NAMA : INTAN SOFIA MELATI

NIM : 10121057
PRODI : S1 FARMASI

RANGKUMAN ISOLASI DAN PERMURNIAN PROTEIN

✓ Isolasi Protein Ekstraseluler
1. Tidak perlu gangguan sel
2. Protein larut yang diekresikan dapat dikumpulkan dalam supernatant sel setelah
sentrifugasi
3. Protein yang terikat dalam membran dapat dilepaskan dari sel hanya dengan
menggunakan deterjen

✓ Isolasi Protein Intraseluler

1. Membutuhkan gangguan sel
- Lisis deterjen
- Lisis enzimatik
- Lisis osmotic
- Siklus beku-cair
- Ultrasonika
- Homogenisasi

2. Pemecahan Sel dan jaringan

Langka pertama dalam permurnian Sebagian besar protein adalah menghancurkan
jaringan dan sel secara terkendali dengan menggunakan prosedur mekanis yang lembut
yang disebut homogenistas membrane plasma dapat dipecah sehingga isi sel terlepas
empat prosedur diantaranya
1. Memecah sel dengan suara frekuensi
2. Digunakan deterjen ringan untuk membuat lubang pada membrane plasma
3. Memaksa sel melalui lubang kecil menggunakan tekanan tinggi
4. Sel oshear antara pendorong berputar yang pas dan dinding tebal bejana kaca
Ketika diterapkan dengan hati hati, homogenisasi membuat Sebagian organel yang
terikat tetap utuh.
✓ Pemurnian Protein
- Sentrifugasi diferensial
- Pengendapan garam diferensial
- Presipitasi pelarut diferensial
- Elektroforesis preparative
- Kromatografi
✓ Sentrifugasi Diferensial
- Pemisahan protein berdasarkan ukuran,massa dan kepadatannya ini adalah fungsi
ukuran protein dan kecepatan sentrifugasi itu memberikan pemisahan yang kasar. Ini
pada dasarnya pecahan. sentrifugasi yang dilakukan untuk memisahkan komponen-
komponen dalam suatu partikel berdasarkan ukuran dan densitasnya. Pengertian
sentrifugasi gradien densitas adalah metode yang disukai untuk memurnikan organel
subselular dan makromolekul.
✓ Dialisis
- proses perpindahan molekul terlarut dari suatu campuran larutan yang terjadi akibat
difusi pada membran semi-permeabel. Molekul terlarut yang oke berukuran lebih kecil
dari pori-pori membran tersebut dapat keluar, sedangkan molekul lainnya yang lebih
besar akan tertahan di dalam kantung membran.
✓ Kromotagrafi Kolom
- Pendekatan paling umum dan terbaik untuk memurnikan protein dalam jumlah besar
mencapai tingkat kemurnian tertinggi dan jumlah terbesar, membutuhkan usaha yang
rendah kemungkinan terendah untuk merusak produk protein, metode standar untuk
industri farmasi
✓ Teknik Kromatografi
1. Kromatografi Fitrasi Gel
o Pengucualian Ukuran AKA (Pengecualian Molekuler) Kromatografi
o Molekul dipisahkan menurut perbedaan ukuran saat mereka melewati polimer
hidrofilik
o Manik - Manik polimer terdiri atas dekstran yang saling terkaitan yang berpori
tinggi dan seragam (seperti keju swiss)
o Protein besar keluar lebih dahulu , Protein kecil keluar terakhir.
Filtrasi Gel Kromatografi memiliki cara untuk mengetahui di mana protein :
o Penanda berat molekul.
o Tambahkan target ke protein Anda misalnya jika Anda ingin memurnikan
enzim, tambahkan substrat ke tabung dan lihat di mana itu muncul.

2. Kromatografi Pertukaran Ion

o Prinsipnya adalah memisahkan berdasarkan muatan "adsorpsi".
o Daya penyelesaian tertinggi.
o Kapasitas pemuatan tertinggi.
o Penerapan yang luas.
o Paling sering teknik kromatografi untuk pemurnian protein.
Pertukaran ion Kromatografi y : Proses pertukaran ion didasarkan pada konsentrasi
ion lawan
3. Kromatografi Afinitas
o Pemisahan adsorptif di mana molekul yang akan dimurnikan secara khusus dan
secara reversibel mengikat (adsorpsi) ke zat pengikat komplementer (ligan)
yang tidak bergerak pada pendukung yang tidak larut (matriks atau resin).
 o Pemurnian adalah 1000X atau lebih baik dari satu langkah (tertinggi dari semua
metode).
o Metode yang disukai jika memungkinkan.

✓ Pemfokusan Isoelektrik
- Teknik elektroforesis dengan resolusi yang tinggi melalui penciptaan gradient pH.
Pemfokusan isoelektrik dilakukan dalam tegangan listrik yang tinggi agar molekul bisa
bergerak hingga titik nol muatannya.
✓ Elektroforesis Gel Poliakrilamida :
- Elektroforesis memisahkan protein berdasarkan ukurannya dengan menggunakan arus
listrik
✓ Elektroforesis Preparatif Elektroforesis Gel Poliakrilamida 2D (HALAMAN 2D) :
- Langkah 1 : Pemfokusan Isoelektrik (IEF)
- Langkah 2 : SDS-HALAMAN