1,2
Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Univeristas Islam
Indonesia
Yogyakarta
ABSTRAK
Nanopartikel emas paling banyak diminati karena dapat digunakan sebagai sensor,
katalis, mudah disintesis dan difungsionalisasi, biokompatibilitas (toksisitas rendah), dan
sifat optik yang mudah diatur. Salah satu senyawa yang dapat digunakan untuk
membantu proses tersebut adalah senyawa rutin.Rutin memiliki aksi fisiologis seperti
antiinflamasi, antibakteri, antioksidan, dan antitumor.Namunsediaan yang dihasilkanpada
penelitian sebelumnyatidak stabil karena mengalami agregasi yang cepat sehingga terjadi
flokulasi pada sediaan, oleh karena itu dibutuhkan penambahanstabilizer seperti PVA
agar agregasi tidak terjadi terlalu cepat dan sediaan tidak mengalami flokulasi. Penelitian
ini bertujuan untuk mengkarakterisasi dan meningkatkan stabilitas nanopartikel emas
dengan penambahan PVA sebagai penstabil sediaan.Metode yang digunakan pada
penelitian ini adalah nanopartikel emas dibuat dengan menggunakan metode
reductions.Karakterisasi dan stabilitas dilakukan dengan melihat warna, panjang
gelombang, ukuran partikel, PDI, zeta potensial, dan morfologi.Hasil penelitian ini
menunjukkan bahwa nanopartikel emas sampel rutin trihidrat terbentuk dalamwaktu ± 9
detik untuk perlakuan dan ± 5 detik untuk kontrol. Panjang gelombang seluruhformula
berada dalam kisaran nanopartikel emas 500 – 550 nm pada jam ke 24 . Ukuran partikel
dan PDI dari formula terbaik (HAuCl 4900µL, rutin trihidrat 1000µL, dan PVA
525µL)nanopartikel emas yaitu 116,9 nm dan 0,049. Morfologi nanopartikel emas yang
terbentuk berbentuk bulat, segitiga, persegi, segi lima, dan heksagonal. Hasil uji sitotoksik
pada sel T47D didapatkan nilai Inhibition Concentration (IC50) pada nanopartikel emas
rutin trihydrate denganPVA adalah 35.954 % dan IC50pada sel vero adalah 60,0499 %
sehingga terbukti sediaan mampu meningkatkan aktivitas sitotoksik terhadap sel kanker
payudara T47D. Stabilitas sediaan dapat mencapai waktu hingga 5 minggu dengan dilihat
dari parameter panjang gelombang, ukuran partikel, PDI, dan zeta potensial.
Kesimpulannya adalah dengan menambahkan 525 μL dari 2,5% PVA dapat memiliki
aktivitas anti sel kanker T47D dan menstabilkan sediaan hingga 5 minggu.
1
untuk mengetahui aktivitas anti kanker, 2.2.2 Preparasi Nanopartikel Emas
meningkatkan kestabilan dan reaktivitas Rutin Variasi PVA
nanopartikel [4]. Nanopartikel Disiapkan 1000 uL sampel rutin
emasdengan metode biosintesis trihidrat 0,1% kemudian dimasukan dalam
merupakan metoderamah lingkungan microtube. Diambil dengan pipet asam
penghasil nanopartikel logam[5]. Tujuan kloroaurat 1 mM sebanyak 900 L
penelitian ini adalah untuk melihat kemudian dimasukan ke dalam microtube
aktivitas, antikanker meningkatkan yang sudah berisi sampel rutin trihidrat
reaktivitas dan kestabilan sediaan 0,1% 1000 L lalu diaduk selama 2 jam
nanopartikel emasrutin trihidrat dengan menggunakan magnetic stearer. Larutan
menggunakan penstabil PVA, karena digunakan setelah 24 jam kemudian
belum pernah dilakukan sebelumnya ditambah PVA 2,5 % sebanyak 25 L
khususnya menggunakan senyawa rutin sampai 1000 L dengan interval antar
trihidrat. formula sebanyak 25 L. Larutan
nanopartikel emas rutin bersama larutan
2. METODE PVA di stearer selama 2 jam. Dibuat
2.1 Bahan dan Alat dalam 40 variasi formula.
Bahan yang digunakan pada penelitian 2.2.3 Karakterisasi Nanopartikel Emas
ini adalah rutin trhidrat (Sigma-aldrich), Dilakukaan observasi visual perubahan
PVA (Sigma-aldrich), aqua pro injection, warna 40 formulananopartikel emas.
emas murni, HCl, HNO3, 0.45 µm filter,, sel Perubahan warna keunguan menandakan
kanker kepadatan, media kultur dan sediaan sudah terbentuk nanopartikel
alkohol 70% yang telah disediakan oleh emas [6]. Observasi panjang gelombang
Departemen Farmasi Universitas Islam 40 formula nanopartikel emasdilakukan
Indonesia. Alat yang digunakan pada dengan menggunakan spektrofotometer
penelitian ini adalah analytical balance Uv-vis pada jam ke 0 dan 24 dalam
(Mettler Toledo, Germany), micropipette rentang antara 400 nm sampai 600 nm.
(Thermo Scientifiec dan Pengukuran nanopartikel emas
Finnipipette),Uv-Vis spectrophotometer menggunakan PSA dilakukan untuk
(Hittachi), particle size analyzer (Horiba, melihat ukuran partikel dan polydisperse
Japan), ultrasonic homogenizer, FTIR, index formula terbaik hasil karakterisasi
SEM, TEM, ELISA reader dan seperangkat sebelumnya. Pengukuran sampel pada
alat gelas(pyrex). range 2000-200 cm-1 dengan
2.2 Prosedur menggunakan fourier transform infrared
2.2.1 Preparasi Sampel Rutin Trihidrat, (FTIR) dilakukan untuk melihat profil
Asam Kloroaurat, dan PVA gugus fungsi nanopartikel emas. Profil
Dibuat rutin trihidrat 0,1 % dengan morfologi nanopartikel emas dilakukan
ditimbang 0,1 gram rutin trihidrat. dengan menganalisis formula terpilih
Dilarutkan dalam 100 ml campuran aqua menggunakan SEM yaitu dengan
pro injeksi dan alkohol 70% dengan meneteskan sampel dengan jumlah yang
perbandingan 1:1 sambil dipanaskan dan kecil ke dalam kisi karbon berlapis
diaduk denganmagnetic stirrer pada suhu tembaga, kemudian lapisan tipis sampel
± 70C selama 30 menit. Dibuat asam dibiarkan sampai mengering.
kloroaurat 10.000 ppm dengan dilarutkan SedangkanTEM dilakukan dengan
emas murni dari aneka tambang 1 gram meneteskan sampel formula terpilih
dengan aquaregia (campuran dari larutan sebanyak 10 μl kedalam grid, kemudian
HCl 30 ml dan HNO3 10 ml) kemudian didiamkan selama 1 menit.Volume residu
dipanaskan sampai semua logam (emas) pada griddiserap menggunakan kertas
melarut. Selanjutnya ditambahkan saring.Grid dikeringkan selama 30 menit
aquadest hingga volume total 100 ml. dan selanjutnya diobservasi.
Dibuat PVA 2,5 % dengan melarutkan 2.2.4 Uji Aktivitas Sel Kanker
PVA 2,5 gram kedalam aquades dan MTT assay adalah metode yang
diadd hingga 100 ml. Kemudian di digunakan untuk uji sitotoksik. Sel dengan
magnetic stearer dengan 175 rpm suhu kepadatan 10.000-50.000 sel/ml diambil
60ᵒC selama 24 jam. Setelah sebanyak 100 μl, kemudian dimasukkan
larutdigunakan saringan 0,45 µm untuk pada mikroplate (96 sumuran). Mikroplate
menyaring residu PVA yang tidak larut. diinkubasi selama 24 jam pada incubator
CO2 dengan suhu 37ºC. Mikroplate yang
2
telah diinkubasi ditambahkan sampel uji variasi PVA untuk mengetahui batas
sebanyak 100 μl dengan masing-masing kestabilannya.Formula kontrol adalah
kadar yang ditentukan dan diinkubasi formula terbaik dari penelitian sebelumnya
kembali selama 24 jam pada incubator yang telah diseleksi dan hanya
CO2. Setelah itu ditambahkan media menggunakan asam kloroaurat dan rutin
komplit yang baru sebanyak 100 l dan trihidrat.Sedangkan, formula terpilih
ditambahkan 10 μl MTT assay 0,5%. adalah formula terbaikdari hasil formulasi
Kemudian, diinkubasi selama 3 jam pada variasi PVA sebagai penstabil yang dilihat
incubator CO2 dengan suhu 37ºC. dari perubahan warna, panjang
Mikroplate yang telah diinkubasi gelombang, ukuran partikel dan
ditambahkan SDS 10% dan diinkubasi polydisperse index.
kembali selama 24 jam pada suhu
ruangan dan gelap. Pembacaan hasil 3.HASIL DAN PEMBAHASAN
dilakukan menggunakan ELISA reader 3.1 Hasil Karakterisasi Nanopartikel
pada panjang gelombang 550 nm. Untuk Emas
analisis data, data absorbansi yang 3.1.1 Hasil Observasi Visual Perubahan
diperoleh dihitung untuk melihat viabilitas Warna Nanopartikel Emas
sel dengan menggunakan rumus : Dari pengamatan perubahan warna
(A−C) secara visual yang dilakukan, seluruh
% Hidup = (B−C) x 100 %
sediaan mengalami perubahan warna.
Keterangan: A = Absorbansi sampel, B = Perubahan warna tersebut terjadi dalam
Absorbansi kontrol sel, dan C = hitungan detik yaitu ± 9 detik menjadi
Absorbansi kontrol media. Nilai IC50 warna ungu atau gelap dan tidak
dihitung menggunakan regresi linear mengalami perubahan hingga jam ke 24.
antara konsentrasi ekstrak dengan % Sehingga dapat disimpulkan sediaan
penghambatan (Arifah, I.S., dkk., 2015). sudah terbentuk nanopartikel emas yang
2.2.5 Uji Stabilitas menandakan terbentuknya nanopartikel
Observasi panjang gelombang emas karena banyak ion Au3+ yang
serapan Uv-vis nanopartikel emasdan tereduksi menjadi Au0 akibat tumbukan
pengukuran nanopartikel antarpartikel bioreduktor dan ion Au3+
emasmenggunakan PSA dilakukan yang sering terjadi [6]. Hasil perubahan
sampai 6 minggu menggunakan formula warna dapat dilihat pada Gambar 1.
kontrol dan formula terpilih dari formulasi
3
Gambar. 2. Hasil pembacaan spektro UV jam ke – 0 (kiri) dan jam ke – 24 (kanan)
0 baik untuk formula kontrol maupun
Dari Gambar 2. hasil menunjukkan perlakuan. Sedangkan, untuk hasil pada
bahwa dari keempat puluh formula, jam ke 24 semua formula menunjukkan
seluruhnya terbentuk nanopartikel emas panjang gelombang >500 nm yaitu berada
pada jam ke 24, karena menunjukkan pada rentang 500 nm sampai 550 nm [7].
panjang gelombang <500 nm pada jam ke
Formula 5
Formula 3
Formula 7
Formula 9
Formula 11
Formula 13
Formula 15
Formula 17
Formula 25
Formula 27
Formula 29
Formula 31
Formula 33
Formula 35
Formula 37
Formula 39
Formula kontrol
Formula 19
Formula 21
Formula 23
Formula 25
Formula 27
Formula 29
Formula 31
Formula 33
Formula 35
Formula 37
Formula 39
Formula kontrol
Formula 19
Formula 21
Formula 23
Gambar 3.Hasil pembacaan PSA ukuran partikel (atas) dan polydispere index (bawah)
4
Dari Gambar 3. hasil Gambar 4. Spektrum FTIR Formula
menunjukkan bahwa dari kedua puluh Kontrol (kiri) dan Perlakuan (kanan)
formula semuanya menunjukkan ukuran 3.1.5 Hasil profil morfologi nanopartikel
partikel <120 nm baik untuk formula emas menggunakan SEM dan TEM
kontrol maupun perlakuan. Sedangkan, Morfolgi nanopartikel emas dapat
untuk hasil polydisperse index semua diketahui denganscanning electron
formula menunjukkan PDI <0.3. Hal ini microscopy (SEM) dan transmission
menunjukkan bahwa sediaan sudah electron microscopy (TEM).Morfologi
terbentuk nanopartikel emasdikarenakan nanopartikel juga dapat dilihat dengan
berada pada rentang <8 μm [8]dan dari SEM yaitu dengan melihat bentuk partikel
nilai PDI yang berada pada rentang pada permukaan sampel melalui proses
<0,7[9]yang menunjukkan bahwa sediaan scan dengan menggunakan pancaran
memiliki distribusi partikel yang sangat energi yang tinggi.Partikel nanopartikel
baik. Dari hasil yang telah diperoleh, emas rutin trihidrat yang terlihat adalah
dipilih formula 21 sebagai formula terpilih tidak beraturan.TEM yang digunakan
dengan ukuran partikel dibawah rata-rata adalah JEOL JEM dan dihitung pada 100
dan PDI paling kecil yaitu 0,049 untuk kv. Sampel yang digunakan untuk
kemudian di lihat karakteristiknya pengujian morfologi partikel nano dengan
menggunakan FTIR, SEM, TEM, begitu TEM adalah formula 21.Formula 21 dipilih
juga untuk uji aktivitas antikanker dan uji karena memiliki ukuran yang kecil dan
stabilitas. distribusi partikel terkecil dibandingkan
3.1.4 Hasil Profil Gugus Fungsi dengan formula lainnya. Nanopartikel
Nanopartikel Emas Fourier Transform emas rutin trihidrat dengan PVA
Infrared (FTIR) mempunyai bentuk yang
FTIR digunakan untuk menentukan bermacam-macam sepertibulat, segitiga,
kemungkinan gugus fungsional yang persegi, trapesium, pentagon, dan
bertanggungjawab untuk mereduksi hexagon sehingga sudah sesuai dengan
nanopartikel emas. Berikut tiga puncak variasi nanopartikel emas[8]. Hasil dapat
serapan utama nanopartikel emas rutin dilihat pada Gambar 5.
trihidrat dengan PVA yang telah diamati
pada 3423,64 cm-1 (OH- regangan luas),
1637,22 cm-1 (C alifatis ≡C- atau obligasi
aromatik), dan 1044,29 cm-1 (-CO- ke
-CC- antisymetric ditambah regangan).
Hasilnya menunjukkan bahwa ada
kelompok-kelompok fungsional yang
berbeda signifikan diantara nanopartikel
emas rutin trihidrat saja dibandingkan
nanopartikel emas rutin trihidrat dengan
PVA. Wed Jan 24 14:10:15 2018 (GMT+07:00)
100
2067,51
80
%Transmittance
1014,89
60
40
566,62
1637,06
20
3427,59
Peak list:
Position: 3427,59 Intensity:
Position:
40 1637,06 Intensity:
Position: 566,62 Intensity:
3,743
22,253
22,738
SEM dan TEM pada Perbesaran yang
Position: 1014,89 Intensity:
Position:
20 2067,51 Intensity:
65,297
84,212
Berbeda
1637,22
567,35
3423,64
-0
6
Sedangkan formula 21 stabil mulai dari mV[12], [13]yaitu -5,3 mV pada jam ke 24,
jam ke 0 hingga minggu ke 6 baik dari meskipun nilai tersebut menandakan
ukuran partikel maupun polydisperse terjadinya agregasi yang cepat[15]. Hasil
index dikarenakan berada pada rentang pengukuran nanopartikel
<8 µm dan PI pada rentang <0,7[8, 9]. emasmenggunakan PSA dari perwakilan
Dari segi zeta potensial pun formula 21 formula kontrol dan perlakuan dapat dilihat
lebih stabil dibandingkan dengan formula di Tabel 2.
kontrol karena lebih mendekati –30
Tabel 2.Hasil pembacaan PSA berdasarkan waktu
Waktu Formula kontrol Formula 21
Particle size PDI [Ð] Zeta potential Particle size PDI [Ð] Zeta
[nm] [mV] [nm] potential
[mV]
Jam ke-0 108.0 ± 4.4 0.232 ± 0.0 -2.7 ± 0.1 103.7 ± 2.0 0.325 ± 0.0 -3.0 ± 0.1
Jam ke-24 227.5 ± 35.9 0.895 ± 0.1 -0.2 ± 0.1 110.8 ± 3.7 0.261 ± 0.1 -5.3 ± 0.5
Minggu ke-1 276.9 ± 6.5 1.247 ± 0.0 - 124.9 ± 13.3 0.380 ± 0.1 -
Minggu ke-2 275.0 ± 7.8 1.225 ± 0.1 - 104.8 ± 4.7 0.383 ± 0.0 -
Minggu ke-3 278.9 ± 20.2 1.210 ± 0.2 - 110.6 ± 16.2 0.382 ± 0.0 -
Minggu ke-4 274.8 ± 68.8 1.310 ± 0.4 - 136.2 ± 32.2 0.462 ± 0.1 -
Minggu ke-5 277.3 ± 70.6 1.189 ± 0.4 - 111.9 ± 2.1 0.186 ± 0.1 -
Minggu ke-6 234.6 ± 53.0 1.070 ± 0.4 - 106.3 ± 6.5 0.301 ± 0.1 -
4. KESIMPULAN [4] R. Nagarajan and et al.,
Berdasarkan hasil penelitian yang telah “Nanoparticles: synthesis,
diperoleh dapat disimpulkan bahwa variasi stabilization, passivation, and
PVA menyebabkan perbedaan yang functionalization,” Wash. DC Am.
cukup signifikan dari segi aktivitas sel Chem. Soc., 2008.
kanker, kestabilan maupun karakteristik [5] K. M. Moghaddam, “University of
pada hampir seluruh formula yaitu dengan medical sciences, tehran, iran. J
menambahkan PVA 525 µL dengan young investigation,” 2010.
konsentrasi 2,5 % dapat memiliki aktivitas [6] E. F. Yanti and T. Taufikurohmah,
anti sel kanker T47D dan menstabilkan “Synthesis and characterization of
sediaan hingga 5 minggu. nanogold using matrix cetostearyl
alcohol as free radicals scavenging
UCAPAN TERIMA KASIH in cosmetic,” UNESA J Chem, vol. 2,
Penulis mengucapkan terima kasih no. 1, 2013.
kepada Kementrian Riset dan Teknologi [7] Annamalai, “Green synthesis,
Tinggi Republik Indonesia atas dana yang characterization and antimicrobial
disalurkan sehingga penelitian ini dapat activity of Au NPs using Euphorbia
terlaksana. hirta L. leaf extract,” Colloids Surf B
Biointerfaces, vol. 108, pp. 60–5,
DAFTAR PUSTAKA 2013.
[1] WHO, “WHO cancer factsheet no. [8] A. Khan and et al., “Gold
297,” 2009. nanoparticles: synthesis and
[2] M. Inayah, “Sintesis nanopartikel applications in drug delivery,” Trop J
emas menggunakan bioreduktor dari Pharm Res, vol. 13, no. 7, p. 1169,
ekstrak kulit buah manggis (Garcinia 2014.
mangostana L.) sebagai indikator [9] Anonym, “Zetasizer nano ZS training
kolorimetri keberadaan logam Zn).,” course,” UK Malvern, pp. 1–120,
2015. 2010.
[3] L. M. Sanda and dkk., “Sintesis [10] P. Prayong, S. Barusrux, and N.
nanopartikel emas dengan metode Weerapreeyakul, “Screening of
reduksi menggunakan bioreduktor Some Indigenous Thai Plants.,”
ekstrak daun ketapang (Terminalia Fitoterapia, vol. 79, no. 7–8, p. 600,
catappa).,” 2014. 2008.
7
[11] J. Sarwono, Statistik itu Mudah :
Panduan Lengkap untuk Belajar 35
Komputerisasi Statistik
Menggunakan SPSS 16.
Yogyakarta: Andi Publisher, 2009.
[12] P. Pimpang and et al.,
“Monodispersity and stability of gold
nanoparticles stabilized by using
polyvinyl alcohol,” Chiang Mai J. Sci.,
vol. 38, no. 1, pp. 31–38, 2011.
[13] S. A. Wissinga, O. Kayserb, and R.
H. Muller, “Solid lipid nanoparticles
for parenteral drug delivery,” Adv
Drug Deliv. Rev, vol. 56, pp. 1257–
1272, 2004.
[14] C. Jacob, O. Kayser, and R. H.
Mu¨ller, “Nanosuspensions as a new
approach for the formulation for the
poorly soluble drug tarazepide,” Int J
Pharm, vol. 196, pp. 161–164, 2000.
[15] S. Honary and F. Zahir, “Effect of
zeta potential on the propertes of
nano-drug delivery systems - review
(part 2),” Trop. J. Pharm. Res., vol.
12, no. 2, pp. 265–273, 2013.