Machine Translated by Google
PENELITIAN ASLI terbit:
Diedit oleh:
Steven Liang,
Rumah Sakit Umum Massachusetts,
Sekolah Kedokteran Harvard,
Amerika Serikat
Diperiksa oleh:
MingfengBai,
Pusat Medis Universitas Vanderbilt,
Amerika Serikat
Taman Kyeongsoon,
Universitas Chung-Ang, Korea Selatan
*Korespondensi:
Aixi Yu
yuaixi@whu.edu.cn
Bagian khusus:
Artikel ini dikirim ke
Obat dan Farmasi
Kimia,
bagian dari jurnal
Perbatasan dalam Kimia
Diterima: 22 Juli 2019
Diterima: 08 Oktober 2019
Diterbitkan: 22 Oktober 2019
Kutipan:
Li Y, Hu X, Yi W, Li D, Guo Y, Qi B dan
Yu A (2019) Pencitraan
Fluoresensi NIR-II pada Avulsi
dan Nekrosis Kulit. Depan. kimia
7:696. doi: 10.3389/fchem.2019.00696
Perbatasan dalam Kimia | www.frontiersin.org
22 Oktober 2019 doi: 10.3389/
fchem.2019.00696
Pencitraan Fluoresensi Kulit NIR-II
Avulsi dan Nekrosis
Yizhou Li, Xiang Hu, Wanrong Yi, Daifeng Li, Yaqi Guo, Baiwen Qi and Aixi Yu*
Departemen Trauma Ortopedi dan Bedah Mikro, Rumah Sakit Zhongnan Universitas Wuhan, Wuhan, China
Avulsi kulit umumnya terlihat pada individu yang terpapar gaya geser yang berat.
Detasemen jaringan subkutan dan patah tulang biasanya menyertai avulsi kulit.
Dengan demikian, estimasi luas jaringan yang rusak sangat penting. Saat ini, kelangsungan
hidup kulit dan jaringan subkutan ditentukan oleh pengamatan klinis, dan pengamatan ini
selalu meremehkan luas sebenarnya dari kulit yang avulsi. Di sini, kami mensintesis probe
inovatif, CH1055-GRRRDEVDK (CH1055-GK), yang secara khusus dapat berikatan dengan
caspase-3 untuk menggambarkan avulsi kulit dan menentukan daerah nekrotik.
Tes afinitas serapan dan pengikatan kami dalam sel apoptosis dan evaluasi probe ex vivo dan
in vivo menunjukkan bahwa probe memiliki kemampuan yang kuat untuk mengikat caspase-3
dalam model avulsi kulit dan dengan jelas mendeteksi area nekrotik pada kulit yang avulsi.
Selain itu, intensitas fluoresensi yang meningkat dari probe pada kulit yang avulsi menunjukkan
area yang terkena lebih besar daripada yang ditentukan oleh pengamatan klinis pada tikus
hidup. Akibatnya, hasil kami menunjukkan bahwa pengamatan probe bertarget caspase-3
CH1055-GK melalui pencitraan NIR-II memungkinkan deteksi avulsi kulit yang jelas pada
subjek, menunjukkan potensinya sebagai alat pencitraan untuk diagnosis dini avulsi kulit dan
penentuannya. dari margin nekrotik.
Kata kunci: Pencitraan fluoresensi NIR-II, avulsi kulit, nekrosis, sel apoptosis, caspase-3
PERKENALAN
Insiden avulsi kulit meningkat drastis akibat kecelakaan lalu lintas dan kecelakaan mesin di industri modern (Tosti dan
Eberlin, 2018; Weinand, 2018). Area luka avulsi kulit yang luas, dikombinasikan dengan syok atau patah tulang yang parah,
menyebabkan kerusakan jaringan lunak yang parah dan kehilangan banyak darah (Latifi et al., 2014; Weinand, 2018). Kulit
dan jaringan subkutan terlepas dari fasia dan struktur muskuloskeletal di bawahnya. Perawatan klinis dari cedera ini
memakan waktu dan sering tertunda sehingga flap yang avulsi mudah berkembang menjadi iskemia dan akhirnya menjadi
nekrosis kulit sekunder karena kerusakan sirkulasi darah.
Cedera avulsi dapat menyebabkan morbiditas dan bahkan kematian yang tinggi (Olingy et al., 2017; Sakai et al., 2017).
Sangat penting untuk mengidentifikasi kelangsungan hidup kulit avulsi seakurat mungkin untuk meningkatkan tingkat
kelangsungan hidup kulit avulsi secara efisien. Dokter biasanya menentukan viabilitas kulit avulsi melalui pemeriksaan
perdarahan kulit, warna kulit, reaksi tekanan, dan isi ulang mikrokapiler. Namun, gejala klinis ini seringkali tidak cukup
akurat untuk memprediksi tingkat cedera avulsi kulit (Gagnier et al., 2013; Latifi et al., 2014; Sen et al., 2017), dan hal ini
dapat menyebabkan eksisi ekstensif pada avulsi. kulit dan jaringan lunak atau infeksi sekunder dan nekrosis. Oleh karena
itu, teknik pencitraan menjadi penting untuk membantu evaluasi viabilitas kulit avulsi dan nekrosis. Meskipun teknik
pencitraan klinis saat ini, termasuk computed tomography (CT) dan magnetic resonance imaging (MRI), telah digunakan
untuk menilai
1 Oktober 2019 | Jilid 7 | Pasal 696
Machine Translated by Google

Li dkk. Pencitraan NIR-II dan Avulsi Kulit

lokasi, luas, dan tingkat keparahan cedera jaringan akut atau et al., 2017b, 2018; Yang et al., 2018; Zeng et al., 2018).
diterapkan untuk mendeteksi peradangan kulit dan kanker kulit Singkatnya, aplikasi probe molekuler NIR-II berdampak
(MacFarlane et al., 2017; Ueno et al., 2018), mereka jarang langsung pada bidang penelitian biomedis dan klinik.
terlibat dalam evaluasi avulsi dan nekrosis kulit. Dengan
demikian, penting untuk mengeksplorasi teknik pencitraan Pada awal avulsi kulit, jaringan lunak hancur parah, dan
yang menjanjikan yang dapat membantu penilaian awal avulsi dan nekrosis pembuluhkulit.
darah masif tiba-tiba hancur sehingga menimbulkan
Dalam beberapa tahun terakhir, manfaat signifikan dari tingkat kerusakan hipoksia dan iskemik, dan dengan demikian,
pencitraan molekuler telah ditunjukkan dalam operasi yang metabolisme sel diubah menjadi kondisi anaerobik (Siemiow
ditargetkan dengan skrining diagnostik molekuler pra operasi dan Arslan, 2004) . ). Selain itu, setelah kerusakan hipoksia
dan operasi yang dipandu gambar fluoresensi (Reinsmith et dan iskemik, terdapat fase utama kematian sel yang terlibat
al., 2013; Iglesias et al., 2014; Walton et al., 2017; Li et al., 2019; dalam peradangan sel dan apoptosis, yang diatur oleh
Zeng et al., 2019). Pencitraan fluoresensi NIR dapat memberikan caspase-3 dan diaktifkan di jalur intrinsik ( Taylor et al., 2008;
informasi fisiologis dan patologis pada tingkat seluler dan Rogers et al., 2017; Strzyz, 2017; Merenungkan dan Boise,
jaringan yang dapat diterapkan dalam biologi dan kedokteran 2019). Caspase-3 bukan hanya poros atau pemicu utama dalam
untuk mendiagnosis atau mengobati penyakit klinis mengatur inisiasi dan propagasi tahap awal rangkaian
(Ntziachristos et al., 2005; Pansare et al., 2012; Hong et al., apoptosis tetapi memiliki situs pengenalan khusus, DEVD ( Wu
2015 ; Lin et al., 2019). Berdasarkan emisi fluoresensi, jendela et al., 2019). Khususnya, motif tetrapeptida ini dapat diikat
pencitraan NIR dibagi menjadi dua jendela pencitraan yang secara khusus ke caspase 3 aktif, dan banyak peptida DEVD
berbeda (yang pertama, NIR-I, 750–900 nm; yang kedua, NIR-II telah dilaporkan digunakan untuk mengevaluasi aktivasi
1.000–1.700 nm) (Hong et al., 2014; Antaris et al., 2017). caspase-3 (Srinivasula et al., 2001; Casares et al., 2005; Scabini et al. , 2011
Dibandingkan dengan jendela NIR-I, jendela NIR-II telah secara Di sini, kami pertama-tama menggunakan probe NIR-II
dramatis meningkatkan kualitas pencitraan dan rasio signal- penargetan caspase-3 (CH1055-GK) untuk mendeteksi avulsi
to-noise karena hamburan cahaya dan autofluoresensi yang kulit dan nekrosis kulit avulsi pada tahap trauma awal. Menurut
minimal. Pencitraan NIR-II memiliki potensi besar untuk hasil kami, CH1055-GK diselidiki untuk deteksi akurat avulsi
pencitraan jaringan dalam dengan peningkatan resolusi spasial kulit dan nekrosis pada model tikus avulsi kulit. Hasil positif
dan peningkatan kontras (Smith et al., 2009; Sun et al., 2016). untuk CH1055-GK ini juga menjadikannya probe NIR-II bertarget
Saat ini, serangkaian probe neon NIR-II termasuk molekul kecil caspase-3 yang menjanjikan untuk terjemahan klinis.
dan titik-titik kuantum sedang digunakan secara aktif untuk pencitraan otak, pembuluh darah, dan limfatik dan untuk operasi yang dipandu pe

Bagan 1 | Struktur kimia CH1055-GK dan kontrol CH1055-PEG.

Perbatasan dalam Kimia | www.frontiersin.org 2 Oktober 2019 | Jilid 7 | Pasal 696

Machine Translated by Google
Li dkk.
BAHAN DAN METODE
Sintesis dan Karakterisasi Probe NIR-II Semua reagen kimia dibeli
dari sumber
komersial (seperti Aldrich, Ameresco, Energy Chemical) dan digunakan
tanpa pemurnian lebih lanjut kecuali dinyatakan lain. HPLC dilakukan
pada Dionex HPLC System (Dionex Corporation) yang dilengkapi dengan
pompa gradien GP50 dan detektor UV-Vis array dioda in-line. Peptida GK
(1.112 DKa) dibeli dari GL Biochem (Shanghai) Ltd. Literatur sebelumnya
dapat dirujuk untuk detail sintesis CH1055 (0.969 KDa) (Antaris et al.,
2016). Sintesis CH1055-GK atau CH1055-PEG (sebagai kontrol) dilakukan
sebagai berikut. Larutan CH1055 (100 µg, 0,103 µmol) dalam DMF kering
(N, N-Dimethylformamide) diaduk selama 10 menit, dan kemudian NHS (N-
hydroxysuccinimide) (59,27 µg, 0,515 µmol) dan EDCI (1-etil-3 -(3-
dimethylaminopropyl)carbodiimide) (98,73 µg, 0,515 µmol) ditambahkan
ke dalam campuran dan diaduk selama 2 jam di bawah perlindungan N2 .
Peptide GK (581.44 µg, 0.515 µmol) atau COtBu-PEG4-NH2 (Polyethylene
glycol, 0.989 KDa, Ponsure Biological) (165.52 µg, 0.515 µmol) dan DIPEA
(N, N diisopropylethylamine) (15 µL) kemudian ditambahkan ke dalam
reaksi larutan dan diaduk semalaman. Produk akhir dimurnikan dengan
HPLC. Kondisi HPLC: eluen: air/asetonitril (mengandung 0,1% TFA, dari
70 hingga 95%); selama 22 menit dengan laju alir 1 mL minÿ1 dan deteksi
pada 254 nm.
GAMBAR 1 | Mengukur hasil MALDI-TOF-MS untuk CH1055-GK.
Perbatasan dalam Kimia | www.frontiersin.org
Pencitraan NIR-II dan Avulsi Kulit
Kultur Sel dan Induksi Apoptosis Sel Sel HACAT, HUVEC, dan HSF
manusia (iCell Bioscience Inc.) dikultur dalam DMEM (Dulbecco's Modified
Eagle Medium)/DMEM-F12 (Dulbecco's Modified Eagle Medium/Nutrient
Mixture F-12, Hyclone) ditambah dengan 10 atau 15% FBS (Fetal Bovine
Serum, VWR, Radnor, PA) dan antibiotik (100 U mLÿ1 penisilin) pada
inkubator 37ÿC dengan 5% CO2. Sel diberi makan setiap 1–2 hari dan
disubkultur ketika mereka mencapai pertemuan 70–80%. Untuk induksi
apoptosis, sel dikultur dalam 6-sumur selama 24 jam, dan kemudian 2
mL media kultur dicampur dengan 20 µmol/L Adriamycin (Thermo Fisher
Scientific Inc.) ditambahkan ke masing-masing dari enam sumur dan
dikultur untuk 6 dan 12 jam pada inkubator 37ÿC dengan 5% CO2 (Crowley
et al., 2016).
Deteksi Cytometric Apoptosis Setelah perawatan dengan Adriamycin,
media kultur dihilangkan, dan kemudian sel dicuci dua kali dengan PBS
pra-pendinginan (Saline buffer fosfat, Teknologi Biomedis Gino).
Selanjutnya, sel dipanen dan disuspensikan kembali dalam 300 µl binding
buffer yang mengandung 5 µl Annexin V-FITC (Fluorescein Isothiocyanate,
Sungene Biotech) serta 5 µl PI (Propidium Iodide, Sungene Biotech), dan
kemudian diinkubasi pada suhu kamar (RT) dalam gelap selama 15 menit.
Akhirnya, kami menjalankan setiap sampel sel, dan datanya dikuantifikasi
dengan flow cytometer.
3 Oktober 2019 | Jilid 7 | Pasal 696
Machine Translated by Google

Li dkk. Pencitraan NIR-II dan Avulsi Kulit

Penyerapan Sel dan Studi Afinitas Pengikatan Probe Pengenalan Model Avulsi Kulit Tikus betina BALB/
CH1055-GK dilarutkan dalam PBS dengan 5% dimetil c (nu/nu) diperoleh dari Charles River Laboratories
sulfoksida (DMSO, Teknologi Biomedis Gino) hingga (Beijing Vital River Laboratory Animal Technology
ÿ1
konsentrasi 0,5 nm µL . Untuk studi serapan, sel-sel apoptosis Co., Ltd.) dan disimpan dalam kondisi steril sebelum
secara acak ditugaskan ke masing-masing kelompok dan membuat model avulsi kulit. Hewan-hewan itu
diinkubasi dengan CH1055-GK (probe 2 nM per 200 ÿL PBS ditempatkan di kandang dengan alas serbuk gergaji
per sampel) dalam pelat kultur sel 6-sumur (Costar, Corning, di ruangan ber-AC dan diberi makan diet laboratorium standar.
NY). Untuk kelompok pemblokiran, inkubasi 1 jam dengan Dua puluh tikus BALB / c (nu / nu) betina (berusia 7–8
peptida GK (200 nM) dilakukan sebelum inkubasi dengan minggu, 20–25 g) digunakan untuk membuat model tikus
CH1055-GK. Pada waktu inkubasi yang berbeda (0–24 jam), avulsi kulit sesuai dengan protokol sebelumnya ( Milcheski
sampel sel dicuci tiga kali dengan PBS dingin, dan kemudian et al., 2013; Chin et al., 2017 ). Tikus yang dibius diperbaiki di bidang yang
sel apoptosis dikumpulkan menggunakan larutan detasemen Setelah menghilangkan rambut di sisi punggung tikus dengan
sel berbasis enzim dalam tabung PCR (250 µl). Selanjutnya, pisau cukur listrik, daerah bedah didesinfeksi dengan etil
tabung PCR disentrifugasi selama 3 menit dengan kecepatan alkohol 75%. Luka kulit dengan ketebalan penuh (4 × 5 cm)
400 r/min. Supernatan kemudian dihilangkan menggunakan dibuat pada kulit punggung. Setelah itu, semua kulit
sistem NIR-II yang dibeli dari Suzhou NIR-Optics Technologies dipisahkan dari jaringan subkutan dengan gagang pisau
(Suzhou, China). Afinitas pengikatan diuji dengan menyiapkan bedah, kemudian kulit ditempel dengan batang kayu kecil
konsentrasi peptida GK yang berbeda dalam PBS (1 × 10ÿ3 satu lubang. Kulit kemudian ditarik dengan hati-hati dengan
-10ÿ9 M per 200 µL PBS per sampel) sebagai agen penghambat mesin penegang (15 N) selama 10 detik. Akhirnya, kulit yang
untuk CH1055-GK. Sel-sel apoptosis diinkubasi dengan agen terluka dengan ketebalan penuh dijahit sesekali kembali ke
penghambat selama 1 jam dan kemudian diinkubasi dengan area primordial. Metode yang sama digunakan untuk semua
CH1055-GK (probe 2 nM per 200 µL PBS per sampel) selama tikus. Semua tikus menerima suntikan garam dalam jumlah
8 jam. Langkah-langkah selanjutnya dilakukan seperti yang yang sama sebelum ditempatkan kembali di kandang, dan
dijelaskan di atas untuk percobaan pengambilan sel. Terakhir, citra NIR dikumpulkan
pernapasan dengan
serta suhu sistem
tubuh tikus NIR-II.
dicatat. Tikus ditempatkan di kandang

GAMBAR 2 | ( A – C ) Pengamatan morfologi sel di bawah mikroskop cahaya dan sitometri aliran yang representatif menghasilkan sel normal (kiri) dan apoptosis (kanan).
( D ) Penyerapan sel dan afinitas pengikatan probe NIR-II (CH1055-GK) dalam sel apoptosis (HACAT, HUVEC, dan HSF) pada waktu inkubasi yang berbeda (0–24 jam). ( E )
Afinitas pengikatan CH1055-GK diukur menggunakan peptida GK (1 × 109 -1 × 103 M) sebagai agen penghambat. Rata-rata ± SD, sumbu x: waktu inkubasi (h) dan agen
penghambat (M), sumbu y: rata-rata intensitas fluoresensi NIR-II dari sel-sel apoptosis.

Perbatasan dalam Kimia | www.frontiersin.org 4 Oktober 2019 | Jilid 7 | Pasal 696

Machine Translated by Google
Li dkk. Pencitraan NIR-II dan Avulsi Kulit

Pencitraan NIR-II in vivo dan ex vivo pada Avulsi Kulit Untuk
mengevaluasi
pencitraan NIR-II pada avulsi kulit dalam studi in vivo, 100 µL
ÿ1
CH1055-GK (0,5 nM µL ke dalam mencit ) diberikan
melalui injeksi vena ekor sebagai kelompok eksperimen. 100 µL
CH1055-GK blocking (dengan 1 µM blocking agent) dan 100 µL
CH1055-PEG juga disuntikkan ke mencit sebagai kelompok
pemblokiran atau kontrol.Semua mencit model avulsi kulit dan
secara acak dibagi menjadi tiga kelompok (kelompok eksperimen ,
kelompok kontrol dan kelompok pemblokiran) (n = 3 untuk setiap
kelompok) Selama injeksi dan pencitraan, mencit dibius
menggunakan aliran oksigen 2 L minÿ1 dengan isofluran 2%.
Dalam pencitraan ex vivo, sampel kulit avulsi segar (ÿ3 mg berat
basah) diperoleh dengan gunting bedah, dan kemudian sampel ini,
secara acak diberikan ke kelompok eksperimen, pemblokiran, dan
kontrol, diinkubasi dengan CH1055-GK, agen pemblokiran, atau
CH1055-PEG, masing-masing. Protokol inkubasi sama dengan yang
digunakan dalam percobaan pengambilan sel. Untuk pencitraan di
jendela NIR-II, filter 1.000 LP digunakan untuk memperoleh
pencitraan fluoresensi, dan waktu pemaparan yang sesuai adalah
20 ms. Tikus dan sampel dicitrakan pada titik waktu yang berbeda
(2, 6, 12, 24 jam).
MRI Tikus
Semua subjek dipindai pada sistem MRI Bruker 7T/20 cm
(Ettlingen, German), menggunakan body coil dengan diameter 72 mm
untuk mengirimkan pulsa frekuensi radio dan kumparan permukaan
quadrature dengan diameter 40 mm untuk menerima sinyal. Selama
pemindaian MRI, tikus dibius dengan isofluran 1,5-2,5%. Film
pramuka MRI digunakan untuk memastikan bahwa lutut sejajar
dengan sumbu tulang paha dan perolehan irisan langsung tegak
lurus dengan permukaan kartilago artikular dataran tinggi tibialis
medial. Semua gambar diperoleh menggunakan urutan T2ÿ
konvensional - weighted gradient-recall echo (GRE) dengan sudut
flip 180 derajat, waktu pengulangan 500 ms, dan waktu gema 12 ms.
Waktu pemindaian adalah 16 menit, menggunakan bidang pandang
3,6 cm dan ketebalan irisan 1 mm. Setelah pemindaian MRI, data
diproses oleh perangkat lunak MRI versi 1.40.
Sitotoksisitas CH1055-GK in vitro dan in
vivo
Sitotoksisitas CH1055-GK dievaluasi dengan uji kit
penghitungan sel-8 (CCK-8) (Thermo Fisher Scientific
Inc.) pada HUVEC, HSF, dan HACAT manusia.
Pertama, 100 µL DMEM/F12 ditambah dengan 10% FBS
ditambahkan ke masing-masing 96-sumur, dan kemudian sel-sel ini
dikultur semalaman pada inkubator 37ÿC dengan 5% CO2. Kedua,
sel diinkubasi dengan CH1055-GK pada konsentrasi berbeda (0, 2,
4, 8, 16 µmol/L) dari 2 hingga 24 jam. Ketiga, 10 ÿL larutan CCK-8
ditambahkan ke masing-masing 96-sumur dan diinkubasi selama 2 jam.
Setelah menambahkan 200 µL DMSO (VWR, Radnor, PA) dan
dikocok selama 15 menit pada kecepatan rendah (50 rpm), viabilitas sel ditentuka

GAMBAR 3 | Pencitraan NIR-II CH1055-GK, PEGylated CH1055, dan agen penghambat in vivo dan ex vivo. ( A ) Foto representatif dan gambar NIR-II (CH1055-GK, CH1055-
PEG, dan Blocking) pada 2, 6, 12, dan 24 jam setelah injeksi vena ekor pada model avulsi kulit. Pencitraan ex vivo juga dilakukan pada interval waktu yang sama. (B,C) Perbandingan
kuantitatif intensitas NIR pada kulit avulsi dari berbagai kelompok. N = 6, rata-rata ± SD. *** P <0,001, ** P <0,01. Sumbu x menunjukkan interval waktu, dan sumbu y adalah intensitas
fluoresen. ( D – F ) Perbandingan antara intensitas fluoresen rata-rata in vivo dan ex vivo. Sumbu x mewakili interval waktu; sumbu y adalah rata-rata jumlah intensitas fluoresen. 80
mW cmÿ2 , 20 ms, LP 1000.

Perbatasan dalam Kimia | www.frontiersin.org 5 Oktober 2019 | Jilid 7 | Pasal 696

Machine Translated by Google
Li dkk. Pencitraan NIR-II dan Avulsi Kulit

menggunakan detektor ELISA otomatis (DR-200Bs, Diatek) pada kegelapan di RT, diikuti oleh tiga pencucian PBS. Setelah itu, 5%
450 nm. Semua sampel diulang sebanyak lima kali. Untuk BSA (Bovine Serum Albumin, Roche) digunakan untuk memblokir
sitotoksisitas in vivo, probe CH1055-GK (10 mg kgÿ1 ) disuntikkan sel selama 1 jam pada suhu kamar. Antibodi anti-manusia tikus
ke tikus melalui vena ekor sebagai kelompok eksperimen, dan primer (pengenceran 1:1.000, Abcam, ab49822) ditambahkan ke
volume PBS yang sama diberikan ke kelompok kontrol. Setelah setiap sumur dan diinkubasi semalaman pada suhu 4ÿC. Setelah
itu, tikus di-eutanasia, dan organ utamanya (Jantung, Hati, Limpa, dibilas dengan PBS, sel diinkubasi dengan antibodi anti-tikus
Perut, Paru-paru, Ginjal, Otak, dan Usus) dipanen 24 jam pasca kambing terkonjugasi CY3 (pengenceran 1:50, Aspen, AS-1109).
injeksi, dan pewarnaan H&E dilakukan untuk mengevaluasi Setelah inkubasi lagi selama 2 jam pada suhu 37ÿC, sel-sel dicuci
toksisitas in vivo. lagi tiga kali dengan PBS dan dirawat selama 5 menit dengan 50–
100 µl DAPI (No. AS1075; Aspen Biotechnology) untuk menodai
Pewarnaan Imunofluoresensi Untuk pewarnaan inti sel. Akhirnya, hasilnya diperiksa di bawah mikroskop fluoresensi (MircoPu
imunofluoresensi, suspensi sel ditambahkan ke kaca penutup dan
diinkubasi pada inkubator 37ÿC dengan 5% CO2 selama 2 jam,
diikuti dengan pencucian dalam PBS selama 3 × 5 menit. Sel Analisis Statistik Sinyal
kemudian ditempatkan ke dalam paraformaldehyde 4% selama 30 fluoresensi NIR dikuantifikasi dengan perangkat lunak ImageJ
menit di RT dan dicuci 3 kali dengan PBS. Selanjutnya, sel 1.38x (National Institutes of Health, Bethesda, MD). Region-of-
diinkubasi dengan buffer permeabilisasi 50-100 µl (0,5% Triton interest (ROI) ditentukan secara manual di sekitar sambungan,
X-100 dalam PBS) selama 10 menit di RT dan dicuci 3 kali dengan dan diperoleh sinyal rata-rata dalam ROI. Data diberikan sebagai
PBS masing-masing selama 5 menit. Sel kemudian diinkubasi dengan rata-rata ± SD (standar
larutan hidrogen deviasi).
peroksida Analisis
3% selama 20statistik
menit

GAMBAR 4 | Evaluasi deteksi avulsi kulit melalui pencitraan NIR dan MRI. Gambar diambil dalam posisi terlentang. ( A ) Gambar NIR CH1055-GK pada avulsi kulit dan kulit normal;
Analisis MRI berbobot T2 dari avulsi kulit dan kulit normal; Pewarnaan H&E atau TUNEL pada avulsi kulit dan kulit normal. (B) Distribusi intensitas fluoresensi pada organ berikut
(ditunjukkan dengan nomor): 1, jantung; 2, hati; 3, limpa; 4, perut; 5, paru-paru; 6, ginjal; 7, kulit avulsi; 8, kulit normal (N = 2).
( C ) Perbandingan kuantitatif intensitas fluoresensi pada avulsi kulit dan kulit normal. N = 2, rata-rata ± SD, *** p <0,001. ( D ) Perbandingan kuantitatif intensitas fluoresensi pada organ
berikut (ditunjukkan dengan angka dalam B): 1, jantung; 2, hati; 3, limpa; 4, perut; 5, paru-paru; 6, ginjal; 7, kulit avulsi; 8, kulit normal (N = 2). *** p <0,001. (E) Analisis Western blot
menunjukkan ekspresi caspase-3 pada kulit normal dan avulsi. 80 mW cmÿ2 , 20 ms, LP 1000. Bilah skala, 100 µm.

Perbatasan dalam Kimia | www.frontiersin.org 6 Oktober 2019 | Jilid 7 | Pasal 696

Machine Translated by Google

Li dkk. Pencitraan NIR-II dan Avulsi Kulit

dilakukan dengan menggunakan uji-t Student dua sisi. Signifikansi
statistik diberikan untuk nilai-P <0,001, 0,01, dan 0,05.
HASIL DAN DISKUSI
Desain dan Mekanisme Deteksi CH1055-GK Seperti
dilaporkan
sebelumnya, avulsi kulit menyebabkan kerusakan jaringan lunak dan
pembuluh darah, yang mungkin terkait dengan berbagai proses
biologis termasuk iskemia dan hipoksia (Ballestin et al., 2018). Oleh
karena itu, jalur apoptosis yang dimediasi oleh caspase 3 diinduksi
dan dapat memberikan pengaruh langsung pada viabilitas kulit yang
avulsi (Liu et al., 2015). Dalam beberapa tahun terakhir, probe telah
digunakan untuk menargetkan dan memantau aktivitas caspase-3
(Shaulov-Rotem et al., 2016), tetapi tidak ada penelitian yang
menunjukkan probe molekul kecil yang dapat digunakan untuk
menemukan avulsi kulit dan bahkan untuk membedakan daerah
nekrotik melalui penargetan caspase-3. Oleh karena itu, kami
berhipotesis bahwa jika probe molekul kecil cukup baik untuk
memasuki kulit untuk mendeteksi avulsi dan nekrosis kulit. Di satu
sisi, aplikasi fluorophore CH1055 molekul kecil NIR-II telah dilaporkan
membuat kemajuan besar dalam pencitraan tumor molekuler dan
pembedahan dengan panduan gambar (Zhang et al., 2016; Yang et
al., 2017). Selain itu, beberapa keunggulan unik CH1055, termasuk
fluoresensi otomatisnya yang rendah, rasio sinyal-latar belakang
yang tinggi, dan penetrasi jaringan yang lebih dalam, membuatnya cocok untuk pe
Di sisi lain, peptida GK adalah penghubung peptida caspase-3 yang
dapat dikenali dengan DEVD situs spesifik dan dianggap sebagai
urutan peptida spesifik yang dapat digunakan untuk mendeteksi
secara kuantitatif aktivitas caspase-3 dalam sel apoptosis (Yan et al . , 2014).
Berdasarkan temuan ini, kami berhipotesis bahwa pewarna
fluoresen molekul kecil CH1055 terkonjugasi dengan peptida GK
akan menargetkan caspase-3 dan secara visual mencerminkan avulsi
kulit serta daerah nekrotik (Skema 1).
Sintesis dan Karakterisasi Probe NIR-II Probe NIR-II CH1055-GK
dan CH1055-
PEG (sebagai kontrol) disintesis dengan CH1055 dan peptida
GRRRDEVDK atau kontrolnya COtBu-PEG4-NH2 (Bagan 1 dan
Gambar S1). Seperti yang dilaporkan dalam pekerjaan kami
sebelumnya, pita serapan NIR CH1055-WYRGRL (CH1055-WL)
menunjukkan stabilitas tinggi dan kemampuan fotostabilitas, yang
memungkinkan probe memancarkan cahaya stabil.

GAMBAR 5 | Pewarnaan imunofluoresensi pengikatan CH1055-GK ke caspase-3 dalam sel apoptosis. Sinyal imunofluoresen berikut ditunjukkan: (A) pewarnaan
fluoresensi biru mewakili nukleus; (B) sinyal fluoresensi hijau menunjukkan probe berlabel FITC (FITC-CH1055-GK); ( C ) sinyal fluoresensi merah mengungkapkan kombinasi
caspase-3 dengan antibodi anti-manusia tikus dan Cy3 dengan antibodi sekunder anti-tikus kambing; (D) gambar yang ditumpangkan. Bilah skala, 100 µm.

Perbatasan dalam Kimia | www.frontiersin.org 7 Oktober 2019 | Jilid 7 | Pasal 696

Machine Translated by Google
Li dkk.
fluoresensi pada organisme hidup dalam waktu yang lama (Yi et al., 2019).lebih rendah dari itu tanpa agen pemblokiran. Uji afinitas pengikatan
Demikian pula dalam penelitian ini, kami merancang probe CH1055-
GK, dan hasil pengukuran MALDI-TOF-MS untuk CH1055-GK adalah
2,064 KDa, sedangkan MW yang diharapkan adalah 2,063 KDa
(Gambar 1). Selanjutnya, hasil pengukuran MALDI-TOF MS untuk
CH1055-PEG adalah 1.958 KDa, sedangkan MW yang diharapkan
adalah 1.957 KDa (Gambar S2).
Penyerapan Sel Probe dan Afinitas Pengikatan dalam Sel Apoptosis
Kami melakukan
pengambilan sel dan uji afinitas pengikatan dari probe molekul kecil
(CH1055-GK) dengan tiga sel apoptosis (HACAT, HUCEC, dan HSF).
Seperti yang ditunjukkan pada gambar yang ditampilkan di bagian
atas pada Gambar 2A – C, sel normal dan sel apoptosis memiliki
morfologi sel yang berbeda di bawah mikroskop cahaya. Selain itu,
hasil flow cytometry mengungkapkan bahwa Adriamycin menginduksi
apoptosis (Q2 plus Q3) pada 43% HACAT, 55,7% HUVEC, dan 54,5%
HSF. Gambar 2D menunjukkan bahwa intensitas NIR HUVEC dan HSF
meningkat secara signifikan dalam 2 jam dan sinyal yang kuat dapat
diamati pada 2 jam (5,63 ± 0,259 × 104 ) (4,52 ± 0,629 × 104 ). Setelah
itu, intensitas fluoresensi terus meningkat secara bertahap hingga
mencapai dataran tinggi pada 12 jam (6,29 ± 0,272 × 104 ) (6,21 ± 0,095
× 104 ). Untuk intensitas fluoresensi HACAT, peningkatan tercepat
terjadi selama periode 2-4 jam sehingga sinyal kuat dapat dideteksi
pada 4 jam (5,99 ± 0,683 × 104 ), dan kemudian intensitas fluoresensi
terus meningkat hingga mencapai puncak pada 12 jam (6,17 ± 0,098 ×
104 ). Sebaliknya, saat inkubasi bersama dengan agen pemblokiran
(GK), intensitas fluoresensi meningkat perlahan, dan intensitas
maksimum adalah 50%
GAMBAR 6 | Sitotoksisitas CH1055-GK in vitro dan in vivo. ( A ) Sitotoksisitas CH1055-GK dievaluasi dengan uji CCK-8 dalam sel manusia (HUVEC, HSF, dan
HACAT). (B) Pewarnaan H&E organ (Jantung, Hati, Limpa, Perut, Paru, Ginjal, Otak, dan Usus) pada kelompok normal dan CH1055-GK. Bilah skala, 100 µm.
Perbatasan dalam Kimia | www.frontiersin.org
Pencitraan NIR-II dan Avulsi Kulit
kemudian dilakukan dengan menggunakan konsentrasi berbeda dari
GK peptida pemblokiran, setelah itu intensitas fluoresensi sel
menurun secara signifikan ketika konsentrasi agen pemblokiran
meningkat sebelum menambahkan CH1055-GK (Gambar 2E).
Singkatnya, hasil kami terutama menunjukkan bahwa probe CH1055-
GK sangat efisien untuk penargetan caspase-3 karena ada akumulasi
CH1055-GK yang tinggi dalam sel apoptosis, dan serapan tinggi
seperti itu jelas dikurangi oleh agen penghambat.
Pencitraan NIR-II dari Avulsi Kulit in vivo dan ex vivo Berdasarkan
foto avulsi
kulit pada model tikus, area nekrotik yang tidak beraturan (1 × 2 cm)
pada kulit tikus yang avulsi diamati pada 2 jam, dan area nekrotik
terlihat diperluas menjadi 4 × 4 cm pada 24 jam (ditunjukkan oleh
lingkaran merah pada Gambar 3A). Menariknya, gambar NIR CH1055-
GK menunjukkan bahwa intensitas fluoresensi secara bertahap
meningkat dari 2 hingga 24 jam pasca injeksi dan daerah yang
terdeteksi lebih luas dibandingkan dengan foto yang sesuai, yang
berarti bahwa CH1055-GK tidak hanya memungkinkan deteksi yang
cepat dan akurat dari luka pada kulit yang avulsi tetapi membantu
dalam mengamati dengan jelas daerah nekrotik potensial (Gambar
3A, B, p < 0,001). Selain itu, perlu dicatat bahwa kelompok kontrol
(CH1055-PEG) menunjukkan intensitas fluoresensi yang jauh lebih
rendah dari 2 hingga 24 jam dan kelompok penghambat (CH1055-GK
plus peptida GK) memiliki tren pertumbuhan sinyal fluoresen yang
lebih lambat daripada kelompok eksperimen (Gambar 3A). , B, p <
0,001). Untuk gambar avulsi kulit ex vivo, hasil statistik juga diperoleh
dari 2 hingga 24 jam dan hampir konsisten dengan penelitian in vivo
kami, yang menunjukkan bahwa CH1055-GK dapat
8 Oktober 2019 | Jilid 7 | Pasal 696
Machine Translated by Google

Li dkk. Pencitraan NIR-II dan Avulsi Kulit

SKEMA 1 | Skema probe NIR-II berbasis GK (CH1055-GK) yang mengikat caspase-3 selama perkembangan avulsi kulit pada tikus hidup dan sel apoptosis. Probe disebarkan
ke kulit yang avulsi setelah injeksi vena ekor dan dipertahankan secara konsisten di kulit. Probe kemudian secara khusus terikat pada caspase-3 dalam sel apoptosis.

menembus ke dalam jaringan kulit dan melakukan deteksi akurat
dalam model ex vivo dari kulit avulsi (Gambar 3A,C, p < 0,01). Seperti
yang ditunjukkan pada Gambar 3D-F, meskipun perbedaan dapat
diamati antara intensitas fluoresensi in vivo dan ex-vivo, hasil ini saling
mendukung hipotesis bahwa CH1055-GK dapat berikatan dengan
caspase 3 untuk mendeteksi avulsi kulit dan kulit nekrotik. Secara
keseluruhan, hasil kami menunjukkan bahwa probe molekul kecil non-
invasif CH1055-GK memberikan terobosan yang signifikan dalam
deteksi avulsi kulit dan nekrosis pada model tikus avulsi kulit.
Secara mengesankan, daerah nekrotik potensial pada kulit yang avulsi
juga dapat dideteksi dengan tepat sehingga pencitraan NIR-II dapat
ke Caspase-3 dalam Sel Apoptosis Hasil pewarnaan
memberikan bantuan saat menentukan daerah nekrotik pada kulit yang avulsi.
imunofluoresensi kami
Perbandingan Deteksi Avulsi Kulit dengan Pencitraan NIR dan MRI
Hasil pencitraan NIR in vivo
menunjukkan peningkatan intensitas fluoresensi CH1055-GK di daerah
nekrotik avulsi kulit dibandingkan dengan kulit normal (Gambar 4A,C,
p < 0,001).
Seperti pencitraan NIR-II, analisis MRI dapat mengidentifikasi kulit yang
pecah dan memverifikasi beberapa perbedaan yang dapat diraba antara
kulit avulsi dan kulit normal, tetapi sulit untuk menentukan daerah
nekrotik pada tahap awal avulsi kulit (Gambar 4A, panah merah).
Selain itu, pewarnaan H&E menunjukkan bahwa ada perbedaan biologis
yang jelas pada kulit yang avulsi dibandingkan dengan kulit normal,
seperti ketidakteraturan struktur jaringan kulit (Gambar 4A).
Selanjutnya, sel-sel TUNEL yang diwarnai positif menunjukkan
peningkatan sel-sel apoptosis pada kulit yang avulsi (Gambar 4A).
Analisis western blotting juga menunjukkan ekspresi aktif caspase-3
yang tinggi pada kulit yang avulsi pada 3 jam dan 6 jam (Gambar 4E).
Setelah probe diberikan ke tikus melalui injeksi vena ekor, retensi
CH1055-GK yang tinggi muncul di kulit yang avulsi serta di organ lain
termasuk hati dan limpa (Gambar 4C, D, p <0,001 ) . Diambil
bersama-sama, hasil ini tidak hanya menunjukkan bahwa apoptosis
dapat menyebabkan kerusakan ireversibel pada avulsi kulit dan
mengakibatkan nekrosis tetapi juga menunjukkan bahwa caspase-3
yang menargetkan probe NIR-II (CH1055-GK) dapat secara lebih baik
mendeteksi avulsi kulit dini dan nekrosis pada kulit. model tikus avulsi dibandingkan
Dalam penelitian kami, ekspresi caspase-3 yang tinggi atau berlebih
dapat mengenali peptida GK, dan caspase-7 mungkin juga dapat
mengenali peptida ini, yang akan diklarifikasi dalam penelitian lebih lanjut.
Pewarnaan Imunofluoresensi untuk Pengikatan Spesifik CH1055-GK
memvalidasi afinitas pengikatan probe CH1055-GK ke caspase-3.
Pewarna fluorofor hijau (FITC) digunakan untuk memberi label CH1055-
GK, dan pewarna fluorofor merah (Cy3) dengan antibodi sekunder anti-
tikus kambing diaplikasikan untuk memberi label caspase-3 (Gambar
5A – C). Sementara inkubasi bersama dengan FITC CH1055-GK dan
caspase-3-Cy3, sel-sel apoptosis dengan ekspresi caspase-3 yang
tinggi atau berlebih juga dapat menampilkan fluoresensi hijau, yang
menunjukkan bahwa probe terikat pada caspase-3 (Gambar 5D, panah
merah ). Sebaliknya, sel non-apoptosis tidak dapat menunjukkan
fluoresensi hijau.
Oleh karena itu, hasil pewarnaan imunofluoresensi kami menunjukkan
bahwa probe dapat secara spesifik terikat pada caspase-3 dalam sel
apoptosis.
Sitotoksisitas in vitro dan Toksisitas in vivo
Sitotoksisitas in vitro CH1055-GK telah diuji dalam
lini sel manusia (HACAT, HUVEC, dan HSF).
Menurut hasil, tidak ada sitotoksisitas yang jelas
pada sel normal yang diinkubasi dengan probe dengan kons

Perbatasan dalam Kimia | www.frontiersin.org 9 Oktober 2019 | Jilid 7 | Pasal 696

Machine Translated by Google
Li dkk.
2–24 jam (Gambar 6A). Untuk toksisitas in vivo, CH1055-GK diberikan pada
mencit melalui injeksi vena ekor dengan dosis 10 mg kgÿ1 . Hasil pewarnaan
H&E organ utama (Jantung, Hati, Limpa, Lambung, Paru, Ginjal, Otak, dan
Usus) menunjukkan bahwa tidak ada kerusakan diagnostik atau peradangan
pada kulit normal dibandingkan dengan kelompok kontrol (Gambar 6B).
Meskipun biokompatibilitas dan keamanan hayati tidak diselidiki dalam
penelitian kami, CH1055-GK menunjukkan potensi deteksi dini avulsi kulit
dan penentuan nekrosis kulit.
KESIMPULAN
Singkatnya, kami telah mensintesis probe fluoresen NIR-II novel CH1055-
GK, dan hasil kami membuktikan bahwa probe memancarkan fluoresensi
tingkat tinggi dalam sel apoptosis dan dalam model avulsi kulit in vivo dan
ex vivo, yang menunjukkan bahwa CH1055-GK memiliki afinitas pengikatan
yang kuat untuk caspase-3.
Kami berhipotesis bahwa probe ini adalah alat diagnostik avulsi kulit awal
yang menjanjikan dan dapat digunakan untuk membedakan daerah nekrotik
potensial dari jaringan sehat atau inflamasi di sekitarnya.
Studi masa depan kami akan dikhususkan untuk secara konsisten
mengeksplorasi kemungkinan penerapan probe ini untuk diagnosis avulsi
kulit pada tahap awal dan dalam pemantauan terapeutik di klinik. Tentu
saja, toksisitas probe in vivo dan studi kinetika difusi harus diselidiki lebih
lanjut sebelum probe dapat diterima untuk digunakan dalam uji klinis.
PERNYATAAN KETERSEDIAAN DATA
Semua dataset yang dihasilkan untuk penelitian ini disertakan dalam artikel/
Materi Pelengkap.
REFERENSI
Antaris, AL, Chen, H., Cheng, K., Sun, Y., Hong, G., Qu, C., dkk.
(2016). Pewarna molekul kecil untuk pencitraan NIR-II. Nat. Mater. 15,
235–242. doi: 10.1038/
nmat4476 Antaris, AL, Chen, H., Diao, S., Ma, Z., Zhang, Z., Zhu, S., dkk.
(2017). Fluorophore kompleks molekul-protein hasil kuantum tinggi
untuk pencitraan inframerah-dekat II. Nat. Komunal.
8:15269. doi: 10.1038/ncomms15269 Ballestin, A., Casado, JG, Abellan, E., Vela, FJ,06059
(2018). Cedera iskemia-reperfusi pada model flap bebas kulit mikrovaskular
tikus: studi histologis, genetik, dan aliran darah. PLoS SATU 13: e0209624.
doi: 10.1371/journal.pone.0209624
Casares, N., Pequignot, MO, Tesniere, A., Ghiringhelli, F., Roux, S., Chaput, N.,
dkk. (2005). Imunogenisitas yang bergantung pada caspase dari kematian
sel tumor yang diinduksi doxorubicin. J.Exp. Kedokteran 202, 1691–
1701. doi: 10.1084/jem.20050915 Chin, TY, Kiat, SS, Faizul, HG, Wu, W., and
Abdullah, JM (2017). Efek minocycline pada cedera avulsi akar tulang
belakang pada model tikus. Melayu. J.Med. Sains. 24, 31–39. doi: 10.21315/mjms2017.24.1.4
Crowley, LC, Marfell, BJ, Scott, AP, dan Waterhouse, NJ (2016). Memicu apoptosis
pada sel hematopoietik dengan obat sitotoksik. Pelabuhan Musim Semi
Dingin. Protokol. 2016, 635–638. doi: 10.1101/pdb.prot087130
Gagnier, JJ, Kienle, G., Altman, DG, Moher, D., Sox, H., dan Riley, D.
(2013). Pedoman CARE: pengembangan pedoman pelaporan kasus klinis
berbasis konsensus. Gumpal. Lanjut Kesehatan Med. 2, 38–43. doi: 10.7453/gahmj.2013.008
Perbatasan dalam Kimia | www.frontiersin.org
Pencitraan NIR-II dan Avulsi Kulit
PERNYATAAN ETIKA
Semua percobaan hewan telah disetujui oleh Komite Perawatan dan
Penggunaan Hewan Universitas Wuhan dan dilakukan sesuai dengan
pedoman nasional dan internasional yang relevan. Instruksi khusus panel
tentang perawatan, pengobatan, dan eutanasia diikuti secara ketat untuk
hewan yang digunakan dalam penelitian ini. Nomor IACUC adalah 2019149.
KONTRIBUSI PENULIS
YL bertanggung jawab untuk melakukan percobaan dan menulis naskah.
WY, DL, dan YG bertanggung jawab untuk menyediakan sel. XH dan BQ
bertanggung jawab untuk mendiskusikan hasil percobaan. AY bertanggung
jawab untuk merancang percobaan dan merevisi kertas.
PENDANAAN
Pekerjaan ini didukung secara finansial oleh Pusat Penelitian Medis Klinik
Bedah Mikro Kota Wuhan (230100061) dan program Dana Bersama Komisi
Kesehatan Provinsi Hubei, Cina.
UCAPAN TERIMA KASIH
Kami juga ingin berterima kasih kepada Prof. Xuechuan Hong atas
bantuannya dalam sintesis probe.
MATERI TAMBAHAN
Bahan Tambahan untuk artikel ini dapat ditemukan online di: https://
www.frontiersin.org/articles/10.3389/fchem. 2019.00696/full#bahan tambahan
Hong, G., Diao, S., Antaris, AL, dan Dai, H. (2015). Bahan nano karbon untuk
pencitraan biologis dan terapi pengobatan nano.
10816–10906.
kimia Rev.10.1021/acs.chemrev.5b 115, doi:
00008
Hong, G., Robinson, JT, Zhang, Y., Diao, S., Antaris, AL, Wang, Q., dkk. (2012).
Pencitraan fluoresensi in vivo dengan titik-titik kuantum Ag2S di wilayah
inframerah-dekat kedua. Angew.
kimia Int. Ed Engl. 51, 9818–9821. doi: 10.1002/anie.2012
Alvarez, V., Uson, A., dkk.
Hong, G., Zou, Y., Antaris, AL, Diao, S., Wu, D., Cheng, K., dkk.
(2014). Pencitraan fluoresensi ultra cepat in vivo dengan fluorofor
polimer terkonjugasi di jendela inframerah-dekat kedua. Nat.
Komunal. 5:4206. doi: 10.1038/ncomms5206
Iglesias, M., Butron, P., Leon-Lopez, DA, Garcia-Mancilla, S., Espino-Gaucin, I.,
dan Rubio, A. (2014). Rekonstruksi jaringan lunak dengan flap bebas omental
pada cedera ekstremitas atas yang kompleks: laporan 13 kasus. Bedah
Mikro 34, 425–433. doi: 10.1002/micr.22236
Latifi, R., El-Hennawy, H., El-Menyar, A., Peralta, R., Asim, M., Consunji, R., et al.
(2014). Tantangan terapeutik untuk mengurangi cedera jaringan lunak. J.Emerg.
Kejutan Trauma 7, 228–232. doi:
10.4103/0974-2700.136870 Li, T., Li, C., Ruan, Z., Xu, P., Yang, X., Yuan, P.,
dkk. (2019). Polipeptida terkonjugasi fluorofor organik inframerah-dekat
kedua untuk terapi fototermal yang dipandu gambar. ACS Nano 13, 3691–3702. doi: 10.
00452
10 Oktober 2019 | Jilid 7 | Pasal 696
Machine Translated by Google
Li dkk.
Lin, J., Zeng, X., Xiao, Y., Tang, L., Nong, J., Liu, Y., dkk. (2019). Titik-titik emisi yang
diinduksi agregasi dekat inframerah II baru untuk bioimaging in vivo. kimia
Sains. 10, 1219–1226. doi: 10.1039/c8sc04363a
Liu, YQ, Liu, YF, Ma, XM, Xiao, YD, Wang, YB, Zhang, MZ, dkk. (2015).
Saline kaya hidrogen melemahkan iskemia kulit/reperfusi menginduksi apoptosis
melalui pengaturan rasio Bax/Bcl-2 dan jalur ASK-1/JNK. J.Plast. Rekonstruksi
Estet. Surg. 68, e147–e156. doi: 10.1016/j.bjps.2015.03.001
MacFarlane, D., Shah, K., Wysong, A., Wortsman, X., dan Humphreys, TR
(2017). Peran pencitraan dalam pengelolaan pasien dengan kanker kulit
nonmelanoma: modalitas dan aplikasi diagnostik. Selai. Acad. Dermatol. 76, 579–
588. doi: 10.1016/j.jaad.2015.10.010
Milcheski, DA, Nakamoto, HA, Tuma, P. Jr., Nobrega, L., dan Ferreira, M.
C.(2013). Model eksperimental cedera degloving pada tikus: efek allopurinol dan
pentoxifylline dalam meningkatkan viabilitas flap avulsi. Ann. Plas. Surg. 70, 366–
369. doi: 10.1097/SAP.0b013e318230601a
Ntziachristos, V., Ripoll, J., Wang, LV, dan Weissleder, R. (2005). Melihat dan
mendengarkan cahaya: evolusi pencitraan fotonik seluruh tubuh. Nat.
Bioteknologi. 23, 313–320. doi: 10.1038/nbt1074
Olingy, CE, San Emeterio, CL, Ogle, ME, Krieger, JR, Bruce, AC, Pfau, DD, dkk. (2017).
Monosit non-klasik adalah nenek moyang bias dari makrofag penyembuhan luka
selama cedera jaringan lunak. Sains. Rep.7:447. doi: 10.1038/s41598-017-00477-1
Pansare, V., Hejazi, S., Faenza, W.,
dan Prud'homme, RK (2012). Tinjau bahan pencitraan optik dan NIR gelombang
panjang: agen kontras, fluorofor, dan pembawa nano multifungsi. kimia Mater. 24,
812–827. doi: 10.1021/cm2028367 Ponder, KG, dan Boise, LH (2019). Prodomain
caspase-3 mengatur
penghapusan dan aktivasi caspase sendiri. Penemuan Kematian Sel. 5:56. doi: 10.1038/
s41420-019-0142-1
Reinsmith, LE, Garcia-Elias, M., dan Gilula, LA (2013). Cedera dislokasi aksial traumatis
pada pergelangan tangan. Radiologi 267, 680–689.
doi: 10.1148/radiol.13111682
Rogers, C., Fernandes-Alnemri, T., Mayes, L., Alnemri, D., Cingolani, G., dan Alnemri,
ES (2017). Pembelahan DFNA5 oleh caspase-3 selama apoptosis memediasi
perkembangan menjadi kematian sel nekrotik / piroptotik sekunder. Nat.
Komunal. 8:14128. doi: 10.1038/ncomms14128
Sakai, G., Suzuki, T., Hishikawa, T., Shirai, Y., Kurozumi, T., and Shindo, M.
(2017). Pemasangan kembali flap kulit avulsi primer dengan terapi luka tekanan
negatif pada cedera degloving pada ekstremitas bawah. Cedera 48, 137–141. doi:
10.1016/j.injury.2016.10.026
Scabini, M., Stellari, F., Cappella, P., Rizzitano, S., Texido, G., and Pesenti, E.
(2011). Pencitraan in vivo dari apoptosis tahap awal dengan mengukur aktivasi
caspase 3/7 waktu-nyata. Apoptosis 16, 198–207. doi: 10.1007/
s10495-010-0553-1 Sen, H., Oruc, M., Isik, VM, Sadic, M., Sayar, H., Citil, R., dkk. (2017).
neonAnn.
Pengaruh penggunaan omeprazole terhadap kelangsungan hidup flap kulit pola acak pada tikus. inframerah-dekat baru untuk pencitraan tumor dan deteksi cedera hati yang
Plas. Surg. 78, e5–e9. doi: 10.1097/sap.0000000000000922
Shaulov-Rotem, Y., Merquiol, E., Sadan, TW, Moshel, O., dan Blum, G.
JCS (2016). Sebuah probe berbasis aktivitas fluoresen yang dipadamkan
mengungkapkan aktivitas caspase-3 dalam retikulum endoplasma selama
apoptosis. kimia Sains. 7, 1322–1337. doi: 10.1039/C5SC03207E
Siemionow, M., dan Arslan, E. (2004). Cedera iskemia / reperfusi: tinjauan sehubungan
dengan transfer jaringan bebas. Bedah Mikro 24, 468–475. doi: 10.1002/micr.20060
Smith, AM, Mancini, MC, dan Nie, S. (2009). Bioimaging: jendela kedua untuk pencitraan
in vivo. Nat. Nanoteknologi. 4, 710–711. doi: 10.1038/nnano.2009.326 Srinivasula,
SM, Hegde, R., Saleh, A., Datta, P., Shiozaki, E., Chai, J., dkk. (2001).
Motif interaksi XIAP yang dilestarikan dalam caspase-9 dan Smac / DIABLO
mengatur aktivitas caspase dan apoptosis. Alam 410, 112–116. doi:
10.1038/35065125 Strzyz, P. (2017). Kematian sel: menarik pemicu apoptosis untuk nekrosis. potensi
Nat. Putaran.
Mol. Bio Sel. 18:72. doi: 10.1038/nrm.2017.1
Sun, S., Inoue, KY, Shiomoto, S., Takano, S., and Matsue, TJC (2017a).
Deteksi amperometrik dari apoptosis dengan menggunakan substrat terkonjugasi
p-metoksianilin untuk caspase-3. ChemElectroChem 4, 941–946. doi: 10.1002/
celc.201600700
Sun, Y., Ding, M., Zeng, X., Xiao, Y., Wu, H., Zhou, H., dkk. (2017b). Fluorofor NIR-II
molekul kecil emisi cerah yang baru untuk pencitraan tumor in vivo dan operasi
yang dipandu gambar. kimia Sains. 8, 3489–3493. doi: 10.1039/c7sc00251c
Perbatasan dalam Kimia | www.frontiersin.org
Pencitraan NIR-II dan Avulsi Kulit
Sun, Y., Qu, C., Chen, H., He, M., Tang, C., Shou, K., dkk. (2016).
Novel benzo-bis(1,2,5-thiadiazole) fluorophores untuk pencitraan kanker NIR II in
vivo. kimia Sains. 7, 6203–6207. doi: 10.1039/c6sc
01561a
Sun, Y., Zeng, X., Xiao, Y., Liu, C., Zhu, H., Zhou, H., dkk. (2018). Fungsi ganda baru
fluoresensi dekat-inframerah II dan probe PET untuk penggambaran tumor dan
operasi yang dipandu gambar. kimia Sains. 9, 2092–2097. doi: 10.1039/c7sc 04774f
Taylor, RC, Cullen, SP, dan Martin, SJ (2008). Apoptosis: penghancuran terkontrol
pada tingkat sel. Nat. Pendeta Mol. Bio Sel. 9, 231–241. doi: 10.1038/nrm2312 Tosti,
R., dan Eberlin, KR
(2018). Operasi tangan “Kontrol Kerusakan”: evaluasi dan manajemen darurat Tangan
Hancur. Klinik Tangan. 34, 17–26. doi: 10.1016/j.hcl.2017.09.002
Ueno, NT, Espinosa Fernandez, JR, Cristofanilli, M., Overmoyer, B., Rea, D.,
Berdichevski, F., dkk. (2018). Konsensus internasional tentang manajemen klinis
kanker payudara inflamasi dari Morgan Welch Inflammatory Breast Cancer Research
Program 10th Anniversary Conference.
J. Kanker 9, 1437–1447. doi: 10.7150/jca.23969
Walton, E., Williams, M., dan Robinson, JR (2017). Penahanan ligamen kolateral medial
di takik intercondylar setelah avulsi proksimal. Radio Rangka. 46, 1575–1578. doi:
10.1007/s00256-0 17-2723-5
Weinand, C. (2018). Cedera degloving pada ekstremitas atas: strategi dengan jaring
kulit dengan ketebalan penuh. Dunia J. Plast. Surg. 7, 372–376. doi: 10.29252/
wjps.7.3.372 Wu, L., Hu, Y., He, Y., Xia, Y., Lu, H., Cao, Z., dkk. (2019). Pemantauan
resonansi plasmon permukaan saluran ganda tingkat intraseluler kompleks p53-
MDM2 dan caspase-3 yang diinduksi oleh antagonis MDM2 Nutlin-3. Analis 144,
3959–3966. doi: 10.1039/c9an00
301k
Yan, H., He, L., Zhao, W., Li, J., Xiao, Y., Yang, R., dkk. (2014). Poly beta cyclodextrin /
TPdye nanomicelle berbasis dua-foton nanoprobe untuk pencitraan aktivasi
caspase-3 dalam sel dan jaringan hidup. Anal. kimia 86, 11440–11450. doi: 10.1021/
ac503546r Yang, J., Xie,
Q., Zhou, H., Chang, L., Wei, W., Wang, Y., dkk. (2018). Analisis protein dan pencitraan
NIR-II dari protein MCM2 pada karsinoma hepatoseluler. J.
Proteom Res. 17, 2428–2439. doi: 10.1021/acs.jproteome.8b00181
Yang, Q., Ma, Z., Wang, H., Zhou, B., Zhu, S., Zhong, Y., dkk. (2017). Desain rasional
fluorofor molekuler untuk pencitraan biologis di jendela NIR-II.
Lanjut Mater. 29:1605497. doi: 10.1002/adma.201605497
Yi, W., Zhou, H., Li, A., Yuan, Y., Guo, Y., Li, P., dkk. (2019). Probe fluoresen NIR-II untuk
pencitraan degenerasi tulang rawan artikular dan deteksi osteoartritis.
Biomater. Sains. 7, 1043–1051. doi: 10.1039/c8bm01440j
Zeng, X., Chen, Z., Tang, L., Yang, H., Liu, N., Zhou, H., dkk. (2019). Sebuah probe lampu
diinduksi oleh obat. kimia Komunal. (Kamb). 55, 2541–2544.
doi: 10.1039/c8cc10286d
Zeng, X., Xiao, Y., Lin, J., Li, S., Zhou, H., Nong, J., dkk. (2018).
Kompleks pewarna-protein inframerah-dekat II untuk pencitraan biomedis dan
terapi fototermal yang dipandu pencitraan. Lanjut Kesehatanc. Mater. 7:e1800589.
doi: 10.1002/adhm.201800589
Zhang, XD, Wang, H., Antaris, AL, Li, L., Diao, S., Ma, R., dkk.
(2016). Pencitraan cedera otak traumatis di jendela inframerah-dekat kedua dengan
fluorofor molekuler. Lanjut Mater. 28, 6872–6879. doi: 10.1002/adma.201600706
Benturan Kepentingan: Para penulis menyatakan bahwa penelitian ini dilakukan di
tidak adanya hubungan komersial atau keuangan yang dapat ditafsirkan sebagai
konflik kepentingan.
Hak Cipta © 2019 Li, Hu, Yi, Li, Guo, Qi dan Yu. Ini adalah artikel akses terbuka yang
didistribusikan di bawah ketentuan Lisensi Atribusi Creative Commons (CC BY).
Penggunaan, distribusi atau reproduksi di forum lain diperbolehkan, asalkan penulis
asli dan pemilik hak cipta disebutkan dan publikasi asli dalam jurnal ini dikutip, sesuai
dengan praktik akademis yang diterima.
Tidak ada penggunaan, distribusi, atau reproduksi yang diizinkan yang tidak mematuhi
ketentuan ini.
11 Oktober 2019 | Jilid 7 | Pasal 696