DASAR REKAYASA BIOPROSES

JURUSAN TEKNOLOGI INDUSTRI PERTANIAN

FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2012

Pengertian Kinetika Kultivasi

Sistem bioproses harus digambarkan secara kuantitatif
Dgn kinetika fermentasi dapat diprediksi yield
(rendemen) dan waktu yang diperlukan
Kinetika fermentasi mempelajari laju pertumbuhan
sel, pembentukan produk dan konsumsi substrat yang
dipengaruhi oleh berbagai kondisi proses
(konsentrasi substrat, suhu, pH, O2 terlarut dll)

Pertumbuhan Sel dan Pembentukan Produk

Pertumbuhan dan pembentukan produk oleh mikroba
merupakan proses biokonversi dimana nutrien dikonversi
menjadi biomassa dan metabolit
Tiap konvrersi dapat dikuantifikasi dengan tetapan
rendemen (yield coefficient) dinyatakan sebagai
massa sel atau produk yang etrbentuk per satuan massa
substrat yang dikonsumsi (Yx/s dan Yp/s)
Yx/s = X/ S

Yp/s = P/ S

tetapan rendemen menggambarkan efisiensi konversi

substrat menjadi biomassa atau produk

Region 1:
Lag phase

microbes are
adjusting to the new
substrate (food
source)

Microbial Growth
(Batch)

Region 2

Exponential growth
phase,
microbes have
acclimated to the
conditions

Region 3

Stationary phase,

log [X]

limiting substrate or
electron acceptor
limits the growth rate

Region 4

Decay phase,
substrate supply has
been exhausted

Time

Pertumbuhan Populasi Mikrobial

Selama fase eksponensial tsb.,tiap mikroba membelah

diri pada interval tetap .
:
(diturunkan dari neraca massa)

Bila 1 sel membelah menjadi 2 sel 2 4 8 . dst

1 21 22 23 24 .. 2n = N (jumlah sel)
Pangkat (eksponen) n = jumlah generasi/penggandaan
Waktu dimana populasi berjumlah dua kali selama waktu
tertentu disebut Waktu Generasi (doubling time) = waktu
penggandaan ( = td h-1)
Selama fase eksponensial tD relatif konstan

Organisme

Waktu Penggandaan sel

Bakteri dan khamir

Kapang dan Alga
Rumput
Ayam
Babi
Sapi muda
Manusia (muda)

20-120 menit
2-6 jam
1-2 minggu
2-4 minggu
4-6 minggu
1-2 bulan
3-6 bulan

1. Laju Pertumbuhan Spesifik

Selama masa pertumbuhan eksponensial, sel berlipat
ganda pada selang waktu tertentu

t
n
td

n = jumlah penggandaan
t = waktu (h)
td = waktu penggandaan (h-1) waktu yang
diperlukan untuk menggandakan populasi sel
menjadi 2X jumlah (kons) semula

X t X 0 .2 n X 0 2

t
td

Xt
t
n.ln 2 ln 2
ln
td
X0

Xt = massa sel setelah waktu t

X0 = massa sel pada waktu t = 0

ln X t ln X 0 ln 2 0.693

Persamaan
pertumbuhan pada fase
t di atas menggambarkan
td
td
eksponensial dimana konstant.

Hubungan antara Waktu Penggandaan (doubling time =

tD) dengan laju spesifik pertumbuhan ()
Hubungan antara tD dengan laju pertumbuhan spesifik
bila konsentrasi biomassa menjadi dua kali dari X0
menjadi X1 selama waktu penggandaan tD (= t 1- t0) :

tD = 0.693/
= 0.693/td

 pada setiap waktu pertumbuhan dapat ditentukan

dari

neraca massanya, sebagai berikut :

dx
F
X X X
dt
V

Keterangan :
F = laju alir
V = volume kultur
= laju kematian spesifik

Akumulasi sel = pertumbuhan pengeluaran sel yang mati

Untuk Kultur Curah (Batch)

F
X 0 dan
V
dX
1 dX
X
dt
X dt

2. Laju Penggunaan Substrat

dS F
X q p X
F
S0

mX S
dt V
Yx
Yp
V
s

Akumulasi Substrat = substrat masuk substrat yang dikonsumsi

untuk pertumbuhan substrat yang dikonsumsi
untuk sistesis produk substrst yang
dikonsumsi untuk pemeliharaan substrat
F = Laju alir (l/jam) keluar
V = Volume kultur (l)
S0 = [substrat yang masuk] (g/l)

g sel yang dibentuk

Yx/s = koefisien rendemen biomassa g substrat yang dikonsumsi

Yp/s

g produk yang dibentuk

g
substrat
yang
dikonsumsi

= koefisien rendemen produk

= laju pertumbuhan spesifik

qp = laju pembentukan produk spesifik (g P/g sel.jam)
g substrat yang dikonsumsi

g sel.x.jam

m = koefisien pemeliharaan

Untuk Kultur Curah

dS
X q p X

mX
dt
Yx
Yp
s

Jika aerasi cukup , mX

, dan tidak ada produk yang terbentuk,
YX
maka
S

dS X

dt Yx
s

Laju penggunaan substrat spesifik (qs)

qp
1 dS

qs
qs

m
X dt
YX
YP
S

qs : laju penggunaan
substrat spesifik
(g S/g sel.jam)

Dari persamaan di atas terlihat sumber C digunakan untuk

sintesis biomassa , pembentukan produk dan
pemeliharaan sel

3. Laju pembentukan Produk

dP
F
q p X P P
dt
V
Akumulasi produk = Produk yang disintesis produk yang dikeluarkan dari
bioreaktor produk yang terdenaturasi
P = konsentrasi produk (g/l)
= laju destruksi produk

qp = laju pembentukan produk spesifik

(g P/g sel.jam)

Bila produknya stabil dan tidak dikeluarkan dari bioreaktor, maka

dP
qpX
dt

Laju pembentukan produk spesifik (qp)

qp

1 dP
X dt

(g P/g sel.jam)

Produk Metabolisme Sel dapat dibagi atas :

1. Produk yang terkait /berasosiasi dengan pertumbuhan (metabolit
primer)
Produk yang langsung atau produk antara pada sistem
metabolisme, seperti etanol dan vitamin

1 dP
qp
Yp
X dt
x

2. Produk yang sebagian terkait dengan pertumbuhan

Terbentuk
sebagian phase pertumbuhan, seperti asam laktat.
dP padadX

1X

dt
dt
q p 1 1

1 dan 1 adalah berturut-turut koefisien yang berhubungan dengan

pertumbuhan dan koefisien yang tak terkait dengan pertumbuhan
3. Produk yang tak terkait dengan pertumbuhan (metabolit sekunder)
Produk yang tidak penting untuk pertumbuhan, seperti antibiotik dan

Metabolit Primer :
qp = 1/X dP/dt = /Yx/p = 1/X dX/dt . dP/dX = 1/X dP/dt (terbukti)
qs = 1/X dS/dt = /Yx/s = 1/X dX/dt . dS/dX = 1/X dS/dt (terbukti)
qp = Yp/s .qs

Yp/s = qp / qs

Campuran :
dP/dt = dX/dt + X
dibagi X 1/X dP/dt = 1/X . dX/dt +
qp = +
qp

Contoh penentuan parameter kinetika produksi metabolit primer (biosurfaktan)

X
P

X
P

X
P

Keterangan :
a. Pembentukan produk yang terkait
dengan pertumbuhan
b. Pembentukan produk yang
sebagian terkait dengan
pertumbuhan
c. Pembentukan produk yang tidak
terkait dengan pertumbuhan

Laju Pembentukan Produk & Penggunaan Substrat Spesifik(qp g P/g

sel.jam & qs g S/g sel.jam) :
- tidak tergantung konsentrasi sel
- menggambarkan efektivitas sel dlm mensintesis produk atau
penggunaan ubstrat
- berguna untuk membandingkan efektivitas hasil suatu fermentasi
Laju Volumetrik (Q ; g/l.jam) :
- tergantung dari konsentrasi sel
- menggambarkan laju sintesis produk atau kebutuhan substrat untuk
tiap satuan kapasitas volume bioreaktor
Pola Pembentukan Produk :
- Pembentukan produk terkait/berasosiasi dengan pertumbuhan
(growth associated) = Metabolit Primer
- Pembentukan produk tidak berasosiasi dengan pertumbuhan (non
growth associated) = Metabolit Sekunder
- Campuran keduanya

YIELD UNTUK BIOMASSA DAN PRODUK

Mencerminkan efisiensi konversi substrat menjadi biomassa atau produk

dX

dP

X
dt
Yx

dS
s
S
dt

Yp

P
dt

dS
S
dt

Yield (hasil) juga dapat ditentukan dari laju pembentukan biomassa atau
produk, dan laju konsumsi substrat

Yx

qs

Yp
s

qp
qs

Koefisien yield tidak konstant selama pertumbuhan karena adanya

konsumsi substrat untuk pemeliharaan

Yx

SG Sm

Keterangan :
Yx/s (0) = yield teramati
SG = substrat yang dikonsumsi untuk pertumbuhan
Sm = substrat yang dikonsumsi untuk pemeliharaan

Laju Penggunaan Substrat dalam Kultur Batch

dS dS
dS

dt dt m dt
dS
X
mX
dt
YX G
S

:X

1 dS

m
X dt
YX G
S

1
YX

m
1

Persamaan Pirt
YX G
S

m : maintenance
G : growth

Koefisien pemeliharaan ditentukan dengan cara memplot

1
dengan

sehingga didapat suatu garis lurus dengan slope m

1
Yx

intercept

1
Yx

Yx/s(0)

= yield yang teramati

Yx/s(G)

= yield pertumbuhan yang sebenarnya

= koefisien pemeliharaan

PRODUKTIVITAS PADA KULTUR BATCH

Produktivitas keseluruhan P 1

X
ln
tT tD tL
m X0

X
X0
tT
tD
tL

= konsentrasi akhir
= konsentrasi awal
= waktu untuk persiapan sebelum running
= waktu delay
= waktu fase lag

Dari persamaan di atas dapat diketahui pengaruh

perubahan proses terhadap produkstivitas keseluruhan
Contoh : * inokulum lbh banyak akan meningkatklan X0 dan
memperpendek waktu proses
* waktu delay lbh pendek akan memperpendek

KULTUR SINAMBUNG
Biomassa :
Akumulasi = Sel masuk Sel keluar + Pertumbuhan Sel mati

dX F
F
X 0 X X X
dt V
V

Bila suplai medium steril (X0 = 0) dan >> , maka

dX
F
X X
dt
V
X DX D X
Dalam keadaan setimbang (staedy state),
Dcrit max
D mendekati Dcrit tidak stabil
D > max wash out

dX
0
dt

dan = D

Substrat :
Akumulasi = nutrisi masuk nutrisi keluar konsumsi untuk tumbuh
konsumsi untuk pemeliharaan konsumsi untuk
sintesis produk
qpX
dS F
F
X
Sf S
mX
dt V
V
YX
YX
S

Bila mX

X
, dan tidak ada pembentukan produk, maka
YX
S

dS
X
D Sf S
dt
YX

dS
Saat setimbang,
0, sehingga x YX S f S
S
dt

Model yang menghubungkan X, S dan D

max .S

Ks S

Persamaan Saat Tidak Setimbang (Non-Steady State)

Biomassa

dX
D X
dt
max .S

D X
Ks S

Substrat

dS
X
D Sf S
dt
YX

X
D Sf S
YX

max .S

KS S

Persamaan dalam Keadaan Setimbang

(Steady State)
Substrat

Bila

dS
DK S
0, maka S
dt
max D

Biomassa

X YX Sf S
S

DK S

YX Sf
S
max D

S fungsi dari D
X fungsi dari D dan Sf

D
D

max .S
KS S

D
max .S
D
KS S

D kritis
D kritis D terendah saat mana wash out terjadi

D C max dan S Sf
D C max

Sf
K S Sf

DC fungsi dari Sf . Bila Sf >> KS, maka DC = max

PRODUKTIVITAS
Biomassa

Produkstivitas P (g/l.jam)

PX D X

X = Yx/s (Sf S)
Sf
D = Dc
Ks - Sf
D yang menghasilkan produktivitas maksimum,
Dihitung dari turunan I pers = 0)

DK S

DYX Sf
S
max D

1
2

KS
D m D C 1

S
S

Produk

Optimasi kultivasi dgn mengkompromikan

: Produktivitas, yield konversi dan substrat
sisa

PP DP
P konsentrasi produk saat " steady state"

PENENTUAN KONSTANTA KINETIK DAN YIELD

Penentuan max dan KS

1. Memplotkan ln X vs t Slope merupakan max

2. Membalikkan Persamaan Monod dan memplotkan 1
1
dan

max .S
KS S

K
1
S
max

1
1

S max

3. Dengan mengoperasikan kultur sinambung chemostat pada kondisi

yang sama pada 2 laju elusi. (D) Ukur
dari masing-masing dan
S
hitung max dari persamaan :

S1 m D1 S2 m D 2

D1
D2
Setelah didapat max, KS dapat dihitung dari persamaan :

m S
KS S

D=

CONTOH

CITRIC ACID PRODUCTION

Commercial production of citric acid is generally by
submerged fermentation of sucrose or molasses using
the filamentous fungus A. niger or synthetically from
acetone or glycerol
However synthetic methods proved to be unsuitable
because of expensive or hazardous raw materials or an
excessive number of reaction steps leading to low
yields.

C6H8O7

2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid

APPLICATION
Citric acid is produced either in the anhydrous form
(crystallization from hot aqueous solutions ) or as the
monohydrate (crystallization at temperatures below 36.6 C).
Food :
a. The dominant use of citric acid is as a flavoring and
preservative in food and beverages (soft drinks).
b. Citrate salts used to deliver those minerals in a
biologically available form in many dietary supplements.
Pharmaceutical :
Used with sodium bicarbonate in effervescent
formulae,for example in antacid and soluble aspirin
preparation.

Cleaning and Chelating Agent

excellent chelating agent, binding metals. It is used to
remove scale from boilers and evaporators.
soften water, which makes it useful in soaps and
laundry detergents. By chelating the metals in hard water,
it lets these cleaners produce foam and work better
without need for water softening.
active ingredient in some bathroom and kitchen cleaning
solutions.
Plastic
Citric acid esters, particular triethyl, tributyl and
acetyltributyl esters are employed as non-toxic plasticizers
in plastic films used to protect food stuffs.

http://medicalmnemonics4u.blogspot.com/2009/11/citric-acid-cycle.html

Production of citric acid by Aspergillus niger using cane

molasses in a stirred fermentor
By Sikander Ali et al (Electron. J. Biotechnol. v.5 n.3 Valparaso dic. 2002)

The kinetics of submerged citric acid fermentation by

Aspergillus niger using blackstrap molasses as the basal
fermentation media.
A laboratory scale stirred fermentor of 15-L capacity having
working volume of 9-L was used for cultivation process and
nutritional analysis.
All fermentations were carried out following the growth on 150
g/l raw molasses sugars for 144 hours.
Ferrocyanide (200 ppm) was used to control the trace metals
present in the molasses medium.

Morphology of the mycelium :

is crucial not only in relation to the shape of the hyphae ,
but also in the aggregation of the growth into small
spherical pellets.
The mycelial pellets should be small (0.2 to 0.5 mm) with
a hard surface.
This state of affairs is brought about by a deficiency of
manganese in the medium or the obviously related
additions of ferrocyanide ion.

Twelve (12) cultures of Aspergillus niger were screened for citric acid
production
Stock cultures of
Aspergillus niger

Dry cell
mass (g/l)

Sugar
consumed
(g/l)

Citric acid
monohydrate
(g/l)

% Yield* Mycelial morphology

GCBT1

16.53

94.65

42.56

44.96

Small shiny pellets

GCBT2

14.95

102.40

78.18

76.35

Intermediate pellets

Table 1. Screening of stock cultures for citric acid

GCBT3production.
18.24
mass
All the 78.04
fermentations 15.25
were carried19.54
out at 30Gelatinous
C

following growth on 150 g/l initial sugar concentration. The

8.12
Viscous
constant at 6.0

GCBT4
16.25
81.52
6.62
initial pH of the molasses medium was kept
GCBT5throughout23.72
67.82 period of
27.69
the fermentation
6-days.
GCBT6
14.75
87.64
11.04
GCBT7
20.05
91.45
84.95

40.83
12.60
92.89

Dumpy mass
Viscous
Intermediate pellets

GCBT8
GCBT9
GCBT10

19.12
20.14
22.68

97.60
90.00
105.28

72.98
18.86
58.14

74.77
20.96
55.22

Mixed pellets
Gummy mass
Small round pellets

GCBT11
GCBT12

18.04
19.55

99.06
89.95

41.02
13.34

41.41
14.83

Fluffy mass
Viscous

* based on the sugar consumed.

The higher producers of citric acid i.e., GCBT2, 7 and 8

have been compared on the basis of :
Citric acid formation parameters [Qp (g/l/h), Yp/s (g/g), Yp/x
(g/g) and qp (g/g cells/h)] and
Substrate consumption parameters [ (h-1), Yx/s (g/g), Qs
(g/l/h), Qx (g/g cells/h) and qs (g/g cells/h)].

Kinetic parameters:
Qp: g citric acid produced/l/h;
Yp/s: g citric acid produced/g substrate consumed:
Yp/x: g citric acid produced/g cells formed;
qp: g citric acid produced/g cells/h;
(h-1): specific growth rate;
Yx/s: g cells/g substrate utilized;
Qs: g substrate consumed/l/h;
Qx: g cell mass produced/l/h;
qs: g substrate consumed/g cells/h.

Kinetic parameters
GCBT2
GCBT7
Citric acid formation parameters
Qp (g/l/h)
0.543
0.590
Yp/s (g/g)
0.763
0.929
Yp/x (g/g)
5.229
4.237
qp (g/g cells/h)
0.036
0.029
Substrate consumption parameters
(h-1)
0.540
0.589
Table 3. Kinetic parameters for
citric acid production
from molasses sugars following
growth of Aspergillus
Yx/s (g/g)
0.219
0.219
niger strains.
Qs (g/l/h)
0.711
0.635
Qx (g cells/l/h)
0.104
0.139
qs (g/g cells/h)
0.047
0.032

GCBT8
0.507
0.748
3.817
0.026
0.506
0.196
0.678
0.133
0.035

GCBT7 The values of specific rate constants (Qp, Qs and Qx in

g/l/h) are more significant .& Yx/s , Yp/s and Yp/x are highly significant.

Nitrogen constituent has a profound effect on citric acid

production because nitrogen is not only important for
metabolic rates in the cells but it is also the basic part of cell
proteins.
Effect of different concentrations of ammonium nitrate (as
nitrogen source for mycelial growth) on citric acid productivity
by Aspergillus niger GCBT7 is shown in Figure 1.
Any increase or decrease other than this concentration,
resulted in the disturbance of fungal growth and subsequently
citric acid production.

The maximum amount

of citric acid (89.64
1.5a g/l) was obtained
when the concentration
of NH4NO3 was kept at
0.2%.
The growth rate
constant ( = 0.548
0.02a g-1) indicated that
enzyme to substrate
ratio was optimum at
0.2% NH4NO3.

Figure 1. Effect of different concentrations of ammonium nitrate on citric acid

productivity by Aspergillus niger GCBT-7.
Yp/s = g citric acid produced/g substrate consumed,
Qp = g citric acid produced/l/h,
(h-1) = specific growth rate,
qs = g substrate consumed/g cells/h.

http://www.scielo.cl/fbpe/img/ejb/v5n3/a10/f1.html

The maximum yield of

citric acid (94.93
4.2a g/l) was
achieved, 144 hours
after inoculation.
The sugar
consumption and dry
mycelial weight were
92.94 and 16.15 g/l,
respectively.

Figure 2a. Time course study during citric acid

fermentation by Aspergillus niger GCBT7 in blackstrap
molasses.

rphology parameters in order to improve bioreactor performance and process yields. Substrate requirement as well as biomass and product yields are some of the basic parameters that need to be considered in determining the feasibility of the fermentation process. All the

Concluding Remarks
The culture of Aspergillus niger GCBT7 was selected as the best
mould to support maximum production of citric acid without
supplements. The observation indicates that it might be possible
to manipulate the morphology parameters in order to improve
bioreactor performance and process yields.
Substrate requirement as well as biomass and product yields are
some of the basic parameters that need to be considered in
determining the feasibility of the fermentation process. All the
kinetic parameters i.e., product and growth yield coefficients
(Yp/s, Yp/x and Yx/s in g/g), volumetric rates (Qp, Qs and Qx in
g/g cells/h) and specific rate constants (qp, qs and qx in g/g/h) are
highly significant.

SELESAI DEH