PENETAPAN KADAR FENOLIK TOTAL EKSTRAK

METANOL DAN FRAKSI ETIL ASETAT KULIT BAWANG

PUTIH MERAH (Allium cepa L.)

Oleh:

1. Nabila Amanda P R (20380068)

2. Nurvika Audia (20390073)
3. Rahma Satya Yuda (20390075)
4. Riri Novianti (20380085)
5. Rostina Widia Susanti (20380089)
6. Selvi Yunita (20380092)
7. Triea Andhini (20380101)
8. Kevin Jusido Pratama (21380007 P)

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS MALAHAYATI
BANDAR LAMPUNG
2023
 KATA PENGANTAR

Dengan mengucapkan Puji syukur kehadirat Allah SWT yang telah

memberikan rahmat dan hidayah-Nya sehingga kami dapat menyelesaikan tugas
proposal Metodeologi dan Desain Penelitian ini tepat pada waktunya. Adapun
tujuan dari penulisan proposal ini adalah untuk memenuhi tugas dosen pada mata
kuliah Metodeologi dan Desain Penelitian. Selain itu, proposal ini juga bertujuan
untuk menambah wawasan tentang kimia farmasi yang berjudul “PENETAPAN
KADAR FENOLIK TOTAL EKSTRAK METANOL DAN FRAKSI ETIL
ASETAT KULIT BAWANG PUTIH MERAH (Allium cepa L.)” bagi para
pembaca dan juga bagi penulis.

Kami mengucapkan terimakasih kepada ibu apt. Ade Maria Ulfa, M.Kes.
selaku dosen mata kuliah Metodeologi dan Desain Penelitian yang telah
memberikan tugas ini sehingga dapat menambah pengetahuan dan wawasan. Kami
juga mengucapkan terimakasih kepada semua pihak yang telah membantu dalam
menyelesaikan proposal ini. Kami menyadari, proposal ini masih jauh dari kata
sempurna. Oleh karena itu, kritik dan saran yang membangunakan kami nantikan
demi kesempurnaan proposal ini.

Bandar Lampung, 4 Juli 2023

Penyusun

ii
 DAFTAR ISI

KATA PENGANTAR ........................................................................................... ii

DAFTAR ISI ......................................................................................................... iii

DAFTAR GAMBAR ..............................................................................................v

BAB I PENDAHULUAN .......................................................................................1

1.1 Latar Belakang ................................................................................................1
1.2 Rumusan Masalah ...........................................................................................3
1.3 Tujuan Penelitian ............................................................................................3
1.4 Manfaat Penelitian ..........................................................................................3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................4

2.1 Bawang Merah ................................................................................................4

2.2 Metabolit Sekunder dan Senyawa Fenolik. ....................................................4
2.2.1 Alkaloid .................................................................................................6
2.2.2 Flavonoid...............................................................................................6
2.2.3 Terpenoid ..............................................................................................7
2.2.4 Tanin......................................................................................................7
2.2.5 Saponin ..................................................................................................8
2.3 Menentukan Teknik Ekstraksi ........................................................................8
2.4 Ekstraksi .......................................................................................................10
2.4.1 Maserasi ..............................................................................................11
2.4.2 Perkolasi ..............................................................................................11
2.4.3 Refluks ................................................................................................11
2.4.4 Sokhlet.................................................................................................12
2.4.5 Fraksinasi ............................................................................................12
2.5 Spektrofotometri ...........................................................................................14
2.5.1 Pengertian Spektrofotometri ...............................................................14
2.5.2 Prinsip Kerja........................................................................................15
2.6 Spektrofotometri Visibel ..............................................................................18
2.7 Hipotesis .......................................................................................................19
2.8 Kerangka Pikir Penelitian .............................................................................20

iii
BAB III METODOLOGI PENELITIAN ..........................................................21

3.1 Waktu dan Tempat Penelitian.......................................................................21

3.2 Alat dan Bahan .............................................................................................21

3.3 Subjek Penelitian ..........................................................................................21

3.3.1 Populasi ...............................................................................................21
3.3.2 Sampel .................................................................................................21
3.4 Variabel Penelitian........................................................................................21
3.5 Prosedur Penelitian .......................................................................................22
3.5.1 Preparasi Sampel ............................................................................22
3.5.2 Ekstraksi Sampel ............................................................................22
3.6 Skrining Fitokimia ........................................................................................22
3.7 Fraksinasi ......................................................................................................24
3.8 Penetapan Kadar ...........................................................................................25

DAFTAR PUSTAKA ...........................................................................................27

iv
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Kulit bawang merah (Allium cepa L.)(Crongquist, 1981) ...................4
Gambar 2.2 Struktur Alkaloid ..................................................................................6
Gambar 2.3 Strukur Flavonoid.................................................................................7
Gambar 2.4 Struktur Tanin ......................................................................................8
Gambar 2.5 Struktur Saponin...................................................................................8
Gambar 2.6 Proses Fraksinasi ................................................................................13
Gambar 2.7 Diagram alat spektrofotometri UV-Vis ..............................................15

v
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Limbah kulit bawang merah (Allium cepa L.) biasa ditemukan di pasar- pasar

tradisional dan hasil dari industri rumah tangga. Limbah ini sebagian besar masih

kurang pemanfaatannya. Hal ini sangat disayangkan ternyata kulit bawang merah

masih mengandung senyawa-senyawa kimia yang berpotensi sebagai antiinflamasi,

menurunkan risiko kardiovaskular, antioksidan, diabetes, kanker, dan aterosklerosi

(Cazzole et al., 2013). Potensi tersebut karena kulit bawang merah mengandung

metabolit sekunder flavonoid dan triterpen. Senyawa metabolit sekunder yang

terdapat dalam kulit bawang merah sebagian besar merupakan senyawa fenolik.

Senyawa fenolik merupakan senyawa yang dihasilkan dari metabolisme

sekunder tumbuhan, memiliki satu atau lebih gugus hidroksil yang terikat pada

sebuah cincin aromatik (Nugroho, 2017). Senyawa fenolik memiliki sifat dapat

teroksidasi menyebabkan senyawa ini banyak digunakan sebagai antioksidan.

Senyawa fenolik dapat di identifikasi dengan mengekstraksi senyawa metabolit

sekunder untuk memisahkan senyawa dari jaringan tumbuhan (Sari, 2017). Ekstrak

yang diperoleh dari kulit bawang merah, selanjutnya difraksinasi untuk

memisahkan kandungan kimia berdasarkan kelarutannya. Fraksinasi merupakan

metode pemisahan senyawa organik berdasarkan kelarutan senyawa-senyawa.

Pemisahan senyawa organik menggunakan 2 pelarut yang tidak saling tercampur,

biasanya antara pelarut air dan pelarut organik. Teknik pemisahan cair-cair ini

biasanya menggunakan corong pisah atau separator.

1
 Larutan atau senyawa organik akan terdistibusi ke dalam fasenya masing-

masing. Tergantung pada kelarutannya terhadap fase tersebut. Hasil fraksinasi akan

terbentuk dua lapisan yaitu lapisan atas dan lapisan bawah. Lapisan tersebut

terbentuk berdasarkan bobot jenisnya. Bobot jenis yang lebih kecil akan menempati

lapisan atas (Nugroho, 2017). Etil asetat digunakan untuk memisahkan flavonoid

yang berbentuk aglikon dan flavonoid yang terikat dengan gula (Rhobinson, 1995).

Hasil dari fraksinasi yaitu berupa ekstrak kental, yang selanjutnya digunakan untuk

analisis kadar fenolik. Senyawa fenolik berbentuk cincin memiliki ikatan rantai

terkonjugasi dan memiliki gugus kromofor sehingga dapat dianalisis menggunakan

instrumen spektrofotometri UV-Vis. Mengingat peran penting dan fungsi senyawa

fenolik maka perlu dilakukan penetapan kadar fenolik total dari kulit bawang

merah. Penetapan kadar fenolik total dapat dihitung kadarnya menggunakan

instrumen spektrofotometri UV-Vis (Sari et al., 2020).

Spektofotometri UV-Vis merupakan pengukuran serapan cahaya di daerah

ultraviolet (200-350 nm) dan sinar tampak (350-800 nm) oleh suatu senyawa

(Zarwinda dan Sartika, 2018). Spektrofotometri UV-Vis melibatkan energi

elektronik yang cukup besar pada molekul yang dianalisis. Spektrofotometri UV-

Vis dapat digunakan untuk analisis kuantitatif suatu analit yang mengandung

molekul-molekul aromatik dan kromofor yang kuat dalam rentang UV.

Spektrofotometri UV-Vis mengacu pada hukum Lambert-Beer yang apabila

suatu cahaya monokromatik melewati suatu media (larutan), maka sebagian cahaya

akan diserap, sebagian lagi dipantulkan, dan sebagian lagi akan dipancarkan.

Spektrofotometri UV-Vis digunakan karena metode ini mudah digunakan, murah,

dan reliabel sehingga memberikan presisi yang baik untuk pengukuran kuantitatif

2
senyawa kimia.

Berdasarkan uraian di atas, maka akan dilakukan penelitian ekstraksi kulit

bawang merah, dan pemisahan fraksi etil asetat serta penetapan kadar fenolik

menggunakan instrumen spektrofotometri UV-Vis.

1.2 Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang di atas, maka dirumuskan suatu permasalahan

yaitu berapa banyak kandungan fenolik dari ekstrak kulit bawang merah sebelum

di fraksinasi dan berapa banyak kandungan fenolik ekstrak kulit bawang merah

pada fraksi etil asetat?

1.3 Tujuan Penelitian

Untuk mengetahui kadar fenolik total dari ekstrak kulit bawang merah sebelum

di fraksinasi dan kadar fenolik total fraksi etil asetat kulit bawang merah.

1.4 Manfaat Penelitian

Manfaat yang diharapkan dari penelitian ini adalah dapat dijadikan sumbangan

terhadap pengetahuan dan wawasan pemanfaatan bahan alam dari limbah kulit

bawang merah.

3
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Bawang Merah

Bawang merah termasuk tanaman yang menghasilkan limbah hasil

sampingan yang cukup besar dari hasil pengolahannya. Limbah sampingan tersebut

berupa kulit bawang merah yang jumlahnya berkisar antara 20-30% dari hasil

panen. Limbah kulit bawang belum di manfaatkan petani secara optimal.

Gambar 2.1 Kulit bawang merah (Allium cepa L.)(Crongquist, 1981)

Limbah kulit bawang merah merupakan limbah pasar tradisional dan industri

rumah tangga yang dapat dijadikan alternatif sebagai pupuk organik yang jarang

sekali dimanfaatkan, padahal limbah kulit bawang mempunyai kandungan unsur

makro yang sangat baik bagi tanaman diantaranya flavonoid, saponin, alkaloid, dan

piretin (Marthatina, 2017).

2.2 Metabolit Sekunder dan Senyawa Fenolik.

Metabolit sekunder adalah senyawa yang tidak terlibat langsung dalam

pertumbuhan, perkembangan, atau reproduksi mahluk hidup yang fungsinya masih

belum diketahui secara pasti (Advinda, 2018). Metabolit sekunder juga digunakan

sebagai penanda dan pengatur jalur metabolisme primer. Hormon tumbuhan yang

4
merupakan metabolit sekunder seringkali digunakan untuk mengatur aktivitas

metabolisme sel dan pertumbuhan suatu tumbuhan. Metabolit sekunder membantu

tumbuhan mengelola sebuah sistem keseimbangan yang rumit dengan lingkungan

dan beradaptasi mengikuti kebutuhan lingkungan. Warna yang diberikan oleh

metabolit sekunder dalam tumbuhan merupakan contoh yang bagus untuk

menjelaskan bagaimana sistem keseimbangan diterapkan. Melalui warna,

tumbuhan dapat menarik serangga untuk membantu proses penyerbukan dan juga

dapat berguna untuk bertahan dari serangan hewan.

Kebanyakan senyawa metabolit sekunder ini bersifat racun bagi hewan.

Senyawa ini hanya di produksi dalam jumlah sedikit, tidak terus-menerus, dan tidak

terlalu penting seperti metabolit primer dalam kelangsungan hidup tanaman. Ada

beberapa penggolongan metabolit sekunder, meliputi senyawa alkaloid, flavonoid,

terpenoid, dan tanin (Marlinda et al., 2012).

Senyawa fenolik merupakan senyawa metabolit sekunder yang terdapat

dalam tumbuhan dengan karakteristik memiliki cincin aromatik yang mengandung

satu atau dua gugus hidroksi (OH). Senyawa fenolik dibagi menjadi menjadi

beberapa kelompok, yaitu fenol sederhana, asam fenolat, fenilpropanoid, flavonoid,

dan tanin (Tatang, 2019).

Dalam tumbuhan, kelompok senyawa ini memiliki beberapa fungsi seperti,

pembangun dinding sel (lignin), pigmen bunga (antosianin), pengendali tumbuh

(flavonol), pertahanan (flavonoid), menghambat dan memacu perkecambahan

(fenol sederhana), dan bau-bauan (vanilin, metil salisilat) (Tatang, 2019).

5
2.2.1 Alkaloid

Alkaloid merupakan golongan senyawa yang mengandung nitrogen

aromatik dan paling banyak ditemukan di alam. Hampir seluruh senyawa alkaloid

berasal dari tumbuh-tumbuhan. Sebagian besar alkaloid berupa zat padat, tidak

berwarna, berasa pahit, memiliki efek farmakologis, dan umumnya sukar larut

dalam air, tetapi dapat larut dalam pelarut non-polar seperti, kloroform dan eter.

Alkaloid merupakan turunan dari asam amino lisin, arnitin, fenilalanin, tirosin, dan

triptofan (Harborne, 1987). Alkaloid dalam bidang kesehatan dipakai sebagai

antitumor, antipiretik, analgesik, pemacu sistem saraf, menaikkan dan menurunkan

tekanan darah, serta melawan infeksi mikrobia (Fatmawati, 2019).

Gambar 2.2 Struktur Alkaloid

2.2.2 Flavonoid

Flavonoid merupakan salah satu golongan fenol alam terbesar. Flavonoid

mempunyai banyak manfaat diantaranya, sebagai antioksidan, antimutagenik,

antineoplastik (anti tumor atau parkista), dan vasodilator (melebarkan pembuluh

darah). Antioksidan pada flavonoid berperan mencegah kerusakan oksidatif yang

timbul oleh radikal bebas sehingga flavonoid dapat digunakan untuk

mengendalikan sejumlah penyakit pada manusia. Kemampuan flavonoid dalam

menangkap radikal bebas 100x lebih efektif dibandingkan vitamin C dan 25x lebih

efektif di banding vitamin E (Nugroho, 2017).

6
 Beberapa flavonoid, seperti morin, fisetin, kuersetin, katekin, dan gosipetin

berkhasiat sebagai antioksidan dan dapat menghambat oksidasi LDL (low density

lipoprotein). Bagi organisme yang menghasilkannya, flavonoid berfungsi

melindungi tumbuhan dari sinar UV, serangga, fungi, virus, dan bakteri sebagai

atraktan pollinator, antioksidan, kontrol hormon, dan penghambat enzim

(Rhobinson, 1995). Salah satu jenis flavonoid adalah isoflavon pada kedelai yang

dipercaya dapat mengobati kanker dan baik untuk kesehatan reproduksi.

2.2.3 Terpenoid

Terpenoid merupakan senyawa kimiawi tumbuhan yang memiliki bau dan

dapat diisolasi dengan penyulingan sebagai minyak atsiri. Terpenoid mengandung

komponen aktif obat alam yang dapat digunakan untuk menyembuhkan berbagai

penyakit seperti diabetes dan malaria. Bagi organisme penghasil, terpenoid

berfungsi sebagai isektisida, fungisida, antipemangsa, antibakteri, dan antivirus

(Rhobinson, 1995).

Gambar 2.3 Strukur Flavonoid

2.2.4 Tanin

Tanin merupakan senyawa polifenol. Tanin memberikan rasa pahit, sepat,

dan bau yang memusingkan. Rasa yang pahit ini tidak disukai serangga sehingga

tanin dapat berfungsi sebagai antiserangga bagi organisme yang menghasilkan.

Tanin terdistribusi pada hampir semua jenis tanaman dengan letak dan jumlah yang

7
berbeda. Senyawa-senyawa tanin ditemukan pada banyak jenis tumbuhan. Senyawa

ini berperan penting untuk melindungi tumbuhan dari pemangsaan oleh herbivora,

dan hama serta sebagai agen pengatur dalam metabolisme tumbuhan

(Lisnawati, 2018).

2.2.5 Saponin

Gambar 2.4 Struktur Tanin

Saponin merupakan senyawa yang mempunyai bobot molekul tinggi dan

Gambar 2.5 Struktur Saponin

tersebar pada beberapa tumbuhan. Saponin merupakan bentuk glikosida dengan

adanya molekul gula yang terikat pada aglikon triterpen atau steroid. Saponin juga

dapat digunakan sebagai sabun. Adapun beberapa dari triterpen yang memiliki rasa

pahit, seperti halnya pada limonin yang berada dalam buah jeruk terutama pada

bagian kulitnya (Hanani,2015).

2.3 Menentukan Teknik Ekstraksi

Dengan Pelarut Yang Tepat Dalam melakukan ekstraksi harus ditentukan

teknik ekstraksi dan jenis pelarut yang tepat disesuaikan dengan sifat fisik dan kimia

8
dari bahan baku maupun metabolit sekundernya. Selain itu, faktor

efisiensi juga harus dipertimbangkan untuk mendapatkan rendemen yang tinggi

dengan kualitas yang tetap terjaga. Tetapi dengan waktu ekstraksi yang lebih

singkat, pelarut yang lebih sedikit, biaya yang lebih murah, serta resiko yang lebih

rendah. Itu semua harus menjadi dasar pertimbangan dalam pemilihan teknik

ekstraksi.

Jenis pelarut juga memainkan peranan penting dalam menunjang

keberhasilan ekstraksi. Ada banyak jenis pelarut organik yang dapat digunakan

dalam ekstraksi bahan alam seperti, heksana, butanol, kloroform, etil asetat, aseton,

metanol, etanol, ataupun akuades. Setiap pelarut memiliki sifat berbeda- beda

seperti, nilai polaritas, titik didih, viskositas, dan tingkat kelarutan pada air. Hal ini

menjadi pertimbangan utama dalam pemilihan jenis pelarut yang disesuaikan

dengan sifat fisik dan kimia dari bahan dan metabolit sekunder yang akan diekstrak.

Secara prinsip, dibutuhkan tingkat kepolaran yang mirip antara pelarut

dengan metabolit yang akan diekstrak sehingga proses pelarutannya maksimal.

Tetapi, perlu juga diperhatikan jenis pelarut yang memiliki daya perusakan yang

kuat terhadap dinding sel dan jaringan sehingga proses ekstraksi juga berjalan lebih

optimal. Jika menginginkan ekstraksi terhadap berbagai macam senyawa metabolit

sekunder dengan spektrum yang luas, maka pelarut dengan sifat kepolaran yang

luas atau berada pada nilai tengah dapat digunakan, seperti metanol, etanol, atau

aseton. Tabel di bawah ini, menampilkan sifat-sifat beberapa pelarut organik yang

umum digunakan untuk ekstraksi.

9
Tabel 2.1 Sifat – sifat pelarut organik yang umum digunakan untuk ekstraksi

Masing-masing pelarut memiliki perbedaan rentang harga yang jauh

berbeda. Akuades, etanol, metanol, dan aseton termasuk pelarut yang mudah

didapat dengan harga yang relatif lebih rendah karena penggunaanya yang banyak

pada berbagai bidang. Sehingga secara ekonomi harganya akan lebih murah,

sedangkan pelarut yang jarang digunakan secara umum seperti, kloroform, butanol,

dan etil asetat yang cenderung lebih mahal (Nugroho, 2017).

2.4 Ekstraksi

Ekstraksi adalah pengambilan senyawa-senyawa metabolit sekunder yang

menjadi target untuk dipisahkan dari biomasa atau ampas atau bagian yang tidak

diperlukan karena sifatnya yang mengganggu baik dalam penyajian maupun karena

mengganggu efektivitas khasiat dari bahan aktifnya. Prinsip proses ekstraksi

dimulai dengan proses pembukaan jaringan atau dinding sel dengan perlakuan

panas, yang dilanjutkan dengan proses penarikan senyawa target menggunakan

pelarut organik yang sesuai. Berdasarkan prinsip kedekatan sifat

kepolaran/polaritas dari senyawa dan pelarut (Tatang, 2019).

10
2.4.1 Maserasi

Maserasi merupakan metode ekstraksi yang paling sederhana dan kuno.

Meskipun demikian, metode ini masih secara luas digunakan karena beberapa

kelebihannya, seperti biaya yang murah, peralatan yang sederhana, serta tanpa

perlakuan panas sehingga menjadi pilihan tepat untuk ekstraksi senyawa-senyawa

yang tidak tahan panas (termolabile) (Nugroho, 2017).

2.4.2 Perkolasi

Perkolasi adalah prosedur yang paling sering digunakan untuk mengekstrak

bahan aktif dalam tumbuhan. Sebuah perkolator adalah wadah sempit berbentuk

kerucut terbuka di kedua ujungnya. Sampel tumbuhan padat dibasahi dengan

sejumlah pelarut yang sesuai dan dibiarkan selama kira-kira 4 jam dalam wadah

tertutup. Selanjutnya, bagian atas perkolator ditutup. Pelarut ditambahkan hingga

merendam sampel. Campuran sampel dan pelarut dapat dimaserasi lebih lanjut

dalam wadah perkolator tertutup selama 24 jam. Saluran keluar perkolator

kemudian dibuka dan cairan yang terkandung di dalamnya dibiarkan menetes

perlahan. Pelarut dapat ditambahkan sesuai kebutuhan sampai ukuran perkolasi

sekitar tiga perempat dari volume yang diperlukan dari produk jadi (Nugroho,

2017).

2.4.3 Refluks

Refluks berarti pelarut yang diputar kembali atau di-recycle secara continue

melalui pengkondensasian berulang pada sebuah alat kondensor. Pada metode ini,

bahan yang akan diekstrak direndam pada pelarut dalam sebuah bejana/labu

berbentuk bulat dan ditempatkan pada sebuah pemanas (dapat menggunakan water

bath, heating mantle, atau hot plate). Bagian atas labu adasebuah lubang yang

11
dihubungkan dengan alat pendingin balik (kondesor). Lubang pada bejana tersebut

juga berguna untuk memasukkan dan mengeluarkan bahan, pelarut, maupun hasil

ekstraknya (Nugroho, 2017).

2.4.4 Sokhlet

Ekstraksi sokhlet hanya diperlukan apabila senyawa yang diinginkan

memiliki kelarutan terbatas dalam pelarut dan pengotor tidak larut dalam pelarut

itu. Jika senyawa yang diinginkan memiliki kelarutan yang tinggi dalam suatu

pelarut, maka suatu penyaringan sederhana dapat digunakan untuk memisahkan

senyawa dari zat yang tidak larut. Keuntungan dari sistem ini adalah proses

ekstraksi cukup dilakukan dalam satu wadah, dimana secara continue pelarut yang

terkondensasi akan menetes dan merendam sampel tumbuhan dan membawa

senyawa terlarut ke labu penampung. Metode ini tidak dapat digunakan untuk

senyawa termolabile karena pemanasan yang berkepanjangan dapat menyebabkan

degradasi senyawa (Nugroho, 2017).

2.4.5 Fraksinasi

Fraksinasi berasal dari kata fraction atau bagian, secara harfiah dapat

diartikan sebagai mekanisme untuk memilah-milah atau memisah-misahkan suatu

kumpulan/kesatuan menjadi beberapa bagian (fraction/part) atau lebih mudahnya

dapat dikatakan sebagai proses pembagian kelompok. Sebuah ekstrak dari suatu

bahan tanaman dapat mengandung puluhan atau ratusan senyawa. Ada berbagai

macam tujuan dari fraksinasi. Fraksinasi dapat ditujukan untuk mendapatkan fraksi

(bagian) tertentu dari suatu ekstrak, dimana bagian itulah yang merupakan fraksi

aktif dan perlu dipisahkan dari fraksi lainnya yang kurang aktif. Tujuan lainnya

adalah dalam rangka mendapatkan ekstrak yang lebih murni sehingga perlu

12
dihilangkan senyawa-senyawa lain yang mengotori atau mengganggu. Fraksinasi

juga diperlukan ketika akan melakukan isolasi atau pemisahan satu senyawa

metabolit sekunder tunggal. Fraksinasi dapat dilakukan dengan beberapa teknik, di

antaranya adalah dengan liquid-iquid extraction (ekstraksi cairan- cairan) atau

menggunakan kolom kromatografi dengan fase diam dan fase gerak tertentu.

a. Fraksinasi liquid-liquid extraction

Fraksinasi dengan liquid-iquid extraction adalah pemisahan sekelompok

senyawa dari kumpulan senyawa dalam sebuah ekstrak yang telah dilarutkan pada

suatu pelarut dengan cara menambahkan jenis pelarut lain yang memiliki polaritas

berbeda dan tidak dapat bercampur antara keduanya (immiscible). Umumnya

fraksinasi dengan metode ini dilakukan dengan menggunakan labu pemisah

(separating funnel).

Gambar 2.6 Proses Fraksinasi

Kedua fase tersebut terbentuk setelah kedua pelarut beserta ekstrak yang ada

di dalamnya bercampur dengan cara dikocok lalu didiamkan selama beberapa saat.

Fase bagian atas ditempati oleh pelarut yang memiliki masa jenis lebih rendah dan

fase bagian bawah ditempati oleh pelarut dengan masa jenis lebih tinggi. Senyawa-

senyawa dari ekstrak tersebut akan bergerak dan terpisah dengan dua

kecenderungan mengikuti kedekatan sifat dari senyawa dengan pelarutnya.

13
Sejumlah senyawa akan bergabung bersama fase bagian atas dan ada sejumlah

senyawa lainnya akan bergabung dengan fase bagian bawah. Setelah masing-

masing fraksi tersebut dipisahkan, maka tahap selanjutnya adalah pengentalan atau

pengeringan fraksi dengan cara evaporasi menggunakan evaporator untuk

memisahkan pelarut dari fraksi ekstraknya (Nugroho, 2017).

b. Fraksinasi menggunakan kolom kromatografi

Teknik fraksinasi lainnya adalah dengan metode kromatografi kolom. Pada

dasarnya, prinsip kerjanya hampir sama dengan liquid-liquid extraction, yang

membedakan adalah media yang digunakan. Pada fraksinasi kromatografi kolom,

proses pembagian fraksinya dilakukan pada sebuah kolom dengan menggunakan

prinsip-prinsip kromatografi, di mana sama-sama mengaplikasikan prinsip tingkat

kepolaran/polaritas. Prinsip yang sama, seperti pada liquid-liquid extraction.

Kromatografi kolom dikenal fase gerak (mobile phase) dan fase diam (stationary

phase) (Nugroho, 2017).

2.5 Spektrofotometri

2.5.1 Pengertian Spektrofotometri

Spektrofotometer sesuai dengan namanya adalah alat yang terdiri dari

spektrometer dan fotometer. Spektrofotometer menghasilkan sinar dari spektrum

dengan panjang gelombang tertentu dan fotometer adalah alat pengukur intensitas

cahaya yang ditransmisikan atau diabsorbsi. Spektrofotometer digunakan untuk

mengukur energi relatif, jika energi tersebut ditransmisikan, direfleksikan atau

diemisikan sebagai fungsi panjang gelombang. Kelebihan spektrofotometerdengan

fotometer adalah panjang gelombang dari sinar putih dapat lebih di deteksi dan cara

ini diperoleh dengan alat pengurai, seperti prisma, grating atau celah optis.

14
Fotometer filter dari berbagai warna yang mempunyai spesifikasi melewatkan

trayek pada panjang gelombang tertentu (Gandjar,2007).

2.5.2 Prinsip Kerja

Spektrum elektromagnetik dibagi dalam beberapa daerah cahaya. Suatu

daerah akan diabsorbsi oleh atom atau molekul dan panjang gelombang cahaya

yang diabsorbsi dapat menunjukan struktur senyawa yang diteliti. Spektrum

elektromagnetik meliputi suatu daerah panjang gelombang yang luas dari sinar

gamma gelombang pendek berenergi tinggi sampai pada panjang gelombang mikro

(Marzuki, 2012).

Keuntungan utama metode spektrofotometri adalah memberikan cara

sederhana untuk menetapkan kuantitas zat yang sangat kecil. Selain itu, hasil yang

diperoleh cukup akurat, di mana angka yang terbaca langsung dicatat oleh detektor

dan tercetak dalam bentuk angka digital ataupun grafik yang sudah diregresikan

(Yahya S, 2013). Secara sederhana instrumen spektrofotometer terdiri dari :

Gambar 2.7 Diagram alat spektrofotometri UV-Vis

a) Sumber sinar polikromatis berfungsi sebagai sumber sinar polikromatis

dengan berbagai macam rentang panjang gelombang.

b) Monokromator berfungsi sebagai penyeleksi panjang gelombang, yaitu

mengubah cahaya yang berasal dari sumber sinar polikromatis menjadi

cahaya monokromatis. Pada gambar di atas, disebut sebagai pendispersi atau

15
 penyebar cahaya dengan adanya pendispersi hanya satu jenis cahaya atau

cahaya dengan panjang gelombang tunggal yang mengenai sel sampel. Pada

gambar di atas, hanya cahaya hijau yang melewati pintu keluar. Proses

dispersi atau penyebaran cahaya, seperti yang tertera pada gambar.

c) Sel sampel berfungsi sebagai tempat meletakan sampel UV dan UV-Vis

menggunakan kuvet sebagai tempat sampel. Kuvet biasanya terbuat dari

kuarsa atau gelas, namun kuvet dari kuarsa yang terbuat dari silika memiliki

kualitas yang lebih baik.

d) Detektor berfungsi menangkap cahaya yang diteruskan dari sampel dan

mengubahnya menjadi arus listrik. Macam-macam detektor, yaitu detektor

foto (photo detector), photocell, misalnya, CdS, phototube, hantaran foto,

dioda foto, dan detektor panas.

e) Read out merupakan suatu sistem baca yang menangkap besarnya isyarat

listrik yang berasal dari detektor. Hal-hal yang harus diperhatikan dalam

spektrofotometri adalah pada saat pengenceran alat-alat pengenceran harus

betul-betul bersih tanpa adanya zat pengotor, dalam penggunaan alat-alat

harus betul-betul steril, jumlah zat yang dipakai harus sesuai dengan yang

telah ditentukan, dalam penggunaan spektrofotometri UV sampel harus

jernih dan tidak keruh, dan dalam penggunaan spektrofotometri UV-Vis

sampel harus berwarna.

2.5.3 Hukum Lambert Beer

Cahaya yang diserap diukur sebagai absorbansi (A), sedangkan cahaya yang

dihamburkan diukur sebagai transmitansi (T), dinyatakan dengan hukum Lambert-

Beer atau Hukum Beer, berbunyi: "Jumlah radiasi cahaya tampak (ultraviolet,

16
inframerah, dan sebagainya) yang diserap atau ditransmisikan oleh suatu larutan

merupakan suatu fungsi eksponen dari konsentrasi zat dan tebal larutan" (Junaidi,

2017).

2.5.4 Faktor Yang Mempengaruhi Penyerapan UV-Vis

a) Kromofor

Kromofor merupakan semua gugus atau atom dalam senyawa organik yang

mampu menyerap sinar ultra-violet dan sinar tampak. Contoh gugus kromofor,

yaitu: alkena, alkuna, karbonil, karboksil, amida, nitro, dan nitrat. Selain kromofor,

pada molekul organik juga dikenal istilah auksokrom yang merupakan gugus

fungsionil yang mempunyai elektron bebas, seperti : -OH, -O, NH, dan -OCH.

Terikatnya gugus auksokrom pada gugus kromofor akan mengakibatkan

pergeseran pita absorbsi menuju ke panjang gelombang yang lebih besar (Gandjar,

2012).

b) Pilihan pelarut

Spektrum serapan UV sebagian besar tergantung pada pelarut yang

digunakan untuk melarutkan suatu sampel. Sampel akan menyerap sinar UV secara

maksimal pada suatu pelarut dan menyerap sinar UV secara minimal pada pelarut

lain sehingga pemilihan pelarut sangat penting (Gandjar, 2012).

c) Pengaturan suhu

Suhu rendah menawarkan pita serapan senyawa obat yang lebih tajam

daripada suhu kamar. Resolusi vibrasional akan lebih karena level vibrasional yang

ditempati lebih sedikit dari tingkat interaksi solut-pelarut diminimalkan (Gandjar,

2012).

17
d) Ion-ion organik

Sifat kromoforik yang terdapat dalam senyawa anorganik ada 2, yaitu

melibatkan beberapa atom seperti MnO4 dan CrO2 dan yang melibatkan atom

tunggal yang memiliki kulit elektron terluar d- yang tidak lengkap (Gandjar, 2012).

2.5.5 Warna Komplementer

Apabila radiasi atau cahaya putih dilewatkan melalui larutan yang berwarna,

maka radiasi dengan panjang gelombang tertentu akan diserap secara selektif dan

radiasi sinar lainnya akan diteruskan. Absorbansi maksimum dari larutan berwarna

terjadi pada daerah warna yang berlawanan dengan warna yang diamati, misalnya

larutan berwarna merah akan menyerap radiasi maksimum pada daerah warna

hijau. Dengan kata lain, warna yang diserap adalah warna komplementer.

2.6 Spektrofotometri Visibel

Pada spektrofotometri ini yang digunakan sebagai sumber sinar/energi adalah

cahaya tampak (visible). Cahaya visibel termasuk spektrum elektromagnetik yang

dapat ditangkap oleh mata manusia. Panjang gelombang sinar tampak adalah 380

sampai 750 nm, sehingga semua sinar yang dapat dilihat oleh kita, entah itu putih,

merah, biru, hijau, atau apapun. Selama dapat dilihat oleh mata, maka sinar tersebut

termasuk ke dalam sinar tampak (visible). Sumber sinar tampak yang umum dipakai

pada spektro visibel adalah lampu tungsten. Sampel yang dapat dianalisis dengan

metode ini hanya sampel yang memilki warna. Hal ini menjadi kelemahan tersendiri

dari metode spektrofotometri visibel. Oleh karena itu, untuk sampel yang tidak

memiliki warna harus terlebih dulu dibuat berwarna dengan menggunakan reagen

spesifik (Sundari, 2015).

18
2.7 Hipotesis

Ho: Ada perbedaan kadar fenolik ekstrak bawang merah sebelum dan sesudah di

fraksinasi.

H: Tidak ada perbedaan kadar fenolik ekstrak bawang merah sebelum dan

sesudah di fraksinasi.

19
2.8 Kerangka Pikir Penelitian

Kerangka konsep pengerjaan ekstrak kulit bawang putih sebagai antibakteri

adalah sebagai berikut:

Serbuk simplisia

Maserasi

Skrining Fitokimia
Fraksi etil asetat
Ekstrak Metanol • Uji flavonoid
• Uji alkaloid
• Uji tanin
• Ujisaponin
• Uji steroid

Uji kadar fenolik ekstrak dan fraksi etil asetat

menggunakan spektrofotometri UV-Vis

Gambar 2.1 Kerangka Penelitian

20
 BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

3.1 Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian dilaksanakan dari bulan juli di Laboratorium FMIPA Universitas

Lampung dan Laboratorium Kimia Universitas Malahayati..

3.2 Alat dan Bahan

Adapun peralatan yang digunakan dalam penelitian ini, yaitu blender,

maserator, batang pengaduk, timbangan analitik (Diamond), spatula, beaker glass,

erlenmeyer, tabung reaksi, evaporator (Heidolph VV2000), oven, corong pisah

(Duran) 100 mL, pipet volume, labu ukur (iwaki dan Pyrex) 100 mL, 50 mL, dan

10 mL, kuvet, spektrofotometri UV-Vis (Genesys 10S).

Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah kulit bawang merah,

metanol 97%, akuades, bubuk Mg, asam galat, HCI pekat, HCl 1%, akuades, FeCl3

1%, Na2CO3 7%, reagen Meyer, reagen Folin Ciocalteau, kloroform, n- heksan,

dan etil asetat..

3.3 Subjek Penelitian

3.3.1 Populasi

Populasi dari penelitian ini adalah kulit bawang merah (Allium cepa L.).

3.3.2 Sampel

Kulit bawang merah dikumpulkan dari pedagang bawang merah di pasar

Bandar Lampung.

3.4 Variabel Penelitian

Variabel yang digunakan dalam penelitian ini terdiri dari 3 variabel, meliputi:
3.1 Variabel bebas, yaitu penetapan kadar fenolik.

21
3.2 Variabel terkontrol, yaitu mengunakan pelarut metanol.

3.3 erikat, yaitu fraksi etil asetat.

3.5 Prosedur Penelitian

3.5.1 Preparasi Sampel

Kulit bawang merah yang digunakan adalah bagian kulit terluar pertama dan

kedua. Kulit bawang merah yang terkumpul kemudian disortasi dan dicuci

menggunakan air mengalir. Kemudian kulit bawang merah dikeringkan dengan

cara diangin-anginkan. Selanjutnya, kulit bawang merah disortasi kering untuk

memisahkan kulit bawang merah yang rusak karena pengeringan. Setelah itu, kulit

bawang merah dihaluskan dengan menggunakan blender.

3.5.2 Ekstraksi Sampel

Metode ekstraksi yang digunakan adalah maserasi dengan menggunakan

pelarut metanol sebanyak 5 L. Serbuk kulit bawang merah sebanyak 246 gr

dimasukkan ke dalam wadah (Maserator) dan direndam dengan 2 L pelarut diaduk

dalam wadah tutup dengan alumunium foil dan didiamkan selama 24 jam. Setelah

24 jam disaring dengan kertas saring. Remaserasi dilakukan tiap 1x24 jam dengan

1,5 L pelarut sampai warnanya mendekati bening. Maserat yang diperoleh

selanjutnya dievaporasi dengan rotary evaporator pada temperatur 50°C untuk

menghilangkan pelarutnya sampai didapat ekstrak yang cukup pekat, lalu di oven

hingga terbentuk ekstrak pasta.

3.6 Skrining Fitokimia

Skrining fitokimia hasil data yang didapati dari masing-masing identifikasi

senyawa akan disajikan dalam bentuk tabel dengan data kualitatif.

22
a) Identifikasi Alkaloid

Tambahkan 2 mL ekstrak etanol kulit bawang putih (Allium sativum L.) ke

dalam tabung A, dan tambahkan 2 mL ekstrak aseton kulit bawang putih (Allium

sativum L.) ke dalam tabung B, kemudian tambahkan beberapa mL HCl 1%.

Kemudian disaring. Filtrat kemudian diuji dengan reagen Meyer (HgCl2 + KI).

Endapan berwarna kuning pucat dan putih yang dihasilkan menunjukkan hasil

positif adanya senyawa alkaloid.

b) Identifikasi Flavonoid

Tambahkan 3 mL ekstrak etanol kulit bawang putih (Allium sativum L.) ke

dalam tabung A, dan tambahkan 3 mL ekstrak aseton kulit bawang putih (Allium

sativum L.) ke dalam tabung B, kemudian tambahkan 3 mL HCL pekat dan serbuk

Mg. Larutan yang berubah warna menjadi merah atau merah jingga menunjukkan

hasil positif adanya flavonoid.

c) Identifikasi Tanin

Tambahkan 2 mL ekstrak etanol kulit bawang putih (Allium sativum L.) ke

tabung A, dan tambahkan 2 mL ekstrak aseton kulit bawang putih (Allium sativum

L.) ke tabung B, dan tambahkan 3 tetes besi klorida (FeCl3). Larutan yang berubah

warna menjadi biru atau hijau kehitam menunjukkan hasil positif adanya tanin.

d) Identifikasi Saponin

Tambahkan 2 mL ekstrak etanol kulit bawang putih (Allium sativum L.) ke

dalam tabung A, dan tambahkan 2 mL ekstrak aseton kulit bawang putih (Allium

sativum L.) ke dalam tabung B, dan tambahkan aquadest hingga terendam

seluruhnya, panaskan selama 5 menit. Setelah dingin, kocok kuat hingga terbentuk

berbusa. Pembentukan busa atau buih yang stabil ± 10 menit setinggi 1–10 cm

23
menunjukkan adanya saponin.

e) Uji Steroid/triterpen

Sebanyak 2 mL. ekstrak kulit bawang merah dimasukkan ke dalam tabung

reaksi ditambahkan beberapa tetes kloroform. Kemudian ditambahkan pereaksi

Liebermann Burchard (asam asetat anhidrat dan asam sulfat pekat). Reaksi positif

akan ditunjukkan dengan adanya cincin berwarna jingga atau ungu untuk

triterpenoid dan steroid dengan warna hijau kebiruan.

3.7 Fraksinasi

Fraksinasi atau ekstraksi cair - cair dilakukan terhadap ekstrak metanol

dengan urutan pelarut n-heksan dan etil asetat di dalam corong pisah. Ekstrak kulit

bawang merah ditambah 50 mL campuran metanol akuades (1:9) yaitu, 5 mL

metanol: 45 mL akuades diaduk sampai semua ekstrak terlarut. Selanjutnya

campuran dimasukkan ke dalam corong pisah dan dilakukan fraksinasi

menggunakan pelarut n-heksan dengan perbandingan metanol akuades 50 mL : n-

heksan 50 mL (1:1). Campuran dikocok dan dibiarkan hingga terbentuk dua lapisan,

yaitu, lapisan fraksi n-heksan (atas) dan lapisan metanol (bawah). Fase n- heksan

dimasukkan dalam wadah (erlenmeyer), sedangkan fase ekstrak metanol

difraksinasi kembali hingga diperoleh fase n-heksan berwarna bening, lakukan 2-3

kali pengulangan. Fase ekstrak metanol difraksinasi kembali menggunakan pelarut

etil asetat dengan perbandingan (1:1) dan dilakukan secara berulang hingga berubah

warna menjadi bening (tidak pekat) 3-4 kali pengulangan. Fase etil asetat yang telah

dikumpulkan kemudian dipekatkan. Hasil fraksi etil asetat dilakukan penetapan

kadar fenolik menggunakan spektrofotometri UV-Vis.

24
3.8 Penetapan Kadar

a) Pembuatan larutan standar asam galat

Larutan standar asam galat 100 ppm dibuat dengan melarutkan 10 mg asam

galat ke dalam 100 mL metanol. Kemudian dari larutan standar dibuat konsentrasi

50 ppm; 40 ppm; 30 ppm; 20 ppm; dan 10 ppm. Masing-masing larutan standar

asam galat ditambahkan 0,4 mL reagen Folin Ciocalteau dan 4 mL Na2CO3 7%.

b) Pembuatan larutan ekstrak dan fraksi etil asetat

Larutan sampel ekstrak kulit bawang merah 100 ppm dibuat dengan

menimbang 10 mg ekstrak kulit bawang merah dimasukkan ke dalam labu ukur 100

mL kemudian ditambahkan metanol sampai tanda tera. Larutan sampel ekstrak kulit

bawang merah 50 ppm dipipet sebanyak 5 mL ke dalam labu ukur 10 mL, kemudian

ditambahkan 0,4 mL reagen Folin Ciocalteau, 4 mL Na2CO3 7% dan dicukupkan

volumenya sampai tanda tera dengan metanol. Larutan fraksi etil asetat dibuat

dengan cara yang sama.

c) Pembuatan larutan untuk penentuan operating time

Larutan asam galat 50 ppm diambil sebanyak 1 mL, ditambahkan 0,4 mL

reagen Folin Ciocalteau dan 4 mL Na2CO3 7%.

d) Pengukuran menggunakan spektrofotometri UV-Vis

1. Penentuan operating time

Larutan untuk operating time yang telah dibuat, diukur absorbansinya, dan

diamati setiap menit selama 20 menit pada panjang gelombang 400-800 nm.

2. Penentuan panjang gelombang maksimum

Larutan untuk penentuan panjang gelombang maksimum yang telah

dibuat, diukur absorbansinya pada panjang gelombang 400-800 nm.

25
3. Pembuatan kurva kalibrasi asam galat

Larutan dengan seri konsentrasi yang telah dibuat, diukur absorbansinya

pada panjang gelombang yang diperoleh pada pengukuran panjang gelombang

maksimum.

4. Pengukuran kadar fenolik pada ekstrak dan fraksi etil asetat

Larutan sampel yang telah dibuat, diukur absorbansinya dengan

spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum. Analisis kadar

fenolik ditentukan berdasarkan persamaan regresi linier y = a + bx, dimana y

adalah serapan dan x adalah konsentrasi dalam mg/100 gram

(Zarnila et al., 2018)

26
 DAFTAR PUSTAKA

Advinda, L. (2018). Dasar-Dasar Fisiologi Tumbuhan. Padang: Deepublish.

Cazzola, R., Camerotto, C., & Cestaro, B. (2011). Anti-oxidant, anti-glycant, and
inhibitory activity against α-amylase and α-glucosidase of selected spices
and culinary herbs. International Journal of food sciences and
nutrition, 62(2), 175-184.

Fatmawati, S.( 2019). Bioaktivitas Dan Konstituen Kimia Tanaman Obat Indonesia.
Yogyakarta: Deepublish.

Gandjar, I. G., & Rohman, A. (2007). Kimia farmasi analisis. Yogyakarta: Pustaka
Pelajar, 224, 228.

Gandjar, I. G., & Rohman, A. (2012). Analisis obat secara spektrofotometri dan
kromatografi. Yogyakarta: Pustaka Pelajar, 316, 368-381.

Hanani, E. (2015). Analisis Fitokimia. Jakarta: Buku Kedokteran Egc. Hal. 8-20.

Marlinda, M., Sangi, M. S., & Wuntu, A. D. (2012). Analisis senyawa metabolit
sekunder dan uji toksisitas ekstrak etanol biji buah alpukat (Persea
americana Mill.). Jurnal Mipa, 1(1), 24-28.

Marthatina, E. N. (2017). Pemanfaatan Limbah Kulit Bawang Merah Dan Bunga

Krisan Untuk Pengendalian Hama Lalat Buah Bactrocera dorsalis
complex (Diptera: Tephritidae) (Doctoral dissertation, Universitas
Brawijaya).

Nugroho, A. (2017). Buku Ajar: Teknologi Bahan Alam. Banjarmasin : Lambung

Mangkurat University.

Robinson, T. (1995). Kandungan Senyawa Organik Tumbuhan Tinggi.

Diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata. Bandung: Institut
Teknologi Bandung

Sari, A. K., & Ayuchecaria, N. (2017). Penetapan kadar fenolik total dan flavonoid
total ekstrak beras hitam (Oryza sativa L) Dari Kalimantan Selatan. Jurnal
Ilmiah Ibnu Sina, 2(2), 327-335.

SUNDARI, N. A. (2015). ANALISA PENGARUH SOLVENT TERHADAP

KESTABILAN PIGMEN ANTOSIANIN PADA KULIT BUAH NAGA
PUTIH MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETER SPECTONIC
GENESYS 20 VISIBLE (Analysis Solvent Effect On Stability Pigments
Anthocyanin Of Skin White Dragon Fruit Using Spectrophotometer
Spectonic Genesys 20 Visible) (Doctoral dissertation, Undip).

27
Yahya, S. (2013). Spektrofotometri UV-Vis. Jakarta: Erlangga.

28