian terbesar adalah biomassa tradisional
(8,5% dari total energi primer), yang digunakan terutama dalam cara-cara yang tidak efisien, seperti
dalam tungku masak primitif berpolusi tinggi yang digunakan oleh populasi pedesaan miskin, yang
dalam banyak kasus menyebabkan deforestasi.

Sejumlah strategi telah diadopsi oleh pemerintah di negara-negara industri dan lembaga keuangan
internasional untuk mendorong penggunaan "energi terbarukan baru," dan telah ada beberapa
keberhasilan, berdasarkan penggunaan keringanan pajak, subsidi, dan standar portofolio terbarukan
(RPS). Contohnya adalah pertumbuhan besar (lebih dari 35% per tahun, "meskipun" dari nilai dasar
rendah) untuk fotovoltaik angin dan matahari di negara-negara industri seperti Denmark, Jerman,
Spanyol, dan Amerika Serikat (4). Teknologi ini secara perlahan menyebar ke negara-negara
berkembang melalui beberapa strategi. Di negara-negara berkembang, contoh terbaik dari
pertumbuhan besar dalam penggunaan energi terbarukan diberikan oleh program etanol tebu di
Brasil. Saat ini, produksi etanol dari tebu di negara ini adalah 16 miliar liter (4,2 miliar galon) per
tahun, membutuhkan sekitar 3 juta hektar lahan. Kompetisi untuk lahan pertanian antara makanan
dan bahan bakar belum besar: Tebu mencakup 10% dari total lahan yang diolah dan 1% dari total
dan tersedia untuk pertanian di negara. Total tanaman tebu (untuk gula dan etanol) adalah 5,6 juta
hektar.
Produksi bioetanol dari tebu dapat direplikasi di negara lain tanpa kerusakan serius pada ekosistem
alami. Di seluruh dunia, sekitar 20 juta hektar digunakan untuk menanam tebu, sebagian besar
untuk produksi gula (5). Perhitungan sederhana menunjukkan bahwa memperluas program etanol
Brasil dengan faktor 10 (mis., Tambahan 30 juta hektar tebu di Brasil dan di negara-negara lain)
akan memasok etanol yang cukup untuk menggantikan 10% bensin yang digunakan di dunia. Area
daratan ini adalah sebagian kecil dari lebih dari 1 miliar hektar tanaman utama yang sudah dipanen
di planet ini.

Kurva pembelajaran etanol dalam

volume, membandingkan harga yang
dibayarkan kepada produsen etanol di
Brasil dengan harga bensin di pasar
internasional Rotterdam (6).

Evaluasi sumber daya biomassa tanaman yang tersedia untuk penggantian minyak
fosil

Abstak
Potensi tanaman untuk menggantikan minyak fosil dievaluasi dengan mempertimbangkan skala
produksi yang dibutuhkan, luas lahan yang dibutuhkan dan jenis tanaman yang tersedia. Tanaman
dengan hasil tinggi (50 ton⁄ha) yang memiliki efisiensi konversi tinggi (75%) akan membutuhkan
jejak lahan global sekitar 100 juta ha untuk menggantikan konsumsi minyak saat ini (2008).
Tanaman dengan hasil yang lebih rendah atau lebih sedikit konversi akan membutuhkan jejak tanah
yang lebih besar. Domestikasi spesies baru sebagai tanaman energi khusus mungkin diperlukan.
Analisis sistematis tanaman yang lebih tinggi dan penggunaannya saat ini dan potensi disajikan.
Bioteknologi tanaman menyediakan alat untuk meningkatkan prospek penggantian minyak dengan
biomassa turunan tanaman dengan meningkatkan jumlah biomassa yang diproduksi per unit luas
lahan dan meningkatkan komposisi biomassa untuk meningkatkan efisiensi konversi menjadi
biofuel dan biomaterial. Pilihan untuk produksi coproduct bernilai tinggi dan ekspresi alat bantu
pengolahan seperti enzim di pabrik dapat menambah nilai lebih lanjut untuk tanaman sebagai
sumber daya bioenergi.

Pertanyaan utama yang perlu kita tanyakan adalah berapa banyak lahan yang kita butuhkan untuk
menanam tanaman untuk menggantikan minyak. Konsumsi minyak dunia pada 2008 adalah sekitar
3930 juta ton. Luas lahan yang dibutuhkan dapat dihitung jika kita mengasumsikan tingkat efisiensi
yang berbeda dalam mengkonversi biomassa tanaman menjadi biofuel (setara minyak) pada setiap
hasil biomassa per hektar. Tabel 1 menunjukkan bahwa area yang dibutuhkan, dalam satu ekstrem,
adalah lebih dari 3000 juta ha dengan hasil panen 5 ton per hektar dan efisiensi konversi 25% atau,
pada ekstrem lain, sekitar 100 juta ha pada 50 ton per hektar dan 75 % efisiensi konversi.
Kebutuhan untukmenghasilkan makanan dan produk lain dari tanaman dan kebutuhan untuk
memesan tanah untuk konservasi keanekaragaman hayati menunjukkan bahwa jejak tanah
minimum yang mungkin diinginkan untuk produksi energi dari tanaman.
Pertanyaan terakhir adalah berapa banyak lahan yang tersedia untuk menanam tanaman ini. Yang
terpenting, kita perlu mempertimbangkan persaingan dengan lahan yang dapat digunakan untuk
produksi pangan atau konservasi alam (keanekaragaman hayati). Jumlah lahan subur di dunia telah
diperkirakan lebih dari 4000 Mha. Jumlah lahan yang tersedia menurut benua diberikan pada Tabel
2. Sebagian besar lahan ini penting untuk konservasi hutan atau keanekaragaman hayati dan tidak
tersedia untuk pertanian. Area sebenarnya dari tanah subur jauh lebih kecil. Dimungkinkan untuk
mengembangkan tanaman energi yang cocok untuk lingkungan produksi yang saat ini tidak
dianggap termasuk tanah yang subur. Namun, masalah utama adalah berapa banyak tanah yang
akan dibutuhkan dan sejauh mana ini
akan bersaing dengan potensi penggunaan lahan lainnya. Penggunaan situs-situs dengan hasil tinggi
mungkin menarik jika sebagai akibatnya jejak tanah bisa kecil (Tabel 1). Estimasi kelayakan
produksi berapapun jumlah biomassa diperumit oleh kesulitan mendefinisikan lahan subur. Banyak
lahan yang belum diklasifikasikan sebagai subur telah digunakan untuk pertanian dengan
menambahkan air (irigasi) atau nutrisi (pupuk) ke lahan yang tidak subur. Spesies yang cocok untuk
produksi di luar kisaran lingkungan yang digunakan untuk tanaman pangan utama juga dapat
meningkatkan jumlah lahan yang mungkin tersedia. Pilihan spesies sangat memengaruhi potensi
produksi biomassa di lokasi mana pun dan wilayah analisis terperinci menurut wilayah diperlukan
untuk mencocokkan lahan yang tersedia dengan spesies tanaman yang tersedia.