Pengujian Ortofosfat dan Total Fosfor

SNI 6989-31 : 2021 Air dan air limbah – Bagian 31: Cara uji kadar ortofosfat dan total fosfor
menggunakan spektrofotometer dengan reduksi asam askorbat
a. Ruang lingkup
Standar ini menetapkan cara uji kadar ortofosfat dan total fosfor dalam contoh uji air
dan air limbah (dikecualikan untuk contoh uji air laut) dengan spektrofotometer secara
asam askorbat pada panjang gelombang 880 nm dan kisaran kadar 0,05 mg PO4/L
sampai dengan 1,5 mg PO4/L untuk ortofosfat serta 0,15 mg P/L sampai dengan 1,3 mg
P/L untuk total fosfor.
b. Perbedaan ortofosfat dan total fosfor
ortofosfat (PO43-) adalah bentuk senyawa fosfor yang reaktif di dalam suatu perairan
total fosfor (P) adalah jumlah unsur P yang terkandung dalam larutan contoh uji setelah
melalui proses destruksi.
c. Untuk mengurangi risiko kecelakaan kerja di laboratorium, maka diperlukan:
1. Penggunaan alat pelindung diri (APD) disesuaikan dengan ruang lingkup pekerjaan.
2. Penanganan bahan kimia secara aman mengacu kepada lembar data keselamatan
bahan (Safety Data Sheet/SDS).
d. Pengujian
1. Prinsip : Ortofosfat dalam suasana asam bereaksi dengan amonium molibdat dan
kalium antimonil tartrat membentuk senyawa asam fosfomolibdat kemudian
direduksi oleh asam askorbat menjadi kompleks biru molibden. Selanjutnya diukur
dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 880 nm. Untuk pengujian total
fosfor, senyawa-senyawa fosfor dalam contoh uji didestruksi dengan peroksodisulfat
menjadi ortofosfat, kemudian diperlakukan sama dengan pengujian ortofosfat.

2. Bahan
 Air bebas mineral
 Larutan H2SO4 (2+1) : tambahkan 20 mL H2SO4 pekat ke dalam 10 mL air bebas
mineral
 Larutan amonium molibdat : larutkan 6 gram heksaamonium heptamolibdat
tetrahidrat (NH4)6Mo7O24.4H2O dan 0,24 gram kalium antimonil tartrat
K(SbO)C4H4O.1/2H2O ke dalam 300 mL air bebas mineral. Setelah larut,
tambahkan 120 mL H2SO4 (2+1). Lalu encerkan menjadi 500 mL dengan air
bebas mineral
 Larutan asam askorbat 72 g/L : larutkan 7,2 gram asam askorbat ke dalam 80 mL
air bebas mineral kemudian encerkan dengan air bebas mineral hingga 100 mL.
Simpan dalam botol gelas pada suhu < 6 °C. Jangan gunakan larutan ini jika
sudah berwarna
 Larutan campuran amonium molibdat - asam askorbat : campur larutan
amonium molibdat dengan larutan asam askorbat dengan perbandingan
volume 5:1. Buat larutan campuran setiap akan digunakan
 Larutan kalium peroksodisulfat (K2S2O8) 40 g/L (kandungan P kurang dari
0,00003 %) : larutkan 4 gram K2S2O8 dengan air bebas mineral dalam labu ukur
100 mL, lalu tepatkan sampai tanda tera
  Larutan induk 500 mg PO43-/L : larutkan 0,715 gram kalium dihidrogen fosfat
anhidrat (KH2PO4), sudah dipanaskan pada temperatur 105 °C ± 2 °C selama 2
jam dan didiamkan dalam desikator, dengan 100 mL air bebas mineral dalam
labu ukur 1.000 mL, kemudian tambahkan air bebas mineral sampai tepat tanda
tera dan homogenkan. (Larutan induk PO43- dapat menggunakan larutan induk
siap pakai yang tersedia secara komersial)
 Larutan induk 500 mg PO4-P/L : larutkan 2,195 gram KH2PO4, sudah dipanaskan
pada temperatur 105 °C ± 2 °C selama 2 jam dan didiamkan dalam desikator,
dengan 100 mL air bebas mineral dalam labu ukur 1.000 mL, kemudian
tambahkan air bebas mineral sampai tepat tanda tera dan homogenkan.
(Larutan induk PO4-P dapat menggunakan larutan induk siap pakai yang
tersedia secara komersial)

3. Alat
 Spektrofotometer UV-Vis
 Timbangan analitik dengan keterbacaan 0,1 mg
 Erlenmeyer 125 mL
 Labu ukur 100 mL, 250 mL, dan 1.000 mL
 Gelas ukur 25 mL, 50 mL, dan 100 mL
 Pipet ukur 5 mL dan 10 mL
 Pipet volumetrik 2 mL, 5 mL, 10 mL, 20 mL, dan 25 mL
 Gelas piala 1.000 mL
 Corong gelas
 Pipet tetes
 Botol decomposing tahan panas jika melakukan destruksi dengan autoklaf
 Alat destruksi (digestion) contoh autoklaf atau hot plate; dan desikator.

4. Pengawetan sampel

Lama
No. Parameter Wadah Pengawetan
Penyimpanan
1. saring dengan media
penyaring ukuran pori 0,45
1. 48 jam
1. Ortofosfat Botol gelas μm dan dinginkan pada
2. 28 hari
suhu ≤ 6 °C
2. bekukan pada suhu -20 °C
Botol plastik (polietilena
tambahkan H2SO4 hingga pH
atau
2. Total fosfor < 2 dan dinginkan pada suhu 28 hari
politetrafluoroetilena
≤ 6 °C
/PTFE) atau botol gelas
A. Preparasi contoh ortofosfat
a) Siapkan contoh uji yang telah diambil sesuai SNI Pengambilan contoh
b) Kondisikan contoh uji pada suhu ruangan jika contoh uji sebelumnya telah
didinginkan
c) Pembuatan larutan baku 50 mg PO43-/L
1) pipet 10 mL larutan induk 500 mg PO43-/L ke dalam labu ukur 100 mL
2) tambahkan air bebas mineral lalu tepatkan sampai tanda tera dan
homogenkan
d) Pembuatan larutan baku 5 mg PO43-/L
1) pipet 10 mL larutan induk 50 mg PO43-/L ke dalam labu ukur 100 mL
2) tambahkan air bebas mineral lalu tepatkan sampai tanda tera dan
homogenkan
e) Pembuatan larutan standar PO43-
Buat deret larutan kerja PO43- dengan 1 (satu) blanko dan minimal 3 (tiga) kadar
yang berbeda secara proporsional dan berada pada rentang pengukuran

 Pembacaan Standar ortofosfat

a) hidupkan dan optimalkan alat spektrofotometer sesuai dengan petunjuk alat
untuk pengujian kadar fosfat. Atur panjang gelombangnya pada 880 nm
b) pipet secara kuantitatif 25 mL masing-masing larutan standar dan masukkan
dalam Erlenmeyer
c) tambahkan 2 mL larutan campuran amonium molibdat - asam askorbat
d) ukur serapan masing-masing larutan kerja dengan alat spektrofotometer pada
panjang gelombang yang telah ditetapkan. Lakukan pengukuran dalam kisaran
waktu antara 10 menit sampai 30 menit setelah penambahan larutan campuran
e) jika koefisien korelasi regresi linier (r) < 0,995, periksa kondisi alat dan ulangi
langkah no.2 sampai dengan no.5 hingga diperoleh nilai koefisien r ≥ 0,995

 Prosedur Uji kadar ortophospat

a) ambil secara kuantitatif 25 mL contoh uji secara duplo dan masukkan masing -
masing ke dalam Erlenmeyer
b) tambahkan 2 mL larutan campuran amonium molibdat - asam askorbat
c) ukur serapan masing-masing larutan kerja dengan alat spektrofotometer pada
panjang gelombang yang telah ditetapkan. Lakukan pengukuran dalam kisaran
waktu antara 10 menit sampai 30 menit setelah penambahan larutan campuran

B. Preparasi contoh total fosfor

a) Pembuatan larutan baku 50 mg PO4-P/L
1) pipet 10 mL larutan induk 500 mg PO4-P/L ke dalam labu ukur 100 mL
2) tambahkan air bebas mineral lalu tepatkan sampai tanda tera dan
homogenkan
b) Pembuatan larutan baku fosfat 5 mg PO4-P/L
1) pipet 10 mL larutan induk 50 mg PO4-P/L ke dalam labu ukur 100 mL;
2) tambahkan air bebas mineral lalu tepatkan sampai tanda tera dan
homogenkan
 c) Pembuatan larutan standar PO4-P
Buat deret larutan kerja dengan 1 (satu) blanko dan minimal 3 (tiga) kadar yang
berbeda secara proporsional dan berada pada rentang pengukuran

 Pembacaan Standar total fosfor

a) hidupkan dan optimalkan alat spektrofotometer sesuai dengan petunjuk alat
untuk pengujian kadar total fosfor. Atur panjang gelombangnya pada 880 nm
b) tambahkan 2 mL larutan campuran amonium molibdat - asam askorbat ke dalam
larutan hasil destruksi, homogenkan lalu diamkan selama 15 menit
c) ukur serapan masing-masing larutan kerja dengan alat spektrofotometer pada
panjang gelombang yang telah ditetapkan. Lakukan pengukuran kurang dari 15
menit setelah penambahan larutan campuran
d) jika koefisien korelasi regresi linier (r) < 0,995, periksa kondisi alat dan ulangi
langkah 2 sampai 3 hingga diperoleh nilai koefisien r ≥ 0,995

 Destruksi untuk pengujian total fosfor

Destruksi menggunakan autoklaf
a) ambil secara kuantitatif 50 mL masing-masing larutan standar dan
contoh uji kemudian masukan ke dalam botol decomposing tahan panas 100
mL
b) tambahkan 10 mL larutan kalium peroksodisulfat dan panaskan di autoklaf
pada suhu 120°C ± 1°C dan tekanan 200 kPa selama 30 menit
c) dinginkan kemudian saring dan tampung filtratnya
d) pipet 25 mL filtrat dan masukkan ke dalam gelas piala 50 mL
e) larutan siap diuji.

Destruksi menggunakan hot plate

a) ambil secara kuantitatif 50 mL masing-masing larutan standar sesuai dan

contoh uji kemudian masukan ke dalam labu erlenmeyer
b) tambahkan 10 mL larutan kalium peroksodisulfat lalu tutup dengan corong
gelas dan didihkan secara hati-hati di atas alat pemanas (contohnya hot
plate) selama 30 menit sampai 40 menit atau sampai volume larutan
mencapai 10 mL, dinginkan kemudian pindahkan hasil pengerjaan ke labu
ukur 50 mL, encerkan dengan air bebas mineral
sampai tanda tera kemudian homogenkan
c) saring dan tampung filtrat
d) pipet 25 mL filtrat dan masukkan ke dalam gelas piala 50 mL
e) larutan siap diuji.

 Prosedur Uji kadar total fosfor

a) Sampel di distruksi terlebih dahulu dengan metode destruksi dengan autoklaf atau
hotplate
b) tambahkan 2 mL larutan campuran amonium molibdat - asam askorbat ke dalam
larutan hasil destruksi, homogenkan lalu diamkan selama 15 menit
c) ukur serapan masing-masing larutan kerja dengan alat spektrofotometer pada
panjang gelombang yang telah ditetapkan. Lakukan pengukuran kurang dari 15
menit setelah penambahan larutan campuran

5. Perhitungan
a) Kadar ortofosfat

Kadar ortofosfat (mg PO4/L) = C PO4 × f

Keterangan:
C PO4 = kadar contoh uji yang didapat (mg PO4/L)
f = faktor pengenceran

b) Kadar total fosfor

Kadar total fosfor (mg P /L) = C P × f

Keterangan:
C PO4 = kadar contoh uji yang didapat (mg P /L)
f = faktor pengenceran

6. Pengendalian mutu
a) Gunakan bahan kimia pro analisis (pa)
b) Gunakan alat gelas bebas kontaminasi
c) Gunakan alat ukur yang terkalibrasi
d) Dikerjakan oleh analis yang kompeten
e) Lakukan pengujian dalam jangka waktu yang tidak melampaui waktu
penyimpanan maksimum
f) Perhitungan koefisien korelasi regresi linier (r) ≥ 0,995 dengan intersepsi lebih
kecil atau sama dengan batas deteksi
g) Lakukan pengujian blanko dengan frekuensi minimal 5 % per batch (satu seri
pengukuran) atau minimal 1 kali untuk jumlah contoh uji kurang dari 20 sebagai
kontrol kontaminasi
h) Lakukan pengujian duplo dengan frekuensi minimal 5 % per satu seri
pengukuran atau minimal 1 kali untuk jumlah contoh uji kurang dari 20 sebagai
kontrol ketelitian analisis
i) Jika Perbedaan Persen Relatif (Relative Percent Difference/RPD) lebih besar atau
sama dengan 10 %, maka dilakukan pengukuran ketiga untuk mendapatkan RPD
kurang dari 10 %.
Perhitungan RPD :

j) Untuk melihat gangguan matriks contoh uji, lakukan kontrol akurasi

menggunakan spike matrix dengan frekuensi 10 % per batch (satu seri
 pengukuran) atau minimal 1 kali untuk jumlah contoh uji kurang dari 10. Kisaran
persen temu balik (% R) untuk spike matrix adalah 85 % - 115 %. Hitung persen
temu balik dengan rumus sebagai berikut :

Keterangan:
A adalah kadar contoh uji yang diperkaya (spike) (mg/L)
B adalah kadar contoh uji (mg/L)
C adalah kadar standar yang ditambahkan (mg/L)

i) Untuk melihat kinerja alat, lakukan pengukuran salah satu larutan standar kerja
dengan frekuensi 10 % per batch (satu seri pengukuran) atau minimal 1 kali
untuk jumlah contoh uji kurang dari 10. Syarat % Relative Standard Deviation (%
RSD) ≤ 5 %
SM 23rd 2017 4500-P FOSFOR

A. Metode Persiapan Sampel ada beberapa cara yaitu :

1. Filtrasi dengan kertas saring 0,45 µm
2. Hidrolisis dengan asam dengan menggunakan reagen
 Indicator pp
 Campuran asam H2S04 pekat dan asam HNO3 pekat
 NaOH 6 N
3. Destruksi dengan asam perklorat
 HNO3
 Asam Perklorat (HClO4.2H2O) 70%-72%
 NaOH 6 N
 Indikatror metil orange
 Indicator pp
4. Destruksi dengan asam sulfat-asam nitrat
 H2S04
 HNO3
 Indicator pp
 NaOH 1 N
5. Destruksi Persulfat (menggunakan autoklaf)
 H2S04
 Amonium persulfat (NH4)2S208 atau kalium persulfate K2S208
 NaOH 1 N
B. Metode pengujian
a. Metode kolorimetri asam Vanadomolibdofosfat
Prinsip : Pada larutan yang mengandung ortofosfat, ammonium molibdat bereaksi
dalam keadaan asam menjadi asam molibdofosfat. Dalam reaksi tersebut terbentuk
komplek asam vanadomolibdofosfat yang berwarna kuning. Intensitas warna kuning
yang terbentuk sebanding dengan konsentrasi fosfat.

b. Metode stannous klorida

Prinsip : Asam molibdofosfat terbentuk dan tereduksi oleh stannous klorida menjadi
warna biru. Metode ini lebih sensitif disbanding metode Metode kolorimetri asam
Vanadomolibdofosfat yaitu dapat membaca sampel dibawan 7 ppb.

c. Metode asam askorbat

Prinsip : Amonium molibdat dan antimon kalium tartrat bereaksi dalam keadaan asam
dengan ortofosfat membentuk asam fosfomolibdat yang direduksi menjadi warna biru
oleh asam perklorat.

d. Metode reduksi asam askorbat secara automatic

Prinsip : Ammonium molibdat dan antimon kalium tartrat bereaksi dengan ortofosfat
dalam keadaan asam untuk membentuk kompleks antimonfosfomolibdat, yang bila
direduksi dengan asam askorbat, menghasilkan warna biru pekat yang sesuai untuk
pengukuran fotometrik. Pengukuran dilakukan pada Panjang gelombang 650 nm – 660
 nm atau 880 nm. Metode ini dapat mengukur kadar ortofosfat pada rentang 0,001 –
10,0 mg P /L.

e. Pengujian ortofosfat dengan metode flow injection

Prinsip : Ion ortofosfat (PO43-) bereaksi dengan amonium molibdat dan kalium tartrat
antimon dalam kondisi asam untuk membentuk kompleks. Kompleks ini direduksi
dengan asam askorbat membentuk kompleks biru yang menyerap cahaya pada panjang
gelombang 880 nm. Absorbansi sebanding dengan konsentrasi ortofosfat dalam
sampel.

f. Metode destruksi dan metode flow injection untuk total fosfor

Prinsip : Polifosfat dirubah menjadi bentuk ortofosfat dengan cara destruksi asam sulfat
dan fosfor organik dirubah menjadi bentuk ortofosfat melalui destruksi persulfat. Ketika
larutan yang dihasilkan diinjeksikan ke instrumen uji, ion ortofosfat (PO43-) bereaksi
dengan amonium molibdat dan kalium tartrat antimon dalam kondisi asam untuk
membentuk kompleks. Kompleks ini direduksi dengan asam askorbat membentuk
kompleks biru pada panjang gelombang 880 nm. Absorbansi sebanding dengan
konsentrasi fosfor total dalam sampel.

g. Metode destruksi persulfate dan metode flow injection untuk total fosfor / in-line UV
Prinsip : Fosfor organik diubah menjadi ortofosfat oleh panas radiasi ultraviolet, dan
destruksi persulfat. Pada saat yang sama, polifosfat anorganik diubah menjadi
ortofosfat melalui destruksi asam sulfat. Larutan yang dihasilkan diinjeksikan ke
instrumen uji, ion ortofosfat (PO43-) bereaksi dengan amonium molibdat dan kalium
tartrat antimon dalam kondisi asam untuk membentuk kompleks. Kompleks ini
direduksi dengan asam askorbat membentuk kompleks biru pada panjang gelombang
880 nm. Absorbansi sebanding dengan konsentrasi fosfor total dalam sampel.

h. Metode persulfat untuk penentuan total nitrogen dan total fosfor secara simultan
Prinsip : Oksidasi senyawa nitrogen menjadi total nitrogen harus terjadi dalam kondisi
basa. Sebaliknya, oksidasi senyawa fosfor menjadi total fosfor harus terjadi dalam
kondisi asam. Metode penentuan total nitrogen menggunakan persulfat-natrium
hidroksida untuk mengoksidasi senyawa nitrogen menjadi nitrat. Oleh karena itu,
metode penentuan total fosfor menggunakan persulfat dalam kondisi asam.
Pada proses destruksi pH sampel bersifat basa ( pH > 12), untuk destruksi total fosfor
pH asam (pH < 2), pada akhir preparasi ditambahkan NaOH sampai pH nya basa.
Dengan rentang pH yang lebar ini memungkinkan oksidasi senyawa nitrogen dan fosfor.
Destruksi sampel nitrat dan ortofosfat menghasilkan total nitrogen dan total fosfor.