Menyiapkan kertas kromatografi serta kromatograf sebanyak 3 buah
Memasukan eluen Asam Asetat 50%, Amonia-Methanol-Air (1:10:20),
NaCl 0,9% pada masing masing kromatograf
Memipet 5 µl 170TmCl₃ pada 6 kertas Kromatografi dan 2 Kertas
Elektroforesis pada bagian 0, diamkan selama 10 menit hingga kering
Memasukan kertas pada alat kromatograf dan lakukan penjenuhan Selma 10
menit, lakukan elusi sampai eluen naik ke titik batas kemudian angkat dan oven selama 20 menit pada suhu 40C
Memasukan kertas pada alat elektroforesis dan membasahi kertas dengan
larutan buffer tanpa mengenai titik yang telah dibasahi 170TmCl₃ , lakukan elektroforesis dengan tegangan 350 V selama 1 jam kemudian angkat dan masukan ke oven selama 20 menit dengan suhu 60C
Setelah kering dilakukan pencacahan menggunakan SCA dan kemudian
dilakukan perhitungan pada excel
Gambar 3.1 Diagram Alir Preparasi dan Penentuan KRK 170TmCl3
b) Variasi HA dalam pembuatan 170TmHA
Memipetkan NaCl 0,9% 850µl, NaHCO₃ 0,5N 100µl pada 3 buah tabung sampel yang telah diberikan HA sebanyak 2 mg.
Selanjutnya melakukan vortex selama 30 detik dengan kecepatan ½
maksimum, dan selanjutnya ditambahkan 170TmCl₃ 50 µl. Vortex kembali selama 30 detik dan dimasukan kedalam sentrifuge selama 5 menit dengan kecepatan 350rpm, kemudian cek pH, pH yang diharapkan 7
Jika pH dibawah 7 maka ditambahkan basa dan jika pH diatas 7 maka
ditambahkan asam dan dihitung volumenya.
Selanjutnya sampel diinkubasi selama 30 menit dengan kecepatan 1250 rpm.
Setelah itu disentrifuge selama 5 menit.
Setelah selesai volume larutan dibagi dua tanpa memisahkan endapannya.
Selanjutnya dicacah diSCA dan setelah selesai dipipetkan endapan pada kertas kromatografi dan elektroforesis sebanyak 5 µl.
Lakukan kromatografi dan elektroforesis selama waktu yang telah ditentukan
pada proses sebelumnya dan keringkan setelah selesai dan mulai mencacah di SCA. Lakukan hal yang sama pada variasi HA 4mg dan seterusnya
Gambar 3.2 Diagram alir penandaan 170TmHA variasi HA