PEMERIKSAAN GRANULA BASOFIL PADA SEDIAAN APUS DARAH

TEPI (SADT) MENGGUNAKAN PEWARNAAN GIEMSA DAN WRIGHT

USULAN KARYA TULIS ILMIAH

Diajukan sebagai salah satu syarat menyelesaikan Program Studi Diploma III Jurusan
Teknologi Laboratorium Medis Poltekkes Kemenkes Bandung

Disusun Oleh :

SHAFA PUTRI GUNAWAN

P17334119083

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA

POLTEKKES KEMENKES BANDUNG

JURUSAN TEKNOLOGI LABORATORIUM MEDIS

2022
 Yang bertanda tangan di bawah ini menyatakan bahwa :
Usulan Karya Tulis Ilmiah dengan judul

PEMERIKSAAN GRANULA BASOFIL PADA SEDIAAN APUS DARAH

TEPI (SADT) MENGGUNAKAN PEWARNAAN GIEMSA DAN WRIGHT

Disusun oleh :

SHAFA PUTRI GUNAWAN

NIM : P17334119083

Telah diperiksa dan disetujui untuk disajikan pada sidang

Usulan Karya Tulis Ilmiah

Menyetujui,
Pembimbing

Nina Marliana, S.Pd. M.Biomedik

NIP. 196206061983032003

Mengetahui,
Ketua Jurusan Teknologi Laboratorium Medis

Entuy Kurniawan, S.Si, M.KM

NIP. 196811111992031001

i
 Laporan Karya Tulis Ilmiah ini telah diujikan pada sidang akhir

Program Studi Diploma III Teknologi Laboratorium Medis

Politeknik Kesehatan Kemenkes Bandung

Tanggal : 28 April 2022

PEMERIKSAAN GRANULA BASOFIL PADA SEDIAAN APUS DARAH

TEPI (SADT) MENGGUNAKAN PEWARNAAN GIEMSA, WRIGHT DAN
WRIGHT-GIEMSA

Disusun oleh :

SHAFA PUTRI GUNAWAN

NIM : P17334119083

Penguji : Tanda Tangan

Ketua : Nina Marliana, S.Pd. M.Biomedik

NIP. 196206061983032003

Penguji I : Adang Durachim, S.Pd. M.Kes

NIP. 196509221990031003

Penguji II : Dr. Betty Nurhayati, M.Si

NIP. 196607271986032015

ii
 KATA PENGANTAR

Puji syukur ke hadirat Tuhan Yang Maha Esa. Atas rahmat dan hidayah-Nya,

penulis dapat menyelesaikan Karya Tulis Ilmiah yang berjudul “Pemeriksaan Granula

Basofil pada Sediaan Apus Darah Tepi (SADT) Menggunakan Pewarna Giemsa,

Wright dan Wright-Giemsa”. Karya Tulis Ilmiah ini disusun untuk memenuhi salah

satu syarat menyelesaikan Program Pendidikan Diploma III Jurusan Teknologi

Laboratorium Medis Poltekkes Kemenkes Bandung.

Dalam penyusunan Karya Tulis Ilmiah ini, penulis mendapat banyak

bimbingan dan bantuan dari berbagai pihak. Maka karena itu, pada kesempatan ini

saya sebagai penulis ingin menyampaikan terima kasih kepada semua pihak yang

tidak bisa disebutkan satu per satu, yang telah memberi bantuan dan dukungan.

Penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan yang mendasar pada

Karya Tulis Ilmiah ini dan jauh dari kata sempurna. Oleh karena itu, kritik dan saran

yang membangun dari pembaca sangat diharapkan untuk penyempurnaan pada

penelitian selanjutnya.

Dalam penyusunan Karya Tulis Ilmiah ini, saya sebagai penulis dibantu oleh

banyak pihak. Oleh karena itu, dengan penuh rasa ikhlas penulis mengucapkan

terimakasih kepada:

1. Bapak Entuy Kurniawan, S.Si, M.K.M., selaku Ketua Jurusan Teknoilogi

Laboratorium Medis Poltekkes Kemenkes Bandung.

3
 2. Ibu Dr. Ani Riyani, M.Kes, selaku Kepala Prodi DIII Jurusan Teknologi

Laboratorium Medis Poltekkes Kemenkes Bandung.

3. Ibu Nina Marliana, S.Pd, M.Biomedik, selaku Pembimbing Karya Tulis

Ilmiah

4. Bapak Adang Durachim, S.Pd, M.Kes, selaku Penguji I Karya Tulis Ilmiah

5. Ibu Dr. Betty Nurhayati, M.Si, selaku Penguji II Karya Tulis Ilmiah

6. Kedua orang tua dan adik tercinta, sebagai support system utama dalam

penyelesaian Karya Tulis Ilmiah ini

7. Keluarga besar dan teman-teman semua terutama kelas D3-3B angkatan

Barana, sebagai teman yang sama-sama berjuang saling menyemangati dalam

penulisan Karya Tulis Ilmiah ini.

8. Pihak-pihak lain yang sangat membantu tetapi tidak bisa dicuapkan satu per

satu disini, saya ucapkan banyak terima kasih

Penulis menyadari Karya Tulis Ilmiah ini masih banyak kekurangan, tetapi

semoga bermanfaat bagi para pembaca maupun bagi peneliti selanjutnya. Oleh karena

itu, saran dan kritik pembaca sangat berarti untuk menyempurnakan penelitian ini.

Bandung, Januari 2022

Penulis

4
 DAFTAR ISI

LEMBAR PENGESAHAN.......................................................................... i

KATA PENGANTAR.................................................................................. iii

DAFTAR ISI................................................................................................. v

DAFTAR TABEL......................................................................................... viii

DAFTAR GAMBAR.................................................................................... ix

BAB I PENDAHULUAN............................................................................. 1

1.1 Latar Belakang................................................................................. 1

1.2 Rumusan Masalah............................................................................ 3

1.3 Tujuan Penelitian............................................................................. 3

1.4 Manfaat Penelitian............................................................................ 3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA.................................................................. 5

2.1 Dasar Teori....................................................................................... 5

2.1.1 Komponen Darah ................................................................... 5

2.1.2 Fungsi Darah........................................................................... 5

2.1.3 Leukosit................................................................................... 6

2.1.3.1 Fungsi Leukosit.................................................................... 7

2.1.3.2 Leukopoiesis........................................................................ 7

5
 2.1.3.3 Morfologi Basofil................................................................. 10

2.1.4 Sediaan Apus Darah Tepi........................................................ 11

2.1.4.1 Jenis Sediaan Apus Darah Tepi ........................................... 11

2.1.4.2 Sediaan Apus Darah Tepi yang Baik................................... 12

2.1.4.3 Pengeringan Sediaan Apus Darah Tepi................................ 13

2.1.4.4 Pewarnaan Sediaan Apus Darah Tepi ................................. 14

2.2 Kerangka Konsep............................................................................. 18

2.3 Definisi Operasional ........................................................................ 18

BAB III METODOLOGI PENELITIAN................................................... 20

3.1 Jenis Penelitian................................................................................. 20

3.2 Populasi dan Sampel........................................................................ 20

3.3 Pengolahan Data............................................................................... 21

3.4 Waktu dan Tempat Penelitian ......................................................... 22

3.5 Alat dan Bahan ................................................................................ 22

3.5.1 Alat ......................................................................................... 22

3.5.2 Bahan ...................................................................................... 22

3.6 Prosedur Penelitian .......................................................................... 23

3.6.1 Cara Pengambilan Darah ........................................................ 23

3.6.2 Cara Membuat SediaanApus Darah Tepi................................ 24

3.6.3 Cara Pewarnaan Sediaan Apus Darah Tepi ............................ 24

3.6.4 Cara Pembacaan Sediaan Apus Darah Tepi ........................... 26

6
 3.7 Skema Kerja .................................................................................... 27

3.8 Rencana Jadwal Penelitian .............................................................. 28

3.9 Rancangan Anggaran Biaya ............................................................ 28

DAFTAR PUSTAKA .................................................................................. 29

7
 DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 Definisi Operasional....................................................................... 18

Tabel 3.1 Tabel Hasil Jumlah Granula Basofil dalam 100 sel....................... 21

Tabel 3.2 Tabel Hasil Uji Deskriptif.............................................................. 21

Tabel 3.3 Tabel Uji Normalitas...................................................................... 22

Tabel 3.3 Rencana Jadwal Penelitian ............................................................ 28

Tabel 3.4 Rancangan Anggaran Biaya .......................................................... 28

8
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Leukopoiesis............................................................................... 7

Gambar 2.2 Basofil ........................................................................................ 10

Gambar 2.3 Sediaan Apus Darah Tepi yang baik.......................................... 12

Gambar 2.4 Rumus Kimia EosinY................................................................. 15

Gambar 2.5 Rumus Kimia Methylene blue.................................................... 15

Gambar 2.6 Zat Eosin Y................................................................................. 15

Gambar 2.7 Zat Methylene blue..................................................................... 15

Gambar 2.8 Pewarna Giemsa......................................................................... 16

Gambar 2.9 Pewarna Wright.......................................................................... 17

Gambar 2.10 Bagan Kerangka Konsep ......................................................... 18

Gambar 3.1 Bagan Skema Kerja ................................................................... 27

9
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Pemeriksaan sediaan apus darah tepi merupakan bagian yang penting dari

rangkaian pemeriksaan hematologi. Kelebihan dari pemeriksaan sediaan Apus

darah tepi yaitu mampu menilai berbagai unsur sel darah tepi seperti morfologi

sel (eritrosit, leukosit, trombosit), menentukan jumlah dan jenis leukosit,

mengestimasi jumlah trombosit dan mengidentifikasi adanya parasit (Riswanto,

2013).

Pewarnaan yang termasuk dalam metode pewarnaan Romanowsky yaitu

pewarnaan Wright, Giemsa, Wright-Giemsa, Leishman, May-Grundwald dan

pewarnaan Jenner. Pewarna Romanowsky mengandung pewarna kationik atau

basa seperti (1) azure B yang dapat memberikan warna biru-ungu atau biru pada

inti sel, nukleoprotein, granula basofil dan granula neutrofil, dan (2) pewarna

anion atau asam, seperti eosin Y dapat memberikan warna merah atau oranye

pada eritrosit dan granula eosinofil serta mewarnai inti sel (McKenzie, 2014 ;

Bain, 2014).

Pada pewarnaan dalam penelitian morfologi eosinofil dengan pewarnaan

Giemsa yang dilakukan oleh Ardina dan Rosalinda pafa tahun 2018

1
 2

menunjukkan inti sel berwarna biru keunguan dan granula tampak cukup jelas

terlihat berwarna merah muda, dan sediaan apus darah tepi lebih tahan lama

setelah disimpan. Pada pewarnaan Wright menunjukan inti sel dan granula

tampak lebih jelas terlihat kemerahan dengan warna yang lebih menonjol

dibandingkan dengan pewarnaan Giemsa namun kekurangan pewarna Wright

yaitu tidak tahan lama dalam iklim tropis. Pada sediaan apus darah tepi dengan

pewarnaan kombinasi Wright-Giemsa memiliki kelebihan dari setiap zat warna

dimana granula, plasma dan inti lebih jelas terlihat dan pewarnaan lebih tahan

lama disimpan. Namun, perlu diperhatikan juga tujuan dari pembuatan preparat

sediaan apus darah tepi, karena apabila ingin menentukan ada/tidaknya parasit

akan lebih baik menggunakan pewarnaan Giemsa, sedangkan apabila ingin

melihat morfologi basofil akan lebih baik menggunakan pewarnaan Wright.

(Ardina dan Rosalinda, 2018).

Basofil adalah jenis leukosit yang paling sedikit jumlahnya yaitu kira-kira

kurang dari 2% dari jumlah keseluruhan leukosit. Sel ini memiliki ukuran sekitar

14 μm, granula memiliki ukuran bervariasi dengan susunan tidak teratur hingga

menutupi nukleus dan bersifat azurofilik sehingga berwarna gelap jika dilakukan

pewarnaan Giemsa. Basofil memiliki granula kasar berwarna ungu atau biru tua

dan seringkali menutupi inti sel, dan bersegmen. Warna kebiruan disebabkan

karena banyaknya granula yang berisi histamin, yaitu suatu senyawa amina

biogenik yang merupakan metabolit dari asam amino histidin (Kiswari, 2014).
 3

Kandungan pewarna Giemsa yaitu eosin, methylene blue dan azzure.

Kandungan pewarna Wright adalah methylene blue dan eosin. Eosin bersifat

asam, berfungsi mewarnai eosinofil berwarna oranye. Methylene blue bersifat

basa, berfungsi mewarnai granula basofil. Azzure berfungsi untuk mewarnai

parasit darah agar terlihat berwarna biru laut yang lebih jelas.

Menurut Gandasoebrata (2016) granula basofil tidak tampak dengan

pewarnaan Giemsa karena granula itu akan larut dan juga dilapangan sendiri

basofil jarang terlihat karena jumlahnya 0,5-1% dalam keadaan normal. Maka

dari itu penulis tertarik untuk melakukan penelitian pemeriksaan granula basofil

pada sediaan apus darah tepi dengan pewarnaan Giemsa dan Wright

1.2 Rumusan Masalah

Bagaimana granula basofil pada Pemeriksaan Granula Basofil pada

Sediaan Apus Darah Tepi (SADT) Menggunakan Pewarna Giemsa, Wright dan

Wright-Giemsa?

1.3 Tujuan Penelitian

Untuk mengetahui granula basofil pada Sediaan Apus Darah Tepi (SADT)

Menggunakan Pewarna Giemsa, Wright dan Wright-Giemsa.

1.4 Manfaat Penelitian

1. Manfaat Teoritis
 4

Penelitian ini diharapkan memberikan informasi mengenai jenis

pewarnaan mana yang lebih baik terhadap granula basofil.

2. Manfaat Praktis
 5

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Dasar Teori

Darah berupa jaringan cair meliputi plasma darah yang di dalamnya

terdapat sel-sel darah. Volume darah secara keseluruhan berkisar 1/12 dari

berat badan. Secara fisiologis volume darah adalah tetap (homeostatik) dan

diatur oleh tekanan osmotik koloid dari protein dalam plasma dan jaringan.

( Siswanto. 2017)

2.1.1 Komponen Darah

Terdiri dari plasma darah yaitu bagian cair darah yang sebagian besar

terdiri atas air, elektrolit, dan protein darah. Butir-butir darah (blood

corpuscle), yang terdiri atas eritrosit (sel darah merah), leukosit (sel darah

putih), trombosit (butir pembeku-platelet). Plasma darah dikurangi protein

pembekuan darah disebut sebagai serum. (Bakta, I Made. 2006.)

2.1.2 Fungsi Darah

Fungsi darah yaitu sebagai termoregulasi (pengatur suhu tubuh) ,

homeostasis (mengatur keseimbangan zat, pH regulator), fungsi

transportasi yaitu : mengangkut oksigen dari paru-paru dan mengangkut

 6

karbon dioksida dari jaringan, mengambil zat-zat makanan dari usus halus

untuk diedarkan ke seluruh jaringan atau alat tubuh, mengangkut hormon

dari kelenjar endokrin, mengangkat atau mengeluarkan zat-zat yang tidak

berguna bagi tubuh untuk dikeluarkan melalui ginjal dan kulit. Fungsi

pertahanan tubuh (imuno) yaitu sebagai pertahanan tubuh terhadap

serangan penyakit dan racun dalam tubuh dengan perantaraan leukosit dan

antibodi. Fungsi untuk menutup luka yaitu kulit merupakan penghalang

masuknya beberapa macam bakteri ke dalam tubuh yang dilengkapi dengan

cairan berupa lendir dan zatzat kimia. Jika kulit rusak, misalnya luka atau

lecet, kemungkinan bakteri dapat masuk. Sel darah putih keluar dari kapiler

untuk melawan bakteri yang masuk. Kalau sel darah putih tidak dapat

bertahan maka sel darah putih akan mati bersama dengan jaringan ( Akbar,

Prima S. 2018).

2.1.3 Leukosit

Sel darah putih, atau leukosit (Yunani; leucko = putih dan cyte = sel),

adalah bagian dari sistem kekebalan yang berpartisipasi dalam respons

imun bawaan dan humoral. Mereka bersirkulasi dalam darah dan

meningkatkan respons inflamasi dan seluler terhadap cedera atau

patogen. Leukosit dapat diklasifikasikan sebagai granulosit dan agranulosit

berdasarkan ada dan tidak adanya butiran mikroskopis dalam

sitoplasmanyan(Tiner A, Ibrahim Sherif A,  Murray I. 2021).

 7

2.1.3.1 Fungsi Leukosit

Secara umum, leukosit berperan penting dalam melindungi tubuh dari

serangan mikroorganisme serta membuang kotoran dan sel yang bermutasi.

Dengan demikian, mereka memungkinkan berbagai sel jaringan tubuh

untuk terus berfungsi dengan baik. Sementara semua leukosit terlibat dalam

respon imun untuk mempertahankan tubuh, hal ini dicapai dengan cara

yang berbeda oleh berbagai jenis leukosit. (Nurin, 2021)

2.1.3.2 Leukopoiesis

Gambar 2.1 Leukopoiesis

(Sumber : Leukopoiesis Enggie Corvi Bahari, 2015)
 8

Leukopoiesis merupakan proses pembentukan leukosit. Proses ini

dirangsang oleh Colony Stimulating Factor (CSF) yang dihasilkan oleh

leukosit matur. Pembentukan leukosit terjadi di sumsum tulang (terutama

seri granulosit), akan disimpan dalam sumsum tulang sampai diperlukan

dalam sistem sirkulasi darah. Granulosit akan dilepaskan pada sirkulasi

darah jika kebutuhannya meningkat. Proses pembentukan limfosit terjadi

pada beberapa jaringan, yaitu sumsum tulang, timus, limpa, dan

limfonoduli. Sedangkan proses pembentukannya dirangsang oleh timus dan

adanya paparan antigen. Pertambahan jumlah leukosit terjadi melalui

proses mitosis, yaitu proses pertumbuhan dan pembelahan sel yang

berurutan. Sel-sel ini membelah diri dan berkembang menjadi leukosit

matur dan dilepaskan dari sumsum tulang ke sirkulasi darah. Leukosit

berada dalam peredaran darah ± 1 hari kemudian masuk ke dalam jaringan

sampai beberapa minggu atau bulan tergantung pada jenis leukositnya

(Aliviameita dan Puspitasari, 2019).

Umumnya progenitor myeloid menghasilkan tiga jenis progenitor,

yaitu granulosit/ monosit, eosinofil/ basofil, dan eritrosit/ megakariosit.

Masing-masing membelah dan matur menjadi sel yang dikenal dengan

blast, satu untuk setiap cell line. Namun, tidak mungkin untuk

membedakan berbagai blast dengan menggunakan mikroskop cahaya

(Aliviameita dan Puspitasari, 2019).

 9

Ada dua jenis leukosit, yaitu granulosit dan agranulosit. Oleh

karena itu pembentukannya disesuaikan dengan seri leukositnya.

Pembentukan sel seri granulosit atau granulopoiesis dimulai dengan fase

mieloblast. Pada pembentukan sel seri agranulosit ada dua jenis sel, yaitu

limfosit dan monosit. Pada pembentukan limfosit (limfopoieis) diawali

dengan fase limfoblast, sedangkan pembentukan monosit (monopoiesis)

diawali oleh fase monoblast (Aliviameita dan Puspitasari, 2019).

Granulopoiesis merupakan evolusi paling dini menjadi mieloblas

dan menghasilkan produk akhir eosinofil, basofil, dan neutrofil. Proses ini

membutuhkan waktu 7-11 hari. Mieloblas, promielosit atau progranulosit,

dan mielosit mampu membelah diri dan membentuk kompartemen

proliferasi atau mitotik. Setelah tahap ini selesai, tidak terjadi lagi

pembelahan, kemudian sel mengalami maturasi dengan beberapa fase,

yaitu metamielosit, neutrofil stab, dan neutrofil segmen. Sel-sel ini menetap

dalam sumsum tulang sekitar 10 hari dan apabila diperlukan akan

dikeluarkan ke dalam sirkulasi (Aliviameita dan Puspitasari, 2019).

Limfopoiesis adalah proses pertumbuhan dan pematangan limfosit.

Pada sumsum tulang normal sekitar 20% nya terdiri dari limfosit yang

sedang berkembang. Setelah maturasi, limfosit masuk ke dalam pembuluh

darah dan beredar dalam interval waktu yang berbeda tergantung pada sifat
 10

sel. Setelah itu berkumpul di kelenjar limfatik (Aliviameita dan Puspitasari,

2019).

Monopoiesis berawal dari sel induk pluripoten yang menghasilkan

berbagai sel induk dengan potensi lebih terbatas, diantaranya adalah unit

pembentuk koloni granulosit yang bipotensial. Turunan sel ini menjadi

prekursor granulosit atau menjadi monoblas. Monoblas mengalami

pembelahan menjadi promonosit, sebagian berproliferasi menghasilkan

monosit yang masuk ke sirkulasi darah, sedangkan sisanya merupakan

cadangan sel yang perkembangannya sangat lambat. Proses pembentukan

dari sel induk hingga menjadi monosit membutuhkan waktu sekitar 55 jam.

Monosit tidak tersedia dalam sumsum tulang dalam jumlah besar namun

setelah dibentuk berpindah ke dalam sinus. Monosit sebelum masuk ke

jaringan, bertahan dalam pembuluh darah selama kurang dari 36 jam.

Terdapat enam jenis leukosit yang secara normal ditemukan di dalam

darah, yaitu: eosinofil, basofil, neutrofil stab, neutrofil segmen, limfosit

dan monosit (Aliviameita; Puspitasari, 2019).

2.1.3.3 Jenis Leukosit

1. Neutrofil
 11

Gambar 2.2 Neutrofil Segmen Gambar 2.3 Neutrofil Batang

(Sumber : Meer, Wim VD., (Sumber : Meer, Wim VD.,
2006) 2006)
Sel ini merupakan sel yang paling banyak di bandingkan sel
leukosit yang lain. Terdapat 2 macam neutrofil yaitu neutrophil
segmen dan neutrofil batang. Perbedaannya hanya pada bentuk intinya
sedangkan ciri-ciri lainnya sama. Neutrofil berukuran sekitar 14 μm,
inti padat dengan bentuk batang seperti tapal kuda pada neutrofil
batang dan inti padat dengan bentuk segmen (disebut juga lobus), pada
neutrofil segmen terdiri 2 sampai 5 lobus dengan sitoplasma pucat.
Granula neutrofil berbentuk bulat halus tipis dengan sifat netral
sehingga terjadi percampuran warna asam (eosin) dan warna basa (biru
metilen) pada granula yang menghasilkan warna ungu atau merah
muda yang samar (Nugraha, Gilang. 2017).

2. Eosinofil

Gambar 2.4 Eosinofil

(Sumber : Theml, H. Diem, H. Haferlach, T., 2004)
 12

Jumlah eosinofil dalam tubuh sekitar 1-3%, sel-sel ini mirip

dengan neutrofil kecuali ukuran eosinofil yang mencapai 16 μm
dengan granula sitoplasmanya yang bersifat eosinofilik sehingga
dengan pengecatan Giemsa akan berwarna merah karena mengikuti zat
eosin, ukran granula sama besar dan teatur seperti gelembung udara.
Nukleus jarang terdapat lebih dari 3 lobus (Nugraha, Gilang. 2017).

3. Basofil

2.5 Basofil

(Sumber :ASH image bank, 2016)

Sel basofil memiliki ukuran sekitar 14 μm, granula memiliki

ukuran yang bervariasi dengan susunan tidak teratur yang dapat

menutupi nukleus dan sitoplasma berwarna merah muda sampai biru

tua keunguan, granula berwarna biru tua, bersifat basofilik sehingga

berwarna gelap jika dilakukan pewarnaan Giemsa. Basofil hanya

kadang-kadang ditemukan dalam darah tepi normal, melakukan

fungsi-fungsi yang sama dalam aliran darah dan mentransportasikan

ke dalam jaringan menjadi sel mast (Nugraha, Gilang. 2017).

 13

4. Monosit

Gambar 2.6 Monosit

(Sumber : Theml, H. Diem, H. Haferlach, T., 2004)

Merupakan sel leukosit yang memiliki ukuran paling besar

yakni sekitar 18 μm, inti padat dan melekuk seperi ginjal atau bulat
seperti telur, sitoplasma tidak mengandung granula (Nugraha, Gilang.
2017).

5. Limfosit

Gambar 2.6 Limfosit

(Sumber : Theml, H. Diem, H. Haferlach, T., 2004)

Terdapat 2 jenis limfosit, yaitu limfosit B dan limfosit T.

Limfosit B matang pada sumsum tulang, sedangkan limfoist T matang
dalam timus. Kedua sel tersebut tidak dapat dibedakan dalam
pewarnaan Giemsa, keduanya mempunyai morfologi yang sama
dengan bentuk bulat berukuran sekitar 12 μm, nukleus padat hanpir
 14

menutupi semua bagian sel sehingga menhisakan sedikit sitoplasma

tidak bergranula (Nugraha, Gilang. 2017).

2.1.4 Sediaan Apus Darah Tepi

Sediaan Apus darah tepi adalah pemeriksaan dengan teknik

mikroskopik untuk mengamati morfologi sel darah atau komponen lain

yang bisa memberikan informasi yang cukup terhadap keadaan

hematologik seseorang (Ardina dan Rosalinda, 2018).

2.1.4.1 Jenis Apus Darah Tepi

Terdapat beberapa jenis sediaan apus darah tepi yang digunakan yaitu

apus tetes tebal, apus tetes tipis dan apus khusus. Preparat apus darah tetes

tebal terbuat dari setetes darah pada kaca objek yang di apus secara spiral

menggunakan kaa objek atau kaca penutup. Apus darah tebal biasanya

digunakan untuk pemeriksaaan parasit malaria, dengan teknis apus darah

tebal eritrosit akan lisis dan memudahkan melakukan pemeriksaan malaria.

Preparat apus darah tetes tipis adalah apus yang digunakan di laboratoium

hematologi tetapi dapat juga digunakan untuk pemeriksaan malaria apabila

sel eritrosit tetap tampak sebagai sel utuh. Pada apus darah tipis dapat

dibuat apusan menggunakan kaca penutup maupun kaca objek. Apus

khusus merupakan apus yang digunakan untuk pemeriksaan tertentu seperti

buffy coat smear yang dapat digunakan untuk pemeriksaan sel lupus

(Nugraha, Gilang. 2017).

 15

2.1.4.2 Sediaan Apus Darah Tepi yang Baik

Gambar 2.7 Sediaan Apus Darah Tepi yang baik

(Nugraha, Gilang. 2017)

Sediaan apus darah tepi yang baik harus memiliki 3 bagian yaitu

bagian kepala, badan dan ekor dengan ketebalan gradual dan ketebalan

apus tersebut menggambarkan distribusi sel darah. Bagian paling tebal

berada di daerah kepala, eritrosit pada bagian ini saling menumpuk, tidak

teratur dengan berbagai macam sel leukosit. Bagian badan apus menipis

dengan distribusi eritrosit yang merata dan leukosit menyebar dengan baik,

pada bagian tengah apusan di dominasi oleh sel limfosit dan bagian

samping apus merupakan campuran granulosit dan monosit. Pada bagian

ekor apus semakin tipis dan membentuk lidah, distribusi eritrosit pada
 16

bagian ini agak jarang dan sel leukosit didominasi oleh sel neutofil. Selain

itu Apus yang baik tidak terdapat lubang-lubang dibagian Apus darah,

Apus tidak membentuk gelombang, tidak menyentuh dan melebihi pinggir

kaca objek dan panjang Apus 2/3 dari panjang kaca objek (Nugraha,

Gilang. 2017).

2.1.4.3 Pengeringan Sediaan Apus Darah Tepi

Faktor pengeringan seperti suhu dan kelembaban dapat mempengaruhi

suatu pemeriksaan yang berhubungan dengan sediaan apus darah tepi.

Faktor suhu dan kelembaban dapat menyebabkan lambatnya proses

pengeringan pada sediaan apus darah yang dapat menyebabkan perubahan

morfologi. Pengeringan yang optimal akan meyebabkan darah melekat kuat

sehingga yakin bahwa sel-sel didalamnya strukturnya tetap normal. Suhu

merupakan salah satu faktor yang dapat mempengaruhi aktivitas sel darah

terutama dalam mengatur aktivitas biologis sel darah (Ramadhani, 2011)

 17

2.1.4.4 Pewarnaan Sediaan Apus Darah Tepi

Ada beberapa macam pewarnaan yang digunakan untuk SADT sesuai

tujuan pemeriksaan, teknik pewarnaan yang digunakan untuk mengamati

sel dan komponen sel darah pada umumnya didasarkan sifat sel dan

komponen sel terhadap zat warna, selain itu terdapat pewarnaan khusus

untuk mewarnai komponen sel saja seperti sisa RNA pada pemeriksaan

retikulosit, granulosit leukosit dan lain sebagainya. Teknik pewarnaan ini

dikenalkan oleh Romanowsky dan Malachowski pada 1891 menggunakan

methylene blue dan eosin, kemudian dimodifikasi oleh Leishman, May

Grunwald, Wright dan Giemsa yang bertujuan menghasilkan pewarnaan

yang lebih baik sehingga lebih mudah diamati (Ardina dan Rosalinda,

2018).

Teknik pewarnaan yang umum digunakan di Indonesia untuk SADT

yaitu Giemsa, karena memiliki ketahanan dan hasil pewarnaan yang lebih

baik. Pewarna Giemsa terdapat dalam bentuk padat/ cair. Giemsa yang

digunakan untuk pewarnaan dibuat dari Giemsa padat atau melarutkan

Giemsa cair yang diencerkan 20 kali menggunakan larutan buffer pH 6,8

dengan perbandingan 1 bagian Giemsa cair : 19 pelarut. Pewarnaan Wright

banyak digunakan untuk melakukan penghitungan sel darah putih sesuai

jenisnya dan untuk mengevaluasi morfologi sel darah (Nugraha, Gilang.

 18

2017).

Gambar 2.8 Rumus Kimia Eosin Y Gambar 2.9 Rumus Kimia Methylene
blue
(Sumber : en.wikipedia.org, 2021)
(Sumber : en.wikipedia.org, 2021)

Gambar 2.10 Zat Eosin Y Gambar 2.11 Zat Methylene blue

(Sumber : e-commerce, 2022) (Sumber : e-commerce, 2022)
2.1.4.4.1 Pewarnaan Giemsa
 19

Gambar 2.12 Pewarna Giemsa

(Sumber : e-commerce, 2022)
Larutan Giemsa adalah campuran dari eosin yang berwarna merah,

methylene blue yang berwarna biru dan azzure B yang berwarna ungu.

Dalam pewarnaan Giemsa, eosin Y (tetrabromoflourescein) berfungsi

untuk memberi warna pada eritrosit. Perpaduan antara eosin dan azzure B

(trimethylthionin) berfungsi untuk memberi warna merah pada inti sel

parasit dan methylene blue berfungsi untuk memberi warna pada

sitoplasma sel (Gandasoebrata, 2016).

2.1.4.4.2 Pewarnaan Wright

Gambar 2.9 Pewarna Wright

(Sumber : e-commerce, 2022)
Pewarnaan Wright adalah pewarnaan polikromatik yan terdiri dari

methylene blue teroksidasi dan eosin. Pada pewarnaan Wright berbahan

dasar metanol, oleh karena itu terkadang beberpa literatur menuliskan tidak
 20

memerlukan fiksasi sebelum pewarnaan. Namun, fiksasi bisa membantu

mengurangi artefak yang dapat terjadi jika pewarna yang sudah terlalu

lama (Gandasoebrata, 2016).

2.2 Kerangka Konsep

Pewarna Giemsa

Granula Basofil

Pewarna Wright

Bagan 2.10 Kerangka Konsep

 21

2.3 Definisi Operasional

Tabel 2.1 Definisi Operasional

No Variabel Definisi Cara Ukur Alat Hasil Ukur Skala

Ukur Ukur

1 Pewarnaan Pewarnaan Melihat Visual Warna Nominal

Giemsa dan Granula Basofil komposisi larutan dari

Wright dengan reagen pada masing-

pewarnaan etiket masing zat

Giemsa dan masing- warna

Wright masing zat Giemsa dan

warna Wright

2 Warna Granula Basofil Melihat ada Mikro Ada/ tidak Rasio

Granula yang berwarna tidaknya skop granula

Basofil biru hitam granula basofil

basofil pada

SADT yang

diwarnai

oleh

pewarna

Giemsa dan
 22

Wright
 23

BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

3.1 Jenis Penelitian

Studi perbandingan atau comparative study merupakan studi

membandingkan dua atau lebih suatu kondisi, kejadian, kegiatan, program dan

lainnya (Sukmadinata,2012). Penelitian ini mencoba membandingkan granula

basofil pada pewarnaan Geimsa dan Wright. Penelitian komparatif juga

mengungkap gambaran mengenai variabel yang diteliti pada setiap kelompok

subjek penelitian yang dibandingkan sehingga membutuhkan analisis

dekriptif.

3.2 Populasi dan Sampel

3.2.1 Populasi

Populasi dari penelitian ini adalah

3.2.2 Sampel

Banyaknya sampel, dihitung berdasarkan pada teori Gay dan Diehl

(1992) bahwa penelitian deskriptif, jumlah sampel minimumnya adalah 10%

dari populasi yang perhitungannya sebagai berikut :

10 % x 88 = 8.8 ≈ 9
 24

Berdasarkan perhitungan diatas maka jumlah unit dalam penelitian ini

adalah 9 x 3 perlakuan = 27 unit

3.3 Pengolahan Data

Pengolahan data pada penelitian ini yaitu menggunakan program SPSS

26. Data di uji kenormalannya terlebih dahulu dengan uji Saphiro-Wilk. Jika

data terdistribusi normal dilakukan uji General Linear Model Repeated

Measures (GLM) dan jika terdistribusi tidak normal dilakukan uji Friedman.

Tabel 3.1 Rencana Hasil Pemeriksaan Jumlah Basofil dalam 100 sel
No No Kode Jumlah Basofil dalam 100 sel

Sampel Giemsa Wright Wright-

Giemsa

Pewarnaan Nilai Min Nilai Maks Rata-Rata

Giemsa
Jumlah
Wright
Basofil
Wright-

Giemsa

Tabel 3.2 Rencana Hasil Uji Statistik Deskriptif

 25

Tabel 3.3 Uji Normalitas

Pewarnaan Kolmogorov-Smirnova Shapiro-

Wilk

Statistic Df Sig. Statistic

Jumlah Giemsa

Granula Wright

Basofil Wright-

Giemsa

3.4 Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Mei 2022 yang bertempat di

Laboratorium Hematologi Jurusan Teknologi Laboratorium Medis Poltekkes

Kemenkes Bandung.

3.5 Alat dan Bahan

3.5.1 Alat

Alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu : spuit 3 mL,

tourniquet, kapas alkohol, plester, kapas kering, tabung K3EDTA, label, kaca

objek, pipet pasteur, rak kaca objek.

 26

3.5.2 Bahan

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu : darah vena, metanol

absolut, pewarna Giemsa, pewarna Wright, larutan buffer pH 6,8, aquades.

3.6 Prosedur Penelitian

3.6.1 Cara Pengambilan Darah

1. Alat dan bahan disiapkan

2. Tourniquet dipasang kira kira 3 jadi diatas lipat siku

3. Bagian median cubital, basilica atau cephalic dipilih, lakukan palpasi

(perabaan) untuk memastikan posisi vena. Vena teraba seperti pipa

kecil , elastis, dan memiliki dinding tebal.

4. Kulit pada bagian yang akan diambil darah dibersihkan dengan kapas

alkohol. Setelah dibersihkan tidak boleh dipegang lagi.

5. Bagian vena ditusuk dengan jarum sekitar 30 - 45 derajat . Jika jarum

masuk kedalam vena akan terlihat darah masuk kedalam spuit.

Usahakan sekali tusuk kena, lepas tourniquet. Kemudian tarik spuit

sejumlah darah yang diperlukan.

6. Kapas kering dilepaskan ditempat suntikkan lalu tarik jarum / segera

lepaskan jarum. Tekan kapas beberapa saat kemudian kenakan plester

kira – kira setelah 1 menit.

 27

3.6.2 Cara Membuat Sediaan Apus Darah Tepi

1. Gelas objek dibersihkan dengan alkohol supaya benar-benar bersih

dan bebas lemak

2. Darah diteteskan 1 tetes kecil di bagian ujung kanan (sekitar 2-3 cm

dari ujung kanan)

3. Dengan menggunakan objek gelas lain dibuat sediaan apus darah tepi

dengan sudut 30-45 derajat sepanjang 3-4 cm

4. Darah harus habis sebelum kaca penghapus mencapai ujung

5. Ketebalan apus darah dapat diatur dengan mengubah sudut antara

kedua kaca, tekanan dan kecepatan mengeser. Makin besar atau

semakin cepat akan menghasilkan sediaan yang makin tipis.

6. Keringkan di udara.

3.6.3 Cara Pewarnaan Sediaan Apus Darah Tepi

3.6.3.1 Cara Pewarnaan Sediaan Apus Darah Tepi dengan Pewarnaan

Giemsa

1. Dibuat larutan Giemsa dengan cara : Pengenceran larutan Giemsa

dengan konsentrasi 10% yaitu perbandingan antara Giemsa dan buffer

adalah 1:10 Keterangan : 1 bagian Giemsa dan 9 bagian buffer. Cara

pengencerannya : Dipipet buffer kedalam gelas ukur sebanyak 9 mL

 28

kemudian ditambahkan Giemsa sebanyak 1 mL. Larutan Giemsa siap

digunakan.

2. Preparat difiksasi yang sudah kering deng methanol absolut selama 3-5

menit.

3. Sisa methanol absolut dibuang kemudian genangi dengan Giemsa yang

sudah diencerkan selama 20-30 menit.

4. Sediaan apus darah tepi dicuci dengan air kran perlahan-lahan.

5. Sediaan apus darah tepi dikeringkan diudara dengan suhu kamar.

3.6.3.2 Cara Pewarnaan Sediaan Apus Darah Tepi dengan Pewarnaan

Wright

1. Dibuat larutan Wright dengan cara : 1 mg serbuk Wright ditambah

dengan 60 mL methanol, homogenkan. Larutan disipan di botol

berwarna. Dikocok setiap hari. Setelah 10 hari larutan cukup matang

untuk dipakai.

2. Larutan Wright diteteskan ke atas preparat (sampai semua sediaan

apus darah tepi tergenangi)

3. Larutan buffer pH 6,8 diteteskan (sampai semua sediaan apus darah

tapi tergenangi) atau aquades dan dibiarkan 5-12 menit.

4. Apus dibilas dengan air dan bagian belakang apus yang kotor

dibersihkan dari sisa zat warna.

 29

5. Preparat apus darah tepi dibiarkan kering di udara (Ardina; Rosalinda,

2018)

3.6.4 Cara Pembacaan Sediaan Apus Darah Tepi

1. Simpan preparat di meja mikroskop

2. Lihat dengan menggunakan objektif 40 x, yaitu untuk melihat kualitas

preparat.

3. Jika sudah bagus dan jelas kemudian ganti objektif dengan 100 x dan

tambahkan minyak imersi

4. Lihat hasil warna granula basofil yang didapatkan.

 30

3.7 Skema Kerja

Pengambilan sampel dari

darah vena

Masukkan darah vena

kedalam tabung K3EDTA

Membuat Sediaan Apus

Darah Tepi

Pewarnaan Sediaan Apus

Pewarnaan Sediaan Apus
Darah Tepi dengan pewarna
Darah Tepi dengan pewarna
Wright
Giemsa

Bagan 3.1 Skema Kerja

Pembacaan hasil
mikroskpis

3.1 Bagan Skema Kerja

 31

3.8 Rencana Jadwal Penelitian

Tabel 3.3 Rencana Jadwal Penelitian

Kegiatan Nov Des Jan Feb Mar Apr Mei Jun

Penelusuran pustaka
Penyusunan
proposal
Sidang usulan KTI
Perbaikan proposal
Pelaksanaan
penelitian
Bimbingan KTI
Penyusunan KTI
Sidang KTI
Perbaikan KTI

3.9 Rancangan Anggaran Biaya

Tabel 3.4 Rancangan Anggaran Biaya

No Jenis Kegiatan Jumlah (Rp)

1 Pembuatan proposal 200.000,00

2 Pembelian alat pemeriksaan 200.000,00

3 Pembelian regaen pemeriksaan 1.000.000,00

4 Merchandise untuk responden 150.000,00

5 Penyusunan KTI 400.000,00

6 Lain – lain 100.000,00

Jumlah 2.050.000,00
32
 BAB IV

HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Penelitian

4.2 Pembahasan

Dari hasil penelitian yang dilakukan, didapatkan hasil bahwa basofil

ditemukan dalam beberapa spesiman yang diberi pewarnaan Wright, sedangkan pada

pewarnaan Giemsa tidak ditemukan basofil.

Giemsa merupakan pewarna dengan prinsip Romanowsky yang terdiri dari Azure B

(produk oksidasi methylen blue) yang memiliki warna biru dan eosin (eosin B atau Y) yang

berwarna merah, kombinasi kedua zat warna tersebut bersifat polikromatik sehingga dapat

memberikan beberapa warna terhadap sediaan apus darah (Nugraha G.,2015). Azur B

(trimetil tionin) bersifat basa dan eosin Y (tetrabromflurecein) bersifat asam. Azur B

mewarnai komponen sel yang bersifat asam dan eosin Y mewarnai komponen yang bersifat

basa seperti granula eosinofil, ikatan antara eosin Y dengan azur B dapat menghasilkan

warna ungu (Arianda D., 2015). Pewarna Giemsa digunakan untuk membedakan inti sel dan

morfologi sitoplasma sel darah merah, sel darah putih, trombosit serta parasit darah (Nugraha

G.,2015).

Granula basofil mengandung mukopolisakarida, asam hialuronat dan histamin,

heparin dan substansi bereaksi lambat. Granula basofil kasar dan bewarna biru bila diwarnai

dengan zat warna yang bereaksi basa, dan bila diwarnai dengan zat metakromatik , granula

nya akan bewarna terang (Widmann, 1989). Granula yang bersifat metakromatik ini memiliki

33
 34

arti bahwa granula tersebut apabila dilakukan pewarnaan kemungkinan akan menghasilkan

warna yang berbeda tergantung pewarnanya (Nugroho dan Maeyama, 2011).

4.2.1 Granula Basofil Dalam Pewarnaan Giemsa

Berdasarkan hasil penelitian bahwa pemeriksaan pada basophil menunjukkan bahwa

granula basophil tidak terlihat ketika menggunakan pewarnaan gimsea (berwarna

gelap) .Basofil adalah jenis leukosit yang paling sedikit jumlahnya yaitu kira-kira kurang dari

2% dari jumlah keseluruhan leukosit. Sel ini memiliki ukuran sekitar 14 μm, granula basophil

memiliki ukuran yang bervariasi dengan susunan tidak teratur hingga menutupi nukleus dan

bersifat azrofilik sehingga berwarna gelap jika dilakukan pewarnaan Giemsa. Basofil

memiliki granula kasar berwarna ungu atau biru tua dan seringkali menutupi inti sel, dan

bersegmen. Warna kebiruan disebabkan karena banyaknya granula yang berisi histamin,

yaitu suatu senyawa amina biogenik yang merupakan metabolit dari asam amino histidin.

Basofil jarang ditemukan dalam darah normal. Selama proses peradangan akan menghasilkan

senyawa kimia berupa heparin, histamin, beradikinin dan serotonin. Basofil berperan dalam

reaksi hipersensitifitas yang berhubungan dengan imunoglobulin E (IgE) (kim et al (2014)

dalam (Rissyamdani, 2021:31)).

Adapun beberapa faktor-faktor lain yang mempengaruhi kualitas hasil pewarnaan pada

darah diantaranya teknik pembuatan sediaan darah (dimana apusan darah tipis yang tidak

memiliki bagian ekor akan mempersulit proses identifikasi), sumber daya manusia, proses

fiksasi yang tidak tepat (menggunakan methanol yang tidak absolut dan tidak langsung

difiksasi setelah sediaan kering), pewarnaan yang kurang tepat, ketelitian, dan keterampilan
 35

peneliti dalam membuat sediaan darah, karena bentuk apusan sediaan darah dapat

mempersulit pengamatan hasil pewarnaan (Susilawati, E., Artati, & Salnus, S., 2021: 11-12).

Referensi

Rissyamdani, Raufen. 2021. Hubungan Rasio Trombosit/Leukosit Dengan Derajat Keparahan

Penderita Sirosis Hati Berdasarkan Skor Child Turcotte Pugh. Tesis. Fakultas

Kedokteran: Universitas Sumatera Utara.

Susilawati, E., Artati, & Salnus, S. 2021. Studi Potensi Ekstrak Antosianin Dari Kulit

Manggis (Garcinia Mangostana) Sebagai Pewarna Apusan Darah Tepi (Adt) Dalam

Melihat Gambaran Leukosit. Jurnal TLM Blood Smear. Volume 2 No.1.

4.2.2 Granula Basofil Dalam Pewarnaan Wright

Berdasarkan hasil penelitian bahwa pemeriksaan pada basophil menunjukkan granula

basophil terlihat ketika menggunakan pewarnaan wright. Pewarnaan wright adalah zat warna

yang digunakan dalam metode Romanowsky, merupakan campuran eosin Y, Azure B,

metilen blue, dan metil alkohol dalam konsentrasi tinggi. Garnula yang tampak pada basophil

ini disebabkan oleh diikatnya warna biru-ungu atau biru pada inti sel, nukleoprotein, dan

leukosit oleh Azure B yang terkandung di pewarnaan wright (Susilawati, E., Artati, &

Salnus, S., 2021: 11). Selain itu pada pewarnaan wright sediaam apus darah tidak perlu

dikeringkan di udara dan tidak perlu diasakan fiksasi sendiri karena pewaraan ini telah

mengandung metil alcohol dalam konsentrasi yang tinggi sehingga dapat langsung

ditambahkan larutan penyangga (buffer) dengan pH 6,4 (basa) dan membiarkannya selama

12-20 menit.
 36

Penggunaan larutan buffer pada apus darah berfungsi mengionisasi komponen sel yang

bersifat basa membentuk warna jingga hingga merah muda, dan methylene blue bersifat basa

memberi warna komponen sel yang bersifat asam membentuk warna biru sedangkan

komponen sel yang bersifat netral akan mengikat warna biru dan merah sama banyak. Karena

inilah granula pada basopil terlihat dengan menggunakan pewarnaan wright (Hidaya, 2019).

4.2.3 Perbedaan Kandungan Pewarna Giemsa dan Wright

Di Indonesia, pewarnaan yang umum digunakan ialah pewarnaan Giemsa sebab

Giemsa lebih tahan lama dalam iklim tropis. Beberapa klinik juga menggunakan pewarna

Wright dalam mewarnai apusan darah tepi. Terkadang pewarnaan Giemsa juga

dikombinasikan dengan Wright, dimana diharapkan kelebihan dari tiap-tiap zat warna

Giemsa dan Wright bisa didapatkan dan akan menjadikan sediaan apus darah tepi lebih jelas

terlihat secara mikroskopis dan jadi lebih tahan lama.

Pada apusan darah tepi salah satu sel yang dapat diamati ialah leukosit. Leukosit

memiliki sebuah inti yang bentuk dan ukurannya bervariasi sehingga mudah dibedakan

dengan eritrosit dan trombosit. Terdapat 5 jenis leukosit yang utama, yaitu neutrofil,

eosinofil, basofil, limfosit, dan monosit. Eosinofil merupakan salah satu jenis sel leukosit

yang memiliki ciri-ciri khas diantaranya sel bulat, inti biasanya hanya memiliki 2 lobus,

kromatin berwarna ungu, sitoplasma mengandung banyak granula eosinofilik (jingga) yang

berukuran sama besar dan lebih besar dibandingkan granula neutrofil.

Giemsa sangat baik untuk mengidentifikasi berbagai sel granulosit dan sel-sel darah

lainnya, menghasilkan gambaran inti yang jelas, sangat baik dalam membedakan komponen

basofilik atau eosinofilik dari sel limfoid dan mieloid, dan keunggulan utama Giemsa ialah
 37

lebih tahan lama dalam iklim tropis dan sangat baik untuk mempelajari parasit-parasit darah.

Oleh sebab itu, eosinofil yang terwarnai dengan Giemsa memberikan hasil yang representatif

dengan warna granula oranye-merah dan preparat apus darah tepi juga dapat bertahan dengan

baik pada iklim tropis Indonesia.

Penggunaan pewarna Wright di Indonesia disebabkan Wright telah mengandung metil

alkohol dalam konsentrasi tinggi, sehingga tidak perlu dilakukan fiksasi. Kelebihan dari

pewarnaan Wright yaitu plasma dan inti sel lebih jelas terlihat. Hal itu disebabkan karena

komposisi dari Wright, yang terdiri dari methylene blue yang akan memberi warna biru pada

inti (nukleus) yang mengandung DNA dan eosin yang memberi warna merah pada

sitoplasma. Sedangkan kekurangan pewarna Wright yaitu tidak tahan lama dalam iklim

tropis.

Pewarnaan Wright-Giemsa merupakan modifikasi pewarnaan Romanowsky yang

mengandung kombinasi zat warna basa seperti methylene blue dan produk oksidatifnya,

azure A dan azure B, dan zat warna asam seperti eosin. Pewarnaan ini sudah rutin digunakan

di laboratorium hematologi untuk mewarnai apusan darah tepi dan sumsum tulang. Teknik

pewarnaan dengan Wright-Giemsa diketahui baik untuk menilai morfologi eosinofil-

neutrofil-basofil, dan Wright untuk basofil, sedangkan Giemsa untuk parasit-parasit dalam

darah.

Pada pewarnaan Wright menunjukan inti sel dan granula tampak lebih jelas terlihat

kemerahan dengan warna yang lebih menonjol dibandingkan dengan pewarnaan Giemsa

namun kekurangan pewarna Wright yaitu tidak tahan lama dalam iklim tropis. Pada apusan

dengan pewarnaan kombinasi Wright-Giemsa terdapat kelebihan dari setiap zat warna

dimana granula, plasma dan inti lebih jelas terlihat dan pewarnaan lebih tahan lama disimpan.
 38

Referensi
Rini Ardina, S. R. (n.d.). MORFOLOGI EOSINOFIL PADA APUSAN DARAH TEPI
MENGGUNAKAN PEWARNAAN. Media Neliti.

4.2.4 Kondisi Pewarna Wright Di Iklim Tropis

Uji coba basophil menggunakan pewarna wright menunjukkan warna yang lebih terang

dibandingkan menggunakan pewarna giemsa. Akan pewarna wright ini memiliki kekurangan

yaitu tidak tahan lama di iklim tropis. Adapun alasan mengapa larutan ini tidak tahan lama

karena larutan wright berbahan dasar metanol (metil alkohol) berkonsentrasi tinggi yang

merupakan bahan yang gampang teroksidasi/menguap dan mengembun akibat panas dan

lembab, sehingga menyebabkan pewarnaannya mudah pudar (tidak tahan lama). Olehnya itu,

dibutuhkan fiksasi sehingga membantu mengurangi artefak air atau noda-noda yang dapat

terjadi ketika kondisi lembab/panas.

Sehingga jika menggunakan larutan wright di iklim tropis yang identik hangat akan

semakin mempercepat proses oksidasi pada saat percobaan yang akan menyebabkan anomali

pada objek penelitian yang dalam hal ini adalah apusan darah.

Referensi

Ardina, Rinny dan Sherly Rosalinda. 2018. Morfologi Eosinofil Pada Apusan Darah Tepi

Menggunakan Pewarnaan Giemsa, Wright, Dan Kombinasi Wright-Giemsa. Jurnal

Surya Medik. Volume 3 No. 2.

39
 BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian didapatkan hasil pemeriksaan granula basophil pada

apusan darah tepi (ADT) dengan menggunakan pewarnaan giemsa tidak terlihat sedangkan

pemeriksaan dengan menggunakan pewarnaan wright terlihat. Maka dapat di simpulkan

bahwa pewarnaan yang di peroleh dari pewarnaan giemsa tidak dapat di gunakan sebagai

pewarnaan pada apusan darah tepi (ADT) dalam melihat gambaran granula basophil. Meski

demikian, larutan giemsa memiliki kelebihan yang tidak dimiliki oleh larutan wright salah

satunya adalah ketahanan di iklim tropis. Alasan yang membuat larutan wright tidak tahan

lama di iklim tropis adalah Karena kandungannya yang berbahan dasar etanol (alkhol)

berkonsentrasi tinggi yang membuatnya gampang terionisasi jika di bawa di suhu yang

tinggi.

Saran

Ada beberapa saran yang dapat direkomendasikan berdasarkan hasil temuan dalam

penelitian ini diantaranya:

1. Untuk dapat melihat granula basophil dapat menggunakan pewarna wright.

40
 41

2. Diperlukan penelitan lanjutna yang mencari keterkaitan antara kandungan di

larutan gimsea terhadap basophil yang membuatnya tidak nampak (bewarna

gelap) ketika dicampurkan.

 DAFTAR PUSTAKA

Akbar, Prima S. 2018. “ANATOMI , FISIOLOGI DAN TERMINOLOGI MEDIS

DARAH, SEL & CAIRAN TUBUH”. Diunduh pada 28 Sepetmber
2021
Aliviameita, Puspitasari. 2019. Buku Ajar HEMATOLOGI. Diunduh pada 21 April
2022.

Ardina, R. and Rosalinda, S. (2018). MORFOLOGI EOSINOFIL PADA APUS

DARAH TEPI MENGGUNAKAN PEWARNAAN GIEMSA, WRIGHT,
DAN KOMBINASI WRIGHT-GIEMSA. Diunduh pada 11 Apr. 2022.

Arif, Mansyur. 2015. “PENUNTUN PRAKTIKUM HEMATOLOGI”. Diunduh pada

10 Oktober 2021

Bakta, I Made. 2006. Hematologi Klinik Ringkas. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran
EGC.
Gandasoebrata. 2016. PENUNTUN LABORATORIUM KLINIK. Dilihat pada 14
April 2022.

Kiswari, R. (2014). HEMATOLOGI & TRANSFUSI. Penerbit Erlangga. Di lihat pada

11 April 2022.

Kurniawan, S. (2017). Pengecatan Preparat Apus Darah Metode Wright . Diunduh

pada 17 April 2022.

Microscope Master. “Leukocytes : Definition, Function, Count, in Urine and

Microscopy”. Diunduh pada 10 Oktober 2021

Mohammad, S. (2021). “PHYSIOLOGY OF BLOOD” . Diunduh pada 8 September

2021

Noviar, Ganjar. 2020. “SEDIAAN APUS DARAH (DIFF COUNT)”. Dosen

Hematologi Poltekkes Kemenkes Bandung, Indonesia

Nugraha, Gilang. 2017. Panduan Pemeriksaan Laboratorium “HEMATOLOGI

DASAR”. Edisi 2. Jakarta Timur : Trans Info Media.

Priyana, A. 2010. Patologi Klinik Untuk Kurikulum Pendidikan Dokter Berbasis

Kompetensi. Diunduh pada 14 April 2022.

42
 43

S. Blumenreich, M. (1990). Clinical Methods: “The History, Physical, and

Laboratory Examinations. 3rd ed. [online] Boston: Butterworths,
p.Chapter 153 The White Blood Cell and Differential Count”.
Diunduh pada 22 September 2021].

Siswanto. 2017. “DARAH DAN CAIRAN TUBUH”. Diunduh pada 28 September

2021

Subawa, A.A.N. and Santi, D.D. (2016). “PENUNTUN PRAKTIKUM PATOLOGI

KLINIK”. Diunduh pada 28 September 2021.

Tiner A, Ibrahim Sherif A,  Murray I. 2021. “Histology, White Blood Cell”. Diunduh
pada 10 Oktober 2021.
44