DASAR REKAYASA BIOPROSES

Pengertian Kinetika Kultivasi

Sistem bioproses harus digambarkan secara kuantitatif

 Dgn kinetika fermentasi dapat diprediksi “yield”
(rendemen) dan waktu yang diperlukan

Kinetika fermentasi  mempelajari laju pertumbuhan

sel, pembentukan produk dan konsumsi substrat yang
dipengaruhi oleh berbagai kondisi proses
(konsentrasi substrat, suhu, pH, O 2 terlarut dll)
Pertumbuhan Sel dan Pembentukan Produk

Pertumbuhan dan pembentukan produk oleh mikroba

merupakan proses biokonversi dimana nutrien dikonversi
menjadi biomassa dan metabolit

Tiap konvrersi dapat dikuantifikasi dengan tetapan

rendemen (yield coefficient)  dinyatakan sebagai
massa sel atau produk yang etrbentuk per satuan massa
substrat yang dikonsumsi (Yx/s dan Yp/s)

Yx/s = Δ X/ Δ S Yp/s = Δ P/ Δ S

tetapan rendemen menggambarkan efisiensi konversi

substrat menjadi biomassa atau produk
Region 1:
Lag phase Microbial Growth
– microbes are
adjusting to the new (Batch)
substrate (food
source)
Region 2
Exponential growth
phase,
– microbes have
acclimated to the
conditions
log X
[]
Region 3 1 2 3 4
Stationary phase,
– limiting substrate or
electron acceptor
limits the growth rate
Region 4
Decay phase,
– substrate supply has
been exhausted
Time
Pertumbuhan Populasi Mikrobial
Selama fase eksponensial tsb.,tiap mikroba membelah
diri pada interval tetap .
:
(diturunkan dari neraca massa)
Bila 1 sel membelah menjadi 2 sel  2  4  8 …. dst

1  21  22  23  24 …………..  2n = N (jumlah sel)

Pangkat (eksponen) n = jumlah generasi/penggandaan

Waktu dimana populasi berjumlah dua kali selama waktu

tertentu disebut “Waktu Generasi” (doubling time) = waktu
penggandaan ( = td h-1)

 Selama fase eksponensial tD relatif konstan

Organisme Waktu Penggandaan sel

Bakteri dan khamir 20-120 menit

Kapang dan Alga 2-6 jam
Rumput 1-2 minggu
Ayam 2-4 minggu
Babi 4-6 minggu
Sapi muda 1-2 bulan
Manusia (muda) 3-6 bulan
1. Laju Pertumbuhan Spesifik

Selama masa pertumbuhan eksponensial, sel berlipat ganda

pada selang waktu tertentu
n = jumlah penggandaan
t t = waktu (h)
n td = waktu penggandaan (h-1)  waktu yang
diperlukan untuk menggandakan populasi
td sel menjadi 2X jumlah (kons) semula

X t  X 0 .2 n  X 0 2 td

 Xt  t Xt = massa sel setelah waktu t

ln   n.ln 2  ln 2 X0 = massa sel pada waktu t = 0
 X0  td
ln X t  ln X 0 ln 2 0.693
 
Persamaan
t di atas menggambarkan
td td pertumbuhan pada fase
eksponensial dimana  konstant.
Hubungan antara Waktu Penggandaan (doubling time =
tD) dengan laju spesifik pertumbuhan (µ)

Hubungan antara tD dengan laju pertumbuhan spesifik

 bila konsentrasi biomassa menjadi dua kali dari X0
menjadi X1 selama waktu penggandaan tD (= t 1- t0) :

tD = 0.693/µ
µ = 0.693/td
 pada setiap waktu pertumbuhan dapat ditentukan dari
neraca massanya, sebagai berikut :
Keterangan :
dx F F = laju alir
 μX  X  αX V = volume kultur
dt V  = laju kematian spesifik

Akumulasi sel = pertumbuhan – pengeluaran – sel yang mati

Untuk Kultur Curah (Batch)

F
X  0 dan α  μ
V
dX 1 dX
 μX  μ 
dt X dt
2. Laju Penggunaan Substrat
dS F μX q p X F
 S0    mX  S
dt V Yx Yp V
s s

Akumulasi Substrat = substrat masuk – substrat yang dikonsumsi

untuk pertumbuhan – substrat yang dikonsumsi
untuk sistesis produk – substrst yang
dikonsumsi untuk pemeliharaan – substrat
F = Laju alir (l/jam) keluar
V = Volume kultur (l)
S0 = [substrat yang masuk] (g/l)
 g sel yang dibentuk 
Yx/s = koefisien rendemen biomassa  g substrat yang dikonsumsi 

 
 g produk yang dibentuk 
Yp/s = koefisien rendemen produk  
 g substrat yang dikonsumsi 
m = laju pertumbuhan spesifik
qp = laju pembentukan produk spesifik (g P/g sel.jam)
 g substrat yang dikonsumsi 
 
m = koefisien pemeliharaan  g sel.x.jam 
Untuk Kultur Curah

dS μX q p X
   mX
dt Yx Yp
s s

X
Jika aerasi cukup , mX  , dan tidak ada produk yang terbentuk,
maka YX
S

dS μX

dt Yx
s
qs : laju penggunaan
Laju penggunaan substrat spesifik (qs)
1 dS μ qp substrat spesifik
qs   qs   m
X dt YX YP (g S/g sel.jam)
S S

Dari persamaan di atas terlihat sumber C digunakan untuk

sintesis biomassa , pembentukan produk dan
pemeliharaan sel
3. Laju pembentukan Produk

dP F
 q p X  P  βP
dt V
Akumulasi produk = Produk yang disintesis – produk yang dikeluarkan dari
bioreaktor – produk yang terdenaturasi

P = konsentrasi produk (g/l) qp = laju pembentukan produk spesifik

 = laju destruksi produk (g P/g sel.jam)

Bila produknya stabil dan tidak dikeluarkan dari bioreaktor, maka

dP
 qpX
dt

Laju pembentukan produk spesifik (qp)

1 dP
qp  (g P/g sel.jam)
X dt
Produk Metabolisme Sel dapat dibagi atas :
1. Produk yang terkait /berasosiasi dengan pertumbuhan (metabolit
primer)
Þ Produk yang langsung atau produk antara pada sistem
metabolisme, seperti etanol dan vitamin
1 dP
qp   Yp μ
X dt x

2. Produk yang sebagian terkait dengan pertumbuhan

Þ Terbentuk pada sebagian phase pertumbuhan, seperti asam laktat.
dP dX
 α1  β1X
dt dt
q p  α1μ  β1

1 dan 1 adalah berturut-turut koefisien yang berhubungan dengan

pertumbuhan dan koefisien yang tak terkait dengan pertumbuhan
3. Produk yang tak terkait dengan pertumbuhan (metabolit sekunder)
Þ Produk yang tidak penting untuk pertumbuhan, seperti antibiotik dan
toksin
Metabolit Primer :
qp = 1/X dP/dt = μ/Yx/p = 1/X dX/dt . dP/dX = 1/X dP/dt (terbukti)
qs = 1/X dS/dt = μ/Yx/s = 1/X dX/dt . dS/dX = 1/X dS/dt (terbukti)
 qp = Yp/s .qs  Yp/s = qp / qs

Campuran :
dP/dt = α dX/dt + β X
dibagi X  1/X dP/dt = α 1/X . dX/dt + β
qp = α μ + β
qp

α
β
μ
X X
P P

t t
a b

X Keterangan :
P a. Pembentukan produk yang terkait
dengan pertumbuhan
b. Pembentukan produk yang
sebagian terkait dengan
pertumbuhan
c. Pembentukan produk yang tidak
t terkait dengan pertumbuhan
c
Laju Pembentukan Produk & Penggunaan Substrat Spesifik(qp g P/g
sel.jam & qs g S/g sel.jam) :
- tidak tergantung konsentrasi sel
- menggambarkan efektivitas sel dlm mensintesis produk atau
penggunaan ubstrat
- berguna untuk membandingkan efektivitas hasil suatu fermentasi

Laju Volumetrik (Q ; g/l.jam) :

- tergantung dari konsentrasi sel
- menggambarkan laju sintesis produk atau kebutuhan substrat
untuk tiap satuan kapasitas volume bioreaktor

Pola Pembentukan Produk :

- Pembentukan produk terkait/berasosiasi dengan pertumbuhan
(growth associated) = Metabolit Primer
- Pembentukan produk tidak berasosiasi dengan pertumbuhan (non
growth associated) = Metabolit Sekunder
- Campuran keduanya
YIELD UNTUK BIOMASSA DAN PRODUK
 Mencerminkan efisiensi konversi substrat menjadi biomassa atau produk

dX dP
dt ΔX dt ΔP
Yx   ; Yp  
s dS ΔS s dS ΔS
dt dt

Yield (hasil) juga dapat ditentukan dari laju pembentukan biomassa atau
produk, dan laju konsumsi substrat

μ qp
Yx  ; Yp 
s qs s qs
Koefisien yield tidak konstant selama pertumbuhan karena adanya
konsumsi substrat untuk pemeliharaan
Keterangan :
ΔX Yx/s (0) = yield teramati
Yx 0   SG = substrat yang dikonsumsi untuk pertumbuhan
s ΔSG  ΔSm
Sm = substrat yang dikonsumsi untuk pemeliharaan
Laju Penggunaan Substrat dalam Kultur Batch

dS  dS   dS 
   
dt  dt  m  dt  G
m : maintenance
dS μX
  mX  G : growth
dt YX G 
S :X

1 dS μ
 m 
X dt YX G 
S :μ

1 m 1
   Persamaan Pirt
YX 0 
μ YX G 
S S
Koefisien pemeliharaan ditentukan dengan cara memplot
1
dengan sehingga didapat suatu garis lurus dengan slope m

1
Yx 0 
s

1
intercept Yx
s
G 

1

Yx/s(0) = yield yang teramati
Yx/s(G) = yield pertumbuhan yang sebenarnya
m = koefisien pemeliharaan
PRODUKTIVITAS PADA KULTUR BATCH

X
Produktivitas keseluruhan  P  1 X
ln  tT  tD  tL
μ m X0

X = konsentrasi akhir
X0 = konsentrasi awal
tT = waktu untuk persiapan sebelum running
tD = waktu delay
tL = waktu fase lag

Dari persamaan di atas dapat diketahui pengaruh

perubahan proses terhadap produkstivitas keseluruhan
Contoh : * inokulum lbh banyak akan meningkatklan X0 dan
memperpendek waktu proses
* waktu delay lbh pendek akan memperpendek
KULTUR SINAMBUNG
Biomassa :
Akumulasi = Sel masuk – Sel keluar + Pertumbuhan – Sel mati

dX F F
 X 0  X  μX  αX
dt V V
Bila suplai medium steril (X0 = 0) dan  >> , maka

dX F
 μX  X
dt V
 μX  DX  μ  D X
Dalam keadaan setimbang (staedy state), dX dan  = D
0
dt
Dcrit  max
D mendekati Dcrit  tidak stabil
D > max  wash out
Substrat :
Akumulasi = nutrisi masuk – nutrisi keluar – konsumsi untuk tumbuh
– konsumsi untuk pemeliharaan – konsumsi untuk
sintesis produk
dS F F μX qpX
 Sf  S   mX 
dt V V YX YX
S S

μX
Bila mX  , dan tidak ada pembentukan produk, maka
YX
S

dS μX
 DSf  S 
dt YX
S

Saat setimbang,
dS
dt

 0, sehingga x  YX S f  S
S

 μ max .S
Model yang menghubungkan X, S dan D μ
Ks  S

Persamaan Saat Tidak Setimbang (Non-Steady State)

Biomassa
dX
 μ  D X
dt
 μ max .S 

  D X
 Ks  S 

Substrat

dS μX
 DSf  S 
dt YX
S

X  μ max .S 
 DSf  S   
YX
S
 KS  S 
 D
Persamaan dalam Keadaan Setimbang
(Steady State) μ max .S
D
KS  S
Substrat

dS DK S
Bila  0, maka S 
dt μ max  D

Biomassa
X  YX Sf  S
S
 
 DK S 

 YX  Sf  
S
 μ max  D 
S fungsi dari D
X fungsi dari D dan Sf
 D
μ max .S
D
KS  S

D kritis
D kritis  D terendah saat mana wash out terjadi
D C  μ max dan S  Sf
Sf
D C  μ max
K S  Sf

DC fungsi dari Sf . Bila Sf >> KS, maka DC = max

PRODUKTIVITAS
Biomassa
Produkstivitas P (g/l.jam)
PX  DX
 X = Yx/s (Sf –S)
DK S 
 DYX  Sf   Sf
S
 μ max  D  D = Dc
Ks - Sf
D yang menghasilkan produktivitas maksimum,
Dihitung dari turunan I pers = 0)
 1

 KS  2
D m  D C 1    
 
Optimasi kultivasi dgn mengkompromikan
 K  S : Produktivitas, yield konversi dan substrat
  S  
 sisa
Produk

PP  DP
P  konsentrasi produk saat " steady state"
PENENTUAN KONSTANTA KINETIK DAN YIELD
Penentuan max dan KS
1. Memplotkan ln X vs t  Slope merupakan max

2. Membalikkan Persamaan Monod dan memplotkan 1 1

dan
μ S
μ max .S
μ
KS  S
1 K 1 1
 S  
μ μ max  S  μ max
3. Dengan mengoperasikan kultur sinambung chemostat pada kondisi
yang sama pada 2 laju elusi. (D)  Ukur dari masing-masing dan
hitung max dari persamaan :
S
S1 μ m  D1  S2 μ m  D 2 

D1 D2
m S
Setelah didapat max, KS dapat dihitung dari persamaan :
D=
KS  S
CONTOH
CITRIC ACID PRODUCTION
Commercial production of citric acid is generally by
submerged fermentation of sucrose or molasses using
the filamentous fungus A. niger or synthetically from
acetone or glycerol

However synthetic methods proved to be unsuitable

because of expensive or hazardous raw materials or an
excessive number of reaction steps leading to low
yields.

C6H8O7

2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid
APPLICATION

Citric acid is produced either in the anhydrous form

(crystallization from hot aqueous solutions ) or as the
monohydrate (crystallization at temperatures below 36.6 ° C).

Food :
a. The dominant use of citric acid is as a flavoring and
preservative in food and beverages (soft drinks).
b. Citrate salts used to deliver those minerals in a
biologically available form in many dietary supplements.

Pharmaceutical :
Used with sodium bicarbonate in effervescent
formulae,for example in antacid and soluble aspirin
preparation.
Cleaning and Chelating Agent

 excellent chelating agent, binding metals. It is used to

remove scale from boilers and evaporators.

 soften water, which makes it useful in soaps and

laundry detergents. By chelating the metals in
hard water, it lets these cleaners produce foam and
work better without need for water softening.

 active ingredient in some bathroom and kitchen cleaning

solutions.

Plastic
Citric acid esters, particular triethyl, tributyl and
acetyltributyl esters are employed as non-toxic
plasticizers in plastic films used to protect food stuffs.
http://medicalmnemonics4u.blogspot.com/2009/11/citric-acid-cycle.html
Production of citric acid by Aspergillus niger using cane
molasses in a stirred fermentor

By Sikander Ali et al (Electron. J. Biotechnol. v.5 n.3 Valparaíso dic. 2002)

The kinetics of submerged citric acid fermentation by

Aspergillus niger using blackstrap molasses as the basal
fermentation media.

A laboratory scale stirred fermentor of 15-L capacity having

working volume of 9-L was used for cultivation process and
nutritional analysis.

All fermentations were carried out following the growth on 150

g/l raw molasses sugars for 144 hours.

Ferrocyanide (200 ppm) was used to control the trace metals

present in the molasses medium.
Morphology of the mycelium :
is crucial not only in relation to the shape of the hyphae ,
but also in the aggregation of the growth into small
spherical pellets.
The mycelial pellets should be small (0.2 to 0.5 mm) with
a hard surface.
This state of affairs is brought about by a deficiency of
manganese in the medium or the obviously related
additions of ferrocyanide ion.
Twelve (12) cultures of Aspergillus niger were screened for citric acid
production
Stock cultures of Dry cell Sugar Citric acid % Yield* Mycelial morphology
Aspergillus niger mass (g/l) consumed monohydrate
(g/l) (g/l)

GCBT1 16.53 94.65 42.56 44.96 Small shiny pellets

GCBT2 14.95 102.40 78.18 76.35 Intermediate pellets

Table 1. Screening of stock cultures for citric acid
GCBT3production. All the 78.04
18.24 fermentations 15.25
were carried19.54 �C
out at 30Gelatinous mass
following growth on 150 g/l initial sugar concentration. The
GCBT4initial pH16.25 81.52 medium6.62
of the molasses 8.12
was kept constant at 6.0Viscous
GCBT5throughout23.72 67.82 period of
the fermentation 27.69
6-days. 40.83 Dumpy mass
GCBT6 14.75 87.64 11.04 12.60 Viscous
GCBT7 20.05 91.45 84.95 92.89 Intermediate pellets

GCBT8 19.12 97.60 72.98 74.77 Mixed pellets

GCBT9 20.14 90.00 18.86 20.96 Gummy mass
GCBT10 22.68 105.28 58.14 55.22 Small round pellets

GCBT11 18.04 99.06 41.02 41.41 Fluffy mass

GCBT12 19.55 89.95 13.34 14.83 Viscous
* based on the sugar consumed.
The higher producers of citric acid i.e., GCBT2, 7 and 8
have been compared on the basis of :

Citric acid formation parameters [Qp (g/l/h), Yp/s (g/g), Yp/x

(g/g) and qp (g/g cells/h)] and

Substrate consumption parameters [µ (h-1), Yx/s (g/g), Qs

(g/l/h), Qx (g/g cells/h) and qs (g/g cells/h)].
Kinetic parameters:

Qp: g citric acid produced/l/h;

Yp/s: g citric acid produced/g substrate consumed:
Yp/x: g citric acid produced/g cells formed;
qp: g citric acid produced/g cells/h;

μ (h-1): specific growth rate;

Yx/s: g cells/g substrate utilized;
Qs: g substrate consumed/l/h;
Qx: g cell mass produced/l/h;
qs: g substrate consumed/g cells/h.
Kinetic parameters GCBT2 GCBT7 GCBT8
Citric acid formation parameters -
Qp (g/l/h) 0.543 0.590 0.507
Yp/s (g/g) 0.763 0.929 0.748
Yp/x (g/g) 5.229 4.237 3.817
qp (g/g cells/h) 0.036 0.029 0.026
Substrate consumption parameters -
μ (h-1) 0.540 0.589 0.506
Table 3. Kinetic parameters for citric acid production
Yx/s (g/g) from molasses sugars following0.219 0.219
growth of Aspergillus 0.196
Qs (g/l/h) 0.711
niger strains. 0.635 0.678
Qx (g cells/l/h) 0.104 0.139 0.133
qs (g/g cells/h)� 0.047 0.032 0.035

GCBT7  The values of specific rate constants (Qp, Qs and Qx in

g/l/h) are more significant .& Yx/s , Yp/s and Yp/x are highly significant.
Nitrogen constituent has a profound effect on citric acid
production because nitrogen is not only important for
metabolic rates in the cells but it is also the basic part of cell
proteins.

Effect of different concentrations of ammonium nitrate (as

nitrogen source for mycelial growth) on citric acid productivity
by Aspergillus niger GCBT7 is shown in Figure 1.

Any increase or decrease other than this concentration,

resulted in the disturbance of fungal growth and subsequently
citric acid production.
 The maximum amount
of citric acid (89.64 ±
1.5a g/l) was obtained
when the concentration
of NH4NO3 was kept at
0.2%.

The growth rate

constant (µ = 0.548 ±
0.02a g-1) indicated that
enzyme to substrate
ratio was optimum at
0.2% NH4NO3.

Figure 1. Effect of different concentrations of ammonium nitrate on citric acid

productivity by Aspergillus niger GCBT-7.

Yp/s = g citric acid produced/g substrate consumed,

Qp = g citric acid produced/l/h,
μ (h-1) = specific growth rate,
qs = g substrate consumed/g cells/h.
http://www.scielo.cl/fbpe/img/ejb/v5n3/a10/f1.html
 The maximum yield
of citric acid (94.93 ±
4.2a g/l) was
achieved, 144 hours
after inoculation.

The sugar
consumption and dry
mycelial weight were
92.94 and 16.15 g/l,
respectively.

Figure 2a. Time course study during citric acid

fermentation by Aspergillus niger GCBT7 in blackstrap
molasses.
rphology parameters in order to improve bioreactor performance and process yields. Substrate requirement as well as biomass and product yields are some of the basic parameters that need to be considered in determining the feasibility of the fermentation process. All the

Concluding Remarks

The culture of Aspergillus niger GCBT7 was selected as the best

mould to support maximum production of citric acid without
supplements. The observation indicates that it might be possible
to manipulate the morphology parameters in order to improve
bioreactor performance and process yields.

Substrate requirement as well as biomass and product yields are

some of the basic parameters that need to be considered in
determining the feasibility of the fermentation process. All the
kinetic parameters i.e., product and growth yield coefficients
(Yp/s, Yp/x and Yx/s in g/g), volumetric rates (Qp, Qs and Qx in
g/g cells/h) and specific rate constants (qp, qs and qx in g/g/h) are
highly significant.
SELESAI DEH