Skripsi Lenisha Tantia

UJI SENSITIVITAS BAKTERI ASAM LAKTAT ASAL DADIH
TERHADAP BEBERAPA ANTIBIOTIK
Skripsi
Diajukan oleh :
Lenisha Tantia
1811201020
PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS ABDURRAB
PEKANBARU
2022
ii
iii
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL...............................................................................................i
LEMBAR PERSETUJUAN..................................................................................ii
LEMBAR PENGESAHAN..................................................................................iii
DAFTAR ISI..........................................................................................................iv
DAFTAR TABEL................................................................................................vii
DAFTAR GAMBAR..........................................................................................viii
DAFTAR LAMPIRAN.........................................................................................ix
LEMBAR PERNYATAAN...................................................................................x
KATA PENGANTAR...........................................................................................xi
DAFTAR RIWAYAT HIDUP...........................................................................xiii
ABSTRAK...........................................................................................................xiv
ABSTRACT...........................................................................................................xv
I. PENDAHULUAN..............................................................................................1
1.1 Latar Belakang..........................................................................................1
1.2 Perumusan Masalah...................................................................................2
1.3 Tujuan Penelitian.......................................................................................3
1.4 Manfaat Penelitian.....................................................................................3
1.4.1 Bagi Peneliti.....................................................................................3
1.4.2 Bagi Program Studi Pendidikan Dokter Universitas Abdurrab........3
1.4.3 Bagi Institusi Terkait........................................................................3
1.4.4 Bagi Masyarakat...............................................................................3
1.5 Orisinalitas Penelitian................................................................................4
II. TINJAUAN PUSTAKA....................................................................................5
2.1 Landasan Teori..........................................................................................5
2.1.1 Dadih................................................................................................5
2.1.2 Karakteristik dan Klasifikasi Bakteri Asam Laktat..........................5
2.1.3 Mekanisme Fermentasi.....................................................................7
2.1.4 Senyawa Metabolit dan Mekanisme Aksi Bakteri Asam Laktat
Sebagai Probiotik.............................................................................9
iv
v
2.1.5 Mekanisme Resistensi Bakteri Asam Laktat Terhadap Antibiotik 10

2.1.6 Mekanisme Resistensi Antibiotik Terhadap Bakteri Asam Laktat 13
2.1.6.1 Resistensi Intrinsik/Fenotif.................................................13
2.1.6.2 Resistensi Ekstrinsik/Genotif.............................................15
2.2 Kerangka Teori........................................................................................17
2.3 Kerangka Konsep....................................................................................17
2.4 Hipotesis Penelitian.................................................................................17
III. METODE PENELITIAN.............................................................................19
3.1 Jenis dan Rancangan Penelitian..............................................................19
3.2 Tempat dan waktu penelitian..................................................................20
3.2.1 Tempat Penelitian...........................................................................20
3.2.2 Waktu Penelitian............................................................................20
3.3 Variabel Penelitian dan Definisi Operasional.........................................21
3.4 Alat dan Bahan Penelitian.......................................................................21
3.4.1 Alat.................................................................................................21
3.4.2 Bahan..............................................................................................22
3.5 Cara penelitian.........................................................................................22
3.5.1 Peremajaan Isolat Bakteri Asam Laktat.........................................22
3.5.2 Identifikasi Bakteri Asam Laktat...................................................22
3.5.3 Pewarnaan Gram............................................................................22
3.5.4 Pembuatan Konsentrasi dari Beberapa Antibiotik.........................23
3.5.4.1 Ampisilin...........................................................................23
3.5.4.2 Eritromisin.........................................................................23
3.5.4.3 Gentamisin.........................................................................24
3.5.4.4 Kanamisin..........................................................................24
3.5.4.5 Klindamisin.......................................................................25
3.5.4.6 Kloramfenikol...................................................................25
3.5.4.7 Streptomisin.......................................................................26
3.5.4.8 Tetrasiklin..........................................................................26
3.5.4.9 Amoksisilin.......................................................................27
3.5.4.10 Siprofloksasin...................................................................27
v
vi
3.5.4.11 Sefadroksil........................................................................28
3.5.4.12 Sulfametoksazol-Trimetroprim........................................28
3.5.4.13 Sefiksim............................................................................29
3.5.4.14 Sefotaksim........................................................................30
3.5.4.15 Rifampisin........................................................................30
3.5.5 Uji Sensitivitas Bakteri Asam Laktat Terhadap Beberapa Antibiotik
......................................................................................................31
3.6 Analisis Data............................................................................................31
3.7 Etika Penelitian........................................................................................31
3.8 Alur Penelitian.........................................................................................32
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN......................................................................33
4.1 Hasil Penelitian........................................................................................33
4.2 Pembahasan.............................................................................................36
4.3 Keterbatasan Penelitian...........................................................................38
V. KESIMPULAN DAN SARAN.....................................................................39
5.1 Kesimpulan..............................................................................................39
5.2 Saran........................................................................................................39
DAFTAR PUSTAKA...........................................................................................42
vi
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Orisinalitas Penelitian................................................................................4

Tabel 2. Definisi Operasional................................................................................21
Tabel 3. Kategori Resistensi..................................................................................31
Tabel 4. Karakteristik Bakteri Asam Laktat..........................................................34
Tabel 5. Hasil Pengukuran Zona Hambat Beberapa Antibiotik pada ketiga isolat
BAL.........................................................................................................34
vii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Jalur Heterofermentatif dan Heterofermentatif....................................8

Gambar 2. Mekanisme Resistensi Antibiotik di BAL.........................................11
Gambar 3. Mekanisme Transfer Gen Horizontal Pada BAL...............................13
Gambar 4. Mekanisme Resistensi Antibiotik Intrinsik Pada Probiotik...............16
Gambar 5. Mekanisme Resistensi Antibiotik Ekstrinsik Pada Probiotik.............16
Gambar 6. Kerangka Teori...................................................................................17
Gambar 7. Kerangka Konsep...............................................................................17
Gambar 8. Rancangan Penelitian.........................................................................20
Gambar 9. Alur Penelitian...................................................................................32
Gambar 10. Isolat Tunggal Bakteri Asam Laktat..................................................33
Gambar 11. Uji Katalase Bakteri Asam Laktat......................................................33
Gambar 12. Pewarnaan Gram Bakteri Asam Laktat..............................................34
Gambar 13. Hasil Uji Sensitivitas BAL terhadap Beberapa Antibiotik pada
Medium MHA..................................................................................35
viii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Izin Peminjaman LaboratoriumError! Bookmark not defined.

Lampiran 2. Surat Izin Peminjaman Alat Laboratorium........................................49
Lampiran 3. Surat Izin Peminjaman Reagensia dan Media...................................50
Lampiran 4. Log Book Penelitian...........................................................................48
Lampiran 5. Komposisi dan Cara Pembuatan Medium.........................................57
Lampiran 6. Standart Mc Farland..........................................................................54
Lampiran 7. Proses Pengenceran Antibiotik..........................................................55
Lampiran 8. Tahapan Uji Sensitivitas....................................................................56
Lampiran 9. Hasil Uji Sensitivitas BAL Asal Dadih Terhadap Beberapa
Antibiotik..........................................................................................57
ix
LEMBAR PERNYATAAN
Yang bertanda tangan dibawah ini:

Nama : Lenisha Tantia
NIM : 18112010220
Fakultas : Kedokteran
Judul Penelitian : Uji Sensitivitas Bakteri Asam Laktat Terhadap Beberapa
Antibiotik
Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya yang
pernah diajukan untuk memperoleh kesarjanaan di suatu perguruan tinggi, dan
sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah
ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis dicantumkan
dan disebutkan dalam daftar Pustaka.
Pekanbaru, 13 Agustus 2022
Lenisha Tantia
1811201020
x
KATA PENGANTAR
Alhamdulillahirobbil’alamin, puji syukur kehadirat Allah SWT dengan

rahmat dan karunia-Nya sehingga penulis diberikan kemudahan dan kenikmatan
dalam menyelesaikan skripsi yang berjudul “Uji Sensitivitas Bakteri Asam Laktat
Terhadap Antibiotik” yang merupakan salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana kedokteran pada Program Studi Pendidikan Dokter di Fakultas
Kedokteran Universitas Abdurrab Pekanbaru.Dalam kesempatan kali ini, penulis
mengucapkan terimakasih yg sebesar besarnya kepada pihak yang telah banyak
membantu, yaitu:
1. Prof. Susi Endrini, S.Si, M.Sc, Ph.D selaku rektor Universitas Abdurrab
Pekanbaru.
2. Dr. dr. Syamsul Bahri Sp.OG selaku Dekan Fakultas Universitas Abdurrab
Pekanbaru.
3. dr. Uly Astuti, M.Biomed selaku Kaprodi Pendidikan Dokter Fakultas
Kedokteran Universitas Abdurrab Pekanbaru sekaligus pembimbing
akademik saya yang memberikan bimbingan serta arahannya selama
perkuliahan.
4. Ibu Eliya Mursyida, M.Si selaku dosen pembimbing yang telah
meluangkan waktunya selama ini untuk membimbing saya dalam
menyelesaikan skripsi, yang telah memberikan arahan dan masukan
dengan sabar dan memberi semangat hingga skripsi ini selesai.
5. dr. Olvaria Misfa, M.Biomed dan Bapak Muhammad Faisal, S.Si, M.Sc
selaku penguji yang memberikan saran dan kritikan untuk
menyempurnakan skripsi ini.
6. Seluruh dosen Program Studi Pendidikan Dokter Universitas Abdurrab
Pekanbaru yang telah mendidik dan memberi ilmu pengetahuan kepada
pembuatan skripsi ini.
7. Seluruh Staff Tata Usaha Program Studi Pendidikan Dokter Universitas
Abdurrab Pekanbaru yang telah memberikan bantuannya dalam
pembuatan skripsi ini.
xi
xii
8. Orang tua yang saya cintai dan yang sangat berharga dalam hidup peneliti,
ayahanda Sai’in dan ibunda Miswati A.Md.Keb (Almh) dan ibunda
Nurhasila dan saudara kandung yang peneliti adik Aden Natasha Aulia dan
Mifta Zahira senantiasa mendoakan, memberi semangat dan dukungan
moril maupun materi yang tiada habisnya hingga peneliti sampai ketahap
ini.
9. Kepada teman-teman satu bimbingan Endang Widiastuti, Nada Nadifah,
dan Agus Prabowo dan kepada sahabat-sahabat penulis Siti Sonya
Rahmatulhaq Hardiningrum dan Nadila yang telah membantu, mendukung
dan selalu ada saat suka dan duka dalam proses pembuatan skripsi ini.
Seluruh teman-teman Trachea (2018) yang telah bersama-sama menjalani
hari kuliah dan semua pihak-pihak yang tidak bisa penulis sebutkan satu
persatu yang telah membantu dalam penyelesaian skripsi ini.
Penulis menyadari bahwa dalam dalam penyusunan skripsi ini masih
banyak terdapat kekurangan dan kesalahan. Oleh karena itu penulis memohon
kritik dan saran agar skripsi ini dapat lebih baik lagi. Penulis mengharapkan
semoga penelitian ini akan memberikan manfaat yang baik serta dapat menambah
pengetahuan bagi para pembaca.
Pekanbaru,13 Agustus 2022
Peneliti
xii
DAFTAR RIWAYAT HIDUP
BIODATA
Nama : Lenisha Tantia
NIM : 1811201020
Tempat / Tanggal Lahir : Bangko Jaya, 8 Oktober 2000
Jenis Kelamin : Perempuan
Agama : Islam
Alamat : Bangko Jaya, Kecamatan Bangko Pusako,
Kabupaten Rokan Hilir, Riau
Nomor HP : 082283364797
Email : lenishatantia08@gmail.com
RIWAYAT PENDIDIKAN
SD : SDS KARYA BAKTI
SMP : MTS AL-FURQON
SMA : SMAS HARAPAN
SARJANA (S1) : Universitas Abdurrab
NAMA ORANG TUA
Ayah : Sai′in
Ibu : Miswati, Am.Keb (alm)
NAMA SAUDARA KANDUNG
Adik : Aden Natasha Aulia
Adik : Mifta Zahira
xiii
UJI SENSITIVITAS BAKTERI ASAM LAKTAT ASAL DADIH
TERHADAP BEBERAPA ANTIBIOTIK
Lenisha Tantia
ABSTRAK
Latar Belakang: Bakteri asam laktat diketahui mempunyai aktivitas antimikroba
yang dapat digunakan sebagai pengawet makanan, kultur fermentasi, dan pangan
probiotik. Probiotik merpakan mikroba yang apabila dikonsumsi dalam jumlah
cukup dapat memberikan manfaat bagi kesehatan pada manusia seperti
meningkatkan immunoglobulin spesifik, mengurangi permeabilitas usus, dan
dapat menormalkan mikroflora di usus. Hal ini dikarenakan probiotik dapat
menghambat bakteri patogen karena memproduksi asam organik, menurunkan pH
lingkungannya, dan mengsekresikan senyawa yang mampu menghambat mikroba
pada infeksi saluran cerna. Pada kasus infeksi bakteri pada saluran cerna
umumnya diatasi dengan mengkonsumsi antibiotik seperti ampisilin, eritromisin,
gentamisin, kanamisin, klindamisin, kloramfenikol, streptomisin, tetrasiklin,
amoksisilin, siprofloksasin, sefradroksil, sulfametoksazol-trimetroprim, sefiksim,
sefotaksim, rifampisin. Tetapi apabila penggunaan antibiotik tidak rasional akan
menyebabkan terjadinya resistensi. Oleh karena itu, dicari kandidat probiotik yang
berasal dari dadih yang mampu menghambat mikroba patogen.
Tujuan: Penelitian ini bertujuan mengetahui dan menganalisis sensitivitas bakteri
asam laktat (BAL) terhadap beberapa antibiotik.
Metode: Metode penelitian menggunakan post test-only with control group,
dengan menggunakan sampel isolat BAL asal dadih, penelitian diawali dengan
peremajaan isolat BAL, kemudian dilakukan pewarnaan Gram, uji katalase, dan
uji sensitivitas BAL terhadap beberapa antibiotik dengan metode difusi sumuran.
Selanjutnya, zona hambat yang terbentuk diukur dengan menggunakan jangka
sorong dan data dianalisis secara deskriptif.
Hasil : Isolat BAL asal dadih merupakan bakteri Gram positif yang berbentuk
coccobacil pada isolat BAL 1 dan isolat BAL 3, serta berbentuk bacil pada isolat
BAL 2. Uji katalase negatif pada ketiga isolat BAL. Uji sensitivitas menunjukkan
isolat BAL 1 sensitif terhadap antibiotik ampisilin, tetrasiklin, dan
sulfometoksazol-trimetroprim. Pada isolat BAL 2 sensitif terhadap antibiotik
eritromisin, tetrasiklin, dan siprofloksasin, sedangkan pada isolat BAL 3 tidak
terdapat antibiotik yang sensitif.
Kesimpulan : Pada isolat BAL 1 dan isolat BAL 2 terdapat beberapa antibiotik
yang sensitif sehingga dapat digunakan sebagai kandidat probiotik.
Kata Kunci: Bakteri Asam Laktat (BAL), sensitivitas, probiotik, antibiotik.
xiv
SENSITIVITY TEST OF DADIH ORIGIN LACTIC ACID BACTERIA TO
SOME ANTIBIOTIC
Lenisha Tantia
ABSTRACT
Background: Lactic acid bacteria are known to have antimicrobial activity that
can be used as food preservatives, fermentation cultures, and probiotic foods.
Probiotics are microbes that when consumed in sufficient quantities can provide
health benefits in humans such as increasing specific immunoglobulins, reducing
intestinal permeability, and normalizing intestinal microflora. This is because
probiotics can inhibit pathogenic bacteria because they produce organic acids,
lower the pH of the environment, and secrete compounds that can inhibit microbes
in gastrointestinal infections. In the case of bacterial infections of the
gastrointestinal tract, generally treated with antibiotics such as ampicillin,
erythromycin, gentamicin, kanamycin, clindamycin, chloramphenicol,
streptomycin, tetracycline, amoxicillin, ciprofloxacin, cefradroxil,
sulfamethoxazole-trimethoprim, cefixime, cefotaxime, rifampin. However,
irrational use of antibiotics will lead to resistance. Therefore, a candidate for
probiotics derived from curd which is able to inhibit pathogenic microbes is
sought.
Objective: This study aims to determine and analyze the sensitivity of lactic acid
bacteria (LAB) to several antibiotics.
Methods: The research method used a post-test-only with control group, using
LAB isolate samples from curd, the study began with rejuvenation of LAB
isolates, then Gram staining, catalase test, and LAB sensitivity test to several
antibiotics by well diffusion method were performed. Furthermore, the inhibition
zone formed was measured using a caliper and the data were analyzed
descriptively.
Results: LAB isolates from curd were Gram positive bacteria in the form of
coccobacil in LAB 1 isolates and LAB 3 isolates, and bacillus in LAB 2 isolates.
The catalase test was negative on the three LAB isolates. The sensitivity test
showed that LAB 1 isolate was sensitive to the antibiotics ampicillin, tetracycline,
and sulfometoxazole-trimethoprim. BAL 2 isolates were sensitive to
erythromycin, tetracycline, and ciprofloxacin antibiotics, while BAL 3 isolates
were not sensitive to antibiotics.
Conclusion: In the LAB 1 and 2 LAB isolates there are several sensitive
antibiotics so that they can be used as probiotic candidates.
Keywords: Lactic Acid Bacteria (LAB), sensitivity, probiotics, antibiotics.
I. PENDAHULUAN
I.1 Latar Belakang

Bakteri asam laktat merupakan kelompok bakteri Gram positif, berbentuk
bacil atau coccus, tidak berspora, dan bersifat anaerob (Quinto et al, 2014).
Bakteri asam laktat mampu hidup pada habitat yang cukup luas, seperti pada
saluran pencernaan hewan dan manusia, produk susu, produk fermentasi,
makanan kalengan, buah, dan juga sayuran tropis. Selain itu, BAL diketahui
mempunyai aktivitas antimikroba sehingga dapat digunakan sebagai pengawet
makanan, kultur fermentasi, dan pangan probiotik (Rahmiati dan Mumpuni,
2017). Bakteri asam laktat mampu memfermentasi gula atau karbohidrat untuk
memproduksi asam laktat dalam jumlah cukup besar. Beberapa genus BAL
diantaranya yaitu Lactobacillus, Streptococcus, Enterococcus, Pediococcus,
Tetragenococcus, Leunoconostoc, dan Lactococcus (Indah et al, 2014).
Menurut Food Agricultural Organization (FAO) dan World Health
Organization (WHO) (2002) dalam Fijan (2014), BAL diketahui memiliki
manfaat bagi kesehatan antara lain sebagai probiotik. Probiotik sendiri
didefinisikan sebagai mikroba hidup yang apabila mengkonsumsi makanan yang
mengandung probiotik dalam jumlah cukup dapat memberikan manfaat bagi
kesehatan pada manusia. Probiotik biasanya dapat dijumpai pada produk
fermentasi seperti yogurt, kefir, dadih, dan sebagainya. Kriteria probiotik yang
telah ditetapkan oleh FAO/WHO yaitu harus teridentifikasi fenotif dan genotif,
mampu bertahan pada kondisi asam lambung dan garam empedu pada
pencernaan, memberi keuntungan pada usus, menghasilkan aktivitas antimikroba
terhadap bakteri patogen, termasuk mikroba yang aman, tidak menghasilkan
toksin, bersifat tidak resisten terhadap antibiotik, dan bukan bakteri patogen.
Bakteri asam laktat sebagai probiotik mampu meningkatkan
immunoglobulin spesifik, mengurangi permeabilitas usus, dan dapat
menormalkan mikroflora di usus. Probiotik dilaporkan dapat mengendalikan
infeksi virus dan bakteri enterik, termasuk Rotavirus, Norovirus, Campylobacter,
Salmonella, Vibrio, Escherichia coli, dan Clostridium difficile terkait antibiotik
(Ray dan Bhunia, 2013). Probiotik dapat menghambat bakteri patogen karena
1
2
mampu memproduksi asam organik, menurunkan pH lingkungannya dan

mensekresikan senyawa yang mampu menghambat mikroba. Menurut penelitian
Yang et al (2019) BAL mampu mencegah terjadinya infeksi bakteri patogen pada
saluran cerna dan diare.
Menurut Sukakarya (2021), isolat BAL yang diisolasi dari indigenus
kombucha dan dadih diketahui dapat menghambat amoksisilin dengan diameter
rata-rata yaitu 16,1mm, 16,3mm, dan 18,6mm, serta beberapa resisten dengan
zona hambat yaitu <15mm pada tetrasiklin, dan kloramfenikol seluruh isolat
resisten dengan diameter yaitu ≤15mm. Peneliti sebelumnya, Pato et al, (2017)
mendapatkan bahwa isolat BAL yang diisolasi dari dadih tidak resisten terhadap
berbagai antibiotik seperti amoksisilin, sefadroksil, eritromisin, siprofloksasin dan
tetrasiklin. Oleh karenanya, diharapkan BAL tersebut dapat menjalankan fungsi
terapeutiknya terhadap pasien yang mengonsumsi salah satu dari jenis antibiotik
tersebut.
Berdasarkan hasil penelitian mengenai resistensi antibiotik terhadap 115
strain BAL yang diisolasi dari susu fermentasi di Turki diketahui bakteri tersebut
resisten terhadap antibiotik linkomisin (27,8%), tetrasiklin (20%), meropenem
(11,3%), gentamisin (10,4%), eritromisin (7,8%), siprofloksasin (6,1%),
kloramfenikol (3,4%), dan vankomisin (0,87%) (Ozteber et al, 2017). Namun,
BAL sensitif terhadap antibiotik β-laktam, kecuali penisilin (Gad et al, 2014).
Tingginya angka resistensi mikroba oleh antibiotik, maka peneliti tertarik
untuk menguji sensitivitas BAL terhadap beberapa antibiotik dengan tujuan
mengetahui kepekaan BAL sebagai kandidat probiotik.
I.2 Perumusan Masalah

Berdasarkan uraian latar belakang di atas, maka dapat dirumuskan masalah
dari penelitian yaitu: bagaimana sensitivitas bakteri asam laktat (BAL) asal dadih
terhadap beberapa antibiotik?
3
I.3 Tujuan Penelitian

Tujuan dari penelitian ini unutk mengidentifikasi bakteri asam laktat (BAL)
asal dadih, serta mengetahui dan menganalisis BAL terhadap antibiotik.
I.4 Manfaat Penelitian

I.4.1 Bagi Peneliti
Menambah pengetahuan dan menambah wawasan penelitian dalam bidang
ilmu mikrobiologi kedokteran terutama mengenai sensitivitas bakteri asam laktat
terhadap beberapa antibiotik.
I.4.2 Bagi Program Studi Pendidikan Dokter Universitas Abdurrab

Penelitian ini diharapkan dapat bermanfaat di lingkungan Program Studi
Pendidikan Dokter Universitas Abdurrab sebagai bahan referensi.
I.4.3 Bagi Institusi Terkait

Memberikan informasi ilmiah dan bahan kajian mengenai resistensi
antibiotik terhadap bakteri asam laktat, serta sebagai bahan referensi tambahan
untuk penelitian selanjutnya.
I.4.4 Bagi Masyarakat

Menambah wawasan masyarakat tentang kemampuan bakteri asam laktat
terhadap beberapa antibiotik sebagai kandidat probiotik.
4
I.5 Orisinalitas Penelitian

No. Nama Peneliti / Metode Hasil Penelitian Perbedaan
Judul / Tahun Penelitian
Penelitian
1. Pato et al/ Eksperimental Hasil uji resistensi Penelitian yang akan
Resistensi dengan metode isolat BAL asal dilakukan menggunakan
Antibiotik dan difusi sumur dadih isolat BAL asal dadih,
Aktivitas menunjukkan kemudian dilakukan uji
Antibakteri bahwa L. casei R- sensitivitas terhadap
Lactobacillus 68 dan LCS beberapa antibiotik seperti
casei R-68 Asal resisten terhadap ampisilin, eritromisin,
Dadih Terhadap jenis antibiotik gentamisin, kanamisin,
Patogen Bawaan amoksisilin, klindamisin,
Makanan/2017 sefadroksil, kloramfenikol,
eritromisin, streptomisin, tetrasiklin,
siprofloksasin, amoksisilin,
dan tetrasiklin siprofloksasin,
sefradroksil,
sulfametoksazol-
trimetroprim, sefiksim,
sefotaksim, rifampisin
2. Sukakarya et Deskriptif Hasil uji Penelitian yang akan
al/Ketahanan kuantitatif ketahanan pada dilakukan menggunakan
Isolat Bakteri dengan metode isolat BAL isolat BAL asal dadih,
Asam Laktat kertas cakram terhadap kemudian dilakukan uji
Indigenus antibiotik sensitivitas terhadap
Kombucha dan didapatkan beberapa antibiotik seperti
Dadih Terhadap amoksisilin ampisilin, eritromisin,
Antibiotik/2021 berberapa gentamisin, kanamisin,
intermediet klindamisin,
dengan diameter kloramfenikol,
zona hambat streptomisin, tetrasiklin,
16,1mm, 16,3mm, amoksisilin,
dan 18,6mm dan siprofloksasin,
beberapa resisten sefradroksil,
dengan diameter sulfametoksazol-
zona hambat trimetroprim, sefiksim,
≤15mm, pada sefotaksim, rifampisin
tetrasiklin, dan
kloramfenikol
seluruh isolat
resisten dengan
diameter ≤15mm,
Tabel 1. Orisinalitas Penelitian
II. TINJAUAN PUSTAKA
II.1 Landasan Teori

II.1.1 Dadih
Dadih merupakan makanan khas Indonesia yang berasal dari Sumatera
Barat dan merupakan salah satu jenis fermentasi susu kerbau yang dihasilkan
dengan cara memeram susu pada suhu kamar (27◦C). Dadih diolah dengan cara
tradisional dengan bahan baku utamanya yaitu susu kerbau dituang ke dalam
tabung bambu kemudian dibiarkan terfermentasi secara alamiah di suhu ruang
selama 24-48 jam. Produksi dadih secara tradisional tanpa kultur starter
menyebabkan konsistensi rasa, aroma, dan tekstur dadih sulit untuk dijaga
(Usmiati dan Risfaheri, 2013).
II.1.2 Karakteristik dan Klasifikasi Bakteri Asam Laktat

Bakteri asam laktat merupakan bakteri Gram positif yang tidak
menghasilkan spora, berbentuk coccus atau bacil, dan dapat menghasilkan asam
laktat sebagai produk akhir metabolik utama selama proses fermentasi. Bakteri
asam laktat banyak didapatkan pada produk susu fermentasi seperti yogurt dan
dadih, selain itu juga terdapat pada produk asinan sayur dan buah, serta juga pada
produk-produk fementasi lainnya (Sahu et al, 2015).
Bakteri asam laktat diketahui memiliki manfaat dalam kesehatan manusia
diantaranya menjaga kekebalan tubuh. Dimana BAL akan mengenali mikroba
patogen yang berbahaya dan juga bahan asing lain yang ada pada tubuh manusia.
Upaya untuk meningkatkan sistem kekebalan tubuh salah satunya ialah
mengkonsumsi probiotik, karena probiotik dapat menunjang metabolisme tubuh
(Yuni, 2013).
Menurut Hutkins (2019), BAL dikelompokkan menjadi 7 kelompok antara
lain yaitu:
1. Lactococcus, merupakan bakteri Gram positif berbentuk coccus dengan
diameter 0,5-10 m, berpasangan atau rantai pendek, non motil, anaerob
fakultatif, mesofil tetapi dapat tumbuh pada suhu 10oC, dapat tumbuh
5
6
dengan baik pada suhu 20-30 oC, mereduksi pH hingga sekitar 4,5 dan
tidak bespora. Dihasilkan untuk menghasilkan makanan bioproses
terutama makanan susu fementasi.
2. Leuconostoc merupakan bakteri Gram positif berbentuk coccus atau
lenticular, berpasangan atau berantai, non motil, anaerob fakultatif,
fermentator heterolaktik, mesofil tetapi dapat tumbuh pada suhu dibawah
3°C, tumbuh dengan baik pada suhu 20-30°C. mampu mereduksi pH
hingga 4,5-5,0. Beberapa digunakan dalam fementasi makanan dan dapat
ditemukan pada tumbuhan, daging, dan susu.
3. Oenococcus, merupakan bakteri Gram positif berbentuk coccus atau bacil,
fermentator heterofermentatif, mampu tumbuh pada pH <5,0 dan mampu
tumbuh pada pH <4,0. Selain itu, bakteri ini merupakan salah satu bakteri
asam laktat yang paling toleran terhadap etanol dan dapat tumbuh dengan
adanya etanol 10%, salah satu habitat yang diketahui adalah anggur.
4. Pediococcus, merupakan bakteri Gram positif berbentuk coccus,
berbentuk tetrad, berpasangan, non motil, anaerob fakultatif, fermantator
homofermentatif, mesofil tetapi beberapa dapat tumbuh pada suhu 50°C
dan dapat tumbuh dengan baik pada suhu antara 25-40°C dan mampu
mentolerir asam tinggi dengan pH 4,2 dan tinggi garam diatas 5% NaCl.
Beberapa spesies dan strain digunakan dalam fementasi makanan, serta
beberapa menyebabkan pembusukan pada minuman beralkohol.
Ditemukan dalam bahan vegetatif dibeberapa produk makanan.
5. Lactobacillus, merupakan bakteri Gram positif berbentuk bacil atau
cocobacil, dengan ukuran pendek (<1,5µm), sedang (>5µm) dan Panjang
(10µm). Sebagian besar non motil, anaerob fakultatif, mesofil (tetapi juga
ada yang psikotrof), bersifat fermentatif homofermentatif atau
heterofermentatif, beberapa spesies dapat tumbuh pada suhu yang
bervariasi dari 30-40°C. Dapat ditemukan pada susu, daging, jus dan
minuman fermentasi dan dalam biji-bijian, produk sereal, dan saluran
pencernaan manusia.
7
6. Streptococcus, merupakan bakteri Gram positif yang berbentuk coccus,

berpasangan atau berantai, non motil, anaerob fakultatif, mesofil, Bakteri
tumbuh dengan baik pada suhu 37-40°C, tetapi juga dapat tumbuh pada
52°C, mampu mereduksi pH menjadi 4,0.
7. Tetragenococcus, merupakan homofermentatif, berbentuk tetrad, fakultatif
anaerob, mesofolik dan neutrafilik, dapat tumbuh pada suhu optimal antara
25°C dan 30°C dan pH optimal antara 6,5 dan 8,0 (Hutkins, 2019).
II.1.3 Mekanisme Fermentasi

Berdasarkan jalur metabolisme glukosa BAL dibagi menjadi 2 yaitu
jalur homofermentatif dan jalur heterofermentatif (Gambar 1):
1. Jalur Homofermentatif
Bakteri asam laktat homofermentatif, glukosa dipecah menjadi
glukosa-6P, hexose dimetabolisme melalui enzim jalur glikolitik
Embden-Meyerhof-Parnas (EMP). Enzim aldolase yang mengikat
glukosa ke jalur memecah fruktosa-1,6-difosfat menjadi dua triosa-3P
yang akhirnya berfungsi sebagai substrat untuk menghasilkan ATP.
Jalur EMP menghasilkan dua molekul piruvat dan dua molekul ATP
per molekul hexosa. Piruvat kemudian direduksi menjadi asam laktat
(Hutkins, 2019).
2. Jalur Heterofermentatif
Pada jalur heterofermentatif metabolisme glukosa melalui jalur
fosfoketolase. Pada bakteri heterofermentatif obligat, aldolase tidak ada
dan sebagai gantinya terdapat enzim fosfoketolase. Glukosa dipecah
menjadi glukosa-6P kemudian menjadi glukonat-6P, kemudian diubah
menjadi silulosa-5P dengan CO2 dan dengan bantuan enzim
fosfoketolase, silulosa diubah menjadi triosa-3P dan asetil-P,
selanjutnya triosa-3P menghasilkan piruvat, kemudian piruvat direduksi
menjadi asam laktat, dan asetil-P direduksi menjadi asetat (etanol)
(Hutkins, 2019).
8
Glukosa
Glukosa-6P Glukosa-6P
Fruktosa-1,6P2 Glukonat-6P
Enzim Aldolase Silulosa-5P + CO2
Triosa-3P
Enzim Fosfoketolase
ADP
ATP Triosa-3P Asetil-P
Piruvat
ADP
ATP
Piruvat
Laktat Laktat Asetat (etanol)
Jalur Homofermentatif Jalur Heterofermentatif

Gambar 1. Jalur Heterofermentatif dan Heterofermentatif
(Hutkins, 2019)
9
2.1.4 Senyawa Metabolit Bakteri Asam Laktat Sebagai Probiotik

Bakteri asam laktat diketahui mampu menghasilkan senyawa metabolit
seperti asam laktat, bakteriosin, dan hidrogen peroksida (H2O2), sehingga dapat
menghambat pertumbuhan mikroba patogen. Asam laktat yang dihasilkan oleh
BAL akan berdifusi ke dalam sel mikroba patogen kemudian akan terdisosiasi
sehingga dapat mengganggu sistem transpor nutrisi dan mengakibatkan sel
membentuk proton dan anion yang dapat mengganggu keseimbangan
pengangkutan nutrisi sel mikroba patogen. Oleh sebab itu, bakteri akan berusaha
mengeluarkan proton tersebut dari dalam sel. Dalam proses pengeluaran ini
mikroba patogen membutuhkan energi tinggi yang dapat mengakibatkan mikroba
patogen tersebut mati karena tidak memiliki energi yang cukup (Kumar et al,
2012). Asam laktat yang dihasilkan dalam fermentasi mampu menurunkan pH
yang dapat mengganggu aktivitas enzim sehingga sel mikroba patogen tidak
mampu melakukan aktivitas metabolisme (Ray et al, 2013).
Menurut Hamidah et al (2019) BAL juga mampu menghasilkan
bakteriosin. Bakteriosin merupakan senyawa toksin menyerupai protein yang
diekskresikan oleh BAL yang sifatnya antimikroba dan mampu menghambat
pertumbuhan mikroba patogen. Perbedaan ukuran zona hambat pada pertumbuhan
yang dibentuk setiap bakteri disebabkan adanya perbedaan aktivitas daya hambat
yang dipengaruhi oleh jenis dinding sel bakteri yang dihambat. Hal ini
berpengaruh terhadap ketahanan suatu bakteri terhadap zat antimikroba karena
terdapat perbedaan pada struktur dinding sel bakteri tersebut (Usmiati et al, 2009
dalam Fauziah et al, 2015).
Faktor pH, suhu, sumber karbon, dan fase pertumbuhan dapat
mempengaruhi aktivitas bakteriosin. Adapun jenis sumber karbon dan nitrogen
yang digunakan dalam medium dapat mempengaruhi pertumbuhan pada sel BAL,
kemudian dapat berpengaruh pada metabolisme produksi bakteriosin. Tingkat
kandungan garam pada media juga dapat berpengaruh terhadap metabolisme
produksi bakteriosin itu sendiri. Target utama bakteriosin yaitu membran
sitoplasma sel mikroba patogen karena reaksi awal bakteriosin dapat merusak
permeabilitas membran dan juga menghilangkan proton motive force (PMF)
10
sehingga akan menghambat produksi energi dan juga biosintesis protein (Usmiati
et al, 2009 dalam Fauziah et al, 2015).
Hidrogen peroksida (H2O2) memiliki aktivitas antimikroba seperti
bakterisidal dengan cara merusak lipid, protein, dan asam nukleat. H2O2 memiliki
sifat sitotoksik yang dapat menyebabkan terjadinya kerusakan pada sel-sel bakteri
(Murphy et al, 2019).
2.1.5 Mekanisme Resistensi Bakteri Asam Laktat Terhadap Antibiotik

Mekanisme resistensi bakteri terhadap antibiotik akan terjadi melalui
adanya non aktivasi antibiotik oleh pompa efluks, modifikasi sel target, dan
modifikasi dinding sel (Sharma et al, 2014). Gen penyandi sifat resistensi
antibiotik dapat berpindah dari satu mikroba ke mikroba lain melalui konjugasi,
transformasi, dan transduksi. Uji kepekaan bakteri terhadap antibiotik sangat
diperlukan terutama bagi bakteri yang terlibat di dalam makanan untuk mencegah
terjadinya perpindahaan dan penyebaran bakteri resisten antibiotik ke manusia
(European Food Safety Authority (EFSA), 2012).
Dua elemen yang relevan harus ada untuk interaksi antibiotik ke sel target,
pertama antibiotik harus mengenali target, dan konsentrasi antibiotik dalam target
harus cukup untuk menghambat pertumbuhan bakteri. Mekanisme resistensi
menyebabkan kegagalan antibiotik untuk menghambat pertumbuhan bakteri
karena interaksi antibiotik ke sel target yang tidak efisien, yang dapat
diklasifikasikan sebagai mekanisme pasif dan aktif. Mekanisme pasif hanya dapat
ditransfer ke sel lain melalui transfer klonal yang melibatkan modifikasi situs
target atau penurunan penyerapan antimikroba, tanpa mempengaruhi struktur
antibiotik, resistensi ini juga dikenal sebagai resistensi intrinsik. Sebaliknya,
mekanisme aktif melibatkan pengurangan konsentrasi antibiotik intraseluler
dengan modifikasi atau degradasi strukturnya dengan enzim atau melalui aksi
pompa efluks (Martínez and Baquero, 2014).
11
Gambar 2. Mekanisme Resistensi Antibiotik di BAL

(Sharma et al, 2014)
Pada gambar 2 menunjukkan mekanisme dimana beberapa bakteri dapat

menunjukkan resistensi terhadap antibiotik yang melibatkan yaitu (1) modifikasi
antibiotik oleh kompleks enzimatik yang mencegah interaksi antibiotik-target, (2)
degradasi enzimatik antibiotik intra atau ekstraseluler, dan (3) pengurangan
konsentrasi antibiotik intraseluler melalui aktivasi pompa aliran atau karena
perubahan permeabilitas dinding sel (Sharma et al, 2014).
2.1.5.1 Resistensi Intrinsik

Resistensi intrinsik adalah kemampuan alami atau bawaan bakteri untuk
bertahan hidup dari pengaruh antibiotik, sebagai akibat dari mutasi yang berasal
dari perubahan keadaan fisiologis bakteri atau oleh paparan antibiotik yang tidak
terkontrol. Resistensi intrinsik memiliki potensi perbanyakan minimum antara
genera bakteri, karena gen resistensi terletak di dalam kromosom dengan transfer
terbatas ke genus lain, yang mewakili risiko rendah dalam bakteri non patogen.
Setiap gen yang bertanggung jawab untuk resistensi intrinsik dapat disebarluaskan
dan ditransfer ke bakteri lain jika diapit oleh urutan penyisipan yang dapat
mendorong mobilisasinya. Misalnya, strain Bifidobacterium biasanya digunakan
sebagai kultur starter dan/atau prebiotik dalam makanan fermentasi tradisional dan
industri meskipun mereka memiliki resistensi intrinsik terhadap kuinolon
12
(siprofloksasin dan asam nalidiksat), mupirosin, tetrasiklin, dan aminoglikosida

seperti streptomisin; namun, semua gen terletak di kromosom dengan transferensi
terbatas ke genus lain (Imperial dan Ibana, 2016).
2.1.5.2 Resistensi Ekstrinsik

Resistensi ekstrinsik atau didapat adalah salah satu di mana bakteri dapat
memasukkan ke dalam struktur seluler materi genetik bergerak yang mampu
memberikan resistensi terhadap antibiotik tertentu. Tidak seperti resistensi
intrinsik, resistensi yang didapat hanya ditemukan pada beberapa sifat atau
subpopulasi bakteri. Perbanyakan gen dapat terjadi antara bakteri dari genera yang
berbeda atau antara organisme yang berbeda. Transfer gen horizontal (HGT)
terjadi ketika bakteri mampu memperoleh gen baru yang dapat meningkatkan
spektrum resistensi intrinsiknya, atau mereka dapat mentransfer resistensi ke
mikroba lain atau langsung ke manusia atau hewan, yang sudah dianggap sebagai
risiko kesehatan. Oleh karena itu, protokol untuk analisis gen resistensi pada BAL
semakin meningkat karena memiliki kapasitas yang tinggi untuk memperoleh AR
dan karena memiliki hubungan yang erat dengan pengolahan makanan (Sharma et
al, 2014). Gambar 3 menunjukkan tiga mekanisme utama HGT; beberapa
diantaranya tidak dianggap relevan dalam transfer resistensi antibiotik di BAL,
misalnya, transduksi (melalui bakteriofag) dan transformasi (ketika DNA
dilepaskan dari satu bakteri dan diserap oleh bakteri lain), karena konjugasi adalah
mekanisme utama yang diamati pada bakteri asam laktat (Sharma et al, 2014).
Konjugasi adalah perpindahan materi genetik bergerak dari plasmid atau
transposon melalui suatu tabung protein yang disebut pilus seksual. Plasmid
adalah molekul DNA ekstrakromosom yang mampu bereplikasi secara otonom
dan dapat memberikan resistensi mikroba terhadap antibiotik dan merupakan
salah satu elemen seluler utama untuk penyebaran gen resisten antibiotik terhadap
β -laktam, aminoglikosida, tetrasiklin, kloramfenikol, sulfonamid, trimetoprim,
makrolida, dan kuinolon (Imperial dan Ibana, 2016).
Plasmid memiliki sejumlah besar determinan genetik yang dapat
memberikan resistensi melalui konjugasi, dan penting untuk mempertimbangkan
13
bahwa bakteri tunggal dapat memiliki banyak plasmid Beberapa peneliti

menunjukkan bahwa keragaman genetik resistensi sebanding dengan jumlah
plasmid yang ada di lingkungan, tanpa melupakan bahwa ada elemen bergerak
lainnya seperti transposon dan integron, meskipun elemen ini tidak menggandakan
diri dan harus diangkut oleh organisme yang sesuai, plasmid atau fag (Brown-
Jaque et al, 2015).
Gambar 3. Mekanisme Transfer Gen Horizontal Pada BAL

(Sharma et al, 2014)
2.1.6 Mekanisme Resistensi Antibiotik Terhadap Bakteri Asam Laktat

Penggunaan antibiotik yang tidak rasional akan mengakibatkan terjadinya
resistensi oleh antibiotik terhadap bakteri. Beberapa strain bakteri memiliki
beberapa jenis mekanisme resistensi. Namun, hanya terdapat dua mekanisme yang
dapat menyebabkan bakteri menjadi resisten terhadap antibiotik yaitu mekanisme
intrinsik dan mekanisme ekstrinsik (Sharma et al, 2014).
2.1.6.1 Resistensi Intrinsik/Fenotif

Mekanisme resistensi intrinsik dapat disebabkan oleh adanya perubahan
fisiologis bakteri seperti fase stasioner, persisten antibiotik, dan keadaan dorman
(istirahat). Resistensi intrinsik memiliki potensi yang minimal terhadap
penyebaran dan tidak menimbulkan risiko terhadap bakteri non patogen, walaupun
14
setiap gen bertanggung jawab terhadap resistensi intrinsik. Akibatnya, bakteri

pertama yang dapat memiliki kemampuan mekanisme intrinsik untuk melindungi
dirinya dari efek antibiotik. Terdapat empat mekanisme utama dimana bakteri
menjadi resisten secara instrinsik terhadap antibiotik yang diberikan (Gambar 4)
yaitu:
a. Inaktivasi enzim atau modifikasi
Beberapa bakteri dapat menghasilkan enzim yang mampu menonaktifkan
atau menghancurkan molekul antibiotik tertentu karena bakteri tersebut dapat
memodifikasi situs targetnya untuk menghindari dirinya dari antibiotik (Deasy,
2009 dalam Sharma et al, 2014). Plasmid yang membawa gen resistensi
antibiotik terdegradasi sehingga antibiotik dan bakteri sehingga menjadi tidak
efektif dalam melawan antibiotik. Misalnya, pada β-laktamase yang merupakan
enzim bakteri yang memecah cincin β-laktam dari antibiotik seperti ampisilin.
Enzim hanya aktif melawan antibiotik tertentu, sedangkan β-laktamase
spektrum luas resisten terhadap beberapa antibiotik (Menurut balletti et al,
2009 dalam Sharma et al, 2014).
b. Pompa efluks dan perubahan luar permeabilitas membran
Perubahan pompa efluks obat aktif mengangkut antibiotik dari bakteri
dengan cara mengurangi konsentrasi dari obat tersebut. Gen resistensi
pembawa plasmid juga memiliki pompa efluks yang mengangkut antibiotik
menjauh dari bakteri. Penurunan permeabilitas dari obat dibawa melintasi
permukaan sel yang dapat menyebabkan terjadinya resistensi. Pompa efluks
beberapa obat dapat menghambat efektivitas dari tetrasiklin (Belletti et al,
(2009) dalam Sharma et al, (2014)).
c. Perubahan situs target bakteri
Beberapa antibiotik memiliki protein pengikat pada dinding sel mikroba
yang sensitif. Perubahan protein tersebut dapat menyebabkan perkembangan
resistensi terhadap mikroba tersebut. Mekanisme ini digunakan untuk
resistensi terhadap berbagai agen antimikroba termasuk β-laktam, tetrasiklin,
dan vankomisin (Belletti et al, 2009 dalam Sharma et al, 2014).
15
d. Penyusunan ulang metabolisme intraseluler

Salah satu mekanisme yang mungkin digunakan oleh bakteri untuk
mengembangkan resistensi terhadap antibiotik adalah dengan memodifikasi
jalur metabolisme yang ditargetkan dan dapat terjadi perubahan internal.
Bakteri membuat beberapa perubahan fenotif sehingga antibiotik mungkin
tidak dapat mencapai situs targetnya dan membuatnya tidak efektif dalam
melawan bakteri (Madhavan dan sowmiya, 2011 dalam Sharma et al, 2014).
2.1.6.2 Resistensi Ekstrinsik/Genotif

Dapat resisten terhadap antibiotik melalui transfer gen horizontal yaitu
proses dimana materi genetik dapat ditransfer antara bakteri dari spesies yang
sama ataupun spesies yang berbeda. Resistensi yang didapat terdapat pada
beberapa strain dalam satu spesies yang biasanya rentan terhadap antibiotik, dan
mungkin menyebar secara horizontal diantara spesies bakteri lainnya. Resistensi
yang didapat terhadap agen antimikroba dapat timbul baik dari mutasi pada
genom bakteri atau melalui akuisisi gen tambahan yang mengkode mekanisme
resistensi (Howden et al, 2006 dalam Sharma et al, 2014). Evolusi resistensi
antibiotik dalam kelompok mikroba ditingkatkan dengan HGT resistensi melewati
batas spesies dan genus yaitu dengan plasmid konjugatif, transposon, memiliki
integron dan elemen penyisipan, litik dan bakteriofag sedang. Dengan demikian,
bakteri di saluran cerna dapat memperoleh resistensi baik melalui mutasi atau
HGT resistensi dari mikroba saluran cerna lain atau apapun. Terlepas dari
mekanisme resistensi dan takson mikroba yang terlibat, kemungkinan sebenarnya
penyebaran resistensi antibiotik melalui transfer horizontal bergantung pada
genetiknya (Radulovic et al, 2012). Penyebaran gen resistensi antibiotik
memerlukan transfer fisik atau akuisisi elemen genetik yang akan mengkode
resistensi antibiotik. Umumnya transfer gen diantara mikroba dalam genus yang
sama, proses ini juga telah diamati antara genera yang berbeda, termasuk transfer
antara organisme yang jauh secara evolusioner seperti bakteri Gram positif dan
Gram negatif. Diantara tiga mekanisme utama untuk pertukaran gen horizontal
16
antara bakteri, kontribusi relatif dari mekanisme ini deketahui dianggap sebagai
mekanisme utama HTG (Gambar 4) (Sommer dan Dantas (2011) dalam Sharma
(2014)).
Gambar 4. Mekanisme Resistensi Antibiotik Intrinsik pada Probiotik

(Levy, 1998 dalam Sharma et al, 2014)
Gambar 5. Mekanisme Resistensi Antibiotik Ekstrinsik pada Probiotik

17
(Levy, 1998 dalam Sharma et al, 2014)

2.2 Kerangka Teori
Dadih
Bakteri Asam Laktat
Intrinsik Ekstrinsik
Modifikasi Perubahan
Pompa efluks Transformasi Konjugasi Transduksi
enzim situs target
Resisten terhadap antibiotik
Gambar 6. Kerangka Teori
2.3 Kerangka Konsep
Beberapa jenis antibiotik

(ampisilin, eritromisin,
gentamisin, kanamisin,
klindamisin, kloramfenikol, Sensitivitas Bakteri Asam
streptomisin, tetrasiklin, Laktat (BAL)
amoksisilin, siprofloksasin,
sefradroksil, sulfametoksazol-
trimetroprin, sefiksim,
sefotaksim, rifampisin)
Gambar 7. Kerangka Konsep
2.4 Hipotesis Penelitian

Hipotesis penelitian ini adalah tidak resisten atau sensitif bakteri asam laktat
(BAL) terhadap antibiotik.
III. METODE PENELITIAN
III.1 Jenis dan Rancangan Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian true experimental. Rancangan
penelitian menggunakan post test-only with control group.
R1 X1 O1
R2 X2 O2
R3 X3 O3
R4 X4 O4
R5 X5 O5
R6 X6 O6
R7 X7 O7
R8 X8 O8
R9 X9 O9
R10 X10 O10
R11 X11 O11
R12 X12 O12
R13 X13 O13
R14 X14 O14
R15 X15 O15
R16 X16 O16
C O
Keterangan:
R1 : kelompok eksperimen 1 XI : perlakuan 1 (antibitik ampisisilin)
R2 : kelompok eksperimen 2 X2 : perlakuan 2 (antibiotik eritromisin)
R3 : kelompok eksperimen 3 X3 : perlakuan 3 (antibiotik gentamisin)
R4 : kelompok eksperimen 4 X4 : perlakuan 4 (antibiotik kanamisin)
R5 : kelompok eksperimen 5 X5 : perlakuan 5 (antibiotik klindamisin)
R6 : kelompok eksperimen 6 X6 : perlakuan 6 (antibiotik kloramfenikol)
R7 : kelompok eksperimen 7 X7 : perlakuan 7 (antibiotik streptomisin)
R8 : kelompok eksperimen 8 X8 : perlakuan 8 (antibiotik tetrasiklin)
19
20
R9 : kelompok eksperimen 9 X9 : perlakuan 9 (antibiotik amoksisilin)

R10: kelompok eksperimen 10 X10: perlakuan 10 (antibiotik siprofloksasin)
R11: kelompok eksperimen 11 X11: perlakuan 11 (antibiotik sefadroksil)
R12: kelompok eksperimen 12 X12: perlakuan 12 (antibiotik sulfametoksazol-
trimetroprim)
R13: kelompok eksperimen 13 X13: perlakuan 13 (antibiotik sefiksim)
R14: kelompok eksperimen 14 X14: perlakuan 14 (antibiotik sefotaksim)
R15: kelompok eksperimen 15 X15: perlakuan 15 (antibiotik rifampisin)
C : kelompok kontrol (akuades) O : pengamatan
Gambar 8. Rancangan Penelitian
III.2 Tempat dan waktu penelitian

III.2.1 Tempat Penelitian
Tempat penelitian dilaksanakan di Laboratorium Mikrobiologi dan
Parasitologi Universitas Abdurrab.
III.2.2 Waktu Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Mei sampai Juni 2022.
21
III.3 Variabel Penelitian dan Definisi Operasional

Tabel 2. Definisi Operasional
No. Jenis Nama Definisi Alat ukur Hasil pengukuran
variabel variabel operasional Penilaian Skala
1. Independen Berbagai Antibiotik yang Mikro Zona Nominal
konsentrasidigunakan dalam pipet bening
antibiotik penelitian ini sekitar
adalah ampisilin antibiotik
10μg, eritromisin
15μg, gentamisin
10μg, kanamisin
30μg, klindamisin
2μg,
kloramfenikol
30μg, streptomisin
10μg, tetrasiklin
30 μg, amoksisilin
20μg,
siprofloksasin
5μg, sefiksim 5μg,
sulfametoksazol-
trimetroprim
1,25μg, sefotaksim
30μg, rifampisin
5μg (CLSI, 2018)
2. Dependen Isolat BAL Isolat BAL 1, Jangka Resisten Rasio
yang isolat BAL 2, sorong (≤14),
diisolasi isolat BAL 3, Intermediet
dari dadih (15-19),
Sensitif
(≥20)
(CLSI,
2018)
III.4 Alat dan Bahan Penelitian

III.4.1 Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah: neraca analitik,
autoclave, inkubator, Laminary air flow (LAF), cawan petri, batang pengaduk,
Erlenmeyer, lumping dan alu, gelas ukur, jarum ose, jangka sorong, bunsen, oven,
pipet ukur, mikro pipet, rak tabung, tabung reaksi steril, spatel, cork borer, vortex,
dan kapas lidi steril.
22
III.4.2 Bahan
Bahan dalam penelitian ini yaitu isolat bakteri asam laktat yang diperoleh
di Laboratorium Mikrobiologi Universitas Abdurrab (Amanda, 2021), antibiotik
(ampisilin, eritromisin, gentamisin, kanamisin, klindamisin, kloramfenikol,
streptomisin, tetrasiklin, amoksisilin, siprofloksasin, sulfametoksazol-trimetoprin,
sefiksim, sefotaksim, rifampisin), medium Muller Hilton Agar (MHA)
(Lampiran1), medium de Mann Rogose Agar (MRSA) (Lampiran1), Alkohol
70%, spiritus, dan akuades, standar McFarland 1,0 (Lampiran 2), pewarnaaan
Gram, hidrogen peroksida (H2O2) 3%.
III.5 Cara penelitian

III.5.1 Peremajaan Isolat Bakteri Asam Laktat
Isolat BAL yang diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi Universitas
Abdurrab (Amanda, 2021), diambil sebanyak satu ose bakteri dari media MRSA
miring lalu digoreskan secara zigzag ke dalam medium MRSA, kemudian
diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam (Nurbaiti et al, 2016).
III.5.2 Identifikasi Bakteri Asam Laktat

Identifikasi BAL dilakukan dengan pengamatan morfologi koloni dan sel.
Pada morfologi koloni, BAL ditumbuhkan pada medium NA kemudian diamati
pertumbuhan koloni meliputi warna, bentuk, elevasi, tepian dan ukuran. Prosedur
selanjutnya dilakukan uji katalase dengan cara mengambil sebanyak 1 ose isolat
BAL, lalu diletakkan pada object glass, dan selanjutnya ditetesi dengan larutan
H2O2 3%. Terbentuknya gelembung O2 menandakan adanya enzim katalase
(Cappuccino dan Welsh, 2019).
III.5.3 Pewarnaan Gram

Pewarnaan Gram dilakukan dengan meletakkan sebanyak 1 ose isolat BAL
di object glass, kemudian diratakan dan difiksasi di atas api bunsen. Selanjutnya
diteteskan dengan larutan kristal violet, dan didiamkan selama 1 menit, lalu dicuci
menggunakan air mengalir dan dikeringkan. Selanjutnya ditetesi menggunakan
23
larutan yodium dan biarkan selama 1 menit, dan dicuci menggunakan air mengalir
dan dikeringkan, kemudian dicuci dengan larutan pemucat (alkohol) selama 30
detik, dicuci menggunakan air mengalir dan dikeringkan. Tahap berikutnya
ditetesi menggunakan larutan safranin dan didiamkan selama 2 menit, lalu di cuci
menggunakan air mengalir dan dikeringkan, kemudian diamati menggunakan
mikroskop dengan perbesaran kuat. Bakteri Gram positif akan berwarna violet dan
bakteri Gram negatif akan berwarna merah (Ibrahim et al, 2017).
III.5.4 Pembuatan Konsentrasi dari Beberapa Antibiotik

III.5.4.1 Ampisilin
Tablet ampisilin 500mg diencerkan ke dalam 5ml akuades steril sehingga
menjadi konsentrasi 100mg/ml. Selanjutnya ambil sebanyak 1ml dari larutan
100mg/ml ditambahkan akuades steril hingga volume menjadi 10ml dan
didapatkan konsentrasi larutan 10mg/ml. Kemudian konsentrasi 10mg/ml diambil
sebanyak 1ml ditambahkan akuades steril hingga volume menjadi 10ml dan
didapatkan konsentrasi 1mg/ml (Fitriana, 2018).
Larutan stok (1mg/ml) diambil sebanyak 2ml larutan, kemudian
ditambahkan akuades hingga volume menjadi 10ml dan didapatkan konsentrasi
menjadi 200µg/ml. Selanjutnya dari konsentrasi 200µg/ml diambil sebanyak 5ml
dan ditambahkan akuades steril hingga volume menjadi 10mg/ml, didapatkanlah
konsentrasi 100µg/ml. Lalu dari konsentrasi 100µg/ml, sebanyak 1ml
ditambahkan akuades steril hingga volume menjadi 10ml sehingga didapatkanlah
konsentrasi 10µg/ml yang akan digunakan dalam penelitian (Fitriana, 2018).
III.5.4.2 Eritromisin
Tablet eritromisin 500mg diencerkan ke dalam 5ml akuades steril
sehingga menjadi konsentrasi 100mg/ml. Selanjutnya ambil sebanyak 1ml dari
larutan 100mg/ml ditambahkan akuades steril hingga volume menjadi 10ml dan
didapatkan konsentrasi larutan 10mg/ml. Kemudian konsentrasi 10mg/ml
diambil sebanyak 1ml ditambahkan akuades steril hingga volume menjadi 10ml
dan didapatkan konsentrasi 1mg/ml (Fitriana, 2018).
24

ditambahkan akuades steril hingga volume menjadi 10ml sehingga
didapatkanlah konsentrasi 30µg/ml, dari konsentrasi tersebut diambil 5ml dan
ditambahkan akuades steril sehingga volume mennjadi 10ml didapatkanlah
III.5.4.3 Gentamisin
Sebanyak 40 mg/ml gentamisin diencerkan ke dalam 4ml akuades steril
sehingga menjadi konsentrasi 10mg/ml. Selanjutnya diambil sebanyak 1ml dari
larutan 10mg/ml ditambahkan akuades steril sehingga volume menjadi 10ml dan
III.5.4.4 Kanamisin
Sebanyak 1g kanamisin diencerkan ke dalam 10ml akuades steril sehingga
didapatkan konsentrasi 100mg/ml. Selanjutnya ambil sebanyak 1ml dari larutan
25

kemudian ditambahkan akuades steril hingga volume menjadi 10ml dan
konsentrasi menjadi 100µg/ml. Lalu dari konsentrasi 100µg/ml, sebanyak 3ml
ditambahkan akuades steril hingga volume menjadi 10ml sehingga konsentrasi
menjadi 30µg/ml yang akan digunakan dalam penelitian (Fitriana, 2018).
III.5.4.5 Klindamisin
Tablet klindamisin 150mg diencerkan ke dalam 1,5 ml akuades steril
didapatkan konsentrasi 100µg/ml. Lalu dari konsentrasi 100µg/ml, sebanyak 1ml
menjadi 10µg/ml, dari konsentrasi tersebut diambil 2ml dan ditambahkan akuades
steril sehingga volume menjadi 10ml didapatkanlah konsentrasi 2µg/ml yang akan
digunakan dalam penelitian (Fitriana, 2018).
III.5.4.6 Kloramfenikol
Tablet kloramfenikol 250mg diencerkan ke dalam 2,5ml akuades steril
sehingga didapatkan konsentrasi 100mg/ml. Selanjutnya ambil sebanyak 1ml dari
26
III.5.4.7 Streptomisin
Sebanyak 1g streptomisin dilarutkan dalam 10ml akuades steril sehingga
menjadi konsentrasi 100mg/ml. Sebanyak 1ml dari larutan 10mg/ml diambil,
lalu ditambahkan akuades steril hingga volume menjadi 10ml sehingga
didapatkan larutan sebanyak 1mg/ml (Fitriana, 2018).
Larutan stok (1mg/ml) diambil sebanyak 2ml dan ditambahkan akuades
hingga volume menjadi 10ml sehingga didapatkan konsentrasi 200µg/ml.
Konsentrasi 200µg/ml, diambil sebanyak 5ml dan ditambahkan 5ml akuades steril
hingga volume menjadi 10ml sehingga didapatkan konsentrasi 100µg/ml.
Konsentrasi 100µg/ml, diambil sebanyak 1ml dan ditambahkan akuades steril
hingga volume menjadi 10ml sehingga didapatkan konsentrasi 10µg/ml yang akan
III.5.4.8 Tetrasiklin
Tablet tetrasiklin 250mg diencerkan ke dalam 2,5ml akuades steril
sehingga didapatkan konsentrasi 100mg/ml. Selanjutnya ambil sebanyak 1ml dari
27
Larutan stok (1mg/ml) sebanyak 2ml larutan diambil kemudian

III.5.4.9 Amoksisilin
Tablet amoksisilin 500mg diencerkan ke dalam 5ml akuades steril
III.5.4.10 Siprofloksasin
Tablet siprofloksasin 500mg diencerkan ke dalam 5ml akuades steril
28
Larutan stok (1mg/ml) sebanyak 2ml larutan diambil kemudian

III.5.4.11 Sefadroksil
Tablet sefadroksil 500mg diencerkan ke dalam 2ml akuades steril
III.5.4.12 Sulfametoksazol-Trimetroprim
Tablet sulfametoksazol-trimetroprim 400mg diencerkan ke dalam 4ml
akuades steril sehingga menjadi konsentrasi 100mg/ml. Selanjutnya ambil
sebanyak 1ml dari larutan 100mg/ml ditambahkan akuades steril hingga volume
29
menjadi 10ml dan didapatkan konsentrasi larutan 10mg/ml. Kemudian konsentrasi

10mg/ml diambil sebanyak 1ml ditambahkan akuades steril hingga volume
menjadi 10ml dan didapatkan konsentrasi 1mg/ml (Fitriana, 2018).
Larutan stok (1mg/ml) daimbil sebanyak 2ml larutan, kemudian
steril sehingga volume mennjadi 10ml didapatkanlah konsentrasi 1,25µg/ml yang
akan digunakan dalam penelitian (Fitriana, 2018).
III.5.4.13 Sefiksim
Tablet sefiksim 450mg diencerkan ke dalam 4,5ml akuades steril
30
III.5.4.14 Sefotaksim
Tablet sefotaksim 1g diencerkan ke dalam 10ml akuades steril sehingga
didapatkan konsentrasi 100mg/ml. Selanjutnya ambil sebanyak 1ml dari larutan
III.5.4.15 Rifampisin
Tablet rifampisin 450mg diencerkan ke dalam 4,5ml akuades steril
31
III.5.5 Uji Sensitivitas Bakteri Asam Laktat Terhadap Beberapa Antibiotik

Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode difusi
sumuran (Nurhayati et al, 2020). Bakteri asam laktat dilarutkan dalam NaCl 0,9%
disesuaikan dengan larutan standar McFarland 1,0 lalu diswab pada medium
MHA dengan menggunakan kapas lidi steril, kemudian didiamkan selama 5-10
menit. Setelah itu, dibuat lubang pada medium MHA menggunakan cork borer
dengan diameter 6mm. Selanjutnya, dimasukkan masing-masing sebanyak 25µl
antibiotik (ampisilin, eritromisin, gentamisin, kanamisin, klindamisin,
kloramfenikol, streptomisin, tetrasiklin, amoksisilin, siproflokasisn, sefadroksil,
sulfametoksazol-trimetroprim, sefiksim, sefotaksim, dan rifampisin) dan kontrol
negatif ke dalam sumuran menggunakan mikropipet, lalu diinkubasi pada suhu
37oC selama 24 jam. Setelah waktu inkubasi, zona jernih yang terbentuk diamati
dan diukur menggunakan jangka sorong. Penelitian ini dilakukan sebanyak 3 kali
pengulangan.
III.6 Analisis Data

Data yang diperoleh dianalisis secara deskriptif dan disajikan dalam
bentuk tabel dan gambar.
Tabel 3. Kategori Resistensi
Kategori Zona Diameter (mm)
Sensitif ≥20
Intermediet 15-19
Resisten ≤14
(CLSI, 2018)
III.7 Etika Penelitian

Penelitian ini dilakukan berdasarkan prinsip-prinsip etik penelitian yang
terbagi dalam tiga prinsip yaitu prinsip non-maleficence, prinsip beneficience,
prinsip kepatuhan. Pada prinsip non-maleficence penelitian dapat dipastikan
bahwa ini tidak membahayakan seperti tidak telibat dalam aktivitas yang
dimaksudkan atau kemungkinan dapat membahayakan hewan, manusia atau
lingkungan serta tidak berkontribusi dalam pengembangan atau produksi mikroba
dan racun. Prinsip beneficience pada prinsip ini dipastikan bahwa manfaat yang
32
sedang dicari lebih besar daripada risiko dan bahaya yang ditimbulkan. Prinsip
selanjutnya yaitu prinsip kepatuhan pada prinsip ini kegiatan penelitian yang
dilakukan mematuhi hukum dan peraturan yang berlaku untuk pelaksanaan ilmu
pengetahuan, tugas dan kewajiban.
III.8 Alur Penelitian
Isolat BAL asal dadih (isolat 1, 2, dan 3)
Peremajaan bakteri
Pewarnaan Gram
Pengenceran antibiotik
Uji sensitivitas BAL terhadap antibiotik
Pengukuran zona hambat
Analisis deskriptif
Gambar 9. Alur Penelitian

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN
IV.1 Hasil Penelitian

Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilaksanakan di Laboratorium
Mikrobiologi dan Parasitologi Universitas Abdurrab pada tanggal 6 Juni 2022,
dari 3 isolat BAL asal dadih didapatkan bentuk morfologi koloni BAL 1 dan BAL
3 sama, sedangkan BAL 2 berbeda (Gambar 10; Tabel 4).
Isolat tunggal Isolat tunggal Isolat tunggal
A B C
Gambar 10. Isolat Tunggal BAL. Keterangan: (A) Isolat BAL 1, (B) Isolat BAL
2, dan (C) Isolat BAL 3
Selanjutnya, pada uji katalase didapatkan hasil negatif pada ketiga isolat
BAL (Tabel 4; Gambar 11). Hasil pewarnaan Gram menunjukkan ketiga isolat
BAL merupakan bakteri Gram positif dengan bentuk coccobacil pada BAL 1 dan
BAL 3, serta bacil pada BAL 2 (Tabel 4; Gambar 12).
A B C
Gambar 11. Uji Katalase Bakteri Asam Laktat. Keterangan: (A) Isolat BAL 1, (B)
Isolat BAL 2, dan (C) Isolat BAL 3.
33
34
A B C
Gambar 12. Pewarnaan Gram Bakteri Asam Laktat. Keterangan: (A) Isolat BAL
1, (B) Isolat BAL 2, dan (C) Isolat BAL 3.
Isolat
Pengamatan
BAL 1 BAL 2 BAL 3
Morfologi Koloni
 Warna Krem Krem Krem
 Bentuk Circular Circular Circular
 Tepian Entire Entire Entire
 Permukaan Convex Raised Convex
 Ukuran 1mm 2mm 1mm
Morfologi Sel
 Pewarnaan Gram Positif Positif Positif
 Bentuk Sel Coccobacil Bacil coccobacil
Biokimia
 Katalase Negatif Negatif Negatif
Tabel 4. Karakteristik Bakteri Asam Laktat
Pada uji sensitivitas dari 3 isolat BAL terhadap beberapa antibiotik diperoleh
hasil seperti pada Tabel 5 dan Gambar 13, dimana dapat dilihat dari 15 antibiotik,
3 antibiotik diantaranya sensitif terhadap BAL 1 yaitu ampisilin, tetrasiklin, dan
sulfametoksazol-trimetroprim. Terdapat 3 antibiotik yang sensitif terhadap BAL 2
yaitu eritromisin, tetrasiklin, dan siprofloksasin.
Tabel 5. Hasil Pengukuran Zona Hambat Beberapa Antibiotik pada ketiga isolat
BAL
BAL 1 BAL 2 BAL 3
Jenis Antibiotik ZH Kategori ZH Kategori ZH Kategori
(mm) (mm) (mm)
Ampisilin 10µg 32,8 S 2 R 3 R
Eritromisin 15µg 19,4 I 21 S 2,8 R
Gentamisin 10µg 3,1 R 4 R 2,6 R
Kanamisin 30µg 0 R 7 R 7 R
Klindamisin 2µg 0 R 1,5 R 9 R
Kloramfenikol 30µg 17,3 I 18,5 I 15 I
35
Streptomisin 10µg 10,1 R 15 I 4,8 R

Tetrasiklin 30µg 44,5 S 21 S 11 R
Amoksisilin 20µg 0 R 2 R 6,4 R
Siprofloksasin 5µg 16,5 I 22,4 S 1 R
Sefadroksil 5µg 0 R 4,3 R 0 R
Sulfametoksazol- 55,6 S 2 R 7 R
Trimetroprim
1,25µg
Sefiksim 5µg 2 R 0 R 2,6 R
Sefotaksim 30µg 0 R 1,2 R 2 R
Rifampisin 5µg 8,7 R 1 R 1,2 R
Keterangan: ZH : Zona hambat
S : Sensitif
I : Intermediet
R : Resisten
SXT
A S CIP C
CTX
T (-) R
K
G
E
AMP
CFM
CN AML CFD
SXT
B E C
CFM
K AML
CTX T
G
(-)
R
CN S
AMP
CIP CFD
E
C AMP CFD
CN
AML
CIP
G
(-)
CTX R
T
K
CFM
S C
SXT
Gambar 13. Hasil Uji Sensitivitas BAL terhadap Beberapa Antibiotik pada
Medium MHA. Keterangan: (A) BAL 1, (B) BAL 2, dan (C) BAL 3.
36
Keterangan:
AMP : Ampisilin CIP : Siprofloksasin
CTX : sefotaksim C : Kloramfenikol
SXT : Sulfametoksazol-Trimetroprim G : Gentamisin
T : Tetrasiklin R : Rifampisin
K : Kanamisin CFD : Sefadroksil
CN : Klindamisin E : Eritromisin
CFM : Sefiksim AML : Amoksisilin
S : Streptomisin (-) : Kontrol negatif
E : Eritromisin
IV.2 Pembahasan
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan, didapatkan 2 isolat BAL
memiliki ciri morfologi yang sama dan 1 isolat dengan ciri yang berbeda (Tabel 5;
Gambar13). Selanjutnya, pada uji pewarnaan Gram dari ketiga isolate
BALmenunjukkan hasil bakteri Gram positif dengan bentuk coccobacil pada
isolat BAL 1 dan isolat BAL 3, serta bentuk bacil pada isolat BAL 2 (Tabel 4;
Gambar 12). Menurut Nasution et al (2020), BAL merupakan bakteri Gram
positif yang berbentuk coccus maupun bacil. Hal yang sama dengan penelitian
Putri et al (2018) yang menyatakan bahwa bakteri Gram positif memiliki lapisan
peptidoglikan lebih tebal, membran selnya hanya memiliki satu lapis dan tidak
memiliki membran luar sehingga pada saat dilakukan pencucian terhadap alkohol
bakteri tersebut dapat mempertahankan warna ungu.
Pada uji katalase didapatkan ketiga isolat BAL negatif katalase seperti
pada gambar 11. Hal ini menandakan bahwa BAL tidak memproduksi enzim
katalase yang bisa merubah H2O2 menjadi H2O dan O2 yang berkaitan dengan
kemampuan BAL yang hanya membutuhkan sedikit O2 untuk hidup (Ibrahim et
al, 2017). Menurut Nasution et al (2020), isolat BAL yg diisilasi dari Dali Ni
Horbo memperoleh hasil semua isolat BAL negatif katalase.
Berdasarkan hasil uji sensitivitas BAL terhadap beberapa antibiotik
didapatkan bahwa isolat BAL 1 sensitif terhadap 3 antibiotik yaitu pada ampisilin,
tetrasiklin, dan sulfametoksazol-trimmetroprim, dan 12 antibiotik lainnya resisten
atau intermediet. Pada isolat BAL 2 terdapat 3 antibiotik yang sensitif yaitu
eritromisin, tetrasiklin, dan siprofloksasin, dan sisanya resisten atau intermediet.
Pada isolat BAL 3 sebagian besar antibiotik resisten dan 1 intermediet (Tabel 5).
37
Jika dibandingkan dengan penelitian Hamida (2015), dari 6 isolat BAL (E1223,
E3, E4, E5, E7, dan E8) yang diisolasi dari fermentasi spontan jagung kemudian
diujikan terhadap 4 antibiotik yaitu eritromisin, bambermisin, kloramfenikol, dan
tetrasiklin hanya terdapat 2 antibiotik yang sensitif yaitu kloramfenikol dan
tetrasiklin pada isolat BAL E5, E7, dan E8. Peneliti lainnya menujukkan hasil dari
13 isolat BAL yang diisolasi dari kombucha dan dadih didapatkan ke 13 isolat
resisten terhadap antibiotik uji (tetrasiklin, dan kloramfenikol) sedangkan pada
pada antibiotik amoksisilin diperoleh 3 isolat BAL (RN9, ML7, dan MK2)
memiliki sifat ketahanan intermediet, sedangkan pada 10 isolat BAL lainnya
(MS21, RB210, RK41, MK42, RL2, RG5, MA1, MB23, MY2, dan RJ1) bersifat
resisten (Sukakarya et al, 2021). Pada penelitian Pato et al (2017), isolat BAL
yang diisolasi dari dadih resisten terhadap beberapa antibiotik seperti: amoksisilin,
sefadroksil, eritromisin, siprofloksasin, dan tetrasiklin.
Menurut Sukakarya et al (2021) terjadinya resistensi BAL terhadap
antibiotik karena adanya faktor intrinsik dari bakteri yaitu dapat menghasilkan
enzim inaktivasi senyawa antibiotik. Dinding sel dari BAL menjadi pertahanan
lain apabila bakteri tersebut tidak mampu menghasilkan enzim inaktivasi atapun
enzim inaktivasi tersebut tidak mampu menghambat senyawa antibiotik yang
terkandung dalam konsentrasi cukup tinggi. Dinding sel BAL yang tersusun dari
beberapa lapisan peptidoglikan yang tebal selain dapat berfungsi sebagai pemberi
integritas dan bentuk sel juga dapat menghambat masuknya senyawa antibiotik
dengan menurunkan permeabilitas membran yang akhirnya akan menurunkan
kemungkinan masuknya komponen antibiotik ke dalam sitoplasma sel (Sujadmiko
dan Wikandari, 2017).
Hasil penelitian yang telah dilakukan didapatkan pada isolat BAL 1
menunjukkan sifat sensitif terhadap antibiotik ampislin, tetrasiklin, dan
sulfametoksazol-trimetroprim dan pada isolat BAL 2 menunjukkan sifat sensitif
terhadap antibiotik erotromisin, tetrasiklin, dan siprofloksasin, sedangkan pada
BAL 3 tidak terdapat antibiotik yang sensitif. Menurut penelitian Hansur et al
(2019), sensitivitas terhadap antibiotik merupakan salah satu faktor terpenting
dalam mengevaluasi keamanan probiotik. Hal ini sesuai dengan penelitian
38
Wahyudi (2020), yang menyatakan bahwa apabila isolat BAL resisten terhadap
antibiotik dan masuk ke dalam saluran pencernaan dapat mengakibatkan transfer
gen resisten terhadap flora usus. Oleh karenanya diperlukan kandidat probiotik
yang sensitif terhadap antibiotik agar didapatkan kandidat probiotik yang aman
untuk digunakan.
IV.3 Keterbatasan Penelitian

Pada penelitian ini medium MRSA yang dibutuhkan untuk digunakan pada
pertumbuhan bakteri asam laktat tidak ada dijual di Pekanbaru sehingga harus
dipesan terlebih dahulu secara online dan cukup lama untuk media tersebut
sampai sehingga memakan waktu dalam penelitian. Kemudian antibiotik yang
digunakan menggunakan antibiotik tablet dan injeksi yang dibeli di apotik dan
dibeberapa apotik yang didatangi tidak ada yang menjual semua antibiotik yang
dibutuhkan dalam penelitian ini sehingga harus pindah ke beberapa apotik lagi
untuk mencari semua antibiotik yang dibutuhkan.
V. KESIMPULAN DAN SARAN
V.1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, maka dapat
disimpulkan bahwa:
1. Pada isolat BAL 1 dan isolat BAL 2 terdapat 3 antibiotik yang sensitif
yaitu ampisilin, tetrasiklin, dan sulfametoksazol-trimmetroprim (BAL 1)
dan eritromisin, tetrasiklin, dan siprofloksasin (BAL 2). Sehingga pada
isolat BAL 1 dan isolat BAL 2 dapat digunakan sebagai kandidat
probiotik.
2. Pada isolat BAL 3 semua resisten kecuali kloramfenikol dengan hasil
intermediet, yang menandakan BAL 3 tidak dapat digunakan sebagai
probiotik.
V.2 Saran
Adapun saran dari peneliti yang telah meyelesaikan seluruh proses
penelitian adalah:
1. Uji sensitivitas dengan metode lain untuk mengetahui perbandingan zona
hambat.
2. Uji sensitivitas BAL terhadap mikroba patogen.
3. Uji sensitivitas BAL dengan menggunakan antibiotik lainnya.
4. Menguji kelayakan isolat BAL 1 dan BAL 2 sebagai kandidat probiotik.
39
DAFTAR PUSTAKA
Amanda, R. A. 2021. Isolasi Bakteri Asam Laktat (BAL) Asal Dadih Serta Uji
Aktivitas Atibakteri Terhadap Escherichia coli. Fakultas Kedokteran
Universitas Abdurrab. [Skripsi].
Anadón, A., Martínez-Larrañaga, M.R., Ares, I., dan Martínez, M.A. 2021.
Prebiotics: Safety and toxicity considerations. in Nutraceuticals: Efficacy,
Safety and Toxicity. 1061–1080.
Authority, E. F. S. 2012. Guidance on the assessment of bacterial susceptibility to
antimicrobials of human and veterinary importance. EFSA Journal.
10(6):1–10.
Brown-Jaque, M., Calero-Cáceres, W. dan Muniesa, M. 2015 ‘Transfer of
antibiotic-resistance genes via phage-related mobile elements’, Plasmid,
79, pp. 1–7.
Cappuccino, J. G. dan Welsh, C. 2019. Microbiology : A Laboratory Manual
(Twelfth Edition). Newyork: Pearson.
CLSI. 2018. M100 Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility
Testing, The Encyclopedia of Astronomy and Astrophysics.
Emmawati, A. et al. 2015. Karakterisasi Isolat Bakteri Asam Laktat dari Mandai
Yang Berpotensi Sebagai Probiotik, Agritech. Bogor.
Fauziah, P. N., Nurhajati, J. dan Chrysanti. 2015. Daya Antibakteri Filtrat Asam
Laktat dan Bakteriosin Lactobacillus bulgaricus KS1 dalam Menghambat
Pertumbuhan Klebsiella pneumoniae Strain ATCC 700603, CT1538, dan
S941. Majalah Kedokteran Bandung. 47(1):35–41.
Fijan, S. 2014. Microorganisms with claimed probiotic properties: An overview of
recent literature. International Journal of Environmental Research and
Public Health. 11(5):4745–4767.
Gad, G. F. M., Abdel-Hamid, A. M. dan Farag, Z. S. H. 2014. Antibiotic
resistance in lactic acid bacteria isolated from some pharmaceutical and
dairy products. Brazilian Journal of Microbiology. 45(1):25–33.
Gillespie, S. H. dan Bamford, K. 2012. Medical Microbiology and Infection at a
Glance. 4th edn. Wiley-Blackwell.
Fitria, G. A. V, 2018. Uji efek kombinasi Antibiotik moksisilin dengan ekstrak
metanol daun sirih (Piper betle L.) terhadap pertumbuhan Staphylococcus
aureus. Universitas Sanata Darma.
Hamida, F. 2015. Seleksi bakteri asam laktat sebagai kandidat probiotik ayam.
Bogor : Institut Teknologi Bogor.
Hamidah, M. N., Rianingsih, L. dan Romadhon. 2019. Aktivitas Antibakteri Isolat
Bakteri Asam Laktat dari Peda dengan Jenis Ikan Berbeda Terhadap E.
40
41
Coli dan S.aureus. Jurnal Ilmu dan Teknologi Perikanan. 1(2):11–21.

Hansur, L., Ugi, D. dan Hambali, H. 2019. Uji Kepekaan Bakteri Asam Laktat
Kandidat Probiotik terhadap Antibiotik Kanamisin, Oleandomisin, dan
Polimiksin B’, eJournal Kedokteran Indonesia. 7(1). 61-65.
Hutkins, R. W. 2019. microbiology and technology of fermented food: second
edition, Microbiology and Technology of Fermented Food: Second
Edition. USA: Wiley Blackwell.
Ibrahim, A., Fridayanti, A. dan Delvia, F. 2017. Isolasi dan Identifikasi Bakteri
Asam Laktat (BAL) Dari Buah Mangga (Mangifera indica L.). Jurnal
Ilmiah Manuntung. 1(2):159-163.
Imperial, I. C. V. J. dan Ibana, J. A. 2016. Addressing the antibiotic resistance
problem with probiotics: Reducing the risk of its double-edged sword
effect. Frontiers in Microbiology. 7.1–10.
Indah, D., Yanti, W. dan Dali, F. A. 2014. Karakterisasi Bakteri Asam Laktat
Yang Diisolasi Selama Fermentasi Bakasang. Jurnal Pengolahan Hasil
Perikanan Indonesia. 16(2):133–141.
Kumar, M. et al. 2012. Probiotic metabolites as epigenetic targets in the
prevention of colon cancer. Nutrition Reviews. 71(1):23–34.
Levy, S. B. 1998. The Challenge of Antibiotic Bacteria. Scientific American.
278:46–53.
Martínez, J. L. dan Baquero, F. 2014. Emergence and spread of antibiotic
resistance: Setting a parameter space. Upsala Journal of Medical
Sciences.119(2):68–77.
Murphy, Emily C. dan Friedman, A. J. 2019. Hydrogen peroxide and cutaneous
biology: Translational applications, benefits, and risks. Journal of the
American Academy of Dermatology. 81(6):1379–138.
Nasution, M. H. B., Ramadhani, S. dan Fachrial, E. 2020. Isolation,
Characterization and Antibacterial Activities of Lactic Acid Bacteria
Isolated From Batak’s Special Food "Dali Ni Horbo”’, Jurnal Natur
Indonesia. 18(1). 1.
Nurbaiti, Rosyidi, A. dan Ali, M. 2016. Skrening Bakteri Asam Laktat yang
Diisolasi dari Usus Ayam Broiler sebagai Kandidat Probiotik untuk
Unggas. Jurnal Ilmu dan Teknologi Peternakan Indonesia. 2(1):144–149.
Nurhayati, L. S., Yahdiyani, N. dan Hidayatulloh, A. 2020. Perbandingan
Pengujian Aktivitas Starter Yogurt Dengan Metode Difusi Sumuran dan
Metode Difusi Cakram.. Jurnal Teknologi Hasil Peternakan. 1(2):41–46.
Ozteber, M. dan Başbülbül, G. 2017. Antibiotic Resistance Patterns of Lactic
Acid Bacteria Isolated From Different Fermented Milk Products of
Turkish Origin. Microbiology Research Journal International. 20(4):1–13.
42
Pato, U. et al. 2017. Antibiotic resistance and antibacterial activity of dadih

originated Lactobacillus casei subsp. Casei r-68 against food borne
pathogens, Biotech. Env. Sc, 19(3). 577–587.
Putri, A. A. et al. 2018. Isolasi Bakteri Asam Laktat Genus Lactobacillus Dari
Feses Rusa Sambar ( Cervus unicolor ). Jimvet E-Issn : 2540-9492. 2(1).
170.
Quinto, E. J. et al. 2014. Probiotic Lactic Acid Bacteria: A Review. Food and
Nutrition Sciences. 05(18):1765–1775.
Rahmiati, R. dan Mumpuni, M. 2017. Eksplorasi Bakteri Asam Laktat Kandidat
Probiotik Dan Potensinya Dalam Menghambat Bakteri Patogen. Elkawnie.
3(2): 141–150.
Ray, B. dan Bhunia, A. 2013. Fundamental food microbiology: Fifth edition,
Fundamental Food Microbiology: Fifth Edition. London: CRC Press.
Sahu, L. et al. 2015. Nutritional and therapeutic significance of protein-based
bioactive compounds liberated by fermentation. Fermented Foods: Part I:
Biochemistry and Biotechnology. (October). 289–302.
Sharma, P. et al. 2014. Antibiotic resistance among commercially available
probiotics. Food Research International. 57:176–195.
Sujadmiko, K. dan Wikandari, P. 2017. Resistensi Antibiotik Amoksisilin Pada
Strain Lactobacillus plantarum B1765 Sebagai Kandidat Kultur Probiotik.
UNESA Journal of Chemistry. 6(1). 6–18.
Sukakarya, I. B. et al. 2021. Antibiotic Resistance of Indigenous Lactic Acid
Bacteria Isolates of Kombucha and Dadih. Jurnal Ilmu dan Teknologi
Pangan. 10(4). 734–745.
Usmiati, S. dan Risfaheri. 2013. Pengembangan Dadih Sebagai Pangan
Fungsional Probiotik Asli Sumatera Barat. J. Litbang Pert. 32(1):20–29.
Wahyudi, F. 2020. Sensitivitas Bakteri Asam Laktat Kandidat Probiotik Hasil
Dari Fermentasi Buah Kakao (Theobroma cacao L.) Terhadap Berbagai
Macam Antibiotik Literature Review. Universitas Airlangga.
Yang, H. et al. 2019. The impact of dietary fiber and probiotics in infectious
diseases. Microbial Pathogenesis. 140. 103931
Yuni, N. M. S. 2013. Isolasi, karakterisasi, dan identifikasi DNA bakteri asam
laktat (BAL) yang berpotensi sebagai antimikroba dari fermentasi markisa
kuning (Passiflora edulis var. flavicarpa). J. Kimia Unand. 2(2):81–91
LAMPIRAN 1
Surat Izin Penelitian
43
44
45
LAMPIRAN 2
Surat Izin Peminjaman Alat Laboratorium
46
LAMPIRAN 3
Surat Peminjaman Reagensia dan Media
47
LAMPIRAN 4
Log Book
48
49
LAMPIRAN 5
Komposisi dan Cara Pembuatan Medium
1. Medium de Mann Rogosa Sharpe Agar (MRSA)

Sebanyak 58,2g bubuk Merck MRSA diencerkan dengan akuades hingga
volume 1L. Larutan dipanaskan dengan menggunakan hot plate sambil diaduk
menggunakan stirrer hingga larutan menjadi homogen. Kemudian medium
disterilkan dengan menggunakan autoclave dengan suhu 121°C selama 15 menit.
Medium MRSA per liternya memiliki komposisi antara lain 20g dextrose,
10g bacteriological peptone, 8g beef extract, 5g sodium acetate, 4g yeast extract,
2g potassium phosphate, 2g ammonium citrate, 1g tween 80, 0,2g magnesium
sulfate, 0,05g manganese, 10g bacteriological agar.
2. Medium Mueller Hinton Agar (MHA)

Sebanyak 17,5g MHA dilarutkan ke dalam 500ml akuades kemudian
dipanaskan dan diaduk hingga homogen. Medium disterilkan dengan autoklaf
pada suhu 121°C selama 15 menit. Medium MHA per liternya terdiri dari 300g
beef dehydrate infusion, 17,5g casein hydrolysate, 1,5g amilum, 17g agar.
50
LAMPIRAN 6
Standar McFarland 1
McFarland dibuat dengan cara mengambil sebanyak 1 ml larutan BaCl2

1% dan 9,95ml H2SO4 1% selanjutnya dihomogenkan. Standar ini dilakukan
untuk menggantikan perhitungan jumlah bakteri satu per satu juga untuk
memperkirakan kepadatan sel yang nantinya akan digunakan pada prosedur
pengujian antibakteri (Cappuccino dan Welsh, 2019)
51
LAMPIRAN 7
Proses Pengenceran Antibiotik
A B
Keterangan: (A). Beberapa antibiotik, (B). Penggerusan antibiotik, (C). Hasil

pengenceran antibiotik
52
LAMPIRAN 8
Tahapan Uji Sensitivitas
A B C
D E
Keterangan: (A). Pembuatan Medium MHA, (B). Penggoresan BAL pada medium
MHA, (C). Pembuatan lubang sumuran, (D). Inokulasi antibiotik pada lubang
sumuran, dan E= Pengukuran zona hambat
53
LAMPIRAN 9
Hasil Uji Sensitivitas BAL Asal Dadih Terhadap Beberapa Antibiotik
54
55
Keterangan: (A). BAL 1 ulangan 2, (B). BAL 1 ulangan 3, (C). BAL 2 ulangan 2,
(D). BAL 2 ulangan 3, (E). BAL 3 ulangan 2, dan (F). BAL 3 ulangan 3.

Skripsi Lenisha Tantia

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Skripsi Lenisha Tantia

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

UJI SENSITIVITAS BAKTERI ASAM LAKTAT ASAL DADIH

TERHADAP BEBERAPA ANTIBIOTIK

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER

2.1.5 Mekanisme Resistensi Bakteri Asam Laktat Terhadap Antibiotik 10

Tabel 1. Orisinalitas Penelitian................................................................................4

Gambar 1. Jalur Heterofermentatif dan Heterofermentatif....................................8

Lampiran 1. Surat Izin Peminjaman LaboratoriumError! Bookmark not defined.

Yang bertanda tangan dibawah ini:

Pekanbaru, 13 Agustus 2022

Alhamdulillahirobbil’alamin, puji syukur kehadirat Allah SWT dengan

Pekanbaru,13 Agustus 2022

I.1 Latar Belakang

mampu memproduksi asam organik, menurunkan pH lingkungannya dan

I.2 Perumusan Masalah

I.3 Tujuan Penelitian

I.4 Manfaat Penelitian

I.4.2 Bagi Program Studi Pendidikan Dokter Universitas Abdurrab

I.4.3 Bagi Institusi Terkait

I.4.4 Bagi Masyarakat

I.5 Orisinalitas Penelitian

II.1 Landasan Teori

II.1.2 Karakteristik dan Klasifikasi Bakteri Asam Laktat

6. Streptococcus, merupakan bakteri Gram positif yang berbentuk coccus,

II.1.3 Mekanisme Fermentasi

Enzim Aldolase Silulosa-5P + CO2

ATP Triosa-3P Asetil-P

Laktat Laktat Asetat (etanol)

Jalur Homofermentatif Jalur Heterofermentatif

2.1.4 Senyawa Metabolit Bakteri Asam Laktat Sebagai Probiotik

2.1.5 Mekanisme Resistensi Bakteri Asam Laktat Terhadap Antibiotik

Gambar 2. Mekanisme Resistensi Antibiotik di BAL

Pada gambar 2 menunjukkan mekanisme dimana beberapa bakteri dapat

2.1.5.1 Resistensi Intrinsik

(siprofloksasin dan asam nalidiksat), mupirosin, tetrasiklin, dan aminoglikosida

2.1.5.2 Resistensi Ekstrinsik

bahwa bakteri tunggal dapat memiliki banyak plasmid Beberapa peneliti

Gambar 3. Mekanisme Transfer Gen Horizontal Pada BAL

2.1.6 Mekanisme Resistensi Antibiotik Terhadap Bakteri Asam Laktat

2.1.6.1 Resistensi Intrinsik/Fenotif

setiap gen bertanggung jawab terhadap resistensi intrinsik. Akibatnya, bakteri

d. Penyusunan ulang metabolisme intraseluler

2.1.6.2 Resistensi Ekstrinsik/Genotif

Gambar 4. Mekanisme Resistensi Antibiotik Intrinsik pada Probiotik

Gambar 5. Mekanisme Resistensi Antibiotik Ekstrinsik pada Probiotik

(Levy, 1998 dalam Sharma et al, 2014)

Bakteri Asam Laktat

Resisten terhadap antibiotik

Gambar 6. Kerangka Teori

2.3 Kerangka Konsep

Beberapa jenis antibiotik

Gambar 7. Kerangka Konsep

2.4 Hipotesis Penelitian

III.1 Jenis dan Rancangan Penelitian

R9 : kelompok eksperimen 9 X9 : perlakuan 9 (antibiotik amoksisilin)

Gambar 8. Rancangan Penelitian

III.2 Tempat dan waktu penelitian

III.2.2 Waktu Penelitian

III.3 Variabel Penelitian dan Definisi Operasional

III.4 Alat dan Bahan Penelitian

III.5 Cara penelitian

III.5.2 Identifikasi Bakteri Asam Laktat

III.5.3 Pewarnaan Gram

III.5.4 Pembuatan Konsentrasi dari Beberapa Antibiotik