Praktikum Genetika (Modul 5) – 2022
Pengenalan Mikropipet dan Pembuatan Larutan Isolasi DNA
Jessen Tanuwidjaja (10621042) , Azka (21122015)
 Sekolah Ilmu dan Teknologi Hayati, Institut Teknologi Bandung
Jalan Ganesha 10, Bandung 40132 Indonesia
e-mail: 10621042@mahasiswa.itb.ac.id
Abstrak
Mikroipet digunakan untuk mengambil larutan dengan presisi
pada volume yang kecil. Teknik pengambilan dengan
mikropipet terdapat 2 yaitu forward pipetting dan reverse
pipetting. Dari percobaan yang dilakukan, dipdapatkan nilai
akurasi rata-rata 82,1476% dan nilai presisi rata-rata
86,33741%. Percobaan ini dilakukan untuk mempersiapkan
praktikan melakukan penelitian dengan sampel yang kecil.
Adapun tujuan dari praktikum modul ini adalah menentukan
perbedaan teknik menggunakan mikropipet untuk mengambil
larutan viscous dan tidak viscous, menentukan nilai akurasi
dan presisi dari mikropipet, menentukan kelayakan guna
mikropipet, dan menentukan volume stock solution TAE 10x
dan volume pelarut ddH2O yang dibutuhkan untuk
pembuatan larutan TAE 10x.
Kata kunci
Akurasi, Presisi, Mikropipet
Pendahuluan
Mirkopipet adalah alat untuk mengambil larutan dengan
volume kecil. Mikropipet beroperasi dengan
perpindahan udara yang digerakkan oleh piston. Vakum
dihasilkan oleh perjalanan vertikal piston logam atau
keramik di dalam selongsong kedap udara. Sampel akan
memiliki volume yang sama dengan udara yang
dipindahkan.
Bagian-bagian mikropipet yang utama adalah plunger
button untuk mengambil dan mengeluarkan sampel, tip
ejector button untuk melepas tip setelah menggunakan
mikropipet atau jika ingin mengambil larutan yang
berbeda, volume adjustment dial untuk mengatur
volume yang dapat diambil oleh mikropipet, dan shaft
sebagai badannya [1].
Saat mengambil sampel dengan mikropipet, mikropipet
ditekan terlebih dahulu sebelum dimasukan kedalam
sampel. Teknik pengambilan sampel pada mikropipet
terdapat 2 yaitu forward pipetting dan reverse pipetting.
Forward pipetting digunakkan untuk larutan yang tidak
kental seperti air, digunakan stop 1 untuk mengambil
sampel dan stop 2 untuk mengeluarkannya. Reverse
pipetting digunakan untuk larutan yang kental seperti
gliserol, digunakan stop 2 untuk mengambil sampel dan
stop 1 untuk mengeluarkannya.
1
Seperti pengukuran pada umumnya, mikropipet juga
memiliki akurasi dan presisi. Akurasi menunjukan
ketepatan antara nilai pengukuran dengan nilai yang
diharapkan. Presisi ditunjukan jika kesalahan acak
pengukuran selalu sama, jika standar deviasi
pengukuran kecil maka semakin presisi. Untuk
menghitung akurasi mikropipet harus dicari terlebih
dahulu persentase errornya sedangkan untuk presisi
dihitung standar deviasi relatifnya, perhitungannya dapat
dilihat pada lampiran.
Stock solution adalah larutan yang konsentrasinya lebih
tinggi dan diketahui. Stock solution dapat diencerkan
untuk membuat working solution. Working solution
merupakan larutan yang diencerkan dan dapat langsung
dilakukan untuk melakukan analisis. Stock solution
dibuat untuk menghemat waktu pembuatan larutan,
menghemat ruang penyimpanan larutan, dan
meningkatkan akurasi saat pembuatan working solution
[2]
.
Pada percobaan modul ini dibuat larutan buffer TAE.
Buffer TAE adalah larutan penyangga yang
mengandung campuran basa Tris, asam asetat dan
EDTA [3]. Buffer TAE (Tris-acetate-EDTA) digunakan
sebagai buffer bergerak dan dalam gel agarosa. Basa
Tris berguna untuk menjaga pH larutan, asam asetat
untuk menstabilkan ion pada gel, dan EDTA untuk
menonaktifkan enzim sehingga DNA dan RNA tidak
terdegradasi [4].
Adapun tujuan dari praktikum modul ini adalah
menentukan perbedaan teknik menggunakan mikropipet
untuk mengambil larutan viscous dan tidak viscous,
menentukan nilai akurasi dan presisi dari mikropipet,
menentukan kelayakan guna mikropipet berdasarkan
analisis nilai akurasi, presisi dan ada atau tidaknya
kebocoran, dan menentukan volume stock solution TAE
10x dan volume pelarut ddH2O yang dibutuhkan untuk
pembuatan larutan TAE 10x.
Metode Kerja
Alat dan Bahan
Dalam percobaan kali ini digunakan alat yaitu
timbangan analitik, mikropipet 10μL, 100μL, dan
1000μL, microtube, gelas kimia 25mL dan 500 mL,
gelas ukur 100mL, dan thinwall PET 750mL. Bahan
Sekolah Ilmu dan Teknologi Hayati :::
2 Praktikum Genetika (Modul 5) - 2022
yang digunakan adalah akuades, gliseros, tips
mikropipet 10μL, 100μL, dan 1000μL, larutan TAE 10x,
dan ddH2O.
Cara Kerja
Pada forward pipetting, diambil dan dikeluarkan
kembali akuades dengan metode forward pipetting pada
stok akuades dalam gelas kimia. Pada reverse pipetting,
diambil dan dikeluarkan kembali gliserol dengan metode
reverse pipetting pada stok gliserol dalam gelas kimia
Pada uji kebocoran mikropipet, langkah pertama adalah
diatur volume mikropipet sehingga mencapai volume
maksimal, lalu tips diisi dengan akuades. Kemudian
mikropipet didiamkan dalam kondisi tegak selama 20
detik. Tips dimasukan kembali ke dalam air, jika
terdapat penurunan air maka ada kebocoran
Pada uji akurasi dan presisi, pertama diambil volume
yang diambil dengan mikropipet sesuai pembagian. Lalu
microtube kosong ditimbang dan dicatat beratnya.
Kemudian diambil akuades atau gliserol dengan
mikropipet dan dimasukan ke dalam microtube kosong
yang sudah ditimbang. Mikrotube yang terisi ditimbang
kembali dan dicatat beratnya. Selanjutnya dihitung
volume cairan yang diambil dan dilakukan pengulangan
pengukuran beberapa kali dan dihitung rata-rata volume
cairan. Dibandingkan rata-rata volume hasil
penimbangan dengan yang diharapkan serta dihitung
nilai E%, RSD, dan SD. Hasil yang didapat
dibandingkan dengan hasil literatur apakah mikropipet
presisi dan akurasi.
Pada pembuatan working solution TAE 1x, pertama
dilakukan perhitungan pengenceran larutan untuk
mendapatkan 500mL working solution TAE 1x dari
stock solution TAE 10x. Kemudian hasil hitung V stock
TAE 10x dilarutkan dengan hasil hitung pelarut ddH2O
pada thinwall PET.
Hasil dan Pembahasan
Pada percobaan modul ini pengamatan akurasi dan
presisi dari mikropipet digunakan 2 larutan yaitu
akuades dan gliserol. Dari hasil kompilasi data
angkatan, didapatkan nilai rata-rata E% 17,8523 dengan
rata-rata standar deviasi 17,7833. Nilai rata-rata RSD
adalah 13,66259 dengan rata-rata standar deviasi
13,96028. Nilai rata-rata presisi adalah 86,33741%
dengan rata-rata standar deviasi 13,96028. Nilai rata-rata
akurasi adalah 82,1476% dengan rata-rata standar
deviasi 17,783,29.
Pada kelompok 2 didapatkan nilai presisi terendah yaitu
57,80975%. Dapat dilihat saat perhitungan volume
sangat jauh perbedaannya walaupun rata-rata volumenya
mendekati volume yang diharapkan. Hal ini dapat
disebabkan karena terjadinya kesalahan saat
pengambilan dan pemindahan gliserol serta juga dapat
terjadi karena mikropipet tidak terkalibrasi dengan baik.
Pada hasil percobaan kelompok 9 didapatkan nilai
akurasi terendah yaitu 46,51731%. Dapat dilihat volume
setelah perhitungan jauh lebih tinggi dari volume yang
diharapkan. Hal ini dapat disebabkan karena
menggunakan teknik pipetting yang salah atau
pengaturan volume mikropipet yang salah.
Pada pembuatan larutan TAE 1x, diencerkan larutan
TAE 10x dengan ddH2O. Untuk membuat 100mL
larutan TAE 1x, dibutuhkan 10mL larutan TAE dan 90
mL ddH2O. Hasil tersebut dapat dicari dengan rumus
pengenceran yaitu M1V1 = M2V2 dengan M1 konsentrasi
TAE 10x, V1 volume TAE 10x, M2 konsentrasi TAE 1x,
dan V2 volume TAE 1x. Volume ddH2O dapat dicari
dengan mengurangi niali V2 dengan V1.
Kesimpulan dan Saran
Dari percobaan ini dapat disimpulkan bahwa, teknik
forward pipetting digunakan untuk larutan yang
tidak kental sedangkan teknik reverse pipetting
digunakan untuk larutan yang kental. Nilai akurasi
rata-rata dari mikropipet yang digunakan adalah
82,1476% dan nilai presisi rata-rata adalah
86,33741%. Berdasarkan analisis nilai akurasi,
presisi dan atau tidaknya terjadi kebocoran,
mikropipet masih layak guna. Dalam pembuatan
100mL larutan TAE 1x dibutuhkan campuran 10mL
larutan TAE 10x dan ddH20 sebanyak 90 mL.
Ucapan Terima Kasih
Terima kasih penulis ucapkan kepada Tuhan Yang
Maha Esa karena atas berkat-Nya jurnal ini dapat selesai
dengan baik. Terima kasih juga kepada asisten
praktikum yang telah memimbing dan membantu
keberlangsungan praktikum modul lima ini sehingga
dapat berjalan dengan baik.
Daftar Pustaka
[1] Henry, Kelli. 2016 "How to Use a Micropipette"
(PDF). mcdb.ucla.edu.
[2] Brody, J. R., & Kern, S. E. (2004). History and
principles of conductive media for standard DNA
electrophoresis. Analytical Biochemistry, 1, 1–13.
https://doi.org/10.1016/j.ab.2004.05.054
[3] Freiser, H., & Nancollas, G. H. (1987).
Compendium of Analytical Nomenclature
Praktikum Genetika (Modul 5) – 2022 3

(IUPAC Chemical Data) (p. 48). Wiley-

Blackwell.

[4] Sambrook, F., & Maniatis. (1989). Molecular

Cloning: A Laboratory Manual (3 Volume Set)
(2nd ed.). Cold Spring Harbor Laboratory Pr.

Sekolah Ilmu dan Teknologi Hayati :::

4 Praktikum Genetika (Modul 5) - 2022

Lampiran
Gambar 1. Kompilasi Data Mikropipet