DISUSUN OLEH :
KELOMPOK 1
i
HALAMAN PERSETUJUAN
LAPORAN PRAKTIK BELAJAR LAPANGAN (PBL)
VALIDASI HASIL
BALAI BESAR LABORATORIUM KESEHATAN PALEMBANG
i
HALAMAN PENGESAHAN
LAPORAN PRAKTIK BELAJAR LAPANGAN (PBL)
SITOHISTOTEKNOLOGI
LABORATORIUM PATOLOGI ANATOMI DYATNITALIS
Laporan Praktik Belajar Lapangan (PBL) ini dibuat untuk memenuhi salah
satu syarat menyelesaikan mata kuliah Sitohistoteknoogi pada Program Studi
Sarjana Terapan Teknologi Laboratorium Medis. Laporan ini telah disetujui oleh
pembimbing Institusi dan Pembimbing Lahan Jurusan Teknologi Laboratorium
Medis Politeknik Kesehatan Palembang.
ii
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur penulis haturkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas segala
rahmat dan petunjuk-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan Laporan Hasil
Praktik Belajar Lapangan (PBL) Sitohistoteknologi Di Laboratorium Patologi
Anatomi Dyatnitalis dengan baik.
Penulis
Kelompok 1
iii
DAFTAR ISI
HALAMAN PENGESAHAN................................................................................iii
KATA PENGANTAR............................................................................................iv
DAFTAR ISI............................................................................................................v
DAFTAR GAMBAR...............................................................................................4
BIODATA MAHASISWA/I....................................................................................5
BAB 1......................................................................................................................4
PENDAHULUAN...................................................................................................4
1.1 LATAR BELAKANG...............................................................................4
1.2 TUJUAN...................................................................................................4
1.3 MANFAAT...............................................................................................5
1.4 WAKTU DAN TEMPAT PELAKSANAAN...........................................5
BAB 2......................................................................................................................6
PEMBAHASAN......................................................................................................6
2.1 HISTOLOGI..............................................................................................6
2.2 PENGOLAHAN SPESIMEN HISTOLOGI.............................................6
2.2.1 Administrasi.......................................................................................6
2.2.2 Pemotongan Spesimen (Potong Gross)..............................................7
2.2.3 Pematangan Jaringan (Tissue Prosesing)...........................................8
2.2.4 Pembuatan Blok Jaringan (Embedding)............................................8
2.2.5 Pemotongan Jaringan.........................................................................9
2.2.6 Pewarnaan Hematoxylin Eosin (HE)...............................................10
2.3 IMUNOHISTOKIMIA (IHC).................................................................12
2.4 SITOLOGI...............................................................................................13
2.4.1 Administrasi.....................................................................................14
2.4.2 Pengambilan Sampel FNAB (Fine Needle Aspiration Biopsy).......15
2.4.3 Pengambilan Sampel PAP Smear....................................................16
2.4.4 Pembuatan Preparat Sitologi............................................................18
2.4.5 Pewarnaan Papanicolau....................................................................19
2.4.6 Pewarnaan Diff Quick......................................................................21
2.5 Sitogenetika.............................................................................................21
iv
2.6 Quality Control
2.6.1 Pemantapan Mutu Internal
2.7 PENGARSIPAN.....................................................................................22
1. Pengarsipan (Histologi).......................................................................22
2.Pengarsipan (Sitologi).................................................................................23
2.8 LIMBAH PATOLOGI ANATOM..........................................................25
BAB 3....................................................................................................................27
PENUTUP..............................................................................................................27
3.1 KESIMPULAN.......................................................................................27
DAFTAR PUSTAKA............................................................................................28
LAMPIRAN...........................................................................................................29
3.2 Dokumentasi Histopatologi.....................................................................29
3.3 Dokumentasi Sitologi..............................................................................32
v
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Formulir Pemintaan Pasien................................................................29
Gambar 2. Sampel Jaringan...................................................................................29
Gambar 3. Pemotongan Gross pada Sampel Uterus...........................................29
Gambar 4. Tahapan Pematangan Jaringan..........................................................30
Gambar 5. Pembuatan Blok Paraffin Gambar……… 6.
Pendinginan Jaringan diatas cooling plate.............................................................30
Gambar 7. Blok Jaringan......................................................................................30
Gambar 8. Pemotongan Blok Jaringan dengan Mikrotom.....................................30
Gambar 9. Proses Deparafinisasi di Waterbath.....................................................31
Gambar 10. Pewarnaan pada Jaringan...................................................................31
Gambar 11. Tahapan Mounting.............................................................................31
Gambar 12. Sediaan yang telah diwarnai dan siap diperiksa.................................32
Gambar 13. Formulir Pemintaan Pasien..............................................................32
Gambar 14. Sampel yang telah di centrifuge dan supernatant yang telah
dibuang..................................................................................................................32
Gambar 15. Pembuatan Sediaan Apus Sitologi..................................................33
Gambar 16. Pewarnaan MDT...............................................................................33
Gambar 17. Pewarnaan Papaniculou....................................................................33
Gambar 18. Sediaan yang telah diwarnai dan siap diperiksa.................................33
Gambar 19. Kontrol Kualitas Sediaan...................................................................34
Gambar 20. Foto bersama staff laboratorium Patologi Anatomi...........................34
vi
BIODATA MAHASISWA/I
Jalan Sugihwaras
Alika Padia Kel. Tanjung
2. PO.71.34.2.20.002 081373182744
Ramadani Rambang Kec.
RKT RT02 RW04
Jalan Jend
Amanda
Sudirman No 064 089535967538
3. Amelia PO.71.34.2.20.003
Utami
RT 01 RW 02 6
Prabumulih Barat
Desa Bandung
Arifatul
5. PO.71.34.2.20.005 Agung Kec. Pagar 081367171815
Fauza
Gunung Kab. Lahat
Jalan Maju
Cheni Dwi Bersama II Lr. Mus
6. PO.71.34.2.20.006 082180853898
Putri Antika i Ulu No. 057 RT 0
69 RW 013
vii
Desa Tanjung
Agung Kec.
7. Desi Ariani PO.71.34.2.20.007 085841337365
Tanjung Agung
Kab. Muara Enim
Jalan Sekayu
Dina Meilan
8. PO.71.34.2.20.008 Selarai LK II Musi 082281281216
Damayanti
Banyuasin
Prumnas Talang
Kania
9. PO.71.34.2.20.009 Kelapa Blok 3 No. 083869475905
Ramadhani
398 RT 27 RW 08
Desa Pengabuan
10. Kesi Saputri PO.71.34.2.20.010 Kec. Abab Kab. 08386094003
PALI
viii
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1 LATAR BELAKANG
Patologi Anatomi merupakan laboratorium khusus untuk
mendiagnosis penyakit melalui materi biologi yang berasal dari organ
jaringan, sel, atau cairan melalui proses sistematik tertentu. Lingkup
pemeriksaan Patologi Anatomi terdiri dari histopatologi, sitologi,
potong beku atau frozen section, histokimia, imunohistokimia, dan
pemeriksaan molekuler. Pemeriksaan histopatologi merupakan
pemeriksaan dengan spesimen yang diambil dengan prosedur anestesi
pada manusia atau binatang hidup atau post mortem (otopsi klinik).
Pemeriksaan histopatologi merupakan pemeriksaan gold standard
dalam penegakan diagnosis Patologi Anatomi. Pemeriksaan sitologi
merupakan pemeriksaan sel dengan menggunakan cairan tubuh
misalnya pemeriksaan pap smear pada ginekologi. Ada juga
pemeriksaan sitologi non ginekologi, contohnya Fine Needle Aspiration
Citology (FNAC), pemeriksaan sputum atau dahak, pemeriksaan efusi
pleura, transthoracal biopsy (TTB), transthoracic needle aspiration
(TTNA).
1.2 TUJUAN
Adapun tujuan dalam melakukan kegiatan Praktik Belajar
Lapangan, antara lain:
a. Mampu melakukan proses administrasi dan menerima bahan
pemeriksaan dengan benar
b. Mampu mendeskripsikan dan memotong gross jaringan
c. Mengetahui dan memahami cara prosessing jaringan
d. Mampu membuat dan memotong blok paraffin
e. Mampu melakukan pengecatan preparat histologi
f. Mampu menerima, melakukan persiapan dan mampu melakukan
pengecatan sitologi
g. Mengetahui cara pengarsipan yang benar
h. Mengetahui proses validasi kualitas mutu pemeriksaan histologi dan
sitologi
i. Mengetahui materi pembelajaran terkait imunohistokimia dan
sitogenetika
j. Mengetahui terkait pengolahan limbah histologi dan sitologi
1.3 MANFAAT
a. Bagi Mahasiswa: mampu menerapkan pembelajaran yang diberikan di
kampus ke lahan praktik
b. Bagi Masyarakat: dapat bekerjasama dengan tenaga kesehatan (Ahli
Teknologi Labortorium Medis) dalam kegiatan yang berhubungan
dengan laboratorium.
2
3
BAB 2
PEMBAHASAN
2.1 HISTOLOGI
Histologi merupakan cabang ilmu biologi yang mempelajari
tentang struktur sel dan jaringan secara detail menggunakan mikroskop.
Kegiatan histologi dilakukan pada sediaan jaringan yang dipotong tipis.
Berdasarkan ukurannya jaringan di klasifikasikan menjadi 3 macam,
antara lain:
4
2.2.3 Pematangan Jaringan (Tissue Prosesing)
Tujuan : Untuk mengetahui langkah-langkah
pematangan jaringan
Alat dan Bahan :
- Cassete jaringan - Etanol
- Formalin - Xylol
- Alkohol 96% - Paraffin cair
Prosedur Kerja:
- Fiksasi cassete jaringan menggunakan formalin selama 90
menit
- Setelah itu, dilakukan proses dehidrasi menggunakan alkohol
96% selama 40 menit, dan menggunakan etanol selama 60
menit
- Kemudian, dilakukan proses clearing menggunakan xylol
selama 60 menit
- Terakhir dilakukan proses infiltrasi menggunakan paraffin
cair selama 60 menit
Note :
Dehidrasi : menghilangkan sisa-sisa air dalam jaringan
Clearing : mengosongkan pori-pori
Infiltrasi : pori-pori yang telah dikosongkan, di isi paraffin cair
5
- Ambil base mold dari mold storage (60°C) untuk mencetak
blok sesuai ukuran jaringan, letakkan diarea hot spot kemudian
isi dengan paraffin sesuai dengan volume yang dibutuhkan
- Ambil jaringan dari cassete dengan pinset dan letakkan kedalam
base mold dengan bagian penampangan jaringan mengadap ke
bawah, lakukan dengan sedikit menekan jaringan agar jaringan
tidak mengambang.
- Tutup dengan kaset jaringan
- Tuangkan paraffin cair kembali hingga batas maksimal
- Dinginkan di atas cooling plate dengan kondisi alas base mold
dingin
- Setelah blok mengeras, keluarkan blok jaringan dari base mold
6
- Metode “trim” digunakan untuk mendapatkan penampang
(permukaan jaringan)
- Ketebalan pemotongan di atur 5-10 mikron
- Putar pegangan mikrotom secara manual sehingga blok bergerak
untuk memotong
- Setelah penampang jaringan terlihat, lepaskan pisau mikrotom dan
pasang helm
- Pastikan blok dalam keadaan dingin untuk mempermudah section
(potong halus)
- Setelah itu, pasang pisau potong halus untuk membuat pita jaringan
dengan metode “section”
- Lakukan pemotongan jaringan dengan ketebalan 0,5-2 mikron
- Setelah didapat pita jaringan, kemudian masukkan ke dalam
waterbath suhu 45°C, untuk proses penempelan pita jaringan ke
objek glass, air dalam waterbath tidak boleh terlalu panas karena
dapat merusak jaringan
- Kemudian ambil jaringan pada air dan letakkan pada permukaan
objek glass
- Setelah itu tiriskan objek glass dan jangan lupa memberi label
nomor berdasarkan cassete embedding
- Diamkan preparat di atas hot plate selama 10 menit hingga paraffin
mencair dan susun pada anting dengan cara back to back, kemudian
dilanjutkan pada tahap pewarnaan.
7
akan menarik zat/larutan yang bersifat asam sehingga akan
berwarna merah dari zat eosin.
Alat dan Bahan :
- Prepatat jaringan - Zat warna eosin
- Chamber pengecatan - Air mengalir
- Xylol - Canada balsam
- Alkohol 70%, 80%, 96% - Kapas / tissue
- Etanol - Deck glass / cover glass
- Zat warna hematoxylin - Objeck glass
- Wadah untuk mencuci preparat (bolong dipinggir bawah)
Prosedur Kerja :
- Deparafinisasi (menghilangkan parafin) preparat ke dalam
xylol 1,2,3 (5 menit).
- Keringkan pada suhu kamar (5 menit)
- Masukkan ke dalam etanol 1,2 (3 menit).
- Masukkan ke dalam alkohol 96% 1, 2 (3 menit).
- Cuci dengan air mengalir sampai alkohol hilang (3 menit)
- Rendam ke dalam hematoxylin meyer (12 menit).
- Cuci dengan air mengalir (7 menit).
- Masukkan ke dalam larutan alkohol 70% (6 celup)
- Masukkan ke dalam alkohol 80% (6 celup)
- Masukkan ke dalam eosin (2 celup)
- Masukkan ke dalam alkohol 96% 1,2 (6 celup)
- Masukkan ke dalam etanol (5 celup)
- Bersihkan preparat dengan tissue dan keringkan.
- Masukkan preparat ke dlam xylol (4 celup)
- Preparat dikeringkan dibagian bawah dan sisi-sisinya dilap
dengan tissue
- Kemudian lakukan mounting proses entelan (untuk
merekatkan bahan preparat) penutupan jaringan diantara
cover glass dengan objek glass oleh entelan/canada balsam.
- Preparat siap diserahkan dan dibaca oleh dr. Sp. PA.
8
2.3 IMUNOHISTOKIMIA (IHC)
Imunohistokimia (immunohistochemistry / IHC) merupakan
teknik pewarnaan histologi yang memungkinkan pendeteksian antigen
jaringan (marker) pada berbagai spesimen dengan menggunakan prinsip
interaksi antigen-antibodi yang spesifik. Antibodi digunakan untuk
memvisualisasikan bagian tertentu dari jaringan. Imunohistokimia
diambil dari nama “immune” yang menunjukkan prinsip dasar dalam
proses ini ialah respon imun yaitu reaksi antara antigen dan antibodi,
serta “histo” yang menunjukkan jaringan secara mikroskopis. Metode
ini masih dianggap sebagai pemeriksaan laboratorium yang berharga
tidak hanya untuk kebutuhan diagnosis suatu kelainan/penyakit tetapi
juga untuk keperluan penelitian dalam bidang histopatologi.
Imunohistokimia sering digunakan untuk penelitian dasar dalam rangka
mengetahui distribusi dan lokasi biomarker ataupun protein terekspresi
pada berbagai macam jaringan pada tubuh. Pada prinsipnya, IHC
didasarkan pada ikatan antara antibodi primer monoklonal atau
poliklonal yang mengikat antigen pada jaringan, membentuk kompleks
imun, untuk diikat oleh antibodi sekunder yang terkonjugasi enzim
seperti peroksidase. Ketika kromogen tertentu ditambahkan, enzim
tersebut mampu mengubah kromogen menjadi warna tertentu yang
tidak dapat larut yang dapat kita identifikasi di bawah mikroskop.
9
munculnya pewarnaan background yang akan mengganggu
pengamatan. Setelah ini, dilakukan antigen retrieval yaitu upaya
memunculkan epitop antigen untuk meningkatkan intensitas warna
antibodi yang mungkin melemah karena proses fiksasi dan parafinisasi.
Metode antigen retrieval yang umum digunakan adalah induksi panas
(dinamakan juga heat induced epitope retrieval / HIER) atau dengan
enzim proteolitik. HIER dilakukan dengan perendaman dalam buffer
sitrat atau Tris-EDTA sebelum dipanaskan dengan mesin HIER,
microwave, boiling, steamer, waterbath atau inkubator. Setelah antigen
retrieval, tahap berikutnya adalah protein blocking untuk memblok
protein tidak spesifik yang ada pada jaringan yang berpotensi
mengganggu ikatan antigen-antibodi. Protein blocking dapat dilakukan
menggunakan normal serum, atau larutan blocking seperti bovine serum
albumin (BSA), gelatin dan tryptone casein peptone. Tibalah langkah
yang krusial yaitu tahap antibodi primer dimana bisa menggunakan
antibodi monoklonal atau poliklonal. Inkubasi antibodi primer
bervariasi durasi maupun suhu lingkungannnya. Antibodi sekunder lalu
diaplikasikan untuk berikatan dengan antibodi primer tersebut (yang
sudah berikatan dengan antigen teridentifikasi pada jaringan). Pada
tahap akhir kromogen ditambahkan untuk memvisualisasikan kompleks
antigen-antibodi tersebut. Jika dirasa perlu, bisa ditambahkan
pewarnaan latar belakang tambahan (counterstain) dengan
menggunakan hematoksilin. Kaca preparat kemudian ditutup dengan
coverslip dan dilihat dibawah mikroskop cahaya.
2.4 SITOLOGI
Sitologi adalah ilmu yang mempelajari morfologi sel-sel cairan
tubuh. Cairan itu bisa kita dapat dengan dua cara tergantung pada tujuan
pemeriksaan :
1. Cairan-cairan yang sudah keluar lepas dari organ tubuh dan sewaktu-
waktu bisa kita siapkan dengan mudah. Contoh : Urine, Sputum.
10
2. Cairan-cairan yang didapat secara aspirasi pada organ tubuh yang
dicurigai. Contoh : FNAB,C.ascites,C.pleura,Pap smear dll.
Pemeriksaan sitologi merupakan cara yang mudah, murah, sederhana
dan hasilnya cukup akurat.
11
2.4.2 Pengambilan Sampel FNAB (Fine Needle Aspiration Biopsy)
Tujuan : Mendapatkan sampel sel untuk
menentukan tanda-tanda adanya keganasan
Alat dan Bahan :
- CT Scan
- USG
- Ballpoint
- Marker Bahan opaque
- Peralatan patologi ; Jarum halus 25G pendek atau Panjang
(spinal needle) tergantung jarak lesi dari permukaan kulit,
spuit 20cc, gelas objek, pengering, dan pewarna
Prosedur Kerja:
1. Informed consent/persetujuan tindakan medic oleh
pasien/keluarga.
2. Persiapan peralatan dan tempat.
3. Tindakan pengambila sampel (FNAB)
Berikut langkah-langkah tindakan pengambilan sampel
(FNAB)
a) Persiapan Pasien :
Kondisi pasien :
- kooperatif (nafas memungkinkan, tidak gelisah, bisa
supine/prone/miring), atau dengan bantuan anestesi.
- hasil lab. BUN, SC, coagulation & bleeding time
Lesi :
- Bisa dicapai, tidak melalui area berbahaya, bisa dianalisis
dari pemeriksaan imejing sebelumnya.
b) Persiapan Alat :
- CT Scan
- USG
- Ballpoint
- Marker Bahan opaque
12
- Peralatan patologi ; Jarum halus 25G pendek atau panjang
(spinal needle) tergantung jarak lesi dari permukaan kulit,
spuit 20cc, gelas objek, pengering, pewarna.
c) Posisikan pasien sesuai perkiraan lesi.
d) Pemeriksaan imejing.
e) Tentukan lesi : representative, paling aman dan terpendek.
f) Ukur jarak dan sudut.
g) Lakukan penusukan, scan ulang untuk cek posisi.
h) Aspirasi.
i) Buat smear, pewarnaan, periksa dengan mikroskop.
4. Pembuatan sediaan hapus
5. Fiksasi
- Alcohol 95 % (papanicolau)
- Kering, methanol (giemsa)
6. Pulasan
2.4.3 Pengambilan Sampel PAP Smear
Sampel berasal dari serviks di ambil menggunakan cocor
bebek. Harus langsung di fiksasi, tidak boleh terkena udara
Tujuan : Untuk mengetahui teknik pengambilan sample pap
smear
Metode : Kombinasi Spatula dengan Endocervical Brush
Alat dan bahan :
- Meja pemeriksaan yang dilapisi kain bersih
- Spekulum yang sudah didisinfeksi
- Sarung tangan
- Spatula eyle
- Cytobrush
- Kaca Preparat
- Tabung pengawet
- Air hangat untuk merublikasi spekulum
- Klorin 0,5 persen untuk dekontaminasi peralatan
- Etil Alkohol 95% (bila menggunakan metode fiksasi
konvensional)
Prosedur Kerja :
- Pemeriksa duduk pada kursi yang telah disediakan,
menghadap ke aspekus genitalis.
- Melakukan periksa pandang (inspeksi) pada daerah vulva
dan perineum.
13
- Ambil spekulum dengan tangan kanan, masukkan ujung
telunjuk kiri pada introitus (agar terbuka), masukkan ujung
spekulum dengan arah sejajar introitus (yakinkan Bahwa
tidak ada bagian yang terjepit) lalu dorong bilah ke dalam
lumen vagina.
- Setelah masuk setengah panjang bilah, putar spekulum 90º
hingga tangkainya ke arah bawah.atur bilah atas dan bawah
dengan membuka kunci pengatur bilah atas bawah (hingga
masing-masing bila menyentuh dinding atas dan bawah
vagina).
- Tekan pengungkit bilah sehingga lumen vagina dan serviks
tampak jelas (perhatikan ukuran dan warna porsio, dinding
dan sekret vagina atau forniks)
- Jika sekret vagina ditemukan banyak, bersihkan secara hati-
hati (supaya pengambilan epitel tidak terganggu).
- Pengambilan sampel pertama kali dilakukan pada porsio
(ektoserviks). Sampel diambil dengan menggunakan spatula
ayre yang diputar 360° pada permukaan Porsio.
- Oleskan sampel pada gelas objek.
- Sampel endoserviks (kanalis servikalis) diambil dengan
menggunakan cytobrush dengan memutar 360° sebanyak
satu atau dua putaran.
- Oleskan sampel pada gelas objek yang sama pada tempat
yang berbeda dengan sampel yang pertama, hindari jangan
sampai tertumpuk.
- Sampel segera difiksasi sebelum mengering. Bila
mnggunakan spray usahakan menyemprot dari jarak 20 – 25
cm atau merendam pada wadah yang mengandung
Etilalkohol 95% selama 15 menit, kemudian biarkan
mengering kemudian diberi label.
- Setelah pemeriksaan selesai, lepaskan pengungkit dan
pengatur jarak bilah, kemudian keluarkan spekulum
- Letakkan spekulum pada tempat yang telah disediakan.
- Pemeriksa berdiri untuk melakukan periksa bimanual untuk
tentukan konsistensi Porsio, besar dan arah uterus serta
keadaan parametrium.
- Angkat tangan kiri dari dinding perut, usapkan larutan
antiseptik pada bekas Sekret/cairan di dinding perut dan
sekitar vulva/perineum.
- Beritahukan pada pasien bahwa pemeriksaan sudah selesai.
- Setelah sampel sel terkumpul, segera lakukan fiksasi untuk
mencegah sel mengering dengan udara luar. Fiksasi dapat
dilakukan dengan teknik konvensional dan teknik liquid
based.
14
2.4.4 Pembuatan Preparat Sitologi
Teknik Pengelolaan Sediaan Sitologi (Dibacakan pada
Simposium Prosedur dan Analisis FNAB yang Tepat dalam
meningkatkan Akurasi Diagnosis) Oleh: Bethy S. Hernowo,
dr., Sp.PA(K)., Ph.D
Hal-hal yang harus diperhatikan dalam pembuatan sitologi
dan fiksasinya.
2. ¾ dari luas kaca objek memanjang, kita isi apusan yang rata
tidak terlalu tebal atau terlalu tipis.
Metode fiksasi
Fiksasi adalah usaha manusia untuk mempertahankan elemen-
elemen sel atau jaringan agar tetap pada tempatnya dan tidak
mengalami perubahan bentuk maupun ukuran. Bahan/larutan
15
fiksatif yang sering digunakan dalam sitologi antara lain
Alkohol (Etanol) dan Metanol (Methyl Alkohol).
Cara fiksasi ada 2 :
1. Fiksasi langsung
Ialah fiksasi pada sediaan smear / apusan
Contohnya : - Pap smear
- FNAB yang langsung dibuat smear / apusan.
- Apusan endapan cairan yang sudah disentrifuge.
2. Fiksasi tidak langsung
Ialah fiksasi yang dilakukan pada bahan/cairan yang tidak
segera di buat sediaan.
Contohnya : C. ascites, C.pleura dsb difiksasi dengan alkohol
50 % perbandingan 1:1, kecuali untuk sputum difiksasi dengan
alkohol 70 % perbandingan 1:1.
2.4.5 Pewarnaan Papanicolau
16
Prosedur :
- Siapkan alat dan bahan yang akan digunakan
- Setelah dibuat sediaan apus tebal / tipis dari sampel
cairan ( sitologi ), fiksasi dengan Alkohol 96% selama
15 menit
1. Tahap pertama yaitu tahap rehidrasi
- Celupkan kedalam alkohol sebanyak 5 kali celup
- Pindahkan ke dalam alcohol 80 % selama 5 menit / 5 kali
celup
- Pindahkan preparat ke dalam alcohol 75% selama 5 menit /
5 kali celup.
- Cuci dengan air mengalir selama 5 menit ( mencuci jangan
langsung pada slide karena dapat merusak sampel )
2. Masukan dan rendam dalam pewarna Hematoxylin selama 5-10
menit.
3. Cuci dengan air mengalir 5 – 10 menit.
4. Tahapan blueing
- Masukkan preparat ke dalam Lithium carbonat selama 1
kali celup
5. Cuci dengan air mengalir 3 menit.
6. Masukkan ke dalam reagen EA 50% selama 3 menit
7. Masukkan ke dalam Alkohol 96% 5 – 10 menit
8. Masukkan preparat ke dalam reagen OG 6% Selama 3 menit
9. Tahapan dehidrasi
- Masukkan preparat bilas dalam alcohol 96% 5 – 10 menit
- Pindahkan lalu bilas ke alcohol 96% 5 – 10 menit
- Pindahkan lalu bilas ke alcohol 96% 5 – 10 menit
- Pindahkan lalu bilas ke alcohol 96% 5 – 10 menit
10. Kemudian tiriskan dan keringkan preparat
11. Lakukan tahap clearing, celupkan preparat sebanyak 1kali
kedalam xylol.
17
12. Kemudian lakukan tahap mounting, dengam memberi entelan
dan deck glass pada sediaan
18
mempersiapkan sampel jaringan sehingga struktur kromosom dapat diamati dan
dianalisis di bawah mikroskop.
Proses utama dalam sitogenetika histologi melibatkan pewarnaan
kromosom dengan menggunakan zat-zat pewarna yang spesifik. Pewarnaan ini
membantu dalam visualisasi dan identifikasi struktur kromosom yang normal atau
abnormal. Setelah pewarnaan, kromosom diobservasi dan dihitung dengan cermat
untuk mengidentifikasi perubahan seperti translokasi, delesi, duplikasi, atau
inversi yang mungkin terjadi. Informasi yang diperoleh dari analisis sitogenetika
histologi dapat memberikan wawasan penting dalam mendiagnosis penyakit
genetik, kelainan kromosom, atau kanker. Hasil-hasil ini dapat digunakan untuk
membantu dokter dalam mengembangkan strategi pengobatan yang sesuai atau
memberikan pemahaman yang lebih baik tentang mekanisme patologi yang
terjadi.
.Dalam sitogenetika histologi, penting untuk menjaga validitas dan kualitas
mutu pemeriksaan. Validasi metode, kualifikasi personel, pengendalian mutu
internal, dan verifikasi eksternal juga diterapkan dalam proses pemeriksaan
sitogenetika histologi untuk memastikan keandalan dan akurasi hasil-hasil yang
diperoleh. Dengan menggabungkan histologi dengan sitogenetika, pengetahuan
tentang struktur dan perubahan kromosom dalam jaringan biologis dapat
memberikan wawasan yang lebih dalam tentang mekanisme penyakit dan
membantu dalam pengembangan terapi yang lebih efektif.
2.6 PENGARSIPAN
5. Pengarsipan (Histologi)
Judul : PENGARSIPAN PREPARATE DAN BLOK PARAFIN
Tujuan :
- Blok parafin sebagai arsip tidak rusak,tidak hilang (aman)
- Mudah dicari dan tersusun rapi
- Di simpan sebagai arsip sehingga dalam 5 tahun dapat di gunakan
Alat dan bahan :
- Pingset
- Kaset
- Jaringan
- Basemol
- Box plastic
- Jaringan
Prosedur Kerja :
1. Sisa blok paraffin yang telah di potong di susun berdasarkan nomor
urut di masukkan kedalam box plastik
2. Blok yang sudah di susun tersebut di letakkan pada rak-rak blok
paraffin
3. Kotak di beri batas berdasarkan berdasarkan tahun
4. Tuangkan paraffin cair 1/2 ke dalam base mold
5. Posisikan Jaringan sesuai dengan yang diharapkan/sesuai orientasi
19
6. Dinginkan dasar dari basemold sehingg Posisi tidak berubah
7. Tutup dengan kaset Jaringan
8. Tuangkan paraffin cair kembali hingga batas basemold dengan kaset
tertutupi
9.Diletakkan diatas cooling plate untuk didinginkan. Sedian histopatologi
& sitopatologi yang sudah di buat di lakukan pengecekan kualitas
sedian berkala di mikroskop
Di nilai / di cek sedaian:
1. Ada / tidak nya krek
2. Kualitas pewarnaan
3. Ada / tidaknya liputan
4. Ada /tidaknya sisa paraffin
5. Apakah jaringan sudah cukup baik/belum
Sedian yang sudah di baca oleh dokter Sp.PA kemudian di ketik
dan di print sebanyak 2 rangkap, 1 rangkap di kirimkan ke
RS.pasien, 1 rangkap digunakan untuk arsip.
Arsip dikategorikan menjadi 2 yaitu
1.Arsip Kering
• Arsip dokumen soft copy & hard copy (min 10 th)
• Arsip blok paraffin & slide (min 5 th)
Arsip disusun berdasarkan dari nomor terkecil ke terbesar dan disimpan
ditempat khusus.
2.Arsip Basah
Berupa sisa jaringan yang disimpan kedalam container khusus di beri label
nomor (3bulan). Label berisi (tanggal, No.PA, No urut, kode sampel)
2.Pengarsipan (Sitologi)
Judul : PENGARSIPAN KERTAS DAN PREPARATE SITOLOGI
Tujuan :
- Kertas sebagai dokumen tidak rusak, tidak hilang (aman)
- Preparat sitologi sebagai arsip tidak rusak, tidak hilang (aman)
- Mudah dicari dan tersusun rapi
- Di simpan sebagai arsip sehingga dalam jangka 10 tahun dapat di
gunakan
Alat dan bahan :
- Kertas
- Alat cetak
- Alat fotocopy
- Buku arsip kertas
- Buku arsip preparat
Prosedur Kerja :
20
Pengarsipan untuk pemeriksaan sitologi ini ada dua macam yaitu
pengarsipan kertas dan Pengarsipan preparat sitologi
A.Pengarsipan Kertas
1. Setelah pembacaan hasil yang dilakukan oleh dokter
2. Petugas lab mengetik diagnosa yang telah ditulis oleh dokter.
3. Cetak dengan bebeapa macam lembar kertas yang masing-
masing kertas tersebut terdiri dari:
- 2 lembar sebagai hasil yang akan diberikan kepada pasien yang
sebelumnya ditulis kedalam buku ekspedisi pengambilan hasil
laboratorium histologi atau sitologi.
- 1 lembar yang akan dicatat dalam buku ekspedisi rekam medic
diantaranya yang berwarna biru (histologi) dan yang berwarna
kuning (sitologi).
- Dan 1 lembar copy hasil yang akan diarsipkan bersama formulir
pasien kedalam arsip kertas dari nomor urut terkecil hingga
nomor urut terbesar.
- Jangka waktu penyimpanan arsip.dalam waktu 10 tahun
penyimpanan
B. Pengarsipan preparat sitologi
1. Asipkan preparat yang telah dibaca dokter kedalam buku pengarsipan
preparat.
2. Tulislah dari nomor urut terkecil hingga terbesar beri label nomor (3
bulan). Label berisi (tanggal, No.PA, No urut, kode sampel)
3. Untuk preparat sitologi tulis dibuku pengarsipan bagian sitologi.
4. Kemudian preparat tersebut disimpan ke dalam lemari
5. Penyimpanan dari nomor urut terkecil hingga nomor urut terbesar
Sedian histopatologi & sitopatologi yang sudah di buat di lakukan
pengecekan kualitas sedian berkala di mikroskop
Di nilai / di cek sedaian:
1. ada / tidak nya krek
2. kualitas pewarnaan
3. ada / tidaknya liputan
4. ada /tidaknya sisa paraffin
5. apakah jaringan sudah cukup baik/belum
21
Sedian yang sudah di baca oleh dokter Sp.PA kemudian di ketik
dan di print sebanyak 2 rangkap, 1 rangkap di kirimkan ke RS.pasien, 1
rangkap digunakan untuk arsip.
2.7 LIMBAH PATOLOGI ANATOM
laboratorium patologi anatomi merupakan salah satu bagian dari fasilitas
kesehatan guna mendukung tenaga kesehatan untuk menentukan diagnostik pasti
dari suatu penyakit seperti kanker. Limbah lingkungan yang dikeluarkan oleh
laboratorium ini pada umumnya adalah bahan kimia. Limbah laboratorium
patologi anatomi dapat berasal dari tubuh manusia ataupun hewan. Limbah yang
berasal dari laboratorium patologi anatomi masuk ke dalam subkategori dari
limbah biohazardous. Sumber limbah biasanya berasal dari pembedahan atau
penelitian yang melibatkan pengambilan organ, jaringan atau bagian tubuh
lainnya serta bahan-bahan pengolahan pembuataan sediaan histologik maupun
sitologi.
Tiga reagen dengan volume tertinggi yang dibuang oleh laboratorium
patologi anatomi adalah formalin, alkohol dan larutan pembeningan (xilol).
Ketiga bahan kimia itu dapat pula dilakukan daur ulang, namun tetap
menghasilkan dampak lain ke lingkungan. Pad adasarnya formalin dapat diganti
dengan fiksatif berbasis glyoxal yang efektif yang dapat dibuang dimana saja
karena biodegradabilitasnya yang tinggi dan toksisitas air yang rendah, namun
kembali lagi bahwa mekanisme tersebut membutuhkan biaya yang tinggi.
Pembuangan inilah yang biasa kita sebut dengan limbah patologis.
Pilihan terbaik untuk pembuangan adalah menuangkan limbah ke saluran
pembuangan sanitasi, dari situ bisa dilakukan pengolahan terlebih dahulu sebelum
memasuki lingkungan. Limbah seperti itu, bagaimanapun, tidak boleh
membahayakan proses biologis yang dilakukan oleh fasilitas pengolahan limbah;
Juga tidak harus melewati sistem yang tidak diolah. Contoh yang pertama adalah
formaldehid dengan kekuatannya dan kuantitas yang cukup untuk membunuh
bakteri pada proses pengolahan.
Beberapa limbah dapat dianggap diterima untuk pembuangan.:
1. Asam dan basa dapat dinetralkan dan formalin dapat didetoksifikasi dengan
produk komersial. Pastikan proses pretreatment aman, efektif dan dapat diterima.
Jangan pernah mencoba mendetoksifikasi formalin dengan mencampur dengan
pemutih (sodium hipoklorit) atau amonia.
2. reaksi bersifat eksotermik dan dengan cepat bisa lepas kendali, menghasilkan
uap dan cairan panas ke seluruh laboratorium. Ketahuilah dengan pasti produk
reaksinya, dan pastikan kadar toksisitasnya hingga konsentrasi yang sangat
rendah.
3. Pelarut yang tidak larut dalam air tidak pernah dialirkan satu kali, bahkan jika
larutan tersebut mudah terbiodegradasi. Jika bahan kimia mudah terbakar dengan
nilai kalori yang cukup tinggi, bahan kimia tersebut mungkin harus dicampur
22
terlebih dahulu dengan bahan bakar dalam sistem pembakaran. Kandidat yang
baik untuk pilihan ini adalah agen pembeningan kecuali kloroform pelarut
halogen, trikloroetana dan turunannya.
4. Perhatikan bahwa bahan kimia yang memiliki metode ini tidak boleh membakar
limbahnya dalam insinerator. Perbedaannya memang sangatlah tipis tapi penting
untuk diperhatikan. Insinerator ada untuk tujuan menghancurkan limbah.
23
BAB 3
PENUTUP
3.1 KESIMPULAN
Berdasarkan pelaksanaan kegiatan Praktek Belajar Lapangan di Laboratorium
Dyat Nitalis dari tanggal 10 s.d 31 Mei 2023 dapat disimpulkan, Mahasiswa telah
mampu melakukan pembuatan preparat sesuai prosedur dari tahap administrasi,
pemeriksaan jaringan, mendeskripsikan dan memotong gross jaringan, membuat
blok paraffin, pengecatan preparat histologi, menerima bahan sitologi, melakukan
persiapan sitologi, mampu melakukan pengecatan sitologi, dan melakukan
pengendalian mutu (QC), Pemantapan Mutu Internal, dan Pemantapan Mutu
Eksternal, serta mengetahui cara pengarsipan blok paraffin yang baik dan benar.
Mahasiswa telah mengetahui bahwa proses histologi dan sitologi jaringan harus
dilakukan secara bertahap dengan prosedur atau tahapan yang terstruktur
27
DAFTAR PUSTAKA
Ramkita, Nora. 2022. PENANGANAN JARINGAN PATOLOGI ANATOMI.
Kementrian Kesehatan Direktorat Jendral Pelayanan Kesehatan. Diakses
melalui: https://yankes.kemkes.go.id/view_artikel/285/penanganan-
jaringan-patologi-anatomi
Pertiwi, Kartika. 2015. PENERAPAN IMMUNOHISTOKIMIA PADA RISET
LABORATORIUM HISTOPATOLOGI: DETEKSI KEMATIAN SEL
PADA TROMBUS KORONER DENGAN TEKNIK VIRTUAL
MULTIPEL IMMUNOHISTOKIMIA. Fakultas Matematika Dan Ilmu
Pengetahuan Alam. Universitas Negeri Yogyakarta. Diakses melalui:
http://staffnew.uny.ac.id/upload/132319831/pengabdian/PPM8%20Work
shop%20Unhas.pdf
Jemali V. 2013. Indonesia Peringkat Ke-3 PengidapKustaTerbesar di Dunia.
Melaluihttp://nasional.kompas.com/read/2013/02/13/21064444/
twitter.com [cited 06/20/2013]
Kartowigno, Soenarto. 2011. 10 Besar Kelompok Penyakit Kulit, Fakultas
Kedokteran Universitas Sriwijaya: Palembang
Kemenkes RI, 2014 Profil Kesehatan Indonesia tahun 2014
http://www.depkes.go.id/resources/download/pusdatin/profil-kesehatan-
indonesia/profil-kesehatan-indonesia-2014.pdf
25
LAMPIRAN
3.2 Dokumentasi Histopatologi
26
Gambar 4. Tahapan Pematangan Jaringan
27
Gambar 9. Proses Deparafinisasi di Waterbath
28
Gambar 12. Sediaan yang telah diwarnai dan siap diperiksa
Gambar 14. Sampel yang telah di centrifuge dan supernatant yang telah dibuang
29
Gambar 15. Pembuatan Sediaan Apus Sitologi
30
Gambar 19. Kontrol Kualitas Sediaan
31