PENGARUH METODE EKSTRAKSI TERHADAP KADAR FLAVONOID

TOTAL, FENOLIK TOTAL DAN TANIN TOTAL PADA BUNGA KENIKIR

(Tagetes erecta Linn.)

PROPOSAL
TUGAS AKHIR

Diajukan guna memenuhi sebagian persyaratan menyelesaikan

pendidikan farmasi program sarjana di Universitas Harapan Bangsa

Oleh:
EKA AMALIA RAKHMADANI
NIM. 200105026

PROGRAM STUDI FARMASI PROGRAM

SARJANA FAKULTAS KESEHATAN
UNIVERSITAS HARAPAN
BANGSA
2023
 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL...............................................................................................i
DAFTAR ISI...........................................................................................................ii
DAFTAR TABEL..................................................................................................iv
DAFTAR GAMBAR..............................................................................................v
BAB I PENDAHULUAN.......................................................................................2
A.Latar Belakang Masalah................................................................................2
B.Perumusan Masalah......................................................................................4
C.Tujuan Penelitian..........................................................................................4
D.Manfaat Penelitian........................................................................................5
E. Keaslian Penelitian........................................................................................5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA............................................................................8
A.Tinjauan Teori...............................................................................................8
1. Tanaman Kenikir.....................................................................................8
2. Pengujian Total Fenol, Flavonoid dan Tanin.........................................10
3. Spektrofotometri UV–Visble.................................................................14
4. Ekstrak dan Ekstraksi............................................................................17
5. Pelarut....................................................................................................21
B.Kerangka Teori............................................................................................22
C.Kerangka Konsep........................................................................................23
BAB III METODE PENELITIAN.....................................................................24
A.Jenis dan Rancangan Penelitian..................................................................24
B.Lokasi dan Waktu Penelitian.......................................................................24
C.Variabel Penelitian......................................................................................24
D.Definisi Operasional...................................................................................24
E. Alat dan Bahan............................................................................................25
1. Alat........................................................................................................25
2. Bahan.....................................................................................................25
F. Prosedur Penelitian.....................................................................................26
1. Preparasi Sampel...................................................................................26
2. Ekstraksi Simplisia................................................................................26
3. Skrining Fitokimia.................................................................................27

ii
 4. Penetapan Kadar Flavonoid Total..........................................................29
5. Penetapan Kadar Fenolik Total..............................................................31
6. Penetapan Kadar Tanin..........................................................................32
G. Analisis Data..............................................................................................34
H. Jadwal Penelitian........................................................................................34
DAFTAR PUSTAKA...........................................................................................36

iii
 DAFTAR TABEL
Tabel 1. Keaslian Penelitian.....................................................................................5

Tabel 2. Jadwal Penelitian......................................................................................34

iv
 DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Bunga Kenikir (Tagetes erecta L.)........................................................9

Gambar 2. Struktur Kimia dan Klasifikasi Fenol Sederhana.................................12

Gambar 3. Struktur Flavonoid ..............................................................................13

Gambar 4. Struktur Tanin.......................................................................................14

Gambar 5. Diagram Blok dari Spektrofotometri...................................................15

Gambar 6. Diagram Alat Spektrometer UV-Vis (Single beam).............................16

Gambar 7. Skema Spektrofotometer UV-Vis (Double-beam)...............................17

Gambar 8. Kerangka Teori.....................................................................................22

Gambar 9. Kerangka Konsep.................................................................................23

v
 2

BAB I
PENDAHULUAN

A. Latar Belakang Masalah

Radikal bebas merupakan suatu senyawa asing yang masuk ke dalam

tubuh dan merusak sistem imunitas tubuh. Radikal bebas tersebut dapat
timbul akibat pada berbagai proses kimia yang kompleks dalam tubuh, polusi
lingkungan, radiasi zat kimia, racun, makanan cepat saji,dan makanan yang
digoreng pada suhu tinggi. Jika jumlah berlebih pada radikal bebas akan
memicu efek patologi. Radikal bebas yang berlebih dapat menyerang apa saja
terutama yang rentan seperti lipid, protein pada timbulnya berbagai penyakit
degeneratif salah satunya penyakit kanker. Salah satu pengahambat
pembentukan radikal bebas yaitu antioksidan ( Amin et al (2013).
Antioksidan dapat dihasilkan dari senyawa metabolit sekunder seperti
flavonoid, fenolik, dan tannin.Salah satu tanaman penghasil senyawa fenolik
dan tannin yakni bunga kenikir.

Menurut penelitian Valvoya et al (2012) tentang skrining fitokimia

ekstrak bunga Kenikir menunjukan bahwa bunga Kenikir mengandung
senyawa fitokontstituen berupa tannin, senyawa fenolik, flavonoid, sterol,
triterpenoid, saponin, karotenoid dan alkaloid yang dapat digunakan untuk
mengatasi penyakit diabetes melitus (Valvoya et.al., 2012).

Ekstraksi merupakan langkah utama untuk memperoleh senyawa

bioaktif dari simplisia tanaman. Kadar senyawa bioaktif dalam ekstrak
tergantung pada beberapa faktor salah satunya yaitu metode ekstraksi.
Metode ekstraksi adalah faktor penting untuk menghasilkan ekstrak yang
memiliki kadar senyawa bioaktif yang tinggi. Perbedaan metode ekstraksi
menghasilkan kadar senyawa metabolit sekunder yang berbeda.

Menurut penelitian Paokuma et al (2023) tentang Pengaruh Metode

Ekstraksi Terhadap Senyawa Flavonoid Total Ekstrak Etanol Daun Patikan
Kebo (Ephorbia hirta) menunjukkan bahwa Kandungan senyawa flavonoid
total menggunakan metode refluks (3,21%) lebih besar dibandingkan metode
perkolasi (2,32%). Hal ini sejalan dengan penelitian sebelumnya tentang
pengaruh metode ekstraksi terhadap kadsr total flavonoid total daun talas
menujukan bahwa metode sokletasi menghasilkan kadar total fenolik dan
flavonoid lebih tinggi dibandingkan dengan maserasi dan MAE(Ramayani
dkk, 2021). Namun berbeda dengan penelitian yang dilakukan oleh
 3

Pemilihan metode ekstraksi memiliki peran penting dalam

menentukan aktivitas kandungan yang terdapat dalam ekstrak seperti

kandungan Flavonoid, fenolik, dan tanin. Metode ekstraksi tidak hanya

berpotensi untuk meningkatkan aktivitas senyawa, tetapi juga bisa

mengurangi aktivitas senyawa suatu ekstrak karena beberapa bahan simplisia

bersifat relatif tidak stabil dan rentan terhadap degradasi (Hasnaeni dan

Wisdawati, 2019).

Selain itu, Ola dkk. (2020) juga melakukan penelitian mengenai

pengaruh komposisi pelarut (etanol 70%, etanol 50% dan air) dan waktu

maserasi (1, 3, dan 5 hari) terhadap kadar tanin total ekstrak daun ketapang

(Terminalia Catappa, L.) dan kemampuannya membentuk kompleks dengan

Fe (III). Hasilnya menunjukkan bahwa kadar tanin total rata-rata berkisar

antara 2,215 - 7,741 mg TAE/g. Uji Anova dua arah menunjukkan bahwa

komposisi pelarut, waktu maserasi maupun interaksi antara keduanya

berpengaruh terhadap kadar tanin total yang diperoleh.

Hal ini menunjukan bahwa pemilihan metode ekstraksi memiliki

pengaruh terhadap stabilitas dan kadar senyawa yang tersari dalam pelarut

(Luliana et al., 2019). Diantara berbagai pelarut, etanol biasanya lebih

sering digunakan karena toksisitasya yang rendah (Khazaei et al., 2016).

Pada umumnya metode ekstraksi terbagi dua yaitu metode dingan dan

metode panas. Pengaruh panas pada proses ekstraksi akan mempengaruhi

stabilitas senyawa. Pada penelitian ini digunakan 2 jenis metode ekstraksi

 4

yaitu cara panas dan cara dingin. Metode cara panas yang dipilih adalah

sokhletasi, sedangkan cara dingin yang dipilih adalah maserasi.

Berdasarkan latar belakang yang diuraikan, maka perlu dilakukan

penelitian terhadap pengaruh metode ekstraksi terhadap kadar flavonoid total,

fenolik total, dan tanin total dalam ekstrak etanol bunga Kenikir (Tagetes

erecta L.) untuk melihat metode ekstraksi yang optimal untuk pengembangan

produk kesehatan dan pangan fungsional berbasis bunga Kenikir.

B. Perumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang diatas maka dapat dirumuskan masalah

sebagai berikut:

1. Bagaimana pengaruh metode ekstraksi terhadap kadar flavonoid

total pada ekstrak etanol bunga Kenikir (Tagetes erecta L.) ?

2. Bagaimana pengaruh metode ekstraksi terhadap kadar fenolik total pada

ekstrak etanol bunga kenikir (Tagetes erecta L).

3. Bagaimana pengaruh metode ekstraksi terhadap kadar tanin total pada

ekstrak etanol bunga kenikir (Tagetes erecta L).

C. Tujuan Penelitian

Berdasarkan latar belakang diatas maka dapat dirumuskan masalah

sebagai berikut:

1. Untuk mengetahui pengaruh metode ekstraksi terhadap kadar

flavonoid total pada ekstrak etanol bunga Kenikir (Tagetes erecta L.)

2. Untuk mengetahui pengaruh metode ekstraksi terhadap kadar fenolik

total pada ekstrak etanol bunga kenikir (Tagetes erecta L).

 5

3. Untuk mengetahui pengaruh metode ekstraksi terhadap kadar tanin

total pada ekstrak etanol bunga kenikir (Tagetes erecta L).

D. Manfaat Penelitian

Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi tentang

pengaruh metode ekstraksi terhadap kadar flavonoid total, fenolik total dan

tanin total ekstrak etanol bunga Kenikir (Tagetes erecta L.), menambah

referensi serta sebagai bahan acuan untuk penelitian lebih lanjut mengenai

hasil pengaruh metode ekstraksi terhadap kadar flavonoid total, fenolik total

dan tanin total ekstrak bunga Kenikir (Tagetes erecta L.).

 6

E. Keaslian Penelitian

Tabel 1.1 Keaslian Penelitian

Nama dan Judul Metode dan Hasil Penelitian Persamaan

Tahun Penelitian Dan

Perbedaan

Ramayani Pengaruh Metode Metode: ekstraksi maserasi, Persamaan:

dkk., 2021 Ekstraksi Microwave Assisted Extraction Metode

Terhadap Kadar (MAE), dan sokletasi. Serta ekstraksi yang

Total Fenolik dan penetapan kadar menggunakan digunakan dan

Kadar Total instrument Spektrofotometer UV- pelarut yang

Flavonoid Daun Vis digunakan

Talas (Colocasia (etanol 96%)

esculenta L.) Hasil: metode ekstraksi

berpengaruh signifikan terhadap Perbedaan:

kadar total fenolik dan flavonoid Bagian tanaman

ekstrak daun talas dengan nilai

p<0,05. Kadar total fenolik dan

kadar total flavonoid tertinggi

pada metode ekstraksi sokletasi

yaitu sebesar 10,39 mgGAE/g

ekstrak dan 12,44 mgKE/g ekstrak

Ola dkk., Determination Of Metode: Ekstraksi Maserasi dan Metode

2020 Total Tanin penetapan kadar menggunakan ekstraksi yang

Contents Of instrument Spektrofotometer UV- digunakan yaitu

 7

Terminalia Vis Maserasi

Catappa, L. Leaf Hasil: kadar tanin total rata-rata Perbedaan:

Extract And Test berkisar antara 2,215 - 7,741 mg Bagian tanaman

Of Its Ability As TAE/g. Uji Anova dua arah yang digunakan

A Complexion menunjukkan bahwa komposisi dan pelarut

Agent Of Fe (Iii) pelarut, waktu maserasi maupun yang digunakan

interaksi antara keduanya

berpengaruh terhadap kadar tanin

total yang diperoleh

Yulianti Pengaruh Metode Metode: metode ekstraksi Metode

dkk., 2020 Ekstraksi Dan (Maserasi dan Soxhletatsi) ekstraksi yang

Polaritas Pelarut digunakan yaitu

Terhadap Kadar Hasil: Metode soxhletation Maserasi dan

Fenolik Total menghasilkan kadar fenolik total Soxhletasi

Daun Kersen tertinggi dibandingkan metode

(Muntingia maceration dengan nilai 13,29% Perbedaan:

Calabura L) w/w. Sedangkan metode Bagian tanaman

maceration menghasilkan kadar yang digunakan

fenolik total tertinggi dan pelarut

dibandingkan metode soxhletation yang digunakan

dengan nilai 10,70% GAE.

8
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. Tinjauan Teori

1. Tanaman Kenikir

Tagetes erecta L. atau marigold Afrika merupakan anggota

keluarga Asteraceae, tanaman asli Amerika Tengah tepatnya Meksiko.

Bunga marigold atau yang lebih dikenal di Indonesia sebagai bunga

Kenikir, bunga cocok botol, atau bunga tahi kotok juga banyak ditanam

oleh masyarakat Indonesia karena tergolong adaptif terhadap lingkungan

baik di dataran rendah maupun dataran tinggi (Silviani dkk., 2023).

Secara historis, marigold telah digunakan di seluruh India, Cina,

dan Indonesia sebagai bumbu dan obat. Marigold adalah bumbu yang

meningkatkan cita rasa makanan dan merupakan bahan dasar pembuatan

kari di India. Marigold digunakan dalam pembuatan kari sejak lebih dari

5000 tahun yang lalu (Singh et.al., 2020). Tanaman Kenikir

dibudidayakan secara luas untuk tujuan pengobatan, sebagai tanaman hias

dan pewarna makanan alami (Santi dkk., 2021). Di Bali, tanaman Kenikir

khususnya pada bagian bunganya banyak dimanfaatkan sebagai sarana

upacara keagamaan (Paramitha et al., 2018).

a. Klasifikasi Tumbuhan

Klasifikasi tumbuhan Kenikir menurut Singh et al., (2020) adalah

sebagai berikut:

Kingdom : Plantae

Ordo : Asterales

9
 10

Family : Asteraceae

Subfamily : Asteroideae

Class : Magnoliopsida

Division : Magnoliophyta

Genus : Tagetes

Species : Tagetes erecta Liin

Gambar 1. Bunga Kenikir (Tagetes erecta L.) (Singh et.al., 2020)

b. Morfologi

Marigold adalah berasal dari Amerika Tengah, yang juga dapat

ditemukan tumbuh di sebagian besar daerah beriklim sedang di dunia.

Tingginya mencapai 50-80 cm, daunnya berwarna hijau tua, panjang

batangnya antara 5-17 cm. Daun dan batangnya ditutupi bulu-bulu

kecil tepi daun bisa bergigi jarang atau bergelombang.

Tipe bongkol akarnya tunggal atau terkumpul. Perbungaan

terminalis, bunga berbentuk cawan, bunga pita dan bunga tabung

dengan susunan mahkota bunga rangkap yang berwarna putih, kuning,

oranye, kuning keemasan atau berwarna ganda (Kusmiati dkk., 2018)

 11

c. Kandungan Senyawa Metabolit Sekunder

Senyawa bunga Kenikir Hasil skrining fitokimia pada bunga

Kenikir menunjukkan ekstrak bunga Kenikir mengandung

fitokonstituen berupa tanin, senyawa fenolik, flavonoid, sterol,

triterpenoid, saponin, karotenoid, tanin dan alkaloid (Valvoya et.al.,

2012). Terdapat beberapa dari senyawa tersebut merupakan golongan

senyawa antioksidan. Golongan senyawa antioksidan yang terdapat

pada bunga Kenikir yaitu flavonoid, fenol, serta karotenoid

berpotensi sebagai antioksidan (Santi, 2021).

d. Senyawa fenolik pada bunga kenikir

a. Mengandung senyawa fenolik

2. Ekstraksi

Ekstraksi merupakan csrs prmisahan komponen bioaktif dari

tanaman asalnya dengan menggunakan pelarut yang sesuai. Ekstraksi

merupakan perpindahan masa komponen kimia yang terdapat dalam

sampel bahan alam ke dalam pelarut prinsip metodenya didasarkan pada

distribusi zat yang terlarut kedalam pelarut . Metode ekstraksi adalah

proses penarikan kandungan kimia yang dapat larut dari serbuk simplisia,

sehingga terpisah dari bahan yang tdak dapat larut (Gandjar dan

Rohman,2007).

Pemilihan jenis pelarut harus mempertimbangkan beberapa faktor

antara lain selektivitas, kemampuan untuk mengekstrak, toksisitas,

kemudahan untuk diuapkan dan harga pelarut. Larutan pengekstraksi yang

digunakan disesuaikan dengan kepolaran senyawa yang diinginkan.

 12

Menurut prinsip like dissolves like, suatu pelarut akan cenderung

melarutkan senyawa yang mempunyai tingkat kepolaran yang sama.

Pelarut polar akan melarutkan senyawa polar dan sebaliknya. Flavonoid,

fenol dan tannin merupakan senyawa golongan polifenol yang

terdistribusi luas pada tumbuhan dalam bentuk glikosida yang berikatan

dengan suatu gula, karena itu flavonoid, fenol dan tannin merupakan

senyawa yang bersifat polar (Muthukumaran et al., 2013).

Beberapa metode ekstraksi yang banyak digunakan untuk

mengekstraksi bahan alam. Metode ekstraksi dibagi menjadi 2 yaitu

ekstraksi panas dan dingin. Metode panas terdiri dari ( Refluks dan

Sokletasi), sedangkan yang metode dingin erdiri dari ( Maserasi dan

Perkolasi ).

1) Maserasi

Maserasi adalah proses ekstraksi simplisia menggunakan

pelarut dengan beberapa kali pengadukan pada suhu ruangan.

Ekstraksi secara maserasi dilakukan pada suhu kamar (27 oC

sehingga tidak menyebabkan degradasi metabolit yang tidak tahan

panas Prosedurnya yang dilakukan dengan merendam simplisia

dalam pelarut yang sesuai dalam wadah tertutup sambil sesekali di

aduk. Pengadukan dilakukan dapat meningkatkan kecepatan

ekstraksi. Kelemahan dari maserasi adalah prosesnya

membutuhkan waktu yang cukup lama. Ekstraksi secara

menyeluruh juga dapat menghabiskan sejumlah besar volume

 13

pelarut yang dapat berpotensi hilangnya metabolit. Beberapa

senyawa juga tidak terekstraksi secara efisien jika kurang terlarut

pada suhu kamar (27 oC). (Departemen Kesehatan RI, 2000).

2) Perkolasi

Perkolasi merupakan proses mengekstraksi senyawa

terlarut dari jaringan selular simplisia dengan pelarut yang selalu

baru sampai sempurna. Perkolasi umumnya dilakukan pada suhu

ruangan. Perkolasi sudah sukup sesuai bik itu untuk ekstraksi

pendahuluan ataupun dalam jumlah besar (Departemen Kesehatan

RI, 2000).

3) Soxhlet

Metode ekstraksi soxhlet adalah metode ekstraksi dengan

prinsip pemanasan dan perendaman sampel. Hal itu menyebabkan

terjadinya pemecahan dinding dan membran sel akibat perbedaan

tekanan antara di dalam dan di luar sel. Dengan demikian,

metabolit sekunder yang ada di dalam sitoplasma akan terlarut ke

dalam pelarut organik. Larutan itu kemudian menguap ke atas dan

melewati pendingin udara yang akan mengembunkan uap tersebut

menjadi tetesan yang akan terkumpul kembali. Bila larutan

melewati batas lubang pipa samping soxhlet maka akan terjadi

sirkulasi. Sirkulasi yang berulang itulah yang menghasilkan

ekstrak yang baik (Departemen Kesehatan RI, 2000).

 14

4) Refluks

Ekstraksi dengan cara refluks pada dasarnya adalah

ekstraksi berkesinambungan. Bahan yang akan diekstraksi

direndam dengan cairan penyari dalam labu alas bulat yang

dilengkapi dengan alat pendingin tegak, lalu dipanaskan sampai

mendidih. Cairan penyari akan menguap, uap tersebut akan

diembunkan dengan pendingin tegak dan akan kembali menyari

zat aktif dalam simplisia tersebut. Ekstraksi ini biasanya dilakukan

3 kali dan setiap kali proses ekstraksi dilakukan selama 4 jam

(Departemen Kesehatan RI, 2000).

5) Digesti

Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan

kontinu) pada suhu yang lebih tinggi dari suhu ruangan, yaitu

secara umum dilakukan pada suhu 40-50℃ (Departemen

Kesehatan RI, 2006).

6) Infusa

Infusa adalah ekstraksi dengan pelarut air pada suhu

penangas air (bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih),

suhu terukur (96-98℃) selama waktu tertentu (15-20 menit)

(Departemen Kesehatan RI, 2000).

7) Dekok

Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama dan suhu

sampai titik didih air, yaitu pada suhu 90-100oC selama 30 menit

(Departemen Kesehatan RI, 2000).

 15

3. Fenol Total

Fenol merupakan senyawa yang memiliki satu atau lebih gugus

hidroksil yang terikat langsung dengan cincin aromatik. Fenol

(C6H5OH) atau asam karbolat merupakan struktur yang mendasari

semua golongan dari senyawa fenol yang mana cincin aromatik yang

dimaksud adalah benzena. Senyawa fenolik merupakan metabolit

sekunder yang dihasilkan tanaman yang terlibat dalam berbagai fungsi

fisiologis khusus, seperti untuk pertumbuhan, perkembangan, dan

pertahanan mekanisme normal dari tanaman (Prasiddha dkk., 2016).

Fenol berfungsi sebagai antioksidan karena kemampuannya dalam

menstabilkan radikal bebas dengan memberikan atom hidrogen secara

cepat kepada radikal bebas. Sementara itu, radikal dari antioksidan

senyawa fenol ini akan lebih stabil daripada radikal bebasnya (Susanti

dan Panunggal, 2015). Aktivitas biologis yang dimiliki senyawa fenolik

sangat luas meliputi antioksidan, antibakteri, antiinflamasi,

antitrombotik, antivirus, hepatoprotektif, antikanker, dan anti alergi

(Prasiddha dkk., 2016).

Senyawa fenolik memiliki ikatan yang saling berkonjugasi dalam

inti benzena yang mana saat terkena sinar UV akan terjadi resonansi

dengan cara transfer elektron. Oleh karenanya, senyawa ini menunjukkan

serapan pada daerah spektrum UV-Vis yang dapat diukur dengan

instrumen spektrofotometer UV-Vis. Berdasarkan Farmakope Herbal

Indonesia, penetapan kadar fenol total dilakukan dengan metode Folin–

 16

Ciocalteu. Metode ini merupakan metode yang paling umum digunakan

untuk menentukan kandungan fenolik total dalam tanaman dengan

pertimbangan bahwa dengan metode ini pengerjaannya lebih sederhana.

Prinsip metode Folin–Ciocalteu adalah senyawa fenolik teroksidasi oleh

reagen Folin–Ciocalteu sehingga larutan uji berwarna biru yang dapat

diukur dengan spektrofotometer visibel pada panjang gelombang 600 –

800 nm. Kandungan fenolik total dinyatakan dengan massa ekivalen

asam galat (Rollando dan Monica, 2018).

4. Flavonoid Total

Flavonoid yaitu senyawa polifenol yang terdiri dari 15 atom karbon

utama yang tersusun atas dua cincin benzena yang dihubungkan dengan

tiga atom karbon yang juga dapat membentuk cincin pyran (Maanari

dkk., 2014).

Bedasarkan substituennya, flavonoid dibagi menjadi flavonol,

antosianin, flavanon, flavon, dan kalkonon. Kategori ini berdasarkan

nomor dan distribusi dari group hidroksil, keberadaan ikatan rangkap

antara posisi dua dan tiga, serta keberadaan ikatan rangkap pada posisi

empat.

Flavonoid memiliki gugus–gugus hidroksil (–OH) sehingga dapat

menetralkan radikal bebas dengan cara mendonorkan atom hidrogennya

sehingga menjadi molekul non radikal yang stabil. Flavonoid

mengandung sistem aromatik yang terkonjugasi. Oleh karena itu,

flavonoid menunjukkan pita serapan yang kuat pada daerah spektrum

 17

UV-Vis (Febrianti dan Sari, 2016). Struktur kimia dari beberapa senyawa

flavonoid dapat dilihat pada Gambar 3.

Gambar 2. Struktur Flavonoid (Fadillah dkk., 2017)

Flavonoid total dapat diukur dengan metode kolorimetri. Prinsip

penetapan kadar flavonoid total menggunakan AlCl 3 adalah pembentukan

kompleks, sehingga terjadi pergeseran panjang gelombang ke arah visible

yang ditandai dengan larutan menghasilkan warna yang lebih kuning.

AlCl3 akan bereaksi dengan gugus keton pada C–4 dan gugus –OH pada

C–3 atau C–5 pada senyawa flavon atau flavonol membentuk senyawa

kompleks yang stabil (Fadillah dkk., 2017).

5. Tanin Total

Senyawa tanin (C76H52O46) adalah senyawa polifenol yang

berasal dari tumbuhan, termasuk kategori tumbuhan tingkat tinggi atau

rendah yang memiliki kemampuan meredam reaksi oksidatif akibat

radikal bebas. Berdasarkan struktur kimianya digolongkan menjadi tanin

terhidrolisis dan tanin terkondensasi (Soenardjo, 2017).

TTC (Total Tannin Content) atau kandungan tanin total adalah

kandungan total tanin pada suatu sampel. Tanin dapat memberikan

aktivitas antioksidan. Standar yang digunakan berupa asam tanat sehingga

 18

dapat dinyatakan dalam satuan TAE/g sampel (Muthukumaran et al.,

2013).

Asam tanat adalah suatu senyawa golongan tanin terhidrolisis

turunan polifenol. Asam tanat sering digunakan sebagai senyawa

pembanding dalam menetapkan kadar tanin total pada suatu sampel. Tanin

yang direaksikan dengan reagen yang membentuk warna yaitu folin-

ciocalteu dan pembentuk suasana basa natrium karbonat (Soenardjo,

2017).

Gambar 3. Struktur Tanin (Soenardjo, 2017)

 19

B. Kerangka Teori

Gambar 4. Kerangka Teori

 BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian

Jenis penelitian yang digunakan dalam penelitian ini adalah eksperimen

laboratorium yang bertujuan untuk menganalisa pengaruh metode ekstraksi

secara maserasi dan sokhletasi terhadap kadar flavonoid total, fenolik total

dan tanin total pada ekstrak etanol bunga Kenikir (Tagetes erecta L.)

menggunakan metode Spektrofotometri UV-Vis.

B. Lokasi dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dulakukan di Laboratorium Biologi Farmasi Fakultas Ilmmu

Kesehatan Universitas Harapan Bangsa Purwokerto pada bulan Desember

2023-juli2024.

C. Variabel Penelitian

Variabel bebas : Metode ekstraksi bunga kenikir (Tagetes erecta L.)

Variabel terikat : Kadar Flavonoid Total, Fenolik total dan Tanin Total

D. Definisi Operasional

1. Flavonoid, Fenol dan Tanin merupakan metabolit sekunder dari polifenol

yang memiliki efek bioaktif termasuk antivirus, anti-inflamasi, anti

penuaan, antioksidan, kardioprotektif, antidiabetes dan anti kanker

(Kurniati, 2021).

2. Ekstraksi merupakan suatu metode pemisahan suatu zat yang didasarkan

pada perbedaan kelarutan terhadap dua cairan tidak saling larut yang

berbeda, biasanya yaitu air dan yang lainnya berupa pelarut organik

(Badaring et al., 2020).

20
 21

E. Alat dan Bahan

1. Alat

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah timbangan

analitik, spatula, vial, alat-alat gelas, blender, ayakan, sokhlet, penyaring,

alumunium foil, rotary evaporator, Alat gelas, spektrofotometer UV-Vis,

magnetic stirrer, , oven dan stopwatch.

2. Bahan

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah bunga kenikir,

etanol 96%, serbuk Mg, HCl pekat, aquades, FeCl3, metanol, kloroform,

asetat asetat, H2SO4, kertas saring, NaOH, Standar Asam Galat, Metanol,

reagen Folin-Ciocalteu, reagen Dragendroff, reagen mayer, Standar rutin,

aluminium klorida P, dan Aquades.

F. Prosedur Penelitian

1. Preparasi Sampel

Prosedur preparasi sampel pada penelitian ini adalah sebagai berikut:

a. Sampel yang digunakan pada penelitian ini berupa bunga kenikir

(Tagetes erecta L.). Bunga kenikir yang telah dipetik disortasi kering

dilanjutkan sortasi basah lalu dirajang tipis tipis, hingga kadar air

mencapai < 10%.

b. Dikeringkan sampel dibawah sinar matahari langsung.

c. Dihaluskan menggunakan blender dan diayak sehingga diperoleh

serbuk simplisia bunga kenikir.

 22

2. Ekstraksi Simplisia

a. Ekstraksi Maserasi

Ekstraksi secara maserasi dilakukan dalam maserator

menggunakan pelarut etanol 96%. Adapun prodesurnya yaitu:

1) Sampel bunga kenikir yang digunakan sebanyak 500 gram serbuk

kering.

2) Sampel dimaserasi dalam maserator selama 3x24 jam.

3) Ekstrak yang diperoleh selanjutnya dilakukan evaporasi sehingga

diperoleh ekstrak kental.

4) Ekstrak kental ini lalu ditimbang dan dilakukan uji fitokimia

(Widiyantoro dan Harlia, 2020).

b. Ekstraksi Sokhletasi

Adapun proses sokletasi adalah sebagai berikut:

1) Ekstraksi secara sokhletasi dilakukan dengan etanol 96%.

2) Sampel yang digunakan 500 gram serbuk kering bunga

kenikir.sokletasi dilakukan pada suhu 45℃

3) Ekstrak hasil sokhletasi selanjutnya dilakukan evaporasi

sehingga diperoleh ekstrak kental.

4) Ekstrak kental selanjutnya ditimbang ,diuji fitokimia

(Widiyantoro dan Harlia, 2020).

3. Skrining Fitokimia

a. Uji Fenol
 23

1) Ekstrak bunga kenikir diambil 100 mg dilarutkan dalam 2 ml

metanol

2) Dimasukkan kedalam tabung reaksi dan dipanaskan.

3) Diteteskan dengan 2 tetes larutan FeCl 3 5%. Hasil positif fenol

jika menunjukkan warna hijau atau warna hijau biru (Silviani et

al., 2023).

b. Uji flavonoid

1) Ekstrak bunga kenikir diambil 100 mg dilarutkan dalam 2 ml

metanol

2) Dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan dipanaskan.

3) Ditambahkan logam Mg secukupnya dan 2-3 tetes HCl pekat.

Apabila terbentuk warna merah jingga sampai merah ungu,

menunjukkan adanya flavonoid (Silviani et al., 2023).

c. Uji alkaloid

1) Ekstrak bunga kenikir diambil 100 mg

2) Dimasukkan ke dalam tabung reaksi

3) Ditambah 5 mL HCl 2 N dan larutan dibagi dalam dua tabung.

Tabung I ditambahkan 2-3 tetes reagen Dragendroff, tabung II

ditambahkan 2-3 tetes reagen Mayer.

4) Hasil positif alkaloid apabila terbentuk endapan berwarna merah

bata, merah, jingga ( dengan reagen Dragendorf ) dan endapan

putih atau kekuning-kuningan ( dengan reagen Meyer ) (Silviani et

al., 2023).

d. Uji tanin
 24

1) Ekstrak bunga kenikir diambil 100 mg dimasukkan ke dalam

tabung reaksi

2) Ditambahkan dengan 2 ml larutan FeCl3 1%. Jika larutan

menghasilkan warna hijau kehitaman atau biru tua, maka ekstrak

tersebut mengandung tanin (Silviani et al., 2023).

e. Uji saponin

1) Ekstrak bunga kenikir diambil 100 mg

2) Dimasukkan dalam tabung reaksi

3) Ditambah air panas sebanyak 10 ml kemudian dikocok selama 1

menit, apabila menimbulkan busa ditambahkan HCl 1 N, bila busa

yang terbentuk dapat bertahan selama 10 menit dengan ketinggian

1-3 cm, maka ekstrak positif mengandung saponin (Silviani et al.,

2023).

f. Uji steroid

1) Ekstrak bunga kenikir diambil 100 mg

2) Dimasukkan dalam tabung reaksi, dilarutkan dalam 0,5 mL

kloroform dan ditambah dengan 0,5 mL asam asetat anhidrat.

3) Campuran ini selanjutnya ditambah dengan 2 ml H 2SO4 pekat

melalui dinding tabung tersebut.

4) Jika hasil yang diperoleh berupa cincin kecoklatan atau violet pada

perbatasan dua pelarut maka ekstrak tersebut menunjukkan adanya

triterpenoid, sedangkan jika hasil yang diperoleh terbentuk warna

hijau kebiruan maka ekstrak tersebut menunjukkan adanya steroid

(Silviani et al., 2023).

 25

4. Penetapan Kadar Flavonoid Total

a. Pembuatan dan Pengukuran Larutan Pembanding

1) Ditimbang 25 mg rutin standar dan ditambahkan 25 mL etanol P

melalui kertas saring sehingga dihasilkan larutan induk standar

rutin 1.000 ppm.

2) Larutan induk standar rutin diencerkan hingga diperoleh

konsentrasi masing-masing 80, 100, 150, 200, 230, dan 250 ppm

secara berturut-turut.

3) Masing-masing konsentrasi larutan standar seri rutin dipipet 0,5

mL

4) Ditambahkan 1,5 mL etanol P, 0,1 mL a.P 10%, 0,1 mL natrium

asetat 1 M, dan 2,8 mL akuades.

5) Dikocok dan didiamkan selama 30 menit pada suhu ruang.

6) Diukur serapan pada panjang gelombang serapan maksimum

416,5 nm (Haresmita dan Pradani, 2022).

7) Dilakukan pengukuran blangko dengan cara yang sama tanpa

penambahan larutan standar dan aluminium klorida, lalu dibuat

kurva baku standar dengan persamaan regresi linier y = ax + b dari

hubungan antara konsentrasi rutin dengan absorbansi

b. Pengujian dan penetuan kadar flavonoid total

1) Sebanyak 0,1 g sampel dilarutkan dalam 10 mL dengan etanol P,

2) Diaduk dengan magnetic stirrer selama 30 menit.

3) Larutan disaring ke dalam labu ukur 10 mL

 26

4) Ditambahkan etanol melalui kertas saring hingga tanda batas

sehingga didapatkan larutan uji.

5) Larutan uji dipipet sebanyak 0,5 mL, kemudian ditambahkan 1,5

mL etanol P, 0,1 mL aluminium klorida P 10%, 0,1 mL natrium

asetat 1 M, dan 2,8 mL akuades.

6) Dikocok dan didiamkan selama 30 menit pada suhu ruang. Diukur

serapan pada panjang gelombang serapan maksimum 416,5 nm.

7) Dilakukan tiga kali pengulangan, lalu nilai absorbansi yang

diperoleh dimasukkan ke dalam persamaan regresi linier hingga

diperoleh kadar flavonoid dalam sampel yang ditunjukkan dengan

miligram rutin ekuivalen per gram sampel dengan satuan mg RE/g

dengan rumus :

C x V x fP
Total Flavonoid =
g

Keterangan:

C = Konsentrasi flavonoid total (nilai x)

V = Volume ekstrak (L)

fP = Faktor pengenceran

g = Berat sampel (gram)

(Wirasti, 2019).

5. Penetapan Kadar Fenolik Total

a. Pembuatan dan Pengukuran Larutan Pembanding

1) Disiapkan larutan pembanding asam galat 1000 ppm.

 27

2) Dilarutkan asam galat 10 mg dengan metanol hingga volume

mencapai 10 ml kemudian 2,5 ml larutan dipipet

3) Diencerkan dengan metanol sampai volume 25 ml hingga menjadi

konsentrasi 100 ppm.

4) Dipipet 1, 2, 3, 4, 5 ml dari larutan lalu ditambahkan dengan

metanol sampai 10 ml dan diperoleh konsentrasi 10, 20, 30, 40,

dan 50 ppm.

5) Tiap konsentrasi dipipet 0,2 ml dan ditambahkan dengan aquadest

sebanyak 15,8 ml dan sebanyak 1 ml FolinCiocalteu kemudian

dibiarkan (8 menit).

6) Ditambahkan sebanyak 3 ml Na2CO3 10% pada larutan lalu

dibiarkan (2 jam; suhu kamar).

7) Dilakukan pengukuran absorbansi pada panjang gelombang

maksimum 765 nm (3 replikasi) (Wirasti, 2019).

b. Pengujian dan penetuan kadar fenolik total

1) Ditimbang 10 mg ekstrak bunga kenikir kemudian dilarutkan

dengan metanol sampai 10 ml (1000 ppm) (Ahmad et al., 2015:

3).

2) Dipipet 0,2 ml dari larutan lalu dicampurkan sebanyak 15,8 ml

aquadest dan sebanyak 1 ml FolinCiocalteu dan dibiarkan (8

menit).

3) Ditambahkan sebanyak 3 ml Na2CO3 10% lalu dibiarkan (2 jam;

suhu kamar).
 28

4) Dilakukan pengukuran absorbansi pada panjang gelombang

maksimum 765 nm (3 replikasi).

5) Hasil kadar fenolik total dinyatakan sebagai mg GAE/g ekstrak.

Dihitung kadar fenolik total dengan rumus :

C x V x fP
Total Fenolik =
g

Keterangan:

C = Konsentrasi fenolik (nilai x)

V = Volume ekstrak (L)

fP = Faktor pengenceran

g = Berat sampel (gram)

(Wirasti, 2019).

6. Penetapan Kadar Tanin

a. Pembuatan Larutan Pembanding

1) Disiapkan larutan pembanding asam tanat 1000 ppm dengan

melarutkan asam tanat 10 mg dengan metanol sampai volume 10

ml

2) Sebanyak 2,5 ml larutan dipipet lalu diencerkan menggunakan

metanol hingga 25 ml sehingga diperoleh konsnetrasi 100 ppm.

3) Ddipipet 1, 2, 3, 4, 5 ml pada larutan lalu ditambahkan metanol

hingga volume 10 ml dan diperoleh seri konsentrasi 10, 20, 30, 40,

dan 50 ppm (Ahmad et al., 2015).

4) Sebanyak 0,1 ml dipipet dari larutan ditambahkan dengan 7,5 ml

aquadest dan sebanyak 0,1 ml Folin-Ciocalteu serta 2 ml dari

Na2CO3. Lalu diinkubasi (37°C; 30 menit)

 29

5) Dilakukan pengukuran absorbansi pada panjang gelombang

maksimum 760 nm (3 replikasi) (Wirasti, 2019).

b. Pengujian dan Penentuan Kadar Tanin Total

1) Ditimbang 10 mg ekstrak bunga kenikir kemudian dilarutkan

dengan metanol sampai 10 ml (1000 ppm) (Ahmad et al., 2015).

2) Sebanyak 0,1 ml dipipet dan dicampurkan dengan 7,5 ml aquadest

dan sebanyak 0,1 ml FolinCiocalteu serta 2 ml dari Na2CO3.

3) Diinkubasi (37°C; 30 menit)

4) Dilakukan pengukuran absorbansi pada panjang gelombang

maksimum 760 nm (3 replikasi).

5) Hasil kadar tanin total yang diperoleh dinyatakan mg TAE/g

ekstrak (Malangngi et al., 2012). Dihitung kadar tanin total dengan

rumus :

C x V x fP
Total Tanin =
g

Keterangan:

C = Konsentrasi tanin (nilai x)

V = Volume ekstrak (L)

fP = Faktor pengenceran

g = Berat sampel (gram)

(Ola et al., 2020)

G. Analisis Data

Data yang diperoleh pada penelitian adalah data kualitatif dan

kuantitatif. Data kualitatif, meliputi data skrining fitokimia simplisia (positif

atau negatif senyawa yang diidentifikasi). Sedangkan data kuantitatif, yaitu

 30

penetapkan kadar flavonoid total, total fenolik dan tanin total ekstrak daun

kenikir dengan metode Spektrofotometri UV-Vis. Dalam memperoleh data,

teknis yang digunakan adalah analisis data secara kuantitatif sehingga

dihasilkan data berupa angka-angka. Data penetapan kadar flavonoid, fenolik

dan tanin total diperoleh melalui persamaan regresi linear yaitu y = ax + b

pada kurva standar.

H. Jadwal Penelitian

Tabel 2. Jadwal Penelitian

Bulan
Jadwal
No. Desember
Penelitian
2023

1. Bimbingan
dengan
dosen
pembimbing
2. Studi
Pustaka
3. Penyusunan
Proposal
Tugas Akhir
4. Pelaksanaan
Penelitian
5. Analisis
Data
6. Penyusunan
Laporan
Akhir
31
 32

DAFTAR PUSTAKA

Christian, G., D., P. K. Dasgupta, and K. A. Schug. (2014). Analytical Chemistry,

Seventh Edition, John Wiley & Sons, Inc, United States.

Depkes RI. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat,

Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, Indonesia.
Fadillah, A., Rahmadani, A., & Rijai, L. (2017). Analisis Kadar Total Flavonoid
dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Kelubut (Passiflora foetida L.),
In Proceeding of Mulawarman Pharmaceuticals Conferences 5(1), 21-28.
Febrianti, N., & Sari, F. J. (2016). Kadar Flavonoid Total Berbagai Jenis Buah
Tropis Indonesia. Program Pendidikan Studi Biologi, FKIP. Yogyakarta:
Universitas Ahmad Dahlan, 607-612.
Gandjar, I. G. dan Rohman, A. (2007). Kimia Farmasi Analisis, Pustaka Pelajar,
Yogyakarta.

Hasnaeni, & Wisdawati, S. U. (2019). Pengaruh Metode Ekstraksi Terhadap

Rendemen dan Kadar Fenolik Ekstrak Tanaman Kayu Beta-Beta (Lunasia
amara Blanco). Jurnal Farmasi Galenika (Galenika Journal of
Pharmacy), 5(2), 175– 182.
https://doi.org/10.22487/j24428744.2019.v5.i2.13149.

Kristanti, W. Y., Budiyanto, M. A. K., & Permana, F. H. (2021). Effect of Various

Doses of Kenikir Flower Crown Extract (Targetes erecta L.) on Reducing
Blood Glucose Levels in Rats. Indonesian Journal of Biotechnology and
Biodiversity, 5(3), 95-105.

Khulbe, A. (2015). A review on Tagetes Erecta. World Journal of Pharmaceutical

Sciences, 3(3), 645-649.

Kurniati, F. (2021). Potensi Bunga Marigold (Tagetes erecta L.) Sebagai Salah
Satu Komponen Pendukung Pengembangan Pertanian, Media
Pertanian, 6(1).
 33

Kusmiati, Wijaya, I. G. A. K., & Yadi. (2018). Uji Potensi Antioksidan Ekstrak
Lutein Bunga Kenikir (Tagetes erecta) Berwarna Kuning dan Jingga
Dengan metode FRAP dan DPPH. Pros Sem Nas Masy Biodiv Indon, 4(2),
274–279. https://doi.org/10.13057/psnmbi/m040231.

Luliana, S., Riza, H., & Indriyani, E. N. (2019). The Effect of Extraction Method
on Total Phenolic Content and Antioxidant Activity of Salam Leaves
(Syzygium polyanthum) using DPPH (1,1-Diphenyl-2-Picrylhidrazil)tivity
of Salam L. MajalaTraditional Medicine Journal, 24(2), 72–76.
https://doi.org/10.22146/mot.33955.

Maanari, C. P., Suryanto, E., dan Pontoh, J. (2014). Aktivitas penangkal radikal
hidroksil fraksi flavonoid dari limbah tongkol jagung pada tikus Wistar,
Jurnal MIPA, 3 (2), 134–138.

Moffat, A. C., Osselton, M. D and Widdop, B. (2011). Textbook of Clarke’s

Analysis of Drugs and Poisons, Fourth Edition, Pharmarceutical Press,
London.

Muthukumaran, P., Saraswathy, N., Aswitha, V., Balan, R., & Gokhul, V. B.
(2013). Assessment of total phenolic, flavonoid, tannin content and
phytochemical screening of leaf and flower extracts from Peltophorum
pterocarpum (DC.) Backer ex K . Heyne : a comparative study,
Pharmacognosy Journal, 8(2), 140-143DOI:10.5530/pj.2016.2.7.
Pramitha, D. A. I., Suaniti, N. M., & Sibarani, J. (2018). Aktivitas antioksidan
bunga pacar air merah (Impatiens balsamina L.) dan bunga gemitir (Tagates
erecta L.) dari limbah canang. Chimica et Natura Acta, 6(1), 8-11.
Prasiddha, I. J., Laeliocattleya, R. A., Estiasih, T., & Maligan, J. M. (2016).
Potensi Senyawa Bioaktif Rambut Jagung (Zea mays L.) Untuk Tabir Surya
Alami: Kajian Pustaka [In Press Januari 2016]. Jurnal pangan dan
agroindustri, 4(1), 40-45.

Rahayu, M. P., & Inanda, L. V. (2015). Penetapan Kadar Fenol Total Ekstrak Etil
Asetat dan Fraksi Dichloromethan-Etil Asetat Kulit Batang Mundu
(Garcinia dulcis. Kurz). Biomedika, 8(2), 37-44.
 34

Ramayani, S. L., Nugraheni, D. H., & Wicaksono, A. R. E. (2021). Pengaruh

Metode Ekstraksi Terhadap Kadar Total Fenolik dan Kadar Total Flavonoid
Daun Talas (Colocasia esculenta L.). Jurnal Farmasi (Journal of
Pharmacy), 10(1), 11-16.

Rollando dan E. Monica. (2018). Penetapan Kandungan Fenolik Tital dan Uji
Aktivitas Antioksidan Fraksi Air Ekstrak Metanol Kulit Batang Faloak
(Sterculia quadrifida R.BR), SCIENTIA Jurnal Farmasi dan Kesehatan. 8
(1), 29–36.

Santi, N. M. (2021). Aktivitas Antioksidan Ekstrak Bunga Gemitir (Tagetes erecta

Linn.), Jurnal Farmagazine, 8(1), 25-31.

Silviani, I., Kurniawan, K., & Lestari, I. T. (2023). Uji Perbandingan Aktifitas
Antioksidan Ekstrak Daun Kenikir (Cosmos Caudatus Kunth) Dan Daun
Leunca (Solanum Ningrum L) Dengan Metode DPPH (2,2-Difenil-1-
Pikrilhidrazil), Jurnal Ilmiah Global Farmasi, 1(1), 27–35.
Singh, Y., Gupta, A., & Kannojia, P. (2020). Tagetes erecta (Marigold) - A review
on its Phytochemical and Medicinal Properties. Current Medical and Drug
Research, 4(1), 1–6. https://doi.org/10.53517/cmdr.2581-5008.412020201.

Soenardjo, N., & Supriyantini, E. (2017). Analisis kadar tanin dalam buah
mangrove Avicennia marina dengan perebusan dan lama perendaman air
yang berbeda, Jurnal Kelautan Tropis, 20(2), 90-95,
https://doi.org/10.14710/jkt.v20i2.1701
Susanti, S., Sundari, R. S., Rizkuloh, L. R., & Mardianingrum, R. (2021).
PENGARUH perbedaan pelarut terhadap kadar fenol total dan aktivitas
antioksidan ekstrak gadung (Dioscorea hispida dennst.). Biopropal
Industri, 12(1), 43-49.

Valyova, M., Stoyanov, S., Markovska, Y., & Ganeva, Y. (2012). Evaluation of
In Vitro Antioxidant Activity and Free Radical Scavenging Potential of
Variety of Tagetes erecta L. Flowers Growing in Bulgaria. International
Journal of Applied Research in Natural Products, 5(2), 19–25.
 35

Wirasti. (2019). Penetapan Kadar Fenolik Total , Flavonoid Total , dan Uji
Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Benalu Petai (Scurrula atropurpurea
Dans.) Beserta Penapisan Fitokimia, Journal of Pharmaceutical and
Medicinal Sciences, 4(1), 1–5.
Widiyantoro, A., & Harlia. (2020). Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun
Kenikir (Cosmos Caudatus Kunth) Dengan Berbagai Metode Ekstraksi.
Indonesian Journal of Pure and Applied Chemistry, 3(1), 9–14.