LAPORAN PRAKTEK KERJA LAPANGAN

DETEKSI ANTIBODI TERHADAP ANTIGEN F1 BAKTERI PENYAKIT

PES (PLAGUE) Yersinia pestis PADA SERUM DARAH TIKUS (Rattus
tanezumi) DENGAN METODE HA (Heme Aglutination) DAN HI
(Hemeaglutination Inhibition) DI INSTALASI LABORATORIUM
PENCEGAHAN DAN PENGENDALIAN PENYAKIT, BBTKLPP,
NONGKOJAJAR, PASURUAN JAWA TIMUR

Oleh :
DEVINTA WAHYU ANGGRAINI
081511433036

PROGRAM STUDI S1 BIOLOGI

DEPARTEMEN BIOLOGI
FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS AIRLANGGA
SURABAYA

2018
 LAPORAN PRAKTEK KERJA LAPANGAN

DETEKSI ANTIBODI TERHADAP ANTIGEN F1 BAKTERI PENYAKIT

PES (PLAGUE) Yersinia pestis PADA SERUM DARAH TIKUS (Rattus
tanezumi) DENGAN METODE HA (Heme Aglutination) DAN HI
(Hemeaglutination Inhibition) DI INSTALASI LABORATORIUM
PENCEGAHAN DAN PENGENDALIAN PENYAKIT, BBTKLPP,
NONGKOJAJAR, PASURUAN JAWA TIMUR

Oleh :
DEVINTA WAHYU ANGGRAINI
081511433036

PROGRAM STUDI S1 BIOLOGI

DEPARTEMEN BIOLOGI
FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS AIRLANGGA
SURABAYA

2018

i
 KATA PENGANTAR

Puji syukur kami panjatkan kehadirat Allah SWT karena berkat

Rahmat dan Hidayah-Nya, penulis dapat menyelesaikan Laporan Akhir

Praktek Kerja Lapangan yang berjudul “DETEKSI ANTIBODI

TERHADAP ANTIGEN F1 BAKTERI PENYAKIT PES (PLAGUE)

Yersinia pestis PADA SERUM DARAH TIKUS (Rattus tanezumi)

DENGAN METODE HA (Heme Aglutination) DAN HI

(Hemeaglutination Inhibition) DI INSTALASI LABORATORIUM

PENCEGAHAN DAN PENGENDALIAN PENYAKIT, BBTKLPP,

NONGKOJAJAR, JAWA TIMUR”

Adapun laporan ini telah dapat terselesaikan dengan baik tentunya

dengan bantuan berbagai pihak, Sehingga dapat memperlancar pembuatan

laporan ini. Untuk itu penulis tidak lupa mengucapakan terima kasih

kepada:

1. Ayah dan Ibu yang senantiasa selalu memberikan doa, dukungan,

semangat untuk menyelesaikan laporan PKL ini.

2. Tante dan Om yang senantiasa memberikan tempat tinggal untuk

menunjang penyelesaian laporan PKL ini.

3. drh. Teguh S. Sinulingga, MVSc selaku pembimbing lapangan di

Instalasi Laboratorium Pencegahan Dan Pengendalian Penyakit, yang

telah memberi ilmu, bimbingan dan pengarahan dalam penulisan laporan

PKL ini.

iii
 iv

4. Prof. Drs. Win Darmanto, M.Si,Ph.D. selaku dosen pembimbing yang

telah memberi bimbingan dan pengarahan dalam penulisan laporan

Prakek Kerja Lapangan (PKL) ini.

5. Bapak Narsono A.Md yang selalu membimbing dalam prosesi uji

serologi HA dan HI.

6. Para staf dan petugas Instalasi Laboratorium Pencegahan dan

Pengendalian Penyakit BBTKLPP Nongkojajar Pasuruan Provinsi Jawa

Timur yang telah memberi dukungan baik ilmu maupun materi yang

terkait dengan konsumsi, kebersihan dan kemananan selama

berlangsungnya PKL.

7. Siti Richa Isnaini, Palupi Dasawulan Lestari, Shinta Tiara Sari dan Vivi

Nur Lailatul selaku kelompok satu laboratorium yang selalu menemani

selama PKL dan memberi koreksi selama penulis mengalami kesulitan.

Penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan baik dari segi

penyusunan bahasa maupun segi lainnya yang masih jauh dari sempurna.

Oleh sebab itu, penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun

dari para pembaca sehingga dapat memperbaiki laporan PKL ini. Semoga

laporan PKL ini dapat bermanfaat bagi pembacanya.

Surabaya, 14 Maret 2018

Devinta Wahyu Anggraini

 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ................................................................................. i

HALAMAN PENGESAHAN ................................................................... ii
KATA PENGANTAR ............................................................................... iii
DAFTAR ISI .............................................................................................. v
DAFTAR GAMBAR ................................................................................. vii
DAFTAR TABEL ..................................................................................... viii
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................. ix
BAB I PENDAHULUAN .......................................................................... 1
1.1 Latar Belakang .......................................................................... 1
1.2 Rumusan Masalah ..................................................................... 3
1.3 Tujuan Penelitian ...................................................................... 4
1.4 Manfaat Penelitian .................................................................... 4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA............................................................... 6
2.1 Pes (Plague) .............................................................................. 6
2.1.1 Pengertian Pes .................................................................. 6
2.1.2 Penularan ........................................................................ 7
2.1.3 Cara Penanggulangan dan Pecegahan Penyakit Pes.... 8
2.2 Tikus (Reservoir) ........................................................................ 9
2.2.1 Klasifikasi dan Jenis Tikus ............................................. 9
2.3 Pinjal .......................................................................................... 11
2.3.1 Klasifikasi Pinjal .............................................................. 11
2.3.2 Morfologi ......................................................................... 12
2.4 Yersinia pestis ............................................................................. 13
2.4.1 Morfologi .......................................................................... 13
2.4.2 Identifikasi Dan Isolasi Yersinia pestis ........................... 14
2.5 Antigen ....................................................................................... 15
2.6 Antibodi ..................................................................................... 16
2.7 Pemeriksaan Serologi Pes Antigen Fraction 1 (F1) ................ 17

v
 2.7.1 Uji HA (Hemeaglutination)............................................. 19
2.7.2 Uji HI (Hemeaglutination Inhibition) ............................ 19
2.8 BBTKLPP (Balai Besar Teknik Kesehatan Lingkungan Pengendalian
Penyakit) ........................................................................................ 20
2.8.1 Profil BBTKLPP .............................................................. 20
2.8.2 Struktur Organisasi......................................................... 22
2.8.3. Tugas Pokok ................................................................... 22
2.8.4. Bagian dan Bidang ....................................................... 24
BAB III METODE PENELITIAN .......................................................... 29
3.1 Waktu dan Tempat PKL .......................................................... 29
3.2 Alat dan Bahan .......................................................................... 29
3.2.1 Alat Penelitian .................................................................. 29
3.2.2 Bahan Penelitian .............................................................. 30
3.3 Metode Pelaksanaan PKL ......................................................... 30
3.3.1 Pengambilan Serum Darah Tikus Rattus tanezumi ...... 31
3.3.2 Pengambilan Darah Domba ( Fresh SRBC ) ............... 31
3.3.3 Persiapan Reagen ............................................................ 31
3.3.4 Persiapan Sampel .......................................................... 34
3.3.5 Pemeriksaan Sampel ...................................................... 34
3.3.6 Pembacaan Hasil Akhir ................................................. 37
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................. 39
4.1 Hasil .......................................................................................... 39
4.1.1 Hasil Analisa Kualitatif Aglutinasi ................................ 39
4.2 Pembahasan .............................................................................. 45
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN .................................................... 52
5.1 Kesimpulan ................................................................................. 52
5.2 Saran ........................................................................................... 53
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 54
LAMPIRAN

vi
 DAFTAR GAMBAR

Gambar. 2.2.1. Tikus Rattus Tanezumi .................................................................11

Gambar 2.3.1. Pinjal Xenopshylla cheopis .............................................................12

Gambar. 2.4.1. Bakteri Yersinia pestis....................................................................14

Gambar 2.8.2. Struktur Organisasi BBTKLPP ....................................................22

Gambar 3.1. Instalasi Laboratorium Pencegahan Dan Pengendalian Penyakit,

BBTKLPP Nongkojajar Pasuruan Jawa Timur ...............................29

Gambar 3.3.5.a. Uji Hemeaglutination (HA).........................................................35

Gambar 3.3.5.b. Uji Hemeaglutination Inhibition (HI) ........................................37

Gambar 4.1. Hasil akhir mikrowell uji HA Positif pada sampel serum darah

tikus Rattus tanezumi ...............................................................................................48

vii
 DAFTAR TABEL

Lampiran 1. Pengambilan Serum Darah Tikus Rattus tanezumi 37

Tabel 4.1.1. Data Sampel Dan Hasil Uji HA – TEST ..........................................39

Tabel 4.1.2. Data Sampel Dan Hasil Uji HI – TEST ............................................43

viii
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Kegiatan Pengambilan Serum Darah Tikus Rattus tanezumi .......56

Lampiran 2. Kegiatan Pengambilan Sheep Red Blood Cell (SRBC) ..................58

Lampiran 3. Alat – alat Yang Digunakan Pada Uji Hemeaglutinatin dan

Hemeaglutination Inhibition ...............................................................60

Lampiran 4. Bahan – bahan Yang Digunakan Pada Uji Hemeaglutination dan

Hemeaglutination Inhibition ...............................................................62

ix
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Pes atau sampar merupakan penyakit zoonosa ( bersumber binatang)

yang secara alami terdapat pada rodent dan dapat menular kepada manusia

lewat gigitan pinjal yang terdapat pada rodent tersebut. (Depkes RI, 2014).

Menurut International Health Regulation, pes termasuk dalam Public

Health Emergencies of International Concern (PHEIC) dan merupakan

jenis penyakit menular yang dapat menimbulkan wabah.(Depkes RI, 2008)

Epidemik penyakit pes di dunia mulai pada kasus sebanyak 25 juta

(50 - 60 % dari populasi) orang meninggal pada periode pertama tahun 514 -

741 M, periode kedua membunuh 60 % populasi di Eropa pada abad ke -

14 , dan periode ketiga menyebabkan 10 juta di dunia pada tahun 1800-an

(Abbot dan Rocke, 2012). Pada tahun 2013 sebanyak 783 kasus pes di dunia

dilaporkan, kematian sebanyak 128 jiwa (WHO, 2014), Kemudian pada

tahun 2014 terjadi wabah pes di Madagaskar sebanyak 263 dan kematian

sebanyak 71 jiwa atau dengan kata lain CFR pes sebesar 27 % (WHO,

2015).

Daerah fokus pes di Indonesia adalah Kabupaten Pasuruan (Jawa

Timur), Kabupaten Boyolali ( Jawa Tengah), Kabupaten Sleman ( Daerah

Istimewa Yogyakarta). (Depkes RI, 2016). Pada tahun 1987 terjadi kasus

pes di Kabupaten Pasuruan tepatnya di Dusun Surorowo, Kayukebek,

Kecamatan Tutur di mana saat itu secara klinis ditemukan penderita pes

1
 2

sebanyak 13 orang. Pada tahun 2004 terdapat 7 kasus, tahun 2005 11 kasus,

tahun 2006 4 kasus, kemudian pada tahun 2007 terjadi KLB (Kejadian Luar

Biasa) pes dengan 82 kasus ( Depkes RI, 2014). Kasus pes di Kabupaten

Pasuruan adalah salah satu alasan pembangunan Laboratorium Instalasi

Pencegahan dan Pengendalian Penyakit, Balai Besar Teknik Kesehatan

Lingkungan Penanggulangan Penyakit (BBTKLPP). Tahun 2007 – 2014

tidak terdapat kasus pes di Kabupaten Pasuruan. Kejadian tersebut

menunjukkan bahwa wabah pes yang terjadi di Kabupaten Pasuruan

memiliki siklus 10 tahunan. Siklus ini juga terjadi di wilayah pes lainya di

seluruh dunia (Pham, et al.., 2009). Namun, belum diketahui mengapa siklus

tersebut terjadi. Sejak saat pes ditemukan, sampai saat ini dilakukan

pengamatan pes secara intesif di Kabupaten Pasuruan untuk mengantisipasi

terjadinya KLB (Kejadian Luar Biasa). Pengamatan dilakukan di wilayah

endemis dan wilayah tempat keluar masuknya hasil pertanian atau barang

lain dari dan ke daerah endemis pes seperti di pelabuhan laut dan udara.

(Depkes RI, 2014).

Penyakit Pes disebabkan oleh bakteri Yersinia pestis yang

menginfeksi binatang kecil dan ditularkan dari binatang ke binatang melalui

gigitan kutu yang terinfeksi (Depkes RI, 2014). Hingga saat ini penyakit pes

masih menjadi momok bagi masyarakat dunia. Penyakit pes menyerang

pada daerah-daerah yang udaranya sejuk. Daerah-daerah yang udaranya

sejuk adalah daerah pegunungan (Syefri Luwis,2008). Hal ini disebabkan

karena penyakit pes bersumber pada pinjal (kutu). Pinjal lebih aktif bergerak
 3

dan lebih tahan hidup di daerah yang berhawa sejuk 170 – 230 C. Pinjal

hidup dan berkembangbiak pada rambut tikus.

Upaya untuk penanggulangan penyakit pes dilakukan dengan cara

surveilans. Survelans yang dilakukan adalah menangkap tikus dengan

memasang trap pada rumah – rumah penduduk, daerah kebun dan hutan.

Kegiatan Surveilans dilakukan oleh Pegawai Puskesmas Kabupaten

Pasuruan. Hasil penangkapan tikus kemudian dilakukan proses pengambilan

serum darah tikus untuk uji konfirmasi penyakit pes dengan cara uji serologi

Hemagulitination dan Hemeaglutination Inhibition. Bakteri Yersinia pestis

mengekpresikan antigen glikoprotein pada permukaan yang disebut Fraction

1 (F1) antigen atau antigen kapsuler pada suhu 33 0C. Antigen permukaan

yang unik ini merupakan antigen target utama yang digunakan dalam

diagnosa pes pada pemeriksaan DFA dan tes antibodi seperti

Hemeaglutination dan Hemeaglutination Inhibition. Kasus konfirmasi pes

positif apabila terdapat isolasi kultur dilisiskan dengan bakteriofag spesifik

dan pemeriksaan antibodi F1 dengan serum menunjukkan serum tunggal

positif dengan titer lebih dari 1 : 10.

1.2 Rumusan Masalah

Dari latar belakang masalah di atas, dapat diajukan rumusan masalah

sebagai berikut :

1. Apakah terdapat antibodi terhadap antigen spesifik F1 bakteri Yersinia

pestis di dalam serum darah tikus rumah (Rattus tanezumi) pada

pemeriksaan konfirmasi serologi penyakit pes (plague) ?

 4

2. Bagaimanakah cara dan prinsip kerja metode Hemeaglutination (HA) dan

Hemeaglutination Inhibition (HI) dalam mendeteksi antibodi terhadap

antigen spesifik F1 bakteri Yersinia pestis ?

3. Bagaimana tindakan yang dilakukan Balai Besar Teknik Kesehatan

Lingkungan dan Penanggulangan Penyakit setelah dikeluarkan Laporan

Hasil Uji (LHU) dari pemeriksaan Laboratorium ?

1.3 Tujuan Praktek Kerja Lapangan

1. Untuk mendeteksi antibody terhadap antigen spesifik F1 Yersinia pestis di

dalam serum darah tikus rumah (Rattus tanezumi) pada pemeriksaan

konfirmasi penyakit pes secara serologi.

2. Untuk mengetahui prinsip kerja metode Hemeaglutination (HA) dan

Hemeagllutination Inhibition (HI) dalam mendeteksi antibodi terhadap

antigen spesifik F1 bakteri Yersinia pestis.

3. Untuk mengetahui tindakan yang dilakukan Balai Besar Teknik Kesehatan

Lingkungan dan Penanggulangan Penyakit setelah dikeluarkan Laporan

Hasil Uji (LHU).

1.4 Manfaat Praktek Kerja Lapangan

1. Dapat menambah ilmu pengetahuan tentang penyakit pes dan bakteri

penyebab pes.

2. Dapat mengetahui cara dan prinsip kerja metode Hemeaglutination (HA)

dan Hemeaglutination Inhibition (HI).

 5

3. Dapat mengetahui tindakan yang dilakukan Balai Besar Teknik Kesehatan

Lingkungan Penanggulangan Penyakit dalam menganggulangi suatu

wabah penyakit di Indonesia.

4. Dapat mengaplikasikan ilmu yang diperoleh dibangku perkuliahan pada

dunia kerja.
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Pes ( plague)

2.1.1 Definisi

Pes atau sampar merupakan penyakit zoonosa ( bersumber binatang)

yang secara alami terdapat pada rodent dan dapat menular kepada manusia

lewat gigitan pinjal yang terdapat pada rodent tersebut. (Depkes RI, 2014).

Pes merupakan penyakit yang sudah lama muncul dan hingga sekarang

belum hilang dan masih menyebabkan wabah di beberapa negara. Pes

disebabkan oleh infeksi bakteri Yersinia pestis yang terdapat pada hewan

pengerat dan ditularkan ke hewan melalui gigitan kutu atau pinjal yang

terinfeksi bakteri tersebut. Tikus memiliki hubungan yang erat dengan

penyebab penyakit pes. Sehingga penyebaran pinjal yang terinfeksi bakteri

pes mudah tersebar melalui pergerakan tikus yang tempat hidupnya disekitar

rumah warga, perkebunan, dan hutan. Manusia dapat terinfeksi bakteri

Y.pestis melalui gigitan pinjal yang berasal dari tikus.

Wabah pes dikenal dengan nama black death, hal tersebut dikarenakan

menyebabkan tiga jenis wabah yaitu pneumonik, bubonik dan septikemik.

Pneumonik menyerang pernafasan, bubonik timbul benjolan pada bagian

ketiak, selangkangan atau inguinal, dan bagian tubuh di bawah telinga, dan

septikemik menyerang sistem peredaran darah. Ketiganya menyerang pada

sistem limfe, sistem limfe adalah suatu sistem sirkulasi sekunder yang

6
 7

berfungsi mengalirkan limfa atau getah bening didalam tubuh. Sehingga

menyebabkan pembengkakan kelenjar getah bening, demam tinggi, sakit

kepala, mual dan nyeri pada persendian. Dalam semua kasus, tingkat

kematian bervariasi dari 30 – 75% bagi bubonik, 90 – 95% pada pneumonik

dan 100% pada septikemik (Thomas C, 2009).

Pemerintah Indonesia maupun dunia sudah menetapkan penyakit pes

menjadi salah satu penyakit karatina dan tercatat dalam Internasional

Health Regulation. Penyakit ini juga termasuk dalam Public Health

Emergency of International Concern (PHEIC) atau Kedaruratan Kesehatan

yang Meresahkan Dunia. Public Health Emergency of International

Concern (PHEIC) adalah KLB (Kejadian Luar Biasa) yang dapat

merupakan ancaman kesehatan bagi negara lain dan kemungkinan

membutuhkan koordinasi internasional dalam penanggulangannya (Sub

Direktorat Zoonosis, 2008:1).

2.1.2. Penularan

Beberapa kemungkinan cara penularan penyakit pes, yaitu penularan

secara eksidental. Penularan pes secara eksidental dapat terjadi pada orang-

orang yang bekerja di hutan atau orang-orang yang sedang mengadakan

camping di hutan. Orang yang berada di hutan digigit oleh pinjal yang

dibawa oleh tikus atau secara langsung digigit oleh tikus hutan yang

terinfeksi penyakit pes. Penularan penyakit pes yang kedua terjadi pada

pekerja yang berhubungan erat dengan tikus, Penularan penyakit pes pada

manusia ditularkan melalui pinjal Xenopsylla cheopis dan Stivalius

 8

cognatus. Pinjal menggigit tikus hutan yang mengandung kuman pes,

kemudian pinjal menggigit tikus rumah, tikus rumah digigit oleh pinjal lain

dan kemudian pinjal tersebut menggigit manusia. Manusia yang terinfektif

ini bila memiliki kutu (Culex irritans) dapat menularkan ke manusia lain

lagi melalui kutunya. Penularan yang umum terjadi pada manusia yaitu

pinjal menggigit tikus yang mengandung bakteri Yersinia pestis.

2.1.3. Cara pencegahan dan penanggulangan penyakit pes.

Penyakit pes dapat dicegah dengan melakukan penyuluhan maupun

pendidikan kesehatan kepada masyarakat dengan mencegah terjadinya

kontak antara kutu dan tikus. Pengobatan penyakit pes yang masih sering

dilakukan adalah dengan menggunakan antibiotik seperti Gentamisin,

Kloramfenikol, Doksisiklin, Trimetropim-Sulfametoksazol, dan Sulfadiazin.

Penyakit pes dapat dicegah dengan melakukan penyuluhan maupun

pendidikan kesehatan kepada masyarakat dengan mencegah terjadinya

kontak antara kutu dan tikus. Belum ditemukanya vaksin untuk penyakit

pes. Sehingga pecegahan dan penanggulangan penyakit pes terfokuskan

pada kebersihan lingkungan. Lingkungan sangat mempengaruhi adanya

penyakit pes. Penyakit pes disebabkan oleh bakteri Y. pestis yang terdapat

pada tubuh pinjal atau kutu. Kutu atau pinjal sering dijumpai atau bersarang

pada tubuh tikus atau hewan pengerat. Cara untuk mencegah dan

menganggulangi penyakit pes yaitu mengawasi dan mengendalikan populasi

hewan pengerat di sekitar rumah maupun lingkungan tempat tinggal.

Pengendalian populasi hewan pengerat dapat dilakukan dengan mengadakan

 9

teknik surveilans. Surveilans merupakan program kesehatan untuk

menanggulangi terjadi epidemik pes. Surveilans memberikan informasi

penting dalam keputusan pencegahan efektif masalah kesehatan (Kumar dan

Raut, 2014).

Cara mencegah terjadinya kontak antara manusia dengan tikus dan

pinjal dapat dilakukan dengan menempatkan kandang ternak di luar rumah,

melakukan perbaikan konstruksi rumah dan gedung – gedung seperti

merubah lantai yang sebelumnya tanah menjadi semen, selalu menjaga

sanitasi sehingga mengurangi kesempatan bagi tikus untuk bersarang,

membuka beberapa buah genting pada siang hari atau memasang genting

kaca sehingga sinar matahari dapat masuk ke dalam rumah, menyimpan

bahan makanan di tempat yang tidak mungkin dicapai atau mengundang

tikus dan sebaiknya tidur di tempat tidur yang memiliki tinggi lebih dari 20

cm dari tanah. Jika menjumpai adanya tikus mati tanpa ada sebab yang jelas

maka segera melaporkan kepada petugas puskesmas untuk dilakukan tindak

lanjut. (Sub Direktorat Zoonosis, 2000)

2.2 Tikus (Reservoir)

2.2.1. Klasifikasi dan Jenis Tikus

Tikus dan mencit termasuk famili Muridae dari kelompok mamalia

(hewan menyusui). Para ahli zoologi sepakat menggolongkan ke dalam ordo

rodentia (hewan pengerat) untuk lebih jelas tikus dapat diklasifikasikan

sebagai berikut:

Dunia : Animalia

Filum : Chordata
 10

Sub Filum : Vertebrata

Kelas : Mammalia

Sub kelas : Theria

Ordo : Rodentia

Sub Ordo : Myomorpha

Famili : Muridae

Sub family : Murinae

Genus :Bandicota, Rattus dan Mus (Swastiko

Priyambodo, 2003)

Menurut tempat hidupnya tikus dibagi menjadi beberapa jenis, yaitu

tikus rumah (Rattus diardi, Mus musculus, Suncus murinus), tikus ladang

(Rattus exulans), tikus kebun (Rattus timanicus), tikus sawah (Rattus

argentiventer), dan tikus bukit (Niviventer) (Sub Direktorat Zoonosis,

2008:31). Tikus tersebut merupakan jenis tikus yang dapat membawa

penyakit pes.

Rattus rattus diardii/ tanezumi (Jentink) memiliki panjang total ujung

kepala sampai ujung ekor 220–370 mm, ekor 101-180 mm, kaki belakang

20–39 mm, telinga 13–23 mm. Rumus mamae 2 + 3 = 10. Warna rambut

badan atas coklat tua dan rambut badan bawah (perut) coklat tua kelabu.

Tikus jenis ini banyak dijumpai di rumah (atap, kamar, dapur) dan gudang,

jarang ditemukan di kebun sekitar rumah (BBTKLPP, Zoonosis 2008).

 11

Gambar 2.2.1. Tikus Rattus tanezumi

(Sumber : www.ecologyasia.com)
2.3 Pinjal

2.3.1 Klasifikasi Pinjal

Pinjal atau kutu termasuk dalam class Insecta dan family Pulicoidae.

Untuk lebih jelasnya, pinjal dapat diklasifikasikan sebagai berikut :

Kingdom : Animalia

Phylum : Arthropoda

Class : Insecta

Order : Siphonaptera

Family : Pulicoidea

Genus : Xenopsylla

Species : Xenopsylla cheopis (Departemen Parasitologi

FKUI 2008 ).

Jenis pinjal penyebab penyakit pes yaitu Xenopsylla cheopis, Pulex

iritans, Nleopsylla sondaica, dan Stivalius cognatus. Di antara beberapa

jenis pinjal tersebut, vektor utama penyakit pes yaitu Xenopsylla cheopis

(Sembel, 2009).
 12

Gambar 2.3.1. Pinjal Xenopsylla cheopis

(Sumber : www.inaturalist.org)

2.3.2 Morfologi

Pinjal merupakan serangga yang memiliki metamorfosa sempurna.

Pinjal memiliki larva yang menyerupai larva lalat yang memiliki rambut

untuk melenting. Larva pinjal memiliki ciri bentuk imago dorsal dan lateral,

pembagian kepala,toraks dan abomen jelas.(Susanna. 2011)

Pinjal memiliki ukuran tubuh 1,5 – 4 mm, seperti biji wijen yang

berbentuk dorsal lateral (Sembels, 2009). Bagian kepala dan dada terpisah ,

memiliki kaki sebanyak tiga pasang pada dada dan satu pasang terakhir

sangat besar. Dengan demikian, dapat melompat (FKUI, 2008).

Pinjal tidak memiliki sayap. Pinjal memiliki mata dan antena, yang

mendeteksi panas, getaran, karbon dioksida, bayangan, dan perubahan arus

udara, yang semuanya menunjukkan makan yang mungkin ada di dekatnya

(Departemen Parasitologi FKUI, 2008:). Serangga ini berwarna coklat

 13

seperti biji mahoni, ditemukan hampir di seluruh tubuh inang yang

ditumbuhi rambut. pinjal dewasa parasitik, sedang pradewasanya hidup di

sarang, tempat berlindung, atau tempat-tempat yang sering dikunjungi tikus

(Sembels, 2009).

2.4 Yersinia Pestis

2.4.1 Morfologi

Yersinia pestis adalah bakteri gram negatif yang berbentuk batang

dengan ukuran 1,5x0,5-0,7 mikron. Bakteri ini bersifat bipolar, non motil,

dan non sporing (Sub Direktorat Zoonosis, 2008:3). Pertumbuhan Y. pestis

akan lebih cepat pada media yang mengandung darah atau cairan jaringan

dan paling cepat bila berada pada suhu 30 C. Pada kultur agar darah dengan

suhu 37 C, koloni-koloninya akan semakin kecil dan dalam waktu 24 jam

akan mati. Inokulum virulen yang diturunkan dari jaringan yang terinfeksi

bakteri Y.pestis akan menghasilkan koloni berwarna abu-abu dan kental,

namun setelah dipindahkan ke laboratorium koloni tersebut menjadi

berubah dan kasar (Melnick, et all 2005).

 14

Gambar 2.4.1. Bakteri Yersinia pestis

(Sumber : www.abcdcatsvets.org )

2.4.2 Identifikasi dan Isolasi Yersinia pestis

Untuk mengidentifikasi bakteri Yersinia pestis pada vektor dan

reservoir perlu dilakukan pada tikus yang masih hidup atau tikus yang

ditemukan mati tanpa sebab (rat fall), sedangkan pada vektor dilakukan

pada pinjal yang ada pada tikus. Untuk mengidentifikasi ada tidaknya

bakteri Yersinia pestis pada tikus yang masih hidup dapat dilakukan dengan

cara mengambil sampel darah dari jantung atau dari daerah sekitar mata,

sedangkan pada tikus yang sudah mati dapat diambil dari jantung apabila

darah masih ada, jika darah sudah habis bisa diambil dari sumsum tulang

panjang seperti femur. Untuk mengidentifikasi sampel bakteri Yersenia

pestis dapat dilakukan dengan metode tes immunofluorescence langsung,

aglutinasi, tes enzyme-linked munosorbent, atau dengan mengisolasi

organisme dalam kultur murni. Dari semua metode ini, metode paling

efektif yaitu tes immunofluorescence langsung, tes ini dapat diketahui dalam

waktu 2 jam (Gage, 2010).

 15

Sedangkan identifikasi Yersinia pestis pada pinjal memerlukan waktu

yang lama. Identifikasi Yersinia pestis pada pinjal dilakukan dengan

menginjeksi hasil gerusan pinjal pada hewan coba selama 25 hari. Apabila

selama 25 hari tikus mati, maka perlu dilakukan pemeriksaan lebih lanjut.

Pemeriksaan dilakukan dengan mengambil darah pada tikus dan kemudian

dideteksi dengan teknik imunologi dan PCR (Gage, 2010).

2.5 Antigen

Antigen adalah zat - zat asing yang pada umumnya merupakan protein

yang berkaitan dengan bakteri dan virus yang masuk ke dalam tubuh.

Beberapa berupa polisakarida atau polipeptida, yang tergolong

makromolekul dengan BM > 10.000. Antigen bertindak sebagai benda asing

atau nonself oleh seekor ternak dan akan merangsang timbulnya antibodi.

Imunogen adalah substansi yang memiliki potensi menimbulkan induksi

respons imun apabila dengan tubuh. Potensi tersebut dinamakan

imunogenisitas. Antigen dan imunogen merupakan senyawa asing yang

masuk ke dalam tubuh dan keduanya akan diproses oleh sistem pertahanan

tubuh. Perbedaan utama dari antigen dan imunogen adalah terdapat pada

respons imun yang terjadi di dalam tubuh. Imunogen yang masuk ke dalam

tubuh pasti akan memicu respons imun di dalam tubuh, sedangkan antigen

yang masuk ke dalam tubuh belum tentu dapat memicu terjadinya respons

imun oleh tubuh.

Senyawa immunogen pasti merupakan senyawa antigen karena

keduanya merupakan zat asing yang sama-sama pasti bereaksi dengan

antibodi, sedangkan senyawa antigen belum tentu merupakan immunogen

 16

karena tidak semua antigen dapat memicu terjadinya respons imun spesifik

dari tubuh. Sifat dari antigen berupa kemampuan untuk bereaksi dengan

hasil dari antibodi yang telah diproduksi oleh sistem imun adalah

antigenicity. Sifat dari immunogen berupa kemampuan untuk memicu

terjadinya respons imun dari dalam tubuh dinyatakan dengan istilah

immunogenicity.

2.6. Antibodi

Secara umum antibodi dapat diartikan sebagai protein yang dapat

ditemukan pada plasma darah dan digunakan oleh sistem kekebalan tubuh

untuk mengidentifikasikan dan menetralisir benda asing seperti bakteri dan

virus yang terbuat dari sedikit struktur dasar yang disebut rantai. Tiap

antibodi memiliki dua rantai berat besar dan dua rantai ringan. Antibodi

diproduksi oleh tipe sel darah yang disebut sel limfosit B.

Antibodi merupakan globulin gamma yang disebut dengan

imunoglobulin dan berat molekulnya antara 160.000 dan 970.000

imunoglobuilin biasanya merupakan sekitar 20% dari seluruh protein

plasma yang terdiri dari kombinasi rantai polipeptida berat dan ringan yang

berbentuk huruf “Y”. Karakteristik bagian lengan dari Antibodi bebentuk

huruf “Y” menentukan spesifisitas antibodi (dengan antigen yang

berikatan). Sebuah antibodi memiliki dua tempat pengikatan antigen identik

dan satu di masing-masing ujung lengan yang disebut fragmen pengikat

antigen. Sedangkan sifat bagian ekor antibodi dapat menentukan sifat

fungsional antibodi (yang terjadi setelah antibodi berikatan dengan antigen).

 17

2.7 Pemeriksaan Serologi Pes Berdasarkan Antigen Fraction 1 (F1)

Pemeriksaan serologi pes berdasarkan detelsi antobodi terhadap

antigen spesifik pada Yarsinia pestis. Kapsul glikoprotein F1 kadang –

kadang dianggap sebagai antigen kapsular karena letaknya di lapisan paling

luar sel yang dikode oleh kompleks Caf1 dan berlokasi di plasmid 110 kb.

Ekspresi antigen F1 ini diatur oleh suhu. Permukaan bakteri tidak akan
0
terdeteksi bila suhu kurang dari atau sama dengan 28 C juga bila sampel

berada disuhu kamar. Sampel yang disimpan dalam refrigator tanpa

o
inkubasi di suhu 37 C menyebabkan hasil negative palsu. Antigen F1

memberikan memberikan respon serologis yang cukup kuat, Sehingga

dalam menentukan ada tidaknya infeksi Yersinia pestis.

Metode yang disarankan oleh WHO adalah aglutinasi, fiksasi

komplemen dan metode hemaglutinasi pasif. Pemeriksaan aglutinasi dan

fiksasi komplemen sudah tidak dilakukan secara rutin karena adanya reaksi

non spesifik. Hemaglutinasi pasif dengan hemaglutinasi inhibisi merupakan

metode pemeriksaan yang saat ini banyak dilakukan. Asumsi dari metode

hemeaglutinasi pasif, apabila manusia atau hewan terinfeksi Yersinia pestis,

maka serum yang diambil segera setelah infeksi akan mengandung antobodi

F1. Serum tunggal dengan titer sekurang – kurangnya 1 : 128 adalah nilai

diagnostik pes yang membuktikan bahwa adanya infeksi oleh Yersinia

pestis baik vaksinasi maupun karena infeksi secara langsung.

Pemeriksaan konfirmasi memerlukan sepasang serum yang diambil

sekurang – kurangnya 2 minggu sampai satu tahun dari serum pertama dan

menunjukkan peningkatan titer spesifik 4 kali dengan pemeriksaan

 18

aglutinasi. Serum atau plasma yang diambil dari pasien dengan septikemia

atau dari bakterimia bubo tidak hanya untuk pemeriksaan kultur tetapi juga

IgM dan antigen F1 yang umumnya memberikan hasil positif.

Pada beberapa kasus, pengambilan darah utuh (whole blood) lebih

mudah daripada memisahkan serum dari darah beku. Darah utuh diambil

dengan menggunakan filter paper kemudian dikeringkan sehingga dapat

disimpan sebelum dilakukan pemeriksaan antibodi, tetapi kurang sensitif

dibandingkan dengan serum.

Sampel pemeriksaan serologis pada umumnya diproses untuk

pemeriksaan skrining dengan metode hemaglutinasi atau latex agglutination

dan diverifikasi secara spesifik dengan aglutinasi. Apabila sampel darah,

jaringan, aspirasi trakea dan serum diambil hari 1 – 7 sejak onset penyakit

dimulai atau pada akhir infeksi pada saat infeksi tampak nyata.

Pada pemeriksaan pasif hemaglutinasi untuk pes, antigen F1

dilekatkan pada glutaraldehide yang terfiksasi pada SRBC dan berfungsi

sebagai antigen yang tersensitisasi. Serum plasma atau protein serum yang

diektraksi dari darah utuh pada filter paper dapat digunakan sebagai sumber

antibody pada pemeriksaan hemeaglutinasi. Reaksi silang non soesifik dapat

terjadi pada pemeriksaan aglutinasi sehingga menyebabkan hasil yang

intermediate. Oleh sebab itu, perlu dilakukan tindakan preabsobsi serum

dengan SRBCs segar untuk menghilangkan reaksi silang non spesifik dan

jika hasilnya positif maka spesifitas pemeriksaan aglutinasi.

 19

2.7.1 Uji HA (Hemeglutination)

Uji Hemeaglutination (HA) digunakan untuk mengukur titer virus

atau antigen secara kuantitas dan kualitas. Virus atau antigen yang bisa

dilakukan uji HA hanya antigen yang dapat mengaglutinasi sel darah merah

(RBC) seperti virus Newcastle Disease, Avian Influenza dan virus Egg Drop

Syndrome, baik virus yang masih hidup ataupun yang sudah diinaktifasi

(mati), hanya saja untuk virus yang masih hidup pengujian HA harus

dilakukan di dalam Bio Safety Cabinet (BSC) supaya tidak terpaparnya

lingkungan baik area laboratorium maupun lingkungan luar laboratorium.

Prinsip uji HA adalah terjadinya ikatan antara virus/antigen dengan

sel darah merah yang ditandai dengan adanya agglutinasi (butiran seperti

pasir). Pembentukan agglutinasi ini disebabkan karena adanya ikatan

virus/antigen dengan sel darah merah. Titer virus/antigen dapat diketahui

dengan melihat adanya agglutisai di dasar lubang dari microplate pada

lubang terakhir/pengenceran tertinggi, misal terjadinya agglutinasi sampai

lubang ke 8.

2.7.2 Uji HI (Hemeaglutination Inhibition)

Uji HI (Hemaglutination Inhibition) adalah merupakan metode uji

serologi untuk mengetahui kadar atau titer antibodi yang terkandung dalam

serum. Serum diperoleh dari darah unggas yang keluar beberapa saat setelah

pengambilan, selanjutnya serum diinaktifasi pada suhu 56°C selama 30

menit.
 20

Prinsip uji HI adalah menghambat terjadinya agglutinasi sel darah

merah (RBC) oleh virus/ antigen akibat terikatnya antigen tersebut dengan

antibodi spesifik. Oleh karena itu uji HI hanya bisa digunakan untuk

virus/antigen yang mengagglutinasi RBC (Syukron et al., 2013). Proses

hemaglutinasi ini terjadi akibat aktivitas hemaglutinin yang terdapat pada

amplop virus atau antigen tersebut. Aktivitas hemaglutinasi berlangsung

maksimal selama satu jam karena dipengaruhi oleh kerja enzim

neuraminidase yang merusak ikatan pada reseptor eritrosit dengan

hemaglutinin dari virus. Pengamatan nilai titer antibodi dari serum sampel

berdasarkan hasil pengenceran tertinggi (paling encer) yang masih sanggup

menghambat aglutinasi (RBC) oleh antigen.

2.8 BBTKLPP (Balai Besar Teknik Kesehatan Lingkungan Pengendalian

Penyakit)

2.8.1. Profil BBTKLPP

Balai Besar Teknik Kesehatan Lingkungan dan Pengendalian

Penyakit (BBTKLPP) Surabaya adalah Unit Pelaksana Teknis (UPT)

Kementrian Kesehatan RI yang berada di bawah dan bertanggungjawab

kepada Direktur Jendral Pencegahan dan Pengendalian Penyakit

berdasarkan Peraturan Mentri Kesehatan RI No.

2349/MENKES/PER/XI/2011 tentang Organisasi dan Tata Kerja Unit

Pelaksana teknis di Bidang Teknik Kesehatan Lingkungan dan

Pengendalian Penyakit . BBTKLPP Surabaya memberikan pelayanan

pencegahan dan pengendalian penyakit kepada masyarakat di empat

 21

wilayah provinsi, yaitu Jawa Timur, Bali, Nusa Tenggara Barat dan Nusa

Tenggara Timur, meliputi 82 kabupaten / kota , 2428 pulau, 50,53 juta atau

sekitar 20,02 % dari penduduk Indonesia.

BBTKLPP Surabaya memiliki kantor yang berada di dua lokasi,

yaitu Kantor Pusat Surabaya dan Instalasi Laboratoriu, Pencegahan dan

Pengendalian Penyakit (P2P) di Nongkojajar, Kabupaten Pasuruan. Kantor

Pusat Surabaya menjadi lokasi aktivitas Bidang Pengembangan Teknologi

Laboratorium, Bidang Analis Dampak Kesehatan Lingkungan, Bidang

Surveilans Epidemilogy, Bagian Tata Usaha, 7 Instalasi Laboratorium dan 5

Instalasi penunjang laboratorium. Adapun di Instalasi Laboratorium P2P

Nongkojajar terdapat empat Laboratorium yaitu Instalasi Laboratorium

Zoonosis dan Hewan Coba, Instalasi Laboratorium Parasit, Vektor dan

Kecacingan, Instalasi Laboratorium Virologi, dan Instalasi Uji Resistensi

Virologi dan Mikrobiologi.

 22

2.8.2. Struktur Organisasi

Gambar 2.8.2. Struktur Organisasi BBTKLPP

2.8.3. Tugas Pokok

Tugas Pokok dan Fungsi BBTKLPP Surabaya berdasarkan Peraturan

Menteri Kesehatan RI No. 2349/MENKES/PER/XI/2011 tentang Organisasi

dan Tata Kerja Unit Pelaksana Teknik Kesehatan Lingkungan dan

Pengendalian Penyakit. Balai Besar teknik kesehatan lingkungan dan

pengendalian Penyakit (BBTKLPP) mempunyai tugas melaksanakan

 23

surveilans epidemilogi, kajian penapisam teknologi, laboratorium rujukan,

kendali mutu, kalibrasi, pendidikan dan pelatihan, pengembangan model

dan teknologi tepat guna, kewaspadaan dini dan penganggulangan KLB

(Kejadian Luar Biasa) di bidang pengendalian penyakit dan kesehatan

lingkungan serta kesehatan matra.

Fungsi :

- Pelaksanaan Surveilans Epidemilogi

- Pelaksanaan Analisis Dampak Kesehatan Lingkungan

- Pelaksanaan Laboratorium Rujukan

- Pelaksanaan Pengembangan Model dan Teknologi Tepat Guna

- Pelaksanaan Uji Kendali Mutu dan Kalibrasi

- Pelaksanaan Penilaian dan Respon Cepat, Kewaspadaan Dini, Dan

Penanggulangan KLB/ Wabah dan Bencana

- Pelaksanaan Surveilans Factor Resiko Penyakit Tidak Menular

- Pelaksanaan Pendidikan dan Pelatihan

- Pelatihan pendidikan dan pelatihan

- Pelaksanaan Kajian Dan Pengembangan Teknologi Pengendalian

Penyakit, Kesehatan Lingkungan, dan Kesehatan Matra

- Pelaksanaan Ketatausahaan dan Kerumahtanggan BBTKLPP.

 24

2.8.4. Bagian dan Bidang

1. Bidang Tata Usaha

Tugas : Melaksanakan penyusunan program laporan, urusan

keuangan, kepegawaianm dan umum

Sub Bagian Program dan Laporan :

- Subbagian Program dan Laporan

Penyiapan bahan penyusunan program, evaluasi dan laporan, serta

informasi

- Subbagian Umum

Melakukan keuangan, kepegawaian, urusan tata usaha, perlengkapan

dan rumah tangga

2. Bidang Pengembangan Teknologi dan Laboratorium (PTL)

Tugas : Melaksanakan perencanaan dan evaluasi, pengembangan dan

penapisan teknologi dan laboratorium, kemitraan dan jejaring kerja,

kesehatan lingkungan, kesehatan matra serta pendidikan dan pelatihan

bidang pengembangan teknologi dan laboratorium.

Seksi :

- Seksi Teknologi Pengendalian Penyakit

Melakukan penyiapan bahan perencanaan, evaluasi dan koordinasi

pelaksanaan pengembangan dan penapisan teknologi, serta pendidikan

 25

dan pelatihan di bidang pengendalian penyakit, kesehatan lingkungan

dan kesehatan matra.

- Seksi Teknologi Laboratorium

Melakukan penyiapan bahan perencanaan, evaluasi dan koordinasi

pelaksanaan pengembangan teknologi laboratorium, pendidikan dan

pelatihan di bidang pengendalian penyakit, kesehatan lingkungan dan

kesehatan matra.

3.Bidang Analisis Dampak Kesehatan Lingkunga (ADKL)

Tugas : Melaksanakan perencanaan dan evaluasi pelaksanaan analisis

dampak lingkungan fisik dan kimia, serta dampak lingkungan biologi, dan

pendidikan dan pelatihan di bidanag pengendalian penyait, kesehatan

lingkungan dan kesehatan matra.

Seksi :

- Seksi Lingkungan Fisik dan Kimia

Melakukan penyiapan bahan perencanaan, evalusai dan koordinasi

pelaksanaan analisis dampak lingkungan fisik dan kimia di bidang

pengendalian penyakit dan kesehatan lingkungan dan kesehatan matra.

- Seksi Lingkungan Biologi

Melakukan penyiapan bahan perencanaan, evaluasi, dan koordinasi

pelaksanaan analisis dampak lingkungan biologi di bidang

pengendalian penyakit dan kesehatan lingkungan.

 26

4.Bidang Suveilans Epidemilogi

Melaksanakan perencanaan dan evaluasi di bidang surveilans

epidemilogi penyakit menular dan penyakit tidak menular, advokasi dan

fasilitas kesiapsiagaan dan penanggulangan KLB, kajian dan diseminasi

informasi, kesehatan lingkungan, kesehatan matra, , kemitraan, dan jejaring

kerja, serta pendidikan pelatihan bidang surveilans epidemilogi.

Seksi :

- Seksi Advokasi Kejadian Luar Biasa

Melakukan penyiapan bahan perencanaan, evaluasi dan koordinasi

pelaksanaan advokasi dan fasilitas kejadian luar biasa, serta wabah

dan bencana.

- Seksi pengkajian dan Diseminasi

Melakukan penyiapan bahan perencanaan, evaluasi dan koordinasi

kajian, pengembangan dan diseminasi infprmasi, serta pendidikan dan

pelatihan bidang surveilans epidemilogi.

5. Instalasi

Berdasarkan keputusan Kepala BBTKLPP No. HK.02.03/1/1684/2017

tentang penataan Instalasi di Lingkungan BBTKLPP Surabaya. BBTKLPP

Surabaya memiliki 16 Instalasi. Dua belas (12) instalasi merupakan instalasi

laboratorium, adapun empat lainya merupakan instalasi penunjang

laboratorium non teknis.

 27

Instalasi Laboratorium Faktor Risiko Penyakit Berasal dari Lingkungan :

- Instalasi Laboratorium Kimia Fisika Media Air

- Instalasi Laboratorium Kimia Fisika Limbah Cair\

- Instalasi Laboratorium Biologi Media Lingkungan dan Biomarker

- Instalasi Laboratorium Kimia Fisika Media Udara dan Radiasi

- Instalasi Laboratorium Kimia Fisika Padatan, Material dan

Biomarker

- Instalasi Laboratorium Pengembangan Teknologi Media dan

Reagensia

- Instalasi Pengembangan Metode, Kendali Mutu dan Kalibrasi

- Instalasi Laboratorium Pencegahan dan Pengendalian Penyakit

(P2P) BBTKLPP Surabaya di Nongkojajar – Kabupaten Pasuruan

- Instalasi Laboratorium Zoonosis dan Hewan Coba

- Instalasi Laboratorium Parasit, Vektor dan Kecacingan

- Instalasi Laboratorium Virologi

- Instalasi Uji Resistensi Mikrobiologi

Instalasi Laboratorium Pencegahan dan Pengendalian Penyakit (P2P)

BBTKLPP Surabaya di Nongkojajar – Kabupaten Pasuruan

Pada tahun 2017, BBTKLPP Surabaya mengoperasionalkan Instalasi

Laboratorium P2P di Nongkojajar Kecamatan Tutur Kabupaten Pasuruan.

Laboratorium dengan 4 lantai ini memiliki standar BSL II. Laboratorium

Pencegahan dan Pengendalian Penyakit ini terdiri atas 4 Instalasi yaitu

Instalasi Laboratorium Parasit, Vektor dan Kecacingan; Instalasi

 28

Laboratorium Virologi; Instalasi Uji Resistensi Virologi dan Mikrobiologi.

Secara bertahap fungsi tersebut akan terus dikembangkan sesuai dengan

kebutuhan masyarakat.

6. Kapasitas Laboratorium BBTKLPP Surabaya

Laboratorium Pengujian Contoh Uji Lingkungan dan Laboratorium

Kalibrasi BBTKLPP Surabaya telah mendapatkan sertifikasi dari Komite

Akreditasi Nasional (KAN). Sertifikasi menandakan BBTKLPP Surabaya

telah menerapkan secara konsisten pengujian dan kalibrasi sesuai SNI ISO /

IEC 17025 : 2008 ( ISO / IEC 1705 :2005). Sertifikat Akreditasi Laboratium

Kalibrasi No. LK – 144 – IDN telah diperoleh semenjak 20 Oktober 2011.

 29

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Tempat dan Waktu Kerja

Praktek kerja lapangan (PKL) dilaksanakan di ) Di Instalasi

Laboratorium Pencegahan Dan Pengendalian Penyakit, BBTKLPP

Nongkojajar Kabupaten Pasuruan Jawa Timur selama 3 minggu, mulai

tanggal 4 Januari sampai 31 Januari 2018.

Gambar. 3.1. Instalasi Laboratorium Pencegahan Dan Pengendalian

Penyakit, BBTKLPP Nongkojajar Kabupaten Pasuruan Jawa Timur.
(Sumber : Dokumentasi Pribadi)

3.2. Alat dan Bahan

3.2.1. Alat

1. Sentrifuge 1,5 – 2,0 ml

 30

2. Sentrifuge 10 – 15 ml

3. Waterbath suhu 50 – 100 o C

4. 8- Chanel mikropipet / 12 – chanel mikropipet ( 10 – 100 µl)

5. Mikropipet ( 1000 µl , 200 µl , 100 µl, 20 µl, 0.5 – 10 µl)

6. Basin reagent

7. Rak mikrotube 1.5 – 2.0 ml

8. Mirror atau plate rider

9. APD ( Masker ; Hand Scoon Non Powder ; Jas Lab )

10. Mikroskop stereo

11. Mikrowell

12. Mikrotube 1.5 – 2.0 ml

13. Yellow tips ( 20 – 200 µl)

3.2.2. Bahan

1. S-SRBC

2. Antigen F – 1

3. Alserver Steril

4. NaCl 0,85 % ( 0,9 %) steril atau salin.

5. Serum darah tikus (Rattus tanezumi) .

6. Normal Rabbit Serum (NRS)

7. Fresh SRBC ( Sheep Red Blood Cell)

8. Serum kontrol positif

9. Alkohol 70 %
 31

3.3. Metode Kerja

3.3.1. Pengambilan Serum Darah Tikus Rattus tanezumi

Tikus hasil tangkapan surveilans diambil darahnya.

Pengambilan darah dilakukan dengan menggunakan spuit berukuran

5 cc pada bagian jantung tikus. setelah darah terambi, kemudian

dilakukan pemisahan serum dan sel darah merah. Pengambilan serum

darah tikus dilakukan dengan cara mensentrifugasi darah tikus selama

15 menit dengan kecepatan 3000 rpm. Kemudian supernatant diambil

dan dilakukan sentrifugasi kembali dengan kecepatan 3000 rpm

selama 15 menit.

3.3.2. Pengambilan Darah Domba ( Fresh SRBC )

Darah domba diambil dari domba yang berjenis kelamin jantan,

pengambilan darah dilakukan dengan menggunakan spuit atau jarum

suntik yang berukuran 10 cc. Darah diambil dari vena jugularis yang

bertempat di bagian leher domba. Darah kemudian ditempatkan pada

tabung Erlenmeyer yang didalamnya diisi dengan bola Kristal. Bola

Kristal berfungsi untuk mencegah terjadinya pembekuan darah atau

penggumpalan darah.

3.3.3. PERSIAPAN REAGEN

3.3.3.a. Fresh SRBC dicuci dengan Alserver dalam Saline

SRBC (Sheep Red Blood Cell) atau sel darah domba

yang telah didapatkan dipindah pada tabung valcon untuk

dilakukan sentrifugasi selama 10 menit dengan kecepatan

 32

3000 rpm. Kemudian membuang supernatant dan

menambahkan buffer saline hingga penuh ( hingga 10 cc).

Melakukan sentrifugasi kembali selama 10 menit dengan

kecepatan 3000 rpm. Setelah itu, mengulangi sentrifugasi

selama 5 kali. Tujuan dari kegiatan ini adalah untuk

memisahkan serum dan sel darah. Sel darah yang telah

dihasilkan dapat disimpan dalam larutan salin sebanyak 50

ml dan disimpan dalam suhu 4oC. Apabila terjadi

hemolisa, dengan adanya supernatan yang berupa saline

dan pellet masih tercampur, maka SRBC tidak dapat

digunakan. Hemolisa biasanya terjadi pada saat serum

disimpan dalm kurun waktu lebih dari 10 hari.

3.3.3.b. s-SRBC Diluent

s-SRBC merupakan reagen yang digunakan untuk

pengaktifan atau pembuat sensitiv dan mencegah terjadinya

reaksi silang non spesifik. s-SRBC dibuat dengan

mereaksikan NRS (Normal Rabbit Serum) dengan salin.

NRS berfungsi sebagai pencegah terjadinya reaksi silang

non spesifik, NRS yang dibutuhkan sebanyak 0.4 ml

sedangkan saline yang digunakan adalah NaCl 0,85 % steril

dengan volume 99,6 ml. s-SRBC disimpan pada suhu 4 oC..

 33

3.3.3.c. F1 – sensitizer Sheep Red Blood Cell (s-SRBC).

F1 – sensitizer Sheep Red Blood Cell (s-SRBC)

berfungsi mencegah reaksi silang, sehingga antibodi hanya

berikatan dengan antigen F1. F1 – sensitizer Sheep Red

Blood Cell s-SRBC dibuat dengan melarutkan antigen F1

yang merupakan pecahan dari kapsul bakteri Yersinia

pestis dengan s-SRBC diluent sebanyak 10 ml. kemudian

menyimpan pada suhu 4 o C.

3.3.3.d. HA – Diluent

Pembuatan HA – Diluent dengan cara melarutkan 1

ml NRS dengan saline ( 0, 85 % ) yang steril sebanyak 99

ml. Kemudian, menyimpan HA – Diluent pada suhu 4 oC.

3.3.3.e. HI – Diluent

Pembuatan HA – Diluent dengan cara melarutkan 1

ml antigen F1 dengan HA – diluent 69 ml, kemudian

menyimpan HI – Diluent pada suhu 4 oC. Pada prinsipnya

HI – Diluent mengakibatkan reaksi non spesifik hal ini

dikarenakan antigen F1 yang belum di sensitisasi

ditambahkan pada uji ini sehingga menghambat terjadinya

reaksi spesifik, dengan demikian uji positifnya tidak

terjadi aglutinasi atau penggumpalan.

 34

3.3.4. PERSIAPAN SAMPEL

Sampel yang digunakan adalah serum darah tikus. Persiapan

sampel diawali dengan memasukkan serum darah kedalam mikrotube

secanyak 50 µl. Kemudian, serum diinaktivasi antibodi selama 60

menit dengan suhu 56 oC. Setelah diinaktivasi, menambahkan 5 µl

SRBC dan melakukan sentrifugasi dengan kecepatan 1000 rpm selama

10 menit kemudian supernatant dipindahkan kedalam mikrotub.

Selanjutnya melakukan absorbsi dengan cara mendiamkan pada suhu

kamar selama 60 menit, jika dengan suhu 4 oC mendiamkan selama 12

jam.

3.3.5. PEMERIKSAAN

3.3.5.a. HA – TEST

Uji Hemeaglutination diawali dengan membagi mikrowel secara

memanjang dengan ketentuan 4 x 12. Satu mikrowel dapat digunakan

untuk 2 kelompok sampel. Kemudian, setiap mikrowell diisi dengan

25 µl HA – diluent. Setelah seluruh well terisi, serum sampel

ditambahkan sebanyak 25 µl pada deretan well pertama.

Mengencerkan suspensi dengan menggunakan mikropipet.

Pengenceran dilakukan mengambil dan mengeluarkan suspensi dalam

tip, lalu mememindahkan ke deretan well dibawahnya.Saat mencapai

lubang terakhir, larutan dalam tip dibuang. Sehingga volume tetap

sama yaitu 25 µl. Setelah dilakukan pengenceran, seluruh well

ditambahkan 25 µl s-SRBC. Kemudian, menutup well dengan plastik

 35

agar tidak terjadi kontaminasi. Mendiamkan selama 5 jam pada suhu

ruang. Pembacaan pada masing – masing lubang dilakukan setelah 5

jam, visualisasi pada uji ini yaitu adanya penggumpalan pada well

deretan ke – 4. Untuk memudahkan dan menjaga akurasi dalam uji ini,

ditambahkan kontrol positif. Sampel yang positif dilakukan uji HI –

TEST untuk mengetahui hasil titer positif.

Gambar. 3.3.5.a. Uji Hemeaglutination (HA)

(Sumber : Dokumentasi Pribadi)

3.3.5.b. HI – TEST

Sampel yang diujikan adalah sampel uji positif

Hemeaglutination (HA). Uji Hemeaglutination diawal dengan

membagi 2 bagian dari mikrowell yang telah disediakan. Dengan

ketentuan dari 12 deret lubang, dibagi menjadi 8 lubang untuk diisi

reagen HA – Diluent dan 4 lubang untuk diisi HI – Diluent. Yang

masing – masing reagen ditambahkan sebanyak 25 µl pada setiap

well. Kemudian sampel ditambahkan pada lubang pertama. Setelah

 36

itu, mengencerkan suspensi dengan menggunakan mikropipet.

Pengenceran dilakukan mengambil dan mengeluarkan suspensi dalam

tip, Saat mencapai lubang terakhir, larutan dalam tip dibuang.

Sehingga volume tetap sama yaitu 25 µl. Pengenceran harus dilakukan

secara hati – hati agar tidak tercampur pada reagen yang berbeda.

Kemudian, menambahkan s-SRBC sebanyak 25 µl pada seluruh well.

Menutup seluruh well dengan plastic wrap agar tidak terjadi

kontaminan sehingga pembacaan menjadi tidak terganggu.

Selanjutnya, mendiamkan selama 4 – 5 jam pada suhu ruang.

Pembacaan hasil uji Hemeaglutination Inhibition berbeda dengan uji

Hemeaglutination. Pada HI, khusunya dengan menggunakan reagen

HI – Diluent uji positif ditandai dengan tidak terjadi aglutinasi atau

penggumpalan pada pengenceran terakhir atau pada lubang terakhir.

Sedangkan pada well yang ditambahkan HA – Diluent uji positif

ditandai dengan adanya penggumpalan atau aglutinasi pada

pengenceran terakhir atau pada well terakhir. Setalah dilakukan

analisa secara visual ada dan tidak penggumpalan, Kemudian,

menghitung jumlah lubang postif pada HA dan lubang positif pada HI,

mengurangkan hasil uji positif HA dan uji positif HI, sehingga di

dapatkan selisih. Selisih tersebut dikalibrasikan pada tabel titer

terakhir. Pada tabel tertulis positif dan negatif. Jika bertuliskan positif

maka pada serum terdapat antibodi terhadap antigen F1 sedangkan

jika negatif, tidak terdapat antobodi terhadap antigen F1.

 37

Gambar 3.3.5.b. Uji Hemeaglutination Inhibition (HI)

(Sumber : Dokumentasi Pribadi)

3.3.5. PEMBACAAN HASIL AKHIR

Tabel 3.3.5. Titer Akhir Pada Pemeriksaan Aglutinasi.

END POINT TITER TABLE

WELL SERUM / PLASMA FILTER PAPER

1 1 : 4 Negatif 1 : 32 Positif

2 1 : 8 Negatif 1 : 64 Positif

3 1 : 16 Positif 1 : 128 Positif

4 1 : 32 Positif 1 : 256 Positif

5 1 : 64 Positif 1 : 512 Positif

 38

6 1 : 128 Positif 1 : 1024 Positif

7 1 : 256 Positif 1 : 2048 Positif

8 1 : 512 Positif 1 : 4096 Positif

9 1 : 1024 Positif 1 : 8192 Positif

10 1 : 2048 Positif 1 : 16384 Positif

11 1 : 4096 Positif 1 : 32768 Positif

12 1 : 8192 Positif 1 : 65536 Positif

13 1 : 16384 Positif 1 : 131072 Positif

14 1 : 32768 Positif 1 : 262144 Positif

15 1 : 65536 Positif

16 1 : 131072 Positif

17 1 : 262144 Positif

(Sumber : WHO)
 BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil

Berikut ini merupakan hasil uji serologi dengan metode HA

(Hemeaglutination) dan HI ( Hemeaglutination Inhibition) yang meliputi

sampel mengalami aglutinasi setelah perlakuan baik HA – TEST maupun

HI – TEST di ) Di Instalasi Laboratorium Pencegahan Dan Pengendalian

Penyakit, BBTKLPP, Pasuruan , Jawa Timur pada tanggal 4 Januari sampai

tanggal 31 Januari tahun 2018.

4.1.1. Hasil Analisa Kualitatif Aglutinasi Pada Serum Dengan Metode HA

dan HI.

Hasil analisa kualitatif penggumpalan pada serum darah tikus dengan

metode uji HA dan HI dapat dilihat pada Tabel 4.1

Tabel 4.1.1. Data Sampel Dan Hasil Uji HA - TEST

No. Nama Daerah No. HA - KESIMPULAN

sampel TEST

(Minggu ke-)

1 Taman (33) 2348 - Negatif

2 Taman (33) 2349 - Negatif

3 Taman (33) 2350 - Negatif

4 Taman (33) 2351 - Negatif

39
 40

5 Taman (33) 2352 - Negatif

6 Taman (33) 2353 - Negatif

7 Taman (33) 2354 - Negatif

8 Taman (33) 2355 + Positif

9 Taman (33) 2356 - Negatif

10 Taman (33) 2357 - Negatif

11 Surorowo (34) 2423 + Positif

12 Surorowo (34) 2424 + Positif

13 Surorowo (34) 2425 - Negatif

14 Surorowo (34) 2426 - Negatif

15 Surorowo (34) 2427 - Negatif

16 Surorowo (34) 2428 - Negatif

17 Surorowo (34) 2429 + Positif

18 Surorowo (34) 2431 + Positif

19 Surorowo (34) 2433 + Positif

20 Surorowo (34) 2434 + Positif

21 Surorowo (34) 2433 + Positif

22 Surorowo (34) 2441 + Positif

23 Surorowo (34) 2442 + Positif

24 Surorowo (34) 2443 + Positif

25 Surorowo (34) 2446 + Positif

26 Surorowo (34) 2450 + Positif

27 Surorowo (34) 2451 + Positif

 41

28 Surorowo (34) 2454 + Positif

29 Surorowo (34) 2463 + Positif

30 Surorowo (34) 2470 + Positif

31 Surorowo (34) 2471 + Positif

32 Surorowo (34) 2475 + Positif

33 Tosari (34) 2242 - Negatif

34 Tosari (34) 2243 - Negatif

35 Tosari (34) 2244 + Positif

36 Tosari (34) 2248 + Positif

37 Tosari (34) 2254 + Positif

38 Tosari (34) 2258 + Positif

39 Tosari (34) 2262 + Positif

40 Tosari (34) 2265 + Positif

41 Tosari (34) 2269 + Positif

42 Tosari (34) 2271 + Positif

43 Tosari (34) 2275 + Positif

44 Campal (35) 2511 - Negatif

45 Campal (35) 2512 - Negatif

46 Campal (35) 2513 - Negatif

47 Campal (35) 2514 - Negatif

48 Campal (35) 2516 - Negatif

49 Campal (35) 2517 - Negatif

50 Campal (35) 2518 - Negatif

 42

51 Campal (35) 2519 - Negatif

52 Campal (35) 2520 - Negatif

53 Campal (35) 2521 - Negatif

54 Campal (35) 2522 + Positif

55 Campal (35) 2523 - Negatif

56 Campal (35) 2524 - Negatif

57 Campal (35) 2525 - Negatif

58 Sedaeng (36) 2286 + Positif

58 Sedaeng (36) 2291 - Negatif

60 Sedaeng (36) 2293 - Negatif

61 Sedaeng (36) 2294 - Negatif

62 Sedaeng (36) 2295 - Negatif

63 Sedaeng (36) 2296 - Negatif

64 Sedaeng (36) 2297 - Negatif

65 Sedaeng (36) 2298 - Negatif

66 Sedaeng (36) 2299 - Negatif

67 Sedaeng (36) 2300 - Negatif

68 Sedaeng (36) 2301 - Negatif

69 Sedaeng (36) 2302 - Negatif

70 Sedaeng (36) 2303 - Negatif

71 Sedaeng (36) 2305 - Negatif

 43

Tabel 4.1.2. Data Sampel Dan Hasil Uji HI – TEST

No Nama No. HA – HI- TITER KESIMPULAN

. Daerah Sampel TEST TEST

(Minggu

ke-)

1 Taman 2355 8 4 1 : 32 Positif

(33)

2 Surorowo 2423 6 4 1:8 Negatif

(34)

3 Surorowo 2424 6 4 1:8 Negatif

(34)

4 Surorowo 2429 6 4 1:8 Negatif

(34)

5 Surorowo 2431 6 4 1:8 Negatif

(34)

6 Surorowo 2433 5 4 1:4 Negatif

(34)

7 Surorowo 2434 5 4 1:4 Negatif

(34)

8 Surorowo 2433 5 3 1:8 Negatif

(34)
 44

9 Surorowo 2441 5 3 1:8 Negatif

(34)

10 Surorowo 2442 6 4 1:8 Negatif

(34)

11 Surorowo 2443 6 4 1:8 Negatif

(34)

12 Surorowo 2446 6 4 1:8 Negatif

(34)

13 Surorowo 2450 6 4 1:8 Negatif

(34)

14 Surorowo 2451 5 3 1:8 Negatif

(34)

15 Surorowo 2454 5 3 1:8 Negatif

(34)

16 Surorowo 2463 6 4 1:8 Negatif

(34)

17 Surorowo 2470 6 4 1:8 Negatif

(34)

18 Surorowo 2471 8 4 1 : 32 Positif

(34)

19 Surorowo 2475 6 4 1:8 Negatif

(34)

20 Tosari (34) 2244 5 3 1:8 Negatif

 45

21 Tosari (34) 2248 5 4 1:4 Negatif

22 Tosari (34) 2254 6 4 1:8 Negatif

23 Tosari (34) 2258 6 4 1:8 Negatif

24 Tosari (34) 2262 7 4 1 : 16 Positif

25 Tosari (34) 2265 6 4 1:8 Negatif

26 Tosari (34) 2269 8 4 1 : 32 Positif

27 Tosari (34) 2271 7 4 1 : 16 Positif

28 Tosari (34) 2275 8 4 1 : 32 Positif

29 Campal 2522 8 4 1 : 32 Positif

(35)

30 Sedaeng 2286 6 4 1:8 Negatif

(36)

4.2 Pembahasan

Pes atau sampar merupakan penyakit zoonosa ( bersumber binatang)

yang secara alami terdapat pada rodent dan dapat menular kepada manusia

lewat gigitan pinjal yang terdapat pada rodent tersebut. (Depkes RI, 2014).

Pes disebabkan oleh infeksi bakteri Yersinia pestis yang terdapat pada

hewan pengerat dan ditularkan ke hewan melalui gigitan kutu atau pinjal

yang terinfeksi bakteri tersebut. Tikus memiliki hubungan yang akrab

dengan penyebab penyakit pes. Sehingga penyebaran pinjal yang terinfeksi

bakteri pes dengan mudah melalui pergerakan tikus yang tempat hidupnya
 46

disekitar rumah warga, perkebunan, dan hutan. Manusia dapat terinfeksi

bakteri Yersinia pestis melalui gigitan pinjal yang berasal dari tikus.

Upaya untuk penanggulangan penyakit pes dilakukan dengan cara

surveilans. Survelans yang dilakukan adalah menangkap tikus dengan

memasang trap pada rumah – rumah penduduk, daerah kebun dan hutan.

Kegiatan Surveilans dilakukan oleh Pegawai Puskesmas Kabupaten

Pasuruan. Hasil penangkapan tikus kemudian dilakukan prosesi

pengambilan serum darah tikus untuk uji konfirmasi penyakit pes dengan

cara uji serologi dan mikrobiologi.

Bakteri Yersinia pestis mengekpresikan antigen glikoprotein

permukaan yang disebut Fraction 1 (F1) antigen atau antigen kapsuler pada
0
suhu 33 C. Antigen permukaan yang unik ini merupakan antigen target

utama yang digunakan dalam diagnosa pes pada pemeriksaan DFA dan tes

antibodi seperti Hemaglutination (HA) dan Hemeaglutination Inhibition.

Uji Haemaglutination (HA) digunakan untuk mengukur titer virus

atau antigen secara kuantitas dan kualitatif dengan adanya penggumpalan

atau aglutinasi pada serum. Prinsip uji HA adalah terjadinya ikatan antara

virus atau antigen dengan sel darah merah yang ditandai dengan adanya

aglutinasi (butiran seperti pasir). Titer virus atau antigen dapat diketahui

dengan melihat adanya aglutinasi di dasar lubang dari mikrowell pada

lubang terakhir pengenceran tertinggi, misalnya terjadinya aglutinasi sampai

lubang ke 8.

Uji HI (Hemagglutination Inhibition) merupakan metode uji serologi

untuk mengetahui kadar atau titer antibodi yang terkandung dalam serum.
 47

Serum diperoleh dari darah tikus, selanjutnya serum diinaktifasi pada suhu

56°C selama 30 menit. Prinsip uji HI adalah menghambat

terjadinya agglutinasi sel darah merah (RBC) oleh virus atau antigen akibat

terikatnya antigen tersebut dengan antibodi spesifik. Oleh karena itu uji HI

hanya bisa digunakan untuk virus atau antigen yang mengagglutinasi RBC

(Syukron et al., 2013).

Pemeriksaan serologi pes berdasarkan deteksi antibodi terhadap

antigen spesifik F1 pada Yersinia pestis. Kapsul glikoprotein F1 dianggap

sebagai antigen kapsular karena letaknya di lapisan paling luar yang di kode

oleh kompleks caf1 dan berlokasi di plasmid 110 kb. Antigen F1 dilekatkan

pada glutaraldehide yang terfiksasi pada s-SRBC dan berfungsi sebagai

antigen yang tersensitisasi. Serum plasma atau protein serum yang

diekstraksi dari darah utuh digunakan sebagai sumber antibodi. Reaksi

silang non spesifik dapat terjadi pada pemeriksaan aglutinasi, Oleh karena

itu, dilakukan absorsi dengan cara menyatukan serum sampel dan SRBC

dari darah domba dengan s-SRBC.

Pemeriksaan serologi dengan metode HA dan HI diawali dengan uji

HA terlebih dahulu, sampel serum darah tikus dan SRBC ditetesi dengan s-

SRBC, kemudian ditetesi larutan HA- diluent. Campuran di encerkan

dengan menggunakan mikropipet dan ditutup dengan plastik agar tidak

mengalami penguapan. Kemudian diinkubasi selama 4 – 5 jam pada suhu

ruang. Pembacaan hasil uji dilakukan dengan menggunakan mikroskop

stereo agar terlihat jelas adanya penggumpalan atau aglutinasi, berdasarkan

hasil pembacaan adanya aglutinasi didapatkan sampel positif HA – TEST

 48

yaitu pada sampel nomor 2355 ; 2429 ; 2431 ; 2433 ; 2434 ; 2441 ; 2442 ;

2443 ; 2446 ; 2450 ; 2451; 2454 ; 2463 ; 2470 ; 2471 ; 2475 ; 2244 ; 2248 ;

2254 ; 2258 ; 2262 ; 2265 ; 2269 ; 2271 ; 2275 ; 2522 dan 2286.

Gambar 4.1. Hasil akhir mikrowell uji HA positif pada sampel uji
serum darah tikus Rattus tanezumi
(Sumber : Dokumentasi pribadi tanggal 19 Januari 2018)

Hasil sampel positif akan diteruskan dengan pemeriksaan HI.

Pemeriksaan selanjutnya dilakukan 2 uji sekaligus dalam satu mikrowell.

Pemeriksaan diawali dengan membagi 96 well plate menjadi 2 bagian

secara vertikal, satu bagian terdiri dari 8 kolom dan bagian lain terdiri dari 4

kolom. Kemudian menandai plate 8x8 untuk HA – TEST dan 4x8 untuk HI

– TEST. Menambahkan larutan HA- diluent pada masing – masing well di

bagian 8x8 untuk HA- TEST dan HI – diluent pada 4x8 untuk HI – TEST,

Setelah seluruh well diisi larutan diluent, sampel positif hasil uji HA –

TEST ditambahkan kedalam setiap well pertama. Pada uji lanjutan ini
 49

digunakan kembali uji HA karena well HA digunakan untuk menghitung

titer dan hasil titer merupakan penentuan uji positif dan negatifnya serum

sampel yang diuji. Tahap selanjutnya dilakukan pengenceran serial dengan

mikropipet dan membuang 25 µl yang terakhir. Kemudian menambahkan 25

µl s-SRBC yang telah diencerkan pada masing – masing well dari plate HA

atau HI dan menggoyangkan secara perlahan – lahan untuk menyakinkan

semua reagen berada di dasar well. Menutup mikrowell dengan penutup

plate untuk menghindari penguapan dan melakukan inkubasi selama 4 – 5

jam pada suhu kamar antara 22 o C – 25 oC.

Pembacaan titer pada metode HI (Hemeagglutination Inhibition)

dilakukan setelah 4 jam inkubasi. Pada HI, khususnya yang menggunakan

reagen HI – Diluent uji positif ditandai dengan tidak terjadi aglutinasi atau

penggumpalan pada pengenceran terakhir atau pada lubang terakhir.

Sedangkan pada well yang ditambahkan HA – Diluent uji positif ditandai

dengan adanya penggumpalan atau aglutinasi pada pengenceran terakhir

atau pada well terakhir. Setalah dilakukan analisa secara visual ada dan

tidak penggumpalan, Kemudian, menghitung jumlah lubang postif pada HA

dan lubang positif pada HI, mengurangkan hasil uji positif HA dan uji

positif HI, sehingga di dapatkan selisih. Selisih tersebut dikalibrasikan pada

tabel titer terakhir. Pada tabel tertulis positif dan negatif. Jika bertuliskan

positif maka pada serum terdapat antibodi terhadap antigen F1 sedangkan

jika negatif, tidak terdapat antobodi terhadap antigen F1.

Pada nomor sampel 2355 serum darah tikus yang ditangkap dari

Dusun Taman menunjukkan pada mikrowell HA- TEST hingga

 50

pengenceran ke 4 terdapat aglutinasi atau penggumpalan, sehingga hasil HA

– TEST ditulis 4, Kemudian pada pembacaan HI – TEST menunjukkan

adanya endapan putih yang terdapat pada mikrowell atau lubang pertama

hingga lubang ke 8, Sehingga hasil HI – TEST ditulis 8, sesuai pada tabel

4.2 . Pembacaan dilakukan pada seluruh sampel yang diuji dan dicatat pada

tabel hasil uji HI – TEST. Setelah dihitung pada masing – masing lubang,

baik pada lubang HA dan lubang HI, Kemudian dilakukan penentuan hasil

pemeriksaan HI – TEST dengan cara melakukan pengurangan antara jumlah

lubang positif pada HA – TEST dan jumlah lubang positif pada HI – TEST

, dan selanjutnya hasil pengurangan dicocokan pada tabel titer terakhir

pemeriksaan aglutinasi dan juga merupakan penentuan indikasi positif atau

negatif dari sampel yang di uji.

Berdasarkan hasil uji HI, sampel yang terindikasi positif adalah

sampel nomor 2355 dari Dusun Tosari yang memiliki titer 1 : 32, 2471 dari

Dusun Surorowo memiliki titer 1 : 32. Sampel nomor 2262 , 2269, 2275

yang masing – masing memiliki titer 1 : 16 dan 1 : 32 dari Dusun Tosari

serta 2522 dari Dusun Campal yang memiliki titer 1 : 32. Hasil tersebut

menunjukkan bahwa terdapat antigen F1 dari bakteri Yersinia pestis yang

telah menginfeksi tikus ( Rattus tanezumi), Hal ini dikarenakan pada Uji HA

maupun HI digunakan untuk mendeteksi adanya antibodi yang dihasilkan

oleh tubuh tikus untuk melawan antigen dari bakteri pes, Sehingga indikasi

positif dari pemeriksaan ini yaitu adanya antibodi terhadap antigen F1

dengan adanya aglutinasi.

 51

Pemeriksaan secara serologi dengan menggunakan uji HA dan uji HI

merupakan pemeriksaan secara pasif, Sehingga harus dilakukan penelitian

dengan menggunakan metode yang berbeda yaitu pemeriksaan secara aktif

dengan mengkultur ulasan dari organ hati, limpa dan paru – paru , kemudian

di amati dengan menggunakan mikroskop. Pemeriksaan secara mikrobiologi

merupakan pemeriksaan secara aktif. Apabila pada uji secara mikrobiologi

ditemukan bakteri Yersinia pestis maka, walaupun tidak dilakukan

pemeriksaan serologi maka tetap dianggap positif pes.

Setelah dilakukan pemeriksaan serologi maupun mikrobiologi di

Instalasi Laboratorium Pencegahan Dan Pengendalian Penyakit, BBTKLPP

Nongkojajar di Pasuruan, dan dinyatakan positif pes baik pada kasus

manusia dan tikus , maka selanjutnya dikeluarkan Laporan Hasil Uji (LHU)

yang akan dikirim ke BBTKLPP Surabaya dan selanjutnya diterbitkan surat

KLB (Kejadian Luar Biasa), Sehingga daerah asal sampel yang di uji

dinyatakan sebagai daerah positif pes. Dengan adanya KLB, maka akan

dilakukan penanggulangan dengan meningkatkan frekwensi aktivitas

surveilans. Kegiatan surveilans dilakukan bertujuan untuk memantau

masyarakat dan menangkap tikus di tiga lokasi penting yaitu daerah hutan,

kebun dan rumah warga.

 BAB V

PENUTUP

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan data dan analisis data yang telah dilakukan, maka dapat

disimpulkan bahwa:

1. Deteksi antibodi terhadap antigen F1 Yersinia pestis dilakukan

untuk pemeriksaan konfirmasi penyakit pes dengan menggunakan

metode HA (Hemeaglutination) dan HI ( Hemeaglutination

Inhibition). Hasil pemeriksaan dinyatakan positif pada serum darah

tikus yang berasal dari Dusun Taman dengan nomor sampel 2355

titer 1 : 32, Surorowo 2471 titer 1 : 32, Tosari 2262 titer 1 : 16,

2269 dan 2275 dengan titer 1 : 32 serta Dusun Campal 2522

dengan titer 1 :32.

2. Prinsip kerja metode HA (Hemeaglutination) yaitu terjadinya

ikatan antara antigen dengan sel darah merah yang ditandai dengan

adanya aglutinasi (butiran seperti pasir), Sedangkan prinsip uji HI

(Hemeaglutination Inhibition) yaitu menghambat

terjadinya aglutinasi sel darah merah (RBC) oleh virus atau

antigen akibat terikatnya antigen tersebut dengan antibodi spesifik.

Oleh karena itu uji positif HI ditandai dengan tidak adanya

penggumpalan atau aglutinasi.

52
 53

3. Hasil deteksi antibodi F1 Yersinia pestis pada sampel serum darah

tikus adalah positif, maka selanjutnya akan dikeluarkan laporan

hasil uji dan dikirim ke BBTKLPP Surabaya, kemudian diterbitkan

surat KLB (Kejadian Luar Biasa).Sehingga daerah asal sampel

yang di uji dinyatakan sebagai daerah positif pes. Dengan adanya

KLB, maka akan dilakukan penanggulangan dengan meningkatkan

frekuensi aktivitas surveilans.

5.1 Saran

Perlu dilakukan uji serologi lebih lanjut secara kuantitatif dan uji

secara mikrobiologi, secara prinsip uji HA (Hemeaglutination) dan HI

(Hemeaglutination Inhibition) di lakukan secara visual pada saat membaca

hasil, sehingga tingkat ketelitian rendah. Hal ini mempengaruhi tindakan

yang dilakukan selanjutnya untuk penanggulangan penyakit pes.

 DAFTAR PUSTAKA

Anonim, 2008. Prosedur Tetap Pemeriksaan Pes. Balai Laboratorium Kesehatan

Yogyakarta.

Anonim, 2006. Instruksi Kerja Pemeriksaan Pes. Balai Laboratorium Keehatan

Yogyakarta.

Amanu, S. 2005 Studi Serologi Denga Uji Hambatan Hemaglutinasi Terhadap

Angsa Yang Dapat Bertindak Sebagai Pembawa New Castle Disease di D.I.

Yogyakarta.http://i-ib.ugm.ac.id/jurnal/download.php?dataId=8360.

Baratawidjaja, K.G. 1998. Imunologi Dasar. Edisi Ketiga. Penerbit Fakultas

Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta.

Abbott, R.C. dan Rocke, T.E. 2012. Plague. Virginia: U.S. Geological Survey

Circular

Balai Besar Teknik Kesehatan Lingkungan dan Pengendalian Penyakit Surabaya.

2014. Laporan Hasil Pengamatan Penyakit Pes di Daerah Enzootik Pes

Pasuruan Provinsi Jawa Timur Bulan Januari-Maret 2014. Surabaya:

BBTKL PP Surabaya

Butler, Thomas. 2009. Plague in The 21st Century. Clinical Infectious Disease

Oxford Journals. 49 (1): 736-742

Depkes RI. 2014. Petunjuk Teknis Pengendalian Pes. Departemen Kesehatan RI,

Direktorat Jendral Pemberantasan Penyakit Menular dan Penyehatan

Lingkungan. Jakarta: Departemen Kesehatan RI

Hardjono dkk, 2003 .interpretasi hasil test lab diagnosik.

Makassar LEPHAS.Makassar, 17 Maret 2018.

54
 55

Murti, Bhisma. 2003. Prinsip dan Metode Riset Epidemiologi. Yogyakarta:

Gadjah Mada Univ. Press

Price, Sylfia. 2005. Patofisiologi. Jakarta. EGC. Hal 82.

Sherwood, Laurale. 2014. Fisiologi manusia. Jakarta. EGC. Hal 456- 460.

WHO, 2009, Laboratory Manual of Plague Diagnostic Test. CDC Atlanta

 LAMPIRAN

Lampiran 1. Pengambilan Serum Darah Tikus Rattus tanezumi

No. Gambar Keterangan

1.

Proses pengambilan darah tikus,

sebanyak 5 cc.

2.

Darah ditampung kedalam

tabung reaksi kecil.

3.

Melakukan sentrifugasi dengan

kecepatan 3000 rpm selama 10

menit.

56
 57

4.

Memindah supernatant kedalam

tabung baru, pellet segera

dibuang.

5.

Melakukan sentrifugasi pada

supernatant.

6.

Serum darah tikus siap untuk di

uji Hemeaglutination dan

Hemeaglutination Inhibition
 58

Lampiran 2. Pengambilan Sheep Red Blood Cell ( darah domba)

No. Gambar Keterangan

1.

Memilih domba jantan untuk

diambil darah.

2.

Mencukur rambut bagian leher

domba, untuk memudahkan

pengambilan darah.

3.

Mengambil darah domba pada

bagian vena jugularis.

 59

4.

Mengambil darah sebanyak 10

cc.

5.

Darah ditampung dalam tabung

Erlenmeyer yang didalamnya

terdapat bola Kristal untuk

menghambat penggumpalan.

6.

Darah domba
 60

Lampiran 3. Alat – alat Yang Digunakan Pada Uji HA dan HI

No. Gambar Keterangan

1.

Mikroskop Stereo

2.

Tip

3.

Mikropipet
 61

4.

Spuit untuk mengambil darah

domba. Berukuran 10 cc.

5.

Sentrifuge

6.

Mikrowell
 62

Lampiran 4. Bahan Yang Digunakan Pada Metode HA dan HI

No. Gambar Keterangan

1.

Serum darah tikus Rattus tanezumi

2.

Sheep Red Blood Cell (SRBC)

3.

Alsevier dalam saline (NaCl)

 63

4.

Normal Rabbit Serum

5.

NaCl

6.

s-SRBC
 64

7.

Serum Kontrol Positif Pes

8.

Antigen F-1

9.

Alkohol 70 %
 65

10.

Aquades