EFEKTIVITAS KONSENTRASI ASAM ALKOHOL

TERHADAP HASIL PEMERIKSAAN BASIL TAHAN ASAM

(BTA) METODE ZIEHL NEELSEN

PROPOSAL
SKRIPSI

Oleh :
NABILA AZZAHRA
NIM: PO.71.34.2.20.017

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA

POLITEKNIK KESEHATAN PALEMBANG
PROGRAM STUDI TEKNOLOGI LABORATORIUM MEDIS
PROGRAM SARJANA TERAPAN
TAHUN 2024
 EFEKTIVITAS KONSENTRASI ASAM ALKOHOL
TERHADAP HASIL PEMERIKSAAN BASIL TAHAN ASAM
(BTA) METODE ZIEHL NEELSEN

PROPOSAL
SKRIPSI

Diajukan Sebagai Salah Satu Syarat Untuk Memperoleh Gelar

Sarjana Terapan Kesehatan

Oleh:
NABILA AZZAHRA
NIM: PO.71.34.2.20.017

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA

POLITEKNIK KESEHATAN PALEMBANG
PROGRAM STUDI TEKNOLOGI LABORATORIUM MEDIS
PROGRAM SARJANA TERAPAN
TAHUN 2024

ii
 HALAMAN PERSETUJUAN

Proposal Skripsi dengan judul :

EFEKTIVITAS KONSENTRASI ASAM ALKOHOL

TERHADAP HASIL PEMERIKSAAN BASIL TAHAN ASAM
(BTA) METODE ZIEHL NEELSEN

Yang Dipersiapkan Oleh:

NABILA AZZAHRA
NIM: PO.71.34.2.20.017

Telah Diperiksa dan Disetujui Untuk Diseminarkan dihadapan

Dewan Penguji

Pembimbing Utama, Pembimbing

Pendamping,

Handayani, ST., MT Fandianta, S.Kom., MPH

NIP. 196910011990032001 NIP. 197902072005011002

iii
iv
 KATA PENGANTAR

Puji dan syukur penulis ucapkan kepada Tuhan yang Maha Esa atas
anugerah
dan penyertaan-Nya yang telah senantiasa memberikan kesehatan kepada penulis
sehingga dapat menyelesaikan Proposal Skripsi “Efektivitas Konsentrasi Asam
Alkohol Terhadap Hasil Pemeriksaan Basil Tahan Asam (BTA) Metode
Ziehl Neelsen”.
Dalam penulisan Proposal Skripsi ini banyak pihak-pihak yang telah ikut
membimbing, mengarahkan dan mengkritik serta dapat diselesaikan dengan baik.
kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada :
1. Muhammad Taswin, S.Si., Apt., MM., M.Kes, selaku Direktur Politeknik
Kesehatan Kemenkes Palembang.
2. Nurhayati, S.Pd., SKM., M.Kes selaku Ketua Jurusan Teknologi
Laboratorium Medis Palembang.
3. Abdul Mutholib, ST., MT selaku Ketua Program Studi Sarjana Terapan
Jurusan Teknologi Laboratorium Medis Palembang.
4. Handayani, ST., MT selaku Dosen Pembimbing Utama yang telah banyak
membantu dalam penyelesaian Proposal Skripsi ini.
5. Fandianta, S.Kom., MPH selaku Dosen Pendamping yang telah
memberikan saran dan masukan serta perbaikan untuk menyempurnakan
dalam penyusunan Proposal Skripsi ini.
6. Ardiya Garini, SKM., M.Kes selaku Dosen Pembimbing Akademik yang
telah memberikan banyak bantuan selama menempuh pendidikan di
kampus.
7. Seluruh dosen dan tenaga kependidikan Jurusan Teknologi Laboratorium
Medis Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan Palembang.
8. Kedua orang tua dan keluarga tercinta yang selalu mendoakan serta
memberikan dukungan dan semangat yang besar selama penyelesaian
proposal skripsi ini
9. Teman seperjuangan Teknologi Laboratorium Medis Angkatan 20 yang
memberikan semangat.

v
 Akhir kata penulis mengucapkan terima kasih kepada semua pihak yang
telah
terlibat dalam penulisan dan penyusunan Proposal Skripsi ini. Kiranya Proposal
Skripsi ini dapat berguna khususnya bagi penulis dan pembaca pada umumnya.

Palembang, Februari 2024

Penulis

vi
 DAFTAR ISI

HALAMAN SAMPUL LUAR.................................................................................i

HALAMAN SAMPUL DALAM ...........................................................................ii
HALAMAN PERSETUJUAN...............................................................................iii
KATA PENGANTAR............................................................................................iv
DAFTAR ISI...........................................................................................................vi
DAFTAR TABEL................................................................................................viii
DAFTAR GAMBAR..............................................................................................ix
DAFTAR LAMPIRAN............................................................................................x
BAB I PENDAHULUAN.......................................................................................1
1.1 Latar Belakang...........................................................................................1
1.2. Rumusan Masalah.....................................................................................4
1.3 Pertanyaan Penelitian.................................................................................4
1.4 Tujuan Penelitian...............................................................................4
1.4.1 Tujuan Umum.................................................................................4
1.5 Manfaat Penelitian.....................................................................................5
1.5.1 Manfaat Teoritis..............................................................................5
1.5.2 Manfaat Aplikatif............................................................................5
1.6 Ruang Lingkup Penelitian..........................................................................5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA..............................................................................6
2.1 Pengertian Tuberkulosis.............................................................................6
2.1.1 Morfologi dan Struktur Bakteri.......................................................6
2.1.2 Penularan Tuberkulosis...................................................................7
2.1.3 Faktor Risiko Tuberkulosis.............................................................7
2.1.4 Diagnosis Tuberkulosis...................................................................8
2.2 Pemeriksaan Mikroskopis Basil Tahan Asam (BTA)................................8
2.3 Pewarnaan Basil Tahan Asam (BTA) Metode Ziehl Neelsen...................9
2.4 Metode Pemeriksaan Laboratorium.........................................................12
2.5 Kerangka Konsep.....................................................................................13
2.6 Definisi Operasional................................................................................13
2.7 Hipotesis...................................................................................................14

vii
BAB III METODE PENELITIAN........................................................................15
3.1 Jenis Penelitian.........................................................................................15
3.2 Lokasi dan Waktu Penelitian...................................................................15
3.2.1 Lokasi Penelitian...........................................................................15
3.2.2 Waktu Penelitian...........................................................................15
3.3 Populasi dan Sampel Penelitian...............................................................15
3.3.1 Populasi Penelitian........................................................................15
3.3.2 Sampel Penelitian..........................................................................15
3.4 Teknik Sampling......................................................................................16
3.5 Jenis, Metode dan Instrumen Pengambilan Data.....................................16
3.5.1 Jenis Pengambilan Data................................................................16
3.5.2 Metode Pengambilan Data............................................................16
3.5.3 Instrumen Pengambilan Data........................................................16
3.6 Alur Penelitian.........................................................................................17
3.7 Analisa Data dan Interpretasi Hasil.........................................................18
3.7.1 Analisa Data..................................................................................18
3.7.2 Interpretasi Hasil...........................................................................18
3.8 Etik Penelitian..........................................................................................19
3.9 Jadwal Rencana Penelitian.......................................................................19
DAFTAR PUSTAKA
LAMPIRAN
BIODATA

viii
 DAFTAR TABEL

Tabel 2. 1 Definisi operasional..............................................................................13

Tabel 3. 1 Jadwal rencana penelitian.....................................................................19

ix
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2. 1 Mycobacterium tuberculosis...............................................................7

Gambar 2. 2 Mikroskopis BTA................................................................................9
Gambar 2. 3 Proses pewarnaan BTA.....................................................................12
Gambar 2. 4 Reagen pewarnaan BTA metode ziehl neelsen.................................12
Gambar 2. 5 Sediaan BTA yang sudah diwarnai...................................................12
Gambar 2. 6 Kerangka konsep...............................................................................13

Gambar 3. 1 Alur penelitian...................................................................................17

x
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 : Lembar Rekap Bimbingan Penyusunan Proposal Skripsi

Lampiran 2 : Instruksi Kerja Pemeriksaan
Lampiran 3 : Tabel Hasil Pemeriksaan

xi
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Tuberkulosis (TB) adalah penyakit infeksi saluran pernapasan yang
disebabkan oleh infeksi Mycobacterium tuberculosis. Bakteri ini umumnya
menyerang organ di paru-paru, namun ada pula yang menyerang area di luar paru-
paru, seperti kelenjar getah bening, kulit, usus atau saluran pencernaan, dan
selaput otak. Mycobacterium tuberculosis juga dikenal sebagai basil tahan asam
yaitu bakteri patogen intraseluler yang sangat kuat dan membutuhkan waktu yang
cukup lama untuk pengobatan. Infeksi tuberkulosis telah diketahui sejak lama dan
masih menjadi penyebab kematian utama di seluruh dunia. (Khariri, 2020)
Menurut data badan kesehatan dunia atau World Health Organization
(WHO), sebanyak 10,4 juta orang di seluruh dunia terinfeksi tuberkulosis. Dari
jumlah tersebut, 1,7 juta orang meninggal dan 400.000 di antaranya terinfeksi
HIV. Di negara dengan ekonomi menengah infeksi TB telah mengakibatkan lebih
dari 95% kematian. Tuberkulosis merupakan penyebab pertama kematian akibat
penyakit menular dan merupakan salah satu dari sepuluh penyakit paling
mematikan di dunia. Beberapa negara termasuk India, Tiongkok, Filipina,
Pakistan, Nigeria, dan Afrika Selatan, penyumbang 64% kasus TB paru. Indonesia
menempati urutan ketiga dari enam negara yang menyumbang 60% kasus
tuberkulosis dunia. (Khariri, 2020)
Bakteri tahan asam merupakan kelompok bakteri yang mempunyai sifat
khusus yaitu tahan terhadap dekolorisasi atau perubahan warna yang disebabkan
oleh asam alkohol, dan tergolong dalam bakteri gram positif. Kelompok bakteri
ini disebut juga Basil Tahan Asam (BTA) karena memiliki bentuk batang atau
basil. Ketahanan BTA terhadap asam dan alkohol pada proses pewarnaan
disebabkan karena bakteri ini mempunyai sifat tahan asam yaitu tingginya
kandungan peptidoglikan dan lipid pada dinding sel sehingga sel bersifat waxy
dan hidrofobik sehingga sulit untuk diwarnai. Kelompok bakteri yang tergolong
basil tahan asam adalah bakteri yang berasal dari genus Mycobacteria, salah satu
diantaranya adalah Mycobacterium tuberculosis patogen pemicu timbulnya
infeksi tuberkulosis. (Febriani et al., 2022)
Secara global pemeriksaan mikroskopis bakteri tahan asam telah disepakati
menggunakan pewarnaan metode Ziehl Neelsen. Zat warna yang digunakan dalam
pewarnaan Ziehl Neelsen adalah karbol fuchsin, asam alkohol, dan methylene
blue. Faktor yang dapat mempengaruhi pemeriksaan mikroskopis bakteri tahan
asam antara lain reagen larutan pewarnaan Ziehl Neelsen. Untuk mendapatkan
hasil pemeriksaan mikroskopis bakteri tahan asam perlu didukung oleh reagen
yang berkualitas. (Achmadi et al., 2021)
Pewarnaan khusus merupakan metode pewarnaan untuk mewarnai bagian
sel atau kuman tertentu yang sulit diwarnai dengan pewarnaan biasa. Metode yang
masih digunakan hingga saat ini untuk mencari bakteri BTA adalah pewarnaan
Ziehl Nielsen, yang dimana pada dinding terdapat lapisan lilin dan lemak yang
membuat cat sulit menembus. Karena pengaruh fenol dan panas maka lapisan lilin
dan lemak dapat menembus warna dasar fuchsin. Pada saat pencucian, lapisan
lilin dan lemak yang terbuka akan menutup kembali. Bahkan ketika pencucian
dengan alkohol asam, bakteri tahan asam tidak kehilangan warna pada fuchsin
tetapi bakteri tidak tahan asam akan luntur dan berwarna biru dari methylene blue
(Amelia et al., 2019)
Pemeriksaan BTA metode Ziehl Nelseen (ZN) merupakan metode
pemeriksaan yang direkomendasikan oleh WHO. Pemeriksaan metode ini masih
menjadi pilihan pertama untuk deteksi awal TB. Teknik ZN merupakan teknik
yang mudah, murah, dan mempunyai spesifisitas yang tinggi untuk mendeteksi
bakteri tahan asam (BTA) pada sputum. Rangkaian kegiatan yang baik diperlukan
untuk mendapatkan hasil yang akurat, mulai dari cara pengumpulan sputum,
pemilihan bahan sputum yang akan diperiksa, pembuatan sediaan apus sputum,
teknik pewarnaan dan alat-alat atau bahan/reagen harus diperhatikan kualitasnya.
(Misnarliah & Mudrika, 2021)
Penggunaan konsentrasi asam alkohol 3% merupakan standar IUALTD
yang ditetapkan. Larutan alkohol asam 3% berfungsi untuk membersihkan dan
melunturkan (menghilangkan warna) pada sel bakteri. Setelah sel bakteri mampu
menyerap warna karbol fuchsin, dinding sel akan menutup kembali pada suhu

2
semula sehingga perlu menunggu beberapa menit. Dan pada saat penambahan
alkohol asam, bakteri yang bukan BTA akan dilunturkan karena tidak dapat
berikatan dengan karbol fuchsin. Bakteri yang tahan terhadap zat warna ketika
ditambahkan alkohol asam disebut bakteri tahan asam, dan warnanya menjadi
merah setelah diwarnai. Bakteri yang tidak tahan terhadap asam mudah
dihilangkan dengan alkohol asam dan berwarna biru setelah dilakukan pewarnaan
dengan methylene blue. (Wulandari, 2018)
Pewarnaan sediaan baik jika latar belakang berwarna biru oleh methylene
blue sedangkan bakteri Mycobacterium tuberculosis akan menyerap zat warna
karbol fuchsin, BTA berwarna merah dan bukan BTA berwarna biru terang.
Pewarnaan jelek disebabkan karena pengecatan yang dilakukan terlalu tipis atau
terlalu tebal sehingga dapat menyebabkan bakteri Mycobacterium tuberculosis
tertutup oleh zat warna karbol fuchsin sehingga kuman sulit diamati dan dapat
mengakibatkan false negative atau false positive (bukan BTA ikut berwarna
merah) yang seharusnya berwarna biru. (Achmadi et al., 2021)
Dari penelitian (Amelia et al., 2019) telah dilakukan uji konsentrasi asam
alkohol (1%, 3%, 6%, 9%, dan 12%) dengan menggunakan reagen pewarnaan
karbol fuchsin 1% dan methylene blue 0,3% terhadap hasil pemeriksaan Bakteri
Tahan Asam (BTA) Metode Ziehl Neelsen dan didapatkan hasil yang sangat
berpengaruh pada kualitas pewarnaan BTA yaitu konsentrasi asam alkohol 12%.
Salah satu larutan yang digunakan untuk melunturkan zat warna dari karbol
fuchsin pada pewarnaan Ziehl Neelsen adalah konsentrasi asam akohol, komposisi
asam alkohol yaitu HCl (asam klorida) pekat dan alkohol 96%. Pada konsentrasi
asam alkohol digunakan untuk pelunturan zat warna dari karbol fuchsin.
Tahap dekolorisasi (pemberian alkohol asam) tidak boleh berlebihan.
Karena jika terlalu berlebih akan hampir sama dengan sel non BTA. Jika waktu
pemberian alkohol asam terlalu singkat, maka tidak akan luntur warna nya secara
sempurna sehingga masih ada sisa warna dari karbol fuchsin pada sediaan yang
mengakibatkan sel non BTA berwarna ungu mendekati sel BTA+ dan akan
mempengaruhi pembacaan mikroskop. (Wulandari, 2018)

3
 Berdasarkan dari latar belakang di atas, maka penulis/peneliti tertarik untuk
melakukan penelitian terkait “Efektivitas Konsentrasi Asam Alkohol Terhadap
Hasil Pemeriksaan Basil Tahan Asam (BTA) Metode Ziehl Neelsen”.
1.2. Rumusan Masalah
Berdasarkan pada uraian dan latar belakang diatas penulis bermaksud untuk
mengetahui bagaimana efektivitas konsentrasi asam alkohol terhadap hasil
pemeriksaan Basil Tahan Asam (BTA) metode Ziehl Neelsen

1.3 Pertanyaan Penelitian

1. Apakah ada pengaruh konsentrasi asam alkohol 1% terhadap pewarnaan
Basil Tahan Asam (BTA) metode Ziehl Neelsen?
2. Apakah ada pengaruh konsentrasi asam alkohol 6% terhadap pewarnaan
Basil Tahan Asam (BTA) metode Ziehl Neelsen?
3. Apakah ada pengaruh konsentrasi asam alkohol 9% terhadap pewarnaan
Basil Tahan Asam (BTA) metode Ziehl Neelsen?
4. Apakah ada perbedaan efektivitas pewarnaan antara konsentrasi asam
alkohol 1%, 6%, dan 9% dengan kontrol (konsentrasi asam alkohol 3%)?

1.4 Tujuan Penelitian

1.4.1 Tujuan Umum
Untuk mengetahui efektivitas konsentrasi asam alkohol terhadap hasil
pemeriksaan Basil Tahan Asam (BTA) metode Ziehl Neelsen

1.4.2 Tujuan Khusus

1. Untuk mengetahui pengaruh konsentrasi asam alkohol 1% terhadap
pewarnaan Basil Tahan Asam (BTA) metode Ziehl Neelsen
2. Untuk mengetahui pengaruh konsentrasi asam alkohol 6% terhadap
pewarnaan Basil Tahan Asam (BTA) metode Ziehl Neelsen
3. Untuk mengetahui pengaruh konsentrasi asam alkohol 9% terhadap
pewarnaan Basil Tahan Asam (BTA) metode Ziehl Neelsen

4
4. Untuk mengetahui perbedaan efektivitas pewarnaan antara konsentrasi
asam alkohol 1%, 6%, dan 9% dengan kontrol (konsentrasi asam alkohol
3%)

5
1.5 Manfaat Penelitian
1.5.1 Manfaat Teoritis
Dapat menambah wawasan ilmu pengetahuan khususnya pada bidang
Bakteriologi Klinis dan menerapkan ilmu yang telah didapatkan selama
perkuliahan di jurusan Teknologi Laboratorium Medis.

1.5.2 Manfaat Aplikatif

Sebagai bahan pembelajaran dan informasi bagi dosen, staff dan mahasiswa
jurusan Teknologi Laboratorium Medis Poltekkes Kemenkes Palembang,
khususnya di bidang Bakteriologi Klinis.

1.6 Ruang Lingkup Penelitian

Penelitian ini mencakup bidang Bakteriologi Klinis yang bertujuan untuk
mengetahui efektivitas konsentrasi asam alkohol terhadap hasil pemeriksaan Basil
Tahan Asam (BTA) metode Ziehl Neelsen. Jenis penelitian ini bersifat
eksperimental laboratorium dengan desain post test only dalam menentukan
seberapa besar efektivitas hasil pemeriksaan preparat BTA terhadap pewarnaan
Ziehl Neelsen menggunakan konsentrasi asam alkohol. Reagen yang digunakan
dalam penelitian ini yaitu Karbol Fuchsin 1%, larutan asam alkohol, dan
methylene blue 0,1%. Penelitian ini menggunakan variasi konsentrasi asam
alkohol 1%, asam alkohol 3% (sebagai kontrol), asam alkohol 6%, dan asam
alkohol 9%. Penelitian ini akan dilaksanakan pada bulan Maret-April tahun 2024.
Populasi dalam penelitian ini adalah penderita tuberculosis paru (TB paru) dengan
hasil pemeriksaan dahak mikroskopis positif/(+). Sampel yang digunakan dalam
penelitian ini adalah sputum penderita tuberkulosis yang berjumlah 24 sampel
dengan 4 perlakuan (Asam Alkohol 1%, 3% sebagai kontrol, 6%, dan 9%), yang
dimana setiap kelompok perlakuan dalam penelitian ini akan di replikasi atau
pengulangan sebanyak 6 kali. Sampel diambil secara purposive sampling dengan
kriteria sampel pasien dengan hasil pemeriksaan BTA positif.

6
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Pengertian Tuberkulosis

Tuberkulosis (TB) merupakan penyakit menular langsung yang
disebabkan oleh infeksi Mycobacterium tuberculosis. Tuberkulosis merupakan
penyakit yang mudah menular melalui udara dari sumber penularannya, yaitu
penderita tuberkulosis BTA positif. Saat penderita batuk atau bersin, bakteri
menyebar melalui udara dalam bentuk percikan dahak. Sekali batuk dapat
menghasilkan sekitar 3.000 percikan dahak. Sebagian besar kuman tuberkulosis
menyerang paru-paru, namun bisa juga menyerang organ tubuh lain yang biasa
disebut tuberkulosis ekstra paru. Tuberkulosis ekstra paru adalah bentuk yang
paling mudah menyerang organ tubuh lain. Tuberkulosis dapat menyerang seluruh
organ tubuh, sehingga pada dasarnya terjadi tanpa pandang bulu. Umumnya
tuberkulosis diketahui hanya menyerang paru-paru, namun tuberkulosis juga
dapat menyerang organ selain paru-paru yang disebut ekstra paru. Tuberkulosis
ekstra paru terjadi ketika kuman tuberkulosis menyebar ke bagian organ tubuh
lain melalui aliran darah. Meskipun diagnosis pasti tuberkulosis seringkali sulit
ditegakkan sedangkan diagnosis kerja dapat ditegakkan berdasarkan gejala klinis
tuberkulosis yang kuat dengan menyingkirkan kemungkinan penyakit lain. (Aini
et al., 2017)

2.1.1 Morfologi dan Struktur Bakteri

Morfologi Mycobacterium tuberculosis berbentuk batang halus berukuran
panjang 1-4 µ dan lebar 0,3-0,6 µ, pada pembenihan berbentuk kokoid,
berfilamen, dan tidak berspora. Kuman ini tahan terhadap asam alkohol yang
dengan cepat dapat menghilangkan warna semua bakteri kecuali Mycobacterium
tuberculosis. (Buntuan, 2014)

7
 Gambar 2. 1 Mycobacterium tuberculosis
(Sumber CDC, 2023)

Taksonomi dari Mycobacterium tuberculosis ialah :

Kingdom : Bacteria
Filum : Actinobacteria
Ordo : Actinomycetales
Sub Ordo : Corynebacterinea
Famili : Mycobacteriaceae
Genus : Mycobacterium
Spesies : Mycobacterium tuberculosis

2.1.2 Penularan Tuberkulosis

Bakteri tuberkulosis paru menular ke orang lain melalui infeksi atau melalui
udara (tetesan dahak penderita tuberkulosis paru positif BTA) saat penderita batuk
atau bersin. Infeksi tuberkulosis paru terjadi ketika penderita tuberkulosis paru
positif BTA berbicara, bersin atau batuk, dan orang yang terinfeksi secara tidak
langsung mengeluarkan lendir ke udara, serta terdapat ± 3.000 percikan
dahak yang mengandung bakteri. TBC paru bisa berakibat fatal jika obatnya tidak
diminum secara teratur hingga 6 bulan. Selain berdampak pada individu, juga
berdampak pada keluarga penderita, yaitu dampak psikologis berupa kecemasan,
kehilangan dukungan, dan rendahnya harga diri. (Kristini & Hamidah, 2020)

2.1.3 Faktor Risiko Tuberkulosis

Faktor perilaku penderita tuberkulosis dapat mempengaruhi terjadinya
penyakit tuberkulosis. Perilaku penderita TBC seringkali membuang dahak
sembarangan sehingga berpotensi menularkan penyakit kepada orang di
sekitarnya. Penderita tuberkulosis yang tidak menerapkan etika batuk atau PHBS
di wilayahnya dapat memberikan peluang bakteri tuberkulosis untuk mudah

8
menulari orang lain. Faktor lain yang dapat mengakibatkan seseorang terkena
penyakit TB adalah perilaku merokok. Merokok membuat lebih rentan terhadap
bakteri TB. Selain itu, kondisi lingkungan rumah juga dapat menjadi faktor lain
terjadinya TB. Rumah yang kekurangan pencahayaan dan sinar matahari
memungkinkan bakteri tuberkulosis bertahan hidup di lingkungan rumah sehingga
meningkatkan kejadian tuberkulosis. (Pralambang & Setiawan, 2021)

2.1.4 Diagnosis Tuberkulosis

Seseorang yang diduga dirinya terinfeksi tuberkulosis harus melakukan
beberapa hal untuk menegakkan diagnosis. Diagnosis ditegakkan berdasarkan
riwayat kesehatan pasien dan keluarganya, pemeriksaan fisik, pemeriksaan
laboratorium (darah dan dahak), foto thoraks, dan tes uji tuberkulin. Gejala utama
penderita tuberkulosis paru adalah batuk berdahak yang berlangsung selama 2
hingga 3 minggu atau lebih. Batuk tersebut bisa saja diikuti dengan gejala lain,
seperti adanya darah pada dahak, batuk darah, sesak napas, badan lemas, nafsu
makan hilang, berat badan turun, mudah lelah, berkeringat di malam hari tanpa
kegiatan fisik, dan demam yang berlangsung lebih dari satu bulan. (Khariri, 2020)

2.2 Pemeriksaan Mikroskopis Basil Tahan Asam (BTA)

Pemeriksaan mikroskopis BTA pada sputum mempunyai peran dalam
diagnosis awal dan pemantauan pengobatan tuberkulosis paru. Untuk
mendapatkan hasil yang akurat memerlukan berbagai macam rangkaian, mulai
dari cara pengumpulan bahan sputum, pemilihan bahan sputum yang akan
diperiksa, hingga pengolahan sediaan di bawah mikroskop. Teknik pewarnaan
yang digunakan yaitu Ziehl Neelsen yang dapat mendeteksi BTA di bawah
mikroskop. (Susanti, 2013)
Pemeriksaan Basil Tahan Asam (BTA) pada prinsipnya adalah melihat
kuman-kuman TBC yaitu Mycobacterium tuberculosis sebagai penyebab TBC di
bawah mikroskop setelah dilakukan pewarnaan sehingga dari pemeriksaan ini
akan didapatkan data berupa jumlah kuman TBC yang disesuaikan dengan skala
IUATLD sehingga didapatkan hasil berupa negatif dan positif (1+, 2+, 3+)

9
 Metode pemeriksaan mikroskopis BTA menggunakan sediaan yang dibuat
secara langsung dari spesimen sputum. Pemeriksaan mikroskopik BTA pada 3
spesimen sputum penderita diambil 3 kali; sewaktu, pagi, dan sewaktu (SPS).
Pemeriksaan mikroskopis memiliki kekurangan dan kelebihan. Kelebihan
pemeriksaan mikroskopis BTA yaitu biaya relative lebih murah, dapat dikerjakan
di laboratorium sederhana yang memiliki mikroskop. Kekurangan pemeriksaan
mikroskopis BTA adalah waktu yang diperlukan untuk pemeriksaan cukup lama.
Sampel yang digunakan merupakan dahak pagi membutuhkan waktu 2 hari
hingga prosedur pengerjaan pembuatan sediaan dan pewarnaan sampai
pemeriksaan di bawah mikroskop memerlukan waktu yang cukup lama.
(Murtafi’ah et al., 2020)
Bahan pemeriksaan mikroskopis BTA adalah dahak atau sputum. Sputum
yang terbaik untuk diperiksa yaitu pagi hari dikarenakan banyak mengandung
mikobakteria dibandingkan waktu lain. (Kalma, 2015)
Hasil pemeriksaan mikroskopis BTA dipengaruhi pada saat persiapan
sampel, yang harus memenuhi kriteria kualitas sputum yang baik. Sediaan sputum
yang berkualitas harus memenuhi persyaratan sebagai berikut : sputum, ukuran,
ketebalan, kerataan, warna, dan kebersihan. Waktu pendinginan karbol fuchsin
biasanya minimal 5-7 menit. (Maulida et al., 2023)

Gambar 2. 2 Mikroskopis BTA

(Sumber CDC, 2023)

2.3 Pewarnaan Basil Tahan Asam (BTA) Metode Ziehl Neelsen

Pemeriksaan BTA metode Ziehl Nelseen (ZN) merupakan metode
pemeriksaan yang direkomendasikan oleh WHO. Pemeriksaan metode ini masih

10
menjadi pilihan pertama untuk deteksi awal TB. Teknik ZN merupakan teknik
yang mudah, murah, dan mempunyai spesifisitas yang tinggi untuk mendeteksi
bakteri tahan asam (BTA) pada sputum. (Misnarliah & Mudrika, 2021)
Pewarnaan BTA metode Ziehl Neelsen tergolong pewarnaan diferensial
yang memilih bakteri menjadi kelompok tahan asam dan tidak tahan. Saat ini
tedapat beberapa metode pewarnaan tahan asam yang tersedia di laboratorium
klinik. Semua didasarkan atas prinsip yang sama dengan perbedaan-perbedaan
yang penting dalam rincian protokol pewarnaannya. Secara umum semua metode
memerlukan pembuatan apusan yang tipis, pengeringan di udara dan fiksasi
panas. Apusan dialiri oleh zat warna primer penetratif, di lunturkan dengan suatu
reagen yang mengandung asam kuat dan diberi warna tandingan dengan zat warna
kedua. Ada berbagai metode pewarnaan tahan asam dengan teknik yang berbeda
diantaranya pewarnaan Ziehl Neelsen. Prinsip pewarnaan BTA metode Ziehl
Neelsen yaitu dengan pemanasan pada pewarnaan Ziehl Neelsen lapisan/pori-pori
lipid pada bakteri akan melebur sehingga zat warna dapat masuk kedalam tubuh
bakteri. Bila preparat dingin zat warna tidak dapat terlepas kembali walaupun
dilunturkan dengan asam, berbeda dengan bakteri tidak tahan asam yang zat
warna pertama akan luntur sehingga mengambil zat warna kedua pada pewarnaan
kedua. Bakteri tahan asam berwarna merah dan bakteri tidak tahan asam berwarna
biru. (Kalma, 2015)
Adapun zat warna Basil Tahan Asam (BTA) metode Ziehl Neelsen terdiri
dari :
a. Karbol Fuchsin
Pewarnaan karbol fuchsin merupakan pewarna dasar yang mengandung
fenol untuk membantu melarutkan dinding sel. Pemanasan biasanya
diperlukan untuk meningkatkan penetrasi pewarna dasar ke dalam sel
bakteri. Semua jenis sel berwarna primer. Sel-sel tersebut kemudian di
dekolorisasi dengan alkohol asam yang menghilangkan pewarna basa dari
semua jenis sel bakteri kecuali bakteri tahan asam. (Purnama et al., 2018)
b. Methylene Blue
Zat warna methylene blue adalah zat pewarna sekunder yang berperan
sebagai pewarna pembanding. Pewarna ini yang akan mewarnai sel yang

11
 telah terdekolorisasi. Pada akhir prosedur pewarnaan tahan asam
menunjukkan warna merah-pink untuk bakteri tahan asam dan warna biru
untuk bakteri yang tidak tahan asam. Contoh bakteri tahan asam adalah
Mycobacterium, sehingga teknik pewarnaan bakteri tahan asam (BTA) ini
sering digunakan dalam identifikasi kuman penyebab infeksi paru.
(Purnama et al., 2018)
c. Asam Alkohol
Larutan alkohol asam 3% berfungsi untuk membersihkan dan melunturkan
(dekolorisasi) warna pada sel bakteri. Setelah sel bakteri mampu menyerap
warna karbol fuchsin, maka dinding sel akan menutup kembali pada suhu
semula, sehingga perlu menunggu beberapa menit. Penambahan alkohol
asam bakteri yang bukan BTA akan dilunturkan karena tidak dapat
berikatan kuat terhadap karbol fuchsin. Bakteri yang tahan terhadap zat
warna ketika ditambahkan alkohol asam disebut bakteri tahan asam, dan
warna nya menjadi merah setelah diwarnai. Bakteri yang tidak tahan
terhadap asam mudah dilunturkan dengan alkohol asam dan berwarna biru
setelah dilakukan pewarnaan dengan methylene blue. Prosedur
Operasional Standar menyebutkan untuk pencucian asam alkohol dapat
dilakukan hingga warnanya pucat. Jika warna cat kurang bersih, ulangi
proses ini hingga warna karbol fuchsin hilang. Namun pada manual
prosedur reagen nya menyatakan bahwa pencucian dengan alkohol asam
dilakukan selama 3 menit sedangkan pada prakteknya pencucian asam
alkohol sebenarnya dilakukan selama 5 menit untuk mendapatkan sediaan
BTA yang bersih dari sisa karbol fuchsin. Tahap dekolorisasi (pemberian
alkohol asam) tidak boleh berlebihan. Karena jika terlalu berlebih akan
hampir sama dengan sel non BTA. Jika waktu pemberian alkohol asam
terlalu singkat, maka tidak akan luntur warna nya secara sempurna
sehingga masih ada sisa warna dari karbol fuchsin pada sediaan yang
mengakibatkan sel non BTA berwarna ungu mendekati sel BTA+ dan
akan mempengaruhi pembacaan mikroskop. (Wulandari, 2018)

12
 Gambar 2. 3 Proses pewarnaan BTA
(Sumber CDC, 2023)

Gambar 2. 4 Reagen pewarnaan BTA metode Ziehl Neelsen

(Sumber CDC, 2023)

Gambar 2. 5 Sediaan BTA yang sudah diwarnai

(Sumber CDC, 2023)

2.4 Metode Pemeriksaan Laboratorium

Pemeriksaan sputum dengan menggunakan metode Ziehl Neelsen untuk
membedakan bakteri tahan asam dan tidak tahan asam yang dapat menyebabkan
infeksi pada orang dengan sistem kekebalan yang lemah. Dimana prinsip pada
metode pemeriksaan ini yaitu dinding bakteri tahan asam serta memiliki lapisan
lilin dan lemak yang sulit untuk menembus cat. Dibawah pengaruh fenol dan
pemanasan, warna dasar fuchsin menembus lapisan lilin dan lemak. Saat
pencucian, lapisan lilin dan lemak yang terbuka akan menutup kembali. Pada saat
pencucian dengan alkohol asam, warna fuchsin tidak dilepas. Sedangkan bakteri
yang tidak tahan terhadap asam akan akan luntur dan mengambil warna biru dari
methylene blue.

13
2.5 Kerangka Konsep
Gambar 2. 6 Kerangka konsep

Asam Alkohol 1%

Efektivitas Pewarnaan BTA

Asam Alkohol 6% (Asam Alkohol 3%)

Asam Alkohol 9%

14
2.6 Definisi Operasional

Tabel 2. 1 Definisi operasional

Variabel Definisi Cara Ukur Alat Ukur Hasil Ukur Skala
Efektivitas Hasil Mikroskopis Mikroskop 1 = bakteri
pewarnaan Pewarnaan dan
dan latar
BTA pemeriksaan
(alkohol mikroskopis belakang
asam 3%) BTA dengan
tidak jelas
konsentrasi
alkohol asam 2 = Bakteri Rasio
3% (kontrol)
jelas dan
latar
belakang
tidak jelas
3 = Bakteri
tidak jelas
dan latar
belakang
jelas
4 = Bakteri
dan latar
belakang
jelas

Kualitas Campuran Mikroskopis Mikroskop 1 = bakteri

Pewarnaan alkohol 96%
dan latar
Konsentrasi sebanyak 99
asam alkohol ml dengan belakang
1% HCl pekat 1 ml
tidak jelas
dalam 100 ml
larutan 2 = Bakteri
jelas dan
Rasio
latar
belakang
tidak jelas
3 = Bakteri

15
 tidak jelas
dan latar
belakang
jelas
4 = Bakteri
dan latar
belakang
jelas

Kualitas Campuran Mikroskopis Mikroskop 1 = bakteri

Pewarnaan alkohol 96%
dan latar
Konsentrasi sebanyak 94
asam alkohol ml dengan belakang
6% HCl pekat 6 ml
tidak jelas
dalam 100 ml
larutan 2 = Bakteri
jelas dan
latar
belakang
Rasio
tidak jelas
3 = Bakteri
tidak jelas
dan latar
belakang
jelas
4 = Bakteri
dan latar
belakang
jelas

Kualitas Campuran Mikroskopis Mikroskop 1 = bakteri

Pewarnaan alkohol 96%
dan latar
Konsentrasi sebanyak 91
asam alkohol ml dengan belakang
9% HCl pekat 9 ml
tidak jelas
dalam 100 ml Rasio
larutan 2 = Bakteri

16
 jelas dan
latar
belakang
tidak jelas
3 = Bakteri
tidak jelas
dan latar
belakang
jelas
4 = Bakteri
dan latar
belakang
jelas

2.7 Hipotesis
1. H0 : Tidak ada pengaruh konsentrasi asam alkohol 1% terhadap pewarnaan
Basil Tahan Asam (BTA) metode Ziehl Neelsen
H1 : Ada pengaruh konsentrasi asam alkohol 1% terhadap pewarnaan Basil
Tahan Asam (BTA) metode Ziehl Neelsen
2. H0 : Tidak ada pengaruh konsentrasi asam alkohol 6% terhadap pewarnaan
Basil Tahan Asam (BTA) metode Ziehl Neelsen
H1 : Ada pengaruh konsentrasi asam alkohol 6% terhadap pewarnaan Basil
Tahan Asam (BTA) metode Ziehl Neelsen
3. H0 : Tidak ada pengaruh konsentrasi asam alkohol 9% terhadap pewarnaan
Basil Tahan Asam (BTA) metode Ziehl Neelsen
H1 : Ada pengaruh konsentrasi asam alkohol 9% terhadap pewarnaan Basil
Tahan Asam (BTA) metode Ziehl Neelsen
4. H0 : Tidak ada perbedaan efektivitas pewarnaan antara konsentrasi asam
alkohol 1%, 6%, dan 9% dengan kontrol (konsentrasi asam alkohol 3%)
H1 : Ada perbedaan efektivitas pewarnaan antara konsentrasi asam alkohol
1%, 6%, dan 9% dengan kontrol (konsentrasi asam alkohol 3%)

17
18
 BAB III
METODE PENELITIAN

3.1 Jenis Penelitian

Jenis penelitian yang dipakai adalah penelitian yang bersifat eksperimental
laboratorium dengan desain post test only dalam menentukan seberapa besar
efektivitas hasil pemeriksaan preparat BTA terhadap pewarnaan Ziehl Neelsen
menggunakan konsentrasi asam alkohol. Suatu penelitian dimana variabel
dependen pemeriksaan Basil Tahan Asam (BTA) dan independen (asam alkohol
1%, asam alkohol 3% sebagai kontrol, asam alkohol 6%, dan asam alkohol 9%)
dilakukan pengukuran dalam waktu yang bersamaan.

3.2 Lokasi dan Waktu Penelitian.

3.2.1 Lokasi Penelitian
Lokasi penelitian akan dilakukan di Puskesmas Sosial Kota Palembang

3.2.2 Waktu Penelitian

Penelitian akan dilakukan pada bulan Maret-April 2024.

3.3 Populasi dan Sampel Penelitian

3.3.1 Populasi Penelitian
Populasi dalam penelitian ini adalah penderita Tuberkulosis Paru (TB Paru)
dengan hasil pemeriksaan dahak mikroskopis positif/(+)
3.3.2 Sampel Penelitian
Sampel penelitian adalah sputum penderita tuberkulosis. Adapun rumus
replikasi dari penelitian ini menggunakan rumus Federer yaitu :
Keterangan :
t : Jumlah perlakuan
r : Jumlah replikasi

(t-1) (r-1) ≥ 15)

(4-1) (r-1) ≥ 15)

19
 3 (r-1) ≥ 15
3r ≥ 15+4
3r ≥ 19
r=
r = 6  per sampel
Jadi setiap kelompok perlakuan dalam penelitian ini akan di replikasi atau
pengulangan sebanyak 6 kali

3.4 Teknik Sampling

Teknik pengambilan sampel yang digunakan yaitu purposive sampling
yaitu pengambilan sampel secara pertimbangan tertentu. Pada teknik ini setiap
sediaan dalam populasi memiliki kriteria sampel pasien dengan hasil pemeriksaan
BTA positif.

3.5 Jenis, Metode dan Instrumen Pengambilan Data

3.5.1 Jenis Pengambilan Data
Jenis pengumpulan data yang digunakan adalah data primer. Data primer
adalah data yang diperoleh atau dikumpulkan oleh peneliti secara langsung dari
kegiatan lapangan yang dilakukan dengan pengambilan sampel

3.5.2 Metode Pengambilan Data

Metode pengambilan data yang dipakai pada penelitian ini adalah dengan
pengambilan sampel dan pemeriksaan mikroskopis. Untuk variabel dependen
pemeriksaan Basil Tahan Asam (BTA). Untuk variabel independen (asam alkohol
1%, asam alkohol 3% sebagai kontrol, asam alkohol 6%, dan asam alkohol 9%).

3.5.3 Instrumen Pengambilan Data

Alat yang digunakan dalam pengambilan sampel sputum adalah pot. Pada
pembuatan sediaan BTA menggunakan alat ose, objek glass, lampu spiritus, dan
korek api. Sedangkan pada pewarnaan menggunakan alat rak pewarnaan, preparat,
pipet tetes, labu semprot, lampu spiritus, korek api. Dan pemeriksaan secara
mikroskopis menggunakan alat mikroskop, deck glass, dan sediaan BTA

20
3.6 Alur Penelitian
Gambar 3. 1 Alur penelitian

Puskesmas Sosial
Kota Palembang

Pemb Preparat

Pewarnaan preparat

Pewarnaan dengan Sama Sama Sama

menggunakan
asam alkohol 1% Asam alkohol 3%

Pemeriksaan
Preparat

DST

3.7 Analisa Data dan Interpretasi Hasil

3.7.1 Analisa Data
Data yang disajikan dalam bentuk distribusi frekuensi, dalam tabel frekuensi
yang digunakan adalah univariat dan bivariat.
a. Univariat
Analisis univariat yang digunakan adalah analisis untuk mengetahui
efektivitas konsentrasi asam alkohol 1%, 3% (kontrol), 6%, dan 9%
b. Bivariat
Analisis bivariat yang digunakan dalam penelitian ini adalah analisis
yang bertujuan untuk melihat efektivitas antara variabel dependen

21
 pemeriksaan Basil Tahan Asam (BTA) dengan variabel independen (asam
alkohol 1%, asam alkohol 3% sebagai kontrol, asam alkohol 6%, dan asam
alkohol 9%). Data ini dianalisis dengan menggunakan uji Anova sebagai
salah satu uji statistik untuk menguji efektivitas antara empat kelompok
data menggunakan program Statistical Package for the Social Sciences
(SPSS)

3.7.2 Interpretasi Hasil

1 = bakteri dan latar belakang tidak jelas
2 = Bakteri jelas dan latar belakang tidak jelas
3 = Bakteri tidak jelas dan latar belakang jelas
4 = Bakteri dan latar belakang jelas

3.8 Etik Penelitian

Etika penelitian bertujuan untuk melindungi hak-hak subjek. Dalam penelitian
ini ditekankan etika penelitian, yaitu :
1. Manfaat (Benefience)
Menghasilkan manfaat yang sebesar-besarnya tanpa merugikan subjek
penelitian dan harus memperhatikan keselamatan subjek penelitian
2. Keadilan (Justice)
Tidak membedakan subjek yang diteliti dan seimbang antara manfaat dan
resikonya

22
 3.9 Jadwal Rencana Penelitian

Tabel 3. 1 Jadwal Rencana Penelitian

No. Kegiatan Bulan
Januari Februari Maret April Mei

1. Persiapan
2. Penyusunan Proposal
3. Seminar Proposal
4. Surat Perizinan
5. Pengambilan Data
6. Pengolahan Data
7. Analisis Data

8.. Penyusunan Hasil

Penelitian
9. Seminar Hasil

23
 DAFTAR PUSTAKA

Achmadi, A., Mardiah, M. M., & Wahyu, S. (2021). Penerapan

Pemantapan Mutu Internal terhadap Kualitas Sediaan Pewarnaan
Ziehl Nielsen untuk Deteksi Mycobacterium TB. Jurnal Ilmiah
Kesehatan (JIKA), 3(3), 124–133.
https://doi.org/10.36590/jika.v3i3.192
Aini, N., Ramadiani, R., & Hatta, H. R. (2017). Sistem Pakar
Pendiagnosa Penyakit Tuberkulosis. Informatika Mulawarman :
Jurnal Ilmiah Ilmu Komputer, 12(1), 56.
https://doi.org/10.30872/jim.v12i1.224
Amelia, R., Hadijah, S., & Nasir, M. (2019). Pengaruh Konsentrasi
Asam Alkohol Terhadap Hasil Pemeriksaan Basil Tahan Asam
Metode Ziehl Neelsen. Jurnal Media Analis Kesehatan, 10(2),
126. https://doi.org/10.32382/mak.v10i2.1266
Buntuan, V. (2014). Gambaran Basil Tahan Asam (Bta) Positif Pada
Penderita Diagnosa Klinis Tuberkulosis Paru di Rumah Sakit
Islam Sitti Maryam Manado Periode Januari 2014 S/D Juni 2014.
Jurnal E-Biomedik, 2(2).
https://doi.org/10.35790/ebm.2.2.2014.5604
Febriani, A., Sijid, S. A., Hidayat, K. S., Muthiadin, C., & Zulkarnain,
Z. (2022). Gambaran Hasil Pemeriksaan Mikroskopik Basil
Tahan Asam Pada Penderita Tuberkulosis Paru di BBKPM
Makassar. Filogeni: Jurnal Mahasiswa Biologi, 2(1), 21–26.
https://doi.org/10.24252/filogeni.v2i1.28631
Kalma. (2015). Efektifitas Waktu fiksasi Preparat Untuk Pewarnaan
Basil Tahan Asam Metode Ziehl Neelsen. Media Analis
Kesehatan, 6(1), 58–63.

24
Khariri. (2020). Pemeriksaan Basil Tahan Asam (BTA) pada Sputum
dengan Metode Pewarnaan Ziehl Neelsen (ZN) untuk Diagnosis
TB Paru. Prosiding Seminar Nasional Ketiga Sinergitas
Multidisiplin Ilmu Pengetahuan Dan Teknologi 2020, 3(1), 132–
139.
https://jurnal.yapri.ac.id/index.php/semnassmipt/article/view/159
Kristini, T., & Hamidah, R. (2020). Potensi Penularan Tuberculosis
Paru pada Anggota Keluarga Penderita. Jurnal Kesehatan
Masyarakat Indonesia, 15(1), 24.
https://doi.org/10.26714/jkmi.15.1.2020.24-28
Maulida, A., Harlita, T. D., & Makkadafi, S. P. (2023). Terhadap
Hasil Pemeriksaan Mikroskopis Basil Tahan Asam kasus ( Badan
Pusat Statistika Kalimantan Timur , 2020 ). Menurut data dari
Dinas Kesehatan kasus ( Dinas Komunikasi dan Informatika
Kalimantan Timur , 2022 ). Berdasarkan Peraturan Menteri
Kesehatan. 11(2), 235–248.
Misnarliah, & Mudrika. (2021). Pengaruh Penundaan Pewarnaan
Preparat Bakteri Tahan Aasam Metode Zihel Nelseen Terhadap
Hasil Pemeriksaan Mikroskopik. Jurnal Teknosains Kodepena,
01(o2), 58–63.
Murtafi’ah, N. matul-, Fadhilah, F. R., & Krisdaryani, R. (2020).
Perbandingan Hasil Pemeriksaan Mycobacterium Tuberculosis
dengan GeneXpert dan Pewarnaan Ziehl Neelsen di Rumah Sakit
Mitra Anugrah Lestari. Riset Informasi Kesehatan, 9(2), 188.
https://doi.org/10.30644/rik.v9i2.381
Pralambang, S. D., & Setiawan, S. (2021). Faktor Risiko Kejadian
Tuberkulosis di Indonesia. Jurnal Biostatistik, Kependudukan,
dan Informatika Kesehatan, 2(1), 60.

25
 https://doi.org/10.51181/bikfokes.v2i1.4660
Purnama, T., Tusmin, & Ruflah. (2018). Penggunaan Giemsa Sebagai
Alternatif Pewarna Pengganti Carbol Fuchsin dan Methilen Blue
Pada Pewarnaan BTA Metode Ziehl Neelsen. Angewandte
Chemie International Edition, 6(11), 951–952., 4(2), 123–131.
https://journal.tlm.umw.ac.id/index.php/JMMedilab/article/view/1
26/71
Susanti, D. (2013). Pemeriksaan Basil Tahan Asam (BTA) Pada
Sputum Penderita Batuk ≥ 2 Minggu di Poliklinik Penyakit
Dalam BLU RSUP. Prof. Dr. R.D Kandao Manado. E-CliniC,
1(1), 1–5. https://doi.org/10.35790/ecl.1.1.2013.4037
Wulandari, S. K. (2018). Perbedaan Waktu Pencucian Alkohol 3%
Terhadap Hasil Pewarnaan Ziehl Neelsen Pada Preparat BTA.

26
 LAMPIRAN

Lampiran 1 : Lembar Rekap Bimbingan Penyusunan Proposal Skripsi

27
Lampiran 2 :Instruksi Kerja Pemeriksaan

PROSEDUR KERJA PEMERIKSAAN BASIL TAHAN ASAM (BTA)

Metode : Ziehl Neelsen

Prinsip : Dinding bakteri tahan asam serta memiliki lapisan lilin dan lemak
yang sulit untuk menembus cat. Dibawah pengaruh fenol dan
pemanasan, warna dasar fuchsin menembus lapisan lilin dan
lemak. Saat pencucian, lapisan lilin dan lemak yang terbuka akan
menutup kembali. Pada saat pencucian dengan alkohol asam,
warna fuchsin tidak dilepas. Sedangkan bakteri yang tidak tahan
terhadap asam akan akan luntur dan mengambil warna biru dari
methylene blue.

Alat : - Mikroskop
- Objek glass
- Deck glass
- Pot sputum
- Rak pewarnaan
- Lampu spiritus
- Korek api
- Pipet tetes
- Ose
- Labu semprot
- Tissu gulung

Reagensia :- Karbol fuchsin 1%

- Methylene blue 0,1%
- Asam alkohol (1%, 3% (sebagai kontrol), 6%, dan 9%)

Sampel : Sputum

28
Prosedur Kerja:

a. Komposisi Asam Alkohol 1%, 3%, 6%, 9%

- Asam Alkohol 1%
(Alkohol 96% sebanyak 99 ml + HCl pekat 1 ml)
- Asam Alkohol 3%
(Alkohol 96% sebanyak 97 ml + HCl pekat 3 ml)
- Asam Alkohol 6%
(Alkohol 96% sebanyak 94 ml + HCl pekat 6 ml)
- Asam Alkohol 9%
(Alkohol 96% sebanyak 91 ml+ HCl pekat 9 ml)

b. Pembuatan Preparat Basil Tahan Asam (BTA)

1. Siapkan objek glass yang bersih, bebas lemak, dan tidak ada goresan
2. Tuliskan kode sediaan pada preparat tersebut
3. Nyalakan lampu spiritus dan fiksasi preparat 2-3 kali dengan melewati
nyala api lalu panaskan ose sampai membara
4. Pada saat pembuatan sediaan dekatkan dengan lampu spiritus agar
menghindari terjadinya kontaminasi dan ambil bagian sputum yang kental
berwarna putih kekuningan atau putih kehijauan lalu letakkan pada
preparat dengan menggunakan ose
5. Oleskan sputum secara merata (jangan terlalu tebal, jangan terlalu tipis)
pada permukaan kaca sediaan dengan ukuran 2x3 cm
6. Keringkan sediaan pada suhu kamar

c. Pemeriksaan Sediaan Basil Tahan Asam (BTA)

1. Siapkan sediaan sputum pasien penderita TBC
2. Lakukan fiksasi dengan cara melewatkan sediaan diatas lampu spiritus
sebanyak 3x. Fiksasi bertujuan untuk mematikan sel-sel bakteri tanpa
merusak struktur sel serta untuk melekatkan sel pada sediaan
3. Teteskan karbol fuchsin 1% hingga menggenangi seluruh permukaan
sediaan
4. Panaskan karbol fuchsin dengan cara melewatkan beberapa kali diatas
lampu spiritus hingga keluar uap (jangan sampai mendidih) atau kurang
lebih selama 3-5 menit. Fungsi pemanasan ini adalah untuk membuka
lapisan asam mikolat dinding sel bakteri agar mudah terwarnai

29
5. Bilas karbol fuchsin dengan air mengalir
6. Celupkan asam alkohol (konsentrasi 1%, 3 % sebagai kontrol, 6% dan
9%) beberapa kali hingga warna merah karbol fuchsin menghilang
7. Bilas sisa-sisa asam alkohol dengan air mengalir
8. Teteskan methylene blue 0,1% hingga menggenangi seluruh permukaan
sediaan dan diamkan selama 10-20 detik
9. Bilas methylene blue dengan air mengalir
10. Keringkan sediaan dengan meletakkannya di udara terbuka
11. Setelah kering, tutup sediaan dengan deck glass
12. Amati hasil pewarnaan dengan mikroskop dengan perbesaran 1000x yang
telah ditetesi oil imersi

30
Lampiran 3 : Tabel Hasil Pemeriksaan

Perlakuan Sampel Pengulangan Total

1 2 3 4 5 6
Kontrol
asam
alkohol 3%
Asam
alkohol 1%
Asam
alkohol 6%
Asam
alkohol 9%

31
 BIODATA

Nama : Nabila Azzahra

Tempat, Tanggal Lahir : Oku Timur, 12 Agustus 2002

Alamat : Yosowinangun, Kecamatan Belitang Madang Raya,

Kabupaten Ogan Komering Ulu Timur

Agama : Islam

Alamat email : nabilaazzahra@student.poltekkespalembang.ac.id

No Hp/WA : 085769583831

Nama Orang Tua

Ayah : Malkan

Ibu : Guslina

Anak Ke : 2 dari 2 bersaudara

Riwayat Pendidikan :

1. SD SD Negeri 3 Gumawang Lulus Tahun 2014

2. SMP SMP Negeri 1 Belitang Lulus Tahun 2017

3. SMA SMA Negeri 1 Belitang Lulus Tahun 2020

32