Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

ILMU KELAUTANMaret 2015 Vol 20(1):45-51 ISSN 0853-7291

Potensi Jamur LautHypocreaceaesp. sebagai Enzim Agarase

menghidrolisis makroalgaGelidium latifolium

Mujizat Kawaroe1,3*, Dwi Setyaningsih2, Bertoka Fajar SP Negara1, Dina Agustinus3

1Departemen Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor,

2Jurusan Teknologi Industri Pertanian, Institut Pertanian Bogor,
3Pusat Penelitian Surfaktan dan Bioenergi, Institut Pertanian Bogor,Kampus Baranangsiang
Jl Raya Padjajaran No 1 Bogor 16144 Jawa Barat, Indonesia
Email: mujizat@ipb.ac.id ; mujizatk@gmail.com

Abstrak

Potensi Jamur Hypocreaceae sp. sebagai Enzim Agarase untuk menghidrolisis Makroalga Gelidium latifolium

Agarase dapat mendegradasi agar menjadi oligosakarida dan memiliki banyak manfaat untuk makanan, kosmetik, dan
lain-lain. Banyak spesies pendegradasi agar adalah organismelaut. Beberapa agarase telah diisolasi dari genera yang
berbeda dari mikroorganisme yang ditemukan di udara dan sedimen laut. Hypocreaceae sp. diisolasi dari air laut Pulau
Pari, Kepulauan Seribu, Jakarta, Indonesia. Berdasarkan dukungan gen 16S rDNA dari 500 basis pasangan, isolat A10
memiliki 99% kenyamanan dengan Hypocreaceae sp. Enzim agarase ekstraseluler dari Hypocreaceae sp. memiliki pH
dan suhu optimum pada 8 TrisHCl (0,148 μ.mL-1) dan 50°C (0,182 μ.mL-1), masing-masing. Enzim Agarase dari
Hypocreaceae sp. mencapai kondisi optimum pada aktivitas enzim tertinggi selama inkubasi dalam 24 jam (0,323 μ.mL-1).
Halaman SDS mengungkapkan bahwa ada dua band dari protein yang dihasilkan oleh agarase dari Hypocreaceae sp.
yang berada di berat molekul 39 kDa dan 44 kDa dan hidrolisis Gelidium latifolium diperoleh 0,88% etanol.

Kata kunci:enzim agarase, Hypocreaceae sp., hidrolisis, jamur, rDNA.

Abstrak

Agarase dapat terdegradasi menjadi oligosakarida dan memiliki banyak manfaat untuk makanan, kosmetik, dan
lain-lain. Banyak spesies agar-degrader adalah organisme laut. Beberapa agarase telah diisolasi dari berbagai
jenis mikroorganisme yang ditemukan di air laut dan sedimen laut. Hypocreaceae sp. diisolasi dari perairan laut
Kepulauan Pari, Kepulauan Seribu, Jakarta, Indonesia. Berdasarkan hasil identifikasi gen 16S rDNA dari 500
pasangan basa, isolat A10 memiliki kemiripan 99% dengan Hypocreaceae sp. Enzim agarase ekstraseluler dari
Hypocreaceae sp. memiliki pH dan suhu optimum pada 8 TrisHCl (0,148 µ.mL-1) dan 50 °C (0,182 µ.mL-1), masing-
masing. Enzim agarase Hypocreaceae sp. mencapai kondisi optimum pada aktivitas enzim tertinggi selama
inkubasi dalam 24 jam (0,323 µ.mL-1). Halaman SDS mengungkapkan bahwa ada dua pita protein yang dihasilkan
oleh agarase dari Hypocreaceae sp. yang berat molekulnya 39 kDa dan 44 kDa dan hidrolisis Gelidium latifolium
diperoleh etanol 0,88%.

Kata kunci: enzim agarase, Hypocreaceae sp., hidrolisis, jamur laut, rDNA

Perkenalan Gelidium spp. DanGracilaria spp(Kawaroeet al., 2015).

Agarase adalah salah satu enzim yang
diklasifikasikan dalam dua kategori yaitu α-agarase dan β-
agarase. Selama ini agarase telah diisolasi dari beberapa
genera mikroorganisme yang berasal dari air laut, sedimen
dan lingkungan laut (Fu dan Kim, 2010). Agarase dapat
digunakan dalam industri kosmetik dan makanan. Manfaat
lain dari agrase adalah dapat menghidrolisis agar menjadi
oligosakarida. Agar-agar banyak terdapat pada rumput laut
merah (Rhodophyceae) diantaranya
Komposisi agar yang ditemukan sekitar 44% untuk
Gelidium spp.dan 53% untukGracilaria spp.(Nguyen et
al.,2012). Selain kandungan agar-agar yang tinggi,
rumput laut memiliki kandungan karbohidrat berkisar
antara 70-72% (Nahaket al.,2011).
G. latifoliummemiliki manfaat sebagai agar-agar, bahan baku
kertas dan juga dapat digunakan sebagai bahan baku
bioetanol terdegradasi oleh asam (Kawaroeet al.,2014).
PenggunaanG.latifoliumsebagai bahan baku bioetanol

* ) Corresponding author ijms.undip.ac.id Diterima/Diterima : 01-10-2015

© Ilmu Kelautan, UNDIP DOI: 10.14710/ik.ijms.20.1.45-51 Disetujui/Diterima : 02-11-2015
H
ILMU KELAUTANMaret 2015 Vol 20(1):45-51
telah banyak memanfaatkan kandungan pati, selulosa
dan hemiselulosa, sedangkan komponen biomassa
seperti agar yang juga berpotensi untuk menghasilkan
bioetanol belum dimanfaatkan secara maksimal. Hal ini
disebabkan proses hidrolisis hanya menggunakan
enzim selulase yang hanya mampu menghidrolisis
fraksi selulosa. Agar berpotensi sebagai bahan baku
bioetanol karena komponen penyusunnya terdiri dari β-
D-galaktosa dan 3,6-anhidro-α-Lgalaktosa (Fu dan Kim,
2010). Keberhasilan konversiGelidium spp.sebagai
bahan baku bioetanol ditentukan oleh beberapa proses
yang berbeda yaitu hidrolisis dan fermentasi (Nahaket
al.,2011). Salah satu proses hidrolisis adalah dengan
menggunakan enzim yang dihasilkan oleh
mikroorganisme.
Beberapa penelitian telah dilakukan mengenai
enzim agarase yang dihasilkan oleh mikroorganisme
laut sepertiBacillus megaterium (Khambhatyet al.,
2008),Acinetobacter sp. (Lakshmikanthet al.,2006),
Pseudomonas sp. (Guptaet al.,2013) danAlteromonas
sp.(Wanget al.,2006). Sejauh ini, bakteri merupakan
satu-satunya mikroorganisme yang dipelajari dan
belum ada penelitian tentang jamur sebagai
penghasil agarase. Gosh and Gosh (1992)
menyebutkan bahwa jamur laut memiliki aktivitas
enzim yang baik dalam proses degradasi suatu
senyawa. Penelitian ini merupakan penelitian
pertama agarase yang dihasilkan oleh jamur laut
Hypocreaceae sp.untuk menghidrolisisG. latifolium.
Bahan dan metode
Jamur (A10) diisolasi dari Pulau Pari, Pulau
Seribu, Jakarta, Indonesia dan diperoleh dari
laboratorium mikrobiologi Pusat Penelitian Surfaktan
dan Bioenergi, Institut Pertanian Bogor, Indonesia.
Peremajaan isolat dilakukan dengan cara
menumbuhkan isolat jamur pada media Potato
dextrose agar (PDA). Selanjutnya cetakan diinkubasi
pada suhu 280C selama 7 hari (Pervezet al.,2012).
Waktu optimal untuk menghasilkan enzim
Waktu optimum untuk memproduksi enzim dimulai
dengan menentukan waktu penuangan inokulum. Waktu
inokulum ditentukan dengan mengkulturkan 2 loop isolat
dalam 15 mL media Potato dextrose (PDL) cair dan
diinkubasi selama 3-5 hari, kemudian dituangkan ke dalam
135 mL media starter. Kultur diinkubasi pada suhu 50HAIC
dalam pengaduk dengan kecepatan pengadukan 100 rpm.
Pengambilan sampel dilakukan selama 7 hari inkubasi
dengan rentang waktu 24 jam untuk mengukur jumlah
total spora. Selanjutnya dibuat kurva pertumbuhan isolat
untuk menentukan waktu terbaik penuangan inokulum
dalam produksi media.
Untuk menentukan waktu optimum
aktivitas enzim, 15 mL larutan dextrose kentang
46 Potensi Jamur Laut Hypocreaceae sp. sebagai Enzim Agarase (M. Kawaroe et al.)
media yang mengandung kultur sel diinokulasi ke dalam 135
mL produksi media. Waktu penuangan inokulum diamati pada
waktu pertumbuhan isolat secara eksponensial (fase
pertumbuhan logaritmik) yang telah diketahui dari kurva
pertumbuhan jamur. Pengambilan sampel dilakukan setiap hari
selama 4 hari selama inkubasi, kemudian supernatan diuji
aktivitas enzimnya dengan menggunakan metode Miller yang
dimodifikasi berdasarkan serapan maksimum larutan reagen
(Wood dan Saddler, 1988).
Aktivitas agarase dinyatakan dalam Satuan
Internasional μmL-1. Satu unit adalah jumlah enzim yang
dibutuhkan untuk memecah menjadi 1 μmol selulosa
menjadi gula pereduksi per menit dalam kondisi
pengujian. Kadar glukosa hasil hidrolisis agar dengan
nilai enzim agarase berdasarkan nilai absorbansi pada λ
550 nm.
Identifikasi Jamur
Identifikasi isolat jamur (A10) berdasarkan
gen rDNAITS1-5.8S-ITS2. Analisis DNA dilakukan
dengan menggunakan primary internal
transcribed spacer 1 (ITS1) 5'- CTT GGT CAT GTAA
TTA GAG GAA-3' dan internal transcribed spacer 4
(ITS4) 5'- TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC-3'. Metode
isolasi sesuai dengan petunjuk Kit Ekstraksi DNA.
Urutan gen 16S rDNA dibandingkan dengan
urutan nukleotida pada database dengan
menggunakan algoritma BLAST situs NCBI (Nursid
et al., 2011).
Produksi enzim agarase
Produksi enzim dilakukan berdasarkan
waktu produksi tertinggi pada kurva yang telah
diketahui sebelumnya. Media produksi enzim
diinkubasi dalam waterbath dengan suhu 50HaiC
dan kecepatan pengadukan 100 rpm. Lama
inkubasi ditentukan berdasarkan waktu produksi
tertinggi yang telah diperoleh sebelumnya. Media
produksi yang mengandung enzim disentrifugasi
dengan kecepatan 2.500 rpm dan suhu 4HAIC
selama 30 menit untuk memisahkan larutan
enzim atau supernatan dengan pelet. Supernatan
hasil sentrifugasi kemudian disimpan pada suhu
10HAIC sebagai ekstrak kasar enzim (Fu dan Kim,
2010; Kawaroeet al.,2014).
Sifat asam dan suhu
Sifat asam diketahui melalui pengukuran pH
optimum dengan menambahkan enzim sebanyak 0,2
mL yang direaksikan dengan 1,8 mL substrat.
Substrat dibuat dengan mencampurkan 1,8 g bubuk
rumput laut ke dalam buffer dengan berbagai kadar
pH 3-9 antara lain buffer asetat 0,05 M (3, 4, 5),
buffer fosfat sitrat 0,05 M (5, 6, 7) dan 0,05 M trisHCl
penyangga (7, 8, 9). Setiap enzim
ILMU KELAUTANMaret 2015 Vol 20(1):45-51
diinkubasi pada 28HaiC selama 30 menit. Aktivitas
enzim agarase diukur menurut prosedur pengujian
sebelumnya (Fu dan Kim, 2010).
Suhu optimum diukur dengan mereaksikan
0,2 mL enzim dengan 1,8 mL substrat dimana
substrat dibuat dengan mencampurkan 1,8 g
makroalgaG. latifoliumbubuk menjadi buffer pH
optimum. Enzim yang telah dicampur dengan
substrat selanjutnya diinkubasi pada suhu antara 28
HaiC sampai 90HaiC dengan 10HaiC selama 30 menit
waktu inkubasi. Aktivitas enzim agarase diukur
menurut prosedur pengujian sebelumnya (Fu dan
Kim, 2010).
Uji stabilitas enzim
Sebanyak 15% (b/v)G. latifoliumdikeringkan
dan selanjutnya ditambahkan akuades dalam
autoklaf selama 30 menit pada suhu 121HAIC dan
tekanan 1 atm. Selanjutnya setelah dingin
ditambahkan enzim pada buffer optimum dengan
konsentrasi 5%, dan inkubasi dilakukan pada suhu
optimum dengan mengukur rentang waktu setiap
24 jam selama 72 jam.
Penentuan berat molekul (halaman SDS)
Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel
elektroforesis (SDShalaman) agarase dilakukan
dalam gel 12,5% sesuai metode yang dijelaskan oleh
Sambrook dan Russel (2001) bersama dengan
penanda protein berat molekul standar.
Proses fermentasi
Fermentasi awal dilakukan dengan menyiapkan
90 mL hidrolisat dan hidrolisis dilakukan dengan
menambahkan enzim sebanyak 5% kemudian
diinkubasi pada suhu optimum enzim tersebut selama
24 jam (diambil dari hasil stabilitas enzim). Lebih-lebih
lagi, Saccharomyces cerevisiaeinokulum disiapkan
dalam 10 mL media YMGP (Yeast Malt Glucose Peptone)
dengan komposisi 5 gL-1, 5 gL-1, 5 gL- 1dan 40g.L-1
kemudian diinkubasi pada 30HAIC selama 24 jam
(Yanagisawaet al., 2011). Fermentasi dilakukan di
Gambar 1.Pohon filogenik berdasarkan analisis urutan 16S rDNA menunjukkan posisiHypocreaceaesp.dan A10
Potensi Jamur Laut Hypocreaceae sp. sebagai Enzim Agarase (M. Kawaroe et al.)
kondisi anaerob pada suhu 50HAIC. Hidrolisat yang
telah dihidrolisis kemudian ditambahkan ke
Saccharomyces cerevisiaeinokulum dan ditambah
dengan 0,5% urea dan 0,06% NPK dari gula sebagai
sumber nutrisi (Setyaningsihet al.,2012). Proses
fermentasi dilakukan selama 5 hari. Hasil fermentasi
didistilasi, kemudian hasil etanol diukur dengan
menggunakan density meter (Anton Paar).
Hasil dan Diskusi
Identifikasi jamur
Hasil identifikasi gen rDNA ITS1-5.8S-ITS2
A10 merupakan spesies dariHypocreaceae sp.
dengan derajat homologi 99% (Gambar 1.).
Strain jamur A10 hasil skrining agarase
dengan aktivitas tertinggi diisolasi dari perairan laut
Pulau Pari, Kepulauan Seribu, Jakarta. Morfologi
isolat berwarna hijau, tumbuh masif pada media
hidup dan memiliki bentuk konidia seperti batang
yang bercabang. Hasil identifikasi DNA menunjukkan
bahwa isolat tersebut memiliki kemiripan dengan
spesiesnya Hypocreaceae sp.yang merupakan
anggota kingdom fungi, divisi Ascomycota, kelas
Sordariomycetes, ordo Hypocreales, famili
Hypocreaceae. Ini adalah spesies yang hidup bebas
di lingkungan tanah.
Sifat asam dan suhu
Sifat asam dan suhu merupakan parameter yang
dapat mempengaruhi aktivitas enzim dalam proses
hidrolisis. Pengaruh pH dan suhu terhadap aktivitas
enzim agarase dapat dilihat pada Gambar 2 dan 3.
Gambar 2 menunjukkan aktivitas agarase meningkat
secara bertahap pada pH 3-5 asetat , kemudian
menurun cukup tajam pada pH 5-7 fosfat dan
meningkat kembali tajam pada pH 7-9 TrisHCl. Aktivitas
enzim agarase yang optimal ditemukan pada pH 8,0 Tris
HCl, yang menunjukkan bahwa enzim agarase
dihasilkan dari Hypocreaceae sp.memiliki aktivitas pada
kondisi pH basa.
47
ILMU KELAUTANMaret 2015 Vol 20(1):45-51

0,16

Aktivitas Enzim (m/mL)

0,15

0,14

0,13

0,12

0,11

0,1

3 4 5 asetat 5 fo 6 7 fo 7 tris 8 9
pH

Gambar 2. Pengaruh pH pada aktivitas agarase diisolasi dariHypocreaceaesp.

0,1

0,1
Aktivitas Enzim (m/mL)

0,1

0,1

0,1

0,1

0,1

0,1
20 30 40 50 60 70 80
Suhu (CHai)

Gambar 3. Pengaruh suhu pada aktivitas agarase diisolasi dariHypocreaceaesp

Beberapa penelitian menunjukkan bahwa diisolasi dariHypocreaceae sp.terjadi pada suhu

aktivitas agarase optimum mikroorganisme berada 50HAIC. Sehingga diperoleh aktivitas enzim
pada pH basa, 7,0 untukB. cereus(Suzukiet al.,2002) dan agarase maksimum pada suhu 50HAIC. Jonnadula
9.0 untuk Pseudomonas sp.(Guptaet al.,2013). dan Ghadi (2011) menyatakan rata-rata
Lakshmikanthet al. (2006) menyatakan bahwa rata-rata agarase mikroorganisme laut memiliki aktivitas agarase
akan memiliki aktivitas optimal pada pH berkisar antara 6,5 pada kisaran suhu optimum 30-50HAIC dengan
sampai 9,0. Enzim akan menunjukkan aktivitas katalitik interval 5HAIC. Aktivitas enzim agarase optimal
maksimum pada kisaran pH tertentu. Perubahan pH akan dihasilkan olehB. cereus(Suzukiet al.,2002),B.
mempengaruhi gugus amino dan karboksil protein enzim. Nilai megaterium(Khambhatiet al.,2008), dan
pH yang ekstrim dapat menyebabkan enzim mengalami Acinetobacter sp.(Lakshmikanthet al.,2006)
denaturasi yang menyebabkan enzim kehilangan aktivitas semuanya berada pada suhu antara 30-50HAIC.
biologisnya. Suhu dapat mempengaruhi aktivitas enzim karena
peningkatan suhu dapat mempercepat reaksi.
Pengaruh suhu terhadap aktivitas agarase dapat dilihat Penurunan aktivitas enzim yang terjadi diatas
pada Gambar 3. Gambar tersebut menunjukkan bahwa terjadi suhu 50HAIC disebabkan oleh terputusnya ikatan
penurunan aktivitas anzim secara perlahan pada suhu 20-40HAI sekunder enzim karena energi kinetik yang besar
C, kemudian meningkat sangat tajam pada 50HAIC dan dari molekul-molekul enzim, mengakibatkan
menurun pada 60HaiC. Aktivitas optimum enzim agarase hilangnya struktur sekunder dan tersier dari

48 Potensi Jamur Laut Hypocreaceae sp. sebagai Enzim Agarase (M. Kawaroe et al.)
ILMU KELAUTANMaret 2015 Vol 20(1):45-51

0,35

0,3

0,25
Aktivitas Enzim (m/mL)

0,2

0,15

0,1

0,05

0
0 24 36 48
Waktu (jam)

Gambar 4. Stabilitas aktivitas agarase diisolasi dariHypocreaceaesp.

Catatan: = 5%, = 10%, =15%, = 20%

120
80

50
44

35 39
25

20

Gambar 5. Halaman SDS agarase diisolasi dariHypocreaceaesp.

enzim. Panas juga dapat menyebabkan konsentrasi enzim yang menghasilkan aktivitas tertinggi
hilangnya sebagian besar ikatan yang kurang kuat adalah 10%. Waktu kestabilan kerja enzim agarase yang
pada struktur protein enzim. Sedangkan penurunan lebih cepat telah dipenuhi oleh substrat pada suhu 24thjam,
aktivitas enzim pada suhu dibawah 50HAIC sehingga aktivitas enzim akan menurun setelah 24 jamth
disebabkan rendahnya afinitas antara enzim dengan jam. Peningkatan konsentrasi enzim tidak mempengaruhi
substrat sehingga proses hidrolisis tidak berjalan aktivitas enzim yang dihasilkan. Hal ini disebabkan
sempurna dan aktivitas enzim menurun. konsentrasi enzim yang sangat tinggi tidak akan berarti
karena semua molekul substrat telah terhidrolisis oleh
Stabilitas enzim konsentrasi yang lebih rendah.

Pengukuran stabilitas enzim dilakukan untuk melihat Berat molekul (halaman SDS)
berapa lama enzim dapat bekerja secara optimal. Stabilitas enzim
paling tinggi pada suhu 24thjam dan mengalami penurunan lambat Penentuan berat molekul dilakukan
pada 48thdan 72tjam. Hal ini mengindikasikan bahwa enzim akan berdasarkan kurva standar SDS dengan
bekerja secara optimal untuk menghidrolisis suatu substrat pada persamaan y= -1,5311x + 2,2827, dimana y= log
suhu 24thjam (Gambar 4.). Terbaik penanda berat molekul (kDa), sedangkan x= relatif

Potensi Jamur Laut Hypocreaceae sp. sebagai Enzim Agarase (M. Kawaroe et al.) 49
ILMU KELAUTANMaret 2015 Vol 20(1):45-51
mobilitas protein (cm). Berat molekul ditentukan
dengan mengambil nilai anti-log y. Berdasarkan hasil
visualisasi pada gel diketahui terdapat dua pita yaitu
39 kDa dan 44 kDa (Gambar 5). Bobot molekul yang
diperoleh dalam penelitian ini tergolong rendah.
Beberapa penelitian menunjukkan bahwa enzim
agarase memiliki berat molekul yang rendah yaitu
39,5 kDa dariAlteromonas sp.(Wanget al.,2006), 33
kDa dariPseudoalteromonas antarctica, 32 kDa dari
Pseudomonas atlantica(Morriceet al.,1983), dan 20
kDa dariVibrio sp.(Aokiet al.,1990). Berdasarkan
klasifikasi berat molekul enzim agarase diketahui
bahwa agarase dihasilkan olehS.cucurbitacearum
termasuk dalam klasifikasi 2 (≤50 kDa) (Jonnadula
dan Ghadi, 2011).
Fermentasi etanol
Fermentasi dari G.latifolium itu tadi
dihidrolisis sebelumnya menggunakan enzim agarase
menunjukkan bahwa kadar etanol 0,88% dibandingkan
dengan hidrolisat asam (Gambar 6.). Etanol yang diperoleh
merupakan hasil proses destilasi, sehingga belum
dimurnikan. Hasil fermentasi menunjukkan kadar etanol
0,88% dan lebih tinggi dari hasil fermentasiG. latifolium
dengan menggunakan asam (1% v/v) yang menghasilkan
etanol hanya 0,50% (Kawaroeet al., 2015). Hal ini
menunjukkan bahwa penggunaan enzim agarase untuk
menghidrolisisG. latifolium.dalam proses produksi
bioetanol lebih efektif daripada asam. Dalam proses
hidrolisis, peran agarase adalah memecah molekul
sehingga posisi β-1,4 menghasilkan neoagarobiosa dan
diubah menjadi galaktosa. Untuk β bersifat sementara,
sedangkan untuk α akan pecah pada posisi α-1,3 sehingga
menghasilkan agarobiosa dan diubah menjadi
galaktopiranosa (Khambhatyet al.,2008; Fu dan Kim 2010;
Chiet al.,2012). Hasil hidrolisis enzimatik kemudian
difermentasi denganS.cerevisiae untuk menghasilkan
bioetanol. Nguyenet al. (2012) menyatakan
1.4
1.2
1
Bioetanol (%)
0,8
0,6
0,4
0,2
0 Produk Alam. VCH Publishers-Inc, New York.
Kontrol A10
perlakuan
Gambar 6.Konsentrasi Bioetanol
50 Potensi Jamur Laut Hypocreaceae sp. sebagai Enzim Agarase (M. Kawaroe et al.)
bahwa bioetanol dapat dihasilkan dari fermentasi
semua bahan yang mengandung gula. Proses
fermentasi adalah proses biologis di mana molekul
gula diubah menjadi energi seluler dan juga
menghasilkan etanol sebagai produk sampingan
dengan bantuan ragi. Fermentasi pada dasarnya
memecah satu molekul glukosa menjadi dua molekul
piruvat. Molekul asam piruvat yang dihasilkan akan
digunakan oleh ragi untuk menghasilkan energi.
Dalam kondisi anaerob, asam piruvat diubah
menjadi asetaldehida dan kemudian menjadi etanol
(Fardiaz, 1989). Proses fermentasi pada dasarnya
dipengaruhi oleh media, suhu, mikroorganisme,
nutrisi dan pH substrat (Saroso, 1998).
Kesimpulan
Kesimpulan dari penelitian ini adalah ekstrak
kasar enzim agarase dariHypocreaceae sp. isolat
memiliki aktivitas optimum pada pH 8,0 (Tris-HCl), suhu
50HAIC, dan stabilitas enzim pada suhu 24th
jam. Penambahan enzim agarase pada proses
fermentasi mampu menghasilkan bioetanolG.
latifoliumhingga 0,88% dan lebih tinggi dari
fermentasi menggunakan asam 0,50%.
.
Referensi
Aoki, T., T. Araki & M. Kitamikado. 1990. Pemurnian
dan karakterisasi novel β-agarase dari
Vibrio sp. AP-2. eur. J. Biochem. 187:461–
465. doi:10.1111/j.1432-1033.19
90.tb15326.x
Chi, WJ, YK Chang & SK Hong. 2012. Agar
degradasi oleh mikroorganisme dan enzim
pengurai agar.Aplikasi Mikrobiol.
Bioteknologi. 94:917–930. doi:10.1007/s002
53-012-402 3-2
Fardiaz, S. 1989. Institut Fisiologi Fermentasi.PAU
Pertanian Bogor, Bogor. [Bahasa Indonesia]
Fu, XT & SM Kim. 2010. Agarase: Tinjauan Mayor
Sumber, Kategori, Metode Pemurnian,
Karakteristik dan Aplikasi Enzim. Maret
Narkoba 8:200-218.doi: 10.3390/md8010200
Astaga, BK & A. Astaga. 1992. Degradasi
Selulosa oleh Fungal Cellullase. Dalam G.
Winkelmann (eds) Mikroba Degradasi
Gupta, V., N. Trivedi, M. Kumar, CRK Reddy & B.
Jha. 2013. Pemurnian dan karakterisasi
ekso-b-agarase dari bakteri laut endofit dan
potensi katalitiknya pada
ILMU KELAUTANMaret 2015 Vol 20(1):45-51
biokonversi polisakarida dinding sel alga
merah menjadi galaktan.Bioenergi
Biomassa. 49:290-298. doi:10.1016/j.biom
bioe.2012.12.027
Jonnadula, R. & SC Ghadi. 2011. Pemurnian dan
Karakterisasi β-agarase dari Bakteri
Pengurai Rumput Laut Microbulbifer sp.
Saring CMC-5.Bioteknologi. Bioproses Eng.
16:513-519. doi:10.1007/s12257-010-039 9-y
Kawaroe, M,, K. Rusmana & Nurafni. 2014.
Produksi Bioethanol dari Macroalgae
Gelidium sp. menggunakan Enzim Agarase
dari Bakteri Laut.Int J. Lingkungan.
Bioenergi. 9:243-251.
Kawaroe, M., A. Sunuddin, J. Hwangbo & A. Shaumi.
2015. Karakteristik dan Aktivitas Selulotik
Jamur Endofit Pada Makroalga (Sargassum
sp.,Gracilariasp.,Gelidiumsp., dan Caulerpa
sp.) dari habitat lamun di Pulau Pari,
Kepulauan Seribu, Jakarta.Int. J. Sci: Aplikasi
Dasar. Res. 22:149-160.
Kawaroe. M., DW Sari, J. Hwangbo & J. Santoso.
2015. Lama fermentasi optimum untuk
menghasilkan bioetanol dariGelidium latifolium
DanGracilaria verucosa. J.Eng. dan Tek.[Dalam
Tinjauan]
Khambhaty, Y., K. Mody & B. Jha. 2008. Pemurnian,
Karakterisasi dan Aplikasi Agarase
Ekstraseluler Novel dari LautBacillus
megaterium.Bioteknologi. Bioproses. Eng.
13:584-591.doi:10.1007/s1225700800263
Lakshmikanth, M., S. Manohar, Y. Souche & J.
Lalita. 2006. Agarase ekstraseluler LSL-1 yang
memproduksi neoagarobiose dari bakteri
tanah pencairan agar yang baru diisolasi,
Acinetobactersp. AG LSL-1.Dunia J. Microb.
Biot.22:1087-1094. doi:10.1007/s11274-0
06-9147-z
Morrice, LM, MW McLean, FB Williamson & WF
Panjang. 1983. Beta-agarase I dan II dari
Pseudomonas atlantica: Pemurnian dan
beberapa properti.eur. J. Biochem.135:553–
558.doi:10.1111/j.1432-1033.1983.tb076
88.x
Nahak, S., N. Gayatri, P. Itishree & RK Sahu. 2011.
Bioetanol dari Alga Laut: Solusi Masalah
Pemanasan Global.J.Appl. Mengepung. Biol.
Sains.1:74-80.
Potensi Jamur Laut Hypocreaceae sp. sebagai Enzim Agarase (M. Kawaroe et al.)
Nguyen, THM & VH Vu. 2012. Bioetanol
produksi dari biomassa ganggang laut:
prospek dan masalah.Lingkungan J.Vietnam.3:
25-29. doi:10.13141/jve.vol3.no1.pp25-29
Nursid, M,. E. Chasanah, Murwantoko & S.
Wahyuono. 2011. Penapisan kapang laut
penghasil senyawa sitotoksik dari beberapa
perairan di Indonesia.J.Pascapanen dan
Bioteknol. Kel. Peri. 6:45-56.
Pervez, MR, M. Musaddiq & PV Thakare. 2012. Di-
studi antimikroba vitro terisolasi
Myrotheciumspp mrp001 melawan patogen
manusia.Aust. J. Aplikasi Dasar. Sains.2:228-
236.
Sambrook, J. & DW Russell. 2001. Biasa Digunakan
Teknik Kloning Molekuler Lampiran 8.
Kloning Molekuler Vol. 3 (edisi ke-3). Cold
Spring Harbor Laboratory Press, New York.
Saroso, H. 1998. Pemanfaatan kulit pisang dengan
cara menangis untuk pembuatan alkohol.
Majalah Bistek 06: 20-28. [Bahasa Indonesia].
Setyaningsih, D., S. Windarwati, I. Khayati, N. Muna
& P. Hernowo P. 2012. Teknik hidrolisis asam
dan adaptasi khamir untuk meningkatkan
produksi bioetanol makroalga merah.Int.
J.Lingkungan. Bioenergi.3:98-110.
Suzuki, H., Y. Sawai, T. Suzuki & K. Kawai. 2002.
Pemurnian dan karakterisasi hidrolase α-
neoagarooligosakarida ekstraseluler dari
Basilsp. MK03.J. Biosci Bioeng 93:456-463.
doi:10.1016/S1389-1723(02) 80092-5
Wang, JX, HJ Mou, XL Jiang & H.Guan. 2006.
Karakterisasi novel β-agarase dari laut
Alteromonassp. SY37–12 dan produknya
yang merendahkan.Aplikasi Mikrobiol.
Bioteknologi. 71:833–839. doi:10.1007/s002
53-005-0207-3
Kayu, TM & JN Saddler. 1988 Meningkatkan
ketersediaan selulosa dalam bahan biomassa.
Dalam Wood WA, Kellogg ST (eds) Methods in
Enzymology. Pers Akademik, New York.
Yanagisawa, M., N. Kanami, A. Osamu & N. Kiyohiko.
2011. Produksi bioetanol konsentrasi tinggi
dari rumput laut yang mengandung
polisakarida yang mudah terhidrolisis.Proses
Biokimia.46:2111-2116. doi:10.1016/j. proc
bio.2011.08.001
51