Machine Translated by Google

Sains Malaysiana 50(7)(2021): 1947-1957

http:// doi.org/ 10.17576/ jsm-2021-5007-10

Produksi Asam Docosahexaenoic, DHA Menggunakan Berbagai Cara Budidaya oleh

Aurantiochytrium sp. SW1
(Penghasilan Asid Dokosaheksaenoik, DHA menggunakan Mod Pengkulturan Berbeza oleh Aurantiochytrium sp.
SW1)

SYARIFFAH NURHIDAYAH SYED ABDUL RAHMAN, MOHD SAHAID KALIL & AIDIL ABDUL HAMID*

ABSTRAK
Thraustochytrid, seperti anggota genus Aurantiochytrium, kaya akan asam docosahexaenoic (DHA, C22:6n-3) dan mewakili sumber
asam lemak omega-3 yang menjanjikan yang memainkan peran penting dalam peningkatan kesehatan manusia, khususnya untuk
neurologis. dan fungsi visual. Berbagai cara budidaya (batch, fed-batch, dan repeat-batch) oleh Aurantiochytrium sp. SW1 dipelajari
untuk produksi asam docosahexaenoic (DHA) yang efektif . Pada penelitian ini, tiga mode fermentasi berbeda dilakukan dalam labu
kocok 1 L dengan volume kerja 500 mL, diinkubasi pada suhu 30 ºC dan 200 rpm. Budidaya batch secara signifikan melebihi mode
budidaya lainnya, mencapai lipid dan DHA maksimal
konsentrasi masing-masing 11,22 g/ L dan 5,87 g/ L, serta produktivitas DHA 0,061 g/L/jam. Konsentrasi lipid dan DHA dari proses
batch berulang menurun melalui siklus untuk ketiga jenis rasio penggantian (80, 90 dan 95%). Rata-rata persentase penurunan
konsentrasi DHA pada siklus satu dan siklus dua masing-masing sebesar 21,76 dan 32,52%. Namun, komposisi asam lemak lipid
yang diperoleh dalam siklus tersebut tetap konsisten dengan 16:0 dan DHA
menjadi asam lemak paling melimpah yang menunjukkan bahwa cara fermentasi ini sangat dapat digunakan untuk aplikasi industri.
Kata Kunci: Aurantiochytrium sp. SW1; asam docosahexaenoic; fed-batch; batch berulang

ABSTRAK
Thraustochytrid, seperti dalam kumpulan genus Aurantiochytrium adalah kaya dengan asam dokosaheksaenoik (DHA, C22:6n-3)
dan merupakan sumber asam lemak omega-3 yang berperan penting dalam memelihara kesehatan manusia terutama dalam fungsi
neuron dan penglihatan. Penghasilan DHA oleh Aurantiochytrium sp.
SW1 dalam mod pengkulturan berbeza (kultur kelompok, kultur suap-kelompok dan kultur kelompok ulangan) yang lebih efektif
diteliti. Semua mod pengkulturan ini dijalankan dalam kelalang goncangan 1 L, dengan 500 mL media penghasilan pada 30 ºC dan
200 rpm. Mod pengkulturan kultur kelompok lebih signifikan berbanding mod pengkulturan lain apabila menghasilkan kepekatan
lipid dan DHA tertinggi dengan nilai masing-masing 11.22 dan 5.87 g/ L, serta produktiviti DHA secara bersamaan 0.061 g/ L/ jam.
Dalam kultur kelompok ulangan (isipadu tertentu medium dituai dan baki kultur ditambah dengan sejumlah medium baru), kepekatan
lipid dan DHA yang didapat berkurang dari kitaran 1 hingga memasuki kitaran 2 bagi ketiga-tiga medium nisbah gantian (80, 90 dan
95%). Peran pengurangan bagi kepekatan DHA dalam kitaran 1 dan 2, masing-masing adalah 21.76 dan 32.52%. Namun, ketekalan
komposisi asid lemak pada nisbah 16:0 dan DHA merupakan asid lemak yang paling banyak diperoleh dalam dua kitaran
pengkulturan, menunjukkan bahawa mod penapaian bagi kultur kelompok ulangan berpotensi tinggi bagi kegunaan industri.

Kata kunci: Asid dokosaheksaenoik; Aurantiochytrium sp. SW1; kelompok-ulangan budaya; kultur suap-kelompok

PERKENALAN
Asam docosahexaenoic (DHA) adalah asam lemak tak jenuh ganda ÿ-3 yang diketahui penting untuk fungsi fisiologis
Machine Translated by Google
1948
dan kesehatan manusia. Hal ini secara alami ditemukan dalam
ASI dan telah terbukti secara klinis menjadi bahan penting
dalam perkembangan otak dan mata bayi terutama selama
trimester terakhir (Fan et al. 2007). Oleh karena itu, sangat
penting untuk pengembangan dan pemeliharaan fungsi kognitif
dan visual yang optimal (Makrides & Bhatia 2016).
Hal ini juga memiliki efek menguntungkan dalam menurunkan
kejadian penyakit kardiovaskular tertentu (Federova et al.
2011), hipertensi, arthritis, sklerosis, dan trombosis (Furlan et dan repeat batch terhadap DHA yang efektif
al. 2017). Sumber komersial utama minyak kaya DHA adalah
minyak ikan yang merupakan bahan utama pertumbuhan
industri akuakultur global. Pasar minyak ikan diperkirakan
akan menghasilkan $2,63 miliar pada tahun 2020 karena
sebagian besar digunakan sebagai bahan pakan dalam
berbagai aplikasi nutrisi hewan dan manusia, yang meliputi
pakan akuakultur, nutrisi hewan dan pakan hewan peliharaan,
obat-obatan, suplemen dan makanan fungsional (Barajas-solono et sehingga
Namun, tingginya biaya dalam proses ekstraksi dan
pemurnian serta masalah lingkungan seperti polusi kimia,
penurunan stok ikan, variasi musiman dalam komposisi minyak
ikan, bau dan rasa tidak enak yang terkait dengan penggunaan
sumber daya laut telah mendorong pencarian sumber alternatif
untuk bahan-bahan tersebut. minyak (Qu dkk. 2013). Oleh
karena itu, pemanfaatan industri mikroba berminyak khususnya
mikroalga yang mampu menghasilkan DHA telah mendapat
banyak perhatian sebagai alternatif DHA yang potensial karena
tingginya permintaan di pasar minyak ikan (Ren et al. 2014).
Di antara dinoflagellata laut heterotrofik, Crypthecodinium
cohnii telah diidentifikasi sebagai penghasil DHA yang produktif batch berulang untuk budidaya Aurantiochytrium sp. strain
dan diproduksi secara aktif oleh Martek Biosciences Corporation NYH-2 adalah 30% meningkatkan produksi biomassa dan
(Ratledge 2005). Optimalisasi berbagai parameter pertumbuhan
dan budidaya untuk meningkatkan produksi DHA oleh
thraustochytrids berminyak telah dipelajari secara ekstensif.
Namun, pengembangan cara fermentasi yang sesuai juga
penting untuk produksi DHA yang efektif dan efisien . Karena
fermentasi batch adalah mode fermentasi paling sederhana
yang dapat digunakan, sebagian besar penelitian yang
dipublikasikan terkait dengan proses ini.
Kami sebelumnya telah mengisolasi Aurantiochytrium
sp. SW1, suatu thraustochytrid heterotrofik, yang umumnya
ditemukan di lingkungan laut yang dapat menghasilkan
sejumlah besar lipid, hingga 55% dari berat sel kering (CDW)
dimana DHA (ÿ-3, C22:6) terdiri dari sebanyak 50% dari
kandungan total asam lemak (TFA) (Manikan et al. 2015).
Meskipun optimalisasi media budidaya untuk meningkatkan
produksi DHA untuk thraustochytrid ini telah dipelajari secara
ekstensif dalam fermentasi batch (Manikan et al. 2015, 2014;
Nazir
dkk. 2018), cara fermentasi ini memiliki keterbatasan terutama
dalam menyediakan kebutuhan nutrisi dan fisiokimia spesifik
yang berbeda untuk pertumbuhan dan DHA.
fase produksi, umumnya menghasilkan konsentrasi biomassa
yang rendah pada akhir fase pertumbuhan. Hal ini dapat
diatasi melalui sistem budidaya fed batch yang memungkinkan
nutrisi tertentu diberikan selama proses berlangsung.
Saat ini, dampak dari cara fermentasi lain seperti fed-batch
produksi Aurantiochytrium sp. SW1 belum dinilai secara
menyeluruh. Secara umum, proses fermentasi fed-batch hemat
biaya karena nutrisi tambahan diberikan ke reaktor sementara
sel dan produk tetap berada di dalam reaktor hingga akhir
fermentasi (Lee et al.
1999). Oleh karena itu, strategi budidaya fed batch yang
optimal untuk Aurantiochytrium sp. SW1 belum terbentuk,
al. .2016).sistem budidaya untuk spesies ini perlu dikembangkan
lebih lanjut.
Sebaliknya, proses batch berulang diketahui dapat
meningkatkan produktivitas fermentasi mikroba karena
menghemat waktu pembersihan, sterilisasi, kultur benih, dan
proses inokulasi di antara setiap siklus fermentasi batch (Bae
dkk. 2004; Shakeri dkk. .2007). Hal ini dibuktikan dengan hasil
yang diperoleh Giulia (2016) dimana produktivitas total
triasilgliserida (TAGs) yang lebih tinggi pada budidaya
Nannochloropsis sp. dicapai dibandingkan dengan proses
batch. Barajas-solono dkk. (2016) juga menemukan bahwa
dengan menerapkan proses kultur semi kontinyu atau proses
asam lemak. Cara fermentasi ini melibatkan pemanenan
persentase tertentu dari kultur hingga 95% (v/v) dan diganti
dengan media segar dengan volume yang sama pada akhir
fermentasi batch. Oleh karena itu, kultur yang tersisa berfungsi
sebagai kultur benih untuk proses fermentasi selanjutnya.
Cara fermentasi ini telah diterapkan dalam berbagai proses
fermentasi untuk menghasilkan produk biokimia yang berbeda,
seperti asam asetat (Ito et al. 1991), erythritol (Koh et al.
2003), asam amino (Hermann 2003) dan asam sitrat (Moeller
et al. 2003). al.2010).
Dalam studi ini, percobaan difokuskan pada efek fermentasi
batch, fed-batch dan batch berulang terhadap produksi DHA
dan lipid oleh Aurantiochytrium sp.
SW1. Konsistensi komposisi asam lemak lipid dari setiap
siklus budidaya berulang juga ditentukan. Hasil dan
produktivitas biomassa, lipid dan DHA sebagai respons
terhadap berbagai mode fermentasi juga diselidiki.
Machine Translated by Google

1949

BAHAN DAN METODE labu berisi sisa kultur. Langkah ini diulangi hingga 2 siklus
selesai.
MIKROORGANISME

Aurantiochytrium sp. SW1 (GenBank: KF500513) disediakan PENENTUAN BERAT SEL KERING
oleh Laboratorium Fisiologi Mikroba, Departemen Ilmu Biologi
Kultur (30 mL) dipanen dengan sentrifugasi pada 4000 × g
dan Bioteknologi, Universiti Kebangsaan Malaysia. selama 10 menit. Pelet yang diperoleh kemudian dicuci dengan
Mikroorganisme ini dipelihara pada agar nutrisi air laut (SNA)
50 mL air suling steril dan suspensi kemudian disentrifugasi
sebagai kultur miring yang mengandung 28 g/L nutrisi agar dan
kembali. Pelet kemudian dikeringkan dalam oven pada suhu
17,5 g/L air laut buatan dengan salinitas 50%.
70-90 °C selama 24 jam dan ditimbang. Biomassa yang
diperoleh dinyatakan sebagai gram sel kering per liter media pertumbuhan.
Karena mikroorganisme mengakumulasi sejumlah besar lipid,
KONDISI BUDAYA
konsentrasi biomassa tanpa lipid digunakan sebagai representasi
Kultur benih disiapkan dengan menginokulasi 200 mL kaldu pertumbuhan yang lebih akurat dengan mengurangkan nilai
benih dengan strip agar miring SNA yang mengandung sekitar konsentrasi lipid (g/L) dari konsentrasi biomassa yang diperoleh.
sepuluh koloni sel mikroalga berumur 48 jam dalam labu
Erlenmeyer 1 L. Kultur benih kemudian diinkubasi pada suhu
30 ° C selama 48 jam dengan kecepatan pengadukan 200 rpm. EKSTRAKSI LIPID DAN ANALISIS ASAM LEMAK
Media yang digunakan dalam kultur benih mengandung 100 g/
Ekstraksi lipid dilakukan menggunakan kloroform-metanol (2:1,
L fruktosa, 2 g/L yeast ekstrak, 8 g/L monosodium glutamat (MSG)
v/v), seperti dijelaskan oleh Folch et al. (1957). Ekstrak diuapkan
dan 16,45 g/L garam laut (salinitas 47%) (Manikan et al.
pada suhu kamar dan dikeringkan dalam desikator vakum
2014, 2015). Inokulum 10% (v/v) diterapkan untuk inisiasi
hingga berat konstan. Komposisi asam lemak sampel ditentukan
fermentasi berikutnya. Ketiga cara budidaya yang berbeda
sebagai metil ester asam lemak (FAMEs) dengan kromatografi
(batch, fed-batch, dan repeat-batch) dilakukan dalam labu
gas (HP 5890, USA) yang dilengkapi dengan kolom kapiler
Erlenmeyer 1 L dengan volume kerja 200 mL. Media yang
(BPX 70, 30 m, 0,32 µm) pada 200
digunakan untuk budidaya mengandung 100 g/L fruktosa, 2 g/L
°C sebagai pendeteksi suhu menggunakan helium sebagai gas
ekstrak ragi, 8 g/L monosodium glutamat (MSG) dan 47%
pembawa dengan laju aliran 40 cm3 menit-1. FAME dibuat
garam laut. Untuk fermentasi batch, kultur diinkubasi selama
dengan melarutkan 0,05 g sampel dalam 0,95 mL heksana dan
120 jam pada suhu 30 °C dengan kecepatan pengadukan 200
campuran tersebut ditambahkan ke 0,05 mL natrium metoksida 1M.
rpm. Kultur dilakukan dalam rangkap dua dengan kultur benih
yang identik.
PENENTUAN FRUTOSA SISA
Budidaya fed-batch dilakukan dengan menggunakan dua
strategi pemberian pakan yang berbeda. Pada strategi Pengukuran konsentrasi sisa fruktosa ditentukan dengan
pemberian pakan 1, budidaya dilakukan dengan konsentrasi menggunakan Metode Kolorimetri Dinitrosalicyclic (DNS)
awal fruktosa 35 g/L. Fruktosa dimasukkan ke dalam kultur (Garriga et al. 2017). Supernatan yang disentrifugasi dari
dengan interval 24 jam untuk mencapai konsentrasi akhir 100 masing-masing sampel diencerkan secara tepat dalam tabung
g/L. Untuk strategi pemberian pakan 2, budidaya dilakukan Falcoon dengan DI H2 O hingga konsentrasi yang diharapkan
dengan konsentrasi awal fruktosa 100 g/L dan fruktosa sebesar 1 g/L gula. Sebanyak 3 mL sampel encer yang
dimasukkan ke dalam kultur dengan interval 48 jam. Kedua diperoleh ditambahkan dengan 3 mL reagen DNS dan
budidaya dengan strategi pemberian pakan berbeda dilakukan dipanaskan pada suhu 90 ºC selama 5-15 menit. Solusinya
selama 120 jam. ditambahkan dengan 1 mL natrium kalium tartrat dan OD pada 575 nm ditentukan
Sementara itu, budidaya batch berulang dimulai dengan
kondisi budidaya seperti yang digunakan dalam budidaya batch. ANALISIS STATISTIK
Kultur dipanen pada berbagai volume panen (95%, 90%, dan
Analisis statistik dilakukan dengan analisis varians satu arah
80% dari total volume kultur) pada 96 jam budidaya. Siklus
(one-way ANOVA) menggunakan SigmaStat 2.03 (SPSS,
budidaya berikutnya kemudian dimulai dengan memindahkan
Chicago, IL, USA). Jika terdapat perbedaan yang signifikan
media segar (95%, 90%, dan 80% dari total volume budidaya)
(P<0,05), semua perbandingan ganda berpasangan antara
ke
masing-masing perlakuan dilakukan dengan menggunakan alat Tukey.
tes.
Machine Translated by Google
1950
HASIL DAN PEMBAHASAN
PERTUMBUHAN, PRODUKSI LIPID DAN DHA
Aurantiochytrium sp. SW1 DENGAN BUDIDAYA BATCH
Fermentasi batch terbukti menjadi mode budidaya yang
efektif untuk budidaya Aurantiochytrium sp. SW1 sebagai
konsentrasi biomassa, kandungan lipid, kandungan DHA
dan produktivitas DHA yang dicapai terbukti serupa dengan
penelitian yang dilaporkan sebelumnya menggunakan
Schizochytrium dan spesies Aurantiochytrium lainnya
(Manikan et al. 2014, 2015; Nazir et al. 2018; Qu et al.
2013) . Seperti diilustrasikan pada Gambar 1, pertumbuhan
terjadi hingga 48 jam di mana konsentrasi sisa fruktosa
menurun secara signifikan seiring dengan peningkatan
konsentrasi biomassa tanpa lemak hingga 48 jam budidaya,
mencapai 11,1 g/L. Konsentrasi biomassa tanpa lemak yang
diperoleh serupa dengan yang dicapai oleh Valcenir dkk.
(2016) dimana hingga 12,3 g/L biomassa tanpa lipid diamati ketikamencapai
PRA-276 ditanam dalam budidaya batch. Profil pertumbuhan
serupa juga dilaporkan oleh Gao dkk. (2013) dimana
pertumbuhan aktif Aurantiochytrium sp. SD116 dihentikan
pada 48 jam budidaya dan dilanjutkan dengan fase stasioner
hingga 96 jam budidaya.
Sepanjang periode budidaya 120 jam, SW1 ditemukan
mengakumulasi lipid pada tahap awal fase log hingga fase
diam akhir. Konsentrasi dan kandungan lipid meningkat dari
1,12 g lipid/L dan 21,37% (g/g biomassa) pada budidaya 24
jam menjadi 11,22 g lipid/L dan 48,91%
25
20
15
10
m
d
,assa,p pa
H
Anio )iiD
/g B
&
T
L(
5
0 0
0 12
Lipid g/L DHA g/L
GAMBAR 1. Profil waktu pertumbuhan, produksi lipid dan DHA oleh
Aurantiochytrium sp. SW1 dalam waktu 120 jam budidaya batch
masing-masing pada 96 jam. Hal ini menunjukkan bahwa, Aurantiochytrium
sp. SW1 memiliki profil akumulasi lipid yang mirip dengan
Schizochytrium sp. HX-308 yang dimulai pada tahap awal
pertumbuhan tetapi dengan kandungan lipid lebih rendah
yaitu 10,7 g/L (Ren et al. 2009). Pengamatan ini berbeda
dengan apa yang telah dilakukan pada jamur berminyak
dimana akumulasi lipid dalam jumlah besar hanya dimulai
selama fase diam (Wynn et. al 1999). Hal ini mungkin
disebabkan oleh keterlibatan dua jalur biosintesis lipid pada
mikroalga oleaginous, yaitu poliketida sintase (PKS), dan
sintase asam lemak (FAS), sedangkan hanya jalur kedua
yang terdapat pada jamur oleaginous (Shuib dkk. 2018).
Biosintesis lipid melalui jalur FAS diketahui hanya dimulai
setelah kehabisan nitrogen, sehingga peningkatan kandungan
lipid dalam jamur berminyak hanya terjadi bersamaan
dengan fase diam (Ratledge 2005).
Konsentrasi DHA meningkat pada fase awal budidaya,
maksimum
Aurantiochytrium sp.pada
ATCCumur 96 jam, mencapai 6,0 g/L
DHA (53,44% dari total asam lemak) dengan produktivitas
DHA tertinggi sebesar 0,063 g/L/jam. Aurantiochytrium sp.
SW1 menunjukkan DHA serupa
pola akumulasi dengan yang dilaporkan oleh Chang et al.
(2013) dan Yu dkk. (2015) dari Schizochytrium sp. S31 dan
Aurantiochytrium sp. YLH70 masing-masing ditanam pada
gliserol dan sirup jagung fruktosa tinggi. Temuan ini juga
menunjukkan bahwa fruktosa dimanfaatkan secara efisien
oleh SW1 dimana hingga 83,0% fruktosa digunakan
sepanjang fase pertumbuhan dan akumulasi lipid.
120
100
80
asuodtkisue/r)gR
F
L(
60
40
20
24 36 48 60 72 96 120
Waktu/jam
Biomassa g/L Biomassa tanpa lipid g/L Sisa fruktosa g/L
Machine Translated by Google

1951

PROSES BUDIDAYA FED-BATCH untuk pertumbuhan sel, akumulasi lipid dan DHA (Qu et
Budidaya fed-batch dilakukan dalam labu Erlenmeyer 1 L al.2013).
untuk mengevaluasi efek dari strategi pemberian fruktosa Respon yang berbeda terlihat ketika strategi pemberian
yang berbeda terhadap produksi lipid dan DHA oleh pakan 2 dilakukan, dimana peningkatan pertumbuhan
Aurantiochytrium sp. SW1. Konsentrasi berat kering sel, terlihat jelas karena pencapaian maksimum biomassa
biomassa tanpa lipid, sisa fruktosa, DHA dan kandungan tanpa lemak adalah 44,16% dan 37,24% lebih tinggi
lipid total dalam 120 jam fermentasi dianalisis secara dibandingkan dengan yang diamati pada strategi pemberian
berkala. Gambar 2 menunjukkan pertumbuhan, lipid dan DHA pakan 1 dan budidaya batch. Berat kering sel akhir,
profil produksi untuk strategi pemberian pakan 1 dan 2. kandungan lipid total dan kandungan DHA pada strategi
Ketika strategi pemberian pakan 1 (budidaya dilakukan pemberian pakan 2 adalah 30,56 g/L, 39,46% DCW ( 12,06
dengan konsentrasi awal fruktosa 35 g/L dan diberi fruktosa g/L lipid) dan 50,61% TFA ( 6,1 g/L DHA), sekitar 60,3 %,
dengan interval 24 jam) digunakan, laju pertumbuhan yang 38,1%, dan 22% peningkatan dibandingkan dengan strategi
diamati lebih lambat dibandingkan dengan kultur batch. . pemberian pakan 1. Perbedaan biomassa, lipid dan DHA
Konsentrasi biomassa tanpa lemak yang dicapai pada 24 konsentrasi yang dicapai dalam strategi pemberian pakan
dan 48 jam adalah 2,8 dan 7,0 g/L, masing-masing 32,0% fed-batch 1 dan 2 signifikan (P<0,05) dengan nilai p masing-
dan 36,9% lebih rendah dibandingkan budidaya batch. masing 0,031, 0,015 dan 0,017. Tabel 1 merangkum hasil
Konsentrasi maksimum lipid, DHA , dan biomassa tanpa dan produktivitas berat sel kering, lipid dan DHA
lipid (berat biomassa tanpa kandungan lipid) juga lebih konsentrasi untuk budidaya batch dan strategi fed-batch 1
rendah 29,3%, 19,5%, dan 21,4% dibandingkan dengan dan 2 Aurantiochytrium sp. SW1.
yang dicapai pada budidaya batch. Hal ini dapat disebabkan
oleh rendahnya konsentrasi glukosa awal dan sisa selama
proses fermentasi sehingga mengakibatkan terbatasnya pasokan sumber karbon

35 35
A.

30 30

25 25

20 20 ostknuo/r)gK
isaratnse F
L(

15 15

10 10
A
,assaam
d H
,pdio aiD
npi/pi)g B
&
Li(tl

5 5

0 0
0 24 48 72 96 120
Waktu/jam

Lipid g/L DHA g/L Biomassa g/L Biomassa tanpa lipid g/L Konsentrasi Fruktosa g/L

B.. 35 100

30
80
25

60
20
/r)gK
ostknuo
isaratnse F
L(

15
40
A
,assaa,m
d H
n
,pdio iD
ia
pi/p)g B
Li(tl

10
20
5

0 0
0 24 48 72 96 120
Waktu/jam

Lipid g/L DHA g/L Biomassa g/L Biomassa tanpa lipid g/L Konsentrasi Fruktosa g/L

GAMBAR 2. Perjalanan waktu produksi biomassa, lipid, DHA dan biomassa tanpa
lipid dalam budidaya fed-batch oleh Aurantiochytrium sp. SW1 menggunakan mode
pemberian waktu yang berbeda. a) strategi pemberian pakan 1, b) strategi pemberian pakan
2. Panah yang digunakan: waktu pemberian fruktosa
Machine Translated by Google
1952
TABEL 1. Hasil dan produktivitas biomassa, lipid dan DHA
Parameter respons Kelompok
DCW (g/L/jam) 0,19
Lipid (g/L/jam) 0,09
DHA (g/L/jam) 0,05
Hasil x/ 0,33
dtk
Menghasilkan 0,16
L/dtk
Menghasilkan 0,09
DHA/dtk
Oleh karena itu, meskipun konsentrasi biomassa dan
produktivitas yang lebih tinggi dicapai pada budidaya yang
dilengkapi dengan kandungan fruktosa yang lebih tinggi pada
strategi pemberian pakan fed-batch 2, hal ini tidak menghasilkan
peningkatan hasil dan produktivitas lipid dan DHA . Tidak ada
perbaikan dalam hal produksi lipid dan DHA dibandingkan
dengan budidaya batch yang diamati seperti yang ditunjukkan
oleh tingkat produktivitas lipid dan DHA yang sama dan hasil
yang lebih rendah untuk massa sel dan pembentukan produk
(Tabel 1). Hal ini menunjukkan bahwa kandungan fruktosa
yang lebih tinggi digunakan untuk pertumbuhan sel daripada
berkontribusi terhadap akumulasi lipid. Diketahui bahwa
pasokan sumber karbon yang berlebihan dan kekurangan
nitrogen sangat penting bagi akumulasi lipid dalam mikroorganisme berminyak (Wong dkk. 2008).
Namun peningkatan konsentrasi fruktosa hingga konsentrasi
tinggi tertentu tidak efektif untuk produksi lipid dan DHA . Hal
ini terbukti disebabkan oleh efek penghambatan konsentrasi
fruktosa tinggi melalui represi katabolit. Fruktosa adalah energi
karbon yang dapat dimetabolisme dengan cepat yang akan
meningkatkan konsentrasi ATP intraseluler , menyebabkan
represi biosintesis enzim dan menghasilkan metabolisme
sumber energi yang lebih lambat (Yamane & Shimizu 1984).
Hasil ini sejalan dengan apa yang dilaporkan oleh Wong et al.
(2008) dimana hasil DHA dari Aurantiochytrium mangrovei MP2
tidak meningkat secara linier pada konsentrasi sumber karbon
yang tinggi.
Laporan lain oleh Ganuza dkk. (2008) menunjukkan bahwa
dengan peningkatan konsentrasi glukosa awal dari 2 menjadi
6 g/L maka berat sel kering Schizochytrium sp. secara dramatis
Fed-batch (Strategi Fed-batch (Strategi pemberian makan
pemberian makan 1) 2)
0,16 0,25
0,07 0,10
0,04 0,05
0,29 0,28
0,12 0,11
0,07 0,06
meningkat dalam 3 hari pertama budidaya tetapi tidak
berpengaruh pada hasil lipid dan DHA .
Fed-batch dengan feeding strategi 1 menghasilkan
rendemen dan produktivitas berat kering sel, lipid, dan DHA
yang paling rendah yang mungkin disebabkan oleh konsentrasi
fruktosa yang tetap rendah selama fermentasi. Namun berbeda
dengan percobaan batch, fed-batch, dan fed-batch berulang
yang dilakukan oleh Schizochytrium sp. (Qu dkk. 2013).
Hasil akhir menunjukkan bahwa proses fermentasi fed-batch dalam strategi feed-back
feeding memiliki biomassa, lipid, produksi DHA , dan produktivitas DHA tertinggi di
antara berbagai cara budidaya. Berdasarkan analisis statistik menggunakan uji Tukey
( ANOVA satu arah), tidak terdapat perbedaan signifikan (P>0,05) antara strategi
pemberian pakan batch dan kedua pada budidaya fed-batch, dimana rata-rata nilai p
untuk biomassa, lipid, dan DHA
konsentrasi masing-masing adalah 0,076, 0,104, dan 0,110.
Karena data menunjukkan tidak ada perbaikan yang dicapai
dalam strategi fed-batch, percobaan lebih lanjut dilakukan untuk
mengevaluasi dampak budidaya batch berulang terhadap
produksi lipid dan DHA oleh Aurantiochytrium sp. SW1.
PROSES BUDIDAYA BATCH BERULANG DAN
PERBEDAAN MODE FERMENTASI
Fermentasi batch berulang merupakan strategi efisien yang
dicapai dengan mengganti bagian tertentu dari kultur matang
dengan media segar dan cara ini merupakan strategi efisien
untuk meningkatkan produktivitas karena menghemat waktu.
Machine Translated by Google

1953

untuk kultur benih, inokulasi, pembersihan dan sterilisasi persentase 90% dan 80% dipekerjakan dibandingkan dengan
fermentor di antara setiap siklus fermentasi (Zhao et al. 95%. Berdasarkan hasil tersebut, rasio penggantian 90%
2011). Budidaya berulang dengan total volume panen yang adalah yang terbaik untuk proses batch berulang karena
berbeda (95%, 90%, dan 80% v/v) dilakukan dengan konsentrasi DHA dan produktivitas DHA tertinggi masing-
pemanenan dengan interval 96 jam (dua siklus), masing- masing tercapai, yaitu 15,04 g/L dan 0,054 g/L/jam (Tabel 2).
masing diikuti dengan penggantian selanjutnya dengan media segar.
Hasil ini sesuai dengan yang dilaporkan oleh Qu et al. (2013),
Waktu penggantian 96 jam digunakan sebagai produksi lipid dimana kandungan akhir DHA dan DHA
tertinggi dan DHA dicapai pada 96 jam dalam mode fermentasi produktivitas Schizochytrium sp. adalah yang tertinggi pada
batch. rasio penggantian 90% dan 80% dibandingkan dengan 95%.
Tabel 2 menunjukkan pengaruh volume panen yang Barajas-Solano dkk. (2016) juga melaporkan bahwa untuk
berbeda terhadap pertumbuhan, produksi lipid, dan DHA menjaga kestabilan produksi kultur Aurantiochytrium
pada akhir siklus kedua. Hasil menunjukkan bahwa seiring sp. dengan menggunakan budidaya fed-batch berulang,
dengan penurunan volume pemanenan, berat kering sel akhir volume budidaya antara 75% dan 90% harus dibuang setiap
dan kandungan lipid total akan lebih tinggi. Produksi dan 2-3 hari selama total waktu 12 hari.
produktivitas DHA akhir juga lebih tinggi ketika volume panen

TABEL 2. Pengaruh perbedaan volume panen terhadap pertumbuhan, lipid, dan produksi DHA oleh Aurantiochytrium sp. SW1 dalam
fermentasi batch berulang

Volume panen DHA Produktivitas DHA

Berat kering sel (g/L) Total lipid (g/L)
(%) (g/L) (g/L/jam)
95 62,80 ± 1,83 26,06 ± 1,15 11,95 ± 2,51 0,041 ± 0,18

90 67,62 ± 1,35 29,87 ± 2,13 15,04 ± 1,76 0,052 ± 0,20

80 67,93 ± 0,52 30,28 ± 1,27 14,78 ± 1,97 0,051 ± 0,14

mencapai 96 jam dan sudah berada pada fase stasioner awal

Karakteristik pertumbuhan dan fermentasi siklus
fermentasi pertama dan kedua dari proses batch berulang
SW1 dengan volume panen 90% ditunjukkan pada Gambar
3. Seperti ditunjukkan pada Gambar 3, semua parameter
termasuk berat sel kering, konsentrasi lipid, DHA
konsentrasi, persentase lipid dan persentase DHA menurun
sepanjang siklus. Dibandingkan dengan kultur awal (batch),
terjadi penurunan konsentrasi DHA sebesar 15,32% pada
siklus pertama dan penurunan selanjutnya sebesar 17,58%
terjadi pada siklus kedua. Hal ini mungkin disebabkan oleh
pengaruh usia budaya yang dipertahankan untuk memulai
siklus berikutnya
ketika siklus pertama dan kedua dimulai.
Seperti ditunjukkan pada Tabel 3, komposisi asam
lemak lipid yang dihasilkan dari dua siklus proses fermentasi
ini terbukti konsisten, dengan 16:0 dan DHA menjadi yang
paling melimpah. Qu dkk. (2013) juga melaporkan pengamatan
serupa dimana kedua asam lemak dominan terdapat dalam
lipid yang dihasilkan oleh Schizochytrium sp. dalam siklus
proses fed-batch yang berulang. Konsistensi komposisi lipid
dalam setiap siklus menunjukkan potensi proses batch
berulang dibandingkan proses fed-batch yang memungkinkan
produksi selanjutnya segera dilakukan.
Machine Translated by Google

1954

30 60

25 50

20 40

15 30
)iD
Hi/pg
Ado
,assam B
&
Li(l

pD
i%
e
sdr)H
esatneA Pi(l
&
10 20

5 10

0 0
Kelompok Siklus 1 Siklus 2

Biomassa g/L Lipid g/L DHA g/L DHA% Lipid%

GAMBAR 3. Konsentrasi biomassa, lipid dan DHA dari kultur batch berulang
Aurantiochytrium SW1 dengan volume panen 90%

TABEL 3. Komposisi asam lemak lipid Aurantiochytrium sp. SW1 diproduksi pada siklus 1 dan 2 dari fermentasi batch berulang

Persentase asam lemak (%)

Komposisi lipid
Siklus 0 Siklus 1 Siklus 2

Bab 14 3.515 4.117 4.505

Ki 14:1 0,246 0,291 0,073

Bab 16 40.504 42.482 45.012

Ki 17:1 0,131 0,166 0,200

Bab 18 1.198 1.175 2.145

Bab 20:4n6 (AA) 0,620 0,629 0,561

Pasal 20:5n3 (EPA) 0,409 0,507 0,477

Ki 22:2 0,978 0,504 0,330

C 22:6n3 (DHA) 47.819 44.751 39.957

Perbandingan keseluruhan efisiensi tiga mode proses fermentasi adalah strategi budidaya yang paling disukai dibandingkan dengan
yang berbeda untuk produksi lipid kaya DHA Aurantiochytrium sp. dua mode lain yang dilakukan sebagaimana diuraikan dalam penelitian ini.
SW1 ditunjukkan pada Tabel 4. Hasil menunjukkan bahwa proses batch Hal ini disebabkan oleh dua alasan: pertama, tidak ada perbedaan
signifikan (P<0,05) yang ditemukan antara batch dan fed-batch.
Machine Translated by Google

1955

budidaya dan kedua, nilai hasil DHA terhadap total fruktosa bahwa budidaya batch (0,06) lebih tinggi dibandingkan strategi
yang dikonsumsi (Y)/(g/L fruktosa yang digunakan) menunjukkan budidaya fed-batch 2 (0,04).

TABEL 4. Parameter respon berbagai cara budidaya untuk produksi DHA oleh Aurantiochytrium sp. SW1

Waktu budidaya Berat kering sel (g/

Modus budidaya Jumlah lipid (g/L) DHA (g/L) Produktivitas DHA (g/L/jam)
(H) L)

Kelompok 96 22,94 ± 0,96 11,22 ± 1,45 6,0 ± 0,75 0,063 ± 0,05

Umpan-batch
96 28.11 ± 1.13 11,04 ± 2,14 6,17 ± 0,82 0,064 ± 0,07
(strategi 1)

*Batch berulang
288 67,62 ± 1,35 29,87 ± 2,13 15,04 ± 1,76 0,052 ± 0,20
(90%)

*Data mewakili jumlah total setiap parameter yang dipanen pada akhir budidaya awal (batch), siklus 1 dan 2

KESIMPULAN Barajas-solono, AF, Yoshida, M. & Watanabe, MM 2016.

Hasil percobaan komparatif lipid dan DHA
produksi oleh Aurantiochytrium sp. SW1 dengan berbagai
modus strategi budidaya disajikan dalam makalah ini.
Hal ini menunjukkan bahwa budidaya batch adalah yang paling
efisien dan cocok untuk produksi lipid dan DHA . Tidak ada
perbedaan yang signifikan dalam konsentrasi lipid, DHA
konsentrasi, dan produktivitas DHA dicapai ketika proses fed-
batch dengan dua strategi pemberian pakan berbeda dilakukan.
Budidaya secara berulang-ulang tidak cocok karena
menunjukkan produktivitas DHA terendah meskipun konsentrasi
DHA tertinggi tercapai.
Namun, konsistensi hasil DHA dan komposisi asam lemak
lipid yang dihasilkan pada setiap siklus fermentasi menunjukkan
potensi penerapannya dalam produksi lipid kaya DHA dalam
skala besar.
Peningkatan produksi biomassa dan DHA pada kultur semi kontinyu
Aurantiochytrium sp NYH-2.
Transaksi Teknik Kimia 49: 235-240.
Chang, G., Luo, Z., Gu, S., Wu, Q., Chang, M. & Wang, X.
2013. Pergeseran asam lemak dan perubahan aktivitas metabolisme
Schizochytrium sp. S31 dikultur pada gliserol. Teknologi Sumberdaya
Hayati 142: 255-260.
Fan, KW, Jiang, Y., Fann, YW & Chen, F. 2007. Karakterisasi lipid mangrove
thraustochytrid - Schizochytrium mangrovei. Jurnal Kimia Pertanian
dan Pangan 55(8): 2906-2910.
Federova, D., Marone, PA, Bailey-Hall, E. & Ryan, AS
2011. Evaluasi keamanan minyak alga dari Schizochytrium
sp. Jurnal Toksikologi Makanan dan Kimia 49(1): 70-77.
Folch, J., Lees, M. & Sloane-Stanley, GHA 1957. Sebuah metode sederhana
untuk isolasi dan pemurnian total lipid dari jaringan hewan. Jurnal Kimia
Biologi 226(1): 497-509.

UCAPAN TERIMA KASIH

Kami berterima kasih kepada Universiti Kebangsaan Malaysia yang
mendanai penelitian ini berdasarkan hibah GUP-2016-054.
REFERENSI
Bae, SM, Park, YC, Lee, TH, Kweon, DH & Choi, JH 2004. Produksi xylitol
oleh Saccharomyces cerevisiae rekombinan yang mengandung gen
xilosa reduktase dalam fed-batch berulang dan fermentasi daur ulang
sel.
Teknologi Enzim dan Mikroba 35(6-7): 545-554.
Furlan, VJM, Maus, V., Batista, I. & Bandarra, NM 2017.
Produksi asam docosahexaenoic oleh Aurantiochytrium sp. ATCC
PRA-276. Jurnal Mikrobiologi Brasil
48(2): 359-365.
Ganuza, E., Anderson, AJ & Ratledge, C. 2008. Budidaya Schizochytrium
sp dengan kepadatan sel tinggi . dalam amonium/
sistem fed-batch pH-auxostat. Jurnal Surat Bioteknologi 30(9):
1559-1564.
Gao, M., Song, X., Feng, Y., Li, W. & Cui, Q. 2013. Isolasi dan karakterisasi
spesies Aurantiochytrium : Produksi asam docosahexaenoic (DHA)
yang tinggi oleh yang baru
Machine Translated by Google
1956
mikrolaga terisolasi, Aurantiochytrium sp. SD116. Jurnal Sains Oleo
62(3): 143-151.
Garriga, M., Almaraz, M. & Marchiaro, A. 2017. Penentuan gula
pereduksi pada ekstrak Undaria pinnatifida
(harvey) alga dengan spektrofotometri UV-visibel (metode DNS).
Teknologi Ilmu Pendidikan Energi 3: 173-
179.
Giulia, B. 2016. Produksi minyak secara batch dan berulang oleh
mikroalga. Universitas Wageningen, Belanda. Ph.D.
Tesis (Tidak Diterbitkan).
Hermann, T. 2003. Produksi industri asam amino oleh bakteri
coryneform. Jurnal Bioteknologi 104(1-3): 155-172.
Ito, T., Sota, H., Honda, H., Shimizu, K. & Kobayashi, T. 1991.
Produksi asam asetat yang efisien dengan fermentasi fed-batch
berulang kali menggunakan dua fermentor. Mikrobiologi dan
Bioteknologi Terapan 36: 295-299.
Koh, ES, Lee, TH, Lee, DY, Kim, HJ, Ryu, YW & Seo, JH 2003.
Peningkatan produksi eritritol oleh mutan osmofilik Candida
mannolie . Surat Bioteknologi 25: 2103-2105.
Lee, J., Lee, SY, Park, S. & Middleberg, APJ 1999. Pengendalian
fermentasi fed-batch. Kemajuan Bioteknologi 17(1): 29-48.
Makrides, M. & Bhatia, J. 2016. Peran asam docosahexaenoic dalam
1.000 hari pertama. Sejarah Nutrisi & Metabolisme 69(1): 8-21.
Manikan, V., Kalil, MS & Hamid, AA 2015. Optimalisasi permukaan
respons media kultur untuk meningkatkan produksi asam
docosahexaenoic oleh thraustochytrid Malaysia. Laporan Ilmiah
5(8611): 1-8.
Manikan, V., Kalil, MS, Isa, MHM & Hamid, AA 2014.
Peningkatan prediksi untuk optimasi medium menggunakan skrining
faktorial untuk produksi asam docosahexaenoic oleh Schizochytrium
sp. SW1. Jurnal Ilmu Terapan Amerika 11(3): 462-472.
Moeller, L., Grunberg, M., Zehnsdorf, A., Strehlitz, B. & Bley, T. 2010.
Kontrol online biosensor produksi asam sitrat dari glukosa oleh
Yarrowia lipolytica menggunakan fermentasi semi kontinyu. Teknik
dalam Ilmu Hayati 10(4): 311-
320.
Nazir, Y., Shuib, S., Kalil, MS, Lagu, Y. & Hamid, AA 2018.
Optimalisasi kondisi kultur untuk meningkatkan pertumbuhan,
produksi lipid dan asam docosahexaenoic (DHA) Aurantiochytrium
SW1 dengan metodologi permukaan respons.
Laporan Ilmiah 8(8909): 1-12.
Qu, L., Ren, LJ, Sun, GN, Ji, XJ, Nie, ZK & Huang, H. 2013. Proses
fermentasi batch, fed-batch dan fed-batch berulang dari
thraustochytrid laut Schizochytrium sp . untuk memproduksi asam
docosahexaenoic.
Rekayasa Bioproses dan Biosistem 13(1): 966-974.
Ratledge, C. 2005. Mikroorganisme biosintesis asam lemak digunakan
untuk produksi minyak sel tunggal. Biokimia
86(11): 807-815.
Ren, LJ, Sun, LN, Zhuang, XY, Qu, L., Ji, XJ & Huang, H. 2014.
Regulasi produksi asam docosahexaenoic oleh Schizochytrium sp.:
efek penambahan nitrogen.
Rekayasa Bioproses dan Biosistem 37: 865-872.
Ren, LJ, Huang, H., Xiao, AH, Lian, M., Jin, LJ
& Ji, XJ 2009. Peningkatan produksi asam docosahexaenoic
dengan memperkuat pasokan asetil-KoA dan NADPH di
Schizochytrium sp. HX-308. Rekayasa Bioproses dan Biosistem
32(6): 837-843.
Shakeri, M., Sugano, Y. & Shoda, M. 2007. Produksi peroksidase
penghilang warna pewarna (rDyP) dari substrat kompleks melalui
kultur batch berulang dan fed-batch dari Aspergillus oryzae
rekombinan. Jurnal Biosains dan Bioteknologi 103(2): 129-134.
Shuib, S., Ibrahim, I., Mackeen, MM, Ratledge, C. & Hamid, AA 2018.
Bukti pertama kompleks multienzim enzim jalur biosintesis lipid di
Cunninghamella bainieri. Laporan Ilmiah 8(3077): 1-10.
Valcenir, JMF, Mendes, F., Victor, M., Irineu, B. & Narcisa, MB 2016.
Produksi asam docosahexaenoic oleh Aurantiochytrium sp. ATCC
PRA-276. Jurnal Mikrobiologi Brasil 48(2): 359-365.
Wong, MKM, Tsui, CKM, Au, DWT & Vrijmoed, LLP 2008. Produksi
asam docosahexaenoic dan ultra-struktur thraustochytrid
Aurantiochytrium mangrovei MP2 di bawah konsentrasi glukosa
tinggi.
Ilmu Mikosains 49(4): 266-270.
Wynn, JP, Hamid, AA & Ratledge, C. 1999. Peran enzim malat dalam
regulasi akumulasi lipid pada jamur berfilamen. Mikrobiologi 145(8):
1911-1917.
Yamane, T. & Shimizu, S. 1984. Teknik fed-batch dalam proses mikroba.
Di dalam. Kontrol Parameter Bioproses, diedit oleh Fiechter, A.
Berlin, Hiedelberg: Springer. hal.147-194.
Yu, XJ, Yu, XQ, Liu, YL, Sun, J., Zheng, JY & Wang, Z.
2015. Pemanfaatan sirup jagung fruktosa tinggi untuk produksi
biomassa yang mengandung asam docosahexaenoic tingkat tinggi
oleh Aurantiochytrium sp . YLH70.
Biokimia dan Bioteknologi Terapan 177(6): 1229-
1240.
Zhao, X., Hu, CM, Wu, SG, Shen, HW & Zhao, ZB 2011.
Produksi lipid oleh Rhodosporidium toruloides Y4 menggunakan
strategi pemberian substrat yang berbeda. Jurnal Mikrobiologi
Industri dan Bioteknologi 38(5): 627-632.
Shariffah Nurhidayah Syed Abdul Rahman & Aidil Abdul
Hamid*
Departemen Ilmu Biologi dan Bioteknologi
Fakultas Sains dan Teknologi
Universitas Kebangsaan Malaysia
43600 UKM Bangi, Selangor Darul Ehsan
Malaysia
Machine Translated by Google

1957

Mohd Sahaid Kalil *Penulis yang sesuai; email: aidilah@ukm.edu.my

Departemen Teknik Kimia dan Proses
Fakultas Teknik dan Lingkungan Buatan Diterima: 13 Februari 2020
Universitas Kebangsaan Malaysia Diterima: 16 November 2020
43600 UKM Bangi, Selangor Darul Ehsan
Malaysia