REVISI 5 Kurnia Nada

PENGARUH EKSTRAK DAUN PEGAGAN (Centella asiatica) TERHADAP
JUMLAH OSTEOBLAS PADA PROSES PENYEMBUHAN LUKA

PENCABUTAN GIGI
SKRIPSI
Oleh :
Kurnia Nada Yulian Saputri
NIM 181610101002
FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI
UNIVERSITAS JEMBER
2022
i
PENCABUTAN GIGI
SKRIPSI
diajukan guna melengkapi tugas akhir dan memenuhi salah satu syarat untuk
menyelesaikan Program Studi Kedokteran Gigi (S1) dan mencapai gelar Sarjana
Kedokteran Gigi
Oleh :
NIM 181610101002
FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI
UNIVERSITAS JEMBER
2022
PERSEMBAHAN
Skripsi ini saya persembahkan kepada:

1. Allah SWT atas ijin dan kehendak-Nya, saya dapat menyelesaikan tugas akhir
ini dengan lancar
2. Ibunda tercinta Dwi Titik Mursini dan Bapak Moedjianto serta kakak saya
Ika Rizki Kurniawati atas segala hal terbaik yang pernah diberikan, nasehat,
motivasi, doa serta rasa cintanya yang tidak pernah berhenti hingga saat ini
3. Guru-guru dari TK hingga SMA dan Dosen-dosen Fakultas Kedokteran Gigi
Universitas Jember yang telah memberikan ilmu yang sangat bermanfaat
4. Sahabat-sahabat yang selalu menemani dan membantu penulis dalam
menyelesaikan tugas akhir ini
5. Almamater Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Jember.
i
MOTTO
PERNYATAAN
Saya yang bertanda tangan dibawah ini:

Nama : Kurnia Nada Yulian Saputri
NIM : 181610101002
menyatakan dengan sesungguhnya bahwa karya ilmiah yang berjudul
“Pengaruh Ekstrak Daun Pegagan (Centella Asiatica) terhadap Jumlah Osteoblas
pada Proses Penyembuhan Luka Pencabutan Gigi” adalah benar-benar hasil karya
sendiri, kecuali kutipan yang telah saya sebutkan sumbernya, belum pernah
diajukan pada institusi manapun, dan bukan karya jiplakan. Saya bertanggung
jawab atas keabsahan dan kebenaran isinya sesuai dengan sikap ilmiah yang harus
dijunjung tinggi.
Demikian pernyataan ini saya buat dengan sebenarnya, tanpa ada tekanan
dan paksaan dari pihak manapun serta bersedia mendapat sanksi akademik jika
ternyata dikemudian hari pernyataan ini tidak benar.
Jember, Maret 2022

Yang menyatakan,

181610101002
iii
SKRIPSI

PENCABUTAN GIGI
Oleh :
NIM 181610101002
Pembimbing:
Dosen Pembimbing Utama : Dr. drg. Supriyadi, M.Kes

Dosen Pembimbing Pendamping : Dr. drg. Izzata Barid, M.Kes
PENGESAHAN
Skripsi berjudul “Pengaruh Ekstrak Daun Pegagan (Centella Asiatica) terhadap

Jumlah Osteoblas pada Proses Penyembuhan Luka Pencabutan Gigi” telah diuji
dan disahkan oleh Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Jember pada:
hari, tanggal :
tempat : Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Jember
Penguji Ketua Penguji Anggota
drg. Zainul Cholid, Sp.BM drg. Nadie Fatimatuzzahro, MDSc

NIP. 197105141998021001 NIP. 198204242008012022
Pembimbing Utama Pembimbing Pendamping
Dr. drg. Supriyadi, M.Kes Dr. drg. Izzata Barid, M.Kes

NIP. 197009201998021001 NIP. 196805171997022001
v
RINGKASAN
PRAKATA
vii
DAFTAR ISI
PERSETUJUAN PEMBIMBING .............................................................................
DAFTAR ISI ........................................................................................................ viii
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. xi
DAFTAR TABEL ................................................................................................. xii
BAB 1. PENDAHULUAN ..................................................................................... 1
1.1.Latar Belakang ......................................................................................... 1
1.2.Rumusan Masalah .................................................................................... 3
1.3.Tujuan Penelitian ..................................................................................... 3
1.4.Manfaat Penelitian ................................................................................... 3
BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................ 5
2..1. Pencabutan Gigi ..................................................................................... 5
2.1.1. Komplikasi Pencabutan Gigi ........................................................ 6
2.2. Penyembuhan Luka ................................................................................ 7
2.3. Penyembuhan Luka Pencabutan Gigi ................................................... 18
2.4. Tanaman Pegagan (Centella asiatica) .................................................. 20
2.4.1. Klasifikasi Tanaman Pegagan ................................................... 22
2.4.2. Deskripsi dan Morfologi .................................................................
2.4.3. Persyaratan Tumbuh .......................................................................
2.4.4. Kandungan Bahan Bioaktif ........................................................ 23
2.5. Ekstraksi ............................................................................................... 24
2.6. Kerangka Konsep Penelitian................................................................. 27
2.7. Penjelasan Kerangka Konsep Penelitian .............................................. 28
2.8. Hipotesis ............................................................................................... 28
BAB 3. METODE PENELITIAN......................................................................... 29

3.1.Jenis dan Rancangan Penelitian ............................................................. 29
3.2.Tempat dan Waktu Penelitian ................................................................ 29
3.2.1.Tempat Penelitian ........................................................................ 29
3.2.2.Waktu Penelitian ......................................................................... 29
3.3.Sampel Penelitian .................................................................................. 30
3.3.1.Sampel ......................................................................................... 30
3.3.2.Besar Sampel ............................................................................... 30
3.4.Variabel Penelitian................................................................................. 31
3.4.1.Variabel Bebas ............................................................................. 31
3.4.2.Variabel Terikat ........................................................................... 31
3.4.3.Variabel Terkendali .........................................................................
3.5.Definisi Operasional .............................................................................. 31
3.5.1.Ekstrak Daun Pegagan ................................................................. 31
3.5.2.Sel Osteoblas ............................................................................... 31
3.5.3.Jumlah Sel Osteoblas .......................................................................
3.5.4.Gambaran Histopatologi ..................................................................
3.6.Alat dan Bahan Penelitian ..................................................................... 32
3.6.1.Alat Penelitian ............................................................................. 32
3.6.2.Bahan Penelitian .......................................................................... 33
3.7.Prosedur Penelitian ................................................................................ 34
3.7.1.Persiapan Hewan Coba ................................................................ 34
3.7.2.Pembuatan Ekstrak Daun Pegagan .............................................. 34
3.7.3.Pengelompokan dan Perlakuan Hewan Coba .............................. 35
3.7.4.Pembuatan Sediaan Jaringan ....................................................... 37
3.7.5.Pengamatan dan Perhitungan Jumlah Sel Osteoblas ................... 40
ix
3.7.6.Analisis Data ............................................................................... 40
3.8.Diagram Alur Penelitian ........................................................................ 41
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 50

DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Tiga tahap penyembuhan luka............................................................. 8

Gambar 2.2 Fase inflamasi terjadi segera setelah terjadinya trauma. ................... 12
Gambar 2.3 Fase proliferasi .................................................................................. 14
Gambar 2.4 Fase maturasi yang terjadi mulai hari ke-21 sampai sekitar 1 tahun. 18
Gambar 2.5 Tanaman Pegagan (Centella asiatica)............................................... 21
Gambar 2.6 Bentuk dan warna daun 12 aksesi pegagan ....................................... 23
xi
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Sitokin yang berperan dalam Fase Inflamasi ............................................... 11

BAB 1. PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang

Pencabutan gigi merupakan tindakan yang paling sering dilakukan baik oleh
dokter gigi umum maupun spesialis bedah mulut dan maksilo fasial. Penelitian
sebelumnya menyebutkan bahwa angka pencabutan gigi di Rumah Sakit Gigi dan
Mulut (RSGM) Universitas Jember mengalami peningkatan dari tahun ke tahun
(Fithri, 2017). Berdasarkan data Riskesdas Nasional tahun 2018, pencabutan gigi
menduduki peringkat tertinggi dalam tindakan mengatasi masalah kesehatan gigi
dan mulut yaitu sebesar 7,9%. Kerusakan jaringan adalah hal yang pasti terjadi
bersamaan dengan tindakan pencabutan. Luka pada jaringan setelah proses
pencabutan gigi dapat menganggu fungsi pengunyahan dan sering menyebabkan
komplikasi.
Penatalaksanaan pada luka paska pencabutan gigi biasanya dilakukan
dengan menghilangkan rasa nyeri. Obat yang sering digunakan adalah golongan
obat AINs (Anti-inflamasi Non steroid) yang diberikan secara sistemik seperti
aspirin, ibuprofen, asam mefenamat dan obat yang diberikan secara topikal yang
terkenal di pasaran yaitu Alvogyl. Selain sebagai analgesik, Alvogyl juga
digunakan karena mengandung antiinflamasi. Pengobatan menggunakan obat
tersebut apabila diberikan dalam jangka waktu lama dapat menimbulkan efek
samping yaitu perdarahan gastrointestinal, lamanya waktu perdarahan, serta dapat
merusak fungsi ginjal. Selain itu, Alvogyl dikontraindikasikan pada pasien yang
memiliki riwayat reaksi alergi terhadap jenis anestesi prokain atau sensitivitas
terhadap senyawa iodin (Hapsari dan Kunti 2014). Meskipun Alvogyl terbukti
efektif, obat ini kurang diminati karena harganya yang relatif mahal. Dari uraian
tersebut, maka perlu dicari bahan alternatif lain dari bahan alam yang memiliki
fungsi yang sama yaitu mempercepat penyembuhan luka paska pencabutan gigi
(Kaya, dkk. 2011).
1
Salah satu bahan alam yang kurang dimanfaatkan oleh masyarakat tetapi
mempunyai potensi sebagai tanaman obat adalah Centella asiatica atau terkenal
dengan nama tumbuhan pegagan. Pegagan tumbuh liar dan kurang mendapat
perhatian. Saat ini daun pegagan lebih sering dimanfaatkan sebagai produk
kecantikan. Pegagan memiliki kandungan senyawa kimia seperti flavonoid,
alkanoid, triterpenoid, glikosida, tannin dan saponin (Zahara, E., dkk. 2018).
Flavonoid adalah senyawa hasil metabolisme sekunder yang dimanfaatakan
sebagai obat memiliki kasiat sebagai antioksidan, antibakteri, antiinflamasi, serta
antidiabetes (Alfaridz, 2018). Kandungan Senyawa alkaloid memiliki
kecenderungan untuk berperan dalam proses penguatan fibril kolagen dengan
mencegah kerusakan sel melalui sintesis DNA sehingga pertumbuhan jaringan
baru pada luka menjadi lebih cepat, padat, dan kuat. (Cahyani 2018). Senyawa
triterpenoid berfungsi sebagai antiviral, antiinflamasi, anti bakteri, sebagai
penghambat kolestrol dan sebgai antikanker (Balafif, 2013). Kandungan senyawa
daun pegagan selanjutnya adalah tanin. Fungsi tanin sebagai antimikroba dan
antioksiadan sehingga dapat berpengaruh terhadap proses penyembuhan luka.
Kandungan dari daun pegagan terakhir adalah saponin. Saponin merupakan
senyawa yang dapat berperan sebagai antiinflmasi serta antibakteri sehingga dapat
berperan dalam membantu percepatan penyebuhan luka. (Herani, 2017).
Pada penyembuhan luka pada soket gigi terdapat tahapan/fase terakhir yaitu
proses remodeling tulang. Proses remodeling tulang merupakan tahapan aktivitas
seluler yang terjadi secara siklik yang diperankan oleh sel osteoblas dan osteoklas.
aktivitas yang yang terjadi pada proses remodeling tulang adalah resorpsi tulang
lama oleh osteoklas dan formasi tulang baru oleh osteoblas. Pada keadaaan
normal proses respsorsi dan mineralisasi terjadi secara seimbang sehingga
kepadatan tulang tetep terjaga. Namun dalam keadaan terinflamasi, proses
resorpsi ini berlangsung lebih lama (Sihombing. 2012).
Dari uraian diatas, diperlukan suatu bahan yang mampu memperbaiki proses
resorpsi-aposisi tulang agar penyembuhan luka paska pencabutan gigi berjalan
lebih cepat. Kandungan antioksidan mampu menghambat aktivasi Receptor
Activator of Nuclear factor Kappa-B Ligand (RANKL) oleh Reactive Oxygen
Species (ROS). Hal ini selanjutnya mencegah osteoklastogenesis sehingga
diferensiasi sel osteoblast tetap berlanjut. Sedangkan kandungan antiinflamasinya
bekerja dengan cara menghambat sitokin pro-inflamasi sehingga asam arakidonat
mengalami penurunan. Penurunan asam arakidonat dapat menurunkan apoptosis
sel osteoblas (Kurniawati, dkk. 2020). Penelitian sebelumnya juga menunjukkan
bahwa dengan pemberian ekstrak Centella asiatica pada konsentrasi yang tepat
terjadi peningkatan osifikasi tulang dan penurunan ekspresi RANKL pada badan
larva zebrafish (Primihastuti D, dkk. 2018).
Berdasarkan uraian diatas, penulis tertarik untuk melakukan penelitian

tentang bagaimana efek ekstrak daun Centella asiatica dalam mempercepat
penyembuhan soket pencabutan gigi melalui peningkatan jumlah osteoblas. Pada
penelitian ini penulis menggunakan tikus putih (Rattus norvegicus) strain wistar
(Sihombing, Marice, dkk. 2011).
1.2. Rumusan Masalah

Bagaimanakah pengaruh pemberian ekstrak daun pegagan (Centella
asiatica) terhadap jumlah osteoblas pada soket alveolar paska pencabutan gigi
tikus wistar?
1.3. Tujuan Penelitian

Untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak daun pegagan (Centella
asiatica) terhadap jumlah osteoblas pada soket alveolar paska pencabutan gigi
tikus wistar.
1.4. Manfaat Penelitian

1.4.1. Memberikan pengetahuan baru bagi perkembangan penelitian selanjutnya
terutama dalam bidang bedah mulut, farmakologi, patologi dan bidang lainnya
mengenai peran ekstrak Centella asiatica terhadap penyembuhan luka pencabutan
gigi.
3
1.4.2. Sebagai data acuan untuk penelitian lebih lanjut mengenai pengaruh
pemberian ekstrak Centella asiatica terhadap penyembuhan luka pencabutan gigi.
1.4.3. Sebagai upaya pemanfaatan bahan alami Centella asiatica dalam
kesehatan gigi dan mulut.
BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA
2..1. Pencabutan Gigi

Pencabutan gigi atau sering disebut ekstraksi gigi merupakan suatu proses
pengeluaran satu gigi secara utuh maupun akar gigi dari alveolus, dimana pada
gigi tersebut sudah tidak dapat dilakukan perawatan lagi. Pengangkatan gigi dari
soketnya dilakukan menggunakan tang, elevator atau melalui pendekatan
transalveolar atau pembedahan. Extraksi gigi merupakan operasi bedah yang
melibatkan jaringan-jaringan dari rongga mulut serta keseluruhan akses yang
dibatasi oleh bibir dan pipi dan menyebabkan hilangnya kontinuitas jaringan
lunak dan jaringan keras pada soket gigi (Wiantari, N.P.N., dkk. 2018). Pada
prosedur pencabutan gigi, bahan anastesi lokal biasanya digunakan untuk
menghilangkan rasa sakit yang timbul. Vasokonstriktor berupa epinefrin biasanya
ditambahkan pada bahan anestesi lokal di lokasi yang akan dilakukan tindakan
untuk memperpanjang durasi kerja. Penggunaan anestesi lokal biasanya juga
seringkali dikombinasikan dengan anestesi topikal untuk menghilangkan rasa
sakit akibat injeksi jarum (Dewi, N.P.A.L., dkk. 2020).
Terdapat dua teknik pencabutan gigi yaitu, teknik yang sering dipakai
yaitu teknik sederhana dan teknik pembedahan yang hanya dilakukan jika teknik
sederhana tidak dapat dilakukan (Sagung A.P.D. 2013). Indikasi ekstraksi gigi
dengan teknik sederhana misalnya gigi berjejal, sedangkan ekstraksi gigi dengan
teknik pembedahan misalnya gigi ankilosis (Azhar, S.A., dkk. 2016). Teknik
sederhana dilakukan dengan menggunakan alat-alat untuk memegang gigi yang
melekat pada jaringan lunak seperti elevator atau tang ekstraktor, kemudian gigi
digoyangkan dan dikeluarkan dari dalam soket tulang alveolaris. Sedangkan pada
teknik pembedahan dilakukan dengan membuat flap, kemudian membuang tulang
di sekitar gigi, lalu gigi digoyangkan dan dikeluarkan dari soket tulang alveolar,
selanjutnya dilakukan penjahitan pada flap ke tempat semula. Setelah prosedur
pencabutan selesai dilakukan baik melalui teknik sederhana maupun pembedahan,
5
pasien diminta untuk menggigit cotton roll yang diletakkan di atas soket bekas
pencabutan gigi (Sagung A.P.D. 2013).
2.1.1. Komplikasi Pencabutan Gigi

Pada tindakan pencabutan gigi harus memerhatikan keadaan lokal
maupun keadaan umum penderita dan memastikan penderita dalam keadaan
sehat. Seluruh rencana perawatan pada tindakan pencabutan gigi harus didasari
dengan ketelitian dalam memeriksa keadaan umum pasien sebelum melakukan
tahap perawatan. Dalam melakukan tindakan pencabutan gigi akan dijumpai
beberapa masalah kesehatan yang sama dan terdapat pada masing-masing
pasien pencabutan gigi. Hal demikian yang akan menjadi faktor resiko
terjadinya komplikasi pencabutan gigi. Beberapa faktor resiko yang biasanya
menjadi penyebab komplikasi pencabutan gigi antara lain penyakit sistemik,
umur pasien, keadaan akar gigi, dan adanya gangguan pada sendi
temporomandibula (Lande, R., dkk. 2015).
Komplikasi akibat pencabutan gigi dapat terjadi karena berbagai faktor
dan bervariasi pula dalam hal yang ditimbulkannya. Komplikasi yang sering
ditemui pada pencabutan gigi antara lain perdarahan, pembengkakan, rasa
sakit, dry socket, fraktur, dan dislokasi mandibula. (Lande, R., dkk. 2015)
Kompilkasi akibat pencabutan gigi dapat dibagi menjadi dua yaitu
komplikasi perioperatf dan komplikasi postoperatif. Yang termasuk dari
komplikasi perioperatif yaitu fraktur mahkota gigi yang bersebelahan atau
luksasi dari gigi sebelahnya, trauma jaringan lunak, fraktur prosesus alveolar,
fraktur tuberositas maksila, fraktur mandibula, dislokasi sendi
temporomandibula, emfisema subkutan atau submukosa, perdarahan,
instrumen yang patah pada jaringan, pergeseran akar atau ujung akar ke sinus
maksilaris serta cedera saraf, sedangkan yang termasuk komplikasi postoperatif
meliputi trismus, hematoma, ekimosis, edema, granuloma, dry soket (Fragiskos
D.F. 2007).
2.2. Penyembuhan Luka
Penyembuhan luka melibatkan melibatkan tiga fase: inflamasi, proliferasi,
dan maturasi. Mediator inflamasi yang terlibat dalam penyembuhan luka terdiri
dari 1) eikosanoid (prostaglandin, prostasiklin, tromboksan, leukotrien, lipoksin),
2) sitokin (kemokin, limfokin, monokin, interleukin, Colony-stimulating factors
(CSFs), interferon, faktor nekrosis tumor), 3) oksida nitrat, dan 4) faktor
pertumbuhan (Prasetyono, T.O.H. 2009). Singkatnya, penyembuhan luka adalah
proses transisi yang juga dikenal sebagai salah satu proses paling kompleks dalam
fisiologi manusia.
Rangkaian reaksi dan interaksi yang kompleks antara sel dan mediator
terjadi dalam proses penyembuhan luka (Prasetyono, T.O.H. 2009). Semua fase
penyembuhan melibatkan peristiwa seluler dan molekuler. Penyembuhan luka
memerlukan keseimbangan antara proses sintesis dan degradasi sehingga
terbentuk proses penyembuhan luka yang normal. Dari keseluruhan proses yang
kompleks, terdiri dari beberapa serial proses meliputi pendarahan yang diikuti
koagulasi, inisiasi respon inflamasi, migrasi sel, regenerasi, dan proliferasi,
remodelling dan lain-lain (T Velnar, 2009). Proses penyembuhan luka melibatkan
berbagai jenis sel (makrofag, fibriblast, osteoblast dan sebagainya), intraselular
messenger (sitokin, faktor pertumbuhan, hormon dan sebagainya), produk buatan
(kolagen, proteoglikan dan sebagainya) serta enzim seperti matriks
metalloproteinase (MMP) (T Velnar, 2009). Secara umum, penyembuhan luka
terbagi dalam 3 fase (gambar 2.1).
7
Gambar 2.1 Tiga tahap penyembuhan luka (Gutner, GC. 2007)
1) Fase Inflamasi Awal (Fase Hemostasis)

Fase Inflamasi terbagi dua, yaitu Fase inflamasi awal atau fase
haemostasis dan fase inflamasi akhir. Pada saat jaringan terluka, pembuluh
darah yang terputus pada luka akan menyebabkan pendarahan, reaksi tubuh
pertama sekali adalah berusaha menghentikan pendarahan dengan
mengaktifkan faktor koagulasi intrinsik dan ekstrinsik, yang mengarah ke
agregasi platelet dan formasi clot vasokontriksi, pengerutan ujung pembuluh
darah yang putus (retraksi) dan reaksi haemostasis. Reaksi haemostasis akan
terjadi karena darah yang keluar dari kulit yang terluka akan mengalami
kontak dengan kolagen dan matriks ekstraseluler, hal ini akan memicu
pengeluaran platelet atau dikenal juga dengan trombosit mengekspresi
glikoprotein pada membran sel sehingga trombosit tersebut dapat beragregasi
menempel satu sama lain dan membentuk massa (clotting). Massa ini akan
mengisi cekungan luka membentuk matriks provisional sebagai scaffold
untuk migrasi sel-sel radang pada fase inflamasi. (Landen, Li, & Stahle,
2016)
Pada saat yang bersamaan sebagai akibat agregasi trombosit,
pembuluh darah akan mengalami vasokonstriksi selama 5 sampai dengan 10
menit, akibatnya akan terjadi hipoksia, peningkatan glikolisis dan penurunan
PH yang akan direspon dengan terjadinya vasodilatasi. Lalu akan terjadi
migrasi sel leukosit dan trombosit ke jaringan luka yang telah membentuk
scaffold tadi. Selain itu, migrasi sel leukosit dan trombosit juga dipicu oleh
aktivasi associated kinase membrane yang meningkatkan permeabilitas
membran sel terhadap ion Ca2+ dan mengaktivasi kolagenase dan elastase,
yang juga merangsang migrasi sel tersebut ke matriks provisional yang telah
terbentuk. Sel trombosit mengalami degranulasi setelah sampai di matriks
provisional kemudian mengeluarkan sitokin-sitokin dan mengaktifkan jalur
intrinsik dan ekstrinsik yang menstimulasi sel-sel netrofil bermigrasi ke
matriks provisional dan memulai fase inflamasi (Landen, dkk. 2016). Adapun
sitokin yang di sekresi sel trombosit juga berfungsi untuk mensekresi faktor-
faktor inflamasi dan melepaskan berbagai faktor pertumbuhan yang potensial
seperti Transforming Growth Factor-β (TGF- β), Platelet Derived Growth
Factor (PDGF), Interleukin-1 (IL-1), Insulin-like Growth Factor-1 (IGF-1),
Epidermal Growth Factor (EGF), dan Vascular Endothelial Growth Factor
(VEGF), sitokin dan kemokin. Mediator ini sangat dibutuhkan pada
penyembuhan luka untuk memicu penyembuhan sel, diferensiasi dan
mengawali pemulihan jaringan yang rusak (Werner S, 2003).
2) Fase Inflamasi Akhir (Lag Phase)
Fase inflamasi dimulai segera setelah terjadinya trauma sampai hari
ke-5 paska trauma. Tujuan utama fase ini adalah menyingkirkan jaringan
yang mati, dan pencegahan kolonisasi maupun infeksi oleh agen mikrobial
patogen (Gutner GC, 2007). Setelah hemostasis tercapai, sel radang akut serta
neutrofil akan menginvasi daerah radang dan menghancurkan semua debris
dan bakteri. Dengan adanya neutrofil maka dimulai respon keradangan yang
ditandai dengan cardinal symptoms, yaitu tumor, kalor, rubor, dolor dan
functio laesa.
Netrofil, limfosit dan makrofag adalah sel yang pertama kali mencapai
daerah luka. Fungsi utamanya adalah melawan infeksi dan membersihkan
debris matriks seluler dan benda-benda asing. Agen kemotaktik seperti
produk bakteri, yaitu DAMP (Damage Associated Molecules Pattern) dan
PAMP (Pathogen Spesific Associated Molecules Pattern), complement factor,
histamin, prostaglandin, dan leukotriene. Agen ini akan ditangkap oleh
reseptor TLRs (toll like receptor) dan merangsang aktivasi jalur signalling
intraseluler yaitu jalur NFκβ dan MAPK. Pengaktifan jalur ini akan
menghasilkan ekspresi gen yang terdiri dari sitokin dan kemokin pro-
inflamasi yang menstimulasi leukosit untuk ekstravasasi keluar dari sel
endotel ke matriks provisional. Leukosit akan melepaskan bermacam-macam
faktor untuk menarik sel yang akan memfagosit debris, bakteri, dan jaringan
yang rusak, serta pelepasan sitokin yang akan memulai proliferasi jaringan.
Leukosit yang terdapat pada luka di dua hari pertama adalah neutrofil,
9
biasanya terdeteksi pada luka dalam 24 jam sampai dengan 36 jam setelah
terjadi luka. Sel ini membuang jaringan mati dan bakteri dengan fagositosis.
Netrofil mensekresi sitokin pro inflamasi seperti TNF-α, IL-1β, IL-6
juga mengeluarkan protease untuk mendegradasi matriks ekstraseluler yang
tersisa. Neutrofil akan difagositosis oleh makrofag atau mati setelah
melaksanakan fungsi fagositosis. Meskipun neutrofil memiliki peran dalam
mencegah infeksi, keberadaan neutrofil yang persisten pada luka dapat
menyebabkan luka sulit untuk mengalami proses penyembuhan. Hal ini bisa
menyebabkan luka akut berprogresi menjadi luka kronis (Landen, dkk. 2016)
Pada hari ke tiga luka, monosit berdiferensiasi menjadi makrofag
masuk ke dalam luka melalui mediasi monocyte chemoattractant protein 1
(MCP-1). Makrofag sebagai sel yang sangat penting dalam penyembuhan
luka memiliki fungsi fagositosis bakteri dan jaringan matin akan berubah
menjadi makrofag efferositosis (M2) yang mensekresi sitokin anti inflamasi
seperti IL-4, IL-10, IL-13 (Landen, dkk. 2016). Makrofag mensekresi
proteinase untuk mendegradasi matriks ekstraseluler (ECM) dan penting
untuk membuang material asing, merangsang pergerakan sel, dan mengatur
pergantian ECM.
Tabel 2.1 Sitokin yang berperan dalam Fase Inflamasi (Samantha Holoway, 2012)
Makrofag M2 merupakan penghasil sitokin dan growth factor yang

menstimulasi proliferasi fibroblast, produksi kolagen, pembentukan
pembuluh darah baru, dan proses penyembuhan lainnya (Gutner GC, 2007).
Makrofag akan menggantikan peran polimorfonuklear sebagai sel
predominan. Platelet dan faktor-faktor lainnya menarik monosit dari
pembuluh darah. Ketika monosit mencapai lokasi luka, maka ia akan
dimatangkan menjadi makrofag.
Peran makrofag adalah (Gutner GC, 2007):
- Memfagositosis bakteri dan jaringan yang rusak dengan melepaskan
protease.
- Melepaskan growth factors dan sitokin yang kemudian menarik sel-sel
yang berperan dalam fase proliferasi ke lokasi luka.
- Memproduksi faktor yang menginduksi dan mempercepat angiogenesis
- Memstimulasi sel-sel yang berperan dalam proses reepitelisasi luka,
membuat jaringan granulasi, dan menyusun matriks ekstraseluler.
11
- Fase inflamasi sangat penting dalam proses penyembuhan luka karena
berperan melawan infeksi pada awal terjadinya luka serta memulai fase
proliferasi
Gambar 2.2 Fase inflamasi terjadi segera setelah terjadinya trauma dan bertujuan
untuk hemostasis, membuang jaringan mati dan mencegah infeksi
invasif oleh mikroba pathogen. Tampak sebukan sel-sel radang
berwarna ungu (kanan) (Gutner GC, 2007)
3) Fase Proliferasi
Fase proliferasi ditandai dengan terbentuknya jaringan granulasi di
dalam dasar luka yang tersusun dari jaringan kapiler baru, fibroblast, dan
makrofag dalam susunan struktur pendukung yang longgar (Myers W.T., dkk.
2007). Selain pembentukan jaringan granulasi dengan kolagennya serta
deposisi protein jaringan ikat dan angiogenesis, epitelisasi juga merupakan
langkah utama dalam penyembuhan luka. Fase kedua ini akan berlangsung
hingga 146-215 hari setelah cedera (Broughton II G., dkk. 2006; Ueno C.,
dkk. 2006).
Angiogenesis ditandai dengan migrasi sel endotel dan pembentukan
kapiler (Broughton II G., dkk. 2006). Angiogenesis merupakan respons alami
penyembuhan untuk menggantikan mikrosirkulasi yang terluka dan
melibatkan pergerakan sel endotel sebagai respons terhadap tiga gelombang
faktor pertumbuhan yaitu PDGF, TGF-β, insulin-like growth factor selama
fase inflamasi; faktor pertumbuhan fibroblast (FGF) yang dilepaskan dari
tempat pengikatan normal pada jaringan ikat sebagai gelombang kedua; dan
vaskular endotelial growth factor (VEGF) yang dihasilkan oleh makrofag.
Angiogenesis berkembang secara proporsional dengan perfusi darah dan
tekanan parsial arteri oksigen. Pembuluh darah baru tumbuh ke dalam matriks
kolagen yang dibentuk oleh fibroblast (Ueno C., dkk. 2006)..
PDGF dan epidermal growth factor (EGF) yang berasal dari trombosit
dan makrofag merupakan sinyal utama bagi fibroblas. Fibroblas bermigrasi
ke lokasi luka dari jaringan sekitarnya, mulai mensintesis kolagen dan
berproliferasi. Menanggapi adanya sinyal PDGF, fibroblast mensintesis
matriks sementara yang terdiri dari kolagen tipe-III, glikosaminoglikan, dan
fibronektin yang menyediakan platform untuk migrasi keratinosit (Broughton
II G., dkk. 2006; Gurtner G.C. 2007) Jenis fibroblas lainnya adalah “wound
fibroblast” yang sudah berada di lokasi luka. Jenis fibroblas ini akan berubah
menjadi miofibroblas yang berperan untuk kontraksi luka (Broughton II G.,
dkk. 2006). Myofibroblast tidak lain adalah fibroblas dengan mikrofilamen
aktin intraseluler yang mampu menghasilkan gaya dan kontraksi matriks.
Myofibroblast berkontraksi pada luka melalui interaksi integrin spesifik
dengan matriks kolagen. Secara klinis Kontraksi luka merupakan respon
alami tubuh untuk melokalisasi dan memperkecil area tersebut sehingga
terlindung dari segala dampak negatif luka (Gurtner G.C. 2007).
Sebenarnya epitelisasi mulai terjadi segera setelah dilukai dan
distimulasi oleh sitokin inflamasi. IL-1 dan TGF-α mengatur ekspresi gen
keratinosit growth factor (KGF) dalam fibroblast. Fibroblast kemudian akan
mensintesis dan mengeluarkan KGF-1, KGF-2 (paling penting pada
manusia), dan IL-6 yang merangsang keratinosit tetangga untuk bermigrasi di
area luka, berproliferasi dan berdiferensiasi di epidermis (Broughton II G.,
dkk. 2006).
Fase proliferasi (gambar. 3) berlangsung mulai hari ke-3 hingga 14
paska trauma, ditandai dengan pergantian matriks provisional yang
didominasi oleh platelet dan makrofag secara bertahap digantikan oleh
migrasi sel fibroblast dan deposisi sintesis matriks ekstraselular (T Velnar,
2009). Pada level makroskopis ditandai dengan adanya jaringan granulasi
yang kaya akan jaringan pembuluh darah baru, fibroblas, dan makrofag,
13
granulosit, sel endotel dan kolagen yang membentuk matriks ekstraseluler
dan neovaskular yang mengisi celah luka dan memberikan scaffold adhesi,
migrasi, pertumbuhan dan diferesiasi sel (Landen, dkk. 2016)(Gutner GC,
2007). Tujuan fase proliferasi ini adalah untuk membentuk keseimbangan
antara pembentukan jaringan parut dan regenerasi jaringan.
Terdapat tiga proses utama dalam fase proliferasi, antara lain:
1. Neoangiogenesis
Angiogenesis merupakan pertumbuhan pembuluh darah baru
yang terjadi secara alami di dalam tubuh, baik dalam kondisi sehat
maupun patologi (sakit). Kata angiogenesis sendiri berasal dari kata
angio yang berarti pembuluh darah dan genesis yang berarti
pembentukan.
Gambar 2.3 Fase proliferasi: jaringan granulasi mengisi kavitas luka dan
keratinosit bermigrasi untuk menutup luka (Gutner GC, 2007)
Pada keadaan terjadi kerusakan jaringan, proses angiogenesis

berperan dalam mempertahankan kelangsungan fungsi berbagai jaringan
dan organ yang terkena. Terjadinya hal ini melalui terbentuknya
pembuluh darah baru yang menggantikan pembuluh darah yang rusak
(Frisca dkk., 2009). Pada angiogenesis pembentukan pembuluh darah
baru berasal dari kapiler-kapiler yang muncul dari pembuluh darah kecil
di sekitarnya (Kalangi, 2011). Pembuluh darah kapiler terdiri atas sel-sel
endotel dan perisit. Kedua jenis sel ini memuat seluruh informasi genetik
untuk membentuk pembuluh darah dan cabang-cabangnya serta seluruh
jaring-jaring kapiler. Molekul-molekul angiogenik khas akan mendorong
terjadinya proses ini, tetapi ada pula molekul-molekul penghambat
bersifat khusus untuk menghentikan proses angiogenesis. Molekul-
molekul dengan fungsi yang berlawanan tersebut nampaknya seimbang
dan serasi dalam bekerja terus menerus mempertahankan suatu sistem
pembuluh darah kecil yang konstan (Kalangi, 2011).
Pada proliferasi terjadi angiogenesis disebut juga sebagai
neovaskularisasi, yaitu proses pembentukan pembuluh darah baru,
merupakan hal yang penting sekali dalam langkah-langkah penyembuhan
luka. Jaringan di mana pembentukan pembuluh darah baru terjadi,
biasanya terlihat berwarna merah (eritem) karena terbentuknya kapiler-
kapiler di daerah itu. Selama angiogenesis, sel endotel memproduksi dan
mengeluarkan sitokin. Beberapa faktor pertumbuhan terlibat dalam
angiogenesis antara lain Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF),
angiopoetin, Fibroblast Growth Factor (FGF) dan TGF-β. Setelah
pembentukan jaringan cukup adekuat, migrasi dan proliferasi sel-sel
endotelial menurun, dan sel yang berlebih akan mati dalam dengan
proses apoptosis (Gurtner GC, 2007).
Angiogenesis meliputi urutan peristiwa sebagai berikut :
a) Terdapat degradasi lokal lamina basal pada kapiler yang telah ada.
b) Migrasi sel-sel endotel ke tempat pertumbuhan baru.
c) Proliferasi dan diferensiasi untuk membentuk kuncup kapiler.
d) Penyusunan kembali sel-sel endotel untuk membentuk lumen.
e) Anastomosis kuncup-kuncup yang berdekatan untuk membentuk
jalinan pembuluh darah.
f) Pengaliran darah melalui pembuluh darah baru
2. Fibroblast
Fibroblas memiliki peran yang sangat penting dalam fase ini.
Fibroblas memproduksi matriks ekstraselular yang akan mengisi kavitas
luka dan menyediakan landasan untuk migrasi keratinosit. Matriks
ekstraselular inilah yang menjadi komponen yang paling nampak pada
15
skar di kulit. Makrofag memproduksi growth factor seperti PDGF, FGF
dan TGF-β yang menginduksi fibroblas untuk berproliferasi, migrasi, dan
membentuk matriks ekstraselular (Gurtner GC, 2007). Dengan bantuan
matrix metalloproteinase (MMP-12), fibroblas mencerna matriks fibrin
dan menggantikannya dengan glycosaminoglycan (GAG). Dengan
berjalannya waktu, matriks ekstraselular ini akan digantikan oleh kolagen
tipe III yang juga diproduksi oleh fibroblas. Kolagen ini tersusun atas
33% glisin, 25% hidroksiprolin, dan selebihnya berupa air, glukosa, dan
galaktosa. Hidroksiprolin berasal dari residu prolin yang mengalami
proses hidroksilasi oleh enzim prolyl hydroxylase dengan bantuan
vitamin C. Hidroksiprolin hanya didapatkan pada kolagen, sehingga
dapat dipakai sebagai tolok ukur banyaknya kolagen dengan mengalikan
hasilnya dengan 7,8. Selanjutnya kolagen tipe III akan digantikan oleh
kolagen tipe I pada fase maturasi. Faktor proangiogenik yang diproduksi
makrofag seperti vascular endothelial growth factor (VEGF), fibroblas
growth factor (FGF)-2, angiopoietin-1, dan thrombospondin akan
menstimulasi sel endotel membentuk neovaskular melalui proses
angiogenesis.
3. Re-epitelisasi
Secara simultan, sel-sel basal pada epitelium bergerak dari daerah
tepi luka menuju daerah luka dan menutupi daerah luka. (T Velnar,
2009). Pada tepi luka, lapisan single layer sel keratinosit akan
berproliferasi kemudian bermigrasi dari membran basal ke permukaan
luka. Ketika bermigrasi, keratinosit akan menjadi pipih dan panjang dan
juga membentuk tonjolan sitoplasma yang panjang. Mereka akan
berikatan dengan kolagen tipe I dan bermigrasi menggunakan reseptor
spesifik integrin. Kolagenase yang dikeluarkan keratinosit akan
mendisosiasi sel dari matriks dermis dan membantu pergerakan dari
matriks awal. Sel keratinosit yang telah bermigrasi dan berdiferensiasi
menjadi sel epitel ini akan bermigrasi di atas matriks provisional menuju
ke tengah luka, bila sel-sel epitel ini telah bertemu di tengah luka,
migrasi sel akan berhenti dan pembentukan membran basalis dimulai (T
Velnar, 2009).
4) Fase Maturasi (Remodeling)
Fase maturasi (gambar 4) ini berlangsung mulai hari ke-21 hingga
sekitar 1 tahun yang bertujuan untuk memaksimalkan kekuatan dan integritas
struktural jaringan baru pengisi luka, pertumbuhan epitel dan pembentukan
jaringan parut (T Velnar, 2009). Segera setelah kavitas luka terisi oleh
jaringan granulasi dan proses reepitelialisasi usai, fase ini pun segera dimulai.
Pada fase ini terjadi kontraksi dari luka dan remodeling kolagen. Kontraksi
luka terjadi akibat aktivitas fibroblas yang berdiferensiasi akibat pengaruh
sitokin TGF-β menjadi myofibroblas, yakni fibroblas yang mengandung
komponen mikrofilamen aktin intraselular. Myofibroblast akan
mengekspresikan α-SMA (α-Smooth Muscle Action) yang akan membuat luka
berkontraksi. Matriks intraselular akan mengalami maturasi dan asam
hyaluronat dan fibronektin akan di degradasi (T Velnar, 2009).
Sekitar 80% kolagen pada kulit adalah kolagen tipe I dan 20%
kolagen tipe III yang memungkinkan terjadinya tensile strength pada kulit.
Diameter serat kolagen akan meningkat dan kolagen tipe III pada fase ini
secara gradual digantikan oleh kolagen tipe Idengan bantuan matrix
metalloproteinase (MMP) yang disekresi oleh fibroblas, makrofag & sel
endotel (Gurtner GC, 2007; T Velnar, 2009). Sedangkan pada jaringan
granulasi mengekspresikan kolagen tipe 3 sebanyak 40% (T Velnar, 2009).
Pada fase ini terjadi keseimbangan antara proses sintesis dan
degradasi kolagen serta matriks ekstraseluler. Kolagen yang berlebihan
didegradasi oleh enzim kolagenasedan kemudian diserap. Sisanya akan
mengerut sesuai tegangan yang ada.Hasil akhir dari fase ini berupa jaringan
parut yang pucat, tipis, lemas, dan mudah digerakkan dari dasarnya.
Setidaknya terdapat tiga prasyarat kondisi lokal agar proses penyembuhan
luka dapat berlangsung dengan normal, yaitu semua jaringan di area luka dan
sekitarnya harus vital, tidak terdapat benda asing, tidak disertai kontaminasi
eksesif atau infeksi (Prasetyono T, 2009).
17
Gambar 2.4 Fase maturasi yang terjadi mulai hari ke-21 sampai sekitar 1 tahun
(Gurtner, 2007)
Saat kadar produksi dan degradasi kolagen mencapai keseimbangan,

maka mulailah fase maturasi dari penyembuhan jaringan luka. Fase ini dapat
berlangsung hingga 1 tahun lamanya atau lebih, tergantung dari ukuran luka
dan metode penutupan luka yang dipakai. Selama proses maturasi, kolagen
tipe III yang banyak berperan saat fase proliferasi akan menurun kadarnya
secara bertahap, digantikan dengan kolagen tipe I yang lebih kuat. Serabut-
serabut kolagen ini akan disusun, dirangkai, dan dirapikan sepanjang garis
luka.
Fase remodelling jaringan parut adalah fase terlama dari proses
penyembuhan. Pada umumnya tensile strength pada kulit dan fascia tidak
akan pernah mencapai 100%, namun hanya sekitar 80% dari normal, karena
serat-serat kolagen hanya bisa pulih sebanyak 80% dari kekuatan serat
kolagen normal sebelum terjadinya luka. Kekuatan akhir yang dicapai
tergantung pada lokasi terjadinya luka dan durasi lama perbaikan jaringan
yang terjadi (T Velnar, 2009)
Sintesis dan degradasi kolagen dan matriks ekstraseluler terjadi secara
simultan dan biasanya terjadi keseimbangan antara kedua proses hingga 3
minggu setelah terjadinya luka sebelum akhirnya terjadi kestabilan.
2.3. Penyembuhan Luka Pencabutan Gigi

Penyembuhan luka pencabutan gigi merupakan proses yang kompleks,
melibatkan kemotaksis berbagai sel ke daerah luka, transformasi sel mesenkim
menjadi sel osteoprogenitor, proliferasi dan diferensiasi osteoblas, sintesis
matriks, mineralisasi, maturasi dan remodeling tulang (Lalani, 2002; Mohamed,
dkk. 2013). Penyembuhan luka paska pencabutan gigi pada dasarnya sama dengan
penyembuhan jaringan lainnya, terdiri dari fase inflamasi, fase proliferasi, dan
fase remodeling. Ketiga fase tersebut melibatkan proses vaskuler, seluler dan
biokimia (MacKay and Miller, 2003; Hupp, 2014).
Fase inflamasi dimulai segera setelah terjadi luka dan berlangsung sampai
sampai hari ke-5. Pada fase ini dilepaskan sitokin dan factor pertumbuhan diikuti
rekrutmen, proliferasi, diferensiasi sel mesenkim, revaskularisasi dan remodeling
jaringan (Schmidt-Bleek, dkk. 2015). Pada awal fase inflamasi platelet
melepaskan factor pertumbuhan, Transforming Growth Factor-β1 (TGF-β1),
Platelet Derived Growth Factor (PDGF), Epidermal Growth Factor (EGF) dan
Fibroblast Growth Factor (FGF). Faktor pertumbuhan ini terlibat pada respon
awal perbaikan jaringan (Shetty and Bertolami, 2004; Guo S and Dipietro, 2010;
Mohamed, dkk. 2013). Transforming Growth Factor-β1, Insulin-Like Growth
Factors (IGFs) dan Bone Morphogenetic Protein superfamily (BMPs)
mempengaruhi aktivitas`osteoblas dalam menginduksi, memodulasi pertumbuhan
tulang (Zhao, 2003; Bikle, 2008), sedangkan VEGF dan PDGF terlibat dalam
angiogenesis dan pembentukan tulang (Luu, dkk. 2008).
Transforming Growth Factor-β berperan disetiap tahap penyembuhan
tulang. Pada fase inflamasi menginisiasi dan mengontrol kemotaksis, aktivasi dan
survival sel inflamasi, menginduksi transformasi monosit menjadi makrofag
(Behm, dkk. 2012; Kasagi and Chen 2013). Pada fase proliferasi TGF-β1
memediasi migrasi dan proliferasi sel endotel, keratinosit dan fibroblas
membentuk jaringan granulasi (Lalani, dkk. 2003; Chen, dkk. 2004),
menstimulasi ekspresi faktor angiogenik (VEGF dan bFGF) untuk angiogenesis.
Pada osteogenesis meregulasi pembentukan tulang dengan menginhibisi fibroblas,
menstimulasi migrasi, proliferasi dan diferensiasi sel mesenkim menjadi
osteoblas, menghambat apoptosis osteoblas dan meningkatkan sintesis dan
mineralisasi matriks tulang (Karsenty and Wagner, 2002; Lalani, 2002: Maeda,
19
dkk. 2002) merekrut prekursor osteoklas untuk resorpsi tulang (Karsenty and
Wagner, 2002; Janssens, dkk. 2005).
Lalani (2002), mengamati karakteristik spasial dan temporal faktor
pertumbuhan TGF-β1, VEGF, PDGF, FGF-2 dan BMP-2 pada penyembuhan
paska pencabutan gigi kelinci dan menyatakan distribusi dan intensitas ekspresi
TGF- β1 meningkat 48 jam sampai hari ke-4, hari ke-7 terjadi penurunan ekspresi,
pada hari ke-14 terjadi peningkatan ekspresi dan ekspresi mencapai puncaknya,
pada hari ke-28 terjadi penurunan ekspresi TGF- β1.
2.4. Sel Osteoblast

2.4.1. Definisi Osteoblast
Osteoblast merupakan satu sel yang berperan dalam pembentukan dan
resorpsi tulang. Osteoblast adalah sel pembentuk tulang yang berasal dari
prekursor sel stroma di sumsum tulang. Sel-sel ini mensekresikan sejumlah
besar kolagen tipe I, protein matriks tulang yang lain dan fosfatase alkali. Sel
ini berdiferensiasi menjadi osteosit, yaitu sel-sel bundar yang dikelilingi
untuk matriks tulang dan diiemukan pada lakuna tulang (Ganong, 2015).
Osteoblast bertanggung jawab untuk sintesa komponen organik
matriks tulang (kolagen dan glikoprotein). Osteoblast semata-mata terletak
pada permukaan jaringan tulang secara berdampingan yang menyerupai epitel
sederhana. Bila osteoblast mensintesa matriks maka osteoblast berbentuk
kuboid dan mempunyai suatu sitoplasma basofilik, bila sintesa menurun
bentuknya menjadi gepeng dan sifat basofilik sitoplasma berkurang
(Junqueira dan Corneire. 2007)
2.4.2. Morfologi Osteoblast
Osteoblas merupakan sel yang berbentuk berbentuk polyhedral
dengan ukuran berkisar antara 20 hingga 30 μm, dan memiliki sitoplasma
basofil karena kandungan nukleoprotein yang berperan untuk sintesis unsur
organik matriks tulang, seperti kolagen dan glikoprotein. Di dalam sitoplasma
osteoblast didaerah terjadinya endapan pada matriks, terdapat butir-butir
halus. Pada proses pembentukan tulang sebagian osteoblas akan berubah
menjadi osteosit dan sebagian yang lainnya akan berada di permukaan
periosteal atau endosteal tulang (lining cell) dengan karakteristik berbentuk
pipih dan beberapa sel osteoblas berbentuk persegi Panjang. Sel-sel ini
mempunyai tonjolan-tonjolan sitoplasma yang mirip jari yang menjulur
kedalam matriks tulang yang sedang dibentuk dan berhubungan dengan
tonjolan-tonjolan sitoplasma osteoblast yang berdekatan (Handayani. 2018;
Ardhiyanto. 2015).
2.4.3. Mekanisme Pembentukan Osteoblast
Osteoblas dan osteoklas diproduksi pada sumsum tulang dan terbentuk
melalui dua garis diferensiasi CFU (colony formation unit) yang berbeda.
Pembentukan osteoklas dari CFU-GM (granulosit-makrofag) mengikuti garis
diferensiasi hematopoietik, sedangkan pembentukan osteoblas dari CFU-F
(fibrosit) mengikuti garis diferensiasi mesensimal pada stroma sumsum
tulang. Pembentukan osteoblas dapat berlangsung secara independen tanpa
memerlukan interaksi dengan progenitor osteoklas. Sebaliknya, pembentukan
osteoklas membutuhkan interaksi yang kompleks dengan progenitor
osteoblas, dimana diferensiasi CFU-GM menjadi osteoklas tidak dapat
berlangsung tanpa adanya interaksi seluler komponen sel-sel stroma yang
memproduksi osteoblas (Iknes, S., dkk. 2012).
Gambar 2.5 Perbedaan antara garis diferensiasi osteoklas dan osteoblas. Garis
diferensiasi hematopoietik (atas) bertanggungjawab dalam
pembentukan osteoklas, sedangkan osteoblas terbentuk melalui garis
21
diferensiasi mesensimal (bawah). Keduanya dimediasi oleh sejumlah
sitokin dan hormon yang berbeda (Iknes, S., dkk. 2012).
2.5. Tanaman Pegagan (Centella asiatica)
2.5.1. Deskripsi dan Morfologi

Berdasarkan klasifikasi taksonomi, pegagan termasuk ke dalam:
Kingdom : Plantae (Tumbuhan)
Divisi : Spermatophyta
Sub Divisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledonae
Ordo : Umbillales
Famili : Umbilliferae (Apiaceae)
Genus : Centella
Spesies : Centella asiatica (L.) Urban atau Hidrocotyle asiatica Linn
Gambar 2.6 Tanaman Pegagan (Centella asiatica)
Pegagan merupakan tanaman menahun dan tidak berbatang dengan

akar jenis rimpang yang merayap. Daun dalam susunan melingkar dan rapat
berimpitan berjumlah kisaran 2-10, beringgit. Bunga termasuk bunga bongkol
majemuk yang tidak berkaliks sehingga bagian bunga tidak lengkap.
Tanaman pegagan berbuah tanpa mengenal musim atau berbunga sepanjang
tahun (Tjitrosoepomo, G. 2000).
2.5.2. Kandungan Bahan Bioaktif
Pegagan mengandung asiatikosida berupa glikosida. Pegagan
(Centella asiatica) mengandung berbagai bahan aktif antara lain: 1) saponin
triterpenoid, 2) triterpenoid genin, 3) minyak atsiri, 4) flavonoid, 5) fitosterol,
dan bahan aktif lainnya. Bahan aktif terpenting dari beberapa bahan aktif
lainnya adalah saponin triterpenoid. Bahan aktif saponin triterpenoid
meliputi: 1) asiaticoside, 2) centelloside, 3) madekossida, 4) dan asam asiatic.
Saponin merangsang pembentukan kolagen, yaitu struktur protein yang
berperan dalam proses penyembuhan luka (Arumugam T., dkk. 2011;
Hanemann U., dkk. 2015).
A. Asiaticoside
Triterpenoid merupakan senyawa terpenting dalam tanaman
pegagan. Triterpenoid berfungsi meningkatkan fungsi mental dan
memberikan efek menenangkan. Senyawa ini juga dapat merevitalisasi
pembuluh darah sehingga memperlancar peredaran darah ke otak.
Asiatikosida merupakan bagian dari triterpenoid yang berfungsi
memperkuat sel kulit dan memrangsang perbaikan, merangsang sel darah
dan sistem kekebalan tubuh, serta sebagai antibiotik alami. Asiatikosida
termasuk dalam kelompok triterpenoid. Asiatikosida adalah glikosida
triterpenik, turunan alfaamarin dengan molekul gula yaitu dua glukosa
dan satu rhamnosa. Aglikon triterpenik di Centella asiatica disebut
asiatikosida yang memiliki gugus alkohol primer, glikol, dan satu
karboksilat teresterifikasi dengan gugus gula (Sutardi. 2016).
B. Madecosside
Madecosside termasuk dalam kelompok triterpenoid. Madecosside
memainkan peran penting dalam memperbaiki kerusakan sel dengan
mensintesis kolagen. Kolagen adalah protein dan mencakup 30% dari
semua protein tubuh mamalia. Oleh karena itu, serat kolagen berperan
dalam penyembuhan luka atau jaringan yang rusak. Madekassoside
menunjukkan peningkatan penyembuhan luka dan penurunan
pembentukan keloid pada fibroblas primer yang berasal dari keloid
23
manusia (Nowwarote N., dkk. 2013; Karapanagioti E., dkk. 2016; Song
J., dkk. 2012)
C. Asam Asiatik
Asam asiatik berperan sebagai agen antiseptik dan berpotensi
sebagai anti jamur, senyawa ini juga dapat melindungi tubuh dari efek
radikal bebas, senyawa ini umumnya digunakan untuk menyembuhkan
luka. Membantu dalam generasi neuroglia, mempromosikan
penyembuhan luka, meningkatkan cornifikasi kutikula, merangsang
granulasi, menginduksi perubahan ekspresi gen, meningkatkan
pembelajaran dan sifat memori, aktivitas antinosiseptif, aktivitas anti-
inflamasi, menghambat aktivitas asetilkolinesterase, aktivitas anti-
apoptosis (Temrangsee P., dkk. 2011; Yasurin P., dkk. 2016).
2.6. Ekstraksi
Ekstraksi ialah proses pengambilan komponen atau bahan aktif dari suatu
bahan menggunakan pelarut tertentu. Ekstraksi dilakukan melalui beberapa
metode, yaitu maserasi, perkolasi, refluks, sokletasi dan ultrasound - assisted
solvent extraction.
A. Metode Maserasi
Maserasi merupakan metode ekstraksi dingin yaitu ekstraksi yang tidak
dilakukan pada suhu tinggi. Metode ini dilakukan dengan memasukkan serbuk
tanaman dan pelarut yang sesuai ke dalam wadah inert yang tertutup rapat pada
suhu kamar dengan sekali-sekali dilakukan pengadukan atau dapat juga
dilakukan pengadukan secara sinambung (maserasi kinetik). Pada umumnya
perendaman dilakukan selama 24 jam, kemudian pelarut diganti dengan pelarut
baru (Mukhriani. 2014).
Proses ekstraksi dihentikan ketika tercapai kesetimbangan antara
konsentrasi senyawa dalam pelarut dengan konsentrasi dalam sel tanaman.
Mekanisme kerja metode ini yaitu pelarut akan mengalir kedalam sel tumbuhan
yang menyebabkan perbedaan tekanan di dalam sel dan di luar dinding sel,
dinding dan membran sel akan lisis sehingga metabolit pada sitoplasma terlarut.
Setelah proses ekstraksi, pelarut dipisahkan dari sampel dengan penyaringan.
Metode ini efektif untuk senyawa yang tidak tahan panas atau mudah
terdegradasi karena panas, peralatan yang digunakan relatif sederhana, dan
murah. Namun metode ini juga memiliki beberapa kelemahan yaitu memerlukan
waktu yang cukup lama, pelarut yang dibutuhkan dalam jumlah banyak, dan
adanya kemungkinan senyawa tertentu tidak dapat diekstrak karena kelarutan
yang rendah pada suhu ruang (Susanty,S., dan F. Bachmid. 2016; Mukhriani.
2014).
B. Metode Perkolasi
Perkolasi merupakan metode ekstraksi yang dilakukan pada suhu ruang
dengan pelarut yang selalu baru hingga pelarut tidak lagi berwarna yang artinya
sudah tidak ada lagi senyawa yang terlarut. Pada metode ini tidak diperlukan lagi
proses penyaringan bahan padatan dengan ekstraknya karena sudah terdapat
sekat berpori pada bagian bawah perkolator (Mukhriani. 2014).
Kelemahan penggunaan metode ini yaitu jumlah pelarut yang dibutuhkan
cukup banyak dan memerlukan waktu yang cukup lama, tidak meratanya kontak
antara padatan dengan pelarut karena aliran bahan pelarut tidak menyebar dan
bila sampel dalam perkolator tidak homogen maka pelarut tidak menjangkau
seluruh area (Hasanah, dkk. 2015; Mukhriani. 2014).
C. Metode Refluks
Ekstraksi refluks merupakan metode ekstraksi yang dilakukan
meningkatkan temperatur pelarut hingga titik didihnya. Metode ini dilakukan
dalam jumlah pelarut yang konstan namun terdapat pendinginan balik. Pada
umumnya dilakukan tiga sampai lima kali pengulangan dari hasil ekstraksi
yang pertama. Metode ini efektif untuk sampel atau bahan yang tahan
terhadap panas langsung (Mukhriani. 2014).
D. Metode Sokletasi
Sokletasi merupakan metode ekstraksi menggunakan alat soxhlet
dengan pelarut yang selalu baru. Soxhet memiliki kondensor (pendingin
balik) sehingga pelarut yang digunakan konstan. Pada metode ini, pelarut
dipanaskan hingga uapnya naik lalu didinginkan oleh kondensor, selanjutnya
uap yang telah terdinginkan melarutkan padatan yang ada di bawahnya.
25
Kelebihan metode ini adalah memerlukan pelarut yang lebih sedikit dan
pengambilan senyawa lebih efektif. Kelemahan dari metode ini adalah
senyawa yang tidak tahan panas dapat terdegradasi karena ekstrak yang
diperoleh terus-menerus dipanaskan (Mukhriani. 2014; Leba. 2017).
E. Metode Ultrasound – Assisted Solvent Extraction
Metode ini merupakan modifikasi metode maserasi menggunakan
bantuan ultrasound yaitu sinyal dengan frekuensi tinggi (20 kHz). Sampel
atau padatan ditempatkan dalam wadah ultrasonic dan ultrasound untuk
memberikan tekanan mekanik pada sel hingga sel sampel mengalami
keruksakan. Kerusakan sel mengakibatkan peningkatan kelarutan senyawa
dalam pelarut sehingga diperoleh hasil ekstraksi (Mukhriani. 2014).
2.7. Kerangka Konsep Penelitian
Keterangan :
: Menyebabkan
: Menghambat
: Mengandung; Terdiri dari
27
2.8. Penjelasan Kerangka Konsep Penelitian
Pencabutan gigi menyebabkan trauma baik pada jaringan lunak maupun
jaringan keras pada soket gigi. Apabila terjadi kerusakan, tubuh akan
menghasilkan respon berupa proses penyembuhan luka yang diawali fase
inflamasi, diikuti fase proliferasi kemudian fase maturasi, namun pada sebagian
orang terdapat kondisi-kondisi tertentu yang menjadi faktor resiko timbulnya
komplikasi. Apabila terjadi komplikasi, proses penyembuhan menjadi terganggu
dikarenakan inflamasi terjadi secara terus-menerus. Komponen inflamasi dapat
menyebabkan terjadinya stress oksidatif akibat pembentukan Reactive Oxygen
Species (ROS). Stres oksidatif memicu peningkatan produksi sitokin pro-
inflamasi yang akan mengaktivasi Receptor Activator of Nuclear factor Kappa-B
Ligand (RANKL) sehingga menyebabkan peningkatan osteoklastogenesis yang
selanjutnya menghambat diferensiasi osteoblast. Ekstrak daun pegagan (Centella
Asiatica) memiliki kandungan bahan aktif berupa saponin dan triterpenoid yang
meliputi: asiaticosida, madekasosida, asiatic asid dan cetellosid. Saponin dan
triterpenoid berperan sebagai antioksidan eksogen bagi tubuh sehingga mampu
menghambat aktivasi RANKL oleh ROS, hal ini selanjutnya mampu
menyebabkan peningkatan jumlah sel osteoblas pada proses penyembuhan luka
pencabutan gigi.
2.9. Hipotesis
Pemberian ekstrak daun pegagan (Centella asiatica) meningkatkan jumlah
osteoblas pada soket alveolar paska pencabutan gigi tikus wistar.
BAB 3. METODE PENELITIAN
2.5. Jenis dan Rancangan Penelitian

Jenis peneliian yang digunakan adalah eksperimental laboratoris dengan
rancangan penelitian post test only control group design yaitu pengukuran
dilakukan setelah perlakuan dan hasilnya dibandingkan dengan kelompok kontrol
(Notoatmodjo. 2007; Pratiknya. 2003)
K(C-7) - O C-7
K(T-7) T (1-6 hari) O T-7
Random allocation K(C-14) - O C-14
dari sampel K(T-14) T (1-13 hari) O T-14
K(C-28) - O C-28
K(T-28) T (1-27 hari) O T-28
Keterangan: C = kontrol; T = perlakuan; O = observasi/pengamatan
2.6. Tempat dan Waktu Penelitian

2.6.1. Tempat Penelitian
Penelitian dilakukan di beberapa tempat yaitu:
a. Laboratorium Bioscience Rumah Sakit Gigi dan Mulut (RSGM) Fakultas
Kedokteran Gigi Universitas Jember untuk pembuatan ekstrak daun pegagan
(Centella asiatica)
b. Laboratorium Fisiologi Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Jember untuk
perlakuan hewan coba
c. Laboratorium Histologi Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Jember untuk
pembuatan dan pengamatan preparat jaringan
2.6.2. Waktu Penelitian

Penelitian akan dilaksanakan pada bulan November 2021 sampai Januari
2022
29
2.7. Sampel Penelitian
2.7.1. Sampel
Sampel pada penelitian ini adalah tikus putih (Rattus norvegicus) strain
wistar berjenis kelamin jantan. Pemilihan sampel penelitian menggunakan metode
simple random sampling. Kriteria pemilihan sampel terbagi menjadi kriteria
inklusi dan eksklusi.
Kriteria inklusi:
a. Tikus putih (Rattus norvegicus) strain wistar
b. Jenis kelamin jantan
c. Berat badan 200-250 gram
d. Usia 2-3 bulan
e. Keadaan umum baik
Kriteria eksklusi:
a. Tikus yang memiliki kelainan fisik
b. Tikus yang mati selama penelitian
2.7.2. Besar Sampel

Rumus yang digunakan untuk menetukan besar sampel minimal adalah
(Daniel. 2005):
Keterangan:
n = besar sampel minimum
Z = nilai Z pada tingkat kesalahan tertentu (α); jika α = 0,05 maka nilai Z =
1,96 (2-tailed) dan Z = 1,64 (1-tailed)
σ = standard deviasi penelitian sejenis
α = kesalahan yang masih ditoleransi
Pada rumus besar sampel minimal nilai σ atau standar deviasi penelitian
sejenis adalah 1,96 (Wuri, 2016). Sehingga diperoleh hasil perhitungan besar
sampel minimal 4 ekor tikus. Sampel terbagi dalam 6 kelompok yaitu 3 kelompok
kontrol dan 3 kelompok perlakuan, sehingga keseluruhan sampel yang dibutuhkan
sebanyak 24 ekor tikus.
2.8. Variabel Penelitian

2.8.1. Variabel Bebas
Variabel bebas pada penelitian ini adalah pemberian ekstrak daun pegagan
(Centella asiatica)
2.8.2. Variabel Terikat

Variabel terikat pada penelitian ini adalah jumlah sel osteoblas dari
gambaran histopatologi pada proses penyembuhan luka pencabutan gigi
2.9. Definisi Operasional

2.9.1. Ekstrak Daun Pegagan
Ekstrak daun pegagan pada penelitian ini adalah ekstrak yang diperoleh
melalui metode maserasi simplisia daun pegagan dengan pelarut etanol 96%
hingga dihasilkan ekstrak dengan konsentrasi 100%. Daun pegagan yang
digunakan diambil dari UPT Pengembangan Pertanian Terpadu Politeknik Negeri
Jember dengan kriteria daun berwarna hijau, utuh, segar, diameter daun 4-6 cm.
2.9.2. Sel Osteoblas

Sel Osteoblas pada penelitian ini adalah sel basofilik yang berbentuk
kuboid atau silindris pendek, memiliki satu inti yang berada di ujung sel dan
ditemukan di tepi tulang alveolar di sekitar soket bekas pencabutan gigi pada
tikus. Sel osteoblast pada penelitian ini diamati pada preparat jaringan yang
diwarnai dengan Haematoxilin-Eosin dengan bantuan mikroskop pada
pembesaran 400x pada 3 lapang pandang yaitu sepertiga koronal, sepertiga tengah
dan sepertiga apikal kemudian dihitung dengan rumus:
31
2.9.3. Prosedur Pencabutan Gigi
Prosedur pencabutan gigi tikus pada penelitian ini adalah prosedur
pencabutan menggunakan metode sederhana. Gigi molar satu kiri rahang bawah
tikus dikeluarkan dari soketnya. Sebelum memulai pencabutan, tikus dianastesi
general di sekitar paha menggunakan ketamin dosis 0,04-0,08 ml/200 gr BB tikus.
Pencabutan gigi dilaksanakan setelah bahan anastesi bekerja. Pencabutan gigi
dilakukan dengan menghilangkan perlekatan gigi pada gingiva menggunakan
eskavator terlebih dahulu, kemudian gigi diungkit dari soketnya dengan bantuan
eskavator kecil dan sonde setengah lingkaran, kemudian dilihat adanya
kegoyangan gigi menggunakan pinset. Setelah kegoyangan gigi maksimal, gigi
dikeluarkan dari soket menggunakan arteri clamp. Setelah gigi dapat dikeluarkan
dari soket, dilakukan irigasi pada soket dengan aquadest steril.
2.10. Alat dan Bahan Penelitian
2.10.1. Alat Penelitian

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah:
a. Timbangan
b. Blender
c. Kertas saring
d. Erlenmeyer
e. Gelas ukur
f. Mesin maserator
g. Vacum rotary evaporator
h. Oven
i. Disposable syringe
j. Sarung tangan/handscone
k. Masker
l. Pinset
m. Sonde setengah lingkaran
n. Escavator kecil
o. Papan bedah
p. Gunting bedah
q. Scalpel dan blade No. 11
r. Arteri klem
s. Inkubator
t. Mikrotom
u. Object glass
v. Deck glass
w. Mikroskop Binokuler
x. Kamera Optilab
y. Rak pengecatan
z. Kandang tikus
2.10.2. Bahan Penelitian

a. Ekstrak daun pegagan (Centella asiatica)
b. Aquadest
c. Tikus wistar jantan
d. Makanan tikus
e. Eter Chloride
f. Paraffin
g. Minyak emersi
h. Alkohol
i. Formalin 10%
j. Asam formiat 10%
k. Gliserin
l. Meyer egg albumin
m. Cat haematoxilin-Eosin
n. Xylol
33
2.11. Prosedur Penelitian
2.11.1. Persiapan Hewan Coba
Sebelum dilakukan penelitian, dilakukan pemilihan tikus putih wistar
jantan sebanyak 24 ekor. Tikus diadaptasikan selama 7 hari dalam kandang dan
diberi makan standar serta minum. Berat badan tikus dipantau, hal ini bertujuan
untuk memperoleh keseragaman pada hewan coba sebelum dilakukan penelitian.
2.11.2. Pembuatan Ekstrak Daun Pegagan

Daun pegagan (Centella asiatica) sebanyak 8 kg dibuat simplisia dengan
cara dicuci sampai bersih, kemudian daun diangin-anginkan di tempat teduh
selama 3 hari hingga kering. Daun pegagan yang telah kering dioven pada suhu
40-50°C selama 36 jam kemudian dihaluskan menggunakan blender. Bubuk yang
dihasilkan diayak menggunakan ayakan 60 mesh agar memperoleh bubuk yang
homogen. Bubuk yang didapatkan yaitu sebanyak 500 gram. Bubuk yang didapat
direndam dalam larutan etanol konsentrasi 96% pada wadah tertutup hingga
seluruh simplisia terendam atau tinggi etanol berkisar 2cm diatas permukaan
simplisia. Perendaman dilakukan selama 3 hari sambil sesekali diaduk dan
dilakukan penggantian pelarut setiap 1x24 jam. Selanjutnya, hasil rendaman
dilakukan penyaringan yang pertama menggunakan saringan teh kemudian
dilanjutkan menggunakan saringan yang lebih halus seperti kertas saring untuk
mendapatkan filtrat. Filtrat yang diperoleh dimasukkan kedalam rotary
evaporator pada suhu tidak lebih dari 60 derajat celcius untuk dilakukan
pemekatan hingga dihasilkan ekstrak yang kental (Sihombing, W. 2015).
Dosis ekstrak daun pegagan pada tikus yaitu 100 mg/kg berat badan secara
peroral (Tang. 1992). Dosis pemberian ekstrak daun pegagan pada tikus dengan
berat badan (BB) 200g yaitu:
BB tikus = 200g
Dosis tikus = 100 mg x 200 gr / 1000
= 20 mg / 200 gr BB tikus
= 0,1 mg / gr BB tikus
Dosis pegagan ~ Takaran lambung tikus
0,1 mg / gr BB ~ 0,02 ml / gr BB
1 ml aquades harus mengandung 5 mg ekstrak
2 ml / 200 gr BB tikus  kapasitas lambung

1 tikus = 2 ml ekstrak
Sehingga: 2 ml aquades ~ 2 x 5 = 10 mg ekstrak
2.11.3. Pengelompokan dan Perlakuan Hewan Coba

24 ekor tikus wistar jantan dibagi dalam 6 kelompok yaitu K(C-7), K(T-7),
K(C-14), K(T-14), K(C-28), K(T-28). Masing-masing kelompok terdiri dari 4 ekor tikus.
Pada hari pertama, tikus dianastesi general dengan injeksi ketamin di sekitar paha,
lalu dilakukan pencabutan gigi M1 kiri rahang bawah.
Dosis anastesi ketamin pada tikus yaitu 20-40 mg/kg berat badan
(Kusumawati. 2004).
Dosis yang digunakan = 20 – 40 mg/kg BB
= 20 – 40 mg x 200g/1000
= 20 – 40 mg x 0,2kg
= 4 – 8 mg
Konsentrasi ketamin yang digunakan pada penelitian yaitu 100mg/ 1ml. Sehingga,
dosis yang dibutuhkan yaitu:
Duration of action atau lama kerja ketamine pada tikus yaitu 15-25 menit pada
pemberian secara intramuscular (Yunani, dkk. 2015), sehingga diperlukan
penambahan xylazine untuk memperpanjang duaration of action dari obat
anastesi.
35
Kelompok K(C-7) :Pemberian larutan saline (NaCl 0,9%) sebanyak
2ml satu kali sehari secara intragastrik dengan
bantuan sonde lambung pada hari ke-1 sampai hari
ke-6. Selanjutnya, pada hari ke-7 dilakukan
euthanasia menggunakan eter untuk pengambilan
rahang bawah, kemudian dilanjutkan pembuatan
sediaan jaringan.

sediaan jaringan.

sediaan jaringan.
Kelompok K(T-7) :Pemberian ekstrak daun pegagan sebanyak 2ml

dengan dosis yang telah ditentukan satu kali sehari
secara intragastrik dengan bantuan sonde lambung
pada hari ke-1 sampai hari ke-6. Selanjutnya, pada
hari ke-7 dilakukan euthanasia menggunakan eter
untuk pengambilan rahang bawah, kemudian
dilanjutkan pembuatan sediaan jaringan.

2.11.4. Pembuatan Sediaan Jaringan

Tahapan pembuatan sediaan jaringan adalah sebagai berikut:
1. Pengambilan sampel sediaan
Pemotongan rahang bawah regio kiri tikus dari mesial molar pertama sampai
molar ketiga. Jaringan difiksasi menggunakan larutan formalin 10% 12-18
jam, tujuannya agar tidak terjadi autolisis, mempertahankan morfologi, serta
menghindari pertumbuhan bakteri dan jamur, kemudian jaringan dicuci pada
air yang mengalir.
2. Dekalsifikasi
Dekalsifikasi dilakukan selama 14 hari menggunakan larutan asam formiat
10%. Tujuan tindakan ini adalah untuk melepaskan bahan anorganik pada
tulang tanpa merusak kandungan protein di dalamnya.
3. Pemrosesan jaringan
Tahapan pemrosesan jaringan meliputi:
a. Dehidrasi
37
Dehidrasi merupakan penarikan air dari dalam jaringan yang telah
dimasukkan embedding cassette dengan menggunakan konsentrasi
rendah ke tinggi, tujuannya adalah untuk mengubah fase air menjadi
minyak. Dehidrasi dilakukan secara bertahap dimulai dengan alkohol
70% selama 15 menit, 80% selama 1 jam, 95% selama 2 jam, dan 100%
selama 3 jam.
b. Clearing
Proses clearing merupakan tahapan penjernihan jaringan dari bahan
alkohol maupun dehidran lain dalam jaringan agar digantikan oleh
molekul paraffin. Clearing dilakukan dengan menggunakan bahan xylol
sebanyak 3 kali pada tabung yang berbeda yaitu: selama 1 jam pada
tabung pertama dan 2 jam pada tabung kedua dan ketiga.
c. Impregnasi
Impregnasi merupakan proses infiltrasi bahan embedding yaitu paraffin
cair bersuhu 56-60 derajat celcius kedalam jaringan sebanyak 3 kali
masing-masing selama 2 jam.
d. Embedding
Proses penanaman jaringan kedalam suatu bahan embedding yaitu
paraffin. Tahap embedding yaitu:
1. Mempersiapkan alat cetak blok paraffin (base mould) yang diolesi
gliserin agar mempermudah pemisahan alat cetak dengan blok
paraffin.
2. Paraffin cair dituang ke dalam base mould, lalu jaringan dimasukkan
dengan bantuan pinset sehingga didapatkan penampang jaringan
dengan arah potong koronal.
3. Blok paraffin dilepas dari base mould
e. Penyayatan
Penyayatan dilakukan mengguakan mikrotom. Sebelum menyayat
jaringan, alat yang perlu disiapkan antara lain object glass yang diolesi
meyer egg alumin. Tahap penyayatan antara lain:
1. Membersihkan pisau mikrotom menggunakan kasa atau kertas saring
yang dibasahi xylol dengan arah tegak lurus.
2. Mengatur ketebalan sayatan yaitu 5µm.
3. Mengambil sayatan yang diperoleh menggunakan kuas lalu
diletakkan diatas waterbath pada temperatur tetap 56-58 derajat
celcius hingga sayatan mekar. Sayatan yang diambil adalah sayatan
yang terbaik.
4. Mengambil sayatan yang sudah mekar dengan object glass yang
diolesi meyer egg albumin, kemudian dikeringkan dengan suhu 30-
35 derajat celcius minimal selama 12 jam.
(Syafriadi, dkk. 2007)
f. Pewarnaan Preparat Jaringan
Pewarnaan dilakukan menggunakan Haematoksilin-Eosin. Tahapan
pewarnaannya sebagai berikut:
1. Preparat dimasukkan ke dalam xylol 2-3 menit lalu diulangi dengan
memasukkan kembali ke wadah yang berbeda selama 2-3 menit.
2. Dilakukan rehidrasi dengan larutan alkohol absolut sebanyak 2 kali
dan alkohol 95% 2 kali pada wadah yang berbeda masing-masing 2-
3 menit.
3. Preparat dibilas dengan air mengalir untuk menghilangkan kelebihan
alkohol 10-15 menit
4. Preparat diwarnai dengan Mayer’s Haematoksilin selama 10 menit
kemudian dibilas air mengalir 20 menit
5. Preparat direndam eosin selama 15 detik sampai 2 menit
6. Dilakukan dehidrasi kembali pada konsentrasi 95% dan absolute
sebanyak 2 kali masing-masing 2-3 menit pada wadah yang berbeda
7. Preparat dimasukkan ke dalam xylol masing-masing selama 3 menit
sebanyak 3 kali menggunakan wadah yang berbeda
8. Melakukan mounting dengan cairan entellan kemudian ditutup deck
glass
(Masruri, 2019)
39
3.7.5. Pengamatan dan Perhitungan Jumlah Sel Osteoblas
Pengamatan dilakukan pada pembesaran 400x menggunakan mikroskop
binokuler. Sel osteoblas dihitung oleh 3 orang pengamat menggunakan metode
double blind. Dalam setiap preparat, pengamat menghitung jumlah sel osteoblas
pada 3 lapang pandang yaitu sepertiga koronal, sepertiga tengah dan sepertiga
apikal kemudian hasil perhitungan jumlah sel osteoblas ditabulasi dan diambil
rata-ratanya. Data disajikan dalam bentuk tabel.
3.7.6. Analisis Data

Peneliti menggunakan software SPSS untuk menguji data yang diperoleh.
Dilakukan uji normalitas menggunakan uji Shapiro-Wilk dan uji homogenitas
menggunakan uji Levene. Jika data berdistribusi normal, analisis dilanjutkan
menggunakan metode statistik parametrik yaitu One-way Anova, lalu dilanjutkan
uji post hoc Least Sifgnificant Difference untuk melihat ada tidaknya perbedaan
antar kelompok.
3.8. Diagram Alur Penelitian
41
BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Penelitian
Berdasarkan hasil pengamatan menggunakan kamera optilab pembesaran

400x pada 24 sampel yang dilakukan di Laboratorium fakultas Kedokteran Gigi
Universitas Jember, didapatkan rata-rata jumlah osteoblas pada soket bekas
pencabutan gigi tikus wistar jantan pada hari ke 7, 14 dan 28 kelompok kontrol
dan kelompok perlakuan terlihat pada tabel 4.1 sebagai berikut:
Tabel 4.1 Rerata jumlah sel osteoblas pada kelompok kontrol dan kelompok
perlakuan
Mean ± SD
No. Kelompok
Hari ke-7 Hari ke-14 Hari ke-28
1. 6.83 11.47 18.39

Kontrol
2. 9.11 13.75 20.03
Perlakuan
Pada gambar tabel 4.1 menunjukkan bahwa rata-rata jumlah osteoblas

pada soket paska pencabutan gigi tikus pada kelompok kontrol secara berturut-
turut pada hari ke-7, hari ke-14 dan hari ke-28 yaitu 6.83, 11.47 dan 18.39.
Sedangkan rata-rata jumlah osteoblas pada soket paska pencabutan gigi tikus pada
kelompok perlakuan secara berturut-turut pada hari ke-7, hari ke-14 dan hari ke-
28 yaitu 9.11, 13.75, dan 20.03.
Rerata jumlah sel osteoblas pada kelompok kontrol dan kelompok
perlakuan apabila disajikan dalam bentuk diagram batang sebagai berikut:
Gambar 4.1 Diagram rata-rata jumlah sel osteoblas pada kelompok kontrol dan
kelompok perlakuan
4.2 Analisis Data
Data hasil penelitian terlebih dahulu diuji menggunakan uji normalitas
untuk mengetahui apakah data berdistribusi normal atau tidak dan uji homogenitas
untuk mengetahui apakah data homogen atau tidak. Uji normalitas yang
digunakan adalah uji Shapiro-Wilk Test dan didapatkan hasil nilai P>0,05 yang
artinya data yang diperoleh terdistribusi normal. Uji homogenitas yang digunakan
yaitu uji Levene Test. Hasil uji homogenitas didapatkan nilai signifikan yaitu
0,332 (P>0,05) sehingga dapat disimpulkan bahwa ragam dari semua kelompok
adalah homogen.
Berdasarkan hasil uji nornalitas dan uji homogenitas yang telah dilakukan,
maka uji beda yang digunakan adalah uji statistik parametrik yaitu uji One-way
Anova. Berdasarkan hasil uji One-way Anova diperoleh P=0,000 (P<0,05) dalam
hal ini terdapat perbedaan bermakna antara kelompok kontrol dan kelompok
perlakuan terhadap jumlah osteoblas.
Tabel 4.2 Nilai signifikansi uji SPSS

Uji Signifikansi
Shapiro-Wilk Test >0,05
43
Levene Test 0,332
One-way Anova 0,000
Untuk mengetahui lebih lanjut perbedaan pada masing-masing kelompok

maka dilanjutkan dengan uji post hoc Least Sifgnificant Difference (LSD).
Analisis data pada penelitian ini terdiri dari dua yaitu membandingkan antara
kelompok kontrol dan kelompok perlakuan pada masing-masing kelompok hari
yaitu hari ke-7, hari ke-14 dan hari ke-28 dan membandingkan antar kelompok
kontrol dan antar kelompok perlakuan.
Tabel 4.3 Nilai signifikansi uji beda LSD terhadap rata-rata jumlah osteoblas
antara kelompok kontrol dan kelompok perlakuan pada masing-
masing kelompok hari
Kelompok K(C-7) K(C-14) K(C-28)
K(T-7) *0,033 - -
K(T-14) - *0,034 -
K(T-28) - - 0,113
Berdasarkan hasil uji LSD pada uji beda rata-rata jumlah osteoblas antara
kelompok kontrol dan kelompok perlakuan pada masing-masing hari yang
tercantum dalam tabel 4.3 yaitu kelompok kontrol hari ke-7 dengan kelompok
perlakuan hari ke-7, kelompok kontrol hari ke-14 dengan kelompok perlakuan
hari ke-14 menunjukkan nilai signifikansi p<0,05 yang artinya terdapat perbedaan
bermakna antara kelompok kontrol hari ke-7 dengan kelompok perlakuan hari ke-
7, kelompok kontrol hari ke-14 dengan kelompok perlakuan hari ke-14.
Sedangkan pada kelompok kontrol hari ke-28 dengan kelompok perlakuan hari
ke-28 nilai signifikansi p>0,05 yang artinya tidak terdapat perbedaan yang
bermakna.
Berdasarkan hasil uji LSD pada uji beda terhadap rata-rata jumlah
osteoblas antar kelompok kontrol, didapatkan hasil signifikansi 0,000 (p<0,05)
antara kelompok kontrol hari ke-7 dengan kelompok kontrol hari ke-14, kelompok
kontrol hari ke-7 dengan kelompok kontrol hari ke-28, kelompok kontrol hari ke-
14 dengan kelompok kontrol hari ke-28 yang artinya terdapat perbedaan yang
signifikan pada rata-rata jumlah osteoblas antar kelompok kontrol. Hasil uji dapat
dilihat pada tabel 4.4 berikut.
antar kelompok kontrol
Kelompok K(C-7) K(C-14) K(C-28)
K(C-7) - *0,000 *0,000
K(C-14) - - *0,000
K(C-28) - - -
Berdasarkan hasil uji LSD pada uji beda terhadap rata-rata jumlah
osteoblas antar kelompok perlakuan, didapatkan hasil signifikansi 0,000 (p<0,05)
antara kelompok perlakuan hari ke-7 dengan kelompok perlakuan hari ke-14,
kelompok perlakuan hari ke-7 dengan kelompok perlakuan hari ke-28, kelompok
perlakuan hari ke-14 dengan kelompok perlakuan hari ke-28 yang artinya terdapat
perbedaan yang signifikan pada rata-rata jumlah osteoblas antar kelompok
perlakuan. Hasil uji dapat dilihat pada tabel 4.5 berikut.
antar kelompok perlakuan
Kelompok K(T-7) K(T-14) K(T-28)
K(T-7) - *0,000 *0,000
K(T-14) - - *0,000
K(T-28) - - -
Keterangan:
K(C-7) : Kelompok kontrol hari ke-7
K(T-7) : Kelompok perlakuan hari ke-7
45
* = beda signifikansi (p<0,05)
4.3 Pembahasan
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak

daun pegagan (Centella asiatica) terhadap jumlah osteoblast pada soket paska
pencabutan gigi. Pencabutan gigi dilakukan agar terjadi kerusakan jaringan,
selanjutnya dilihat dan dibandingkan respon perbaikan atau remodelling tulangnya
melalui penghitungan jumlah sel osteoblast yang ada di sekitar soket.
Penelitian ini menggunakan tikus wistar jantan yang terbagi menjadi 6

kelompok (K(C-7), K(T-7), K(C-14), K(T-14), K(C-28), K(T-28)). Keenam kelompok
merupakan model tikus yang mendapatkan tindakan ekstraksi gigi. Pemberian
ekstrak daun pegagan pada kelompok perlakuan diinterpretasikan sebagai
pemberian terapi paska pencabutan gigi. Pemberian aquadest pada kelompok
kontrol diinterpretasikan sebagai pasien yang tidak mendapatkan terapi sesudah
pencabutan gigi.
Hasil analisis statistik pada penelitian menunjukkan adanya peningkatan

jumlah sel osteoblas pada kelompok perlakuan jika dibandingkan dengan
kelompok kontrol secara signifikan pada hari ke-7 dan hari ke-14, namun tidak
signifikan pada hari ke-28. Hasil perhitungan rata-rata jumlah osteoblas kelompok
kontrol hari ke-7 yaitu 6.83, sedangkan pada kelompok perlakuan hari ke-7 yaitu
9.11. Hari ke-7 pasca pencabutan gigi masih terjadi proliferasi sel osteoblas serta
terbentuknya woven bone dimulai dari bagian tepi soket. Osteoblas ini akan
membantu proses mineralisasi soft callus dengan cara mensekresi matriks
(kolagen tipe l) yang nantinya akan menjadi woven bone. Uji LSD menunjukkan
bahwa antara kelompok perlakuan dan kelompok kontrol terdapat perbedaan yang
bermakna. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak daun pegagan mampu
meningkatkan proses proliferasi dan diferensiasi osteoblas.
Hari ke-14 pasca dilakukan pencabutan gigi terjadi aktivitas perubahan

woven bone menjadi lamellar bone oleh sel osteoblas. Aktivitas osteoblas dan
osteoklas akan mengubah tulang yang belum matang (woven bone) menjadi
lamellar bone. Osteoklas mampu merusak sel-sel yang rusak pada soket pasca
dilakukan pencabutan yang kemudian akan diganti oleh osteoblas untuk
membentuk tulang baru. Uji LSD pada hari ke-14 menunjukkan perbedaan yang
bermakna antara kelompok perlakuan dengan kelompok kontrol dimana gel
ekstrak daun binahong mampu mempercepat proliferasi osteoblas.
Sekitar minggu ke-3 pasca pencabutan gigi terlihat adanya spikula-spikula

yang memadat menjadi trabekula tulang. Pada minggu ke-3 pasca pencabutan
gigi, osteoblas sudah mulai terjebak didalam trabekula tulang dan terus berlanjut
hingga hari ke-28 pasca pencabutan gigi, selanjutnya osteoblast yang terjebak
akan membentuk osteoid. Saat osteoid terbentuk, beberapa sel osteoblas
terperangkap dalam osteoid dan selanjutnya disebut osteosit. Pada 4-6 minggu
sebagian besar alveolus dipenuhi woven bone. Uji LSD pada hari ke-28 antara
kelompok perlakuan dengan kelompok kontrol tidak terdapat perbedaan yang
bermakna. Hal ini dapat disebabkan karena pertumbuhan osteoblas yang mulai
stabil pada kelompok perlakuan dimana osteoblas sudah mulai terjebak didalam
matriks menjadi osteosit dibandingkan dengan kelompok kontrol yang masih terus
menunjukkan peningkatan lebih tinggi dimana deposisi matriks tulang oleh
osteoblas menjadi osteosit masih sedikit dibandingkan kelompok perlakuan.
Peningkatan rata-rata jumlah osteoblas pada kelompok perlakuan

dibandingkan dengan kelompok kontrol terjadi karena kandungan senyawa aktif
dalam ekstrak daun pegagan mampu mempercepat proses proliferasi dan
diferensiasi sel osteoblas. Kandungan beberapa senyawa ekstrak daun pegagan
memiliki aktifitas sebagai antiinflamasi dan antioksidan. Kandungan flavonoid,
47
triterpenoid dan saponin pada ekstrak daun pegagan berfungsi sebagai
antiinflamasi dengan menurunkan aktivitas mediator pro inflamasi seperti TNF-α,
IL-1β, IL-6. Sedangkan kandungan flavonoid dan tanin berfungsi sebagai
antioksidan.
Flavonoid berperan penting dalam menjaga permeabilitas serta

meningkatkan resistensi pembuluh darah kapiler. Flavonoid bekerja terutama pada
endotelium mikrovaskular untuk mengurangi terjadinya hiperpermeabilitas dan
edema. Mekanisme flavonoid dalam menghambat terjadinya inflamasi melalui
dua cara yaitu menghambat asam arakhidonat dan sekresi enzim lisosom dari sel
endothelial dan menghambat fase proliferasi dan fase eksudasi dari proses
inflamasi. Terhambatnya pelepasan asam arakhidonat dapat menyebabkan kurang
tersedianya substrat arakhidonat bagi jalur siklooksigenase dan lipooksigenase,
sehingga akhirnya akan menekan jumlah prostaglandin, tromboksan, prostasiklin,
endoperoksida, asam hidroksatetraienoat, dan leukotrin (Robbinson, 1995).
Penekanan jumlah agen kemotaktik tersebut menurunkan produksi mediator pro-
inflamasi sehingga menekan aktivasi Receptor Activator of Nuclear factor Kappa-
B Ligand (RANKL) selanjutnya menurunkan osteoklastogenesis sehingga
menstimulasi diferensiasi osteoblast (Sabir, 2003).
Adanya penurunan produksi mediator pro-inflamasi selain menekan

aktivasi RANKL juga menekan produksi dan migrasi komponen inflamasi.
Adanya komponen inflamasi dapat menyebabkan terjadinya stress oksidatif akibat
pembentukan Reactive Oxygen Species (ROS). Antioksidan yang dikandung
ekstrak daun pegagan mampu menekan efek destruktif radikal bebas dan
meningkatkan penyembuhan ketika terjadi kerusakan tulang (Sheweita, 2007).
Keterbatasan penelitian ini yaitu sulit untuk menyamakan besar lapang

pandang rongga tulang yang diamati. Selain itu, memiliki keterbatasan dalam
perhitungan jumlah sel osteoblas karena setiap tikus yang digunakan sebagai
hewan coba memiliki metabolisme dan diameter rongga-rongga tulang yang
berbeda sehingga jumlah sel osteoblas bervariasi.
BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, dapat
disimpulkan bahwa pemberian ekstrak daun pegagan (Centella asiatica)
mampu meningkatkan jumlah osteoblas pada soket alveolar paska
pencabutan gigi tikus wistar.
5.2 Saran
1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan mengamati sel lain
2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai manfaat ekstrak daun

pegagan pada kasus-kasus lain di bidang kedokteran gigi
3. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai toksisitas ekstrak daun

pegagan terhadap jaringan di sekitar soket gigi
49
DAFTAR PUSTAKA
Ardhiyanto, H. B. (2015). Stimulasi Osteoblas Oleh Hidroksiapatit Sebagai

Material Bone Graft Pada Proses Penyembuhan Tulang. Stomatocnatic-
Jurnal Kedokteran Gigi, 9(3), 162-164.
Arumugam T., M. Ayyanar, Y. J. K. Pillai, and T. Sekar. 2011. Phytochemical

Screening and Antibacterial Activity of Leaf and Callus Extracts of Centella
Asiatica. Bangladesh J. Pharmacol, vol. 6, pp. 55–60
Azhar, S.A., R.S. Praptiningsih, E.D. Agustin. 2016. Pengaruh Mendengarkan

Ayat Suci Al Quran Terhadap Tingkat Kecemasan Pasien sebelum Tindakan
Ekstraksi Gigi. ODONTO Dental Journal. Volume 3. Nomer 1: 55-59
Baek, K.H., K.W. Oh, W.Y. Lee, S.S. Lee, M.K. Kim, H.S. Kwon. 200.
Association of oxidative stress with postmenopausal osteoporosis and the
effects of hydrogen peroxide on osteoclast formation in human bone
marrow cell cultures. Calcified Tissue International. Volume 87(3), 226-
235.
Bermawie, N., S. Purwiyanti, dan Mardiana. 2008. Keragaan sifat morfologi,
hasil, dan mutu plasma nutfah pegagan (Centella asiatica (L.) Urban).
Bulletin Penelitian Tanaman Rempah dan Obat XIX (1): 1-18.
Bermawie, N., S.D.I. Meynarti, S. Purwiyanti, dan Suryatna. 2006. Karakterisasi
dan evaluasi plasma nutfah pegagan. Laporan Akhir Tahun. Balai Penelitian
Tanaman Rempah dan Obat, Bogor. 25 hlm.
Bikle, D.D. 2008 Integrins, insulin like growth factors, and the skeletal response
to load. Osteoporos Int. Volume 19: 9: 1237-46
Broughton II G., J.E. Janis, C.E. Attinger. 2006. Wound healing: an overview.
Plast Reconstr Surg. 117 (Suppl): 1eS-32eS.
Chen, D., M. Zhao, dan G.R. Mundy. 2004. Bone morphogenetic proteins.
Growth Factors. 22 :233–241
Dalimartha, S. 2000. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia Jilid 2. Trubus Agriwidya,
Jakarta. 214 hlm.
Dalimartha, S. 2006. Atlas Tumbuhan Indonesia. Cetakan VIII. Trubus
Agriwidaya., Jakarta. 214 hlm.
Dewi, N.P.A.L., D.N.A. Susanti, S. Kusumadewi. 2020. Gambaran Penggunaan
Bahan Anestesi Lokal pada Praktek Dokter Gigi Kota Denpasar. Bali Dental
Journal, Volume 4, Nomor 1: 21-26
Domazetovic, V., G. Marcucci, T. Lantomasi, M. L. Brandi dan M. T. Vincenzini.
Oxidative stress in bone remodeling: role of antioxidants. Clinica Case In
Mineral Bone Metabolism. 2017; 14(2):209-216.
Faten Khorshid, S. S. (2010). Plectranthus tenuiflorus (Shara) Promotes Wound
Healing: In vitro and in vivo Studies. Int. J. of Botany, 69-80
Fithri. Z., A. Rochim,. Dan Z. Cholid. 2017. Distribusi Pencabutan Gigi
Berdasarkan Karakteristik Sosiodemografi pada Pasien RSGM Universitas
Jember Periode Januari-Desember 2014. E-Journal Pustaka Kesehatan.
5(1).
Fragiskos D.F. 2007. Oral surgery. Greece: Springer, Page: 73-93.
Frisca, Sardjono, C.T., dan Sandra F., 2009, Angiogenesis: Patofisiologi dan
Aplikasi Klinis, JKM, Vol 8 (2): 174-87.
Ganong. 2015. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran, Edisi 24. EGC: Jakarta.
Guo S, DiPietro LA. Factors affecting wound healing. J Dent Res 2010; 89(3):
219-229.
Gurtner G.C. 2007. Wound healing: normal and abnormal. In: Thorne CH,
Beasley RW, Aston SJ, Barlett SP, Gurtner GC, Spear SL, editors. Grabb
and Smith’s plastic surgery. 6th ed. Philadelphia: Lippincott Williams &
Wilkins; p. 15-22.
Hamzah Z., dan N. Kartikasari. 2015. Pencabutan Gigi Irrasional Mempercepat
Penurunan Struktur Anatomis dan Fungsi Tulang Alveolar. Stomatognatic
(Jurnal Kedokteran Gigi Unej) Vol. 12 No. 2, 2015: 61-66
Handayani, B., & Brahmanta, A. (2018). Oosteoblas Number in Tenstion Area by
Giving Propolos Extraxt as Oothodontic Relaps Prevention. Denta Jurnal
Kedokteran Gigi, 12(1), 28.
Hanemann U., and V. McKay. 2015, Lifelong literacy: Towards a new agenda.
Int. Rev. Educ., vol. 61, no. 3, pp. 265–272
51
Hapsari dan Kunti. 2014. Efektivitas Salep Ekstrak Etanol Daun Kamboja
(Plumeria accuminata Ait) terhadap Penyembuhan Luka Gingiva Melalui
Pengamatan Sel PMN (Polimorfonuklear). Skripsi. Yogyakarta: Universitas
Muhammadiyah Yogyakarta.
Haryono, R.S., Suharjono, dan S. Hidayati. 2014. Lama Pembekuan Darah
Menggunakan Spongostan dan Alvogyl pada Pasien Post Odontectomy Gigi
Molar Tiga Bawah di Rumah Sakit. Jurnal Gigi dan Mulut Vol. 1, No. 2,
ISSN : 2338-963X
Hasanah, M., F. Tasriyanti, dan D. Darwis. 2015. Aktivitas Antioksidan Ekstrak
Etanol Daun Benalu Sawo (Helixanthere sp.) Hasil Ekstraksi Soxhletasi dan
Perkolasi. Prosiding SnaPP. 1(1): 189-194.
Hidayati, A. N., C. Suryawati, dan A. Sriatmi. 2014. Analisis Hubungan
Karakteristik Pasien Dengan Kepuasan Pelayanan Rawat Jalan Semarang
Eye Center (SEC) Rumah Sakit Islam Sultan Agung Semarang. Jurnal
Kesehatan Masyarakat (e-Journal), Volume 2, Nomor 1
Hupp JR, Ellis E, Tucker MR. Contemporary oral and maxillofacial surgery. 6th
ed. Missouri: Elsevier, 2014: 44-7, 91-2
Iknes, S., W. Sunny dan J.R.K. Sonny. 2012. Peran Estrogen pada Remodeling
Tulang. Jurnal Biomedik. 4(3): S18-28
Janqueira, L.C., J. Corneiro. 2007. Histologi Dasar Edisi 10. EGC: Jakarta.
Janssens K, Dijke P, Janssens S, & Hul W. 2005. Transforming Growth Factor-β1
to the Bone. Endocrine Reviews, 26:743-774
Januwati, M., S. Sudiatso, dan S.W. Andriani. 2002. Pengaruh dosis pupuk
kandang dan tingkat populasi terhadap pertumbuhan dan produksi pegagan
(Centella asiatica (L.) Urban) di bawah tegakan kelapa (Cocos nucifera L.).
Jurnal Bahan Alam Indonesia 1(2): 49-57.
Kalangi, S.J.R., 2011, Peran Integrin pada Angiogenesis Penyembuhan Luka,
Cermin Dunia Kedokteran, 38(3): 177-181.
Karapanagioti E., and A. Assimopoulou. 2016. Naturally occurring wound healing
agents: An evidence-based review. Curr Med Chem, vol. 23, no. 20, pp.
3285–3321
Karsenty G & Wagner EF. 2002. Reaching a genetic and molecular understanding
of skeletal development. Dev Cell, 2, 389–406
Kasagi S & Chen W. 2013. Review TGF-beta1 on Osteoimmunology and The
Bone Component Cells. Cell & Bioscience 1-7
Kaya, G., G. Yapici., Z. Savas., dan M. Gungormus. 2011. Comparison of
Alvogyl, SaliCept Patch, and Low-Level Laser Therapy in the Management
of Alveolar Osteitis. American Association of Oral and Maxillofacial
Surgeons. 6(9): 1574-1576
Kristiani, N. N., Kusumah, E. D., dan Lailani, P. K. 2009. Analisis Fitokimia dan
Penampilan Polapita Protein Tanaman Pegagan (Centella asiatica) Hasil
Konsentrasi In Vitro. Bul. Littro, vol. 20, hh.11-20
Kurniawati, Atik., Wahyukundari, Melok Aris., Astuti, Syafira Dwi. 2020. Potensi
ekstrak daun ungu dalam menurunkan jumlah sel osteoklas tikus yang
diinduksi Porphyromonas gingivalis. Cakradonya Dental Journal. 12 (2) :
75-82
Kusumawati, D. 2004. Bersahabat dengan Hewan Coba. Yogyakarta: Gajah
Mada University Press.
Lalani ZS. 2002. Characterization of healing tissue in a tooth extraction socket in
a rabbit model. Texas Medical Center. Dissertations.
Lande, R., B.J. Kepel, dan K.V. Siagian. 2015. Gambaran Faktor Risiko dan
Komplikasi Pencabutan Gigi di Rsgm PSPDG-FK UNSRAT. Jurnal e-GiGi
(eG), Volume 3, Nomor 2, Hal: 467-481
Landen, N. X., Li, D., & Ståhle, M. (2016). Transition from inflammation to
proliferation: a critical step during wound healing. Cellular and Molecular
Life Sci., 73(20), p.3861–3885. https://doi.org/10.1007/s00018-016-2268-0
Lasmadiwati, E.M.M Herminati, dan Y.H. Indriani. 2004. Pegagan Meningkatkan
Daya Ingat, Membuat Awet Muda, Menurunkan Gejala Stres dan
Meningkatkan Stamina. Seri Agrisehat. Penerbit Penebar Swadaya, Jakarta.
II + 69 hlm.
Leba, M. A. U. 2017. Buku Ajar Ekstraksi dan Real Kromatografi. Yogyakarta:
Penerbit Deepublish.
Luu H, Kraut D, Graves D, Gerstenfled L. 2008. Diabetes interferes with the bone
formation by affecting the expression of transcription factors that regulate
the osteoblasts differentiation. Endocrinology.144:352-64
MacKay N & Miller A. 2003. Nutritional Support for Wound Healing. Alternative
Medicine Review, 8(4), 359-372
Maeda S, Dean DD, Gomez R, Schwartz Z & Boyan BD. 2002. The First Stage of
Transforming Growth Factor Beta1 Activation is Release of The Large
Latent Complex from The Extracellular Matrix of Growth Plate
Chondrocytes by Matrix Vesicle Stromelysin-1 (MMP-3). Calcif Tissue Int,
70(1), 54–65
53
Masruri, Ahmad. 2019. Potensi Bubuk Kulit Kopi Arabika (Coffea arabica L.)
Berpotensi Meningkatkan Jumlah Sel Fibroblas Pasca Pencabutan Gigi
pada Tikus Wistar Jantan. Fakultas Kedokteran Gigi. Universitas Jember
Mohamed MAH, Younis WH, Yaseen NY. 2013. The effect of autologous bone
marrow-derived stem cells with estimation of molecular events on tooth
socket healing in diabetic rabbits (Immunohistochemical study). J Bagh
College Dentistry Vol. 25(Special Issue 1), June
Mukhriani. 2014. Ekstraksi, pemisahan senyawa, dan identifikasi senyawa aktif.
Jurnal Kesehatan. 7(2): 361-7.
Musyarofah, N. 2006. Respons tanaman pegagan (Centella asiatica L. Urban)
terhadap pemberian pupuk alami di bawah naungan. Skripsi. Departemen
Budidaya Pertanian Fakultas Pertanian IPB, Bogor.
Myers W.T., M. Leong, L.G. Phillips. 2007. Optimizing the patient for surgical
treatment of the wound. Clin Plast Surg. 34(4): 607-20.
Nignsih, J.R., T. Haniastuti, dan J. Handajani. 2019. Re-epitelisasi Luka Soket Pasca
Pencabutan Gigi Setelah Pemberian Gel Getah Pisang Raja (Musa
sapientum L) Kajian Histologis pada Marmut (Cavia cobaya). JIKG (Jurnal
Ilmu Kedokteran Gigi) Vol. 2 No. 1
Nignsih, J.R., T. Haniastuti,dan J. Handajani. 2019. Re-Epitelisasi Luka Soket
Pasca Pencabutan Gigi Setelah Pemberian Gel Getah Pisang Raja (Musa
Sapientum L) Kajian Histologis Pada Marmut (Cavia Cobaya). JIKG
(Jurnal Ilmu Kedokteran Gigi) Vol. 2 No. 1
Noor, M.M. dan N.M. Ali. 2004. Kesan in vivo ekstrak daun Centella asiatica ke
atas histologi [testis] dan kualiti sperma mencit. Sains Malaysiana 33(2): 97-
103.
Notoatmodjo, S. 2007. Metodologi Penelitian Kesehatan. Jakarta: PT Rineka
Cipta
Nowwarote N., T. Osathanon, P. Jitjaturunt, S. Manopattanasoontorn, and P.
Pavasant. 2013. Asiaticoside induces type I collagen synthesis and
osteogenic differentiation in human periodontal ligament cells. Phyther.
Res. vol. 27, no. 3, pp. 457–462
Prasetyono, T.O.H. 2009. General concept of wound healing, revisited. Med J
Indones, Vol.18, No. 3, July- September
Pratiknya A.W. 2003. Dasar-dasar Metodologi Penelitian Kedokteran dan
Kesehatan. Ed. 1, Cetakan 5. Jakarta: PT Raja Grafindo Persada
Primihastuti D, Ali MM & Kalsum U. Pengaruh Ekstrak Etanol Pegagan (Centella
asiatica) Terhadap Ossifikasi Tulang dan Osteoklastogenesis pada Model
Stunting Larva Zebrafish Model Stunting. 2018. Jurnal AcTion: Aceh
Nutrition Journal Vol. 3 No. 2
Ramadhan, S.N., R. Rayit, dan Ematrisy. 2015. Uji antibakteri ekstrak daun
pegagan terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Salmonella typhi
dengan metode Bioautografi. Jurnal Kesehatan Andalas 4(1): 203-206.
Riset Kesehatan Dasar (Riskesdas). Kementerian kesehatan Republik Indonesia.
2018. Available from:
http://www.depkes.go.id/resources/download/infoterkini/materi_rakorpop_2
018/hasil %20riskesdas%202018.pdf
Sagung A.P.D. 2013. Dental Extraction Technique using Difficulty. Jurnal
Kesehatan Gigi. 1(2):115-119
Samson, M., D.C. Button, A. Chaouachi, dan D.G. Behm. 2012. Effects of
dynamic and Static Stretching within General Activity Specific warmup
protocols. Jurnal of Sports science and medicine. Volume 11(2): 279–285.
Shetty V & Bertolami C. 2004. Wound healing In Peterson L Principles of oral
and maxillofacial surgery. Ontario: BC Decker
Sihombing, I., Wangko, S., & Kalangi, S. J. (2012). Peran estrogen pada
remodeling tulang. Jurnal Biomedik: JBM, 4(3).
Sihombing, Marice, dkk. 2011. Perubahan Nilai Hematologi, Biokimia Darah,
Bobot Organ dan Bobot Badan Tikus Putih pada Umur Berbeda. Jurnal
Veteriner Vol. 12 No. 1: 58-64. ISSN : 1411 – 8327
Sihombing, W., M. Akmal, S. Wahyuni, I. Nasution, Rinidar, dan Hamdan. 2015.
Efek Ekstrak Daun Pegagan (Centella asiatica (L.) Urban) Terhadap
Perkembangan Sel Spermatid Tikus (Rattus norvegicus). Jurnal Medika
Veterinaria, Vol. 9 No. 1
Song J., dkk. 2012. Madecassoside suppresses migration of fibroblasts from
keloids: involvement of p38 kinase and P13K signaling pathways. Burns,
vol. 38, pp. 677–684
Sudarsono, P., Gunawa, dan D. Wahyono. 2002. Hasil penelitian sifat-sifat
pegagan. Pusat Studi Obat Tradisional Universitas Gadjah Mada,
Yogyakarta.
Susanty,S., dan F. Bachmid. 2016. Perbandingan Metode Ekstraksi Maserasi dan
Refluks terhadap Kadar Fenolik dari Ekstrak Tongkol Jagung (Zea mays l.).
Jurnal Konversi. 5(2):87-93.
55
Sutardi. 2008. Kajian waktu panen dan pemupukan fosfor terhadap pertumbuhan
dan produksi asiatikosida tanaman pegagan (Centella asiatica L. Urban) di
dataran tinggi. Tesis. Program Studi Agronomi, Sekolah Pascasarjana
Institut Pertanian Bogor.
Sutardi. 2016. Kandungan Bahan Aktif Tanaman Pegagan dan Khasiatnya Untuk
Meningkatkan Sistem Imun Tubuh. Jurnal Litbang Pertanian Vol. 35 No.
Hal. 121-130
Syafriadi M., B. Kusumawardani, D. Setyorini, dan R. Joelianto. 2007. Petunjuk
Praktikum Patologi Anatomi: Degenerasi dan Rahang. Tidak Diterbitkan.
Buku Petunjuk Praktikum. Jember: Fakultas Kedokteran Gigi Universitas
Jember.
Tang, W., Eisenbrand, G. 1992. Chinese Drugs Of Plant Origin. Berlin:
SpringerVerlag. p.1011-14
Temrangsee P., S. Kondo, and A. Itharat. 2011. Antibacterial activity of extracts
from five medicinal plants and their formula against bacteria that cause
chronic wound infection. J. Med. Assoc. Thail., vol. 94, pp. 166–170
Tjitrosoepomo, G. 2000. Morfologi Tumbuhan. Yogyakarta: Gadjah Mada
University Press.
Ueno C., T.K. Hunt, H.W. Hopf. 2006. Using physiology to improve surgical
wound outcomes. Plast Reconstr Surg. 117 (Suppl): 59S-71S.
Van Steenis C, G, G, J. 2006. Flora. PT Pradnya paramita: Jakarta.
Velnar T, Balley T, Smrkolj V. The wound healing process: An overview of the
cellular and molecular mechanisms. The Journal of International Medical
Research 2009; 37: 1528-42.
Werner S, G. R. (2003). Regulation of wound healing by growth factor and
cytokines. Physiol Rev 83, 835-870.
Wiantari, N.P.N., P.I. Anggraeni, S.A. Handoko. 2018. Gambaran Perawatan
Pencabutan Gigi dan Tingkat Pengetahuan Masyarakat tentang Kesehatan
Gigi dan Mulut di Wilayah Kerja Puskesmas Mengwi II. Bali Dental
Journal, Volume 2, Nomor 2: 100-104
Winarto, W.R. dan M. Surbakti. 2003. Khasiat dan Manfaat Pegagan. Agromedia
Pustaka, Jakarta.
Wray, David; Stenhouse, David; Lee, David. 2003. Textbook of General and Oral
Surgery. London: Chuchill Livingstone.
Wuri, S.M. 2016. “Efektivitas Ekstrak Etanol Daun Bayam Merah sebagai
Hepatoprotektor terhadap Kadar ALP Serum Mencit yang Diinduksi
Isoniazid”. Skripsi. Jember. Universitas Jember.
Yasurin P., M. Sriariyanun, and T. Phusantisampan. 2016. Review:
Bioavailability Activity of Centella asitica. KMUTNB Int J Appl Sci
Technol, vol. 9, no. 1, pp. 1–9
Yunani, R., E. H. Mudji, dan D. Apritya. 2015. Perbedaan Efektivitas
Anestetikum Antara Zoletil-Acepromacin dan Ketamin-Acepromacin Pada
Tikus Putih (Rattus Norvegicus). Jurnal Kajian Veteriner. 3(2): 113-119.
Zahara, E., E. Nuraenah, T. Yuliyani, Darwitri, H. Khotimah, U. Kalsum, I. W. A.
Wiyasa, N. Ramli, A. H. Al-Rahmad, dan M. M. Ali. 2018. Ekstrak Ethanol
Pegagan (Centella Asiatica) Meningkatkan Osifikasi Tulang dan Panjang
Badan Larva Zebrafish (Danio Rerio) Model Stunting Usia 9 Hari Pasca
Fertilisasi. Jurnal AcTion: Aceh Nutrition Journal (3)2: 95-102
Zhao GQ. 2003. Consequences of knocking out BMP signaling in the mouse.
Genesis. 35:43–56.
Robbinson Trevor. 1995. „”The Basic Of Higher Plants 6th Edition”. Disadur
Padmawinata, K. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Bandung : ITB.
Sheweita, Khoskhal SAKI. Calcium metabolism and oxidative stress in bone
fractures: Role of antioxidants. Current Drug Metabolism. 2007; 8: 519-25.
57
Lampiran A. Perhitungan Besar Sampel
Besar sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah berdasarkan
rumus sebagai berikut (Daniel, 2005)
Keterangan:
n = besar sampel minimum
Z = nilai Z pada tingkat kesalahan tertentu (α); jika α = 0,05 maka
nilai Z = 1,96 (2-tailed) dan Z = 1,64 (1-tailed)
σ = standard deviasi penelitian sejenis
α = kesalahan yang masih ditoleransi
Pada penelitian ini nilai 𝜎 diasumsikan sama dengan nilai d (𝜎 = d), hal ini
dikarenakan bahwa nilai 𝜎2 jarang sekali diketahui. Maka hasil perhitungan besar
sampel adalah sebagai berikut:
n = (1,96)2 . 𝜎2
𝑑2
n = (1,96)2
n = 3,84 = 4
Jadi, jumlah sampel minimum yang harus digunakan adalah 4 sampel untuk
masing-masing kelompok. Penelitian ini menggunakan 24 ekor tikus sebagai
sampel, yang terbagi ke dalam 2 kelompok yang masing-masing terdiri dari 12
ekor tikus.
Lampiran B. Perhitungan Dosis Ekstrak Daun Pegagan

Dosis ekstrak daun pegagan pada tikus yaitu 100 mg/kg berat badan secara
peroral (Tang. 1992). Dosis pemberian ekstrak daun pegagan pada tikus dengan
berat badan (BB) 200g yaitu:
BB tikus = 200g
Dosis tikus = 100 mg x 200 gr / 1000
= 20 mg / 200 gr BB tikus
= 0,1 mg / gr BB tikus
Dosis pegagan ~ Takaran lambung tikus
0,1 mg / gr BB ~ 0,02 ml / gr BB
1 ml aquades harus mengandung 5 mg ekstrak
2 ml / 200 gr BB tikus  kapasitas lambung

1 tikus = 2 ml ekstrak
Sehingga: 2 ml aquades ~ 2 x 5 = 10 mg ekstrak
Lampiran C. Dosis Ketamin

Dosis anastesi ketamin pada tikus yaitu 20-40 mg/kg berat badan
(Kusumawati. 2004).
Dosis yang digunakan = 20 – 40 mg/kg BB
= 20 – 40 mg x 200g/1000
= 20 – 40 mg x 0,2kg
= 4 – 8 mg
Konsentrasi ketamin yang digunakan pada penelitian yaitu 100mg/ 1ml. Sehingga,
dosis yang dibutuhkan yaitu:
59
Lampiran D. Surat Identifikasi Tanaman
Lampiran E. Kode Etik
61
Lampiran F. Alat dan Bahan
Lampiran F.1. Alat
Kertas saring
Timbangan Erlenmeyer
Blender
Maserator Oven
Gelas ukur Rotary evaporator
Disposable syringe
Handscoon Masker Pinset
Sonde halfmoon Escavator kecil Papan bedah Gunting bedah

Scalpel dan blade Arteri klem Sonde lambung
Dental rat chair
Embedding
Kandang tikus Wadah jaringan Base mould
cassete
paraffin
63
Waterbath
Automatic Tissue Mikrotom Kuas

Processor
Object glass Deck glass
Slide warmer
Rak pengecatan
Mikroskop Kamera optilab

binokuler
Lampiran F.2. Bahan
Ekstrak Daun Tikus wistar Aquadest steril Makanan tikus

Pegagan
Xylazine Eter chloride
Formalin 10%
Ketamin
Asam formiat Paraffin Gliserin
10%
Alkohol
Maayer’s Eosin
Haematoxilin- Xylol
haematoksilin
Eosin
Minyak Emersi
Lampiran G. Perlakuan Hewan Coba
Injeksi ketamin Pencabutan gigi tikus
65
Lampiran H. Gambaran Histologi
Kontrol hari ke-7
Perlakuan hari ke-7
Kontol hari ke-14

Perlakuan hari ke-14
Kontrol hari ke-28
Perlakuan hari ke-28
67
Lampiran I. Hasil Perhitungan Sel Osteoblast
1
Lampiran J. Analisis Data
Tests of Normality
KELOMP Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
OK Statistic df Sig. Statistic df Sig.
RATA-RATA K(C-7) .182 4 . .974 4 .864
JUMLAH K(T-7) .227 4 . .944 4 .676
K(C-14) .185 4 . .972 4 .855
K(T-14) .312 4 . .806 4 .113
K(C-28) .315 4 . .852 4 .234
K(T-28) .281 4 . .904 4 .450
a. Lilliefors Significance Correction
Test of Homogeneity of Variances

Levene Statistic df1 df2 Sig.
RATA-RATA Based on Mean 1.238 5 18 .332
JUMLAH Based on Median .704 5 18 .628
Based on Median and with .704 5 8.198 .636
adjusted df
Based on trimmed mean 1.086 5 18 .401
ANOVA
RATA-RATA JUMLAH
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 535.870 5 107.174 55.363 .000
Within Groups 34.845 18 1.936
Total 570.716 23
Multiple Comparisons
Dependent Variable: RATA-RATA JUMLAH
LSD
(I) (J) 95% Confidence Interval
KELOM KELOM Mean Difference
POK POK (I-J) Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound
K(C-7) K(T-7) -2.27500* .98383 .033 -4.3420 -.2080
K(C-14) -4.66250* .98383 .000 -6.7295 -2.5955
K(T-14) -6.91750* .98383 .000 -8.9845 -4.8505
K(C-28) -11.55500* .98383 .000 -13.6220 -9.4880
K(T-28) -13.19250* .98383 .000 -15.2595 -11.1255
K(T-7) K(C-7) 2.27500* .98383 .033 .2080 4.3420
K(C-14) -2.38750* .98383 .026 -4.4545 -.3205
K(T-14) -4.64250* .98383 .000 -6.7095 -2.5755
K(C-28) -9.28000* .98383 .000 -11.3470 -7.2130
K(T-28) -10.91750* .98383 .000 -12.9845 -8.8505
K(C-14) K(C-7) 4.66250* .98383 .000 2.5955 6.7295
K(T-7) 2.38750* .98383 .026 .3205 4.4545
K(T-14) -2.25500* .98383 .034 -4.3220 -.1880
K(C-28) -6.89250* .98383 .000 -8.9595 -4.8255
K(T-28) -8.53000* .98383 .000 -10.5970 -6.4630
K(T-14) K(C-7) 6.91750* .98383 .000 4.8505 8.9845
K(T-7) 4.64250* .98383 .000 2.5755 6.7095
K(C-14) 2.25500* .98383 .034 .1880 4.3220
K(C-28) -4.63750* .98383 .000 -6.7045 -2.5705
K(T-28) -6.27500* .98383 .000 -8.3420 -4.2080
K(C-28) K(C-7) 11.55500* .98383 .000 9.4880 13.6220
K(T-7) 9.28000* .98383 .000 7.2130 11.3470
K(C-14) 6.89250* .98383 .000 4.8255 8.9595
K(T-14) 4.63750* .98383 .000 2.5705 6.7045
K(T-28) -1.63750 .98383 .113 -3.7045 .4295
K(T-28) K(C-7) 13.19250* .98383 .000 11.1255 15.2595
K(T-7) 10.91750* .98383 .000 8.8505 12.9845
K(C-14) 8.53000* .98383 .000 6.4630 10.5970
K(T-14) 6.27500* .98383 .000 4.2080 8.3420
K(C-28) 1.63750 .98383 .113 -.4295 3.7045
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

REVISI 5 Kurnia Nada

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

REVISI 5 Kurnia Nada

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

PENGARUH EKSTRAK DAUN PEGAGAN (Centella asiatica) TERHADAP

JUMLAH OSTEOBLAS PADA PROSES PENYEMBUHAN LUKA

Kurnia Nada Yulian Saputri

FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI

Kurnia Nada Yulian Saputri

FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI

Skripsi ini saya persembahkan kepada:

Saya yang bertanda tangan dibawah ini:

Jember, Maret 2022

Kurnia Nada Yulian Saputri

PENGARUH EKSTRAK DAUN PEGAGAN (Centella asiatica) TERHADAP

Kurnia Nada Yulian Saputri

Dosen Pembimbing Utama : Dr. drg. Supriyadi, M.Kes

Skripsi berjudul “Pengaruh Ekstrak Daun Pegagan (Centella Asiatica) terhadap

Penguji Ketua Penguji Anggota

drg. Zainul Cholid, Sp.BM drg. Nadie Fatimatuzzahro, MDSc

Pembimbing Utama Pembimbing Pendamping

Dr. drg. Supriyadi, M.Kes Dr. drg. Izzata Barid, M.Kes

PERSETUJUAN PEMBIMBING .............................................................................

DAFTAR ISI ........................................................................................................ viii

DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. xi

DAFTAR TABEL ................................................................................................. xii

BAB 1. PENDAHULUAN ..................................................................................... 1

1.1.Latar Belakang ......................................................................................... 1

1.2.Rumusan Masalah .................................................................................... 3

1.3.Tujuan Penelitian ..................................................................................... 3

1.4.Manfaat Penelitian ................................................................................... 3

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................ 5

2..1. Pencabutan Gigi ..................................................................................... 5

2.1.1. Komplikasi Pencabutan Gigi ........................................................ 6

2.2. Penyembuhan Luka ................................................................................ 7

2.3. Penyembuhan Luka Pencabutan Gigi ................................................... 18

2.4. Tanaman Pegagan (Centella asiatica) .................................................. 20

2.4.1. Klasifikasi Tanaman Pegagan ................................................... 22

2.4.2. Deskripsi dan Morfologi .................................................................

2.4.3. Persyaratan Tumbuh .......................................................................

2.4.4. Kandungan Bahan Bioaktif ........................................................ 23

2.5. Ekstraksi ............................................................................................... 24

2.6. Kerangka Konsep Penelitian................................................................. 27

2.7. Penjelasan Kerangka Konsep Penelitian .............................................. 28

2.8. Hipotesis ............................................................................................... 28

BAB 3. METODE PENELITIAN......................................................................... 29

3.2.Tempat dan Waktu Penelitian ................................................................ 29

3.2.1.Tempat Penelitian ........................................................................ 29

3.2.2.Waktu Penelitian ......................................................................... 29

3.3.Sampel Penelitian .................................................................................. 30

3.3.2.Besar Sampel ............................................................................... 30

3.4.1.Variabel Bebas ............................................................................. 31

3.4.2.Variabel Terikat ........................................................................... 31

3.4.3.Variabel Terkendali .........................................................................

3.5.Definisi Operasional .............................................................................. 31

3.5.1.Ekstrak Daun Pegagan ................................................................. 31

3.5.2.Sel Osteoblas ............................................................................... 31

3.5.3.Jumlah Sel Osteoblas .......................................................................

3.5.4.Gambaran Histopatologi ..................................................................

3.6.Alat dan Bahan Penelitian ..................................................................... 32

3.6.1.Alat Penelitian ............................................................................. 32

3.6.2.Bahan Penelitian .......................................................................... 33

3.7.Prosedur Penelitian ................................................................................ 34

3.7.1.Persiapan Hewan Coba ................................................................ 34

3.7.2.Pembuatan Ekstrak Daun Pegagan .............................................. 34

3.7.3.Pengelompokan dan Perlakuan Hewan Coba .............................. 35

3.7.4.Pembuatan Sediaan Jaringan ....................................................... 37

3.7.5.Pengamatan dan Perhitungan Jumlah Sel Osteoblas ................... 40