Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Hindawi
Pengobatan Oksidatif dan Umur Panjang Seluler
Volume 2020, ID Artikel 7963212, 11 halaman
https://doi.org/10.1155/2020/7963212

Artikel Penelitian
Triterpenoid Saponin AG8 dariArdisia gigantifoliastaff.
Menginduksi Apoptosis Sel Kanker Payudara Tiga Negatif
melalui Jalur Stres Oksidatif

Li-Hua Mu ,1Li-Hua Wang,1Teng-Fei Yu,2Yu-Ning Wang,3Hong Yan,4Ping Liu,1

5,6
dan Bisakah Yan

1Departemen Farmakologi Klinis, Pusat Perlengkapan Medis, Rumah Sakit Umum PLA Tiongkok, Beijing 100853, Tiongkok
2Departemen USG, Rumah Sakit Tiantan Beijing di Capital Medical University, Beijing 100050, Cina
3Divisi
Bedah Klinis, Pusat Medis Pertama, Rumah Sakit Umum PLA Tiongkok, Beijing 100853, Tiongkok
4Departemen Obstetri dan Ginekologi, Pusat Medis Pertama, Rumah Sakit Umum PLA Tiongkok, Beijing 100853, Tiongkok

5Departemen Teori Dasar Pengobatan Tiongkok, Fakultas Kedokteran Pra-Klinis, Universitas Pengobatan Tiongkok Guangzhou,
Guangzhou 510060, Tiongkok
6Pusat Penelitian Pengobatan Integratif Dasar, Universitas Pengobatan Tiongkok Guangzhou, Guangzhou 510060, Tiongkok

Korespondensi harus ditujukan kepada Ping Liu; cpi301@163.com dan Can Yan; gzyancan@hotmail.com

Diterima pada 17 Juni 2020; Revisi 11 Agustus 2020; Diterima 12 September 2020; Diterbitkan 15 Oktober 2020

Editor Akademik: Valentina Pallottini

Hak Cipta © 2020 Li-Hua Mu dkk. Ini adalah artikel akses terbuka yang didistribusikan di bawah Lisensi Atribusi Creative Commons, yang
mengizinkan penggunaan, distribusi, dan reproduksi tanpa batas dalam media apa pun, asalkan karya asli dikutip dengan benar.

Kanker payudara triple-negatif (TNBC) dikaitkan dengan kelangsungan hidup pasien yang buruk karena tidak adanya ekspresi
reseptor estrogen (ER), reseptor progesteron (PR), dan reseptor faktor pertumbuhan epidermal manusia 2 (HER2). Penelitian kami
sebelumnya menunjukkan bahwa triterpenoid saponin AG8 dariArdisia gigantifoliastaff. menghambat proliferasi sel MDA-MB-231.
Dalam penelitian ini, efek AG8 dianalisis lebih lanjut pada tipe sel TNBC yang berbeda: sel MDA-MB-231, BT-549, dan MDA-MB-157.
AG8 menghambat kelangsungan hidup sel MDA-MB-231, BT-549, dan MDA-MB-157 dengan cara yang bergantung pada dosis dan
menunjukkan sitotoksisitas yang lebih kuat terhadap subtipe Afrika Amerika (AA) dan mesenkim (M) dibandingkan Kaukasia (CA)
dan subtipe mesenchymal stem-like (MSL). AG8 mengganggu penyerapan MitoTracker Red CMXRos oleh mitokondria sel TNBC
dengan cara yang bergantung pada dosis, dan ini dipulihkan denganN-asetil-L-sistein (NAC). AG8 memengaruhi kadar sel TNBC
GSH, SOD, dan MDA, tetapi subtipe TNBC yang berbeda memiliki sensitivitas berbeda terhadap AG8 dan NAC. Selain itu, kami
menemukan bahwa AG8 meningkatkan rasio Bax/Bcl-2 dan kadar sitokrom c sitoplasma dan secara signifikan menurunkan
fosforilasi ERK dan AKT dalam sel BT549 dan MDA-MB-157. AG8 memperoleh efek antikanker melalui pembentukan ROS, aktivasi
ERK dan AKT, dan dengan memicu jalur apoptosis mitokondria dalam sel TNBC. AG8 memiliki efek sitotoksik selektif terhadap
subtipe AA dan M TNBC dan secara nyata menginduksi apoptosis sel MDA-MB-157 (subtipe AA) melalui jalur yang tidak terkait
dengan ROS, yang berbeda dari dua subtipe lainnya. Mekanisme yang mendasarinya harus diselidiki lebih lanjut.

1. Perkenalan TNBC karena kekurangan reseptor yang diperlukan, dan oleh

Kanker payudara triple negatif (TNBCs) kekurangan reseptor
estrogen (ER), reseptor progesteron (PR), dan ekspresi reseptor
faktor pertumbuhan epidermal manusia 2 (HER2) dan
menyumbang sekitar 15-25% dari total kasus kanker payudara
[1]. TNBC sangat berulang dan bermetastasis dengan prognosis
buruk dan sering terjadi pada pasien muda [2, 3]. Terapi
hormon umum atau terapi bertarget tidak efisien
karena itu, kombinasi pengobatan kemoterapi biasanya
diberikan kepada pasien TNBC; Namun, resistensi obat dan efek
samping yang merugikan sering terjadi [4, 5]. TNBC adalah
penyakit yang sangat heterogen dengan setidaknya enam
subtipe molekuler: imunomodulator (IM), mesenchymal (M),
mesenchymal stem-like (MSL), basal-like 1 dan 2 (BL1 dan BL2),
dan luminal androgen receptor (LAR) [6]. TNBC juga dapat
dibagi menurut rasnya menjadi tipe African American (AA).
2 Pengobatan Oksidatif dan Umur Panjang Seluler
dan tipe Kaukasia (CA) [7]. Subtipe TNBC ini memiliki respons berbeda
terhadap pengobatan standar perawatan (SOC), karena masing-masing
subtipe memiliki ontologi uniknya sendiri [8]. Karena sebagian besar
terapi yang tersedia saat ini tidak memberikan manfaat bagi TNBC, agen
terapeutik dengan toksisitas minimal dan kemanjuran yang lebih baik
perlu dikembangkan.
Menurut penelitian kami sebelumnya, saponin triterpenoid
dariArdisia gigantifoliastaff. menunjukkan aktivitas sitotoksik
terhadap beberapa jenis sel kanker [9-11]. Beberapa saponin
triterpenoid menunjukkan sitotoksisitas yang menonjol
terhadap sel kanker payudara [12, 13]. Diantaranya, triterpenoid
saponin AG8 diisolasi dariA. gigantifoliastaff. menghambat
proliferasi sel MDA-MB-231. Dalam penelitian ini, AG8 dipilih
untuk analisis lebih lanjut pada tipe sel TNBC yang berbeda
termasuk MDA-MB-231, BT-549, dan MDA-MB-157. Penelitian ini
bertujuan untuk menyelidiki efek AG8 pada jalur stres oksidatif
dan induksi kematian sel pada sel TNBC.
2. Bahan-bahan dan metode-metode
2.1. Bahan Kimia dan Reagen.AG8 (Gambar 1(a), kemurnian:
>95%) diisolasi dariA. gigantifoliastaff. seperti yang
dijelaskan sebelumnya [10]. 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-
diphenyltetrazolium bromide (MTT) dibeli dari Sigma-Aldrich
(St. Louis, MO, USA).
2.2. Budaya sel.Garis sel TNBC MDA-MB-231, MDA-
MB-157, dan BT-549 dibeli dari Koleksi Kultur Sel dari
Akademi Ilmu Kedokteran Tiongkok (Beijing, Tiongkok).
Sel MDA-MB-231 dan MDA-MB-157 dikultur dalam
medium L-15 (Gibco, Grand Island, NY, USA) yang
ditambah dengan 10% serum janin sapi (FBS) dan 1%
penisilin/streptomisin dengan 5% CO2di 37°C dalam
suasana lembab. Sel BT-549 ditanam dalam medium
DMEM (Gibco) yang mengandung 20% FBS pada suhu
37°C dalam atmosfer lembab 5% CO2.
2.3. Uji Viabilitas SelEfek AG8 pada viabilitas sel dievaluasi
menggunakan uji MTT. Untuk tujuan ini, sel MDA-MB-231,
MDA-MB-157, dan BT-549 diobati dengan peningkatan
konsentrasi AG8 selama 24 jam. Kemudian sel diinkubasi
dengan larutan MTT selama 4 jam, supernatan disedot, dan
kristal formazan dilarutkan menggunakan DMSO. Terakhir,
viabilitas sel dihitung dengan mengukur absorbansi pada
570nm menggunakan microplate reader (Perkin-Elmer, Inc.,
1420-012, Shanghai, China). AntioksidanN-asetil-L-sistein
(NAC; Sigma, # A7250) dalam PBS (konsentrasi akhir 4mM)
ditambahkan ke sel selama 1 jam sebelum penambahan
AG8, dan kemudian, sel dikultur dengan NAC dan AG8
selama 24 jam sebelum menguji viabilitas sel.
2.4. Uji Proliferasi dan Klonogenisitas.Untuk penilaian proliferasi, sel-
sel diunggulkan ke dalam cawan kultur berukuran 6 cm dan dihitung
setelah 24 jam dan diberi perlakuan dengan konsentrasi AG8 yang
berbeda selama 24 jam dan diganti dengan kultur biasa untuk terus
diinkubasi selama 14 hari. Koloni dicuci dan difiksasi dengan
paraformaldehyde 4% selama 15 menit. Kemudian koloni diwarnai
dengan kristal violet 0,1% selama 10 menit dan dihitung.
2.5. Pengukuran Apoptosis Sel.Apoptosis sel TNBC diperiksa
menggunakan pewarnaan ganda Annexin V-FITC dan PI. Sel-
sel diperlakukan dengan konsentrasi AG8 yang berbeda
selama 24 jam: sel MDA-MB-231 dengan 0, 4.0, 8.0, dan 16.0
μM AG8; MDA-MB-157 dengan 0, 1.0, 1.5, dan 2.0μM AG8;
dan sel BT-549 dengan 0, 0,5, 1,0, dan 1,5μM AG8.
Kemudian, sel-sel dikumpulkan, dicuci dengan PBS, dan
diwarnai dengan kit Annexin V-FITC (Keygen, Jiangsu, China).
Apoptosis sel dianalisis menggunakan flow cytometry (FACS
Calibur; Becton Dickinson, San Jose, CA, USA). NAC (4mM)
ditambahkan ke sel TNBC 1 jam sebelum pengobatan
dengan AG8, dan kemudian, sel dikultur dengan NAC dan
AG8 selama 24 jam sebelum pengukuran apoptosis sel.
2.6. Pengukuran Aktivitas Mitokondria.Sel MDA-MB-231, MDA-
MB-157, dan BT-549 diinkubasi dengan konsentrasi AG8 yang
berbeda selama 24 jam, dan kemudian, 100nM Mito-Tracker Red
CMXRos ditambahkan ke dalam sel (Keygen, Jiangsu, China).
Setelah inkubasi pada suhu 37°C selama 30 menit, sel diamati
dengan menggunakan mikroskop fluoresensi (Olympus BX60,
Tokyo, Jepang). NAC (4mM) ditambahkan ke sel TNBC 1 jam
sebelum pengobatan AG8, dan kemudian, sel dikultur dengan
NAC dan AG8 selama 24 jam sebelum pengukuran aktivitas
mitokondria.
2.7. Pengukuran Tingkat ROS Intraseluler.Intraseluler
ROS diperkirakan menggunakan probe fluoresen, 2',7'
- diklorofluorescein diasetat (DCFH-DA). Secara singkat, sel
diperlakukan dengan konsentrasi AG8 yang berbeda dengan
atau tanpa NAC (4mM) selama 24 jam. Sel MDA-MB-231, MDA-
MB-157, dan BT-549 (0:5 × 105sel/ml) kemudian diinkubasi
dalam media kultur yang mengandung 10μM DCFH-DA selama
20 menit pada 37°C. Setelah inkubasi, sel dicuci dengan PBS dan
diresuspensi dalam PBS untuk pengukuran akumulasi ROS
menggunakan flow cytometry.
2.8. Pengukuran Kadar SOD, GSH, dan MDA.Setelah
pengobatan dengan AG8 selama 24 jam, kadar superoksida
dismutase (SOD), glutathione (GSH), dan malondialdehyde
(MDA) dalam sel MDA-MB-231 (AG8: 0, 4.0, 8.0, dan 16.0μM),
MDA-MB-157(AG8: 0, 1.0, 1.5, dan 2.0μM), dan sel BT-549
(AG8: 0, 0,5, 1,0, dan 1,5μM) dianalisis menggunakan alat uji
SOD WST-1, alat uji GSH, dan alat uji MDA dari Nanjing
Jiancheng Bio-Engineering Institute (Nanjing, Jiangsu,
Tiongkok, #A001-3, #A006-2 dan #A003-4) sesuai dengan
instruksi pabriknya. NAC (konsentrasi akhir 4mM)
ditambahkan ke sel TNBC 1 jam sebelum pengobatan AG8,
dan kemudian, sel dikultur dengan NAC dan AG8 selama 24
jam sebelum pengukuran apoptosis sel.
2.9. Analisis Western Blot.Sel BT549 dan MDA-MB-157 diobati
dengan konsentrasi AG8 yang berbeda (1,0 dan 1,5μM) dengan
atau tanpa NAC (4mM) selama 24 jam. Sel-sel TNBC
dikumpulkan dan dilisiskan dalam reagen ekstraksi protein total
dengan inhibitor proteinase. Konsentrasi protein diukur dengan
alat uji protein BCA. Sampel protein dari sel TNBC yang diberi
perlakuan dipisahkan oleh SDS-PAGE dan kemudian
dipindahkan ke membran PVDF, yang dicuci dan diblokir dalam
susu kering tanpa lemak 5% di TBST selama 1 jam pada suhu 25°
C. Selanjutnya membran dicuci
Pengobatan Oksidatif dan Umur Panjang Seluler 3

HAI
HAI
HAI H
HAI HAI
CH3 HAI OH
HAI HAI HAI HAI
HAI HAI HAI
HAI HAI
HAI HAI
OH
OH HAI
OH HAI
HAI
OH
AG8
(A)
MDA-MB-231 BT-549 MDA-MB-157
⁎⁎
100 100
⁎⁎
80 80 ⁎⁎ 100 ⁎
%

⁎⁎
Viabilitas sel %

Viabilitas sel %
60 ⁎⁎⁎ 60 ⁎⁎
⁎⁎
40 40 50 ⁎⁎⁎
⁎⁎⁎
⁎⁎ ⁎⁎⁎
20 20 ⁎⁎⁎ ⁎⁎⁎
0 0 0
0,25 M

0,31 M

0,62 M

1.25 M

2.50 M

5.00 M
16.0 M

0M

0M
0M

0,5 M

1.0 M

2.0 M

4.0 M
1.0 M

4.0 M

8.0 M

Konsentrasi AG8 Konsentrasi AG8 Konsentrasi AG8

(B)

Kontrol
AG8 H2HAI2
MDA-MB-231

4M 8M 16 M

40
1M 1.5 M 2M
⁎⁎
BT-549

⁎⁎⁎
30 ⁎⁎⁎
Apoptosis (%)

⁎⁎⁎

20
MDA-MB-157

1M 1.5 M 2M

10 ⁎
⁎

0
MDA-MB-231 BT-549 MDA-MB-157

Kontrol Tinggi-AG8
Rendah-AG8 H2HAI2

Tengah-AG8

(C)

Angka1: Lanjutan.
4 Pengobatan Oksidatif dan Umur Panjang Seluler
Kontrol AG8
0M 4.0 M 8.0 M 16.0 M
MDA-MB-231
0M 0,5 M 1.0 M 1.5 M
BT-549
0M 1.0 M 1.5 M 2.0 M
MDA-MB-157
(D)
Angka1: Efek AG8 pada sel TNBC.(a) Struktur AG8. (b) Ketergantungan dosis AG8 mengurangi viabilitas sel MDA-MB-231, BT-549, dan MDA-
MB-157. (c) Sel dianalisis secara sitometri setelah pewarnaan dengan kit Annexin V-FITC. (d) Gambar representatif dari pembentukan koloni sel
TNBC yang diperlakukan berbeda ditunjukkan. (e) Hasil kuantitatif uji pembentukan koloni ditampilkan. Data direpresentasikan sebagai rata-
rataberarti ± SDdari tiga percobaan independen,∗P<0:05,∗∗P<0:01,Dan∗∗∗P<0:001versus kontrol.
dan diinkubasi dengan antibodi primer yang diindikasikan
terhadap cleved-caspase-3, Bax, Bcl-2, sitokrom C, AKT, pAKT,
ERK, dan pERK (Cell Signaling Technology, MA, USA) pada jam 4°
C semalaman dan selanjutnya diinkubasi dengan antibodi
sekunder terkonjugasi peroksidase horseradish pada suhu 25°C
selama 1 jam. Pita protein beban divisualisasikan menggunakan
reagen pendeteksi chemiluminescent yang ditingkatkan (Pierce,
Rockford, IL, USA).
2.10. Analisis statistik.Semua data disajikan sebagaiberarti ±
simpangan baku (SD) dari tiga percobaan independen. Data
dianalisis dengan ANOVA. Perbandingan statistik dievaluasi
menggunakan StudentT-tes.Pnilai kurang dari 0,05 dianggap
signifikan secara statistik.
3. Hasil
3.1. AG8 Menghambat Proliferasi Sel dan Pertumbuhan Sel Kanker
Payudara Triple Negatif.Untuk menentukan apakah AG8
mempengaruhi proliferasi sel TNBC secara berbeda, pengaruhnya
terhadap MDA-MB-231 (MSL, CA), BT-549 (M, CA), dan MDA-MB-157
(MSL, AA) diselidiki. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1 (b),
AG8 menghambat viabilitas sel MDA-MB-231, BT-549, dan MDA-
MB-157 dengan cara yang tergantung pada dosis, dan IC50nilainya
adalah 3,80, 0,73, dan 1,38μM, masing-masing. AG8 menunjukkan
sitotoksisitas yang lebih kuat pada sel MDA-MB-157 dibandingkan
sel MDA-MB-231, yang menunjukkan bahwa AA mungkin lebih
sensitif terhadap AG8 dibandingkan garis sel CA TNBC. MDA-MB-231
dan BT-549 adalah TNBC tipe CA; AG8 menunjukkan peningkatan
sitotoksisitas terhadap BT-549 (IC500,73μM) dibandingkan dengan
MDA-MB-231(IC503.80μM), yang berarti AG8 dapat memiliki efek
lebih besar pada subtipe M dibandingkan subtipe MSL.
Untuk menentukan efek AG8 pada apoptosis sel, apoptosis
sel MDA-MB-231, BT-549, dan MDA-MB-157 diobati dengan AG8
selama 24 jam dan diwarnai ganda dengan
H2HAI2
50 M
150
Persentase koloni (%)
100
⁎
50 M ⁎⁎
⁎⁎
50 ⁎⁎
⁎⁎⁎
⁎⁎⁎
⁎⁎⁎
0
50 M
MDA-MB-231 BT-549 MDA-MB-157
Kontrol Tinggi-AG8
Rendah-AG8 H2HAI2
Tengah-AG8
(e)
annexin-V/PI untuk menguji apoptosis menggunakan flow cytometry.
Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1(c), setelah perlakuan dengan 0,
4.0, 8.0, dan 16.0μM AG8 selama 24 jam, persentase sel apoptosis pada
sel MDA-MB-231, BT-549, dan MDA-MB-157 meningkat secara signifikan.
Inkubasi sel MDA-MB-231 dengan AG8 dosis tinggi menghasilkan tingkat
apoptosis yang lebih tinggi dibandingkan H2O2 yang digunakan sebagai
kontrol positif. Hasil ini menunjukkan bahwa AG8 dapat mengurangi
viabilitas sel dengan meningkatkan jumlah sel apoptosis awal atau akhir
dengan cara yang bergantung pada dosis. Uji pembentukan koloni
menunjukkan bahwa AG8 menurunkan persentase koloni dengan cara
yang bergantung pada dosis, namun efek ini lebih rendah dibandingkan
dengan H2O2 (Gambar 1(d) dan 1(e)). Secara keseluruhan, semua hasil di
atas menunjukkan bahwa AG8 menghambat proliferasi sel TNBC dan
menyebabkan apoptosissecara in vitro.
3.2. N-Acetyl-Cysteine Memulihkan Viabilitas Sel TNBC yang
Diobati AG8.Untuk mengetahui efek dari antioksidan tersebutN-
asetil-L-sistein (NAC) pada kelangsungan hidup sel TNBC yang
diobati dengan AG8, MDA-MB-231(AG8, 4.0μM), BT-549 (AG8, 1.0μM),
dan MDA-MB-157(AG8, 1.5μSel M) diberi perlakuan awal dengan
NAC (4mM) sebelum inkubasi 24 jam dengan AG8. Seperti yang
ditunjukkan pada Gambar 2, NAC saja tidak berpengaruh pada
viabilitas sel MDA-MB-231 dan BT-549, namun meningkatkan
viabilitas sel MDA-MB-157. Setelah pengobatan dengan AG8,
viabilitas sel MDA-MB-231, BT-549, dan MDA-MB-157 masing-masing
menurun secara dramatis menjadi 40,3%, 65,3%, dan 50,3%, dan
pada kelompok AG8+NAC, viabilitas sel meningkat secara signifikan
masing-masing menjadi 89,3%, 93,6%, dan 72,6%. Hasil ini
menunjukkan bahwa NAC secara signifikan dapat menangkal efek
negatif AG8 pada viabilitas sel TNBC (Gambar 2).
3.3. AG8 Mempengaruhi Fungsi Mitokondria di Sel TNBC.Diketahui
bahwa disfungsi mitokondria merupakan salah satu dari sekian
banyak penyebab apoptosis. Jadi, kami memeriksa efek AG8
Pengobatan Oksidatif dan Umur Panjang Seluler 5

MDA-MB-231 BT-549 MDA-MB-157

150
⁎⁎⁎ ⁎⁎
100 100
⁎⁎

Viabilitas sel (%)

Viabilitas sel (%)

Viabilitas sel (%)

100

50 50
50

0 0 0
DMSO NAC sendirian AG8 AG8+NAC DMSO NAC sendirian AG8 AG8+NAC DMSO NAC saja AG8 AG8+NAC
perawatan 24 jam perawatan 24 jam perawatan 24 jam

Angka2: Efek NAC terhadap kelangsungan hidup AG8 melawan sel TNBC. Sel MDA-MB-231, BT-549, dan MDA-MB-157 diunggulkan dalam pelat 6 sumur
dengan kepadatan 100.000 sel per sumur dan dirawat 24 jam kemudian dengan AG8 atau kontrol kendaraan (DMSO)±NAC (4mM) selama 24 jam.
Viabilitas sel dinilai dengan uji MTT dan dinyatakan sebagai% kepadatan optik relatif terhadap sel yang diobati dengan DMSO. Data (N=3)dinyatakan
sebagai berarti ± SDdari tiga percobaan independen,∗∗P<0:01Dan∗∗∗P<0:001versus AG8.

tentang aktivitas mitokondria sel TNBC menggunakan pewarna Dalam sel BT-549, dibandingkan dengan 1.0μKelompok M AG8, NAC
Mito-Tracker Red CMXRos. Sebelum pengobatan dengan sel AG8, menunjukkan efek signifikan hanya pada kadar MDA. Singkatnya,
MDA-MB-231, BT-549, dan MDA-MB-157 memiliki banyak struktur AG8 menunjukkan sitotoksisitas terhadap sel TNBC dengan
fluoresensi seperti titik berwarna merah terang di sitoplasma sel mempengaruhi tingkat GSH, SOD, dan MDA yang berhubungan
(Gambar 3(a)). Setelah pengobatan AG8 selama 24 jam; fluoresensi dengan jalur stres oksidatif, namun subtipe TNBC yang berbeda
merah dalam sitoplasma menurun secara signifikan tergantung memiliki sensitivitas yang berbeda terhadap AG8 dan NAC.
pada dosis yang menunjukkan bahwa AG8 mengganggu
penyerapan MitoTracker Red CMXRos oleh mitokondria. Pada
3.5. Pengaruh AG8 pada Jalur Apoptosis Ketergantungan
kelompok AG8+NAC, fluoresensi merah meningkat secara dramatis
Mitokondria pada Sel TNBC.Setelah diobati dengan AG8, NAC, atau
dibandingkan dengan kelompok AG8 saja pada konsentrasi yang
AG8+NAC selama 24 jam, ekspresi protein Bax, Bcl-2, dan sitokrom c
sama (Gambar 3(a)). Hasil ini dengan jelas menunjukkan bahwa
dalam sel BT549 dan MDA-MB-157 diuji dengan Western blotting.
fungsi mitokondria yang sangat terganggu setelah pengobatan
Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 5(a) di BT549, AG8 secara
dengan AG8 dapat dipulihkan dengan memperlakukan sel TNBC
signifikan meningkatkan ekspresi sitokrom c, dan efek ini
dengan NAC. Reaksi oksidatif di mitokondria menghasilkan
dinetralkan oleh NAC. Namun, dalam sel MDA-MB-157 (subtipe AA),
pembentukan ROS, yang diubah menjadi H2O2 oleh superoksida
AG8 hanya sedikit meningkatkan pelepasan sitokrom c, dan NAC
dismutase. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3 (b), AG8 secara
juga menunjukkan efek yang lemah pada peningkatan ini (Gambar
signifikan meningkatkan kadar ROS intraseluler dalam tiga sel TNBC
5(a) dan 5(c)). Baik dalam sel BT549 dan MDA-MB-157, AG8 secara
dibandingkan dengan kelompok kontrol, dan antioksidan NAC
signifikan meningkatkan dan menurunkan ekspresi Bax dan Bcl-2,
secara signifikan menurunkan kadar ROS intraseluler. Setelah
dan NAC menyelamatkan levelnya. Untuk kedua sel TNBC,
pretreatment dengan NAC, ROS yang dimediasi AG8 dihambat
pengobatan AG8 meningkatkan rasio Bax/Bcl-2 secara signifikan
secara signifikan. Pada sel MDA-MB-231 dan BT-549, AG8 bahkan
(Gambar 5(b)), menunjukkan bahwa keluarga protein Bcl-2 terlibat
menunjukkan aktivitas yang lebih baik dibandingkan kontrol positif
dalam apoptosis yang diinduksi AG8 pada sel kanker payudara. AG8
H2O2.
secara signifikan meningkatkan tingkat ekspresi caspase-3 dalam sel
BT549 dan MDA-MB-157, dan pra-perawatan dengan NAC
3.4. Pengaruh AG8 terhadap Kadar GSH, SOD, dan MDA
tampaknya memblokir efek ini (Gambar 5 (d)). Temuan ini
pada Sel TNBC.Untuk menentukan efek potensial AG8
menunjukkan bahwa AG8 dapat menginduksi apoptosis sel BT549
terhadap stres oksidatif, kadar GSH, SOD, dan MDA dalam
dan MDA-MB-157 melalui jalur yang bergantung pada mitokondria.
sel TNBC yang diobati dengan atau tanpa AG8 diukur lebih
lanjut. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4, setelah
inkubasi dengan AG8 selama 24 jam, kadar GSH dan SOD
dalam sel MDA-MB-231, BT-549, dan MDA-MB-157 menurun 3.6. Pengaruh AG8 pada Jalur Pensinyalan MAPK dan AKT di Sel
tergantung pada dosis, dan kadar MDA ditingkatkan dengan TNBC.Kami memeriksa efek modulasi AG8 pada pAKT dan pERK
cara yang bergantung pada dosis. Efek antioksidan NAC dalam sel TNBC dan menemukan bahwa setelah 24 jam
pada tingkat GSH, SOD, dan MDA sel TNBC yang diobati pengobatan AG8, ekspresi pAKT dan pERK dalam sel BT549 dan
dengan AG8 juga diperiksa. Pada sel MDA-MB-157, kadar MDA-MB-157 menurun secara signifikan (Gambar 6(a)). Di
GSH dan SOD pada kelompok AG8+NAC (1:5μM + 4mM) BT549, pra-perawatan dengan (4mM NAC) sebelum pengobatan
meningkat, dan kadar MDA menurun secara signifikan AG8, secara signifikan mengembalikan tingkat pAKT dan pERK,
dibandingkan dengan kelompok AG8 saja pada konsentrasi dipulihkan dibandingkan dengan kelompok AG8 (Gambar 6 (b)).
yang sama. Mengenai sel MDA-MB-231, NAC tidak Dalam sel MDA-MB-157, NAC mengembalikan penurunan pERK
menunjukkan efek signifikan terhadap kadar GSH, namun yang diinduksi AG8 tanpa mempengaruhi penurunan pAKT
kadar SOD dan MDA meningkat dan menurun dibandingkan (Gambar 6(b)). Temuan ini menunjukkan bahwa produksi ROS
dengan kelompok AG8 saja pada konsentrasi yang sama. yang diinduksi AG8 dapat aktif
6 Pengobatan Oksidatif dan Umur Panjang Seluler

0M 1.0 M 4.0 M 8.0 M 4.0 M+NAC

MDA-MB-231

0M 0,5 M 1.0 M 1.5 M 1.0 M+NAC

BT-549

0M 1.0 M 1.5 M 2.0 M 1.5 M+NAC

MDA-MB-157

(A)
Kontrol AG8 AG8+NAC NAC H2HAI2
MDA-MB-157 MDA-MB-231

4.0 M

1.5 M 600
⁎⁎⁎
⁎⁎⁎
Persentase ROS (%)

400
⁎⁎ ⁎⁎⁎
⁎⁎
1.0 M
⁎⁎
200 ⁎
BT-549

⁎⁎
⁎

⁎⁎ ⁎⁎ ⁎⁎
0
MDA-MB-231 BT-549 MDA-MB-157
Kontrol NAC
AG8 H202
AG8+NAC

(B)

Angka3: Efek AG8 pada fungsi mitokondria dalam sel TNBC. (a) Sel MDA-MB-231, BT-549, dan MDA-MB-157 diinkubasi dengan DMSO 0,1%
atau dengan AG8 selama 24 jam. Setelah perawatan, sel diinkubasi dengan 100nM MitoTracker Red CMXRos selama 30 menit. Sel-sel diamati
dengan mikroskop fluoresensi (100x). (b) Generasi ROS intraseluler yang diinduksi oleh AG8 dan NAC diukur dengan DCFH-DA (10μM) dan
aliran sitometri. Semua hasil mewakili tiga percobaan independen,∗P<0:05,∗∗P<0:01,Dan∗∗∗P<0:001versus kontrol.

Aktivasi MAPK dan AKT serta memicu jalur apoptosis
mitokondria pada sel TNBC.
4. Diskusi
Kanker payudara triple-negatif (TNBCs) mencakup 12-20% dari
seluruh kanker payudara yang terdiagnosis dan mempunyai
kelangsungan hidup pasien yang buruk secara keseluruhan [14-16].
Pilihan pengobatan untuk TBNC terbatas pada pembedahan, radiasi,
atau kemoterapi konvensional karena hanya sedikit terapi bertarget
yang tersedia [15]. TNBC adalah penyakit yang sangat heterogen
dan dapat dibagi menjadi subtipe molekuler yang berbeda:
imunomodulator (IM), mesenchymal (M), mesenchymal stem-like
(MSL), basal-like 1 dan 2 (BL1 dan BL2), dan luminal androgen
receptor ( tipe LAR) atau African American (AA) dan Kaukasia
tipe sian (CA) [6, 7]. Setiap subtipe TNBC memiliki ontologi
uniknya sendiri dan memberikan respons berbeda terhadap
perawatan standar perawatan (SOC) [8]. Di sini, kami
menyelidiki efek penghambatan AG8, saponin triterpenoid
alami dari Ardisia gigantifoliastapf., pada subtipe TNBC yang
berbeda yaitu MDA-MB-231 (MSL, CA), BT-549 (M, CA), dan
MDA-MB-157 (MSL, AA).
Apoptosis adalah sejenis kematian sel yang dikontrol secara genetik,
dan induksi apoptosis dieksplorasi sebagai pendekatan terapeutik untuk
kanker [17, 18]. Kami menemukan bahwa, mengenai garis sel MSL TNBC,
AG8 menunjukkan sitotoksisitas yang lebih kuat terhadap subtipe AA
(MDA-MB-157) dibandingkan CA (MDA-MB-231). Untuk TNBC tipe CA, AG8
menunjukkan lebih banyak sitotoksisitas terhadap subtipe M (BT-549)
dibandingkan subtipe MSL (MDA-MB-231). Hasil ini menunjukkan bahwa
AG8 mungkin memiliki sitotoksisitas selektif
Pengobatan Oksidatif dan Umur Panjang Seluler 7

MDA-MB-231 BT-549 MDA-MB-157

6 5 ⁎ 8
⁎ ###

⁎⁎ 4 ⁎⁎⁎ 6 ⁎⁎
4 ⁎⁎⁎

GSH ( M/g)
⁎⁎⁎

GSH ( M/g)
GSH ( M/g)

3
⁎⁎⁎ 4
2
2
2
1

0 0 0
DMSO

DMSO

DMSO
0,5 M

1.0 M

1.5 M

1.0 M

0,5 M

2.0 M
1.0 M

4.0 M

8.0 M

1.0 M+NAC

1.5 M+NAC
4.0 M+NAC

MDA-MB-231 BT-549 MDA-MB-157

150 #
⁎ 200 150 ##
⁎ ⁎
Aktivitas SOD (U/mg)

Aktivitas SOD (U/mg)

Aktivitas SOD (U/mg)

150 ⁎⁎
100 ⁎⁎ ⁎⁎ 100 ⁎⁎
⁎⁎
100
50 50
50

0 0 0

DMSO
DMSO
DMSO

1.0 M

0,5 M

2.0 M
0,5 M

1.0 M

1.5 M

1.5 M+NAC
1.0 M+NAC
1.0 M

4.0 M

8.0 M

4.0 M+NAC

MDA-MB-231 # BT-549 MDA-MB-157

4 ## 3 ⁎⁎⁎
⁎⁎⁎ 3
⁎ ⁎⁎ ⁎ ⁎
⁎⁎
3 ⁎⁎ ⁎
MDA (nM/mg)

MDA (nM/mg)
MDA (nM/mg)

2 2
2

1 1
1

0 0 0
DMSO
DMSO

DMSO

2.0 M
1.0 M

0,5 M
1.0 M

4.0 M

8.0 M

0,5 M

1.0 M

1.5 M

1.5 M+NAC
4.0 M+NAC

1.0 M+NAC

Angka4: Efek AG8 pada kadar GSH, SOD, dan MDA dalam sel TNBC. Sel diperlakukan dengan konsentrasi AG8 yang berbeda selama 24 jam.
Gambar yang ditampilkan adalah hasil representatif dari tiga ulangan biologis. Data dinyatakan sebagaiberarti ± SDdari tiga percobaan
independen,∗P<0:05,∗∗P<0:01,Dan∗∗∗P<0:001versus DMSO;#P<0:05Dan##P<0:01versus AG8.

terhadap subtipe AA dan M TNBC perlu dikonfirmasi dalam sel kanker [22-25]. Oleh karena itu, antioksidan (NAC) sering
penelitian selanjutnya. Lebih lanjut, hasil kami menunjukkan digunakan untuk mendorong pengurangan oksigen. Yang
bahwa jumlah sel apoptosis awal atau akhir meningkat mengejutkan, perlakuan awal dengan NAC mengurangi
tergantung dosis sebesar AG8. sitotoksisitas yang diinduksi AG8, menunjukkan bahwa produksi ROS
ROS mengandung elektron tidak berpasangan dan dihasilkan mempunyai peran dalam apoptosis sel TNBC yang diinduksi AG8.
oleh reduksi oksigen parsial [19]. Produksi ROS yang berlebihan Pada subtipe CA sel TNBC (MDA-MB-231 dan BT-549), aktivitas
selanjutnya dapat menyebabkan ketidakstabilan lipid, protein, dan seluler pulih serupa dengan kelompok DMSO, sedangkan pada sel
DNA [20, 21]. Akumulasi ROS lebih berbahaya bagi sel kanker karena yang diberi NAC, aktivitas seluler masih menurun secara signifikan
tingkat stres oksidatif pada sel kanker lebih tinggi dibandingkan sel dibandingkan dengan sel TNBC. kelompok DMSO. Hasil ini
normal. Beberapa saponin triterpenoid telah dilaporkan menunjukkan bahwa AG8 dapat menginduksi apoptosis sel TNBC
menginduksi apoptosis melalui akumulasi ROS di dalam subtipe AA tidak hanya melalui jalur ROS.
8 Pengobatan Oksidatif dan Umur Panjang Seluler

BT549 MDA-MB-157 kDa

4
Bax 21
⁎⁎⁎ ###
3 ⁎⁎ ##
Bcl-2 26

Rasio Bax/Bcl-2
Cyto.c 15 2

Caspase-3 13
1

tubulin 55
0
DMSO +–––––––

DMSO

DMSO
AG8

AG8
NAC

NAC
AG8+NAC

AG8+NAC
NAC ––++––+ +
AG8 –++––++ –

Perawatan 24 jam

BT-549
MDA-MB-157

(A) (B)

2.0 ⁎⁎⁎
10 ###

⁎⁎⁎ ###
Ekspresi protein Caspase-3
Ekspresi protein sito-c

1.5 8

6 ⁎⁎⁎###
1.0
4
0,5
2

0,0 0
DMSO

DMSO
AG8

AG8

DMSO

DMSO
NAC

NAC

AG8

AG8
NAC

NAC
AG8+NAC

AG8+NAC

AG8+NAC

AG8+NAC
Perawatan 24 jam Perawatan 24 jam

BT-549 BT-549
MDA-MB-157 MDA-MB-157

(C) (D)

Angka5: Pengaruh AG8 pada ekspresi protein keluarga Cyto.c dan Bcl-2 sel TNBC. (a) sel BT549 dan MDAMB-157 diobati dengan AG8 (1.0 dan
1.5μM) dengan atau tanpa NAC (4mM) selama 24 jam, dan ekspresi protein dianalisis menggunakan Western blotting. (b) Rasio Bax/Bcl-2, (c)
data cycto.c, dan (d) caspase-3 disajikan sebagaiberarti ± SDdari tiga percobaan independen.∗∗P<0:01Dan∗∗∗P< 0:001dibandingkan dengan
kelompok DMSO;##P<0:01Dan###P<0:001dibandingkan dengan kelompok AG8.

Depolarisasi mitokondria adalah salah satu penyebab utama
disfungsi mitokondria, dan disfungsi mitokondria sangat penting
untuk apoptosis sel. Gangguan integritas membran mitokondria
akan menyebabkan depolarisasi membran mitokondria dan
akhirnya apoptosis yang dimediasi mitokondria [26-29].
Integritasnya diperiksa menggunakan pewarna MitoTracker Red
CMXRos [30]. Pengobatan sel dengan AG8 mengakibatkan
kerusakan membran mitokondria yang bergantung pada dosis, dan
efek ini dibalik oleh NAC dalam sel TNBC.
Homeostasis redoks seluler dipertahankan oleh keseimbangan
antara antioksidan dan prooksidan. SOD dan GSH intraseluler
adalah antioksidan penting yang melindungi komponen seluler dari
kerusakan oksidatif [31, 32]. Meskipun diproduksi di bawah tekanan
oksidatif dan peroksidasi lipid, MDA dapat mencerminkan kerusakan
oksidatif pada membran plasma [33].
Untuk mengevaluasi lebih lanjut efek AG8 pada stres oksidatif, kami
menganalisis tingkat enzim antioksidan dan prooksidatif seluler
yang penting dalam sel TNBC yang distimulasi AG8. Kami
menemukan bahwa AG8 dapat secara signifikan menurunkan kadar
antioksidan SOD dan GSH, menunjukkan bahwa AG8 dapat memulai
ketidakseimbangan redoks dalam sel TNBC dan kemudian
menginduksi apoptosis. Penelitian kami menunjukkan bahwa AG8
secara signifikan meningkatkan kadar enzim prooksidatif MDA
dalam sel TNBC. Telah ditunjukkan bahwa AG8 mungkin merupakan
kandidat yang tepat untuk pengobatan TNBC karena menginduksi
stres oksidatif.
Bax dan Bcl-2 memainkan peran penting dalam apoptosis
sel [34]. Mitokondria dapat memulai jalur kematian sel
apoptosis melalui pelepasan sitokrom c [35]. Keseimbangan
anggota keluarga Bcl-2 yang pro dan antiapoptosis menentukan
Pengobatan Oksidatif dan Umur Panjang Seluler 9

1.5

⁎⁎⁎ # # ⁎⁎ ##

perK/ERK (satuan arb)

1.0

0,5

0,0

DMSO

DMSO
AG8

AG8
kDa

NAC

NAC
BT549 MDA-MB-157

AG8+NAC

AG8+NAC
AKT 60
perawatan 24 jam

pakt 56 1.5

pAKT/AKT (satuan arb)

⁎⁎ ## ⁎⁎⁎
ERK 44 1.0

merembes
43
0,5

tubulin 55
0,0
DMSO +–––+–––

DMSO

DMSO
AG8

AG8
NAC

NAC
AG8+NAC

AG8+NAC
NAC ––++––++
AG8 –++––++–

Perawatan 24 jam

BT-549
MDA-MB-157

(A) (B)

Angka6: Efek AG8 pada fosforilasi ERK dan AKT dalam Sel TNBC. (a) sel BT549 dan MDAMB-157 diobati dengan AG8 (1.0 dan 1.5μM) dengan
atau tanpa NAC (4mM) selama 24 jam, dan ekspresi protein dianalisis menggunakan Western blotting. (b) Intensitas volume pita relatif
terhadap total pita AKT dan ERK yang cocok. Data disajikan sebagaiberarti ± SDdari tiga percobaan independen.∗∗P<0:01Dan∗∗∗P < 0:001
dibandingkan dengan kelompok DMSO;##P<0:01Dan###P<0:001dibandingkan dengan kelompok AG8.

apoptosis akhir/nasib kelangsungan hidup sel [34]. Ketika rasio
Bax/Bcl-2 meningkat, potensi membran mitokondria hilang,
sitokrom c dilepaskan, dan selanjutnya, caspase-9 diaktifkan,
menghasilkan aktivasi caspase-3 [35, 36]. Caspase-3 dapat
menyebabkan kematian sel yang ditandai dengan blebbing
membran sel, kerusakan struktur sel, dan fragmentasi DNA (37).
Dalam sel BT-549 dan MDA-MB-157 yang diobati dengan AG8,
ekspresi Bax dan Bcl-2 masing-masing meningkat dan menurun
secara signifikan, dan peningkatan rasio Bax/Bcl-2 berkurang
secara signifikan dengan pengobatan NAC. AG8 dapat
menginduksi pelepasan sitokrom c dari mitokondria ke dalam
sitoplasma, dan efek ini juga dilawan oleh NAC. Ini
menunjukkan bahwa apoptosis yang diinduksi AG8 mungkin
terjadi melalui jalur mitokondria.
Jalur pensinyalan AKT dan MAPK merupakan jalur penting
yang terlibat dalam regulasi proses termasuk pertumbuhan sel,
proliferasi, diferensiasi, dan apoptosis [38, 39]. AKT dan/atau
ERK terfosforilasi dapat meningkatkan proliferasi sel dan
menghambat apoptosis [40-42]. ROS telah dilaporkan
menginduksi apoptosis sel tumor dengan mengaktifkan jalur
pensinyalan caspases, MAPK, dan PI3K/AKT [43, 44]. Aktivasi AKT
dan/atau ERK mungkin merupakan mekanisme utama
anisme untuk pengobatan kanker [45]. Selain itu, AKT
dapat mengatur apoptosis sel melalui modulasi anggota
keluarga Bcl-2 [46]. Oleh karena itu, kami menyelidiki
jalur pensinyalan seluler yang terlibat dalam apoptosis
yang diinduksi AG8. Kami menemukan bahwa AG8
secara signifikan menurunkan fosforilasi ERK dan AKT
dalam sel BT549 dan MDA-MB-157. NAC dapat secara
signifikan memulihkan kadar ERK terfosforilasi di kedua
sel, sementara NAC hanya membalikkan penurunan
dramatis kadar pAKT di sel BT549 dan tidak memiliki efek
pada penurunan pAKT di sel MDA-MB-157. Hasil ini
menunjukkan bahwa ROS mungkin memiliki efek kecil
pada kematian pAKT yang diinduksi AG8 pada MDA-
MB-157 (subtipe AA), dan reaksi yang berbeda antara
subtipe yang berbeda ini perlu diperiksa lebih lanjut.
Karena itu,
5. Kesimpulan
Meskipun mekanisme dan efek terapeutik AG8 pada TNBC
perlu diselidiki lebih lanjut, hasil ini menunjukkan bahwa
AG8 menunjukkan efek antikanker dengan menginduksi
10
ROS, menghambat jalur pensinyalan ERK dan Akt, dan secara
langsung merusak fungsi mitokondria. Selain itu, kami
menemukan bahwa subtipe TNBC yang berbeda menunjukkan
sensitivitas yang berbeda terhadap AG8, dan oleh karena itu,
AG8 mungkin memiliki efek sitotoksik selektif terhadap subtipe
AA dan M TNBC. Menariknya, AG8 secara dramatis menginduksi
apoptosis sel MDA-MB-157 (subtipe AA) melalui jalur yang tidak
hanya terkait dengan ROS, berbeda dengan dua subtipe lainnya.
Mekanisme efek AG8 perlu diteliti lebih lanjut.
Ketersediaan Data
Kumpulan data yang dihasilkan selama dan/atau dianalisis selama
penelitian ini tersedia dari penulis terkait berdasarkan permintaan
yang masuk akal.
Konflik kepentingan
Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak memiliki kepentingan bersaing.
Kontribusi Penulis
L-HM dan L-HW merancang proyek, melaksanakan sebagian
besar eksperimen, dan menyusun naskah. TF-Y dan Y-NW
berpartisipasi dalam pekerjaan molekuler, biokimia, dan biologi
sel. HY dan ML berkontribusi pada bagian eksperimen dan
analisis data. PL dan CY menyusun dan merancang eksperimen.
Semua penulis membaca dan menyetujui naskah akhir. Li-Hua
Mu dan Li-HuaWang memberikan kontribusi yang sama dalam
pekerjaan ini.
Ucapan Terima Kasih
Penelitian ini didukung oleh hibah dari National Natural
Science Foundation of China (No. 31370006).
Referensi
[1] VS Jamdade, N. Sethi, NA Mundhe, P. Kumar, M. Lahkar, dan
N. Sinha, “Target terapeutik kanker payudara triple-negatif:
tinjauan,”Jurnal Farmakologi Inggris,jilid. 172, tidak. 17,
hlm.4228–4237, 2015.
[2] GJ Morris, S. Naidu, AK Topham dkk., “Perbedaan karakteristik
karsinoma payudara pada pasien Afrika-Amerika dan Kaukasia
yang baru didiagnosis,”Kanker,jilid. 110, tidak. 4, hal.876–884,
2007.
[3] T. Ovcaricek, S. Frkovic, E. Matos, B. Mozina, dan S. Borstnar, “Kanker
payudara triple negatif - faktor prognostik dan kelangsungan
hidup,”Radiologi dan Onkologi,jilid. 45, tidak. 1, hal. 46–52, 2011.
[4] MB Chougule, AR Patel, T. Jackson, dan M. Singh, “Aktivitas antitumor
Noscapine dalam kombinasi dengan Doxorubicin pada kanker
payudara triple negatif,”PLoS Satu,jilid. 6, tidak. 3, pasal e17733,
2011.
[5] G. von Minckwitz dan M. Martin, “Perawatan neoadjuvan untuk
kanker payudara triple-negatif (TNBC),”Sejarah Onkologi, jilid.
23, tidak. 6, hal.vi35–vi39, 2012.
[6] BD Lehmann, JA Bauer, X. Chen et al., “Identifikasi subtipe
kanker payudara triple-negatif manusia dan model
praklinis untuk pemilihan terapi yang ditargetkan,”Jurnal
Investigasi Klinis,jilid. 121, tidak. 7, hlm.2750–2767, 2011.
Pengobatan Oksidatif dan Umur Panjang Seluler
[7] L. Martinez, E. Thames, J. Kim, G. Chaudhuri, R. Singh, dan
S. Pervin, “Peningkatan sensitivitas sel kanker payudara triple
negatif Afrika-Amerika terhadap apoptosis yang dimediasi
mitokondria yang diinduksi oksida nitrat,”Kanker BMC,jilid. 16,
tidak. 1, hal. 559, 2016.
[8] KD Amos, B. Adamo, dan CK Anders, “Kanker payudara
triple-negatif: pembaruan uji klinis neoadjuvan,”Jurnal
Internasional Kanker Payudara,jilid. 2012, ID Artikel
385978, 7 halaman, 2012.
[9] LH Mu, NY Wei, dan P. Liu, “Saponin triterpenoid sitotoksik
dari Ardisia gigantifolia,”tanaman Medica,jilid. 78, tidak. 6,
hal.617–621, 2012.
[10] LH Mu, QQ Gong, HX Zhao, dan P. Liu, “Saponin
triterpenoid dariArdisia gigantifolia,” Buletin Kimia &
Farmasi,jilid. 58, tidak. 9, hal.1248–1251, 2010.
[11] QQ Gong, LH Mu, P. Liu, SL Yang, B. Wang, dan YL Feng,
“Sapoin triterpenoid baru dariArdisia gigantifolia Staf,”
Surat Kimia Cina,jilid. 21, tidak. 4, hal.449–452, 2010.
[12] XL Zheng, XZ Dong, LH Mu, HB Liao, BY Yu, dan
P. Liu, “Aktivitas antiproliferasi saponin triterpenoid AG4
dariArdisia gigantifoliastaf. pada sel MCF-7,”Buletin
Farmakologi Tiongkok,jilid. 29, tidak. 5, hal.674–679, 2013.
[13] LH Mu, YN Wang, DX Wang dkk., “AG36 menghambat proliferasi
sel kanker payudara manusia dengan mendorong apoptosis
secara in vitroDanin vivo,” Frontiers dalam Farmakologi, jilid. 8,
hal. 15, 2017.
[14] WD Foulkes, IE Smith, dan JS Reis-Filho, “Kanker payudara
Triple-Negatif,”Jurnal Kedokteran New England, jilid. 363,
tidak. 20, hal. 1938–1948, 2010.
[15] HA Wahba dan HA El-Hadaad, “Pendekatan terkini dalam
pengobatan kanker payudara triple-negatif,”Biologi &
Kedokteran Kanker,jilid. 12, tidak. 2, hal.106–116, 2015.
[16] GC Guo, JX Wang, ML Han, LP Zhang, dan L. Li, “microRNA-761
menginduksi fenotip agresif dalam sel kanker payudara
triplenegatif dengan menekan ekspresi TRIM29,” Onkologi
Seluler,jilid. 40, tidak. 2, hal.157–166, 2017.
[17] E. Robles-Escajeda, U. Das, NM Ortega dkk., “Dienon mirip
kurkumin baru menginduksi apoptosis pada sel kanker
payudara triple-negatif,”Onkologi Seluler,jilid. 39, tidak. 3,
hal.265–277, 2016.
[18] M. Hassan, H. Watari, A. Abu Almaaty, Y. Ohba, dan
N. Sakuragi, “Apoptosis dan terapi penargetan molekuler pada
kanker,”Penelitian Biomed Internasional,jilid. 2014, ID Artikel
150845, 23 halaman, 2014.
[19] PD Ray, BW Huang, dan Y. Tsuji, “Homeostasis spesies oksigen
reaktif (ROS) dan regulasi redoks dalam pensinyalan seluler,”
Sinyal Seluler,jilid. 24, tidak. 5, hal.981–990, 2012.
[20] V. Lobo, A. Patil, A. Phatak, dan N. Chandra, “Radikal bebas,
antioksidan dan makanan fungsional: berdampak pada kesehatan
manusia,” Ulasan Farmakognosi,jilid. 4, tidak. 8, hal.118–126, 2010.
[21] JF Turrens, “Pembentukan mitokondria spesies oksigen
reaktif,”Jurnal Fisiologi,jilid. 552, tidak. 2, hal.335–344,
2003.
[22] Y. Shan, F. Guan, X. Zhao et al., “Macranthoside B menginduksi
apoptosis dan autophagy melalui akumulasi spesies oksigen reaktif
dalam sel kanker ovarium manusia A2780,”Nutrisi dan Kanker,jilid.
68, tidak. 2, hal.280–289, 2016.
[23] L. Liu, T. Li, J. Tan dkk., “NG sebagai donor oksida nitrat baru menginduksi
apoptosis dengan meningkatkan spesies oksigen reaktif dan
Pengobatan Oksidatif dan Umur Panjang Seluler 11

menghambat fungsi mitokondria dalam sel MGC803,” [39] TF Franke, CP Hornik, L. Segev, GA Shostak, dan
Imunofarmakologi Internasional,jilid. 23, tidak. 1, hal. 27–36, 2014. C. Sugimoto, “PI3K/Akt dan apoptosis: ukuran penting,”
[24] ZT Wu, XM Qi, JJ Sheng et al., “Timosaponin A3 menginduksi onkogen,jilid. 22, tidak. 56, hal.8983–8998, 2003.
hepatotoksisitas pada tikus melalui menginduksi stres oksidatif dan [40] H. Zhou, XM Li, J. Meinkoth, dan RN Pittman, “Akt mengatur
menurunkan regulasi transporter asam empedu,”Acta kelangsungan hidup sel dan apoptosis pada tingkat
Pharmacologica Sinica,jilid. 35, tidak. 9, hal.1188–1198, 2014. postmitokondria,”Jurnal Biologi Sel,jilid. 151, tidak. 3, hal.483–
[25] X. Zhu, K. Wang, K. Zhang dkk., “Ziyuglikosida II menghambat 494, 2000.
pertumbuhan sel karsinoma payudara manusia MDA-MB-435 [41] Z. Miao, F. Yu, Y. Ren, dan J. Yang, “d, l-Sulforaphane menginduksi
melalui penghentian siklus sel dan induksi apoptosis melalui apoptosis yang bergantung pada ROS pada sel Gliomablastoma
jalur bergantung mitokondria,”Jurnal Internasional Ilmu manusia dengan menonaktifkan jalur pensinyalan STAT3,”Jurnal
Molekuler,jilid. 14, tidak. 9, hal.18041–18055, 2013. Internasional Ilmu Molekuler,jilid. 18, tidak. 1, hal.72–85, 2017.
[26] JD Ly, DR Grubb, dan A. Lawen, “Potensi membran mitokondria [42] WF Zhong, XH Wang, B. Pan, F. Li, L. Kuang, dan ZX Su, “Eupatilin
(deltapsi (m)) dalam apoptosis; Sebuah pembaharuan," menginduksi apoptosis sel kanker ginjal manusia melalui jalur
Apoptosis,jilid. 8, tidak. 2, hal.115–128, 2003. pensinyalan MAPK dan PI3K/AKT yang dimediasi ROS,”Surat
[27] M. Loeffler dan G. Kroemer, “Mitokondria dalam pengendalian kematian Onkologi,jilid. 12, tidak. 4, hal.2894–2899, 2016.
sel: kepastian dan penyamaran,”Penelitian Sel Eksperimental, jilid. 256, [43] K. Wu, Q. Chang, Y. Lu et al., “Resistensi gefitinib dihasilkan dari
tidak. 1, hal. 19–26, 2000. aktivasi Akt yang dimediasi STAT3 dalam sel kanker paru-paru,”
[28] MH Harris dan CB Thompson, “Peran keluarga Bcl-2 target onco,jilid. 4, tidak. 12, hlm.2430–2438, 2013.
dalam regulasi permeabilitas membran mitokondria [44] DM Zhang, JS Liu, MK Tang dkk., “Bufotalin dari Venenum Bufonis
luar,”Kematian Sel dan Diferensiasi,jilid. 7, tidak. 12, menghambat pertumbuhan sel HepG2 yang resistan terhadap
hlm.1182–1191, 2000. berbagai obat melalui penghentian siklus sel G2/M dan apoptosis,”
[29] J. Estaquier, F. Vallette, JL Vayssiere, dan B. Mignotte, “Jalur Jurnal Farmakologi Eropa,jilid. 692, tidak. 1-3, hal. 19– 28, 2012.
mitokondria apoptosis,”Kemajuan dalam Pengobatan
MitokondriaAdv. Contoh. medis. Biol.,jilid. 942, hlm.157–183, [45] C. Perricone, C. De Carolis, dan R. Perricone, “Glutathione:
2012. pemain kunci dalam autoimunitas,”Ulasan Autoimunitas,jilid. 8,
[30] JC Liao, WT Chang, YH Lan, MJ Hour, dan HZ Lee, “Penerapan tidak. 8, hal.697–701, 2009.
proteomik untuk mengidentifikasi molekul target yang terlibat [46] KC Pramanik, SR Boreddy, dan SK Srivastava, “Peran kompleks rantai
dalam fotokilling yang diinduksi Lonicera japonica pada sel kanker transpor elektron mitokondria dalam capsaicin memediasi stres
paru-paru manusia CH27,”Pengobatan Komplementer dan oksidatif yang menyebabkan apoptosis pada sel kanker pankreas,”
Alternatif BMC,jilid. 13, tidak. 1, hal. 244, 2013. PLoS Satu,jilid. 6, tidak. 5, artikel e20151, 2011.
[31] QQ Mao, YF Xian, SP Ip, SH Tsai, dan CT Che, “Efek
perlindungan glikosida peony terhadap kematian sel yang
diinduksi kortikosteron pada sel PC12 melalui tindakan
antioksidan,” Jurnal Etnofarmakologi,jilid. 133, tidak. 3,
hal.1121–1125, 2011.
[32] D. Arnoult, P. Parone, JC Martinou, B. Antonsson,
J. Estaquier, dan JC Ameisen, “Pelepasan faktor penginduksi
apoptosis mitokondria terjadi di bagian hilir pelepasan sitokrom c
sebagai respons terhadap beberapa rangsangan proapoptosis,”
Jurnal Biologi Sel,jilid. 159, tidak. 6, hal.923–929, 2002.
[33] P. Kakkar dan BK Singh, “Mitokondria: pusat aktivitas redoks dan
pengendalian marabahaya seluler,”Biokimia Molekuler dan
Seluler,jilid. 305, tidak. 1-2, hal.235–253, 2007.
[34] D. Li, E. Ueta, T. Kimura, T. Yamamoto, dan T. Osaki,
“Spesies oksigen reaktif (ROS) mengontrol ekspresi
protein keluarga Bcl-2 dengan mengatur fosforilasi dan
ubiquitinasinya,”Ilmu Kanker,jilid. 95, tidak. 8, hal.644–
650, 2004.
[35] I. Budihardjo, H. Oliver, M. Lutter, X. Luo, dan X. Wang,
“Jalur biokimia aktivasi caspase selama apoptosis,”
Tinjauan Tahunan Biologi Sel dan Perkembangan, jilid.
15, tidak. 1, hal.269–290, 1999.
[36] I. Vivanco dan CL Sawyers, “Jalur fosfatidylinositol 3-
kinase – AKT pada kanker manusia,”Ulasan Alam
Kanker,jilid. 2, tidak. 7, hal.489–501, 2002.
[37] JY Fang dan BC Richardson, “Jalur pensinyalan MAPK dan
kanker kolorektal,”Onkologi Lancet,jilid. 6, tidak. 5,
hal.322–327, 2005.
[38] C. Peyssonnaux dan A. Eychene, “Jalur Raf/MEK/ERK:
konsep aktivasi baru,”Biologi Sel, jilid. 93, tidak. 1-2,
hal.53–62, 2001.