KATA PENGANTAR

Puji syukur kehadirat Allah SWT atas limpahan rahmat dan karunia-Nya sehingga
penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi ini yang berjudul
“PENETAPAN KADAR FENOLAT TOTAL DAN AKTIVITAS

ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL BIJI BUAH MARKISA

KONYAL (Passiflora ligularis f. lobata) MENGGUNAKAN
SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS”. Skripsi ini merupakan salah satu
persyaratan untuk menyelesaikan program studi S1 Farmasi di Universitas
Perintis Indonesia. Dalam penulisan skripsi ini tidak terlepas dari do’a, bantuan,
dan bimbingan serta dukungan dari berbagai pihak. Oleh karena itu dalam
kesempatan ini penulis dengan senang hati menyampaikan ucapan terimakasih
dan penghargaan yang tak terhingga kepada :

1. Ibu apt.Verawati, M.Farm, selaku pembimbing I dan Ibu Tisa Mandala Sari,

S.Pd, M.Si selaku pembimbing II, yang telah membimbing penulis dengan

penuh perhatian dan kesabaran serta dapat meluangkan waktu untuk

memberikan petunjuk, arahan, dan nasehat dalam menyelesaikan penelitian

dan penulisan skripsi ini.

2. Bapak Yenrizal Jafri, S.Kp, M.Biomed, selaku Rektor Universitas perintis

Indoneisa.

3. Ibu Dr. apt. Eka Fitrianda, M.Farm, selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas

Perintis Indonesia.

4. Ibu apt. Revi Yenti, M.Si, selaku Ketua Prodi S1 Farmasi Universitas Perintis

Indonesia.

ii
5. Ibu Dr. apt. Ifmaily, M.Kes, selaku Pembimbing Akademik yang telah

memberikan bimbingan dan nasehat dalam kegiatan akademik yang diberikan

selama ini.

6. Bapak/Ibu Dosen yang telah mendidik dan memberikan ilmu kepada penulis

dan Staf Karyawan/Karyawati serta Analis Labor Program Studi S1 Farmasi

Universitas Perintis Indonesia.

Semoga Allah SWT membalas dan melimpahkan rahmat dan karunia-Nya kepada

kita semua. Kritik dan saran yang membangun sangat diharapkan penulis demi

kesempurnaan skripsi ini. Penulis juga berharap skripsi ini dapat bermanfaat dan

menjadi sumbangan yang bernilai bagi ilmu pengetahuan dan bermanfaat bagi kita

semua.

Padang, 17 Juli 2022

Penulis

iii
 ABSTRAK

Markisa konyal (Passiflora ligularis F. lobata) telah banyak dimanfaatkan

sebagai sari buah markisa. Limbah dari markisa konyal dapat dimanfaatkan oleh
masyarakat, maka perlu dilakukan penelitian yang menggali potensi markisa
konyal seperti biji buah markisa sebagai obat bahan alam. Penelitian ini bertujuan
untuk mengetahui kadar senyawa fenolat total dan aktivitas antioksidan ekstrak
etanol dari biji buah markisa konyal menggunakan metode Spektrofotometri UV-
Vis. Sampel dimaserasi dengan pelarut etanol 70% dan 96 %, dilakukan tiga kali
pengulangan dan filtrat dipekatkan menggunakan alat rotary evaporator pada
suhu 40°C. Ekstrak yang didapatkan ditentukan kadar senyawa fenolat
menggunaan metode Follin - Ciocalteau serta uji aktivitas antioksidan
menggunakan metode DPPH dengan asam galat sebagai senyawa pembanding.
Persamaan linearitas asam galat yang digunakan dalam penentuan kadar senyawa
fenolat total di dalam sampel adalah y = 0,043+0,00569x dengan koefisien
korelasi (r) = 0.9974 yang dukur pada panjang λ max 747 nm. Uji aktivitas
antioksidan asam galat didapatkan IC50: 2,04 µg/mL, dan uji aktivitas antioksidan
sampel didapatkan IC50: 21,8983 µg/mL. Berdasarkan nilai IC50 dapat
disimpulkan bahwa aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol biji buah markisa
masuk kedalam kategori sangat kuat. Kesetaraan aktivitas antioksidan ektrak
etanol biji buah markisa konyal dengan asam galat yaitu 1:10,7355 mg, artinya 1
mg gram asam galat setara dengan 10,7355 mg ekstrak etanol biji buah markisa
konyal.

Kata kunci : Biji buah markisa konyal (Passiflora ligularis F. lobata), Ekstrak,
Aktivitas Antioksidan, DPPH.

iv
 ABSTRACT

Konyal passion fruit (Passiflora ligularis F. lobata) has been widely used
as passion fruit juice. Waste from konyal passion fruit can be used by the
community, it is necessary to conduct research that explores the potential of
konyal passion fruit such as passion fruit seeds as natural medicine. This study
aims to determine the total phenolic compound content and antioxidant activity of
ethanol extract from konyal passion fruit seeds using UV-Vis Spectrophotometry
method. The sample was macerated with 70% and 96% ethanol solvent, repeated
three times and the filtrate was concentrated using a rotary evaporator at 40°C.
The extract obtained was determined by the concentration of phenolic compounds
using the Follin - Ciocalteau method and the antioxidant activity test using the
DPPH method with gallic acid as a comparison compound. The linearity equation
for gallic acid used in determining the total phenolic compound content in the
sample was y = 0.043+0.00569x with a correlation coefficient (r) = 0.9974
measured at a length of max 747 nm. The antioxidant activity test of gallic acid
obtained IC50: 2.04 g/mL, and the antioxidant activity test of the sample obtained
IC50: 21.8983 g/mL. Based on the IC50 value, it can be concluded that the
antioxidant activity of the ethanolic extract of passion fruit seeds is categorized as
very strong. The equivalence of antioxidant activity of ethanolic extract of konyal
passion fruit seeds with gallic acid is 1: 10.7355 mg, meaning that 1 mg gram of
gallic acid is equivalent to 10.7355 mg of ethanolic extract of konyal passion fruit
seeds.
Keywords:: Konyal passion fruit seeds (Passiflora ligularis F. lobata), Extract,
Antioxidant Activity, DPPH.

v
 DAFTAR ISI

JUDUL………………………………………………………………......……….i
KATA PENGANTAR………………………………………………………......ii
ABSTRAK……………………………………………………………………....iv
ABSTRACT………………………………………………………………..…....v
DAFTAR ISI……………………………………………………………..……..vi
DAFTAR GAMBAR…………………………………………………..………vii
DAFTAR TABEL……………………………………………………..…...…..viii
DAFTAR LAMPIRAN………………………………………………..……….ix
BAB I. PENDAHULUAN……………………………………………..…………1
1.1 Latar Belakang…………………………………………………………….1
1.2 Rumusan Masalah........................................................................................1
1.3 Tujuan Penelitian..........................................................................................3
1.4 Manfaat Penelitian........................................................................................3
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA………………………………………………...5
2.1 Tinjauan Botani Tumbuhan Markisa Konyal (Passiflora ligularis Juss.)....5
2.1.1 Klasifikasi Tumbuhan Markisa.............................................................5
2.1.2 Nama Daerah.........................................................................................6
2.1.3 Morfologi Tumbuhan............................................................................6
2.1.4 Kandungan Kimia Tanaman Markisa....................................................6
2.1.5 Kegunaan Tanaman Markisa.................................................................7
2.2 Simplisia......................................................................................................7
2.3 Ekstraksi......................................................................................................8
2.3.1 Definisi Ekstraksi..................................................................................8
2.3.2 Metode Ekstraksi...........................................................................……8
2.3.2.1 Cara Dingin………………………………………………………..8
2.3.2.2 Cara Panas…………………………………………………………9
2.4 Senyawa Fenolat dan Metode Follin-Ciocalteu........................................10
2.4.1 Pengertian Senyawa Fenolat................................................................10
2.4.2 Sifat Fisiko Kimia................................................................................11
2.4.3 Asam Galat..........................................................................................11
2.4.4 Metode Follin-Ciocalteu......................................................................12

vi
 2.5 Radikal Bebas............................................................................................13
2.5.1 Definisi Radikal Bebas.........................................................................13
2.5.2 Pembentukan Radikal Bebas ...............................................................14
2.6 Antioksidan..........................................................................................15
2.6.1 Pengertian Antioksidan........................................................................15
2.6.2 Pembagian Antioksidan.......................................................................16
2.6.3 Metoda Pengujian Antioksidan............................................................14
2.6.4 Pengujian Antioksidan dengan Metode DPPH....................................18
2.7 Spektrofotometri UV-Vis..........................................................................19
2.7.1 Defenisi Spektrofotometri UV-VIS....................................................20
2.7.2 Hukum Lambert-Beer.........................................................................20
2.7.3 Bagian-bagian Spektrofotometer UV-Vis .........................................21
2.7.4 Prinsip Kerja Spektrofotometri UV-VIS............................................20
BAB III. METODE PENELITIAN……………………………………………25
3.1 Waktu dan Tempat Penelitian....................................................................25
3.2 Alat dan Bahan...........................................................................................25
3.2.1 Alat.............…………………………………………………………..25
3.2.2 Bahan....................................................................................................25
3.3 Prosedur Kerja............................................................................................26
3.3.1 Pengambilan Sampel............................................................................26
3.3.2 Identifikasi Tumbuhan..........................................................................26
3.3.3 Penyiapan Sampel................................................................................26
3.4 Pembuatan Ekstrak.....................................................................................26
3.5 Evaluasi Ekstrak.........................................................................................26
3.5.1 Pemeriksaan Organoleptis....................................................................27
3.5.2 Penentuan Rendemen Ekstrak..............................................................27
3.5.3 Pemeriksaan Susut Pengeringan...........................................................27
3.5.4 Kadar Abu............................................................................................27
3.6 Uji Skrinning Fitokimia..............................................................................28
3.7 Pembuatan Reagen.....................................................................................30
3.8 Penentuan Kadar Fenolat Total dengan Metoda Follin-Ciocalteu.............31
3.9 Penentuan Aktivitas Antioksidan Dengan Metode DPPH.........................32
3.7 Rumus Perhitungan Data............................................................................34
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN………………………………………36
4.1 Hasil Penelitian………………………….…………………………………36
4.2 Pembahasan………………………………………………………………..36

vii
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN………………………………………..43
5.1 Kesimpulan...................................................................................................43
5.2 Saran.............................................................................................................43
DAFTAR PUSTAKA…………………………………………………………...44
LAMPIRAN……………………………………………………………………..47

viii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

Gambar 1. Markisa Konyal (Passifloral Ligularis F. Lobata)................................5

Gambar 2. Rumus Struktur Asam Galat................................................................12
Gambar 3. Reaksi Senyawa Fenol Dengan Reagen Folin-Ciocalteu.....................13
Gambar 4. Struktur Dpph.......................................................................................19
Gambar 5. Reduksi Dpph Oleh Senyawa Antioksidan..........................................20
Gambar 6. Skema Alat Spektrofotometer Uv-Vis................................................23
Gambar 7. Kebun Buah Markisa...........................................................................47
Gambar 8. Buah Markisa Konyal.........................................................................47
Gambar 9. Pengukuran Buah Markisa Konyal.....................................................47
Gambar 10. Biji Buah Markisa Konyal.................................................................47
Gambar 11. Dokumentasi Proses Pembuatan Ekstrak...........................................48
Gambar 12. Hasil Surat Identifikasi Tumbuhan Markisa Konyal ........................49
Gambar 13. Skema Pembuatan Ekstrak Etanol Biji Buah Markisa Konyal..........50
Gambar 14. Skema Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum Asam
Galat ..................................................................................................51
Gambar 15. Pembuatan Kurva Kalibrasi Asam Galat ...………………….….….52
Gambar 16. Skema Penentuan Kadar Fenolat Total Ekstrak Etanol Biji Buah
Markisa .............................................................................................53
Gambar 17. Skema Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum.............54
Gambar 18. Skema Penentuan Aktivitas Antioksidan Standar Asam Galat..........55
Gambar 19. Skema Penentuan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Biji Markisa
Konyal...............................................................................................56
Gambar 20. Panjang Gelombang Serapan Maksimum Asam Galaqt 80 µg/ml....60
Gambar 21. Kurva Kalibrasi Asam Galat .............................................................61
Gambar 22. Panjang Gelombang Serapan Maksimum Dpph 35 µg/Ml................68
Gambar 23. Kurva Aktivitas Antioksidan Standar Asam Galat............................69
Gambar 24. Kurva Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Biji Buah Markisa
Konyal……………………………………………………………...71

ix
 DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

Tabel 1. Tingkat Kekuatan Antioksidan Dengan Metode DPPH..........................35

Tabel 2. Hasil Pemeriksaan Organoleptis Ekstrak.................................................57
Tabel 3. Hasil Persentase Rendemen Ekstrak........................................................57
Tabel 4. Hasil Susut Pengeringan..........................................................................57
Tabel 5. Hasil Kadar Abu Total.............................................................................58
Tabel 6. Hasil Pemeriksaan Skrinning Fitokimia Ekstrak.....................................59
Tabel 7. Hasil Pengukuran Absorban Asam Galat Pada Panjang Gelombang
Serapan Maksimum 747 nm Dengan Spektrofotometer Uv-Vis..............61
Tabel 8. Hasil Perhitungan Persamaan Regresi Linear Asam Galat Pada Panjang
Gelombang Serapan Maksimum 747 nm ...............................................62
Tabel 9. Hasil Perhitungan Batas Deteksi (BD) Dan Batas Kuantisasi (BK)........64
Tabel 10. Hasil Evaluasi Pengukuran Kadar Fenolat Total Ekstrak Etanol Biji
Buah Markisa Konyal............................................................................65
Tabel 11. Hasil Perhitungan Kadar Fenolat Total Ekstrak Biji Buah Markisa
Konyal Menggunakan Spektrofotometer Uv-Vis Pada Panjang
Gelombang Serapan Maksimum 758 nm................................................66
Tabel 12.Hasil Perhitungan IC50 Standar Asam Galat...........................................69
Tabel 13. Hasil Perhitungan IC50 Ekstrak Etanol Biji Buah Markisa Konyal ......71
Tabel 14. Kesetaraan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Biji Markisa Konyal
Dengan Pembanding Asam Galat...........................................................73

x
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

Lampiran 1. Tumbuhan Markisa Konyal (Passiflora Ligularis F. Lobata) Dan

Dokumentasi Pembuatan Ekstrak..........................................................................47
Lampiran 2. Hasil Surat Identifikasi Tumbuhan Markisa Konyal (Passiflora
Ligularis F. Lobata)..........................................................................49
Lampiran 3. Skema Kerja Pembuatan Ekstrak Biji Buah Markisa (Passiflora
Ligularis F. Lobata)..........................................................................50
Lampiran 4. Skema Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum Asam
Galat).................................................................................................51
Lampiran 5. Pembuatan Kurva Kalibrasi Asam Galat...........................................52
Lampiran 6. Skema Penentuan Kadar Senyawa Fenolat Total Ekstrak Biji Markisa
(Passiflora Ligularis F. Lobata).......................................................53
Lampiran 7. Skema Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum Dpph. .54
Lampiran 8. Skema Penentuan Aktivitas Antioksidan Standar Asam Galat.........55
Lampiran 9. Skema penentuan aktivitas antioksidan ekstrak etanol biji buah
markisa konyal dengan metode DPPH .............................................56
Lampiran 10. Pengujian karakteristik ekstrak etanol biji buah markisa konyal....57
Lampiran 11. Pemeriksaan Skrining Fitokimia Ekstrak........................................59
Lampiran 12. Panjang Gelombang Serapan Maksimum Asam Galat 80 µg/ml ...60
Lampiran 13. Perhitungan Batas Deteksi (BD) Dan Batas Kuantasasi (BK)........64
Lampiran 14. Perhitungan Kadar Fenolat Total Ekstrak Biji Buah Markisa Konyal
.........................................................................................................66
Lampiran 15. Hasil Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum Dpph 35
µg/ml ................................................................................................68
Lampiran 16. Aktivitas Antioksidan Standar Asam Galat.....................................69
Lampiran 17. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Biji Buah Markisa Konyal..71
Lampiran 18. Kesetaraan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Biji Buah Markisa
Konyal Dengan Pembanding Asam Galat........................................73

xi
 BAB I. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Pengkajian mengenai radikal bebas dan antioksidan termasuk topik yang

sedang berkembang didalam tren penelitian saat ini. Radikal bebas merupakan

senyawa kimia yang dalam jumlah berlebihan dapat merusak kesehatan.

Radikal bebas berasal dari dalam tubuh yang dihasilkan oleh proses kimia

kompleks dan juga dari lingkungan luar seperti polutan, radiasi zat-zat kimia,

makanan cepat saji, dan racun (Selawa dkk, 2013). Radikal bebas yang

berlebihan didalam tubuh dapat menimbulkan spesi oksigen reaktif (ROS),

dimana akan memicu keadaan stress dan berbagai macam penyakit seperti,

penuan dini, diabetes, hiperkolesterol, penyakit jantung, inflamasi dan lain-

lain (Yuhernita, 2011). Oleh karena itu untuk melindungi tubuh dari serangan

radikal bebas maka diperlukan suatu bahan yang berfungsi sebagai

antioksidan (Kate,2014). Antioksidan merupakan senyawa yang dapat

meredam reaktivitas dari radikal bebas dengan berbagai cara seperti memutus

reaksi berantai, perangkapan elektron dan stabilisasi molekul radikal (Brown,

2000).

Tumbuhan memproduksi berbagai metabolit skunder yang memiliki

bioaktivitas sebagai antioksidan contohnya golongan polifenol, flavonoid,

antosianin dan tanin (Harborne,1987). Senyawa fenolik mampu bertindak

sebagai antioksidan dengan memutuskan reaksi rantai radikal bebas secara

langsung dan menangkap berbagai spesi reaktif seperti radikal superoksida,

hidroksil, peroksil dan asam hipoklorit (Nurmi, 2008). Salah satu tumbuhan

penghasil antioksidan alami adalah genus Passiflora yang dikenal juga dengan

1
nama buah markisa. Beberapa spesies dari genus ini antara lain, Passiflora

edulis (markisa ungu), Passiflora flevicarpa (markisa kuning), Passiflora

ligularis (markisa konyal) dan Passiflora quadrangularis (markisa erpis)

(Rukmana, 2003). Beberapa penelitian menyebutkan genus Passiflora ini

memiliki aktivitas antioksidan dan kandungan fenolik yang tinggi. Komponen

kimia yang telah dilaporkan dari genus Passiflora adalah vitexin, flavone-6,8-

diglikosida, apigenin-6-C-rhamnosil-8-carabinoside (Sakalem, 2012). Namun

untuk markisa konyal belum banyak diperoleh informasi kajian

bioaktivitasnya.

Markisa konyal (Passiflora ligularis) hanya dapat tumbuh pada daerah

yang beriklim subtropis dan tidak banyak angin, sehingga distribusinya di

Indonesia terbatas. Di Indonesia buah markisa konyal diproduksi dengan

mayoritas penghasil utama yakni Sumatera Utara, Sulawesi Selatan, dan

Sumatera Barat. Di Sumatera Utara dan Sulawesi Selatan buah markisa

umumnya dimanfaatkan untuk pembuatan sirup sedangkan di Sumatera Barat

markisa konyal dikonsumsi sebagai buah segar. Salah satu tempat budidaya

markisa konyal di Sumatera Barat adalah di daerah Alahan Panjang, Solok,

Provinsi Sumatera Barat. Secara umum buah markisa memiliki banyak

manfaat untuk kesehatan antara lain menguatkan daya tahan tubuh,

melancarkan pencernaan, menutrisi tubuh serta menangkap radikal bebas.

(Karsinah, 2007)

Pada penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Sari (2021) dilaporkan

bahwa ekstrak kulit buah markisa konyal memiliki aktivitas antioksidan yaitu

dengan nilai IC50 sebesar 53,34 μg/mL (kategori kuat) yang diuji

2
 menggunakan metode DPPH (1,1-Difenil-2=Pikrilhidrazil). Berdasarkan

informasi tersebut maka peneliti melanjutkan eksplorasi terhadap fenolik total

dan aktivitas antioksidan dari biji buah markisa konyal. Penentuan kadar

fenolik total menggunakan metoda Follin-Ciocalteu karena merupakan

metode yang sederhana, sensitif dan teliti. Pengujian aktivitas antioksidan

pada penelitian ini menggunakan metode DPPH dengan asam galat sebagai

senyawa baku pembandingnya.

1.2 Rumusan Masalah

1. Berapa kadar fenolik total ekstrak etanol biji markisa konyal

menggunakan metode Follin-Ciocalteu?

2. Bagaimanakah aktivitas antioksidan ekstrak etanol biji buah markisa

konyal dengan metode DPPH?

1.3 Tujuan Penelitian

1. Untuk mengetahui kadar fenolik total ekstrak etanol biji markisa konyal

menggunakan Follin-Ciocalteu.

2. Untuk menentukan aktivitas antioksidan ekstrak etanol biji markisa

konyal dengan metode DPPH.

1.4 Manfaat Penelitian

1. Manfaat untuk peneliti hasil penelitian ini bermanfaat dalam

pengembangan ilmu pengetahuan terutama di bidang farmasi.

2. Manfaat bagi masyarakat memberikan informasi kepada masyarakat

bahwa biji markisa konyal dapat dimanfaatkan sebagai sumber

antioksidan alami.

3
3. Dapat mengetahui kadar fenolik total dari ekstrak etanol biji markisa

konyal.

4. Manfaat bagi industri farmasi dapat mengetahui sumber antioksidan dari

bahan alami.

4
 BAB II. TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Tinjauan Botani Tumbuhan Markisa Konyal (Passiflora ligularis f.lobata)

2.1.1 Klasifikasi Tumbuhan Markisa

Gambar 1. Buah Markisa Konyal

(Pertanianku.com,2016)

Kingdom : Plantae

Divisio : Spermatophyte

Sub divisi : Angiospermae

Kelas : Dicotiledoneae

Ordo : Paretales

Famili : Passifloraceae

Genus : Passiflora

Spesies : Passiflora ligularis f. lobata

5
2.1.2 Nama Daerah

Markisa memiliki nama antara lain seperti buah negri (Jawa), paksi

(Sunda), konyal (Jawa Barat), areuy pasi, buah monyet, granadilla (Amerika

Selatan), maracuya (Spanyol), dan markisa (Melayu) (Mahkota, 2013).

2.1.3 Morfologi Tumbuhan

Markisa konyal memiliki ukuran buah lebih besar dibandingkan markisa

ungu. Bentuk dari karakterisasi morfologi daun dan bunga juga sangat berbeda

(Siregar, et al., 2018).

Markisa merupakan herba berkayu, mamanjat, berakar tunggang,

memiliki batang segi empat, dan ada sulur yang keluar dari ketiak daun. Daun

tunggal tersebar, bangun daun bulat telur memanjang, pertulangan daun menjari,

serta ada daun penumpu (stipula) yang berukuran kecil. Pangkal daun berbentuk

jantung bertaju tiga, permukaan daun licin, tepi daun bergigi tidak dalam dan

runcing. Bunga keluar dari ketiak daun, hermaprodit, mahkota bunga berlepasan,

dan ada mahkota tambahan. Bakal buah menumpang, buah buni, biji berarellus

berwarna kuning, kulit buah yang masih muda berwarna hijau, hijau keunguan,

setelah masak berwarna kuning tua. Panjang buah 9 cm, tebal kulit buah 1 cm,

dan ada tiga daun buah membentuk satu ruang. Dialypetalae artinya mahkota

bunga berlepasan, tanaman markisa konyal termasuk famili Passifloraceae artinya

markisa-markisaan (Mahkota, 2013).

2.1.4 Kandungan Kimia Tanaman Markisa

Tanaman markisa umumnya memiliki fitokonstituen berupa senyawa

alkaloid, fenol, glikosida, flavonoid, sianogenik, passiflorisin, poliketida dan

α-piron (Mahkota, 2013).

6
2.1.5 Kegunaan Tanaman Markisa

Buah markisa memiliki bermanfaat bagi kesehatan, karena memiliki

kandungan nutrisinya yang berkhasiat (Ovelando, et al., 2013). Markisa konyal

atau bisa disebut juga markisa manis memiliki rasa yang manis dan menyegarkan,

sangat enak dikonsumsi sebagai buah segar (Karsinah, et al., 2007).

Buah markisa dapat mengurangi ketegangan otot, menurunkan cemas,

sakit kepala, kejang otot, dan menurunkan tekanan darah. Sedangkan, daunnya

untuk insomnia. Selain itu markisa juga memiliki daya anti bakteri serta dapat

pula untuk mengobati malaria (Mahkota, 2013).

2.2 Simplisia

Simplisia adalah bahan alam yang telah dikeringkan yang digunakan untuk

pengobatan dan belum mengalami pengolahan (Kementrian Kesehatan Republik

Indonesia, 2017). Simplisia adalah bahan alamiah yang digunakan sebagai obat

yang belum mengalami pengolahan apapun, kecuali berupa bahan yang telah

dikeringkan. Simplisia dapat dibedakan menjadi 3 bagian yaitu simplisia nabati,

simplisia hewani, dan simplisia pelikan (mineral). Simplisia nabati merupakan

simplisia yang berupa tumbuhan utuh, bagian tumbuhan (eksudat tumbuhan).

Eksudat tumbuhan merupakan isi sel yang secara langsung keluar dari tumbuhan

atau isi sel dengan cara tertentu dikeluarkan dari selnya, atau senyawa nabati

lainnya yang dengan cara tertentu dapat dipisahkan dari tumbuhannya, dan belum

berupa senyawa kimia murni (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2000)

7
2.3 Ekstraksi

2.3.1 Definisi Ekstraksi

Menurut Departemen Kesehatan Republik Indonesia (2000), ekstraksi

adalah suatu cara penarikan dari kandungan kimia dapat larut sehingga dapat

terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair. Simplisia yang

diekstrak mengandung senyawa aktif yang dapat larut dan senyawa yang tidak

dapat larut seperti serat, karbohidrat, protein, dan lain sebagainya. Senyawa aktif

yang terdapat dari berbagai simplisia dapat digolongkan sebagai berikut, yaitu

golongan minyak atsiri, alkaloid, flavonoid, dan lain sebagainya. Struktur kimia

yang berbeda dapat mempengaruhi kelarutan serta stabilitas senyawa-senyawa

tersebut terhadap pemanasan, udara, cahaya, logam berat, dan derajat keasaman.

Jika senyawa aktif yang terkandung di dalam simplisia telah diketahui, maka

pemilihan pelarut dan pemilihan cara ekstraksi yang tepat akan menjadi lebih

mudah.

Ekstrak merupakan hasil dari proses ektraksi sediaan kering, kental atau

cair dibuat dengan cara menyaring simplisia nabati menurut cara yang cocok,

diluar pengaruh cahaya matahari langsung (Kementrian Kesehatan Republik

Indonesia, 2017).

2.3.2 Metode Ekstraksi (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2000)

Menurut Departemen Kesehatan Republik Indonesia (2000), metode

ekstraksi dengan menggunakan pelarut dilakukan dengan 2 cara yaitu denga cara

dingin dan panas. Ekstrasi dengan cara dingin yaitu maserasi dan perkolasi,

8
sedangkan ekstrasi dengan cara panas yaitu refluks, sokletasi, digesti, infusa, dan

dekok.

2.3.2.1 Cara Dingin

1. Maserasi

Maserasi adalah proses suatu ekstraksi simplisia sederhana menggunakan

pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur

ruangan (kamar). Secara teknologi, ekstraksi dengan prinsip metode pencapaian

konsentrasi pada keseimbangan. Maserasi kinetik berarti melakukan pengadukan

yang kontinyu atau dengan cara terus-menerus. Remaserasi berarti dilakukan

pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan maserasi

pertama hingga seterusnya.

2. Perkolasi

Perkolasi adalah suatu proses ekstraksi dengan cara melewatkan pelarut secara

lambat pada simplisia dalam suatu alat perkolator pada suhu ruangan. Proses ini

terdiri dari tahap pengembangan bahan, tahap maserasi antara, dan tahap perkolasi

sebenarnya (penetasan atau penampungan ekstrak) secara terus-menerus sehingga

diperoleh ekstrak atau perkolat yang jumlahnya 1-5 kali bahan.

2.3.2.2 Cara Panas

1. Refluks

Refluks adalah suatu ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya,

selama waktu tertentu dan jumlah pelarut yang terbatas relatif konstan dengan

adanya pendinginan balik. Pada umumnya dilakukan pengulangan suatu proses

9
pada residu pertama 3-5 kali sehingga dapat termasuk dalam proses ekstraksi

sempurna.

2. Sokletasi

Sokletasi adalah suatu ekstraksi dengan menggunakan pelarut yang selalu

baru, pada umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga dapat terjadi

ekstraksi kontinyu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya

pendinginan balik.

3. Digestasi

Digestasi adalah suatu maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinyu) pada

temperatur dengan suhu yang lebih tinggi dari pada temperatur ruangan (kamar),

yaitu secara umum dilakukan pada temperatur dengan suhu 40-50° C.

4. Infusa

Infusa adalah suatu ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air

(bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur terukur 96-98°C)

selama waktu tertentu (15 - 20 menit ).

5. Dekok

Dekokta adalah suatu proses ekstraksi yang hampir sama dengan infusa, tetapi

dekok dipanaskan pada waktu yang lebih lama yaitu 30 menit dengan suhu 90° C.

2.4 Senyawa Fenolat dan Metode Follin-Ciocalteu

2.4.1 Pengertian Senyawa Fenolat

Fenolat merupakan senyawa yang memiliki cincin aromatis dengan satu

atau lebih gugus hidroksil. Senyawa ini diberi nama berdasarkan nama senyawa

induknya yaitu fenol. Sedangkan, senyawa fenol yaitu senyawa yang terdiri dari

cincin aromatis yang mengandung paling sedikit satu atau beberapa gugus

10
hidroksil (-OH) (Harborne, 1987). Senyawa fenolat dari tumbuhan mempunyai

beberapa efek, yaitu antioksidan, antiinflamasi, antiproliferasi, antimutagenik,

antimikrobial, antikarsinogenik, dan pencegahan terhadap penyakit jantung

(Balasundram, 2006).

Fenolat merupakan golongan metabolit sekunder yang distribusinya cukup

luas pada tanaman. Golongan fenolat memiliki berbagai aktivitas antioksidan,

antibakteri, antiinflamasi, dan antikanker. Kandungan fenolat dalam tumbuhan

berperan sebagai antioksidan alami yang dapat menangkal berbagai oksidan dan

radikal bebas yang berbahaya bagi kesehatan (Verawati dkk, 2017).

Mekanisme senyawa fenolik sebagai antioksidan yaitu melalui

kemampuan dari gugus fenol untuk mengikat radikal bebas dengan memberikan

atom hidrogennya melalui proses transfer elektron, sehingga fenol berubah

menjadi radikal fenoksil. Radikal fenoksil yang terbentuk sebagai hasil reaksi

fenol dengan radikal bebas kemudian akan menstabilkan diri melalui efek

resonansi. Karena alasan ini maka derivat dari fenol merupakan donor hidrogen

yang baik yang dapat menghambat reaksi yang terjadi oleh senyawa radikal.

Senyawa fenol disebut juga sebagai inhibitor radikal (Togo, 2004).

2.4.2 Sifat Fisiko Kimia

Dalam keadaan murni, senyawa fenolat sederhana berupa zat padat tak

berwarna, tetapi biasanya mudah teroksidasi dan berwarna gelap bila bereaksi

dengan udara. Kelarutan senyawa fenolat dalam air bertambah bila gugus

hidroksilnya bertambah banyak. Senyawa fenolat umumnya larut dalam pelarut

organik polar. (Harbone, 1987)

2.4.3 Asam Galat

11
 Asam galat merupakan asam organik yaitu asam 3, 4, 5 trihidrobenzoat.

Rumus kimianya adalah C6H12(OH3)COOH. Gugus hidroksil pada asam galat

yang bertanggung jawab dalam memberikan aktivitas antioksidan, semakin

banyak gugus hidroksil maka semakin reaktif untukdigunakan sebagai antioksidan

(Dewick, 2001)

Gambar 2. Rumus struktur asam galat (Dewick, 2001)

Alasan penggunaan asam galat sebagai standar dalam penetapan

kandungan fenolik total yaitu karena asam galat merupakan senyawa murni,

memiliki kestabilan yang tinggi, dan mudah didapat (Harbone,1987).

2.4.4 Metode Folin-Ciocalteu

Metode Folin-Ciocalteu adalah metode yang paling umum digunakan

untuk mengukur total fenol dari suatu ekstrak atau bahan uji. Pengujian total fenol

dengan metode Folin-Ciocalteau berlangsung berdasarkan reaksi reduksi oksidasi

(redoks). Reagen Folin-Ciocalteu dapat dibuat dengan melarutkan 100 g natrium

tungstate (VI) dihidrat dan 25 g natrium molibdat (VI) dihidrat dengan 700 ml

aquadest, 100 ml asam klorida, dan 50 ml asam fosfat 85 % yang ditambahkan

150 g litium sulfat hidrat. Reagen ini sangat stabil jika terlindung dari reduktan

dan terlindung dari cahaya (Agbor dkk, 2014).

Reaksi yang terjadi adalah reaksi oksidasi-reduksi dalam suasana basa

menggunakan reagen Follin ciocalteu dan natrium karbonat. Ion fenolat akan

mereduksi asam heteropili (asam fosfomolibdat-fosfotungstat) dalam reagen

12
Folin-Ciocalteu menjadi suatu kompleks molybdenum-tungsten berwarna biru

yang diukur secara spektrofotometri visibel pada panjang gelombang maksimum

(Haci dkk, 2009).

Gambar 3. Reaksi senyawa fenol dengan reagen Folin-Ciocalteu

(Kate, 2014)

Warna biru yang dihasilkan dari reaksi ini akan semakin pekat setara

dengan konsentrasi senyawa fenolat yang terdapat pada larutan uji dan memiliki

serapan kuat pada panjang gelombang 760 nm (Kate, 2014).

2.5 Radikal Bebas

2.5.1 Definisi Radikal Bebas

Radikal bebas adalah sekelompok atom maupun molekul yang memiliki

elektron tidak berpasangan pada lapisan luarnya. Molekul biologi pada dasarnya

tidak ada yang bersifat radikal. Apabila molekul non radikal bertemu dengan

radikal bebas, maka akan terbentuk suatu molekul radikal yang baru. Radikal

bebas dapat dikatakan bersifat tidak stabil dan selalu berusaha mengambil

elektron dari molekul di sekitarnya. sehingga radikal bebas bersifat toksik

terhadap molekul biologi atau sel. (Erlidawati, 2018)

Radikal bebas juga berperan dalam proses penuaan. Radikal bebas dapat

dihasilkan dari hasil sintesis tubuh dan dari faktor eksternal seperti asap, hasil

13
penyinaran ultra violet, zat kimiawi dalam makanan dan polutan lain.

Pembentukan radikal bebas akan meningkat seiring dengan bertambahnya usia.

Oleh karena itu tubuh memerlukan suatu substansi penting yaitu antioksidan yang

dapat membantu melindungi tubuh dari serangan radikal bebas maupun senyawa

radikal (Werdhasari, 2014).

2.5.2 Pembentukan Radikal Bebas

Radikal dengan kereaktifan yang tinggi dapat memulai sebuah reaksi

berantai dalam sekali pembentukannya sehingga menimbulkan senyawa yang

tidak normal dan reaksi berantai dapat merusak sel-sel penting dalam tubuh

(Badarinath, et al., 2010). Mekanisme reaksi pembentukan radikal bebas dibagi

menjadi 3 tahapan reaksi yaitu:

a. Tahap inisiasi

Tahap inisiasi akan menghasilkan suatu zat antara yang sangat reaktif,

disebabkan karena adanya elektron yang tidak berpasangan pada biji terluar.

Reaksi ini terjadi melalui pemecahan rantai homolitik (yang memerlukan panas

atau cahaya) sehingga membentuk radikal.

Secara umum tahap inisiasi adalah:

b. Tahap propagasi

Tahap propagasi adalah reaksi yang melibatkan radikal bebas, yang mana

jumlah radikal bebas akan tetap sama. Pada tahap ini radikal bebas ROO yang

terbentuk akan merebut sebuah atom hidrogen dari dalam molekul RH

menghasilkan radikal bebas R• dan ROOH. Pada hakekatnya pembentukan awal

beberapa radikal bebas akan mengakibatkan perkembangbiakan radikal-radikal

14
bebas baru dalam suatu reaksi pengabdian diri yang disebut reaksi rantai. Tahap

ini merupakan radikal yang membentuk radikal baru.

c. Tahap terminasi

Tahap terminasi adalah tahap dimana reaksi yang berujung pada turunnya

jumlah radikal bebas yang diakibatkan oleh adanya penggabungan radikal bebas

yang masih tersisa. Pada tahap ini merupakan tahap akhir dari reaksi radikal bebas

yang tidak reaktif dan stabil. Terjadi reaksi coupling atau penggabungan dua

radikal membentuk produk non radikal.

2.6 Antioksidan

2.6.1 Pengertian Antioksidan

Antioksidan dalam pengertian kimia adalah senyawa pemberi elektron

(electron donors) dan secara biologis antioksidan merupakan senyawa yang

mampu mengatasi dampak negatif oksidan dalam tubuh seperti kerusakan elemen

vital sel tubuh. Antioksidan merupakan suatu senyawa yang memperlambat atau

mencegah proses oksidasi dengan cara menghentikan reaksi berantai dari radikal

bebas. Antioksidan bekerja dengan cara mendonorkan satu elektronnya kepada

senyawa yang bersifat oksidan sehingga aktivitas senyawa oksidan tersebut bisa

dihambat (Winarsi, 2007).

15
2.6.2 Pembagian Antioksidan

a. Antioksidan alami

Antioksidan alami adalah antioksidan yang diperoleh dari hasil

metabolisme tubuh atau ekstraksi bahan alam, misalnya dari ekstrak tumbuhan.

Antioksidan alami umumnya berupa berupa glutation peroksidase, vitamin C,

senyawa fenol atau polifenol, golongan flavonoid, turunan asam sinamat, kumarin

dan tokoferol.

b. Antioksidan sintetik

Antioksidan sintetik adalah antioksidan alami yang telah diproduksi

secara sintetis untuk tujuan komersial. Antioksidan sintetik yang paling sering

digunakan adalah Propil Galat (PG), Butil Hidroksi Anisol (BHA), Butil Hidroksi

Toluen (BHT) dan Tert-butil hidrokuinon. Antioksidan berdasarkan mekanisme

kerjanya (Winarsi, 2007).

c. Antioksidan Primer (Antioksidan enzimatis).

Antioksidan primer meliputi enzim superoksida dismutase (SOD),

Katalase dan glutation peroksidase (GSH-Px). Suatu senyawa dikatakan

antioksidan primer, apabila dapat memberikan atom hydrogen secara cepat

kepada senyawa radikal, kemudian radikal antioksidan yang terbentuk segera

berubah menjadi senyawa yang lebih stabil. Antioksidan primer bekerja dengan

mencegah pembentukan senyawa radikal bebas baru, atau mengubah radikal

bebas yang telah terbentuk menjadi molekul yang kurang reaktif.

d. Antioksidan sekunder (Antioksidan Non Enzimatis)

16
 Antioksidan sekunder disebut juga antioksidan eksogenus atau sistem

pertahanan preventif. Dalam sistem pertahanan ini, terbentuknya senyawa oksigen

reaktif dihambat dengan cara pengkelatan metal atau dirusak pembetukannya.

Pengkelatan metal terjadi dalam cairan ekstraseluler. Antioksidan sekunder

bekerja dengan cara menangkap radikal bebas (free radical scavenger), kemudian

mencegah reaktivitas amplifikasinya. Ketika jumlah radikal bebas berlebihan,

kadar antioksidan sekunder yang dapat diamati dalam cairan biologis menurun.

e. Antioksidan Tersier

Kelompok antioksidan tersier tersier meliputi system enzim DNA-

repair dan metionim sulfoksida reduktase. Enzim-enzim ini berfungsi dalam

perbaikan biomolekuler yang rusak akibat reaktivitas radikal bebas.

2.6.3 Metoda Pengujian Antioksidan

Pengujian aktivitas antioksidan dapat dilakukan dengan beberapa metode

yaitu:

a. Metode DPPH

Metode DPPH (1,1difenil-2- pikrilhidrazil) merupakan senyawa radikal

nitrogen. DPPH akan mengambil atom hidrogen yang terdapat dalam suatu

senyawa, misalnya senyawaan fenol. Mekanisme terjadinya reaksi DPPH ini

berlangsung melalui transfer elektron. Larutan DPPH yang berwarna ungu

memberikan serapan absorban maksimum pada range 515-520 nm. Larutan DPPH

ini akan mengoksidasi senyawa dalam ekstrak tanaman. Proses ini ditandai

dengan memudarnya warna larutan dari ungu menjadi kuning.

b. Metode FRAP

17
 Pengujian aktivitas antioksidan dengan metode FRAP (ferric reducing

antioxidant power) didasarkan atas kemampuan senyawa antioksidan dalam

mereduksi senyawa besi(III)-tripiridil-triazin menjadi besi(II)- tripiridil triazin

pada pH 3,6.

c. Metode CUPRAC

Pada metode CUPRAC (Cupric Ion Reducing Antioxidant Capacity),

kompleks bisneokuproin-tembaga(II) akan mengoksidasi senyawaan antioksidan

dalam ekstrak tanaman dan mengalami reduksi membentuk kompleks bis-

neokuproin-tembaga(I). Secara visual hal ini dapat dilihat dari perubahan warna

kompleks larutan dari biru toska menjadi kuning. Pereaksi CUPRAC merupakan

pereaksi yang selektif karena memiliki nilai potensial reduksi yang rendah, yaitu

sebesar 0,17 V (Niken, 2010).

2.6.4 Pengujian Antioksidan dengan Metoda DPPH

DPPH merupakan singkatan umum untuk senyawa kimia organik yaitu

1,1-diphenyl-2-picryl hydrazil. DPPH adalah bubuk kristal berwarna gelap terdiri

dari molekul radikal bebas yang stabil. DPPH mempunyai berat molekul 394,32

gram/mol dengan rumus molekul C1H12N5O6 larut dalam air. Penyimpanan

dalam wadah tertutup baik. Metode DPPH merupakan metode yang sederhana,

cepat dan mudah untuk penapisan aktivitas penangkapan radikal beberapa

senyawa, selain itu metode ini terbukti akurat, efektif dan praktis (Molyneux,

2004).

Radikal DPPH adalah suatu senyawa organik yang mengandung nitrogen

tidak stabil dengan absorbansi kuat pada λ max 517 nm dan berwarna ungu gelap.

Setelah bereaksi dengan senyawa antioksidan, DPPH tersebut akan tereduksi dan

18
warnanya akan berubah menjadi kuning. Perubahan tersebut dapat diukur dengan

spektrofotometer, dan diplotkan terhadap konsentrasi. Penurunan intensitas terjadi

disebabkan oleh berkurangnya ikatan rangkap terkonjugasi pada DPPH. Hal ini

dapat terjadi apabila adanya penangkapan warna satu elektron oleh zat antioksidan

(Erlidawati, 2018).

Gambar 4. Struktur DPPH (Molyneux, 2004).

Uji aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode ini dapat diamati

berdasarkan dari hilangnya warna ungu akibat tereduksinya DPPH oleh

antioksidan. Intensitas warna dari larutan uji diukur melalui spektrofotometri UV-

Vis pada panjang gelombang. Hasil persen (%) inhibisi (penghambatan) disubstitu

sikan dalam persamaan linear kemudian diinterpretasikan sebagai IC50. Persen

inhibisi adalah perbandingan antara selisih dari absorbansi blanko dan absorbansi

sampel dengan absorbansi blanko. (Erlidawati, 2018).

Persen inhibisi digunakan untuk menentukan persentase hambatan dari

suatu bahan yang dilakukan terhadap senyawa radikal bebas. IC50 didefinisikan

sebagai jumlah antioksidan yang diperlukan untuk menurunkan konsentrasi awal

DPPH sebesar 50%. Pada metode ini memiliki keuntungan, yaitu lebih sederhana

dan waktu analisis yang lebih cepat (Erlidawati, 2018).

19
 Reaksi yang terjadi adalah sebagai berikut:

Gambar 5. Reduksi DPPH oleh senyawa antioksidan (Prakash, 2001).

2.7 Spektrofotometri UV-VIS

2.7.1 Definisi Spektrofotometri UV-Vis

Spektrofotometri merupakan salah satu metode dalam kimia analisis yang

digunakan untuk menentukan komposisi suatu sampel baik secara kuantitatif dan

kualitatif yang didasarkan pada interaksi antara materi dengan cahaya.

Spektrofotometer adalah alat untuk mengukur transmitan atau absorban suatu

sampel sebagai fungsi panjang gelombang. Dimana detektor dapat mengukur

intensitas cahaya yang dipancarkan (Dachriyanus, 2004). Tiap media akan

menyerap cahaya pada panjang gelombang tertentu tergantung pada senyawa atau

warna yang terbentuk.

Spektrofotometer UV-Vis merupakan gabungan antara prinsip

spektrofotometri UV dan Visible. Alat ini menggunakan dua buah sumber cahaya

yang berbeda. yaitu sumber cahaya UV dan sumber cahaya Visible. Larutan yang

dianalisis diukur serapan sinar ultra violet atau sinar tampaknya. Sinar Ultraviolet

mempunyai panjang gelombang antara 200-400 nm, sementara sinar tampak

20
(visible) mempunyai panjang gelombang 400-800 nm. Konsentrasi larutan yang

dianalisis akan sebanding dengan jumlah sinar yang diserap oleh zat yang terdapat

dalam larutan tersebut (Sembiring, 2019).

2.7.2 Hukum Lambert-Beer (Dachriyanus, 2004).

Hukum Lambert-beer (Beer’s law) adalah hubungan linearitas antara

absorban dengan konsentrasi larutan analit. Absorbsi sinar oleh larutan mengikuti

hukum Lambert-Beer, yaitu:

A = a.b.c

Keterangan:

a : Apsorptivitas

b : Panjang sel/kuvet

c : Konsentrasi (g/L)

A : Absorban

2.7.3 Bagian-bagian Spektrofotometri UV-Vis (Watson,2009)

Spektrofotometer terdiri dari beberapa komponen sehingga dapat

digunakan untuk mengidentifikasi sampel. Komponen-komponen tersebut ialah:

1. Sumber cahaya

Sumber cahaya pada spektrofotometer harus memiliki pancaran radiasi yang

stabil dan intensitasnya tinggi. Sumber cahaya pada spektrofotometer UV-Vis ada

dua macam:

a. Lampu Tungsten (Wolfram)

21
 Lampu ini digunakan untuk mengukur sampel pada daerah tampak. Bentuk

lampu ini mirip dengan bola lampu pijar biasa. Memiliki panjang gelombang

antara 350-900 nm. Spektrum radiasinya berupa garis lengkung.

b. Lampu Deuterium

Lampu ini dipakai pada panjang gelombang 190-350 nm. Spektrum energi

radiasinya lurus, dan digunakan untuk mengukur sampel yang terletak pada

daerah UV.

2. Monokromator

Monokromator adalah alat yang akan memecah cahaya polikromatis menjadi

cahaya tunggal (monokromatis) dengan komponen panjang gelombang tertentu.

Bagian-bagian monokromator, yaitu:

a. Prisma

Prisma akan mendispersikan radiasi elektromagnetik sebesar mungkin supaya

di dapatkan resolusi yang baik dari radiasi polikromatis.

b. Grating (kisi difraksi)

Kisi difraksi memberi keuntungan lebih bagi proses spektroskopi. Dispersi

sinar akan disebarkan merata, dengan pendispersi yang sama, hasil dispersi akan

lebih baik. Selain itu kisi difraksi dapat digunakan dalam seluruh jangkauan

spektrum.

c. Celah optis

22
 Celah ini digunakan untuk mengarahkan sinar monokromatis. Apabila celah

berada pada posisi yang tepat, maka radiasi akan dirotasikan melalui prisma,

sehingga diperoleh panjang gelombang yang diharapkan.

d. Filter

Berfungsi untuk menyerap warna komplementer sehingga cahaya yang

diteruskan merupakan cahaya berwarna yang sesuai dengan panjang gelombang

yang dipilih.

3. Detektor

Detektor akan menangkap sinar yang diteruskan oleh larutan. Sinar

kemudian diubah menjadi sinyal listrik oleh amplifier dan dalam rekorder dan

ditampilkan dalam bentuk angka-angka pada reader (komputer). Detektor dapat

memberikan respons terhadap radiasi pada berbagai panjang gelombang.

4. Visual display/recorder

Merupakan sistem baca yang memperlihatkan besarnya isyarat listrik,

diyatakan dalam bentuk % transmitan maupun absorbansi. (Watson, 2009)

Gambar 6. Skema Alat Spektrofotometer UV-VIS (Watson, 2009)

2.7.4 Prinsip Kerja Spektrofotometri UV-Vis

23
 Cahaya yang berasal dari lampu deuterium maupun wolfram yang bersifat

polikromatis akan di teruskan melalui lensa menuju ke monokromator pada

spektrofotometer dan filter cahaya pada fotometer. Monokromator kemudian akan

mengubah cahaya polikromatis menjadi cahaya monokromatis (tunggal). Berkas-

berkas cahaya dengan panjang tertentu kemudian akan dilewatkan pada sampel

yang mengandung suatu zat dalam konsentrasi tertentu. Oleh karena itu, terdapat

cahaya yang diserap (diabsorbsi) dan ada pula yang dilewatkan. Cahaya yang

dilewatkan ini kemudian di terima oleh detektor. Detektor kemudian akan

menghitung cahaya yang diterima dan mengetahui cahaya yang diserap oleh

sampel. Cahaya yang diserap sebanding dengan konsentrasi zat yang terkandung

dalam sampel sehingga akan diketahui konsentrasi zat dalam sampel secara

kuantitatif (Dachriyanus, 2004).

24
 BAB III. METODE PENELITIAN

3.1 Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian telah dilakukan pada bulan September 2021 hingga Juni 2022 di

Laboratorium LLDIKTI wilayah X Kota Padang, Sumatera Barat.

3.2 Alat dan Bahan

3.2.1 Alat

Alat yang digunakan adalah botol maserasi, gelas piala, gelas ukur, rotary

evaporator, oven, furnace, krus porselen, desikator, tabung reaksi, pipet tetes,

corong, plat tetes, labu ukur, spektrofotometer UV-VIS (T92 PG Instruments),

vial, aluminium foil, timbangan analitik, kain flanel, kapas, cawan penguap, pipet

skala, pipet mikro, waterbath, sudip, spatel, lumpang kayu.

3.2.2 Bahan

Bahan yang digunakan adalah biji buah markisa konyal (Passiflora

ligularis f. lobata), etanol 96%, etanol 70 %, kloroform, kloroform amoniak,

aquadest, logam Mg, HCl (p), H 2 SO4 (p), FeCl3, Norit, Asam asetat anhidrat,

25
Asam galat, Asam sulfat 2N, methanol, natrium karbonat, larutan asam galat 500

ppm, larutan DPPH 35 ppm, Follin Ciocalteu, pereaksi mayer.

3.3 Prosedur Kerja

3.3.1 Pengambilan Sampel

Sampel yang digunakan adalah biji buah markisa konyal sebanyak 300 g

yang diambil di daerah Alahan Panjang Kecamatan Lembah Gumanti Solok

Provinsi Sumatera Barat.

3.3.2 Identifikasi Tumbuhan

Identifikasi tumbuhan dilakukan untuk memastikan jenis tanaman yang

digunakan dalam penelitian. Identifikasi penelitian markisa konyal dilakukan di

Herbarium Universitas Andalas, Jurusan Biologi, Fakultas Ilmu Pengetahuan

Alam (FMIPA), Padang, Sumatera Barat.

3.3.3 Penyiapan Sampel

Buah markisa konyal segar diambil sebanyak 10 kg, kemudian dipisahkan

antara kulit dan biji buah, didapatkan sebanyak 4,80 kg biji buah markisa basah.

Lalu biji dan selaput markisa dipisah menggunakan saringan santan agar

pemisahan biji dan selaput markisa lebih mudah dan cepat. Setelah itu biji buah

markisa dicuci bersih dengan air, yang bertujuan untuk membersihkan biji buah

dari selaput yang ada pada biji buah hingga didapatkan berat 2,2 kg. Selanjutnya

biji buah dikering anginkan selama kurang lebih 7 hari. Setelah kering berat biji

yang diproleh sebanyak 650g. Dari 650g sampel ditimbang kembali sebanyak

26
300g untuk dijadikan simplisia. Biji buah ditumbuk kasar menggunakan lumpang

kayu.

3.4 Pembuatan Ekstrak

Ekstrak biji buah markisa dibuat dengan cara maserasi. Serbuk simplisia

dimasukkan ke dalam botol maserasi, direndam dengan pelarut etanol 70 %

selama 48 jam sambil sesekali diaduk. Setelah perendaman, saring untuk

mendapat maseratnya dan ampasnya direndam lagi dengan etanol 96 % selama 48

jam. Proses maserasi ini diulangi sebanyak 3x untuk mengoptimalkan penarikan

senyawa metabolit sekunder yang ada pada sampel. Gabungkan semua maserat

yang didapatkan, lalu dipekatkan dengan rotary evaporator hingga diperoleh

ekstrak kental (Badan POM RI, 2004).

3.5 Evaluasi Ekstrak (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2000)

3.5.1 Pemeriksaan Organoleptis

Pemeriksaan organoleptis bertujuan untuk mengetahui karakteristik suatu

ekstrak pada sampel. Identifikasi dilakukan dengan pengamatan secara visual

meliputi bentuk, warna, dan bau.

3.5.2 Penentuan Rendemen Ekstrak

Timbang sampel basah (biji markisa), kemudian hasil ekstrak yang

diperoleh ditimbang kembali. Hitung rendemennya.

Berat ekstrak yang diperolah

% Rendemen = × 100 %
Berat serbuk simplisia kering

27
3.5.3 Pemeriksaan Susut Pengeringan

Bersihkan krus porselen lalu keringkan krus porselin dan tutupnya di

dalam oven pada suhu 105‫ﹾ‬C selama 30 menit. Dinginkan di dalam desikator, lalu

ditimbang beratnya. Masukkan ekstrak kental ke dalam krus sebanyak 1-2 gram.

Krus porselen yang berisi sampel dimasukan ke dalam oven pada suhu 105‫ﹾ‬C buka

tutupnya dan biarkan tutup tetap berada di dalam oven selama 1 jam. Setelah itu

krus dikeluarkan dan didinginkan dalam desikator selama 10-15 menit lalu

ditimbang. Lakukan pengulangan seperti cara di atas hingga diperoleh berat yang

konstan.

( B−A )−(C− A)
% Susut pengeringan = ×100 %
(B−A )

Keterangan: A = Berat krus kosong (gram)

B = Berat krus + sampel sebelum dipanaskan (gram)

C = Berat krus + sampel setelah dipanaskan (gram)

3.5.4 Kadar Abu

Ekstrak kental ditimbang sebanyak 2-3 gram dan masukan ke dalam krus

yang sebelumnya telah dipijarkan dan timbang. Dipijarkan hingga semua ekstrak

mengarang. Masukkan ke dalam furnest selama 6 jam pada suhu 600 ‫ﹾ‬C sehingga

terbentuk abu, dinginkan dalam desikator selama 10-15 menit lalu timbang berat

abu yang diperoleh. Hitung kadar abu yang didapat dengan rumus:

C−A
% Kadar abu = ×100 %
B− A

28
 Keterangan: A = Berat krus kosong (gram)

B = Berat krus + sampel sebelum dipanaskan (gram)

C = Berat krus + sampel setelah dipanaskan (gram)

3.6 Uji Skrining Fitokimia

Ekstrak kental ditimbang sebanyak 0,5 gram, kemudian masukkan

kedalam tabung reaksi. Lalu tambahkan kloroform dan air masing-masingnya

5 ml dengan perbandingan (1:1), kemudian kocok kuat dan biarkan sejenak

hingga terbentuk 2 lapisan yaitu lapisan air dan kloroform.

 Pada lapisan air dilakukan pengujian Uji Flavanoid

1. Uji Flavanoid

Letakkan 1-2 tetes lapisan air pada plat tetes, tambahkan sedikit serbuk

logam Mg dan beberapa tetes HCl(p), timbulnya warna kuning-orange

sampai merah menunjukkan adanya senyawa flavonoid.

2. Uji Fenolik

Letakkan 1-2 tetes lapisan air pada plat tetes, kemudian tambahkan 1-2

tetes pereaksi FeCl3, terbentuknya warna hijau, merah, biru atau hitam

yang kuat menandakan adanya kandungan fenolik.

3. Uji Saponin

Lapisan air dimasukkan dalam tabung reaksi kemudian dikocok, apabila

terbentuk busa yang permanen (± 15 menit) menunjukkan adanya saponin.

 Pada lapisan kloroform dilakukan pengujian sebagai berikut :

1. Uji Terpenoid dan Steroid

29
 Lapisan kloroform disaring dengan norit, hasil saringan dipipet 2-3 tetes dan

biarkan mengering pada plat tetes, setelah kering tambahkan 2 tetes asam

asetat anhidrat dan 1 tetes H2SO4(p) (pereaksi Lieberman-Bouchard) jika

terbentuk warna merah menandakan adanya terpenoid dan jika terbentuk

warna biru atau hijau menandakan adanya steroid.

2. Uji Alkaloid

Sebanyak 2-3 tetes lapisan kloroform ditambahkan dengan 1 mL kloroform

amoniak dan 1 tetes asam sulfat 2 N, kemudian kocok kuat dan diamkan

sampai terbentuk dua lapisan, ambil lapisan asam (lapisan atas) lau

tambahkan 1-2 tetes pereaksi mayer, reaksi positif alkaloid ditandai dengan

adanya kabut putih hingga gumpalan putih.

3.7 Pembuatan Reagen

a. Pembuatan Larutan Induk Asam galat 500 μg/mL (Waterhause, 1999).

Sebanyak 12,5 mg asam galat dimasukkan kedalam labu ukur 25 ml

dilarutkan dengan metanol sampai tanda batas sehingga diperoleh konsentrasi

larutan 500 μg/mL .

b. Pembuatan Larutan Natrium Karbonat 1 M (Waterhause, 1999)

Sebanyak 10,6 g natrium karbonat dilarutkan dengan aquadest dalam labu

ukur 100 mL sampai tanda batas, kocok hingga homogen.

c. Pembuatan Larutan DPPH 35 μg/mL (Molyneux, 2004)

Timbang 10 mg DPPH masukkan kedalam labu ukur 100 mL,lalu

tambahkan metanol sampai tanda batas. Kemudian dipipet sebanyak 17,5 mL

larutan DPPH masukkan kedalam labu ukur 50 mL, lalu tambahkan metanol

sampai tanda batas hingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 35 μg/mL .

30
d. Pembuatan Larutan Sampel

Sebanyak 25 mg dari ekstrak kental dilarutkan dengan metanol, sampai

volume pada labu ukur menjadi 25 mL, sehingga diperoleh larutan induk ekstrak

1000 μg/mL .

3.8 Penentuan Kadar Fenolat Total dengan Metoda Follin-Ciocalteu

a. Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum Asam Galat – Folin

Ciocalteu (Poumorad dkk, 2006)

Larutan induk asam galat (500 µg/ml) di pipet sebanyak 1,6 ml ke dalam

labu ukur 10 ml, lalu encerkan dengan metanol sampai tanda batas sehingga

didapatkan kosentrasi asam galat 80 µg/ml. Kemudian di pipet 0,5 ml kemudian

campur dengan pereaksi Folin–Ciocalteu sebanyak 5 ml (di encerkan 1:10

aquadest). Kemudian tambahkan 4 ml larutan natrium karbonat 1M kocok

homogen. Biarkan pada suhu kamar selama 15 menit dan diukur panjang

gelombang serapan maksimum asam galat dengan spektrofotometer UV-Vis pada

panjang gelombang maksimum 400-800 nm.

b. Pembuatan Kurva Kalibrasi Asam Galat (Mosquera dkk, 2007).

Larutan induk asam galat (500 μl/mL ¿ dipipet sebanyak (0,8; 1,2; 1,6; 2,0;

2,4) mL lalu diencerkan dengan methanol dalam labu ukur 10 mL sampai tanda

batas, hingga diperoleh konsentrasinya 40, 60, 80, 100, 120 μg/mL asam galat.

Dari masing-masing larutan dipipet sebanyak 0,5 ml, kemudian dicampur dengan

5 ml pereaksi Follin-Ciocalteu, tambahkan 4 ml larutan natruim karbonat 1 M dan

31
biarkan selama 15 menit, lalu ukur serapan dengan Spektrofotometer UV-VIS

pada panjang gelombang serapan maksimum.

c. Perhitungan Batas Deteksi (BD) dan Batas Kuantisasi (BK)

Setelah didapatkan kurva kalibrasi asam galat kemudian dihitung nilai

batas deteksi dan batas kuantisasi. Perhitungan BD dan BK dilakukan secara

statistik melalui persamaan regresi linier dengan konsentrasi, dimana respon

instrument berhubungan linier dengan konsentrasi. Besar batas deteksi dinyatakan

dalam (BD) = 3 x SB/b, dimana b adalah slope dan SB adalah simpangan baku.

Besar batas kuantisasi dinyatakan dalam (BK) = 10 x SB/b, dimana b adalah slope

dan SB adalah simpangan baku.

d. Penentuan Kadar Senyawa Fenolat Total (Pourmorad dkk, 2006).

Dipipet 0,5 ml larutan sampel, lalu tambahkan 5 mL perekasi Follin-

Ciocalteu (diencerkan 1:10) dengan aquadest, kemudian tambahkan 4 ml larutan

natrium karbonat 1 M, dikocok sampai homogen, biarkan pada suhu kamar

selama 15 menit, lalu ukur serapan dengan Spektrofotometer UV-VIS pada

panjang gelombang maksimum dengan 3 x pengulangan. Hitung kadar senyawa

fenolat total dengan menggunakan rumus persamaan regresi linier yang diperoleh

dari kurva kalibrasi larutan standar.

3.9 Penentuan Aktivitas Antioksidan dengan Metoda DPPH

a. Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum DPPH (Mosquera

dkk, 2007).

Dipipet sebanyak 4 mL larutan DPPH 35 μg/mL yang baru dibuat,

masukkan kedalam vial, lalu tambahkan 2 mL metanol dan diamkan selama 30

menit ditempat yang gelap. Ukur serapan dengan Spektrofotometer UV-VIS pada

32
panjang antara 400-800 nm, sehingga didapatkan panjang gelombang serapan

maksimum.

b. Penentuan Aktivitas Antioksidan Standar Asam Galat (Pourmorad dkk,

2006).
Dipipet 1 ml larutan induk asam galat (500 μg/mL ¿ , kemudian dilarutkan

dalam metanol dalam labu ukur 50 mL sampai tanda batas, sehingga diperoleh

larutan standar asam galat dengan konsentrasi 10 μg/mL . Dari larutan ini,

masing-masing dipipet (0,5; 1; 1,5; 2; 2,5) mL masukkan ke dalam labu ukur 10

mL, lalu tambahkan metanol sampai tanda batas hingga diperoleh konsentrasi

(0,5; 1; 1,5; 2; 2,5) μg/mL .

Dipipet masing-masing larutan 2 ml, lalu masukkan ke dalam vial,

tambahkan 4 mL larutan DPPH 35 μg/mL . Diamkan selama 30 menit di tempat

gelap. Ukur serapan dengan Spektrofotometer UV-VIS pada panjang gelombang

serapan maksimum dan tentukan aktivitas antioksidan dengan menghitung %

inhibisi (hambatan).

c. Penentuan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Biji Markisa (Mosquera dkk,

2007).
Ditimbang sampel sebanyak 25 mg, kemudian di larutkan dengan metanol

dalam labu ukur 25 mL sampai tanda batas, hingga diperoleh larutan standar

konsentrasi 1000 μg/mL. Dari larutan standar 1000 μg/mL dipipet 2,5 ml,

kemudian dilarutkan kedalam labu ukur 25 ml sehingga didapat larutan dengan

konsentrasi 100 μg/mL. dari larutan 100 μg/mL dipipet (0,5; 1; 1,5; 2; 2,5) mL.

Kemudian tambahkan methanol dalam labu ukur 10 mL sampai tanda batas.

Sehingga diperoleh sampel dengan konsentrasi (5; 10; 15; 20; 25) μg/mL . Pipet

masing-masing konsentrasi sebanyak 2 mL larutan sampel dengan menggunakan

pipet mikro dan masukkan kedalam vial, kemudian tambahkan 4 mL DPPH 35

33
μg/mL . Campuran dihomogenkan dan biarkan selama 30 menit ditempat gelap,

ukur serapan dengan menggunakan Spektrofotometer UV-VIS pada panjang

gelombang serapan maksimum. Tentukan aktivitas antioksidan dengan

menghitung % inhibisi (hambatan). Dan persamaan regresi dari nilai konsentrasi

dan persen inhibisi. Dari persamaan regresi di cari nilai IC 50 dengan memasukan

nilai 50 ke persamaan regresi.

3.10 Rumus Perhitungan Data

a. Kadar fenolat totat

Kadar fenolat total dalam sampel dapat dihitung dengan menggunakan

rumus persamaan regresi linier (y = a + bx) yang diperoleh dari kurva kalibrasi

larutan standar, antara absorban dan konsentrasi asam galat .

C x V x Fp
Kadar Fenolat Total =
Bs

Keterangan :

C = Konsentrasi larutan sampel (µg/ml)

V = Volume larutan sampel (ml)

Fp = Faktor pengenceran

Bs = Berat sampel (g)

b. Penentuan persen inhibisi

Aktivitas antioksidan sampel ditentukan dari besaran hambatan serapan

radikal DPPH melalui perhitungan % inhibisi serapan DPPH dengan

menggunakan rumus:

34
 Absorban kontrol− Absorban sampel
% Inhibisi = × 100 %
Absorban kontrol

Keterangan :

Absorban Kontrol = Serapan larutan radikal DPPH 35 μg/mL .

Absorban Sampel = Serapan larutan sampel ditambah larutan DPPH 35

μg/mL

c. Nilai IC50

IC50 adalah konsentrasi yang dapat atau mampu menghambat proses

oksidasi sebesar 50% yang dapat dihitung dengan menggunakan persamaan

regresi linier yang diperoleh. Untuk menentukan IC50 diperlukan persamaan

kurva standar dari persen inhibisi sebagai sumbu y dan kosentrasi ekstrak

antioksidan sebagai sumbu x. Nilai IC50 dihitung dengan cara memasukkan nilai

50% kedalam persamaan kurva standar sebagai sumbu y kemudiaan dihitung nilai

x sebagai kosentrasi IC50. Semakin kecil nilai IC50 menunjukkan semakin tinggi

aktivitas antioksidannya (Molyneux, 2004).

Tabel 1. Tingkatan Kekuatan Antioksidan (Verawati, 2022)

In Nilai IC 50

te

ns

it

as

nt

35
io

ks

id

an

Sa <50 μg/mL

ng

at

ua

K 50-100 μg/mL

ua

Se 101-250 μg/mL

da

ng

Le 250-500 μg/mL

ah

Ti >500 μg/mL

da

ak

tif

36
 BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Penelitian

1. Tanaman yang digunakan sebagai sampel dalam penelitian ini telah

diidentifikasi di Herbarium ANDA Jurusan Biologi Fakultas Matematika dan

Ilmu Pengetahuan Alam (FMIPA), Universitas Andalas dengan nomor surat

562/ID/ANDA/XII/2021, berdasarkan hasil identifikasi tanaman yang diuji ini

adalah Passiflora lingularis f. lobata (Mast) Killip yang termasuk kedalam

famili Passifloraceae (Lampiran 2, Gambar 11)

2. Dari 300 g biji buah markisa kering diperoleh ekstrak kental sebanyak

37,6899 g dengan rendemen sebesar 12,5633 % (Lampiran 10, Tabel 3)

3. Pemeriksaan organoleptis dari ekstrak didapatkan ekstrak berbentuk kental,

warna coklat kehitaman, bau khas, dan rasa pahit. (lampiran 10, Tabel 2)

4. Penentuan susut pengeringan yang diperoleh sebesar 4,1525 % (Lampiran 10,

Tabel 4)

5. Penentuan kadar abu total sebesar 1,8984 % (Lampiran 10, Tabel 5)

37
6. Hasil skrining fitokimia ekstrak positif mengandung flavonoid, fenolik,

saponin, terpenoid dan alkaloid. (Lampiran 11, Tabel 6)

7. Hasil pengukuran kurva kalibrasi asam galat yang direaksikan dengan reagen

Folin-Ciocalteu pada panjang gelombang maksimum 747 nm diperoleh (r) =

0,9974 dan persamaan regresi (y) = 0,043+0,00569x (Lampiran 12, Tabel 7)

8. Hasil penetapan kadar fenolat total ekstrak etanol biji buah markisa konyal

sebesar 77,73 mg/g atau 7,77387% (Lampiran 14, Tabel 11)

9. Panjang gelombang serapan maksimum DPPH 35 µg/ml adalah 515 nm

dengan absorban 0,570 (Lampiran 15)

10. Nilai IC50 larutan standar asam galat yang digunakan sebagai pembanding

pada penentuan aktivitas antioksidan sebesar 2,04 µg/ml (Lampiran 16, Tabel

12)

11. Nilai IC50 ekstrak etanol biji buah markisa konyal sebesar 21,8983 µg/ml

(Lampiran 17, Tabel 13)

12. Kesetaraan aktivitas antioksidan ekstrak etanol biji buah markisa konyal

dengan pembanding asam galat sebesar 10,7355 mg, artinya 1 mg asam galat

setara dengan 10,7355 mg ekstrak etanol biji buah markisa konyal. (Lampiran

18, Tabel 14)

4.2 Pembahasan

Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah biji buah markisa

konyal yang diambil didaerah Alahan Panjang Kecamatan Lembah Gumanti

Solok Provinsi Sumatera Barat. Identifikasi telah dilakukan di Herbarium ANDA

Jurusan Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam (FMIPA),

Universitas Andalas dengan membawa bagian akar, batang, buah, bunga dan

38
daunnya. Identifikasi bertujuan untuk memastikan kebenaran dari tumbuhan yang

digunakan dalam penelitian. Berdasarkan hasil dari identifikasi tersebut

dinyatakan bahwa bagian tumbuhan yang digunakan dalam penelitian ini adalah

benar yaitu biji buah markisa konyal (Passiflora ligularis f. lobata) dengan surat

yang telah diberikan oleh pihak Herbarium Universitas Andalas Padang.

Buah markisa konyal diambil sebanyak 10 kg, kemudian dipisahkan antara

kulit dan biji buah didapatkan berat 4,80 kg biji buah markisa basah. Dilakukan

pemisahan biji dan selaput markisa menggunakan saringan santan agar pemisahan

biji dan selaput markisa lebih mudah. Setelah itu biji buah dicuci dengan air, yang

bertujuan untuk membersihkan biji buah dari selaput yang ada pada biji buah

hingga didapatkan berat 2,2 kg. Selanjutnya biji buah dikeringkan dengan tidak

menggunakan sinar matahari langsung, untuk mengurangi kadar air dan untuk

mencegah terjadinya reaksi enzimatis yang dapat menyebabkan terjadinya

penguraian atau pengrusakan senyawa yang ada di dalam sampel. Berat biji yang

diperoleh setelah dikeringanginkan ialah sebanyak 650g. Proses pengeringan juga

dapat membuat simplisia menjadi lebih awet dan tahan lama (Verawati dkk,

2017). Setelah dikeringkan, biji buah ditumbuk kasar menggunakan lumpang

kayu agar pada saat maserasi pelarut dapat berpenetrasi secara cepat ke dalam

simplisia dan proses ekstraksi menjadi lebih optimal. sampel yang digunakan

sebanyak 300g.

Proses ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi. Metode ini dipilih

karena prosesnya sederhana, efektif untuk menarik zat-zat yang diinginkan dan

tidak menggunakan proses pemanasan, sehingga dapat menghindari terjadinya

kerusakan zat aktif yang ada pada sampel. Pelarut yang digunakan adalah etanol,

39
karena harganya murah, relatif tidak toksik dan bersifat universal (mampu

menarik senyawa polar maupun non polar) sehingga memudahkan untuk menarik

senyawa fenolat yang ada pada simplisia. Saat maserasi, terjadi kesetimbangan

konsentrasi antara pelarut yang digunakan dengan simplisia, karena itu diperlukan

adanya pengadukan dan pergantian pelarut secara berulang (Asra dkk, 2019).

Proses ekstraksi pertama dilakukan selama 48 jam menggunakan etanol 70%

karena sampel mengandung kadar air yang cukup tinggi sehingga dapat

mengembangkan dan membuka pori-pori sampel yang sebelumnya berada dalam

keadaan kering (Verawati dkk, 2017). Ekstraksi yang kedua menggunakan etanol

96% dengan merendam sampel selama 48 jam. Proses maserasi ini diulangi

sebanyak 3x untuk mengoptimalkan penarikan senyawa metabolit sekunder yang

ada pada sampel.

Hasil maserasi setiap perendaman disaring kemudian maseratnya

digabungkan untuk diuapkan pelarutnya menggunakan vaccum pada tekanan

rendah dengan alat rotary evaporator. Penggunaan tekanan yang rendah dapat

membantu proses penguapan terjadi lebih cepat karena pelarut akan menguap

pada suhu dibawah titik didihnya. sehingga didapatkan ekstrak etanol kental.

Setelah didapatkan ekstrak etanol kental biji buah markisa konyal kemudian

dilakukan karakterisasi yang bertujuan untuk melihat mutu dari ekstrak.

Dari 300g biji buah markisa konyal kering didapatkan berat ekstrak etanol

kental biji buah sebanyak 37,6899 g dengan hasil perhitungan rendemen sebesar

12,5633%. Rendemen bertujuan untuk melihat bagaimana perbandingan antara

ekstrak kental dengan simplisia kering (Departemen Kesehatan RI, 2000). Hasil

pemeriksaan organoleptis dari ekstrak berupa, ekstrak yang kental, bewarna coklat

40
kehitaman dengan bau khas. Pemeriksaan organoleptis bertujuan untuk

mengidentifikasi secara langsung bagaimana karakteristik spesifik dari ekstrak

dengan menggunakan panca indra.

Hasil penentuan dari susut pengeringan ekstrak sebesar 4,1525%. Susut

pengeringan bertujuan untuk memberikan batasan tentang besarnya senyawa yang

hilang pada proses pengeringan yang dilakukan dengan pemanasan pada

temperatur 105‫ﹾ‬C karena pada suhu ini air dapat menguap dan senyawa-senyawa

yang memiliki titik didih yang lebih rendah dari air akan ikut menguap (Lisa,

2016). Hasil susut pengeringan yang didapat memenuhi standar susut pengeringan

yaitu kurang dari 10%.(Depkes,2000)

Hasil penentuan kadar abu total dari ekstrak adalah sebesar 1,8984 %.

Kadar abu total bertujuan untuk memberikan bagaimana gambaran kandungan

mineral internal dan eksternal yang berasal dari proses awal sampai terbentuknya

ekstrak (Depkes RI, 2000). Hasil skrining fitokimia didapatkan bahwa ekstrak

etanol biji buah markisa konyal positif mengandung flavonoid, fenolik, saponin,

terpenoid dan alkaloid. Skrining fitokimia dilakukan untuk mengetahui secara

kualitatif metabolit sekunder yang terdapat di dalam ekstrak (Verawati dkk, 2017).

Penentuan kadar fenolik total dari ekstrak etanol biji buah markisa konyal

dilakukan menggunakan metoda Follin-Ciocalteu. Prinsip metoda Follin-

Ciocalteu adalah reaksi oksidasi dari senyawa fenol pada suasana basa oleh

pereaksi Folin-Ciocalteu yang akan menghasilkan suatu kompleks bewarna biru

yang memberikan serapan kuat pada panjang gelombang 747 nm. Terjadinya

peningkatan intensitas warna biru sebanding dengan besarnya jumlah senyawa

fenolik pada sampel (Blainski, 2013)

41
 Panjang gelombang serapan maksimum dengan menggunakan baku

pembanding asam galat, asam galat digunakan karena asam galat merupakan salah

satu golongan senyawa fenolat yang memiliki kestabilan yang tinggi, murni,

murah, mudah didapat dan tersedia di alam (Harbone, 1987). Hasil penentuan

panjang gelombang maksimum dari asam galat pada konsentrasi 500 µg/mL

adalah 747 nm dengan absorban 0,496. Selain sebagai pembanding pada

penetapan kadar fenolat, asam galat juga digunakan pembanding di pengujian

aktivitas antioksidan.

Setelah diketahui panjang gelombang serapan maksimum asam galat

kemudian dilakukan pengukuran absorban dari asam galat dengan konsentrasi 40,

60, 80, 100 dan 120 µg/ml, ini bertujuan untuk menentukan kurva kalibrasi asam

galat dengan reagen Folin-Ciocalteu sehingga didapatkan persamaan regresi

linier. Persamaan regresi yang didapatkan yaitu (y) = 0,043 + 0,00569x dengan

harga koefisien korelasinya (r) = 0,9974, nilai batas deteksi (BD) = 1,8026 µg/ml

dan batas kuantisasi 6,0087 µg/ml. Batas deteksi adalah jumlah analit terkecil

yang dapat terdeteksi dengan alat sedangkan batas kuantisasi adalah jumlah analit

terkecil yang dapat diukur secara cermat dan seksama pada alat (Verawati dkk,

2017). Persamaan regresi linier dimaksudkan untuk mengukur kadar senyawa

fenolat total pada sampel dengan cara mengukur absorban sampel kemudian

dimasukkan kedalam persamaan regresi tersebut. Kadar fenolat total yang

didapatkan dari ekstrak etanol biji buah markisa konyal sebesar 77,73 mg/g.

Untuk pengujian aktivitas antioksidan menggunakan metode DPPH (1,1-

Diphenyl-2-picrylhydrazil) karena metode DPPH merupakan metode yang

sederhana, cepat serta menggunakan sampel dalam jumlah yang sedikit. Sebelum

42
dilakukan pengujian aktivitas antioksidan larutan sampel, dilakukan penentuan

panjang gelombang serapan maksimum dengan menggunakan larutan kontrol.

Larutan kontrol yang digunakan adalah larutan DPPH menggunakan pelarut

etanol dengan tujuan untuk mendapatkan daerah serapan maksimum DPPH yang

diukur pada rentang 400-800 nm dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis

(Qulub dkk, 2018). Hasil yang didapatkan panjang gelombang serapan maksimum

DPPH adalah 515 nm pada konsentrasi 35µg/ml dengan absorban 0,570.

Pengujian aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode DPPH

dilakukan untuk menentukan seberapa besar aktivitas suatu sampel untuk

menghambat radikal stabil DPPH dengan cara mendonorkan atom hidrogen.

Sampel yang memiliki aktivitas antioksidan mereduksi DPPH menjadi DPPH-H

(Molyneux, 2004). Reduksi yang terjadi ditandai dengan adanya perubahan warna

dari ungu menjadi kuning. Penurunan intensitas warna DPPH diikuti oleh

penurunan absorban DPPH. Semakin kuat aktivitas antioksidan sampel, semakin

pudar warna DPPH yang dihasilkan.

Parameter untuk menentukan adanya aktivitas antioksidan suatu senyawa

adalah Inhibition Concentration (IC50), merupakan konsentrasi dari suatu zat

antioksidan yang dapat menyebabkan 50% DPPH kehilangan karakter radikal

(Molyneux, 2004). Semakin kecil harga IC50 menunjukan semakin besar

kemampuan antioksidan dari suatu senyawa yang digunakan.

Hasil penelitian didapatkan bahwa aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol

biji buah markisa konyal memiliki nilai IC50 sebesar 21,8983 µg/ml, sedangkan

nilai IC50 dari asam galat yang digunakan sebagai pembanding adalah 2,0398

µg/mL. Suatu senyawa memiliki aktivitas antioksidan sangat kuat apabila nilai

43
IC50 kurang dari 50 µg/mL, kuat apabila nilai IC 50 berkisar antara 50-100 µg/mL,

sedang jika nilai IC50 berkisar antara 101-250µg/mL, lemah apabila

250-500µg/mL, dan tidak aktif apabila >500µg/mL (Verawati dkk, 2022). Dari

batasan ini dapat dikatakan bahwa ekstrak etanol biji buah markisa konyal

memiliki aktivitas antioksidan sangat kuat. Kesetaraan aktivitas antioksidan

ekstrak dengan asam galat sebesar 10,7355 mg, artinya 1 mg asam galat setara

dengan 10,7355 mg ekstrak etanol biji buah markisa konyal.

Dari hasil penelitian yang telah dilakukan, aktivitas antioksidan yang

terdapat pada ekstrak etanol biji buah markisa konyal dipengaruhi oleh senyawa

fenolik. Adapun senyawa lain yang berperan sebagai senyawa antioksidan yaitu

flavonoid, yang menunjukkan hasil positif dari uji skrinning fitokimia.

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, dapat diambil kesimpulan :

1. Kadar fenolat total yang diperoleh dari ekstrak etanol biji buah markisa

konyal menggunakan metode Follin-Ciocalteu adalah 77,73 mg/g

2. Aktivitas antioksidan yang diperoleh dari ekstrak etanol biji buah markisa

konyal mengunakan metode DPPH adalah sangat kuat yaitu dengan nilai

IC50 sebesar 21,8983 µg/mL

44
5.2 Saran

Disarankan kepada peneliti selanjutnya untuk dapat melanjutkan hasil penelitian

ini pada pembuatan sediaan farmasi seperti dibidang kosmetik.

DAFTAR PUSTAKA

Agbor GA, Vinson JA dan Donnelly PE. 2014. Folin-Ciocalteau Reagent for
Polyphenolic Assay. International Journal of Food Science, Nutrition and
Dietetics (IJFS); 3(8): 147-156.

Badarinath A, Rao K, Chetty CS, Ramkanth S, Rajan T, & Gnanaprakash

K.A .2010. Review on In-vitro Antioxidant Methods: Comparisons,
Correlations, and Considerations. International Journal of PharmTech
Research

Blainski A, Cristiny G, De Mello J. 2013. Application and Analysis of The Folin

Ciocalteu Method for The Determination of The Total Phenolic Content
From Limonium Brasiliense L. J. Mdpi Molecules. 18: 6855

45
Brown, A., 2000, Understanding Food: Principles and Preparation, Wadsworth
Thomson Learning ,USA, pp. 675-677.

Dachriyanus. 2004. Analisis Struktur Senyawa Organik Secara Spektroskopi.

Cetakan Pertama. Padang: Universitas Andalas.

Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2000. Parameter Standar Umum

Ekstrak Tumbuhan Obat. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan
Makanan: Jakarta

Dewick M P. 2001. Medicinal Natural Products. John Wiley & Sons Ltd.
England: 121-125.

Erlidawati. Ajmi. Abdul gani. 2017. Uji Aktivitas Antioksidan Gulma Siam
(Chromoleana odorata L.) Dengan Metode 1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil.
(jipi) 1(2):132-142

Mahkota AW. 2013. Uji Aktivitas Afrodisiaka Ekstrak Biji Markisa (Passiflora
Ligularis, Juss.) Asal Kabupaten Jeneponto Terhadap Mencit Jantan (Mus
Musculus). Skripsi. Makassar : Universitas Hasanuddin.

Pertanianku.com,2016.Fakta Ilmiah Buah Markisa. Diakses pada tanggal 12

November 2021, https://www.pertanianku.com/fakta-ilmiah-buah-markisa/

Haci IAE, Didi A, Bekkara FA, Gherib M. 2009. In Vitro Antioxidant Activity
and Total Phenolic Contents in Methanol Crude Extrat from The Algerian
Medicinal Plan Limoniastrum Feei. Scientific Study and Reaserch; 10(4):
329-336.

Harborne J B. 1987. Metode Fitokimia Penentuan Cara Modern Menganalisa

Tumbuhan Cetakan Ke-2. Diterjemahkan oleh K. Padmawinata dan I.
Soediro. Bandung. Institut Teknologi Bandung.

Karsinah, F.H. Silalahi, A.Manshur.2007.Eksplorasi dan Karakterisasi Plasma

Nutfah Tanaman Markisa; Balitro Solok Sumbar. J. Hort. 17(4):297-306

Kate D I. 2014. Penetapan Kandungan Fenolik Total dan Uji Aktivitas

Antioksidan Dengan Metode DPPH (1,1-Diphenyl-2-Pikrilhydrazil)
Ekstrak Metanolik Umbi Bidara Upas (Merremia mammosa (Lour) Hallier
f). Skripsi. Yogjakarta. Universitas Sanata Dharma.

Kementrian Kesehatan Republik Indonesia Edisi II. 2017. Farmakope Herbal

Indonesia. Jakarta : Direktorat Jenderal Kefarmasian dan Alat Kesehatan.

Molyneux P. 2004. The Use Of The Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl

(DPPH) For Estimating Antioxidant Activity. Songklanakarin. J. Sci.
Technol. 26 (2): 211-219.

46
Mosquera, O. M., Correa, Y. M., Buitrago, D. C. & Nino, J. 2007. Antioxidant
Activity of Twenty Five Plants from Colombian Biodeirvesity. Mem Inst
Oswaldo Cruz, Rio de janeiro. 102 (5):631-634

Niken, W. 2010. Pengukuran Aktivitas Antioksidan Dengan Metode Cuprac,

Dpph, Dan Frap Serta Korelasinya Dengan Fenol Dan Flavonoid Pada
Enam Tanaman. Departemen Kimia Fakultas Matematika Dan Ilmu
Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor. Jurnal (hal 6)

Nurmi,A, 2008, Antioksidant Studies On Selected Lamiacea Herbs In Vitro And

In Humans, Yliopistopaino, University Print, Helsinski, Finland, 33

Prakash A, Rigelhof F dan Miller E. 2001. J. Antioxidant Activity. Medallliaoan

Laboratories.19 (2): 1-4.

Pourmorad F, Hosseinimehr S J, Shahabimajd N. 2006. Antioxidant Activity,

Phenol and Flavonoid Contents of Some Selected Iranian Medicinal Plants.
African Journal of Biotechnology. 5 (11): 1142-1145.
.
Qulub MS, Wirasti W, Mugiyanto E. 2018. Perbedaan Aktivitas Antioksidan
Ekstrak Etanol Daun, Daging, Buah, dan Biji Mengkudu (Morinda
citrifolia L.) Dengan Metode DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazil).
Journal University Research Colloquium: 454-462.

Rukmana, R. (2003). Usaha Tani Markisa. Yogyakarta: Kanisius. Halaman 16.

Santoso, M. dan Rosalina, W. 2009. Albedo Markisa Konyal Sebagai
Bahan Baku Pembuatan Kertas Dengan Metoda Organosolv. Prosiding
Seminar Kimia Bersama UKM-ITB VIII. Bandung: ITB.

Sakalem ME, Negri G, Tabach R. 2012. Chemical composition of hydroethanolic

extracts from fi ve species of the Passiflora genus. Department of
Psychobiology, Universidade Federal de São Paulo, Brazil.

Sari TM, Fera O, Yonedi YP. 2021. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Biji
Buah Markisa Konyal (Passiflora Ligularis F. Lobata) Padang: Universitas
Perintis Indonesia

Sembiring, E. 2019. Aktivitas Antioksidan Ekstrak dan Fraksi dari Biji Jagung
(Zea mays) L. Vol 9, No 1

Siregar AE and Gultom T. 2018. Karakterisasi Morfologi Markisa (Passiflora) Di

Kabupaten Karo Sumatera Utara [Journal] // Prosiding Seminar Nasional
Biologi dan Pembelajarannya.

Togo H. 2004. Advanced Free Radical Reactions for Organic Synthesis. Chiba.
Japan: 13.

47
 Verawati, Nofiandi D, Petmawati. 2017. Pengaruh Metode Ekstraksi Terhadap
Kadar Fenolat Total dan Aktivitas Antioksidan Daun Salam (Sygium
polyanthum (Wight) Walp.). Jurnal Katalisator Kopertis Wilayah X; 2(2):
53-59.
Verawati, Almahdy, Febriyenti, Putra DP,2022. In Vitro and In Vivo Evaluation
of Photoprotective Effect of Elaphantopus Mollis Exstracts.Tropical
Journal of Natural Product Research: 365-370
Waterhause A. 1999. Folin-Ciacalteu Micro Method for Total Phenol in Wine.
Departement of Viticulture & Enology. University Of California. Davis.

Watson D G. 2009. Analisis Farmasi Edisi kedua. EGC: Jakarta.

Werdhasari, A, 2014 ‘Peran antioksidan bagi kesehatan’, Jurnal Biotek

Medisiana Indonesia, vol. 3, no. 2, hh. 59-68.

Winarsi W. 2007. Antioksidan Alami dan Radikal Bebas. Jogjakarta: Kanisius

Yuhernita dan Juniarti, 2011. Analisis Senyawa Metabolit Sekunder Dari Ekstrak
Metanol Daun Sungkai Yang Berpotensi Sebagai Antioksidan. Departemen
Biokimia, Universitas YARSI, Jakarta.

Lampiran 1. Gambar Biji, Kebun dan Buah Markisa Konyal (Passiflora

lingularis f. lobata) dan Dokumentasi pembuatan ekstrak

Gambar 7. Kebun Buah Markisa Konyal Gambar 8. Buah Markisa Konyal

48
Gambar 9. Pengukuran Buah Markisa Konyal Gambar 10. Biji Buah Markisa Konyal

Lampiran 1. (Lanjutan)

300 gr serbuk
simplisia

(Simplisia Kering) (Maserasi Ekstrak)

Penyaringan
Ekstrak

49
 Maserat
Ekstrak

(Ampas Maserasi)
Proses Rotary

Ekstrak
Kental

(Merotary Sampel)

Gambar 11. Dokumentasi Proses Pembuatan Ekstrak

Lampiran 2. Hasil Surat Identifikasi Tumbuhan Markisa Konyal (Passiflora

lingularis f. lobata)

50
Gambar 12. Hasil Surat Identifikasi Tumbuhan Markisa Konyal (Passiflora
lingularis f. lobata)

Lampiran 3. Skema Kerja Pembuatan Ekstrak Biji Buah Markisa

(Passiflora ligularis f. lobata)

51
 300 g biji buah markisa konyal segar

 Kering anginkan
 Ditumbuk kasar
menggunakan lumpang kayu

Simplisia

 direndam dengan etanol

70% selama (48 jam) lalu
disaring.
 selanjutnya ampas sisa
maserasi 70% di rendam
kembali dengan etanol 96%,
selama (48 jam) dilakukan
3x pengulangan
 saat perendaman, sesekali
diaduk dan diamkan, lalu
disaring

Filtrat Ampas

Rotary Evaporator

Ekstrak etanol kental

Karakteristik ekstrak Skrinning Fitokimia Penentuan kadar Penentuan

Fenolik total aktivitas
- Organoleptis - Uji flavonoid Antioksidan
- Rendemen - Uji fenolik
- Susut pengeringan - Uji saponin
- Kadar abu - Uji terpenoid
- Uji steroid
- Uji alkaloid
Gambar 13. Skema Pembuatan Ekstrak Etanol Biji Buah Markisa
Konyal (Passiflora ligularis f. lobata)

52
Lampiran 4. Skema Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum
Asam Galat

Larutan induk 500 ppm

Pipet 1,6 mL ke labu ukur 10 mL

Encerkan dengan metanol

Larutan 80 ppm

Dipipet 0,5 mL + 5 mL folin ciocalteau

(diencerkan 1:10) dengan aquadest
+ 4 mL Natrium karbonat 1M
Biarkan pada suhu kamar ± 15 menit

Larutan uji asam galat

Diukur dengan spektrofotometer Uv-Vis

λ max

Gambar 14. Skema Penentuan Panjang Gelombang Serapan

Maksimum Asam Galat

53
Lampiran 5. Pembuatan Kurva Kalibrasi Asam Galat

Larutan induk asam galat (500

μg/mL ¿ L

 Dipipet sebanyak 0,8; 1,2; 1,6;

2,0; 2,4 mL
 Diencerkan dengan methanol
dalam labu ukur 10 mL hingga
tanda batas

Larutan standar dengan konsentrasi

40, 60, 80, 100, 120 μg/mL

 Dari masing-masing konsentrasi

larutan standar dipipet 0,5 ml
 Tambahkan 5 ml pereaksi Follin
Ciocalteu (diencerkan 1:10)
dengan aquadest
 Tambahkan 4 ml larutan natrium
karbonat 1 M, diamkan 15 menit
 Ukur serapandengan
Spektrofotometer UV-VIS pada
panjang gelombang maksimum
747 nm

Absorban

Gambar 15. Pembuatan Kurva Kalibrasi Asam Galat

54
Lampiran 6. Skema Penentuan Kadar Senyawa Fenolat Total Ekstrak biji
Markisa (Passiflora ligularis f. lobata)

25 mg ekstrak

 Masukkan ke dalam labu ukur 25

mL
 Ditambah metanol ad tanda batas

Larutan Uji Konsentrasi 1000 µg/mL

 Dipipet 0,5 mL larutan uji

 Tambahkan 5 ml pereaksi Follin
Ciocalteu (diencerkan 1:10)
dengan aquadest
 Tambahkan 4 mL natrium
karbonat 1 M, kocok hingga
homogen, dan diamkan selama
15 menit
 Ukur serapan dengan
Spektrofotometer UV-Vis pada
panjang gelombang serapan
maksimum 747 nm
 Dilakukan 3 kali pengulangan
Absorban

 masukan nilai ke persamaan regresi

Kadar Senyawa Fenolat Total

Gambar 16. Skema Penentuan Kadar Fenolat Total Ekstrak Etanol Biji
Buah Markisa Konyal (Passifolra ligularis f. lobata)

55
Lampiran 7. Skema Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum
DPPH

10 mg DPPH

 Tambahkan metanol dalam labu

ukur 100 mL hingga tanda batas
DPPH 100 µg/mL

 Pipet 17,5 mL larutan DPPH,

masukan dalam labu ukur 50 mL,
ad kan dengan metanol hingga
tanda batas

Larutan DPPH konsentrasi 35 µg/mL

 Pipet sebanyak 4 mL, tambahkan

2 ml metanol
 Diamkan selama 30 menit
 Ukur serapan dengan
Spektrofotometer UV-VIS pada
panjang geombang maksimum

Panjang Gelombang
Serapan Maksimum
DPPH

Gambar 17. Skema Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum

DPPH

56
Lampiran 8. Skema Penentuan Aktivitas Antioksidan Standar Asam Galat

Larutan induk asam galat (500 μg/ml ¿

 Pipet 1 mL
 Dilarutkan dengan metanol
dalam labu ukur 50 ml
hingga tanda batas

Larutan standar asam galat konsentrasi 10 μg/ml

 Pipet masing-masing larutan

standar (0,5; 1; 1,5; 2; 2,5)
mL
 Ditambahkan metanol dalam
labu ukur 10 mL

Seri konsentrasi asam galat 0,5; 1; 1,5; 2; 2,5 μg/ml

 Dipipet 2 ml masing-masing
konsentrasi, masukkan
kedalam vial
 Tambahkan 4 ml larutan
DPPH 35 μg/ml
 Diamkan selama 30 menit
ditempat yang gelap.
Ukur serapan dengan Spektrofotometer UV-VIS pada panjang
gelombang maksimum

% inhibisi asam galat

 persamaan regresi

IC 50

Gambar 18. Skema Penentuan Aktivitas Antioksidan Standar Asam Galat

57
 Lampiran 9. Skema Penentuan Aktivitas Antioksidan ekstrak etanol biji
markisa konyal dengan Metoda DPPH

Larutan induk sampel 1000

μg/mL.

Dari larutan standar 1000 μg/mL dipipet

sebanyak 2,5 ml, kemudian dilarutkan dalam
labu ukur 25 ml dengan metanol hingga tanda
batas

Larutan induk sampel 100 μg/mL.

Dari larutan standar 100 μg/mL dipipet (0,5; 1;

1,5; 2; 2,5) ml, kemudian dilarutkan dalam
labu ukur 10 ml dengan methanol hingga tanda
batas

konsentrasi larutan deret standar

(50; 10; 15; 20; 25) μg/mL.

Dipipet masing – masing 2 ml lalu

ditambahkan 4 ml larutan DPPH 35
μg/ml

Larutan uji

Diamkan selama 30 menit ditempat

gelap

Ukur serapan dengan

Spektrofotometer UV-VIS pada
panjang gelombang maksimum

Hitung % inhibisi dan tentukan

persamaan regresi

IC50

Gambar 19. Skema Penentuan Aktivitas Antioksidan ekstrak etanol biji

markisa konyal dengan Metoda DPPH

58
Lampiran 10. Pengujian Karakterisasi Ekstrak Etanol Biji Buah Markisa
Konyal (Passiflora lingularis f. lobata)
Tabel 2. Hasil Pemeriksaan Organoleptis Ekstrak

Pemeriksaan Organoleptis Pengamatan

Bentuk Ekstrak Kental

Warna Coklat kehitaman
Bau Khas
Rasa Pahit

Tabel 3. Hasil Persentase Rendemen Ekstrak

No. Berat Biji Basah Berat Biji Kering Berat ekstrak

1 2200 g 300 g 37,6899 g

berat ekstrak kental (g)

% Rendemen = x 100 %
Berat serbuk simplisia kering(g)

37,6899 g
= x 100 %
300 g

= 12,5633 %

Tabel 4. Hasil Susut Pengeringan

No. Berat krus Berat krus + ekstrak Berat krus +

kosong sebelum dipanaskan ekstrak setelah
(A) (B) dipanaskan (C)
1 63,5412 g 64,5719 g 64,5291 g

59
Lampiran 10 (lanjutan)

( B−A )−(C− A)
% Susut Pengeringan = x 100 %
(B−A )

( 64,5719−63,5412 ) −(64,5291−63,5412)
= x 100
(64,5719−63,5412)

1,0307−0,9879
= x 100 %
1,0307

0,0428
= x 100 %
1,0307

= 4,1525 %

Tabel 5. Hasil Kadar Abu Total

No. Berat krus kosong Berat krus + ekstrak Berat krus +

(A) sebelum pemijaran ekstrak setelah
(B) pemijaran (C)
1 53,6767 g 56,3051 g 53,7266 g

(C− A)
% Kadar Abu Total = x 100 %
( B−A )

(53,7266−53,6767)
= x 100%
(56,3051−53,6767)

0,0499
= x 100%
2,6284

= 1,8984 %

60
Lampiran 11. Pemeriksaan Skrining Fitokimia Ekstrak
Tabel 6. Hasil Pemeriksaan Skrining Fitokimia Ekstrak

No Metabolit Pereaksi Pengamatan Kesimpulan

Sekunder
.

1 Flavonoid Logam Mg + HCl(p) Kuning +

2 Fenolik FeCl3 Hitam +
3 Saponin` Lapisan air dikocok Terbentuk +
kuat Busa
Permanen
4 Steroid As. Asetat Tidak -
Anhidrat+H2SO4 (p) berwarna biru
atau hijau
5 Terpenoid As. Asetat Bewarna +
Anhidrat+H2SO4 (p) Merah
6 Alkaloid Kloroform Terdapat +
Amoniak+H2SO4(p) gumpalan
putih

Keterangan : ( + ) Terjadi reaksi

( - ) Tidak Terjadi Reaksi

61
Lampiran 12. Panjang Gelombang Serapan Maksimum Asam Galat 80

µg/mL

62
Gambar 20. Panjang Gelombang Serapan Maksimum Asam Galat 80 µg/mL

63
Lampiran 12 (lanjutan)
Tabel 7. Hasil Pengukuran Absorban Asam Galat Pada Panjang Gelombang
Serapan Maksimum 747 nm dengan Spektrofotometer UV-VIS
No. Konsentrasi (μg/mL) Absorban
1 40 0,280
2 60 0,372
3 80 0,501
4 100 0,605
5 120 0,733

kurva kalibrasi asam galat

0.8
0.7
f(x) = 0.005695 x + 0.0426000000000001
0.6 R² = 0.997304024821114
absorban

0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130

Konsentrasi (μg/mL)

Gambar 21. Kurva Kalibrasi Asam Galat

Lampiran 12 (lanjutan)

64
Tabel 8. Hasil Perhitungan Persamaan Regresi Linear Asam Galat Pada
Panjang Gelombang Serapan Maksimum 747 nm
2 2
NXY x y x

1.40 1600 0,0784 1

2.60 3600 0,138384 2

3.80 6400 0,251001 4

4.10 10000 0,366025 6

5.10 14400 0,537289 8

ƩƩ Ʃ x 2= 36000 Ʃ y 2= 1,371099 Ʃ

Keterangan :
x = Konsentrasi Asam Galat
y = Absorban
Persamaan Regresi :
y = a + bx
Dimana :
x = kadar
y = Absorban
a dan b = Koefisien regresi
a. Koefisien korelasi (r)
n Ʃxy−Ʃx Ʃy
r=
√¿ ¿ ¿
5 (222 , 06 )−(400)(2.491)
=
√¿¿¿
1110 , 3−996 , 4
=
√( 180.000 )−( 160.000 ) ( 6,855495 )−(6,205081)
113 , 9
=
√20.000 . 0,65041

65
 113 , 9
=
√13008 , 2
113 , 9
=
114 , 05
= 0,9987
2
R = (0,9987¿2
= 0,9974
Lampiran 12. (Lanjutan)

b. Koefisien regresi (b)

n Ʃxy−ƩxƩy
b= 2
nƩ x −¿ ¿
5 (222 , 06 )−(400)(2.491)
=
5 (36000 )−¿ ¿
1110 ,3−996 , 4
=
180.000−160.000
113 , 9
=
20.000
= 0,00569
c. Konstanta (a)
Ʃ y−bƩx
a=
n
2,491−(0,00569)(400)
=
5
2,491−2,276
=
5
0,215
=
5
= 0,043

Jadi, persamaan regresi dari kurva kalibrasi asam galat adalah :

y = a + bx
= 0,043 + 0,00569x

66
Lampiran 13. Perhitungan Batas Deteksi (BD) dan Batas Kuantasasi (BK)
Tabel 9. Hasil Perhitungan Batas Deteksi (BD) dan Batas Kuantisasi (BK)
X Y Yi y-yi (y-yi)²

40 0,280 0,2706 0,0094 0,00008836

60 0,372 0,3844 -0,0124 0,00015376

80 0,501 0,4982 0,0028 0.00000784

100 0,605 0,6120 -0,007 0,000049

120 0,733 0,7258 0,0072 0,00005184

Ʃ = 0,0003508

Keterangan :
y = Absorban Asam Galat
yi = Nilai absorban perhitungan
y-yi = Selisih nilai absorban perhitungan dengan absorban terbaca
x = Konsentrasi
Contoh perhitungan :
Persamaan regresi y = 0,043 + 0,00569x
yi = 0,043 + 0,00569x
= 0,043 + 0,00569x. (40)
= 0,2706

67
y-yi = 0,280 – 0,2706
= 0,0094

Lampiran 13. (lanjutan)

a. Simpangan Baku (SB)

SB =
√
Ʃ( y− yi)²
n−2
=
√
0,0003508
5−2
=
√
0,0003508
3
=√ 0,00001169
= 0,003419 µg/mL

b. Batas Deteksi (BD)

3. SB
BD =
b
3 .0,003419
=
0,00569
= 1,8026 µg/mL

c. Batas Kuantisasi (BK)

10. SB
BK =
b
10(0,003419)
=
0,00569
= 6,0087 µg/mL

Tabel 10. Hasil Evaluasi Pengukuran Kadar Fenolat Total Ekstrak Etanol
Biji Buah Markisa Konyal
No. Hasil Evaluasi Nilai yang diperoleh
1. Persamaan Regresi y = 0,043 + 0,00569x

68
 2. Koefisien Korelasi 0,9974
3. Simpangan Baku Relatif 0,003419 µg/ml
4. Batas Deteksi 1,8026 µg/ml
5. Batas Kuantisasi 6,0087 µg/ml

Lampiran 14. Perhitungan Kadar Fenolat Total Ekstrak Biji Buah Markisa
Konyal
Tabel 11. Hasil Perhitungan Kadar Fenolat Total Ekstrak Biji Buah Markisa
Konyal Menggunakan Spektrofotometer UV-VIS Pada Panjang
Gelombang Serapan Maksimum 747 nm
Peng- Absorban Konsentrasi ± SD % KV Kadar
ukuran (A) (C) µg/ml C-C (C- C ¿ ² Fenolat
Total (mg/g)
1. 0,480 76,8014 -0,9373 0,9119 0,97 1,2477 77,7387
2. 0,485 77,6801 -0,0586 0,0034
3. 0,491 78,7346 0,9959 0,9918

A = 0,485 C = 77,7387 Ʃ= 1,9071

Contoh perhitungan konsentrasi :

y = 0,043 + 0,00569x
0,480 = 0,043+0,00569x
0,480 - 0,043 = 0,00569x
0,437 = 0,00569x
0,437
x=
0,00569
x = 76,8014 µg/ml
a. Penetapan Kadar fenolat Total

69
 C x V x Fp
Kadar fenolat total =
Bs
77,7387 µg /mlx 25 mlx 1
=
0,0250 g
= 77.7387 µg/g
= 77,7387 mg/g
= 0,0777387 g/g
= 7,77387 %

Lampiran 14. (Lanjutan)

b. Standar Deviasi (SD)

SD =
√
Ʃ ( C−C ) ²
n−1
=
√
1,9071
3−1
=√ 0,95355
= 0,97µg/ml

c. Koefisien variasi (KV)

SD
% KV = x 100%
C
0 , 97
= x 100 %
77,7387
= 1,2477 %

70
Lampiran 15 . Hasil Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum
DPPH 35 µg/mL

71
Gambar 22. Panjang Gelombang Serapan Maksimum DPPH 35 µg/mL

Lampiran 16. Aktivitas Antioksidan Standar Asam Galat

Tabel 12. Hasil Perhitungan IC 50 Standar Asam Galat

72
K A A % IC 50 (µg/mL)
o b b
ns s s I
en o o n
tr r r h
as b b i
i a a b
A n n i
sa D A s
m P s i
G P a
al H m
at
(µ G
g/ al
m a
L) t
+
D
P
P
H
0, 0, 0, 1
5 5 4 1
1 5 , 2,0400 µg/mL
3 4 5
0
%
1 0, 0, 2
5 3 4
1 8 ,
3 5 9
5
%
1, 0, 0, 3
5 5 3 7
1 2 ,
3 0 6
2
%
2 0, 0, 4
5 2 8
1 6 ,
3 2 9
2
%
2, 0, 0, 6
5 5 2 0

73
 1 0 ,
3 1 8
1
%

aktivitas antioksidan asam galat 10 (μg/mL)

70
60.81
60
f(x) = 24.518 x − 0.0169999999999959
48.92
50 R² = 0.998856409957147
37.62
40
% inhibisi

30 24.95

20 11.5
10
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3

Konsentrasi (μg/mL)

Gambar 23. Kurva Aktivitas Antioksidan Standar Asam Galat

Contoh perhitungan ab% inhibisi larutan standar asam galat :

Absorban Kontrol− Absorban Asam Galat
% Inhibisi = x 100 %
Absorban Kontrol
0,513−0,454
= x 100 %
0,513
= 11,50 %

Lampiran 16 (Lanjutan)
Perhitungan IC50 larutan standar asam galat :
Dari persamaan % inhibisi didapatkan persamaan regresi linear, dengan
persamaan ini dapat dihitung konsentrasi larutan standar asam galat yang
memberikan persen inhibisi sebesar 50 % :

74
 y = a+bx
50 = -0,017 + 24,518x
24,518x = 50 + 0,017
24,518x = 50,017
50,017
x=
24,518
= 2,0400 µg/mL
Dimana :
x = Konsentrasi larutan standar asam galat
y = Persen inhibisi

Lampiran 17. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Biji Buah Markisa

Konyal
Tabel 13. Hasil Perhitungan IC50 Ekstrak Etanol Biji Buah Markisa Konyal
Konsentrasi Absorban Absorban % IC50 (µg/mL)
Ekstrak DPPH Sampel + Inhibisi
Etanol Biji DPPH
Buah

75
 Markisa
Konyal
(µg/mL)
5 0,608 0,499 17,92

10 0,608 0,442 27,30

15 0,608 0,386 36,51 21,8983 µg/mL

20 0,608 0,326 46,38

25 0,608 0,267 56,08

aktivitas antioksidan ekstrak etanol biji buah

markisa konyal (passiflora ligularis)

60 56.08

f(x) = 1.908 x + 8.218

50 R² = 0.999824141264923 46.38

40 36.51
% inhibisi

30 27.3

17.92
20

10

0
0 5 10 15 20 25 30

Konsentrasi (μg/mL)

Gambar 24. Kurva Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Biji Buah Markisa
Konyal (Passiflora lingularis)

Lampiran 17. ( Lanjutan)

Contoh Perhitungan % inhibisi larutan ekstrak etanol biji buah markisa konyal :
Absorban Kontrol− Absorban Sampel
% Inhibisi = x 100 %
Absorban Kontrol
0,608−0,499
= x 100 %
0,608

76
 0,109
= x 100 %
0,608
= 17,92 %
Perhitungan IC50 larutan ektstrak etanol biji buah markisa konyal :
Dari persamaan % inhibisi didapatkan persamaan regresi linear,
dengan persamaan ini dapat dihitung konsentrasi larutan ekstrak etanol biji buah
markisa konyal yang memberikan inhibisi sebesar 50 % :
y = a + bx
50 = 8,218 + 1,908x
1,908x = 50 – 8,218
1,908x = 41,782
41,782
x=
1.908
= 21,8983 µg/mL
dimana :
x = Konsentrasi larutan ekstrak etanol biji buah markisa konyal
y = persen inhibisi

Lampiran 18. Kesetaraan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Biji Buah

Markisa Konyal Dengan Pembanding Asam Galat
Tabel 14. Kesetaraan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Biji Buah
Markisa Konyal dengan Pembanding Asam Galat
IC50 Ekstrak Etanol IC50 Asam Galat Kesetaraan Ekstrak
Biji Buah Markisa (µg/mL) Etanol Biji Buah
Konyal (µg/mL) Markisa Konyal

77
 dengan Asam Galat
(mg)
21,8983 2,0398 10,7355

Contoh Perhitungan Kesetaraan Aktivitas Antioksidan Ekstrak dengan Asam

Galat
Kesetaraan aktivitas antioksidan ekstrak dengan pembanding asam

galat dapat ditentukan dengan rumus :

IC 50 Ekstrak
mg Ekstrak etanol biji buah markisa konyal = x 1 mg Asam
IC 50 asam galat
Galat
21,8983 µg /mL
= x 1 mg
2,0398 µg /mL
= 10,7355 mg
Kesetaraan aktivitas antioksidan ekstrak etanol biji buah markisa konyal

dengan asam galat yaitu 1 : 10,7355 mg, artinya 1 mg asam galat setara dengan

10,7355 mg ekstrak etanol biji buah markisa konyal.

78