Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

biomolekul

Artikel

Merokok selama Kehamilan: EffEfek pada Enzim

Antioksidan, Metallothionein dan Elemen Jejak
pada Pasangan Ibu-Bayi Baru Lahir
Alica Pizent1, Maja Lazarus1,* , Jelena Kovačić1, Blanka Tariba Lovakovi1, Irena Brčić Karačonji
1, Tanja ivkovi Semren1, Ankica Sekovanić1, Tatjana Orct1, Karmen Branovi-Čakani2, Nataša
Brajenovi1, Andreja Jurič1, Iva Miškulin3, Lana krgatić3, Sandra Stasenko4, Tatjana Mioč4,
Jasna Jurasovi1 dan Martina Piasek1
1 Institut Penelitian Medis dan Kesehatan Kerja, 10.000 Zagreb, Kroasia; apizent@imi.hr (AP);
jkovacic@imi.hr (JK); btariba@imi.hr (BTL); ibrcic@imi.hr (IBK); tzivkovic@imi.hr (T.Ž.S.);
asekovanic@imi.hr (AS); torct@imi.hr (TO); nbrajen@imi.hr (NB); ajuric@imi.hr (AJ); jurasovic@imi.hr
(JJ); mpiasek@imi.hr (MP)
2 Institut Kedokteran Hewan Kroasia, 10.000 Zagreb, Kroasia; Pusat Rumah Sakit Universitas
3 branovic@veinst.hr , 10.000 Zagreb, Kroasia; iva.miskulin@gmail.com (IM);
lana.skrgatic@mef.hr (L.Š.)
4 Rumah Sakit Universitas Merkur, 10.000 Zagreb, Kroasia; sandra.stasenko@zg.t-com.hr (SS);
tatjana.mioc@hotmail.com (TM)
* Korespondensi: mlazarus@imi.hr

---- -
Diterima: 6 April 2020; Diterima: 9 Juni 2020; Diterbitkan: 10 Juni 2020 ---

Abstrak:Pengaruh ibu merokok sebagai sumber pajanan logam toksik Cd dan Pb terhadap aktivitas superoksida dismutase (SOD) dan glutation peroksidase (GPx), metallothionein (MT),

Cd, Pb, Cu, Fe, Mn, Se dan Zn adalah dinilai dalam darah ibu dan tali pusat dan plasenta pada 74 pasangan ibu-bayi yang sehat setelah melahirkan cukup bulan. Analisis diskriminan jarang

(SDA) digunakan untuk mengidentifikasi elemen dengan dampak terkuat pada SOD, GPx dan MT di kompartemen yang diukur, yang kemudian diukur dengan analisis regresi berganda.

Aktivitas SOD lebih rendah pada plasma ibu dan tali pusat, dan lebih tinggi pada plasenta perokok dibandingkan bukan perokok, sedangkan aktivitas GPx dan konsentrasi MT tidak

berbeda antara kedua kelompok. Meskipun merokok aktif selama kehamilan berkontribusi terhadap konsentrasi Cd dan Pb ibu yang lebih tinggi, kontribusinya terhadap variabilitas SOD,

GPx atau MT setelah kontrol untuk elemen lain yang diidentifikasi oleh SDA tidak signifikan. Namun, gangguan keseimbangan dalam pertahanan antioksidan yang diamati dalam kondisi

tingkat paparan Cd dan Pb yang relatif rendah hingga sedang dapat berkontribusi pada peningkatan kerentanan keturunan terhadap stres oksidatif dan risiko perkembangan penyakit di

kemudian hari. Studi lebih lanjut pada sejumlah besar subjek akan membantu untuk lebih memahami interaksi kompleks antara paparan elemen beracun dan stres oksidatif yang terkait

dengan ibu yang merokok. gangguan keseimbangan dalam pertahanan antioksidan yang diamati dalam kondisi tingkat paparan Cd dan Pb yang relatif rendah hingga sedang dapat

berkontribusi pada peningkatan kerentanan keturunan terhadap stres oksidatif dan risiko perkembangan penyakit di kemudian hari. Studi lebih lanjut pada sejumlah besar subjek akan

membantu untuk lebih memahami interaksi kompleks antara paparan elemen beracun dan stres oksidatif yang terkait dengan ibu yang merokok. gangguan keseimbangan dalam

pertahanan antioksidan yang diamati dalam kondisi tingkat paparan Cd dan Pb yang relatif rendah hingga sedang dapat berkontribusi pada peningkatan kerentanan keturunan terhadap

stres oksidatif dan risiko perkembangan penyakit di kemudian hari. Studi lebih lanjut pada sejumlah besar subjek akan membantu untuk lebih memahami interaksi kompleks antara

paparan elemen beracun dan stres oksidatif yang terkait dengan ibu yang merokok.

Kata kunci:logam beracun; elemen penting; MERUMPUT; GPx; metallothionein; analisis diskriminan jarang;
paparan perkembangan; ibu merokok

1. Perkenalan

Ada bukti yang muncul bahwa paparan ibu terhadap berbagai stresor lingkungan mungkin memiliki
peran penting dalam memprogram kerentanan keturunan terhadap efek kesehatan yang merugikan.
Pemrograman janin mencakup adaptasi struktural, fisiologis, dan metabolik permanen terhadap lingkungan
intrauterin, yang merupakan lingkungan pertama janin yang sedang berkembang. Setiap perubahan selama
periode perinatal dapat meningkatkan risiko terkena penyakit di kemudian hari. Konsep ini disebut

Biomolekul2020,10, 892; doi:10.3390/biom10060892 www.mdpi.com/journal/biomolecules

Biomolekul2020,10, 892 2 dari 18

sebagai asal-usul perkembangan kesehatan dan penyakit (DOHaD) [1,2]. Mekanisme konsekuensi kesehatan
akibat pajanan lingkungan dan kondisi yang dimanifestasikan setelah lahir dapat berupa stres oksidatif, yang
diakui sebagai salah satu mediator utama yang termasuk dalam program kesehatan dan penyakit keturunan
di masa depan.3,4].
Merokok selama kehamilan merupakan salah satu faktor lingkungan utama yang dapat mempengaruhi
kesehatan wanita selama masa reproduksi dan keturunannya. Meskipun upaya untuk mengurangi merokok, secara
global, 52,9% (95% CI 45,6-60,3) wanita yang merokok setiap hari terus merokok selama dan/atau setelah kehamilan [
5]. Seorang wanita hamil yang merokok memaparkan embrio/janinnya ke berbagai bahan kimia dari asap tembakau
serta meningkatkan risiko efek merugikan, secara langsung melalui transfer toksikan melalui plasenta dan secara
tidak langsung dengan mempengaruhi pembuluh darah plasenta, aliran darah arteri umbilikalis, dan gangguan
nutrisi plasenta. jalan [6,7].
Asap tembakau mengandung sejumlah besar bahan kimia yang berhubungan dengan inisiasi atau
perkembangan proses patologis yang mempengaruhi perkembangan foetoplasenta dan hasil kehamilan [7].
Diantaranya adalah radikal bebas dan spesies oksigen reaktif (ROS) yang berpotensi menyebabkan kerusakan
oksidatif pada lipid membran sel, protein, enzim dan DNA.8]. ROS yang berlebihan dapat meningkatkan
perkembangan jaringan dan fungsi vaskular plasenta yang abnormal.9,10], berkontribusi terhadap gangguan
transportasi nutrisi dan oksigen ke janin yang sedang berkembang [11,12]. Pada ibu perokok dan bayinya yang baru
lahir, peningkatan peroksidasi lipid dan gangguan keseimbangan prooksidan-antioksidan dilaporkan.12–14]. Selain
itu, merokok adalah, kecuali makanan, sumber utama kadmium (Cd) dan timbal (Pb) pada populasi umum di daerah
yang tidak tercemar [15,16]. Kedua logam beracun itu terbukti berdampak buruk bagi kesehatan manusia, terutama
selama periode sensitivitas tertentu, seperti kehamilan dan menyusui (periode perinatal) [17]. Tingkat darah
mencerminkan paparan Cd dan Pb baru-baru ini, sedangkan plasenta mencerminkan paparan masa lalu dan baru-
baru ini karena redistribusi elemen selama kehamilan.7]. Meskipun elemen redoks tidak aktif, Cd dan Pb dapat
berkontribusi terhadap stres oksidatif dengan mengganti elemen esensial dari tempat pengikatan di berbagai protein
sitoplasma dan membran, yang mempengaruhi struktur, aktivitas, dan fungsinya.18,19].
Dalam kondisi normal, sistem antioksidan meminimalkan kelebihan produksi spesies reaktif dan
mencegah efek buruk dari stres oksidatif. Enzim antioksidan superoksida dismutase (SOD) dan glutathione
peroxidase (GPx) berada di garis pertahanan pertama melawan ROS dan produk sampingannya. Untuk aktivitas
dan struktur yang optimal, sejumlah kecil elemen esensial diperlukan: tembaga (Cu) dan seng (Zn) untuk Cu,Zn-
SOD (dalam sitoplasma dan ekstraseluler), mangan (Mn) untuk Mn-SOD (dalam mitokondria ) dan selenium (Se)
untuk Se-GPx (dalam sitoplasma dan mitokondria). Unsur-unsur ini juga penting untuk embriogenesis dan
pertumbuhan serta perkembangan janin.20].
Metallothionein (MT), protein pengikat logam kecil yang kaya sistein, memiliki peran penting dalam
penyimpanan dan homeostasis Zn dan Cu. Peran penting tambahannya adalah mengais radikal bebas yang
dihasilkan dalam stres oksidatif dan detoksifikasi. Karena banyaknya gugus -SH dan afinitas/kapasitas tinggi
untuk mengikat berbagai ion logam reaktif, seperti Cd, merkuri (Hg), Cu, Pb, nikel (Ni), kobalt (Co), besi (Fe),
perak (Ag ) dan emas (Au), MT berkontribusi pada penurunan ketersediaan efek toksik dalam kondisi paparan
akut, sedangkan dalam kondisi paparan kronis akumulasi logam beracun (seperti kompleks Cd-MT atau Hg-MT)
dapat menimbulkan risiko efek toksik. (diulas di [21,22]). Merokok tembakau dapat mempengaruhi ekspresi MT
di plasenta dan selanjutnya mengikat, mentransfer dan akumulasi plasenta dari ion logam terkait. Namun,
literatur yang relevan tidak memiliki studi yang menggabungkan efek terkait merokok pada MT pada pasangan
ibu-bayi yang sehat.23] dan kapasitas antioksidan dengan mempertimbangkan interaksi berbagai elemen [19,
24]. Karena enzim antioksidan dan MT berbagi peran penting dalam fisiologi elemen dan toksikologi terkait
merokok, serta dalam pemeliharaan keseimbangan pro/antioksidan, sangat penting untuk mengikuti
parameter tersebut secara bersamaan.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menilai efek merokok dan paparan terkait unsur toksik
pada enzim antioksidan, MT dan konsentrasi unsur esensial dalam sampel ibu dan janin yang
diambil segera setelah persalinan pervaginam spontan pada pasangan ibu-bayi yang sehat dari
Kroasia. Kami mengukur aktivitas SOD dan GPx dalam plasma ibu dan tali pusat, konsentrasi MT,
Cu, Fe, Se dan Zn dalam serum ibu dan tali pusat dan Cd, Mn dan Pb pada ibu.
Biomolekul2020,10, 892 3 dari 18

dan darah tali pusat. Semua parameter ini juga ditentukan dalam plasenta. Kami menerapkan pendekatan inovatif
untuk mengidentifikasi elemen dengan dampak terkuat pada variabilitas SOD, GPx dan MT dengan menggunakan
analisis diskriminan jarang diikuti dengan analisis regresi berganda.

2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1. Peserta Studi

Penelitian dilakukan pada 74 pasangan ibu-bayi yang dipilih dalam studi yang lebih luas pada
kohort yang lebih besar yang direkrut pada periode antara Desember 2017 dan Januari 2019.
Peserta adalah wanita postpartum sehat yang melahirkan normal secara normal (minggu ke-37-42
kehamilan ) di bangsal bersalin dari dua rumah sakit klinis di Zagreb, Kroasia. Setiap peserta
diberitahu tentang tujuan penelitian dan protokol dan menandatangani persetujuan untuk
bersedia berpartisipasi dalam penelitian ini. Studi ini disetujui oleh komite etik dari tiga institusi
yang berkolaborasi: University Hospital Center (no. 021-1/43-18), Rumah Sakit Universitas Merkur
(no. 03/1-5102/1) dan Institute for Medical Research and Occupational Kesehatan (no. 100-21/17-07)
di Zagreb, Kroasia. Data yang relevan mengenai riwayat medis, karakteristik sosiodemografi,7,25]
dan dari catatan klinis. Berdasarkan informasi yang dilaporkan sendiri tentang kebiasaan merokok,
kedua kelompok yang diteliti direncanakan untuk ditetapkan berdasarkan kriteria berikut: bukan
perokok—tidak pernah merokok atau merokok >12 bulan sebelum kehamilan terakhir, dan
perokok—merokok kapan saja selama kehamilan atau dalam waktu 12 bulan sebelum kehamilan
terakhir. Untuk memastikan penilaian objektif dari kebiasaan merokok pada peserta penelitian,
status merokok juga diukur dengan pengukuran cotinine urin. Beberapa penelitian telah
menyarankan bahwa batas kadar kotinin urin 25-50 ng/mL tepat untuk mengidentifikasi perokok di
antara wanita hamil dan pascapersalinan.26,27]. Untuk membedakan perokok aktif dari non-
perokok, titik batas ditetapkan pada 100 ng/mL. Tingkat kotinin urin lebih rendah dari batas
kuantifikasi (LOQ) ditetapkan sebagai titik potong untuk non-perokok untuk menghindari
kesalahan klasifikasi antara non-perokok dan perokok pasif yang tanpa sadar terpapar asap
tembakau lingkungan tingkat rendah. Dengan demikian, dua kelompok studi diidentifikasi dan
dibandingkan: non-perokok (n=37) dengan cotinine urin < LOQ, dan perokok (n=37) dengan
cotinine urin≥ 100ng/mL.

2.2. Koleksi Sampel

Sampel urin spot dari wanita hamil dikumpulkan dalam wadah bertutup ulir pada hari rawat inap untuk
melahirkan. Sampel darah tali pusat dan ibu yang tidak berpuasa diambil dalam waktu 10 menit setelah
melahirkan. Darah dikumpulkan dalam vacutainer BD untuk tabung uji elemen jejak dengan K2EDTA untuk
analisis darah utuh dan plasma dan tanpa antikoagulan untuk analisis serum. Seluruh plasenta dengan tali
pusat ditempatkan dalam kantong polietilen zip-lock setelah melahirkan. Semua sampel disimpan pada suhu 4◦
C sampai transportasi ke laboratorium analitik. Sampel darah dan plasenta diproses lebih lanjut dalam waktu
dua jam setelah melahirkan.
Di laboratorium analitik, sampel urin dituang untuk menghindari partikel yang terlihat, dimasukkan
ke dalam vial bertutup ulir dan disimpan hingga analisis pada 20◦C. Sampel darah utuh, plasma dan
serum diambil dan disimpan pada suhu 80◦C sampai analisis. Plasenta segar diambil sampelnya
mengikuti metode yang dijelaskan sebelumnya [7,25]. Seluruh plasenta ditempatkan di sisi ibu, dioleskan
pada kertas saring, tali pusat dan membran ekstraembrionik dipotong dan massa plasenta baru dicatat.
Menggunakan pisau keramik, tiga bagian ketebalan penuh (termasuk permukaan ibu dan janin) diambil
dari setiap plasenta. Satu bagian tengah (C) diambil dari garis tengah diskus plasenta menghindari
daerah insersi tali pusat. Dua bagian perifer (P) diambil antara daerah pusat dan perifer, 3 cm terluar dari
margin diskus plasenta luar. Desidua basalis dan lempeng korionik plasenta kemudian dipotong dari
setiap sampel, meninggalkan jaringan trofoblas (vili korionik) untuk persiapan lebih lanjut. Sampel
representatif dikumpulkan lebih lanjut dengan memotong C
Biomolekul2020,10, 892 4 dari 18

dan bagian P menjadi kubus kecil sekitar 1-2 g berat jaringan segar dan subsampel yang terdiri dari satu
bagian C atau dua P dari setiap plasenta disimpan dalam cryotube pada 80◦C sampai analisis.

2.3. Analisis Superoksida Dismutase

Aktivitas SOD diukur dalam plasma dan supernatan homogenat jaringan plasenta menggunakan
Superoxide Dismutase Assay Kit (item no. 706002, Cayman Chemicals, Ann Arbor, MI, USA). Subsampel C
dan P plasenta dihomogenkan masing-masing dalam 5 mL buffer HEPES 20 mM dingin, pH 7,2, yang
mengandung 1 mM ethylene glycol tetraacetic acid (EGTA), 210 mM manitol dan 70 mM sukrosa per
gram jaringan dengan Precellys®Evolusi (Bertin Technologies, Montigny-le-Bretonneux, Prancis)
homogenizer jaringan. Homogenat kemudian disentrifugasi (Eppendorf Centrifuge 5417 R, Eppendorf
AG, Hamburg, Jerman) pada 10.000×gselama 15 menit pada 4◦C dan supernatan disimpan pada suhu -80◦
C sampai analisis. Absorbansi dibaca pada 445 nm menggunakan pembaca pelat Tecan Infinite M200 Pro
(Tecan Group Ltd., Männedorf, Swiss). Satu unit SOD didefinisikan sebagai jumlah enzim yang dibutuhkan
untuk menunjukkan 50% dismutasi radikal superoksida. Aktivitas SOD diekspresikan sebagai U/mL
plasma dan U/g protein dalam supernatan homogenat jaringan plasenta.

2.4. Analisis Glutathione Peroksidase

Aktivitas GPx diukur dalam plasma dan supernatan homogenat jaringan plasenta menggunakan
Glutathione Peroxidase Assay Kit (item no. 703102, Cayman Chemicals, Ann Arbor, MI, USA). Subsampel C dan P
plasenta dihomogenkan masing-masing dalam 5 mL buffer dingin yang mengandung 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 5
mM ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), dan 1 mM dithiothreitol (DTT) per gram jaringan dengan OMNI TH
Tissue Homogenizer (OMNI). Internasional, Inc., Kennesaw, GA, AS). Homogenat kemudian disentrifugasi
(Eppendorf Centrifuge 5417 R, Eppendorf AG, Hamburg, Jerman) pada 10.000×g selama 15 menit pada 4◦C dan
supernatan disimpan pada suhu -80◦C sampai analisis. Absorbansi dibaca pada 340 nm menggunakan
pembaca pelat Tecan Infinite M200 Pro (Tecan Group Ltd., Männedorf, Swiss). Satu unit didefinisikan sebagai
jumlah enzim yang akan menyebabkan oksidasi 1,0 nmol NADPH menjadi NADP+per menit pada 25◦C. Aktivitas
GPx dinyatakan sebagai nmol/menit/mL plasma dan nmol/menit/g protein dalam supernatan homogenat
jaringan plasenta.

2.5. Analisis Metallothionein

Isoform metallothionein-2 diukur dalam serum dan supernatan plasenta. Kami memutuskan untuk
mengikuti tingkat isoform MT2 protein sebagai isoform MT utama di antara empat [28] dan sebagai Ronco et
al. [29] menemukan MT2 plasenta, dan bukan isoform MT1, meningkat pada perokok dibandingkan dengan
bukan perokok. Pertama, bagian tengah (bagian C) dan dua bagian perifer (bersama-sama sebagai bagian P)
dicairkan dan dihomogenkan masing-masing (10%w/v) dalam 0,01 mol/L buffer PBS dengan Precellys®Evolusi
(Bertin Technologies, Montigny-le-Bretonneux, Prancis) homogenizer jaringan. Homogenat kemudian
disentrifugasi (Eppendorf Centrifuge 5417 R, Eppendorf AG, Hamburg, Jerman) pada 5000×gjam 4◦C selama 15
menit dan supernatan disimpan pada suhu -80◦C sampai analisis MT2. Konsentrasi MT2 diukur pada 450 nm
pada pembaca lempeng mikro (Infinite F50, Tecan Trading AG, Männedorf, Swiss) menggunakan kit komersial
(enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), tes SEB868Hu 96, Cloud-Clone Corp., Houston, Texas, AS). Data
MT2 numerik dinyatakan dalam protein ng/g atau dalam serum ng/mL.

2.6. Analisis Protein

Protein total dalam supernatan homogenat plasenta ditentukan menggunakan uji kolorimetri
Bradford standar dengan albumin serum sapi sebagai standar [30].
Biomolekul2020,10, 892 5 dari 18

2.7. Analisis Elemen Jejak

Kadar Cd, Mn dan Pb dalam darah ibu dan tali pusat dan Cu, Fe, Se dan Zn dalam serum ibu dan tali
pusat diukur setelah pengenceran sampel dengan larutan basa (0,7 mmol/L amonia, 0,01 mmol/L EDTA,
0,07% (v/v) Triton X-100, dan 3µg/L standar internal. Bagian C dan P plasenta yang dicairkan sebagian
(0,5 g) dicerna asam dalam sistem pencernaan gelombang mikro UltraCLAVE IV (Milestone, Sorisole,
Italia) sebelum elemen diukur dengan menggunakan spektrometri massa plasma yang digabungkan
secara induktif (ICP-MS; Agilent 7500cx, Tokyo , Jepang) mengikuti prosedur yang dirinci di tempat lain [
31]. Konsentrasi elemen diukur di bagian C dan P plasenta untuk mendapatkan sampel yang homogen
dan konsentrasi elemen plasenta rata-rata digunakan dalam analisis berikut. Keakuratan pengukuran
dikontrol menggunakan standar darah dan jaringan (SRM) dan bahan referensi bersertifikat (CRM):
SeronormTMDarah Elemen Jejak (Level 1, 2 dan 3), SeronormTMTrace Elements Serum (Level 1 dan 2) (Sero
AS, Billingstad, Norwegia), ClinChek®Kontrol Darah Utuh (Level 1, 2 dan 3), dan ClinChek®Kontrol Serum
(Level 1 dan 2) (Resep, München, Jerman), Hati Sapi BCR-185R, Ginjal Babi BCR-186R (IRMM, Geel, Belgia),
dan Hati Sapi SRM 1577b (NIST, Gaithersburg, MD, USA). Batas deteksi (LOD) dan hasil analisis elemen
dalam bahan referensi yang dilakukan untuk kontrol kualitas pengukuran disajikan dalam Tabel
Tambahan S1 dan S2. Pemulihan keseluruhan adalah 92-113% dari nilai analitis yang ditetapkan. Unsur-
unsur yang diukur dinyatakan dalamµg/L serum atau darah lengkap dan mg/kg berat jaringan plasenta
basah.

2.8. Analisis Cotinine

Cotinine sebagai penanda paparan asap tembakau diekstraksi dengan 85µm serat poliakrilat
(Supelco, Bellefonte, USA) terkena ruang kepala di atas 1 mL urin ibu pada 80◦C selama 15 menit
(ekstraksi mikro fase padat-headspace; HS-SPME). Kuantifikasi diperoleh dengan kromatografi gas-
spektrometri massa (GC-MS; Varian 3400 CX kromatografi gas dilengkapi dengan spektrometer massa
perangkap ion 4D Saturnus) dalam kondisi yang dijelaskan sebelumnya oleh Brčić Karačonji et al. [32]
dan data yang dinyatakan dalam ng/mL. LOQ untuk kotinin urin adalah 0,25 ng/mL.

2.9. Analisis Statistik

Tes Shapiro-Wilk digunakan untuk menilai normalitas data. Dengan demikian, siswa parametrik tuji
atau nonparametrik Mann–WhitneykamuTes dilakukan untuk mendeteksi perbedaan parameter antara
ibu yang tidak merokok dan ibu yang merokok dan bayinya. Perbedaan aktivitas SOD dan GPx, MT dan
konsentrasi elemen antara kompartemen ibu dan bayi diuji dengan uji pasangan cocok Wilcoxon.
Variabel kategori dianalisis dengan uji Fisher. Hasil disajikan sebagai rata-rata±simpangan baku atau
median dan jangkauan. Koefisien korelasi Spearman digunakan untuk mengevaluasi hubungan statistik
antara variabel yang diminati. Sebelum analisis lebih lanjut, variabel dependen ditransformasikan untuk
mendekati distribusi normal dengan menambahkan konstanta (hanya untuk SOD dalam plasenta dan MT
dalam serum ibu) dan mengambil logaritma natural.
Pertama, hubungan Cd dan Pb dengan SOD, GPx, dan MT dinilai dalam model regresi linier yang disesuaikan
dengan usia, pendidikan, dan status merokok (dihilangkan dalam kasus Cd untuk menghindari masalah dengan
kolinearitas).
Di bagian kedua penelitian, kami menilai efek simultan dari elemen terpilih pada SOD, GPx, dan MT dalam
matriks yang diukur. Untuk mengidentifikasi elemen dengan asosiasi terkuat dengan SOD, GPx, dan MT,
analisis diskriminan sparse (SDA), terutama cocok untuk sampel kecil dengan sejumlah besar variabel [33]
digunakan. Tidak seperti analisis yang lebih sederhana, seperti analisis korelasi atau regresi berganda yang
dapat menilai kontribusi sejumlah prediktor yang terbatas pada saat yang sama karena kendala ukuran
sampel, analisis SDA mempertimbangkan efek dari semua prediktor potensial secara bersamaan. Dengan
demikian, analisis ini memungkinkan kita untuk menilai apakah Cd atau Pb sebagai penanda paparan merokok
adalah di antara elemen yang berkontribusi paling signifikan terhadap perbedaan MT dan enzim antioksidan
ketika mempertimbangkan paparan simultan terhadap elemen tertentu. Setelah transformasi log,
Biomolekul2020,10, 892 6 dari 18

semua kolom data yang digunakan sebagai prediktor (elemen) dinormalisasi agar memiliki mean nol dan
satuan panjang. Variabel dependen (SOD, GPx, MT) dikategorikan menjadi tiga kelompok sesuai dengan tertiles
data yang diamati. Sebagai prediktor potensial, Cd, Mn dan Pb dalam darah ibu dan tali pusat, dan Cu, Fe, Se
dan Zn dalam serum ibu dan tali pusat, biomarker yang diterima secara umum dari paparan mereka
dipertimbangkan. Selain itu, ketujuh elemen dalam plasenta dimasukkan. Karena jumlah variabel yang dapat
dimasukkan dalam analisis multivariat lebih lanjut dibatasi oleh ukuran sampel, jumlah prediktor potensial
ditetapkan menjadi empat. Parameter penyetelan dipilih oleh prosedur validasi silang tanpa-satu-keluar [33].
Karena keluaran SDA tidak menilai signifikansi model, analisis regresi berganda lebih lanjut
dilakukan setelah analisis SDA. Variabel yang dianggap sebagai prediktor dalam model regresi ini
adalah empat elemen dari analisis SDA, dan usia ibu, merokok dan pendidikan. Ketika Cd dipilih
sebagai prediktor, merokok dihilangkan untuk mengurangi efek kolinearitas.
Semua analisis dilakukan dalam perangkat lunak statistik R, versi 3.5.0 (R Foundation for Statistical
Computing, Wina, Austria).

3. Hasil

3.1. Karakteristik Umum Ibu dan Bayi Baru Lahir

Meja1menunjukkan karakteristik umum dari peserta penelitian. Rata-rata usia ibu adalah 31 tahun, dan ibu yang
merokok lebih muda dari yang bukan perokok (30 vs 33 tahun). Menurut data yang dilaporkan sendiri tentang
kebiasaan merokok, tiga peserta yang dinyatakan bukan perokok memiliki kadar kotinin urin lebih tinggi dari batas
batas 100 ng/mL (yaitu, 199 ng/mL, 556 ng/mL dan 1160 ng/mL). mL, masing-masing). Karena itu, mereka dianggap
perokok. Peserta menyatakan diri sebagai perokok dilaporkan merokok 10 (2-20) batang per hari sebelum kehamilan
dan 9 (1-20) batang per hari selama kehamilan, dan hanya tiga dilaporkan merokok 20 batang per hari selama seluruh
kehamilan. Tidak ada perbedaan signifikan antara perokok dan bukan perokok yang ditemukan pada paritas, indeks
massa tubuh (IMT) sebelum hamil, IMT sebelum melahirkan, dan pertambahan berat badan selama kehamilan. Sekitar
70% bayi yang baru lahir adalah laki-laki. Ada distribusi jenis kelamin yang sama dari bayi baru lahir antara perokok
dan non-perokok. Semua bayi baru lahir memiliki kesehatan yang sangat baik dengan nilai median tertinggi skor
APGAR 10, baik pada menit 1 dan 5 (data tidak ditampilkan).

Tabel 1.Ciri-ciri umum ibu nifas dan bayi baru lahir yang dikelompokan menurut kebiasaan merokok
ibu menurut kadar kotinin urin1.

Semua (n=74) Bukan Perokok (n=37) Perokok (n=37) p2

Karakteristik ibu
Usia (tahun) 31±5 33±5 30±5 0,003
Pendidikan3 <0,001
Sekolah dasar 4 (5,41%) 1 (2,70%) 3 (8,11%)
Sekolah Menengah 33 (44,59%) 8 (21,62%) 25 (67,57%)
gelar universitas 35 (47,30%) 28 (75,68%) 7 (18,92%)
23.15 23.26 23.05
BMI sebelum hamil (kg/m2 ) tidak
(14,69–36,59) (18.37–36.33) (14,69–36,59)
28.13 27.89 28.31
BMI sebelum melahirkan (kg/m2) tidak
(19,83–41,52) (22,57–41,52) (19,83–38,64)
Pertambahan berat badan selama hamil (kg) 14.29±4.63 13.88±4.18 14.70±5.06 tidak
Keseimbangan 2 (1–6) 2 (1–6) 2 (1–6) tidak
Kotinin urin (ng/mL) 1730 (<LOQ–7723) <LOQ 955 (101–7723) <0,001
Karakteristik bayi baru lahir
Pria 52 (70) 26 (70) 26 (70) tidak
Berat lahir (g) 3494±496 3558±486 3430±503 tidak
Panjang badan lahir (cm) 50.47±2.02 50.59±1.77 50.35±2.25 tidak
Berat lahir/berat plasenta 8,74 (6,49-14,91) 9,19 (6,49-14,91) 8.23 (6.98-11.70) 0,017

Karakteristik plasenta
Berat yang dipangkas (g) 401±85.1 394±90.2 408±80.4 tidak

1Hasil disajikan sebagai mean±SD, median (min-maks) atau angka dan persentase (%). Non-perokok memiliki kadar
kotinin urin lebih rendah dari batas kuantifikasi (LOQ), perokok memiliki kadar kotinin urin≥ 100ng/mL.2Perbedaan antara
perokok dan bukan perokok diuji dengan Student's t-test, Mann Whitneykamu-test, atau Fisher's test dan dianggap
signifikan padap<0,05.3Dua perokok tidak melaporkan tingkat pendidikannya.
Biomolekul2020,10, 892 7 dari 18

3.2. Perbandingan Parameter Terukur Antara Kompartemen Ibu dan Bayi

3.2.1. Konsentrasi Elemen

konsentrasi elemen tidak berarti yakin di m sesudah al an d darah tali pusat atau serum dan di dalam plasenta
disajikan pada Gambar1dan Tabel Tambahan S3.

Gambar 1.konsentrasi (sebuah) Cu, (b) Fe, (c) Zn, (d) Cd, (e) M N, (f) Pb dan (g) Se pada sampel darah
ibu dan tali pusat serta serum dan plasenta dari 74 pasangan ibu-bayi. Kotak dan garis masing-
masing mewakili 25%-75% rentang interkuartil dan median, dan kumis mewakili rentang non-
pencilan. Singkatan: MB—darah ibu, MS—serum ibu, CB—darah tali pusat,
CS—bersama serum ketiga, PL—plasenta.

aku yang diukur pada ibu dengan darah tali pusat atau serum, perbedaan
Ketika membandingkan tingkat
r elemen, terlepas dari
yang signifikan diamati untuk sebagian besar t kebiasaan merokoktibu. Konsentrasi n
darah tali pusat secarasaya
signifikan lebih rendah daripada dalam darah ibu untuk Cd dan Pb, dan lebih tinggi
untuk Mn. Konsentrasi dalam serum tali pusat secara signifikan lebih rendah daripada serum ibu untuk Cu dan
Se, dan lebih tinggi untuk Fe dan Zn.

3.2.2. Aktivitas SOD dan GPx dan Konsentrasi MT

Ketika membandingkan kadar antara plasma darah tali pusat dan ibu, perbedaan yang signifikan
ditemukan untuk kedua enzim, terlepas dari kebiasaan merokok ibu. Median aktivitas SOD adalah 1,7 kali lipat
lebih tinggi dan aktivitas GPx 1,6 kali lipat lebih rendah pada tali pusat dibandingkan plasma ibu dari masing-
masing ibu.
MT pada serum tali pusat 11 kali lebih tinggi dibandingkan serum ibu masing-masing. Tidak ada
perbedaan signifikan yang ditemukan untuk SOD, GPx dan MT antara kompartemen pusat dan perifer
plasenta. Oleh karena itu, nilai rata-rata parameter ini di kompartemen plasenta pusat dan perifer
digunakan dalam analisis statistik lebih lanjut.
Biomolekul2020,10, 892 8 dari 18

3.3. Perbandingan Parameter Terukur antara Perokok dan Bukan Perokok

3.3.1. Konsentrasi Elemen

Konsentrasi elemen yang diukur dibandingkan antara kelompok merokok dan tidak merokok (Tabel S3). Ibu
perokok memiliki median konsentrasi Cd yang lebih tinggi secara signifikan dalam darah mereka (0,683 vs 0,307µg/L)
dan plasenta (8,07 vs 6,33µg/kg berat basah) dibandingkan dengan bukan perokok, sedangkan tidak ada perbedaan
yang signifikan dalam Cd darah tali pusat (0,029 vs 0,028µg/L) ditemukan. Meskipun Pb lebih tinggi pada perokok
dibandingkan non-perokok di semua kompartemen yang diukur (darah ibu: 9,32 vs 8,30µg/L, darah tali pusat: 6,55 vs
6,07µg/L, plasenta: 2,86 vs 2,07µg/kg berat basah, masing-masing), hanya perbedaan plasenta yang signifikan secara
statistik.
Ibu yang merokok memiliki Fe secara signifikan lebih rendah dalam serum (0,760 vs 1,058 mg/L) dan plasenta (94,4 vs
108,8 mg/kg berat basah), Se dalam serum tali pusat (40,4 vs 43,6µg/L), dan Zn yang lebih tinggi di plasenta (11,1 vs 10,7 mg/
kg BB basah) dibandingkan ibu yang tidak merokok. Tidak ada perbedaan signifikan antara perokok dan bukan perokok yang
ditemukan untuk Cu dan Mn di semua matriks yang diukur, Fe dalam serum tali pusat, Se dalam serum ibu dan plasenta, dan
Zn dalam serum ibu dan tali pusat.

3.3.2. Aktivitas SOD dan GPx dan Konsentrasi MT

Kadar SOD, GPx dan MT dibandingkan antara kelompok merokok dan tidak merokok (Tabel2). Aktivitas
SOD secara signifikan lebih rendah pada ibu dan plasma tali pusat dan 1,7 kali lipat lebih tinggi pada plasenta
perokok dibandingkan kelompok tidak merokok. Aktivitas GPx serupa pada plasma ibu dan tali pusat dan di
plasenta kedua kelompok. Ibu yang merokok dan tidak merokok serta bayinya yang baru lahir memiliki kadar
MT yang sama dalam serum dan plasenta.

Meja 2.Aktivitas enzim antioksidan dan konsentrasi MT pada pasangan ibu-bayi1.

Non-Perokok perokok
p2
Semua

(n=74) (n=37) (n=37)

SOD (U/ml)
plasma ibu 2.26 (2.00–2.67) 2.42 (2.18-2.66) 2.08 (1.87-2.60) 0,025
plasma kabel 3,74 (3,40–4,26) 4.13 (3.59–4.48) 3.64 (3.04–3.81) 0,004
Plasenta 21.00 (8.09–39.52) 16,36 (6,14–32,65) 31,27 (12,44–43,38) 0,047

GPx (nmol/min/ml)
plasma ibu 69,76 (58,23–80,04) 70.22 (62.92–77.55) 63,60 (56,10–81,84) tidak

plasma kabel 41,33 (35,01–46,10) 41,50 (36,76–46,75) 39,90 (34,19–46,03) tidak

Plasenta 20,83 (16,93–24,36) 20,36 (17,62–23,84) 21.00 (15.11–26.36) tidak

MT (ng/ml)
serum ibu 3.13 (2.46–4.01) 3.16 (2.43–3.55) 3,09 (2,56–4,21) tidak

serum tali pusat 35,14 (30,54–42,48) 34.03 (30.63–41.28) 36,63 (29,91–42,64) tidak

Plasenta 178.5 (148.2–442.0) 174.6 (156.1–251.0) 197,8 (143,8–271,6) tidak

1Hasilnya
disajikan sebagai median dan rentang interkuartil 25-75%. non-perokok
2Perbedaan
diuji antara perokok dan
oleh Mann Whitneykamu-uji dan dianggap signifikan padap<0,05.

3.4. Asosiasi antara Enzim Antioksidan, MT dan Elemen

3.4.1. Asosiasi Cd dan Pb dengan Unsur Lain

Cd dan Pb berhubungan positif pada semua matriks yang diteliti (darah tali pusat: r Spearman =
0,41,p<0,001; darah ibu : r = 0,25,p=0,03; plasenta (hanya pada perokok): r = 0,37,p=0,03). Pb
berhubungan positif dengan Mn (r = 0,26,p=0,026) dalam darah tali pusat, Cu dalam serum ibu (r = 0,30,
p=0,009) dan dengan Fe dalam serum tali pusat (r = 0,35,p=0,002). Di plasenta, Cd berhubungan positif
dengan Cu (r = 0,34,p=0,003), sedangkan Pb berasosiasi positif dengan Zn (r = 0,29,p=0,012).
Biomolekul2020,10, 892 9 dari 18

3.4.2. Asosiasi antara Enzim Antioksidan dan MT

GPx dalam plasma ibu menunjukkan hubungan positif yang signifikan dengan GPx dalam plasma
tali pusat (Spearman r = 0,55,p<0,001), serta SOD dalam plasma ibu dengan SOD dalam plasma tali pusat
(r = 0,50,p<0,001). MT dalam serum ibu secara signifikan terkait dengan MT plasenta (r = 0,41, p<0,001).
GPx berhubungan positif dengan SOD pada kedua plasma tali pusat (r = 0,25,p=0,037) dan plasenta (r =
0,38,p=0,001). MT plasenta berhubungan positif dengan SOD plasenta (r = 0,55, p<0,001 dan GPx (r =
0,34,p=0,003).

3.4.3. Asosiasi Cd dan Pb dengan SOD, GPx dan MT

Cd dalam darah ibu berhubungan negatif dengan GPx dalam plasma ibu (β =0,07 [−0,13, 0,002],p=
0,044) setelah disesuaikan dengan usia dan tingkat pendidikan. Demikian pula, Pb plasenta
berhubungan negatif dengan SOD di plasenta setelah penyesuaian status merokok, usia, dan pendidikan
(β = 0,06 [−0,11, 0,01],p=0,019). Namun, hanya sejumlah kecil variabilitas GPx dan SOD yang dijelaskan
dalam model ini (R . yang disesuaikan2nilai 0,06 dan 0,10, masing-masing).

3.4.4. Identifikasi Elemen dengan Dampak Terkuat pada SOD, GPx dan MT

Menurut analisis SDA (Tabel S4), Zn dan Fe dalam serum ibu, Mn dalam darah ibu dan Pb
plasenta diidentifikasi sebagai elemen yang paling kuat terkait dengan SOD dalam plasma ibu. SOD
dalam plasma tali pusat paling kuat terkait dengan Mn dalam darah ibu, Cd dalam darah tali pusat,
dan Mn dan Zn plasenta. Untuk SOD baik dalam plasma ibu dan plasma tali pusat, hasilnya tidak
meyakinkan sehubungan dengan arah asosiasi. SOD di plasenta paling kuat terkait dengan serum
tali pusat Cu dan Zn, Se dan Fe plasenta, di mana hubungan dengan Zn dan Se plasenta adalah
positif dan hubungan dengan serum Cu dan Fe plasenta negatif.
Analisis SDA menunjukkan Fe dalam serum tali pusat sebagai hubungan negatif, dan Se dalam serum ibu
dan tali pusat dan plasenta sebagai elemen yang paling kuat berhubungan secara positif dengan GPx dalam
plasma ibu. GPx dalam plasma tali pusat paling kuat terkait dengan serum tali pusat Cu dan Zn, Se dan Fe
plasenta (hubungan positif untuk keempat elemen), sedangkan GPx di plasenta paling kuat terkait dengan Mn
dalam darah ibu, Fe dalam serum ibu, dan Cd plasenta. dan Zn (hasil yang tidak meyakinkan sehubungan
dengan arah asosiasi).
Analisis SDA menunjukkan Pb dalam darah ibu, Cd dalam darah tali pusat, Fe dalam serum tali
pusat dan Mn plasenta sebagai elemen yang paling kuat terkait dengan MT dalam serum ibu. Arah
asosiasi tidak dapat ditentukan dari hasil SDA. Tingkat MT dalam serum tali pusat paling kuat
terkait dengan Zn dan Se dalam serum ibu (berhubungan positif) dan Cu dan Fe plasenta
(berhubungan negatif). MT plasenta paling kuat terkait dengan Fe dalam serum ibu dan Se, Fe, dan
Mn plasenta. Hanya asosiasi dengan Fe plasenta yang negatif, sedangkan tiga asosiasi lainnya
positif.

3.4.5. Beberapa Model Regresi

Mempertimbangkan secara bersamaan empat elemen yang ditemukan signifikan dari analisis SDA
sebelumnya dan prediktor usia, pendidikan (dan merokok) analisis regresi berganda mengungkapkan
hubungan yang signifikan dengan enzim antioksidan atau MT (Tabel3).
Biomolekul2020,10, 892 10 dari 18

Tabel 3.Hasil analisis regresi berganda. Setiap baris mewakili hasil dari satu model regresi berganda dengan empat elemen yang diidentifikasi dari analisis SDA, merokok, usia dan
pendidikan sebagai prediktor. Merokok dimasukkan sebagai prediktor hanya dalam model tanpa Cd sebagai prediktor.

β [Interval Keyakinan 95%]

Variabel tak bebas p Adj. R2
Mencegat Elemen 1 Elemen 2 Elemen 3 Elemen 4 Merokok Usia Pendidikan

Fe_MS Mn_MB Pb_PL Zn_MS

0,680 0,052 0,007 0,060
0.133 0,006 0,017 0,049
log(SOD_MP) [0.144, 1.216] [−0,210, 0,105] [−0,007, 0,021] [−0,214, 0,095] 0,081 0,09
[−0,022, 0,288] [−0,018, 0,006] [−0,036, 0,003] [−0,762, 0,861]
p=0,014 p=0,508 p=0.296 p=0,445
p=0,092 p=0,340 p=0,087 p=0,904
Cd_CB Mn_MB Mn_PL Zn_PL
1.527 0,001 0,015
2,742 0,010 0,002 0,010
log (SOD_CP) [0.865, 2.189] [−0,010, 0,012] [−0,132, 0,102] 0.624 <0,01
[−7.237, 1.753] [−0,021, 0,001] [−0,002, 0,006] [−0,066, 0,046]
p<0,001 p=0.851 p=0,799
p=0.227 p=0,085 p=0,433 p=0,716
Cu_CS Fe_PL Se_PL Zn_PL
5.175 0,082 0,012 0,012
2.013 0,017 0,007 0,024
log(SOD_PL+10) [3.489, 6.862] [−0,173, 0,338] [−0,034, 0,009] [−0,239, 0,263] <0,001 0,66
[−4,899, 0,874] [−0,020, -0,013] [0,000, 0,013] [−0,131, 0,082]
p<0,001 p=0,521 p=0.243 p=0,923
p=0.168 p<0,001 p=0,043 p=0,650
Fe_CS Se_MS Se_CS Se_PL
3.203 0,030 0,005 0,041
0,001 0,002 0,004 0,004
log(GPx_MP) [2.500, 3.905] [−0,188, 0,128] [−0,008, 0,018] [−0,194, 0,112] 0,099 0,08
[−0,036, 0,033] [−0,004, 0,008] [−0,007, 0,015] [0,000, 0,008]
p<0,001 p=0,705 p=0,473 p=0,596
p=0,944 p=0,526 p=0,479 p=0,057
Cd_PL Cu_CS Se_PL Zn_PL
2.353 0,002 0,028
0,003 2,726 0,004 0,029
log (GPx_CP) [1.645, 3.060] [−0,012, 0,008] [−0,137, 0,080] <0,001 0.24
[−0,011, 0,018] [1.361, 4.090] [0,001, 0,007] [−0,019, 0,078]
p<0,001 p=0,708 p=0,603
p=0.637 p<0,001 p=0,014 p=0,233
Cd_PL Fe_MS Mn_MB Zn_PL
2.374 0,003 0,036
0,006 0,016 0,006 0,082
log (GPx_PL) [1.468, 3.280] [−0,018, 0,012] [−0,128, 0,199] 0,253 0,03
[−0,028, 0,015] [−0,194, 0,163] [−0,021, 0,008] [0.014, 0.151]
p<0,001 p=0,702 p=0,666
p=0,550 p=0,863 p=0,371 p=0.019
Cd_CB Fe_CS Mn_PL Pb_MB
1.946 0,001 0,007
0,625 0,002 0,003 0,006
log (MT_MS+5) [1.610, 2.282] [−0,009, 0,007] [−0,092, 0,077] 0.382 <0,01
[−2.811, 4.061] [−0,028, 0,033] [0,000, 0,005] [−0,015, 0,003]
p<0,001 p=0.857 p=0,868
p=0,718 p=0,871 p=0,061 p=0.211
Cu_PL Fe_PL Se_MS Zn_MS
3.845 0,039 0,003 0,047
0,403 0,001 0,001 0,186
log (MT_CP) [3.213, 4.477] [−0,100, 0,179] [−0,010, 0,015] [−0,095, 0,189] 0,338 0,02
[−0,767, 0,038] [−0,003, 0,001] [−0,005, 0,007] [−0,628, 1.000]
p<0,001 p=0,575 p=0,654 p=0,512
p=0,031 p=0,164 p=0,752 p=0,650
Fe_MS Fe_PL Mn_PL Se_PL
4.895 0.117 - 0,009 0,076
0.212 0,004 0,004 0,003
log (MT_PL) [3.859, 5.931] [−0,092, 0,326] [−0,026, 0,009] [−0,127, 0,280] <0,001 0,23
[0,003, 0,422] [−0,007, 0,002] [−0,001, 0,009] [−0,002, 0,008]
p<0,001 p=0.268 p=0,325 p=0,455
p=0,047 p=0,002 p=0,149 p=0.259
Singkatan: GPx—glutathione peroxidase, SOD—superoxide dismutase, MT—metallothionein, —koefisien regresi berganda, CB—darah tali pusat, CP—plasma tali pusat, CS—serum tali pusat, MB—
darah ibu, MP—plasma ibu, MS—ibu serum, PL—plasenta. Merokok diberi kode 0 untuk bukan perokok dan 1 untuk perokok; pendidikan diberi kode 0 untuk sekolah dasar dan menengah dan 1
untuk gelar universitas.
Biomolekul2020,10, 892 11 dari 18

Nilai SOD plasenta yang lebih tinggi secara signifikan terkait dengan nilai Se plasenta yang lebih tinggi (p
=0,043) dan nilai Fe plasenta yang lebih rendah (p<0,001). Dua elemen lain yang ditunjukkan oleh analisis SDA,
serum tali pusat Cu dan Zn plasenta, bukanlah prediktor yang signifikan secara statistik dalam model regresi
berganda. Jumlah variabilitas nilai SOD plasenta yang dijelaskan oleh prediktor regresi berganda relatif tinggi,
67% (modelp<0,001, R . yang disesuaikan2= 0,67), sebagian besar karena hubungan negatif yang signifikan
antara Fe dan SOD di plasenta. Di sisi lain, aktivitas SOD dalam plasma ibu dan tali pusat tidak terkait secara
signifikan dengan salah satu prediktor yang dipertimbangkan.
Prediktor dari model SDA untuk aktivitas GPx dalam plasma tali pusat adalah serum tali pusat Cu dan Zn
plasenta, Se dan Fe. Model regresi berganda mengungkapkan bahwa nilai GPx yang lebih tinggi dalam plasma
tali pusat secara signifikan terkait dengan nilai Se plasenta yang lebih tinggi.p=0,014) dan serum tali pusat Cu (
p<0,001), sedangkan hubungan dengan Zn dan Cd plasenta tidak mencapai signifikansi statistik. Prediktor yang
disertakan menjelaskan 24% variasi dalam nilai GPx plasma tali pusat (modelp<0,001). Nilai aktivitas GPx
plasenta yang lebih tinggi secara signifikan terkait dengan Zn plasenta yang lebih tinggi (p=0,019), sedangkan
hubungan dengan Cd plasenta, Mn dalam darah ibu, dan Fe dalam serum ibu tidak signifikan secara statistik
dalam model regresi berganda. Selanjutnya, hanya 3% variasi GPx plasenta yang dijelaskan dalam model dan
model tidak mencapai signifikansi statistik. Tak satu pun dari prediktor dari model SDA untuk GPx dalam
plasma ibu (serum tali pusat Cu dan Zn plasenta, Cd dan Se) secara signifikan terkait dengan GPx dalam model
regresi berganda.
Selain Cd dalam darah tali pusat dan Pb dalam darah ibu, model untuk MT ibu termasuk Fe dalam serum
tali pusat dan Mn plasenta. Namun, ketika variabel-variabel ini dimasukkan ke dalam model regresi berganda
dengan usia ibu dan pendidikan sebagai pembaur, tidak satupun dari variabel-variabel ini secara signifikan
terkait dengan MT. Nilai MT yang lebih tinggi dalam serum tali pusat dikaitkan dengan nilai Cu plasenta yang
lebih rendah (p=0,031), sedangkan hubungan dengan Zn dan Se dalam serum ibu dan Fe plasenta tidak
signifikan secara statistik dalam model regresi berganda. Selain itu, hanya sejumlah kecil variasi MT serum tali
pusat yang dijelaskan dalam model (2%; R . yang disesuaikan2= 0,02) dan model tidak signifikan secara
statistik. Model regresi berganda untuk MT di plasenta termasuk Fe dalam serum ibu dan Se, Fe dan Mn
plasenta. Nilai MT yang lebih tinggi dalam model ini terkait dengan nilai Fe yang lebih tinggi dalam serum ibu (
p=0,047) dan nilai Fe plasenta yang lebih rendah (p=0,002). Asosiasi MT dengan Se dan Mn di plasenta tidak
signifikan secara statistik. Prediktor yang disertakan menjelaskan 23% variabilitas MT plasenta (model)p=0,001,
R . yang disesuaikan2= 0,23).

4. Diskusi

Merokok berkontribusi pada peningkatan produksi ROS dan peningkatan paparan ibu dan janinnya terhadap
berbagai bahan kimia beracun, termasuk elemen jejak beracun. Di antara yang paling melimpah adalah Cd dan Pb
dengan potensi toksik, genotoksik dan karsinogenik yang terbukti. Kedua unsur tersebut memiliki waktu paruh yang
panjang di dalam tubuh, tingkat penyerapannya sekitar 10-20 kali lebih tinggi melalui inhalasi dibandingkan dengan
penyerapan gastrointestinal, dan banyak efek kesehatan yang merugikan di hampir semua organ dalam tubuh.7,34,
35].
Kami mempelajari efek merokok tembakau ibu aktif dan paparan terkait Cd dan Pb pada enzim
antioksidan dan MT di kompartemen ibu dan bayi dengan mempertimbangkan efek elemen toksik yang
dipelajari pada tingkat elemen esensial (Cu, Fe, Mn, Se dan Zn) dan peran mereka dalam pertahanan
antioksidan di unit ibu-plasenta-janin. Hasil kami menunjukkan bahwa efek Cd atau Pb pada enzim
antioksidan dan MT dalam sampel biologis ibu dan janin setelah mengontrol prediktor lain dalam
penelitian kami tidak signifikan secara statistik, yang dibahas lebih lanjut secara rinci dalam teks.

Dalam penelitian ini, wanita pascamelahirkan yang merokok memiliki kadar Cd dalam darah dan plasenta yang
lebih tinggi dibandingkan dengan bukan perokok, dan kebiasaan merokok tidak berpengaruh pada kadar Cd pada
bayi baru lahir karena diharapkan transportasi Cd plasenta terbatas (Tabel S3). Hasil ini menguatkan temuan kami
sebelumnya dalam studi tentang paparan Cd dari asap rokok pada wanita postpartum yang sehat [25,36,37]. Dalam
penelitian ini, kadar Cd dalam darah tali pusat bayi baru lahir adalah 4% dan 9% dari kadar pada perokok dan
Biomolekul2020,10, 892 12 dari 18

ibu yang tidak merokok, masing-masing. Pada populasi penelitian lain, persentase ini bervariasi dari 10% hingga 79%
(ditinjau dalam [24,38–42]). Seperti yang diharapkan dari hasil penelitian lain [39,43,44], sebagian besar Cd yang
diserap terakumulasi di plasenta, terutama pada perokok (Tabel S3).
Hasil kami menentang penelitian sebelumnya yang menemukan bahwa Cd terkait merokok di plasenta
meningkatkan ekspresi MT plasenta.43,44], tetapi sejalan dengan penelitian kami sebelumnya [23]. Perbedaan dapat
ditugaskan terutama untuk Cd plasenta 5-10 kali lebih tinggi daripada peserta kami, dan metode kuantifikasi MT
plasenta yang berbeda. ELISA adalah metode pilihan dalam penelitian ini, Western blot dalam penelitian Ronco et al. [
43], Kippler dkk. [39] dan Phuapittayalert dkk. [42]. Hubungan positif MT plasenta dengan Cd makanan dari ibu tidak
merokok dengan rata-rata Cd plasenta 130µg/kg [39] dan 35µg/kg [42] Cd plasenta pada ibu-ibu ini dari Bangladesh (n
=44) dan Thailand (n=14) adalah 5-17 kali lebih tinggi dari tingkat rata-rata yang diukur pada ibu dalam penelitian
kami (7,50µg/kg, Tabel S3) dan tinggi dibandingkan dengan data literatur [45]. Perbedaan Cd plasenta yang rendah
namun signifikan antara ibu perokok dan tidak merokok yang terlihat di sini jelas terlalu rendah untuk menghasilkan
perubahan yang terlihat pada tingkat MT, baik dengan induksi MT di plasenta atau redistribusi kompleks Cd-MT yang
sudah terbentuk. pada hati atau ginjal ibu. Perpindahan Cd dari ibu ke bayi baru lahir dibatasi dengan mengikat MT di
plasenta, tetapi reduksi parsial dan transportasi ke bayi baru lahir ini telah disarankan untuk diatur juga oleh
mekanisme molekuler lain termasuk DMT1, ZIP14, ZnT2, CaT1, megalin, hanya untuk menyebutkan beberapa [46–49].
Cd yang tidak terikat dapat menyebabkan efek toksik sambil mengganggu enzim dan fungsi membran yang
bergantung pada Zn dan Cu.49,50]. Bersamaan dengan fakta bahwa Cd gagal meningkatkan kadar MT plasenta ibu
dalam penelitian kami, kami juga gagal untuk melihat adanya hambatan dalam pasokan Zn untuk bayi baru lahir yang
disebabkan oleh pengikatan pada MT yang diinduksi Cd, menguatkan laporan sebelumnya [39,40].

Sejalan dengan laporan penulis lain [34,41], hasil kami (Tabel S3) mengkonfirmasi perjalanan Pb melalui plasenta
yang diusulkan terjadi oleh difusi pasif [51]. Meskipun pada populasi lain kadar Pb dalam sel darah merah atau darah
tali pusat berkisar 50-100% dari pada ibu.24,38,41,52], menurut hasil kami, Pb darah tali pusat adalah 69% dari darah
ibu. Hasil ini menunjukkan plasenta sebagai penghalang penting, tetapi agak buruk untuk transfer Pb dari ibu ke bayi
baru lahir.53] memungkinkan tingkat Pb ibu yang lebih tinggi daripada Cd untuk mencapai bayi baru lahir [54]. Pb
diukur dalam darah tali pusat bayi kami yang baru lahir (hingga 7,68µg / L) berada di bawah tingkat kekhawatiran
yang ditentukan saat ini untuk efek pada perkembangan saraf 12µg/L (batas kepercayaan bawah persentil ke-95 dari
dosis patokan 1% risiko ekstra, BMDL01; EFSA 2010). Oleh karena itu, kami dapat berasumsi bahwa bayi baru lahir
dalam penelitian kami tidak terpapar kadar Pb kritis setidaknya dalam kandungan.

Pb plasenta menunjukkan perbedaan yang lebih nyata antara perokok dan bukan perokok dibandingkan Cd
(Tabel S3), tetapi dalam analisis multivariat (Tabel3) Pb tidak dikonfirmasi sebagai prediktor signifikan kadar MT,
berbeda dengan Cu dan Fe. Karena Fe adalah penginduksi stres oksidatif yang terkenal [55–57], dan MT disebutkan
sebelumnya untuk berpartisipasi dalam pemulungan radikal bebas [56], kami menyarankan bahwa asosiasi yang
ditemukan di sini mencerminkan metabolisme radikal bebas di plasenta. Hubungan antara MT dan Cu esensial dapat
ditujukan pada partisipasi timbal balik MT dan enzim antioksidan SOD (dengan Cu sebagai kofaktor) yang disebutkan
sebelumnya dalam menjaga keseimbangan oksidatif. Co-ekspresi MT dan Cu,Zn-SOD telah dilaporkan sebelumnya
dalam ragi [58]. Berlawanan dengan temuan kami, pemberian Pb pada tikus terbukti menghasilkan produksi MT [59]
mengikuti mekanisme ion Zn substitusi Pb di MT dan ion Zn bebas yang mendorong sintesis MT baru [60].

Metallothionein, selain peran utamanya dalam penyimpanan elemen esensial dan fungsi transportasi,
juga memberikan peran defensif terhadap radikal bebas.50,56,61]. Hasil kami dari surplus besar MT di tali
pusat dibandingkan dengan serum ibu mendukung kebutuhan bayi baru lahir untuk Zn dan Cu dan molekul
pemulung radikal bebas karena bayi baru lahir tidak memiliki mekanisme antioksidan yang berkembang
sepenuhnya. Namun, harus ditekankan bahwa kadar MT dalam serum tali pusat bayi baru lahir kami tidak
terkait dengan kadar ibu atau plasenta. Jadi, kami berhipotesis bahwa kadar MT tali pusat mencerminkan baik
MT yang diangkut dari serum ibu dan plasenta, dan MT yang disintesis pada bayi baru lahir. Ekspresi MT
terbukti lebih awal pada hati janin tikus [62]. Enzim MT dan antioksidan memiliki peran antioksidan umum
yang dikonfirmasi di sini melalui hubungan positif kadar MT dengan aktivitas enzim SOD di
Biomolekul2020,10, 892 13 dari 18

plasenta. Merokok sebagai satu-satunya faktor (Tabel2) atau dengan faktor biologis dan lingkungan
lainnya (misalnya, usia ibu, pendidikan) tidak berdampak pada tingkat MT (data tidak ditampilkan),
berbeda dengan laporan peneliti lain [24,43,63]. Temuan tentang induksi MT pada darah ibu dan tali
pusat dan plasenta ibu perokok dapat dikaitkan dengan peningkatan produksi radikal bebas dari logam
dan bahan kimia pemicu radikal bebas lainnya dari asap rokok.
Telah disarankan bahwa merokok merusak homeostasis elemen penting, meskipun hasil yang tidak konsisten
telah dilaporkan.13,19,23,25,36,64,65]. Merokok dalam penelitian kami berkontribusi terhadap penurunan Fe dalam
serum dan plasenta ibu, Se dalam serum tali pusat dan plasenta, dan Zn dalam plasenta bila dibandingkan dengan
kontrol yang tidak merokok (Tabel S3). Hal ini sejalan dengan temuan bahwa perokok mungkin memiliki tingkat
antioksidan dan elemen esensial yang lebih rendah daripada non-perokok sebagai akibat dari penurunan asupan
makanan atau penipisan nutrisi antioksidan yang beredar karena paparan asap tembakau kronis.66,67]. Peningkatan
kebutuhan unsur-unsur esensial selama embriogenesis, pertumbuhan dan perkembangan janin sering
mengakibatkan penurunan kadarnya dalam sirkulasi ibu, terutama jika asupannya melalui makanan kurang. Sebagian
besar Fe dalam sirkulasi ibu digunakan untuk memperluas massa eritrosit, memenuhi kebutuhan Fe janin dan
mengkompensasi Fe karena kehilangan darah saat melahirkan. Oleh karena itu, penurunan kadar Fe dalam sirkulasi
ibu selama kehamilan sering terjadi dan juga dikenal sebagai anemia fisiologis kehamilan. Penurunan kadar Fe dalam
plasenta perokok dibandingkan dengan ibu yang tidak merokok (Tabel S3) juga telah ditemukan dalam penelitian
kami sebelumnya [25]. Hal ini mungkin berhubungan dengan peningkatan kadar Cd dan Pb dalam plasenta perokok
melalui kompetisi untuk mengikat protein pengangkut yang sama, misalnya pengangkut logam divalen 1 (DMT1).
Salah satu mekanisme tidak langsung yang mungkin dari toksisitas janin yang diinduksi Cd adalah peningkatan
pengikatan Zn dan Cu ke MT di plasenta yang menyebabkan berkurangnya transfer elemen penting ke janin.29,44,49].
Kami tidak menemukan bukti untuk mendukung teori ini karena Cd dalam plasenta tidak menunjukkan hubungan
yang signifikan dengan Zn atau Cu dalam darah tali pusat/serum, berbeda dengan temuan oleh Kippler et al. [39] dan
Kantola dkk. [64]. Hubungan terbalik antara Cd dengan Zn dan Cu telah diduga sebagai akibat dari penurunan
regulasi Zn yang diinduksi Cd (dalam plasenta dan darah ibu) dan pengangkut Cu (dalam darah ibu) yang ditemukan
pada hewan pengerat.47,68]. Namun, kami mengukur peningkatan kadar Cu plasenta dengan peningkatan akumulasi
Cd di plasenta, yang mungkin melibatkan MT [50]. Dengan mengasingkan Cu, MT menghambat keterlibatannya dalam
reaksi redoks [50]. Sejalan dengan hasil yang dilaporkan oleh Tekin et al. [40], kami tidak menemukan hubungan
antara kadar Cd dan Zn di plasenta.

Saat mempertimbangkan paparan simultan elemen terpilih dalam matriks yang diukur, hasilnya menunjukkan
tidak ada pengaruh signifikan Cd atau Pb pada variabilitas SOD dan GPx (Tabel3). Hasil untuk SOD plasenta
menunjukkan pengaruh kuat dari penurunan Fe dan peningkatan Se plasenta. Disarankan bahwa, dalam kondisi
anemia defisiensi Fe, peningkatan aktivitas SOD dapat menjadi faktor kompensasi untuk peningkatan stres oksidatif
karena pemendekan rentang hidup sel darah merah dan peningkatan kerentanan terhadap hemolisis.69]. Hasil untuk
GPx dalam plasma tali pusat menunjukkan Se plasenta yang lebih tinggi dan serum Cu tali pusat sebagai prediktor
yang signifikan dalam model regresi berganda. Hubungan positif yang diperoleh antara Se dan GPx diharapkan
karena Se hadir di situs aktif GPx dan perubahan konsentrasinya berpengaruh pada aktivitas GPx. Akumulasi Cd
plasenta pada perokok dapat membentuk kompleks inert biologis dengan Se plasenta, seperti yang disarankan dalam
model eksperimental [70], membatasi transfer Se ke janin dan, karenanya, menurunkan aktivitas GPx janin (serum tali
pusat). Seperti disebutkan di atas, kami menemukan hubungan positif antara Cd dan Cu plasenta. Peningkatan Cu
dapat berkontribusi pada peningkatan radikal hidroksil yang memulai peroksidasi lipid.18]. GPx dapat secara efektif
mengurangi spesies reaktif oleh GSH. Oleh karena itu, peningkatan Cu dapat secara tidak langsung berkontribusi
pada aktivasi GPx, seperti yang ditunjukkan dalam penelitian kami.

Telah dikemukakan bahwa rangkaian reaksi rantai radikal bebas dalam organisme perokok berkontribusi
terhadap gangguan keseimbangan dinamis antara oksidasi dan antioksidan dan penipisan kapasitas
antioksidan yang mengakibatkan penurunan aktivitas eritrosit rata-rata SOD, GPx dan katalase (CAT) pada
perokok. vs. bukan perokok [71]. Merokok aktif selama kehamilan menghabiskan potensi antioksidan dalam
plasma ibu dan tali pusat yang berkontribusi terhadap gangguan keseimbangan antara oksigen dan
Biomolekul2020,10, 892 14 dari 18

metabolisme nitrogen [12–14]. SOD dan GPx eritrosit yang lebih tinggi pada ibu perokok pada trimester ketiga
kehamilan (n=28) dengan GPx lebih rendah pada bayi mereka yang baru lahir [72] dan GPx serum yang lebih tinggi
pada ibu perokok (n=14) dan bayi mereka yang berusia tujuh hari tanpa perbedaan SOD serum pada hari ketujuh
postpartum [73,74] diamati bila dibandingkan dengan kontrol non-merokok. Dalam penelitian ini, aktivitas SOD secara
signifikan lebih rendah pada plasma ibu dan tali pusat tetapi secara signifikan lebih tinggi pada plasenta perokok jika
dibandingkan dengan kontrol yang tidak merokok (Tabel2). Penurunan SOD dalam plasma ibu dan tali pusat dan
peningkatan plasenta ini paralel dengan penurunan Zn dalam darah ibu dan peningkatan Zn dalam plasenta (Tabel
S3) pada perokok dibandingkan dengan bukan perokok. Pengaruh Cd atau Pb terhadap variabilitas SOD tidak
signifikan. Perbedaan antara hasil penulis lain dan hasil kami dapat disebabkan oleh waktu perekrutan yang berbeda
untuk populasi penelitian, serta matriks yang berbeda yang digunakan untuk analisis aktivitas enzim. Kami berasumsi
bahwa peningkatan stres oksidatif karena ibu yang merokok aktif berkontribusi pada penghambatan aktivitas SOD
dalam plasma. Akumulasi radikal superoksida yang dihasilkan kemudian menginduksi ekspresi SOD yang diamati
sebagai aktivitas SOD yang lebih tinggi di plasenta ibu perokok. Karena itu, aktivitas SOD plasenta yang lebih tinggi
dapat mewakili respons adaptif terhadap produksi radikal superoksida yang lebih tinggi. Aktivitas SOD yang lebih
tinggi menghasilkan tingkat hidrogen peroksida yang lebih tinggi yang harus dinetralkan secara efisien oleh GPx dan
katalase. Dengan demikian, peningkatan SOD bersama dengan peningkatan GPx akan berkontribusi pada
perlindungan sistem foeto-plasenta terhadap toksisitas ROS [75,76]. Namun, kami tidak menemukan perbedaan yang
signifikan dalam aktivitas GPx dalam matriks yang dianalisis antara kelompok (Tabel2). Ekspresi berlebih dari SOD
dapat membuat peka, daripada melindungi sel dari stres oksidatif dan berkontribusi pada kerusakan oksidatif DNA,
protein, dan lipid.77]. Gangguan keseimbangan antara enzim antioksidan mungkin memiliki peran penting untuk
meningkatkan kerentanan keturunan terhadap stres oksidatif.

5. Kesimpulan

Kami menemukan SOD yang secara signifikan lebih rendah pada plasma ibu dan tali pusat,
SOD yang lebih tinggi pada plasenta perokok dibandingkan dengan peserta yang tidak merokok,
sedangkan GPx dan MT tidak berbeda antara kelompok studi. Meskipun merokok aktif selama
kehamilan berkontribusi pada Cd dan Pb plasenta yang lebih tinggi, kontribusi mereka terhadap
variabilitas SOD, GPx atau MT setelah kontrol untuk usia ibu, merokok, pendidikan dan paparan
bersama elemen lain tidak signifikan. Namun, gangguan keseimbangan dalam pertahanan
antioksidan yang diamati dalam kondisi tingkat paparan Cd dan Pb yang relatif rendah hingga
sedang dapat berkontribusi pada peningkatan kerentanan keturunan terhadap stres oksidatif dan
risiko perkembangan penyakit di kemudian hari.

Bahan Tambahan:Berikut ini tersedia secara online dihttp://www.mdpi.com/2218-273X/10/6/892/s1, Tabel S1. Batas
deteksi (LOD) untuk kuantifikasi logam dalam darah manusia dan hasil analisis bahan referensi standar/bersertifikat
yang digunakan untuk kontrol kualitas, Tabel S2. Batas deteksi (LOD) untuk kuantifikasi logam dalam plasenta
manusia dan hasil analisis bahan referensi standar/bersertifikat yang digunakan untuk kontrol kualitas, Tabel S3.
Konsentrasi unsur-unsur yang diukur dalam darah dan serum ibu/tali pusat, dan plasenta yang dikelompokkan
menurut kebiasaan merokok ibu, Tabel S4. Hasil analisis diskriminan jarang.

Kontribusi Penulis:Konseptualisasi: MP, JJ, AP, ML; metodologi: JJ, MP, AP, ML, KB-Č.; penyidikan: AP, ML, BTL,
T.Ž.S., KB-Č., AS, TO, NB, AJ, IBK; validasi: JJ, AS, UNTUK; resmi
analisis: JK; sumber: IM, JJ, L.Š., SS, TM; tulisan—draf asli: AP, ML, JK; tulisan—review dan editing: MP, JJ, IBK, BTL,
ML, JK, AP; visualisasi: JK, ML, AP; pengawasan: JJ, MP, AP, ML; administrasi proyek: MP, JJ; akuisisi pendanaan: JJ,
MP Semua penulis telah membaca dan menyetujui versi naskah yang diterbitkan.

Pendanaan:Studi ini didanai oleh Kroasia Science Foundation selama proyek penelitian “Penilaian Paparan
Harian terhadap Logam dan Kerentanan Individu Ibu sebagai Faktor Asal Mula Perkembangan Kesehatan dan
Penyakit, METALORIGIN” (hibah HRZZ-IP-2016-06-1998).
Ucapan terima kasih:Penulis berterima kasih kepada semua peserta studi dan tim personel terampil yang
berpartisipasi dalam institusi yang berkolaborasi. Kami juga berterima kasih atas bantuan teknis yang terampil dari
Snježana Mataušić, Vesna Triva, Krešimir Neki dan Mladen Komesar di laboratorium analitik internal.
Biomolekul2020,10, 892 15 dari 18

Konflik kepentingan:Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan. Para penyandang dana tidak memiliki peran dalam
desain penelitian; dalam pengumpulan, analisis, atau interpretasi data; dalam penulisan naskah, atau dalam keputusan untuk
mempublikasikan hasilnya.

Referensi
1. Barker, DJP Asal-usul teori asal-usul perkembangan.J.Magang. Med.2007,261, 412–417. [CrossRef]
2. Rodrsayaguez-Rodrsayaguez, P.; Ramiro-Cortijo, D.; Reyes-Hernsebuahndez, CG; LHaipez de Pablo, AL; Carmen
Gonzosebuahlez, M.; Arribas, SM Implikasi stres oksidatif dalam pemrograman janin penyakit kardiovaskular.
Depan. Fisiol.2018,9, 602. [CrossRef]
3. Thompson, LP; Al-Hasan, Y. Dampak stres oksidatif dalam pemrograman janin.J. Kehamilan2012,2012, 582748. [
CrossRef]
4. SEBUAHvila, JGO; Echeverri, saya.; de Plata, CA; Castillo, A. Dampak stres oksidatif selama kehamilan pada pola
epigenetik janin dan asal awal penyakit vaskular.nutrisi Putaran.2015,73, 12–21. [CrossRef]
5. Lange, S.; Probst, C.; Rehm, J.; Popova, S. Prevalensi nasional, regional, dan global merokok selama
kehamilan pada populasi umum: Tinjauan sistematis dan meta-analisis.Bola Lancet. Kesehatan2018,6,
e769–e776. [CrossRef]
6. Pintican, D.; Poienar, AA; Strilciuc, S.; Mihu, D. Pengaruh ibu merokok pada vaskularisasi plasenta manusia:
Sebuah tinjauan sistematis.Taiwan J. Obstet. Ginekol.2019,58, 454–459. [CrossRef] [PubMed]
7. Piasek, M.; Michael, HC; Blanuša, M.; Kostial, K. Penilaian gangguan steroid dan konsentrasi logam di
plasenta manusia: Efek dari merokok. DiBuku Pegangan Merokok dan Kesehatan; Koskinen, CJ, Ed.; Nova
Science Publishers, Inc.: New York, NY, AS, 2011; hal.325–365.
8. Valavanidis, A.; Vlachogianni, T.; Fiotakis, K. Asap tembakau: Keterlibatan spesies oksigen reaktif dan radikal bebas
stabil dalam mekanisme kerusakan oksidatif, karsinogenesis, dan efek sinergis dengan partikel terhirup lainnya.
Int. J.Lingkungan. Res. Kesehatan masyarakat2009,6, 445–462. [CrossRef] [PubMed]
9. Myatt, L.; Kossenjans, W.; Sahay, R.; Eis, A.; Brockman, D. Stres oksidatif menyebabkan disfungsi vaskular di
plasenta.J. Ibu. janin. Med.2000,9, 79–82. [PubMed]
10. Pramuka, MH; Gordijn, SJ; Scherjon, SA; van Goor, H.; Hillebrands, JL Stres oksidatif dalam patologi plasenta.
Plasenta2018,69, 153-161. [CrossRef]
11. Bolisetty, S.; Naidoo, D.; Lui, K.; Koh, THHG; Watson, D.; Montgomery, R.; Whitehall, J. Postnatal perubahan
vitamin antioksidan plasma ibu dan bayi dan pengaruh merokok.Lengkungan. Dis. Anak Janin Neonatal
Ed.2002,86, F36–F40. [CrossRef]
12. Chelchowska, M.; Ambroszkiewicz, J.; Gajewska, J.; Laskowska-Klita, T.; Leibschang, J. Pengaruh merokok tembakau selama
kehamilan pada oksidan plasma dan status antioksidan pada ibu dan bayi baru lahir.eur. J. Obstesi. Ginekol. Reproduksi
Biol.2011,155, 132–136. [CrossRef]
13. Chełchowska, M.; Ambroszkiewicz, J.; Gajewska, J.; Mazur, J.; Lewandowski, L.; Reśko-Zchara, M.; Maciejewski,
TM Pengaruh paparan aktif asap tembakau pada status oksida nitrat wanita hamil.
Int. J.Lingkungan. Res. Kesehatan masyarakat2018,15, 2719. [CrossRef]
14. Aycicek, A.; Ipek, A. Ibu perokok aktif atau pasif menyebabkan stres oksidatif dalam darah tali pusat.eur. J.Pediatr.
2008,167, 81–85. [CrossRef] [PubMed]
15. Otoritas Keamanan Pangan Eropa (EFSA). Panel kontaminan dalam rantai makanan: Pendapat ilmiah tentang timbal
dalam makanan.EFSA J.2010,8, 1570. [CrossRef]
16. Otoritas Keamanan Pangan Eropa (EFSA). Paparan diet kadmium pada populasi Eropa.EFSA J. 2012,10, 2551.
[CrossRef]
17. Knopik, VS; Maccani, MA; Francazio, S.; McGeary, JE Epigenetika ibu merokok selama kehamilan dan efek
pada perkembangan anak.Dev. Psikopat.2012,24, 1377–1390. [CrossRef]
18. Jomova, K.; Valko, M. Kemajuan dalam stres oksidatif yang diinduksi logam dan penyakit manusia.Toksikologi2011,283, 65–
87. [CrossRef]
19. Milnerowicz, H.; ciskalska, M.; Dul, M. Efek pro-inflamasi logam pada orang dan hewan yang terpapar asap
tembakau.J. Elemen Jejak. Med. Biol.2015,29, 1–10. [CrossRef]
20. Terrin, G.; Canani, RB; di Chiara, M.; Pietravalle, A.; Alendri, V.; Conte, F.; de Curtis, M. Seng di awal kehidupan: Sebuah
elemen kunci dalam janin dan neonatus prematur.Nutrisi2015,7, 10427-10446. [CrossRef] [PubMed]
Biomolekul2020,10, 892 16 dari 18

21. Saboli, I.; Breljak, D.; karica, M.; Herak-Kramberger, CM Peran metallothionein dalam lalu lintas kadmium dan
toksisitas pada ginjal dan organ mamalia lainnya.BioMetals2010,23, 897–926. [CrossRef]
22. Sekovanić, A.; Jurasovic, J.; Piasek, M. Metallothionein 2A polimorfisme gen dalam kaitannya dengan penyakit dan
tingkat elemen pada manusia.Ah. Hai. Rada Toksikol.2020,71, 27–47.
23. Sekovanić, A.; Jurasovic, J.; Piasek, M.; Pašalić, D.; Ork, T.; Sulimanec Grgec, A.; Stasenko, S.; Branović akani,
K.; Jazbec, A. Metallothionein 2A polimorfisme gen dan elemen jejak pada pasangan ibu-bayi dalam
populasi Kroasia.J. Elemen Jejak. Med. Biol.2018,45, 163-170. [CrossRef] [PubMed]
24. Bizoń, A.; Milnerowicz-Nabzdyk, E.; Zalewska, M.; Zimmer, M.; Milnerowicz, H. Perubahan keseimbangan pro/antioksidan
pada wanita hamil yang merokok dan tidak merokok dengan pembatasan pertumbuhan intrauterin.Reproduksi racun.
2011,32, 360–367. [CrossRef] [PubMed]
25. Piasek, M.; Blanuša, M.; Kostial, K.; Laskey, JW Plasenta kadmium dan konsentrasi progesteron pada
perokok.Reproduksi racun.2001,15, 673–681. [CrossRef]
26. Higgins, ST; Heil, SH; Badger, GJ; Mongeon, JA; Salomo, LJ; McHale, L.; Bernstein, IM Verifikasi biokimia
status merokok pada wanita hamil dan baru saja melahirkan.Eks. klinik Psikofarmaka. 2007,15, 58–66. [
CrossRef]
27. Stragierowicz, J.; Mikołajewska, K.; Zawadzka-Stolarz, M.; Polańska, K.; Ligocka, D. Estimasi nilai cutoff
cotinine dalam urin dan air liur untuk wanita hamil di Polandia.BioMed Res. Int.2013,2013, 1–11. [CrossRef
]
28. Skroch, P.; Buchman, C.; Karin, M. Regulasi transkripsi gen metallothionein manusia dan ragi oleh ion
logam berat.Prog. klinik Biol. Res.1993,380, 113–128.
29. Ronco, AM; Garrido, F.; Llanos, MN Merokok secara spesifik menginduksi isoform metallothionein-2 pada plasenta
manusia pada saat aterm.Toksikologi2006,223, 46–53. [CrossRef]
30. Bradford, MM Sebuah metode cepat dan sensitif untuk kuantisasi jumlah mikrogram protein menggunakan
prinsip pengikatan protein-pewarna.anal Biokimia.1976,72, 248–254. [CrossRef]
31. ivkovi, T.; Tariba, B.; Pizent, A. Analisis multielemen plasma mani manusia dengan sel reaksi gurita ICP-MS.J.
Anal. Atom. Spektrom.2014,29, 2114–2126. [CrossRef]
32. Brčić Karačonji, I.; Skender, L.; Karači, V. Penentuan nikotin dan kotinin dalam urin dengan kromatografi gas
mikroekstraksi fase padat headspace dengan deteksi spektrometri massa.Akta Chim. Bahasa Slowakia2007,54,
74–78.
33. Clemmensen, L.; Tergesa-gesa, T.; Witten, D.; Ersboll, B. Analisis diskriminan jarang.teknometrik2011,53,
406–413. [CrossRef]
34. Badan Pengawasan Zat Beracun dan Penyakit ATSDR.Profil Toksikologi untuk Timbal; Departemen Kesehatan dan Layanan
Kemanusiaan, Layanan Kesehatan Masyarakat, Pusat Pengendalian Penyakit: Atlanta, GA, USA, 2019. Tersedia online:
https://www.atsdr.cdc.gov/toxfaqs/tf.asp?id=93&tid=22(diakses pada 9 Juni 2020).
35. Badan Registrasi Zat Beracun dan Penyakit ATSDR.Profil Toksikologi untuk Kadmium; Departemen Kesehatan dan
Layanan Kemanusiaan, Layanan Kesehatan Masyarakat, Pusat Pengendalian Penyakit: Atlanta, GA, USA, 2012.
Tersedia online:http://www.atsdr.cdc.gov/toxprofiles/tp.asp?id=48&tid=15(diakses pada 9 Juni 2020).
36. Stasenko, S.; Bradford, EM; Piasek, M.; Henson, MC; Varnai, VM; Jurasovic, J.; Kušec, V. Logam dalam plasenta
manusia: Fokus pada efek kadmium pada hormon steroid dan leptin.J. Aplikasi racun.2010,30, 242–253. [
CrossRef] [PubMed]
37. Piasek, M.; Jurasovic, J.; Sekovanić, A.; Brajenovi, N.; Brčić Karačonji, I.; Mikoli, A.; Sulimanec Grgec, A.; Stasenko, S.
Kadmium plasenta sebagai bioindikator non-invasif tambahan dari ibu yang merokok tembakau aktif.J.Toksikol.
Mengepung. Kesehatan Bagian A2016,79, 443–446. [CrossRef] [PubMed]
38. Gundacker, C.; Hengstschläger, M. Peran plasenta dalam paparan janin terhadap logam berat.Wien Med.
Wochenschr.2012,162, 201–206. [CrossRef] [PubMed]
39. Kippler, M.; Hoque, AMW; Raqib, R.; hrvik, H.; Ekstrom, EC; Vahter, M. Akumulasi kadmium dalam plasenta
manusia berinteraksi dengan pengangkutan zat gizi mikro ke janin.racun. Lett.2010,192, 162–168. [
CrossRef] [PubMed]
40. Tekin, D.; Kayaalto, Z.; Aliyev, V.; Söylemezoğlu, T. Efek polimorfisme metallothionein 2A pada akumulasi kadmium
plasenta: Apakah metallothionein merupakan faktor pengubah dalam transfer zat gizi mikro ke janin?J. Aplikasi
racun.2012,32, 270–275. [CrossRef]
Biomolekul2020,10, 892 17 dari 18

41. Sakamoto, M.; Yasutake, A.; Domingo, JL; Chan, HM; Kubota, M.; Murata, K. Hubungan antara konsentrasi elemen
jejak dalam jaringan korionik plasenta dan jaringan tali pusat: Penggunaan potensial sebagai indikator untuk
paparan prenatal.Mengepung. Int.2013,60, 106–111. [CrossRef]
42. Phuapittayalert, L.; Saenganantakarn, P.; Supanpaiboon, W.; Cheunchoojit, S.; Hipkaeo, W.; Sakulsak, N.
Peningkatan ekspresi CACNA1C dalam plasenta yang mengandung kadar Cd tinggi: Implikasi toksisitas Cd.
Mengepung. Sci. polusi. Res. Int.2016,23, 24592–24600. [CrossRef]
43. Ronco, AM; Arguello, G.; Suazo, M.; Llanos, MN Peningkatan kadar metallothionein dalam plasenta perokok.
Toksikologi2005,208, 133–139. [CrossRef]
44. Sorkun, HC; Bir, F.; Akbulut, M.; Divrikli, U.; Erken, G.; Demirhan, H.; Duzcan, E.; Elci, L.; Celik, saya.; Yozgatli,
U. Efek polusi udara dan merokok pada kadmium plasenta, konsentrasi seng dan ekspresi
metallothionein.Toksikologi2007,238, 15–22. [CrossRef]
45. Esteban-Vasallo, MD; Aragonés, N.; Pollan, M.; LHaipez-Abente, G.; Perez-Gomez, B. Mercury, kadmium, dan tingkat timbal
dalam plasenta manusia: Tinjauan sistematis.Mengepung. Perspektif Kesehatan.2012,120, 1369–1377. [CrossRef]

46. Brako, EE; Wilson, AK; Yunus, MM; Blum, CA; Cerny, EA; Williams, KL; Bhattacharyya, MH Jalur kadmium
selama kehamilan dan menyusui dalam kontrol versus metallothionein 1,2-knockout tikus. racun. Sci.2003
,71, 154-163. [CrossRef]
47. Nakamura, Y.; Ohba, K.; Ohta, H. Partisipasi pengangkut logam dalam pengangkutan kadmium dari ibu tikus ke
janin.J.Toksikol. Sci.2012,37, 1035–1044. [CrossRef]
48. Jacobo-Estrada, T.; Santoyo-Ssebuahnchez, M.; Théracun, F.; Barbier, O. Penanganan kadmium, toksisitas dan target
molekuler yang terlibat selama kehamilan: Pelajaran dari model eksperimental.Int. J. Mol. Sci.2017,18, 1590. [CrossRef] [
PubMed]
49. Espart, A.; Artime, S.; Tort-Nasarre, G.; Yara-VarHain, E. Paparan kadmium selama kehamilan dan menyusui:
dampak Materno-janin dan bayi baru lahir dari kompleks Cd(ii), dan Cd-metallothionein.Metalomik2018,10,
1359–1367. [CrossRef] [PubMed]
50. Nordberg, M.; Nordberg, GF Metallothioneins: Perkembangan dan Tinjauan Sejarah. DiIon Logam dalam Ilmu
Hayati; Sigel, A., Sigel, H., Sigel, RKO, Eds.; Royal Society of Chemistry: London, Inggris, 2009; Jilid 5, hlm. 1-29.

51. Goyer, RA Transplasental transpor timbal.Mengepung. Perspektif Kesehatan.1990,89, 101–105. [CrossRef] [PubMed]
52. Tekin, D.; Kayaalto, Z.; Söylemezoğlu, T. Efek polimorfisme metallothionein 2A pada metabolisme timbal: Apakah wanita hamil
dengan genotipe heterozigot untuk polimorfisme metallothionein 2A dan bayi mereka yang baru lahir berisiko memiliki kadar
timbal dalam darah yang lebih tinggi?Int. Lengkungan. Menempati Mengepung. Kesehatan2012,85, 631–637. [CrossRef] [
PubMed]
53. Skerfving, S.; Bergdahl, I. Memimpin. DiBuku Pegangan Toksikologi Logam, Logam Tertentu; Nordberg, GF,
Fowler, B., Nordberg, M., Eds.; Elsevier: Amsterdam, Belanda, 2015.
54. Vahter, M.; Berglund, M.; Akesson, A.; Tutupén, C. Logam dan kesehatan wanita.Mengepung. Res.2002,88, 145–155. [
CrossRef]
55. Ercal, N.; Gurer-Orhan, H.; Aykin-Burns, N. Logam beracun dan stres oksidatif Bagian I: Mekanisme yang terlibat dalam
kerusakan oksidatif yang diinduksi logam.Curr. Atas. Med. Kimia2001,1, 529–539. [CrossRef]
56. Babula, P.; Masarik, M.; Adam, V.; Eckschlager, T.; Stiborov, M.; Trnkova, L.; Skutkova, H.; Provaznik, saya.;
Hubalek, J.; Kizek, R. metallothioneins Mamalia: Properti dan fungsi.Metalomik2012,4, 739–750. [CrossRef]

57. Matovic, V.; Buha, A.; ukić-Ćosić, D.; Bulat, Z. Wawasan tentang stres oksidatif yang disebabkan oleh timbal dan/atau
kadmium dalam darah, hati, dan ginjal.Kimia Makanan. racun.2015,78, 130-140. [CrossRef]
58. Cari, MT; Galiazzo, F.; Ciriolo, MR; Rotilio, G. Bukti untuk co-regulasi Cu, Zn superoksida dismutase dan
ekspresi gen metallothionein dalam ragi melalui kontrol transkripsi oleh tembaga melalui faktor ACE 1.
FEBS Lett.1991,278, 263–266. [CrossRef]
59. Ikebuchi, H.; Teshima, R.; Suzuki, K; Terao, T.; Yamane, Y. Induksi simultan protein seperti Pb-
metallothionein dan Zn-thionein di hati tikus yang diberi timbal asetat.Biokimia. J.1986,233, 541–546. [
CrossRef] [PubMed]
60. Palacios,HAI.;Leiva-Presa,SEBUAH.;Atrian, S.; Lobinski, R. Sebuah studi tentang Pb (II) yang mengikat tikus rekombinan
Zn7-metallothionein 1 dan domainnya oleh ESI TOF MS.Talanta2007,72, 480–488. [CrossRef] [PubMed]
Biomolekul2020,10, 892 18 dari 18

61. Saboli, I.; Breljak, D.; Herak-Kramberger, CM; Ljubojevi, M. Kadmium dan metallothionein. DiEnsiklopedia
Metalloprotein; Musim Semi: New York, NY, AS, 2013; hal. 342–352.
62. Furukawa, S.; Usuda, K.; Abi, M.; Hayashi, S.; Ogawa, I. Ekspresi histologis metallothionein pada plasenta tikus yang
sedang berkembang.J.Toksikol. Patol.2008,21, 223–227. [CrossRef]
63. Kowalska, K.; Bizoń, A.; Zalewska, M.; Milnerowicz, H. Pengaruh faktor biologis dan lingkungan terhadap
konsentrasi metallothionein dalam darah.J. Elemen Jejak. Med. Biol.2015,29, 99-103. [CrossRef]
64. Kantola, M.; Purkunen, R.; Kroger, P.; Tooming, A.; Juravskaja, J.; Pasanen, M.; Saarikoski, S.; Vartiainen, T.
Akumulasi kadmium, seng, dan tembaga dalam darah ibu dan jaringan plasenta perkembangan:
Perbedaan antara Finlandia, Estonia, dan St Petersburg.Mengepung. Res.2000,83, 54–66. [CrossRef]
65. Pateva, IB; Kerling, EH; Reddy, M.; Chen, D.; Carlson, SE; Tancabelic, J. Pengaruh ibu merokok pada toko besi
baru lahir.klinik Res. Percobaan2015,1, 4–7. [CrossRef]
66. Alberg, AJ Pengaruh merokok pada konsentrasi sirkulasi mikronutrien antioksidan. Toksikologi2002,180,
121–137. [CrossRef]
67. Northrop-Clewes, CA; Thurnham, DI Pemantauan mikronutrien pada perokok rokok.klinik Chim. Akta 2007,
377, 14–38. [CrossRef] [PubMed]
68. Wang, H.; Wang, Y.; Bo, QL; Ji, YL; Liu, L.; Hu, YF; Chen, YH; Zhang, J.; Zhao, LL; Xu, DX Paparan kadmium ibu
mengurangi transportasi seng plasenta dan menginduksi pembatasan pertumbuhan janin pada tikus.
Reproduksi racun.2016,63, 174-182. [CrossRef]
69. Jansson, LT; Perkkiö, MV; Willis, WT; Refino, CJ; Dallman, PR Superoksida dismutase sel darah merah meningkat
pada anemia defisiensi besi.Acta Hematol.1985,74, 218–221. [CrossRef] [PubMed]
70. Jambi, L.; Nehru, B.; Bansal, MP Redoks modulasi protein pengikat selenium oleh paparan kadmium pada tikus.
mol. Biokimia Sel.1997,177, 169–175. [CrossRef] [PubMed]
71. Zhou, JF; Yan, XF; Guo, FZ; Cerah; Qian, ZJ; Ding, DY Efek merokok dan berhenti merokok pada konstituen
plasma dan aktivitas enzim yang berhubungan dengan stres oksidatif.Bioma. Mengepung. Sci.2000, 13,
44–55. [PubMed]
72. Aydogan, U.; Durmaz, E.; Erkan, CM; Eken, A.; Ulutas, oke; Kavuk, S.; Gursel, O.; Alanbay, saya.; Oke, C.; Kurekci, AE;
dkk. Efek merokok selama kehamilan pada kerusakan DNA dan konsekuensi tingkat ROS dalam darah ibu dan
bayi baru lahir.Ah. Hai. Rada Toksikol.2013,64, 35–46. [CrossRef]
73. Ermis, B.; Yildirim, A.; rs, R.; Tastekin, A.; Ozkan, B.; Akcay, F. Pengaruh merokok pada serum dan susu
malondialdehid, superoksida dismutase, glutathione peroksidase, dan tingkat potensi antioksidan pada ibu
pada hari ketujuh postpartum.Biol. jejak elemen. Res.2005,105, 27–36. [CrossRef]
74. Ermis, B.; Ors, R.; Yildirim, A.; Tastekin, A.; Kardas, F.; Akcay, F. Pengaruh merokok pada malondialdehid
serum ibu dan bayi, superoksida dismutase, dan tingkat glutathione peroksidase.Ann. klinik
Laboratorium. Sci.2004,34, 405–409.
75. Al-Gubory, KH; Fowler, PA; Garrel, C. Peran spesies oksigen reaktif seluler, stres oksidatif dan antioksidan
dalam hasil kehamilan.Int. J. Biokimia. Biol Sel.2010,42, 1634-1650. [CrossRef]
76. Qanungo, S.; Mukherjea, M. Profil ontogenik dari beberapa antioksidan dan peroksidasi lipid pada jaringan
plasenta dan janin manusia.mol. Biokimia Sel.2000,215, 11–19. [CrossRef]
77. Cerutti, P.; Astaga, R.; Oya, Y; Amstad, P. Peran pertahanan antioksidan seluler dalam karsinogenesis oksidan. Mengepung.
Perspektif Kesehatan.1994,102, 123–129. [PubMed]

©2020 oleh penulis. Penerima Lisensi MDPI, Basel, Swiss. Artikel ini adalah artikel akses
terbuka yang didistribusikan di bawah syarat dan ketentuan lisensi Creative Commons
Attribution (CC BY) (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).